CN1951895A - 一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法 - Google Patents
一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1951895A CN1951895A CN 200610063478 CN200610063478A CN1951895A CN 1951895 A CN1951895 A CN 1951895A CN 200610063478 CN200610063478 CN 200610063478 CN 200610063478 A CN200610063478 A CN 200610063478A CN 1951895 A CN1951895 A CN 1951895A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hypericin
- extract
- silica gel
- eluent
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法,一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法,包括如下步骤:A.制备金丝桃素硅胶柱层析提取物步骤,又包括如下分步骤:A1准备样品、A2配制洗脱液、A3装柱、A4上样、A5硅胶柱洗脱、A6组分的收集;B.制备金丝桃素凝胶过滤提取物步骤,又包括如下分步骤:B1凝胶的预处理与装柱、B2上样、B3洗脱及收集,即得到提取物产品。本发明工艺简单,提取物中金丝桃素含量高,其作为光敏物质,可进行光动力治疗(Photodynamic therapy,PDT),对人肝癌细胞系HepG2、人肺癌细胞系A549、SpcA1和人乳腺癌细胞系MDA231有明显生长抑制作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种金丝桃素提取物的提取方法,特别是指一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法。
背景技术
贯叶金丝桃(Hypericum performatum L.或St.John’s wort),又称贯叶连翘,为藤黄科金丝桃属多年生草本植物。中医认为其具有收敛止血及抗菌功效,在欧洲用于治疗抑郁等病症已有悠久的历史。贯叶金丝桃中萘骈二蒽酮类物质金丝桃素具有多种生理活性,在抗病毒方面,可以抑制多种逆转录病毒,包括人体免疫缺陷病毒(HIV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)、鼠白血病病毒(LP-BM5)和高致病性的禽流感病毒(H5N1和H9N2)等,以及多种包膜病毒,如乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、I型单纯疱疹病毒(HSV-1)、流感病毒A1(Brazil)、鼠巨噬细胞病毒(MCMV)和辛德比病毒(Sindbis virus)等;在抗抑郁方面,对于轻度和中度抑郁症患者的疗效明显优于安慰剂,其疗效与三环类抗抑郁药,如丙咪嗪、阿米替林、多虑平等;在抗肿瘤方面,金丝桃素被证明是一种很有潜力的用于光动力***的光敏剂。体外实验证明金丝桃素对肺癌、胃癌等死亡率极高癌症在内等数十种肿瘤具有PDT治疗潜力,将成为新一代高效无毒的抗肿瘤新药。
金丝桃素纯品十分昂贵,应用于临床上,治疗成本高。目前市场上所售的贯叶金丝桃提取物中金丝桃素的含量仅为0.3%,大量的贯叶金丝桃提取物被欧美等国收购后,加工制成高附加值的制剂出售。
国内对于从贯叶金丝桃中提取纯化金丝桃素的研究尚处于初级阶段,通常采用醇提取法和碱液提取法,近两年在实验室阶段出现了一些新的方法,如大孔吸附树脂法、超临界CO2萃取法和加压液相色谱柱法(VLC)等。但是,以上这些方法所得的产品只能达到国际市场上要求的金丝桃素含量≥0.3%的基本要求,对于从天然药物中提取纯化生产更高金丝桃素浓度的提取物尚无报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:提供一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法,其工艺简单,且提取得到的提取物中金丝桃素含量高。
