CN1907350A - 组合物,其提取物及它们的药物用途 - Google Patents
组合物,其提取物及它们的药物用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1907350A CN1907350A CN 200510089003 CN200510089003A CN1907350A CN 1907350 A CN1907350 A CN 1907350A CN 200510089003 CN200510089003 CN 200510089003 CN 200510089003 A CN200510089003 A CN 200510089003A CN 1907350 A CN1907350 A CN 1907350A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- radix
- extracts
- preparation
- rhizoma
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及包括羌活,独活,黄芩,黄连和葛根的组合物,其提取物,其制备方法及上述组合物或其提取物的药物用途,尤其是在镇痛解热,由病毒尤其是流感病毒引起的感冒,抗炎及增强免疫功能方面的用途。
Description
发明领域
本发明涉及包括羌活,独活,黄芩,黄连和葛根的组合物,其提取物,其制备方法及上述组合物或其提取物的药物用途,尤其是在镇痛解热,由病毒尤其是流感病毒引起的感冒,抗炎及增强免疫功能方面的用途。
背景技术
目前用于预防或治疗发烧,炎症,由病毒引起的感冒或增强免疫功能的药物大多数为化学合成药,这些药物在治疗中或多或少都会带来一些药物不良反应。因此,寻找并开发疗效明确且药物不良反应小的来自植物或动物的产品仍是十分需要的。
发明内容
本发明人经研究现已发现包括来自植物的羌活、独活、葛根、黄芩和黄连的组合物或其提取物具有优良的解热镇痛、缓解或减轻或治疗由病毒尤其是流感病毒引起的感冒症状、抗炎及免疫调节作用且基本无药物不良反应。
因此,本发明涉及组合物,其包括来自植物的羌活、独活、葛根、黄芩和黄连。
本发明还涉及提取物,其特征在于:该提取物是来自植物的羌活、独活、葛根、黄芩和黄连混合物的C1-4烷基醇提取物。
本发明还涉及提取物的制备方法,其包括:
a.用含水C1-4烷基醇提取羌活、独活、葛根、黄芩和黄连的混合物;
b.过滤a)中提取液,减压浓缩滤液至浸膏,其相对密度为1.15-1.20;
c.将b)中浸膏与水搅拌,室温静置,抽滤;
d.干躁c)中抽滤后的沉淀物。
本发明还涉及药物组合物,其包括来自植物羌活、独活、葛根、黄芩和黄连的提取物和/或药用载体。
本发明还涉及来自植物的羌活、独活、葛根、黄芩和黄连的组合物或其提取物在制备用于预防或治疗发烧、由病毒引起的感冒,炎症或与免疫功能有关症状或疾病的药物中的用途。
根据本发明,本发明中所用的羌活优选为伞形科植物羌活(Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang)的干躁根茎,其通常应符合《中国药典》2000年版(一部)第144页羌活项下的有关规定。进一步讲,所述羌活优选含异欧胡前素(C16H14O4)不少于0.3%。
根据本发明,本发明中所用的独活优选为伞形科植物重齿毛当归(Angelica pubescens Maxin.F.biserrata Shan et Yuan)的干躁根,其通常应符合《中国药典》2000年版(一部)第215页独活项下的有关规定。进一步讲,所述独活优选含蛇床子素(C15H16O3)不少于0.3%。
根据本发明,本发明中所用黄芩优选为唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的干躁根,其应符合《中国药典》2000年版(一部)第248页黄芩项下的有关规定。
根据本发明,本发明所用的黄连优选毛茛科植物黄连(Coptischipensis Franch)的干躁根茎,其应符合《中国药典》2000年版(一部)第250页黄连项下的有关规定。
根据本发明,本发明中所用葛根优选为兰科植物苷葛藤(Puerariathomsonii Benth)的干燥根,其应符合《中国药典》2000年版(一部)第273页葛根项下的有关规定。
根据本发明,本发明的组合物可以经煎煮后使用。
根据本发明,本发明的提取物可以单独或与药物载体混合通过口服或非肠道途径给药。适于口服给药的剂型举例讲有:片剂,胶囊,口服液或悬浮液等。适于非肠道给药的剂型举例讲有注射液。进一步讲,本发明提取物也可为单位剂型,如0.1-0.8g本发明提取物/粒胶囊。
根据本发明讲,本发明中所述含水C1-4烷基醇优选为80%乙醇水溶液。根据本发明,本发明中所述药用载体为制药领域中已知的药用载体,举例讲,如国家药品注册中允许使用的药用载体或赋形剂或辅料。
根据本发明,本发明所述提取物的制备可以如下进行:将羌活,独活,葛根,黄芩和黄连的混合物用80%乙醇回流提取两次,每次1小时。第1次提取所加80%乙醇量为羌活,独活,葛根,黄芩和黄连量的8倍,然后滤过;第二次提取所加80%乙醇量为所述混合物的6倍量,滤过。合并第一次和第二次的乙醇提取液,减压浓缩至浸膏,加6倍量水到浸膏中,充分搅拌,静置6小时,抽滤。所得沉淀于60-100℃下干燥,然后粉碎,过60目筛,得粉末状物。提取率6-48%。根据本发明,本发明提取物(下面简称本品)具有下面性质:
