CN1939427B - 杠板归提取物及其制备方法、药物组合物和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种杠板归提取物及其制备方法、药物组合物和用途。杠板归提取物是将新鲜采集的杠板归地上部分晾干粉碎，得到杠板归粗粉，然后用有机溶剂、含水有机溶剂或水加热回流或渗滤提取2～4次，提取液浓缩干燥后得到的。本发明杠板归提取物具有良好的解热、镇痛、抗炎作用，能够对妇科疾病，特别是非特异性外阴炎、外阴溃疡、外阴瘙痒、***炎、***、***、经闭、痛经起很好的治疗作用；同时对伤科疾病如跌扑损伤具有治疗作用。

Description

杠板归提取物及其制备方法、药物组合物和用途

技术领域：本发明涉及一种杠板归提取物及其制备方法、药物组合物和用途，属于药物技术领域。

背景技术：杠板归是蓼科植物杠板归的干燥地上部分，是西南地区特有常用药，具有悠久的药用历史。根据苗族民间用药经验，其地上部分可药用，具有清热解毒，利湿消肿，散瘀止血等功能。杠板归既可单用，也可入复方。在苗族民间，杠板归与苦参、黄柏、鸡血藤、益母草等配伍，具有清热燥湿、活血化瘀、调经止带的功能，用于***、***炎、***、红白带、痛经、***的治疗。

目前，杠板归的提取一般采用的是常规的水提醇沉法或醇提法，但对于杠板归提取物的药理学研究尚未见报道。申请人经过广泛深入的研究发现，通过将杠板归用有机溶剂、含水有机溶剂或水在一定条件下提取得到的杠板归提取物具有显著的抗菌、消炎、解热、镇痛作用，并显示出良好的治疗妇科疾病和伤科疾病的作用。

发明内容：

本发明的目的在于：提供一种杠板归提取物及其制备方法、药物组合物和用途。本发明杠板归提取物具有显著的抗菌、消炎、解热、镇痛作用，特别是对非特异性外阴炎、外阴溃疡、外阴瘙痒、***炎、***、***、经闭、痛经、跌扑损伤具有治疗作用。

本发明是这样实现的：杠板归提取物的制备方法为：将新鲜采集的杠板归地上部分晾干粉碎，得到杠板归粗粉，然后用有机溶剂、含水有机溶剂或水加热回流或渗滤提取2～4次，提取液浓缩干燥后得到杠板归提取物。

所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、***、石油醚或汽油。

具体的说，杠板归水提取物的制备方法为：取杠板归适量，粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至60℃测相对密度为1.30，放冷，加入乙醇使含醇量为70％，静置过夜，取上清液减压浓缩至相对密度为1.25的稠膏，75℃减压干燥，即得。

杠板归醇提取物的制备方法为：取杠板归适量，粉碎成粗粉，加8倍量75％的乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，余液浓缩至相对密度为1.25的稠膏，减压干燥，即得。

按上述杠板归提取物制备方法提取得到的杠板归提取物。

由上述杠板归提取物组成的药物组合物：包括作为活性成分的杠板归提取物和一种或多种药用载体或赋形剂。

本发明杠板归提取物用于制备治疗妇科疾病的药物。

所述的妇科疾病为非特异性外阴炎、外阴溃疡、外阴瘙痒、***炎、***、***、经闭或痛经。

本发明杠板归提取物用于制备治疗伤科疾病的药物。

所述的伤科疾病为跌扑损伤。

本发明杠板归提取物可单独或以药物组合物形式使用，因此还涉及含有作为活性成份的有效剂量的杠板归提取物以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-90％重量的杠板归提取物。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。如果需要，可将杠板归提取物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明的杠板归提取物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、***片、检剂、膏剂、贴剂、注射剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药***。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体：例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、***胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片、多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体：例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氮化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑石粉等；粘合剂如***胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成检剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体：例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分杠板归提取物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分杠板归提取物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

本发明杠板归提取物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。

为了验证本发明制备方法的合理性，申请人对杠板归的提取工艺进行了试验研究和筛选，具体如下：

一、杠板归水提取工艺的研究

影响煎煮的主要因素有：药材粉碎粒度、煎煮次数、加水量及煎煮时间等，申请人经过研究发现：通过以下方法优选出的提取工艺可以认为是杠板归的最佳水提取工艺，所得的提取物疗效最好。