为解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法,包括如下步骤:
A、制备金丝桃素硅胶柱层析提取物步骤,又包括如下分步骤:
A1、准备样品,将贯叶金丝桃粗提物加入甲醇中溶解,超声波处理20~40min后过滤,再在滤液中加入一定量的柱层析硅胶,混匀后蒸干溶剂;
A2、配制洗脱液,采用氯仿-甲醇梯度洗脱剂,洗脱剂极性逐渐增大,氯仿∶甲醇=9∶1-8.5∶1.5-8∶2-7.5∶2.5(v/v);
A3、装柱,将一定量的柱层析硅胶与氯仿∶甲醇=9∶1的初始洗脱剂混匀,浸泡8~12小时,在色谱柱下端垫上一层防止漏胶的脱脂棉,缓慢将处理好的硅胶倒入色谱柱,同时不停地敲打色谱柱外侧,使硅胶装实,随着洗脱剂的流出,硅胶不断沉积下来,沉降6~10小时;
A4、上样,继续沉降直至溶剂仅够覆盖硅胶表面为止,将处理好的样品缓慢加入色谱柱,随着溶剂的流出,形成一层样品层;
A5、硅胶柱洗脱,采用氯仿-甲醇洗脱剂梯度洗脱,洗脱剂极性逐渐增大;
A6、组分的收集,将所收集的样品经由TLC检测,合并相同组分,用旋转蒸发仪蒸干,得到金丝桃素硅胶柱层析提取物;
B、制备金丝桃素凝胶过滤提取物步骤,又包括如下分步骤:
B1、凝胶的预处理与装柱,将葡聚糖凝胶干粉浸泡于60~70%乙醇中6~10小时,洗去可能存在的残留物,湿态不间隙装柱;
B2、上样,将金丝桃素硅胶柱层析提取物用甲醇溶解,再经超声波处理后过滤,然后缓慢沿柱壁上样,当溶液缓慢下降至柱内,缓慢加入洗脱液;
B3、洗脱及收集,采用甲醇为洗脱剂进行洗脱,将洗脱后的提取物进行收集即得到提取物产品。
本发明的有益效果是:本发明的提取方法工艺简单,且提取物中金丝桃素含量高,提取物作为光敏物质,可进行光动力治疗(Photodynamic therapy,PDT),对人肝癌细胞系HepG2、人肺癌细胞系A549、SpcA1和人乳腺癌细胞系MDA231有明显的生长抑制作用。
附图说明
图1是本发明一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法的流程示意图。
具体实施方式
如图1所示,本发明提供一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法,包括如下步骤:
A、制备金丝桃素硅胶柱层析提取物步骤
A1、准备样品
取1~3重量份贯叶金丝桃粗提物,加入18~22体积份甲醇溶解,超声20~40min,过滤;称取1~3重量份柱层析硅胶(200~300目),加入上述处理过的贯叶金丝桃提取液,混匀后采用旋转蒸发仪蒸干溶剂。
A2、配制洗脱液
根据薄层层析(Thin layer chromatography,TLC)优化的结果,本实验采用氯仿-甲醇梯度洗脱,洗脱剂极性逐渐增大,氯仿∶甲醇=9∶1-8.5∶1.5-8∶2-7.5∶2.5(v/v)。
A3、装柱
称取20~25重量份柱层析硅胶(200~300目),以65~75体积份初始流动相(氯仿∶甲醇=9∶1的洗脱剂)混匀,浸泡8~12小时。在色谱柱下端垫上一层脱脂棉,防止漏胶。缓慢将处理好的硅胶倒入色谱柱,同时不停地敲打色谱柱外侧,使硅胶装实。随着流动相的流出,硅胶不断沉积下来,低流速沉降过夜,测得高径比为3.5~6.5∶1。
A4、上样
继续沉降直至溶剂仅够覆盖硅胶表面为止,将处理好的样品缓慢地加入色谱柱,随着溶剂的流出,形成一层样品层。
A5、硅胶柱洗脱
采用氯仿-甲醇梯度洗脱,洗脱剂极性逐渐增大,氯仿∶甲醇=9∶1-8.5∶1.5-8∶2-7.5∶2.5(v/v),流速为1.0~6.0mL/min。
A6、组分的收集
将所收集的样品经由TLC检测,合并相同组分,用旋转蒸发仪蒸干,得到金丝桃素硅胶柱层析提取物。
B、制备金丝桃素凝胶过滤提取物步骤
B1、凝胶的预处理与装柱
将葡聚糖凝胶干粉浸泡于60~70%乙醇中6~10小时,洗去可能存在的残留物,湿态不间隙装柱。
B2、上样
将金丝桃素硅胶柱层析提取物用甲醇溶解,超声处理,过滤。缓慢沿柱壁上样,当样品溶液缓慢下降至柱内,缓慢加入洗脱液。
B3、洗脱及收集
采用甲醇为洗脱剂进行洗脱,将洗脱后的提取物进行收集即得到提取物产品。