(1)取本品0.3g,加无水***20ml,室温放置2小时,滤过,滤液低温挥去***,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。取异欧前胡素对照品,加甲醇制成每ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。另取羌活对照药材0.2g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验,吸取供试品溶液4μl、对照品溶液2μl、对照药材溶液4μl,分别点样于同一硅胶G薄层板上,以正己烷-苯-乙酸乙酯(3∶1∶1)为展开剂,展开,取出,105℃加热约5小时至斑点清晰,冷却,日光下检视。供试品色谱中,在与对照品及对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(2)取本品0.3g,加无水***20ml,室温放置2小时,滤过,滤液低温挥去***,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。取蛇床子素对照品,加甲醇制成每ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。另取独活对照药材0.2g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验,吸取供试品溶液4μl、对照品溶液2μl、对照药材溶液4μl,分别点样于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-***-冰醋酸(10∶10∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品及对照药材色谱相应的位置上,显示相同蓝紫色的荧光斑点;
(3)取本品0.2g,加甲醇10ml,室温放置1小时,滤过,滤液即作为供试品溶液。取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。另取黄连对照药材0.1g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验,吸取供试品溶液2μl、对照品溶液1μl、对照药材溶液2μl,分别点样于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品及对照药材色谱相应的位置上,显示相同亮黄色的荧光斑点;
水分:不得超过5.0%(《中国药典》2000年版一部附录IX H水分测定法项下烘干法)。
总香豆素含量:对照品溶液的制备精密称取蛇床子素对照品适量,加无水乙醇制成每ml含0.087mg的溶液,作为对照品溶液。
标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,置于25ml量瓶中,以甲醇稀释至刻度,摇匀。以无水乙醇为空白。照分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录V),在322nm波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线。
测定法取本品约50mg,精密称定,置50ml三角瓶中,加无水***30ml,超声提取30分钟,滤过,用无水***分次洗涤滤纸和漏斗,洗涤液与滤液合并,回收***,残渣以无水乙醇溶解,置于25ml量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,静置。精密量取上述溶液1ml置25ml量瓶中,以无水乙醇稀释至刻度,摇匀。照标准曲线制备项下的方法,测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中总香豆素的含量,计算,即得。
本品含总香豆素以蛇床子素(C15H16O3)计,不得低于6.5%。
总黄酮:对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品适量,以80%乙醇溶解,制成浓度为0.088mg/ml的对照品溶液。
标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,置于25ml量瓶中,以80%乙醇稀释至刻度,摇匀。以80%乙醇为空白。照分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录V),在276nm波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线。
测定法取本品约30mg,精密称定,置50ml量瓶中,加80%乙醇30ml,超声提取10分钟,以80%乙醇稀释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液1ml拌入0.5g聚酰胺粉(80-120目),水浴加热挥干溶剂后,加到已装有0.5g聚酰胺粉的层析柱中,用水洗脱40ml,弃去,改用80%乙醇洗脱,收集洗脱液约100ml,减压浓缩至小体积,转移至25ml量瓶中,加80%乙醇稀释至刻度,摇匀。照标准曲线制备项下的方法,测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的含量,计算,即得。
本品含总黄酮以黄芩苷(C12H18O11)计,不得低于24.3%。
总生物碱对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量,以水溶解,制成浓度为0.022mg/ml的对照品溶液。