取杠板归药材适量，按下表1试验，以出膏率及杠板归的药理活性评分作为评价指标进行提取工艺的优选，结果见表2、表3：

表1  杠板归提取工艺研究的因素水平表

表2  杠板归提取工艺优选结果表

表3  正交试验方差分析表

方差来源	SS	自由度	变异均方	统计量F	显著性
						A	2.1425	2	1.0712	5.1952
B	13.7421	2	6.8710	33.3223	P＜0.05
						C	14.1274	2	7.0637	34.2565	P＜0.05
D(误差)	0.4012	2	0.2006	1
						总计	30.4132	8

注：F_0.05(2，2)＝19.00

研究结果表明：各因素对杠板归水提取工艺影响大小的顺序为：C＞B＞A＞D，其中B、C两个因素有显著性差异，B2＞B3＞B1，C2＞C3＞C1，因此，提取次数选2次，加水量选10倍；A、D两个因素没有显著性差异，但考虑到生产实际，选择粗粉，以方便过滤提取液，煎煮时间第一次定为2小时，第二次定为1.5小时。

因此，杠板归水提取物的最佳提取工艺为：取杠板归适量，粉碎成粗粉，加10倍量的水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液。

杠板归药材经水提浓缩后，除杂相当关键，申请人采用不同浓度的乙醇进行醇沉以除去杂质，方法如下：

取杠板归粗粉，按优选的水提煎煮条件煎煮提取，减压浓缩(60-75℃，-0.08Mpa)至相对相密度1.30(60℃)，摇匀，量取一定量浓缩液，加乙醇，使乙醇含量为60％、70％、80％，醇沉24小时，取上清液减压回收乙醇，挥干，减压干燥(65-80℃，-0.08Mpa)，称醇提物重量；醇沉物减压干燥(65-80℃，-0.08Mpa)，称杂质重量。测定醇提物的药理活性，试验结果见表4。

表4  除杂工艺研究结果表

序号	药液量(ml)	含醇量(％)	醇提物量(g)	醇沉物量(g)	药理活性评分
						1	125	60	11.3658	7.5442	90
2	125	80	10.5629	8.2025	89
						3	125	70	10.4425	8.8284	92
4	125	0	19.3653	0	86

研究结果表明：醇沉浓度为70％时，除去的杂质最多，同时药理活性最高，因此，选用70％的乙醇浓度作为去除杂质的浓度。

浓缩工艺的研究：申请人考察了减压浓缩和常压浓缩两种方法，经过优选发现，减压浓缩和常压浓缩两种方法比较，减压浓缩较常压浓缩快，节约时间，且药理活性比常压浓缩高，因此，选择减压浓缩作为本提取物制备的浓缩方法。

干燥工艺：申请人研究发现，干燥温度对提取物的药理活性有一定的影响，本提取物在75℃减压干燥的药理活性最好，因此，选择75℃减压干燥作为本提取物的干燥方法。

二、杠板归醇提取工艺的研究

影响提取的主要因素有：提取次数、溶媒用量、溶媒浓度及提取时间等，申请人经过研究发现：通过以下方法优选出的提取工艺可以认为是杠板归的最佳醇提取工艺，所得的提取物疗效最好。

取杠板归药材适量，粉碎成细粉，按表5进行试验，结果见表6、表7：

表5  杠板归醇提取工艺研究的因素水平表

表6  杠板归醇提取工艺优选结果表

表7  正交试验方差分析表

方差来源	SS	自由度	变异均方	统计量F	显著性
						A	2.1249	2	1.0625	4.6681
B	12.2741	2	6.1371	26.9642	P＜0.05
						C	14.1238	2	7.0619	31.0277	P＜0.05
D(误差)	0.4552	2	0.2276	1
						总计	28.9780	8

注：F_0.05(2，2)＝19.00

研究结果表明：各因素对杠板归醇提取工艺影响大小顺序为：C＞B＞A＞D，通过直观分析，选择C2、B2、A2、D2作为最佳提取工艺，即：杠板归适量，粉碎成粗粉，加8倍量75％的乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，余液浓缩至相对密度为1.25的稠膏，减压干燥，即得杠板归醇提取物。