所收集的的产品经TLC检测后,旋转蒸发,以甲醇溶解,超声处理,以HPLC进行定量检测,得到金丝桃素的纯度可以达到2.35%的凝胶过滤提取物。
采用本发明方法提取的金丝桃素提取物可作为光敏剂用于肿瘤的PDT治疗。以下为本提取物对人肝癌细胞系HepG2、人肺癌细胞系A549、SpcA1和人乳腺癌细胞系MDA231体外生长抑制的药效试验。
1、肿瘤细胞系的选择
根据发病率高、危害大,传统治疗方法效果不好以及尚无理想的治疗方法为原则选择了人肝癌细胞HepG2、肺癌细胞SpcA1和A549、乳腺癌细胞MDA231作为实验细胞系。
2、金丝桃素样品的吸收光谱分析
此实验的目的是找出可能用于金丝桃素光动力治疗实验的激发光波长。在400~750nm范围对金丝桃素进行吸收光谱分析,可见金丝桃素最大吸收波长为590nm左右,另外在550nm处也有一较大吸收峰,在620~680nm红光区也有一较小的吸收峰。因此激发光源波长可在这3个范围内选择。
3、金丝桃素在避光条件下对细胞的毒性研究
此实验的目的在于确定PDT实验中使用的金丝桃素浓度,此浓度在避光条件下应对细胞无明显的毒性,以避免在临床使用时出现毒副作用。各组分别加入一系列不同浓度的金丝桃素,避光培养24h后用MTT法比较各组细胞活力。
结果表明,避光条件下金丝桃素对细胞的毒性很小,当金丝桃素浓度达到5μmol/L才出现了较明显的毒性。
4、PDT法研究金丝桃素对肿瘤细胞的抑制作用
细胞在生长状况良好的前提下,加入不同浓度金丝桃素提取物,对照组不加金丝桃素,其它处理方式与实验组相同。避光孵育一定时间后,将光源置于培养板正上方,用TQ8210型光纤功率计调整光源功率密度,照射一定时间。PDT后避光培养24h进行细胞形态观察以及各项药效评价实验。
4.1不同波长光源的筛选
通过HepG2细胞,进行了不同波长光源的筛选。细胞接种于微孔培养板分别用红色(主波长620nm)、黄色(主波长590nm)、绿色(波长540nm)LED光源置于微孔板正上方,用TQ8210型光纤功率计调整光源功率密度约1.05mW/cm2,照射60min,积累能量约7.5J/cm2。PDT后避光培养,用MTT比色法比较不同光源激发的PDT效应。只有处于金丝桃素最大吸收峰又具有一定穿透力的黄光才能取得较好的PDT效果,红光和绿光在一定光照能量下产生的细胞毒效应并不显著。
4.2光照时机和光照时间的选择
研究了细胞对金丝桃素的吸收曲线。显示了给药后不同时间细胞内的荧光强度,测定了相对荧光值(Relative Fluorescence Unit,RFU),其反映了细胞摄入的金丝桃素量,可见胞内的金丝桃素含量在给药6h后趋于饱和。
并通过研究HepG2细胞,比较了给药后1h和6h光照的PDT效果,以确定PDT的最佳光照时机,并研究PDT效果与细胞内药物浓度的关系。给药后6h比给药后1h进行PDT的效果明显要好,说明金丝桃素的抗肿瘤效果显然与细胞内的金丝桃素含量有关,也预示着PDT过程产生的活性物质(如活性氧系ROS)的寿命非常短暂,光照时只有已进入细胞内的金丝桃素才能对产生细胞毒作用。
研究了金丝桃素浓度不同的提取物在给药后6h分别光照30、60、90min的细胞生长抑制曲线。结果表明,金丝桃素的光动活性与光照的时间基本呈正相关性。与对照组比较,P值均<0.05,具有显著差异。
4.3细胞形态变化研究
细胞进行PDT实验后,继续避光培养24小时。置倒置显微镜下观察细胞形态的变化,可见细胞产生了不同的形态变化,如当金丝桃素浓度≤100nmol/L,细胞的死亡形式主要为凋亡,表现为细胞脱落,逐渐变为圆形,悬浮细胞增多,胞质浓缩,细胞体变小;而当金丝桃素浓度为500nmol/L时,细胞的死亡形式主要为直接坏死,表现为细胞膜通透性增细胞肿胀,最后细胞溶解破裂。
4.4凋亡DNA的提取与电泳检测
凋亡细胞在凋亡的晚期,DNA可被其自身产生的酶降解为较小的片段。用少量凋亡DNA提取试剂盒提取凋亡细胞的DNA,琼脂糖凝胶电泳,EB染色后在紫外灯下观察,可检测凋亡DNA片段形成的ladder。
4.5金丝桃素PDT对各种细胞的体外杀伤的量效关系
在细胞生长状况良好的前提下,加入浓度为5~100nmol/L的金丝桃素溶液,对照组不加金丝桃素溶液,其它处理方式与实验组相同。避光孵育6h后,将波长为590nm的黄色LED光源置于培养板正上方,PDT后避光培养24h用MTT比色法测定各组的细胞生长抑制率。金丝桃素的光动活性与其浓度呈明显的正相关。