标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,置于50ml分液漏斗中,加水补充至同一体积,依次精密加入pH5.20的邻苯二甲酸氢钾溶液5ml、0.1%溴麝香草酚蓝溶液1ml、氯仿10ml,用力振摇2分钟,静置40分钟,分取下层氯仿液,以相应的试剂为空白。照分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录V),在416nm波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线。
测定法取本品约30mg,精密称定,置50ml量瓶中,加80%乙醇30ml,超声提取10分钟,以80%乙醇稀释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液0.5ml,照标准曲线制备项下的方法,自“加水补充至同一体积”起,依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中总生物碱的含量,计算,即得。
本品含总生物碱以盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl)计,不得低于19.2%。
具体实施方式
下面的实施例及试验例用来进一步说明本发明,但其并不意味着对本发明的任何限制。
实施例1
本发明组合物的组成:
成份 量(克)
羌活(干燥根茎) 700
独活(干燥根) 525
黄芩(干燥根) 525
黄连(干燥根茎) 525
葛根(干燥根) 525
实施例2
本发明提取物的制备
将羌活700g,独活525g,葛根525g,黄芩525g和黄连525g混合,往其中加入80%乙醇回流提取2次,每次1小时。其中第一次提取加入的80%乙醇量为所述混合物的8倍量,提取后滤过;第二次提取加入的80%乙醇量为所述混合物的6倍量,提取后过滤。合并第1次提取和第二次提取的80%乙醇提取液,减压浓缩(65℃,0.095MPa)至浸膏(50℃,相对密度1.15-1.20),加水至浸膏总重的6倍,充分搅拌,室温清置6小时,抽滤,沉淀物80℃下真空干躁,粉碎,过60目筛,得到提取率为6.48%的本发明提取物。
实施例3
实施例2提取物对正常和发热大鼠体温的作用
材料与方法
受试药物
实施例2。清华大学生物科学与技术系药物药理室提供。批号:010318。用时以蒸馏水溶解药物至所需浓度。
[动物]雄性Wistar大鼠,非近交系封闭群。体重:195.58±10.56g(正常体温)。178.73±11.13g(发热大鼠治疗给药),185.42±13.55g(发热大鼠预防给药)。由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供。合格证号:SCXK11-00-0006。每组12只。
[试剂]干酵母粉。100g/袋。批号:990608。丹麦合资丹保利酵母厂生产。用时以生理盐水调至所需浓度。
[试验仪器]HP-200液晶温度计。测温探头Φ2mm。北京师范大学实验仪器厂生产。
[试验主要步骤]
对正常大鼠体温的影响:取大鼠随机分组,测量体温两次,间隔30分钟,取两次体温差值在0.4℃以内者作为试验对象。灌胃不同剂量的药物,给药后分别于1,2,3,4,5,6小时测量体温,并记录之。计算体温波动值和曲线下面积。做组间比较。
对发热大鼠的治疗作用:取大鼠随机分组,测量体温两次,间隔30分钟,取两次体温差值在0.4℃以内者,作为试验对象。背部皮下注射15%干酵母生理盐水液,1mL/100g体重。注射后放入笼中,禁食不禁水,于注射后3-5小时测体温,取体温升高0.8以上者纳入试验组,灌胃不同剂量的药物。分别于药后1,2,3,4,5,6小时测量体温并记录之,计算体温升高值和曲线下面积。
对大鼠体温升高的预防作用:取大鼠随机分组,测量体温两次,间隔30分钟,取两次体温差值在0.4以内者,作为试验对象。口服不同剂量的药物,于给药后即刻背部皮下注射酵母液,剂量同上。于注射后1,2,3,4,5,6小时测量体温,计算体温升高值和曲线下面积(AUC),以此来反应体温抑制指数。
大鼠测深部直肠温度(探头6cm)来反应体温。
体温升高值=药后体温-正常平均体温。
体温抑制指数(TRI)=∑[(Ci+Ci-1)/2*Δt](C:体温变化值,i:采样点。t:测试时间。
剂量设置
分组 | 剂量(mg/kg) | 相当于临床用量的倍数 | 临床用量(mg/kg) |
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 等体积100840400200100 | 8.3311.6711.45.72.85 | 127234.234.234.2 |
给药途径与体积:灌胃,1mL/100g体重。
[试验对照]
1.空白对照:蒸馏水。
2.阳性药对照:感冒软胶囊。北京同仁堂制药厂生产,批号:8170098。本品由羌活、麻黄、荆芥穗、川芎、薄荷等药物组成,具有散风解热的作用,用于外感风寒引起的头痛身热、鼻塞流涕、恶寒无汗、骨节酸痛、咽喉肿痛等症,450mg/粒。zz-3242-京卫药准字(1993)第004008号。
阿斯匹林。0.3g/片。具有解热镇痛的作用。批号:001208。北京市曙光制药厂生产。
[数据处理]试验数据以EXCEL软件处理。组间t检验。以P<0.05,P<0.01为显著性检验水平。
结果见表1-1至1-5。
表1-1对正常大鼠体温的影响(x±s)
分组 | 剂量mg/kg | 正常体温℃ | 给药后不同时间体温升高值(℃) | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6(小时) | |||