为了确保本发明的效果，申请人对所述杠板归提取物进行了生物活性实验，具体如下：

观察指标：鸡蛋清致大白鼠足跖肿胀实验(抗炎作用)；二甲苯致小鼠耳廓肿胀度试验(抗炎作用)；小白鼠扭体实验(镇痛作用)；酵母菌致热试验(解热作用)。

该生物活性实验所采用的杠板归提取物均为用乙醇作为提取溶剂得到的提取物。

1.杠板归提取物对鸡蛋清致大白鼠后足跖肿胀的影响：

方法及结果：取Wistar大白鼠30只，称重，用苦味酸标记，分为3组，将大鼠右后肢用手固定，在其踝关节处用圆珠笔作一标志，动物的右后肢浸入足容量测量装置内，浸入深度以标志处为界。从该装置的刻度吸管处所读取的数值即为动物右足的正常体积。连续测两次，求其平均值。给3组动物分别灌胃以下药物：杠板归提取物制得的溶液，氢化可的松，生理盐水，容量均为1ml/100g。30min后在每鼠右后肢掌心向踝关节方向进针，皮下注射10％鸡蛋清液0.1ml/只。其后每0.5小时分别测定鼠右后肢的容积，连续3次。

实验结果(表8)表明，杠板归提取物具有良好的抗炎作用(比氢化可的松强)。

表8  杠板归提取物对鸡蛋清致大白鼠后足跖肿胀的影响

注：**表示与生理盐水组比较差异极显著(P＜0.01)

2.杠板归提取物对小白鼠的镇痛作用(扭体法)：

方法及结果：昆明种小白鼠40只，体重18-22g，♀♂各半，将小白鼠腹部的毛剪掉，随机分为2组，每组20只。给药组灌服杠板归提取物0.3g/10g，对照组灌服等量生理盐水。给药后30min，各鼠腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/只。观察并记录注射醋酸溶液后15-30min内出现扭体反应的次数及时间。计算杠板归提取物的镇痛百分率。结果见表9。

结果表明：杠板归提取物对醋酸所致小白鼠扭体反应有明显的抑制作用。

表9  对醋酸所致小白鼠扭体反应的影响(x±s)

组别	动物数(只)	药物浓度(％)	15min内扭体次数
				生理盐水组	20	--	41.45±7.75
杠板归提取物组	20	5	18.02±4.33**

3.二甲苯致小鼠耳廓肿胀度试验：

方法与结果：取小鼠50只，雌雄各半，随机均分为5组。空白组给予等量生理盐水，小剂量组给予杠板归提取物溶液0.025ml/g，中剂量组给予杠板归提取物溶液0.05ml/g，高剂量组给予杠板归提取物溶液0.1ml/g，连续给药5天，对照组1次腹腔注射给予氢化可的松0.02mg/g。未次给药后1h，将40μl二甲苯涂于小鼠右耳廓两面致炎，左耳不涂为对照，4h后将小鼠麻醉处死，剪下双耳用直径9mm的打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，以左右耳片重量差作为肿胀度，计算肿胀抑制百分率。结果见表10：

表10  杠板归提取物小鼠耳廓肿胀的影响(mg，X±s)

结果表明：杠板归提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀具有显著的抑制作用，说明该提取物具有良好的抗炎作用。

4.杠板归提取物对酵母菌致大鼠体温发热的影响试验

方法与结果：正式试验前，每天测1次大鼠直肠体温，共测3次，选择体温变化在0.3℃以下的大鼠40只，雌雄各半，按体温及性别随机分成5组：正常对照组、阳性对照组(阿司匹林0.1g/kg)、杠板归提取物高、中、低剂量组，末次测体温后用20％酵母菌1ml/100g，皮下注射致热，致热后3小时灌胃给药，测定给药后1小时、2小时、3小时体温变化。结果见表11：

表11  杠板归提取物对酵母菌致热作用的影响

组别	药前体温	药后1小时	药后2小时	药后3小时
					正常对照组	38.32±0.21	39.87±0.26	39.78±0.87	39.34±0.38
阳性对照组	38.33±0.24	37.11±0.32**	37.21±0.33**	37.86±0.56*
					低剂量组	38.36±0.31	37.73±0.38**	37.79±0.26**	38.85±0.34
中剂量组	38.29±0.28	37.64±0.32**	37.71±0.41**	38.20±0.33
					高剂量组	38.31±0.27	37.77±0.34**	37.81±0.37*	39.13±0.26

注：*P＜0.05  **P＜0.01

结果表明：杠板归提取物对酵母菌致大鼠体温升高具有明显的降低体温作用，说明该提取物具有良好的解热作用。

结论：通过以上四个试验的结果表明，杠板归提取物具有良好的解热、镇痛、抗炎作用，能够对妇科疾病，特别是非特异性外阴炎、外阴溃疡、外阴瘙痒、***炎、***、***、经闭、痛经起很好的治疗作用；同时对伤科疾病如跌扑损伤具有治疗作用。