5、金丝桃素提取物与金丝桃素标准品的药效比较
通过HepG2细胞,分别加入含10~100nmol/L金丝桃素的(1#)样品和金丝桃素标准品溶液,对照组不加药,其它处理方式与实验组相同。避光孵育6h后,用黄色LED光源置于微孔板正上方,PDT后避光培养24h用MTT比色法比较两者的PDT效应结果表明,提取物具有更大的细胞生长抑制活性,P值<0.05,具有显著差异。样品的抗肿瘤效果比标准品好,这预示着提取物中可能还有其它成分与金丝桃素协同发挥了抗肿瘤的功效。
通过A549细胞,在生长状况良好的前提下,加入金丝桃素含量均为相同浓度的以下样品:①金丝桃素标准品;②金丝桃素提取物。避光孵育6h后,用黄色LED光源置于微孔板正上方,按一定条件PDT后避光培养24h用MTT比色法比较两组细胞活力。结果表明金丝桃素提取物样品细胞毒性都明显高于金丝桃素标准品,P<0.05,有显著差异。
6、热疗法与PDT的协同作用
乳腺癌细胞MDA231细胞按常规PDT程序光照60min后,立即放入43℃的培养箱中30min,对照组放入37℃培养箱。实验完成后置CO2培养箱中避光培养24h,用MTT比色法比较各组细胞活力。研究了PDT后立即热疗对细胞生长抑制率的影响。可见热疗法对金丝桃素的PDT疗法有一定的协同作用,当HY浓度较低(0~30nmol/L)时其作用是显著的(P<0.05);当HY浓度较高(≥50nmol/L),细胞凋亡达到一定程度以后其作用不显著(P>0.05)。
Claims (5)
1、一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法,其特征在于,包括如下步骤:
A、制备金丝桃素硅胶柱层析提取物步骤,又包括如下分步骤:
A1、准备样品,将贯叶金丝桃粗提物加入甲醇中溶解,超声波处理20~40min后过滤,再在滤液中加入一定量的柱层析硅胶,混匀后蒸干溶剂;
A2、配制洗脱液,采用氯仿-甲醇梯度洗脱剂,洗脱剂极性逐渐增大,氯仿∶甲醇=9∶1-8.5∶1.5-8∶2-7.5∶2.5(v/v);
A3、装柱,将一定量的柱层析硅胶与氯仿:甲醇=9∶1的初始洗脱剂混匀,浸泡8~12小时,在色谱柱下端垫上一层防止漏胶的脱脂棉,缓慢将处理好的硅胶倒入色谱柱,同时不停地敲打色谱柱外侧,使硅胶装实,随着洗脱剂的流出,硅胶不断沉积下来,沉降6~10小时;
A4、上样,继续沉降直至溶剂仅够覆盖硅胶表面为止,将处理好的样品缓慢加入色谱柱,随着溶剂的流出,形成一层样品层;
A5、硅胶柱洗脱,采用氯仿-甲醇洗脱剂梯度洗脱,洗脱剂极性逐渐增大;
A6、组分的收集,将所收集的样品经由TLC检测,合并相同组分,用旋转蒸发仪蒸干,得到金丝桃素硅胶柱层析提取物;
B、制备金丝桃素凝胶过滤提取物步骤,又包括如下分步骤:
B1、凝胶的预处理与装柱,将葡聚糖凝胶干粉浸泡于60~70%乙醇中6~10小时,洗去可能存在的残留物,湿态不间隙装柱;
B2、上样,将金丝桃素硅胶柱层析提取物用甲醇溶解,再经超声波处理后过滤,然后缓慢沿柱壁上样,当溶液缓慢下降至柱内,缓慢加入洗脱液;
B3、洗脱及收集,采用甲醇为洗脱剂进行洗脱,将洗脱后的提取物进行收集即得到提取物产品。
2、如权利要求1所述的一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法,其特征在于:A1步骤中,贯叶金丝桃粗提物用量为1~3重量份,甲醇用量为18~22体积份,超声波处理20~40min后过滤;柱层析硅胶的规格为200~300目,用量为1~3重量份,蒸干溶剂是采用旋转蒸发仪。
3、如权利要求1所述的一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法,其特征在于:A3步骤中,柱层析硅胶规格为200~300目,用量为20~25重量份,氯仿∶甲醇=9∶1的初始洗脱剂用量为65~75体积份,沉积的硅胶高径比为3.5~6.5∶1。
4、如权利要求1所述的一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法,其特征在于:其特征在于:A5步骤中,洗脱剂流速根据层析柱而定,可为1.0~6.0mL/min。