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 100840400200100 | 37.17±0.3637.3±0.3637.23±0.4336.86±0.3537.17±0.4637.42±0.196 | -0.06±0.15-0.02±0.29-0.16±0.27-0.06±0.28-0.21±0.44-0.14±0.24 | -0.34±0.32-0.48±0.640.01±0.39*-0.34±0.64-0.09±0.34-0.18±0.36 | -0.24±0.34-0.61±1.070.11±0.28*-0.19±0.450.095±0.19-0.03±0.34 | -0.14±0.24-0.59±0.970.04±0.35-0.01±0.350.095±0.22-0.13±0.22 | -0.04±0.21-0.67±1.29-0.05±0.460.15±0.370.085±0.34-0.07±0.27 | -0.02±0.25-0.51±0.87-0.09±0.330.07±0.230±0.31-0.20±0.23 |
与对照组相比,*P<0.05。n=10
表1-2不同药物对发热大鼠的预防作用(x±s)
分组 | 剂量mg/kg | 正常体温℃ | 给药后不同时间体温升高值(℃) | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6(小时) | |||
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 100840400200100 | 37.65±0.4037.73±0.3737.73±0.3537.81±0.3637.75±0.4237.68±0.35 | -0.04±0.15-0.12±0.36-0.12±0.47-0.03±0.300.085±0.170.095±0.30 | -0.16±0.15-0.47±0.35*-0.27±0.37-0.15±0.31-0.1±0.45-0.15±0.16 | -0.41±0.30-0.4±0.21-0.39±0.30-0.15±0.26*-0.1±0.34*-0.15±0.39 | 0.13±0.320.02±0.330.1±0.360.17±0.380.23±0.330.296±0.245 | 0.91±0.270.53±0.40*0.66±0.290.57±0.35*0.625±0.33*0.695±0.268 | 1.11±0.180.65±0.43**0.81±0.28*0.75±0.34*0.82±0.36*0.925±0.236 |
与对照组相比,*P<0.05,**P<0.01。n=10
表1-3不同药物对发热大鼠体温的抑制作用(x±s)
分组 | 剂量mg/kg | 给药前体温升高值℃ | 给药后不同时间体温升高值(℃) | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6(小时) | |||
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 100840400200100 | 0.99±0.151.075±0.251.105±0.2241.125±0.1961.02±0.1461.025±0.155 | 1.06±0.140.695±0.36**0.995±0.2270.935±0.2850.96±0.2961.025±0.251 | 1.06±0.150.395±0.22**0.825±0.307*0.745±0.3.9**0.84±0.281*0.895±0.339 | 1.10±0.250.515±0.207**0.855±0.2730.555±0.309**0.75±0.339*0.8255±0.341 | 1.12±0.250.625±0.224**0.745±0.174**0.495±0.206**0.64±0.404**0.725±0.357* | 0.99±0.260.815±0.2480.735±0.268*0.535±0.267**0.62±0.359*0.735±0.323 | 0.86±0.3240.725±0.4040.665±0.2770.525±.241*0.72±0.440.695±0.33 |
与对照组相比,*P<0.05,**P<0.01。n=10
表1-4不同药物大鼠体温指数比较(x±s)
分组 | 剂量mg/kg | TRI6小时,℃ | ||
对正常大鼠体温 | 对发热大鼠预防 | 对发热大鼠治疗 | ||
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 100840400200100 | -0.81±1.148-2.870±4.621-0.060±1.776-0.340±1.9690.073±1.170-0.680±1.182 | 1.005±0.972-0.055±1.3710.445±1.3470.800±1.3571.110±1.4311.210±1.010 | 5.230±0.9473.060±0.909**3.990±1.051*3.060±1.152**3.690±1.617*4.040±1.515* |
与对照组相比,*P<0.05,**P<0.01。n=10
表1-5不同药物对发热大鼠体温的升高百分率(x±s)