具体实施方式：

本发明的实施例1：杠板归水提取物的制备：

取杠板归地上部分干品5kg，粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至60℃测相对密度为1.30，放冷，加入乙醇使含醇量为70％，静置过夜，取上清液减压浓缩至相对密度为1.25的稠膏，75℃减压干燥，即得杠板归水提取物430g。

本发明的实施例2：杠板归乙醇提取物的制备：

取杠板归地上部分干品5kg，粉碎成粗粉，加8倍量75％的乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，余液浓缩至相对密度为1.25的稠膏，减压干燥，即得杠板归乙醇提取物410g。

本发明的实施例3：杠板归石油醚提取物的制备：

将杠板归地上部分干品5kg粉碎后，用石油醚加热回流提取，每次用石油醚30L，提取3次，合并提取液，减压蒸发至干，得到石油醚提取物370g。

本发明的实施例4：杠板归乙酸乙酯水溶液提取物的制备：

将杠板归地上部分干品5kg粉碎后，用乙酸乙酯水溶液加热回流提取，每次用乙酸乙酯水溶液40L，提取2次，合并提取液，减压蒸发至干，得到乙酸乙酯水溶液提取物370g。

本发明的实施例5：杠板归三氯甲烷提取物的制备：

将杠板归地上部分干品5kg粉碎后，用三氯甲烷渗滤提取，每次用三氯甲烷25L，提取4次，合并提取液，减压蒸发至干，得到三氯甲烷提取物250g。

本发明的实施例6：含杠板归提取物的药物组合物1：

按下述配比称取原料：杠板归200g、五倍子150g、乌梅100g、苦参100g、千里光100g。以上五味，加水煎煮2次，每次2小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)，加乙醇至浓度为70％，静置过夜，取上清夜，浓缩，减压干燥，干浸膏粉碎过160目，按浸膏与PEG20001∶1的比例称量，混合，用胶体磨研匀，压制成1000粒软胶囊。本制剂口服，每次4粒，一日3次。用于治疗妇科疾病如非特异性外阴炎、外阴溃疡、外阴瘙痒、***炎、***、***、经闭或痛经。

本发明的实施例7：含杠板归提取物的药物组合物2：

按下述配比称取原料：杠板归60g，当归30-60g，红花30g，乳香20-30g，没药20-30g，血竭20-30g，鹤虱30g，共研为细末，开水冲，候温加白酒100mL灌服，或取饮片煎汤灌服。用于治疗跌扑损伤、筋骨疼痛等伤科疾病。

本发明的实施例8：杠板归提取物单方制剂：

称取杠板归提取物200g、植物油156.8g、蜂蜡3.2g混匀，用胶体研磨机研磨均匀，用压制法罐装成软胶囊，制成1000粒，每粒0.4g。本制剂口服，一次4粒，一日3次。用于治疗百日咳、带状疱疹等。

Claims (6)

1.杠板归提取物的制备方法，其特征在于：将新鲜采集的杠板归地上部分晾干粉碎，得到杠板归粗粉，然后用乙醇或水加热回流或渗滤提取2～4次，提取液浓缩干燥后得到杠板归提取物；具体的说：取杠板归适量，粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至60℃测相对密度为1.30，放冷，加入乙醇使含醇量为70％，静置过夜，取上清液减压浓缩至相对密度为1.25的稠膏，75℃减压干燥，即得杠板归水提取物。

2.杠板归提取物的制备方法，其特征在于：将新鲜采集的杠板归地上部分晾干粉碎，得到杠板归粗粉，然后用乙醇或水加热回流或渗滤提取2～4次，提取液浓缩干燥后得到杠板归提取物；具体的说：取杠板归适量，粉碎成粗粉，加8倍量75％的乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，余液浓缩至相对密度为1.25的稠膏，减压干燥，即得杠板归醇提取物。

3.如权利要求1或2所述杠板归提取物制备方法提取得到的杠板归提取物。

4.如权利要求3所述的杠板归提取物组成的药物组合物，其特征在于：包括作为活性成分的杠板归提取物和一种或多种药用载体。

5.如权利要求3所述的杠板归提取物用于制备治疗非特异性外阴炎、***炎、***、***、痛经或外阴溃疡、外阴瘙痒、经闭的药物。

6.如权利要求3所述的杠板归提取物用于制备治疗跌扑损伤的药物。