5、如权利要求1所述的一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法,其特征在于:B3步骤获得的提取物产品为金丝桃素纯度为2.35%的凝胶过滤提取物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB2006100634784A CN100475762C (zh) | 2006-11-03 | 2006-11-03 | 一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB2006100634784A CN100475762C (zh) | 2006-11-03 | 2006-11-03 | 一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1951895A true CN1951895A (zh) | 2007-04-25 |
CN100475762C CN100475762C (zh) | 2009-04-08 |
Family
ID=38058475
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNB2006100634784A Expired - Fee Related CN100475762C (zh) | 2006-11-03 | 2006-11-03 | 一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN100475762C (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102079696A (zh) * | 2011-01-15 | 2011-06-01 | 深圳职业技术学院 | 金丝桃素提纯方法 |
CN102132920A (zh) * | 2011-02-21 | 2011-07-27 | 华南师范大学 | 一种富钾山稔子饮料及其制备方法 |
CN103721058A (zh) * | 2013-10-23 | 2014-04-16 | 青岛华仁技术孵化器有限公司 | 用于预防流感病毒的中药制剂 |
CN105693494A (zh) * | 2016-02-27 | 2016-06-22 | 蚌埠医学院 | 一种从贯叶连翘中提取纯化金丝桃素的工艺 |
CN105777522A (zh) * | 2014-12-18 | 2016-07-20 | 六安裕发农业科技有限公司 | 一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法 |
-
2006
- 2006-11-03 CN CNB2006100634784A patent/CN100475762C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102079696A (zh) * | 2011-01-15 | 2011-06-01 | 深圳职业技术学院 | 金丝桃素提纯方法 |
CN102079696B (zh) * | 2011-01-15 | 2013-09-04 | 深圳职业技术学院 | 金丝桃素提纯方法 |
CN102132920A (zh) * | 2011-02-21 | 2011-07-27 | 华南师范大学 | 一种富钾山稔子饮料及其制备方法 |
CN103721058A (zh) * | 2013-10-23 | 2014-04-16 | 青岛华仁技术孵化器有限公司 | 用于预防流感病毒的中药制剂 |
CN105777522A (zh) * | 2014-12-18 | 2016-07-20 | 六安裕发农业科技有限公司 | 一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法 |
CN105777522B (zh) * | 2014-12-18 | 2017-12-26 | 安徽农达生物技术有限公司 | 一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法 |