分组 | 剂量mg/kg | 给药前体温升高百分率(%) | 给药后不同时间体温升高百分率(%) | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6(小时) | |||
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 100840400200100 | 0(0.99±0.15)0(1.075±0.25)0(1.105±0.224)0(1.125±0.196)0(1.02±0.146)0(1.025±0.155) | 7.07-35.3-9.95-16.9-5.880 | 7.07-63.3-25.3-33.8-17.6-12.7 | 11.11-52.1-22.6-50.7-26.5-19.5 | 13.13-41.9-32.6-56-37.3-29.3 | 0-24.2-33.5-52.4-39.2-28.3 | -13.1-32.6-39.8-53.3-39.4-32.2 |
*体温升高百分率=[(给药后体温升高均值-给药前体温升高均值)/给药前体温升高均值*100%]
**“-”:体温降低。“+”:体温升高。
讨论与结论
1对正常大鼠体温的影响。给药后不同时间内对照组体温略有下降。阿斯匹林体温下降较明显,但由于标准差过大,与对照组相比无统计学意义。实施例2提取物三剂量组体温变化无明显差异。感冒软胶囊在药后2,3小时体温无明显下降,略有升高,与对照组相比有统计学意义,但由于体温升高在0.2℃之内,无实际意义。
2对酵母液给大鼠背部皮下注射导致体内产生内生致热原,从而引起发热。这种发热需要3-5小时。在体温升高之前有一个明显体温下降的过程,在这一时期大鼠明显地表现为倦缩、寒颤等。此与体内产热过程有关。而且这种体温下降越明显,之后的发热越高。实验结果表明,实施例2提取物能够明显减轻造模后大鼠体温下降,并能在一定程度上抑制其后的发热。大中剂量在注射酵母后3,5,6小时与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。阳性药阿斯匹林在注射酵母后2小时体温明显降低,并与对照组相比有统计学意义。在5,6小时能够明显抑制体温的升高。感冒软胶囊与阿斯匹林有相同的效应。只是作用轻于阿斯匹林。对注射酵母后的体温下降无明显抑制作用。
3在注射酵母后待大鼠体温升高至0.8℃以上者作为发热模型,然后口服不同剂量的药物,以观察其解热作用。实验结果表明,给药后实施例2提取物对发热大鼠的体温有明显的抑制作用,大剂量组药后1小时体温下降16.9%,2,3小时体温分别下降33.8%和50.7%。相同时间对照组体温则分别上升7.07%,7.07%和11.11%。阳性药阿斯匹林表现出作用快但持续时间短特点,药后1-3小时体温分别下降35.3%,63.3%和52.1%。以后体温回升。感冒软胶囊解热作用弱于实施例2提取物,药后1-3小时,体温分别下降9.95%,25.3%和22.6%。具体结果参表5.4 TRI(temperature resistant index)为不同时间点体温变化值所描绘曲线下面积(AUC)之和。它不但反应某一时间点体温的高低,而且全面反应在实验观察时间内整个体温变化的情况。是一个综合评价药物解热作用的指标。结果表明,实施例2提取物对发热大鼠体温整体有明显的抑制作用,大中小三剂量TRI6小时分别为3.060±1.152,3.690±1.617和4.040±1.515,与对照组相比(5.230±0.947),差异有显著性(P<0.05)。阿斯匹林有明显的作用,TRI6小时为3.060±0.909。感冒软胶囊也有明显的抑制作用,其TRI6小时为3.990±1.051,但不及实施例2提取物大剂量组,仅相当于中剂量组效应。
对正常大鼠及发热预防作用的TRI6小时,由于个体差异较大,标准差过大,虽有一定的趋势,但无统计学意义。
但总地来说,实施例2提取物对正常大鼠体温无明显影响,对发热大鼠的体温有明显的抑制作用。
二对发热家兔体温的作用
实施例2提取物能够明显的抑制发热家兔的体温升高.
观察实施例2提取物对发热家兔的体温影响。
材料与方法
受试药物:
实施例2提取物。批号及来源同前。用时以蒸馏水溶解药物至所需浓度。
动物为雄性日本大耳白家兔,非近交系封闭群。体重:1.78±0.14kg。由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供。合格证号:SCXK11-00-0002。每组6只。
[试剂]大肠杆菌内毒素。购自上海第二医科大学微生物教研室。批号001116。肝素为Sigma产品。
[试验仪器]HP-200液晶温度计。测温探头Φ2mm。北京师范大学实验仪器厂生产。AS-2100恒温水浴振荡仪。上海医用仪器厂生产。LD5-2A型离心机。北京医用离心机厂。
试验主要步骤
内生致热原制备:参文献[7-9]进行。
将正常雄性大鼠肝素化(1200ug/kg,iv),然后颈总动脉取血,在全血中加入大肠杆菌内毒素(5ug/100mL全血),38℃水浴振荡温育1小时,2000转离心15分钟,用无菌生理盐水洗涤沉淀,再离心15分钟,去上清。在沉淀中加入与原上清等体积的无菌生理盐水,38℃水浴培养18小时,2000转离心15分钟,取上清液,用Φ0.22um的微孔滤膜超滤。取滤液(EP液)分装,-20℃保存备用。
发热家兔模型的制备及给药:取正常家兔随机分为6组,测两次体温,取均值作为正常体温。每只家兔耳缘静脉注射EP液,3mL/kg体重。注射完即刻灌胃不同剂量的药物。分别于给药后0.5,1,2,3,4,5,6小时测1次体温。计算体温变化值和曲线下面积。做组间比较。
3兔测深部直肠温度(探头6cm)来反应体温.