CN105693494A (zh) * | 2016-02-27 | 2016-06-22 | 蚌埠医学院 | 一种从贯叶连翘中提取纯化金丝桃素的工艺 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN100475762C (zh) | 2009-04-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Chanayath et al. | Pigment extraction techniques from the leaves of Indigofera tinctoria Linn. and Baphicacanthus cusia Brem. and chemical structure analysis of their major components | |
Zhang et al. | Induction of HL-60 apoptosis by ethyl acetate extract of Cordyceps sinensis fungal mycelium | |
CN100475762C (zh) | 一种贯叶金丝桃中金丝桃素提取物的提取方法 | |
CN103550263A (zh) | 一种灵芝超微纯粉及其制备方法与制剂 | |
CN102389440A (zh) | 环烯醚萜类化合物在制备抗骨质疏松药物中的应用 | |
CN103304635B (zh) | 一种环肽类化合物抗肿瘤的应用及其制备方法 | |
CN101810653A (zh) | 山芝麻提取物在制备抗肝纤维化药物中的应用 | |
CN100355775C (zh) | 一种海鞘多肽及其制备方法 | |
CN101028322B (zh) | 毛裂蜂斗菜提取物用于制备防治肿瘤疾病药物的用途 | |
CN104998022A (zh) | 一种龙血树叶提取物及其制备方法、其药物组合物、制剂与应用 | |
CN101190259A (zh) | 一种广玉兰总内酯提取物及其制备方法和应用 | |
CN103263461B (zh) | 合欢皮水提物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN110776409B (zh) | 一种印度黄檀的提取方法及提取物在抗肿瘤药物中的应用 | |
CN101433564B (zh) | 菱角提取物在制备治疗白血病药物中的应用 | |
CN101525323B (zh) | 苯乙烯基色酮类化合物及其制备方法和用途 | |
CN106942737A (zh) | 沙棘黄酮及其应用 | |
CN111848376A (zh) | 一种蓝萼香茶菜根提取物、提取分离方法及其应用 | |
CN103113196B (zh) | 一种连钱草酚及其制备方法和应用 | |
CN103285052A (zh) | 长柱金丝桃提取物在制备抗肿瘤及抑制肿瘤生长药物中的应用 | |
CN103739657B (zh) | 一种油茶皂苷化合物、其制备方法、应用及其制备的抗肿瘤药物 | |
CN104324021A (zh) | 银桦酸、银桦酸和对苯二酚及海南裂叶山龙眼活性组分在制备抗肿瘤和抗炎药物中的应用 | |
CN105434479A (zh) | 从黄绿蜜环菌中提取抗肿瘤活性组分的方法及其应用 | |
CN101966207A (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的翠绿针毛蕨总黄酮制备方法及其含量测定方法 | |
CN109464438B (zh) | 粗毛甘草素a在用于抗肿瘤药物中的用途 | |
CN110294766B (zh) | 一种超临界流体提取鸡骨香根提取物及其方法、应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C17 | Cessation of patent right | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20090408 Termination date: 20121103 |