5体温升高值=药后体温-正常平均体温。
体温抑制指数(TRI)=∑[(Ci+Ci-1)/2*Δt](C:体温变化值,i:采样点。t:测试时间。
剂量设置
分组 | 剂量(mg/kg) | 相当于临床用量的倍数 | 临床用量(mg/kg) |
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 等体积5042020010050 | 4.1655.8355.72.851.425 | 127234.234.234.2 |
[给药途径与体积]灌胃,2mL/kg体重。
[试验对照]
1.空白对照:蒸馏水。
2.阳性药对照:
感冒软胶囊。北京同仁堂制药厂生产,批号:8170098。本品由羌活、麻黄、荆芥穗、川芎、薄荷等药物组成,具有散风解热的作用,用于外感风寒引起的头痛身热、鼻塞流涕、恶寒无汗、骨节酸痛、咽喉肿痛等症,450mg/粒。zz-3242-京卫药准字(1993)第004008号。
阿斯匹林。0.3g/片。具有解热镇痛的作用。批号:001208。北京市曙光制药厂生产。
[数据处理]试验数据以EXCEL软件处理。组间t检验。以P<0.05,P<0.01为显著性检验水平。
结果
表2-1不同药物对发热家兔体温的抑制作用(x±s)
分组 | 剂量mg/kg | 给药后不同时间体温升高值(℃) | ||||||
0.5 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6(小时) | ||
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 5042020010050 | 0.786±0.2431.0±0.2830.883±0.470.785±0.341.125±0.3920.45±0.259* | 1.10±0.2020.617±0.389*1.081±0.1561.022±0.3771.175±0.1991.0±0.148 | 1.10±0.2720.55±0.114**0.605±0.384*0.486±0.31**0.758±0.25*0.617±0.24** | 0.943±0.2320.433±0.129**0.477±0.38*0.472±0.289**0.608±0.291*0.517±0.232** | 0.914±0.2560.45±0.13**0.431±0.315*0.329±0.193**0.492±0.229**0.317±0.256** | 0.814±0.1750.383±0.147**0.386±0.221**0.314±0.182**0.425±0.214**0.25±0.221** | 0.514±0.1700.333±0.1440.266±0.2020.275±0.17*0.292±0.250.083±0.232** |
与对照组相比,*P<0.05,**P<0.01。n=6
表2-2不同药物家兔体温指数比较(x±s)
分组 | 剂量mg/kg | TRI6小时,℃ |
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 5042020010050 | 5.325±1.032.850±0.788**3.708±1.175*3.358±1.066**4.019±1.067*2.854±0.978** |
与对照组相比,*P<0.05,*P<0.01。n=6
表2-3不同药物对发热家兔体温的升高百分率的影响
分组 | 剂量mg/kg | 给药后不同时间体温升高百分率(%) | ||||||
0.5 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6(小时) | ||
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 5042020010050 | 0(0.79±0.24)0(1.0±0.283)0(0.883±0.47)0(0.785±0.34)0(1.125±0.392)0(0.45±0.259) | 39.95-38.322.4230.194.44122.2 | 39.95-45.0-31.5-38.1-32.637.11 | 19.97-56.7-46.0-39.9-46.014.89 | 16.28-55.0-51.2-58.1-56.3-29.6 | 3.56-61.7-56.3-60.0-62.2-44.4 | -34.6-66.7-69.9-65.0-74.0-81.6 |
*体温升高百分率=[(给药后体温升高均值-0.5小时体温升高均值)/0.5小时体温升高均值*100%]
**“-”:体温降低。“+”:体温升高。
讨论与结论
1在注射EP后各组家兔体温均明显升高,唯小剂量组升高幅度较小。对照组体温升高持续5小时,待6小时时体温下降。
2实施例2提取物三剂量组对发热家兔体温有明显的抑制作用。以大剂量明显,并呈一定的量效关系。一般在药后2小时体温明显下降,并能持续至5-6小时。阳性药阿斯匹林作用较快,在药后1小时即使体温明显下降,下降率为38.3%。感冒软胶囊解热特点基本同实施例2提取物。
3结果表明,实施例2提取物对发热大鼠体温整体有明显的抑制作用,大中小三剂量TRI6小时分别为3.358±1.066,4.019±1.067和2.854±0.978,与对照组相比(5.325±1.03),差异有显著性(P<0.05)。以大、小剂量组明显。阿斯匹林有明显的作用,TRI6小时为2.850±0.788。感冒软胶囊也有明显的抑制作用,其TRI6小时为3.708±1.175,但不及实施例2提取物大、小剂量组,仅相当于中剂量组效应。
实施例2提取物对对发热家兔的体温有明显的抑制作用。
实施例4
实施例2提取物的抗病毒作用:
在MDCK细胞中研究实施例2提取物对细胞的毒性,及对流感病毒甲型,流感病毒乙型的抑制效果。实验表明对流感病毒甲型,实施例2提取物两批实验的半数有效浓度(IC50)平均为0.055±0.011mg/mL,对流感病毒乙型,两批实验的半数有效浓度平均为0.048±0.0014mg/mL,对细胞的半数毒性浓度(TD50)平均为0.188±0mg/mL。实施例2提取物0.078mg/mL在VERO细胞内对COXB3感染的CPE无抑制作用。
[试验目的]观察观察实施例2提取物对感染小鼠的抗病毒作用,以及在细胞培养内对流感病毒甲、乙型,COXB3的抑制作用。具体如下所示。
对小鼠感染病毒的保护作用
材料与方法
[受试药物]实施例2提取物。批号及来源同前。用时以蒸馏水溶解药物至所需浓度。
[实验动物]KM小鼠,非近交系封闭群,雄性。体重:15.24±0.81g。由中国预防医学科学院微生物流行病研究所提供。合格证号:96-36号。每组15只。
[病毒株及培养基]购自中国预防医学科学院病毒所。流感病毒(A31.四川97-315)。牛肉汤粉。购自中国药品生物制品检定所,批号:001224。试验步骤:
稀释病毒:用肉汤将流感病毒稀释成2个LD50/0.05ml,置冰水浴中备用。感染小鼠:选健康小鼠,随机分为7组,每组15只,于***轻度麻醉下滴鼻感染(小鼠用***麻醉,使其头部仰起,用注射针头***鼻腔,缓慢滴入流感病毒接种物),用0.25ml注射器每只小鼠接种50ul。
药物防治:于病毒感染前一天开始灌胃给药,每天两次,共给药3天。连续观察14天。逐日记录动物发病症状和死亡数。设病毒、药物、阳性药和正常对照组等。
[给药途径与体积]灌胃,0.2ml/10g体重。
[试验对照]
1.空白对照:蒸馏水。
2.阳性药对照。感冒软胶囊。北京同仁堂制药厂生产,批号:8170098。本品由羌活、麻黄、荆芥穗、川芎、薄荷等药物组成,具有散风解热的作用,用于外感风寒引起的头痛身热、鼻塞流涕、恶寒无汗、骨节酸痛、咽喉肿痛等症,450mg/粒。zz-3242-京卫药准字(1993)第004008号。
病毒唑。50mg/片。批号:010414。苏中制药厂生产。抗病毒药。结果
表3-1实施例2提取物对流感病毒感染小鼠存活率的影响(x±s)
分组 | 剂量mg/kg | 动物数 | 死亡数 | 死亡百分率% | 死亡抑制率% |
正常对照病毒对照病毒唑感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 701680800400200 | 15151515151515 | 014586810 | 093.3333.33*53.3340.0*53.33*66.67 | 64.3142.8757.1342.8728.51 |
x2检验,与病毒对照组相比,*P<0.05。
对流感病毒的抑制试验
每mL20-30万个细胞接种于96孔板中,每孔0.1mL,37℃ 2.5%CO2培养24小时,弃培养液,加入适量病毒,37℃ 2.5%CO2吸附2.5-3小时,弃病毒液,加入列毒浓度的药液,作2倍系列稀释,8个稀释度分别为5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.15625,0.079,0.039mg/mL.每浓度2个孔,37℃ 2.5%CO2培养48小时,观察细胞病变,完全破坏为4;75%破坏为3;50%破坏为2,25%破坏为1;无病变为0。计算每浓度药液平均细胞病变程度。共进行两批实验,设细胞对照,病毒对照,阳性药病毒唑对照.
药物效果计算:计算药物半数有效浓度(IC50)及治疗指数(TI).
IC50=Antilog[(A+(50-A)/(B-A))×C]
A=Log<50%药物浓度。B=Log>50%药物浓度。C=Log稀释倍数。
TI=TD50/IC50
4VER细胞培养液及实验方法同MDCK细胞.
结果
实施例2提取物对MDCK细胞的毒性
二批实验浓度为2,1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.03125,0.015625mg/mL,显微镜观察细胞病变,二批实验结果表明实施例2提取物对MDCK细胞半数有毒浓度TD50为0.188±0mg/mL。
表3-2实施例2提取物体外抗流感病毒甲型及乙型细胞的IC50(x±s)
样品 | 病毒株 | 感染病毒TCID50 | IC50 (mg/mL) | TD50(mg/mL) | TI | |
24h | 48h | |||||
实施例2提取物病毒唑实施例2提取物病毒唑 | 济防90-15(甲)济防90-15济防97-13(乙)济防97-13 | 1010010010-19.1100-19.1100 | 0.037±0.00990.075±0.0260.027±0.00140.033±0.018 | 0.0550.011-0.088±0.00710.048±0.00140.0630.058±0.022 | 0.188±00.188±0 | 3.4(48h)5.1(24h)>13.33.9(24h)7.0(24h)3.0(48h)>30.3 |
注:两批实验用药物为同一批号。
结论
1小鼠抗病毒试验结果表明,实施例2提取物具有一定抗病毒作用。可以改善感染小鼠的生命质量,延长生存时间,降低死亡率。三剂量死亡抑制率分别为57.13%,42.87%和28.51%。大中剂量的差异与病毒对照组相比有统计学意义(P<0.05)。阳性药病毒唑表现出明显的抑制作用,其抑制率为64.31%。感冒软胶囊为42.87%,效果同实施例2提取物中剂量组。
2实施例2提取物对MDCK细胞的半数有毒浓度为0.188±0mg/mL,对VERO细胞的TD50为0.156±0mg/mL.实施例2提取物抑制流感甲型病毒IC50为0.055±0.011mg/mL,治疗指数为3.4,对流感病毒乙型IC50为0.048±0.0014mg/mL,治疗指数为3.9.实施例2提取物最大无毒浓度0.078mg/mL对COXB3病毒无抑制作用.
实施例5
实施例2提取物的体内外抗菌作用
(一)对小鼠感染金葡菌的对抗作用
材料与方法
[受试药物]实施例2提取物。批号及来源同前。用时以蒸馏水溶解药物至所需浓度。
[动物]KM小鼠,非近交系封闭群,雌雄各半。体重:18.77±0.67g。由中国预防医学科学院微生物流行病研究所提供。合格证号:96-36号。每组20只。
[实验用菌株及培养基]金黄色葡萄球菌ATCC25923。由中国医学科学院医药生物技术所药理室提供。牛肉汤粉。购自中国药品生物制品检定所,批号:001224。
[试验主要步骤]
1.稀释菌液。用金黄色葡萄球菌的肉汤过夜培养物作系列稀释(10-1,10-2,10-3......),取每稀释液0.05ml腹腔注射于小鼠,引起小鼠全部死亡的最低细菌量(稀释度)为最小致死量(MLD),选取引起80-90%小鼠死亡的的细菌液备用。
2.感染小鼠。选健康小鼠,随机分为6组,每组20只,腹腔注射经预试实验测得LD80-90稀释度的金黄色葡萄球菌液感染各组小鼠,每鼠注射0.5ml。
3.药物防治:于感染接种前1h,感染接种后6h,24h各给药一次,每次0.5ml。设细菌、药物、阳性药和正常对照组等,连续观察10天,逐日记录动物发病症状和死亡数。
4.数据处理:
死亡率=每组死亡数/每组数×100%
死亡抑制率(%)=(细菌对照组死亡率-实验组死亡率)/细菌对照组死亡率×100%
[给药途径与体积]灌胃,0.5ml/只。
[试验对照]
1.空白对照:蒸馏水。
2.阳性药对照:感冒软胶囊,北京同仁堂制药厂生产,批号:8170098。本品由羌活、麻黄、荆芥穗、川芎、薄荷等药物组成,具有散风解热的作用,用于外感风寒引起的头痛身热、鼻塞流涕、恶寒无汗、骨节酸痛、咽喉肿痛等症,450mg/粒.zz-3242-京卫药准字(1993)第004008号。
结果
表4-1对小鼠抗菌作用的影响(x±s)
分组 | 剂量mg/kg | 动物数 | 死亡数 | 死亡百分率(%) | 死亡抑制率(%) |
正常对照细菌对照感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 1680800400200 | 202020202020 | 01784710 | 85.040.0*20.0**35.0*50.0 | 52.9476.4758.8241.18 |
x2检验,与细菌对照组相比,*P<0.05,**P<0.01。
二体外抗菌作用
材料与方法
[药物]实施例2提取物和对照药感冒软胶囊,均同上。
[培养基]MH琼脂培养基由中国药品生物制品检定所购进。MH肉汤培养基和脑心浸液培养基为美国DIFCO公司产品。
[细菌]试验菌株为25株实验室保存标准菌株和近两年北京地区医院临床分离菌,质控菌选用金黄色葡萄球菌ATCC29213、大肠杆菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。
[实验方法]最低抑菌浓度(MIC)测定。采用平皿稀释法和DENLAY多点接种进行药敏实验,试验菌用营养肉汤及脑心浸液增菌;药物加少量乙醇助溶后用MH肉汤二倍稀释成各种所需浓度,分别加适量到平皿中,MH琼脂培养基溶化后定量注入含药液平皿内混匀,药物的终浓度分别为0.1,0.2,0.4......50mg/mL。肺炎链球菌、化脓性链球菌和粪肠球菌的培养基内含5%脱纤维的羊血,平皿中培养基凝固后用多点接种器接种试验菌(105cfu/点),置35℃恒温培养18小时(肺炎球菌、化脓链球菌和粪肠球菌置5%CO2培养箱培养24小时)后观察结果,无菌生长的平皿中所含药物最小的浓度即为最低抑菌浓度(MIC)。
结果
表4-2实施例2提取物的抗菌谱测定
细菌 | MIC(mg/mL) | |
实施例2提取物 | 感冒软胶囊 | |
1金葡菌ATCC292132金葡菌ATCC259233表葡菌ATCC122284化脓链球菌5565化脓链球菌A16肺炎链球菌01-17粪肠球菌322218粪肠球菌322259大肠杆菌ATCC2592210大肠杆菌ATCC3521811铜绿假单胞菌ATCC2785312铜绿假单胞菌2913奇异变形杆菌01-1014普通变形杆菌5615摩根变形菌4908616雷极变形杆菌49006 | 506.2512.50.80.81.56>50>50>50>5025256.256.253.1256.25 | >50>50>50505050>50>50>50>50>50>50>50>50>50>50 |
17阴沟肠杆菌4530118产气肠杆菌4510219醋酸钙不动杆菌2500120粘质沙雷氏菌4100221弗劳地枸橼酸杆菌00-1022肺炎克雷白杆菌00-1023流感嗜血杆菌ATCC5854624流感嗜血杆菌99-425流感嗜血杆菌99-5 | 50>502550>50>506.2512.56.25 | >50>50>50>50>50>50>50>50>50 |
结论
1实施例2提取物对革兰氏阳性菌中金葡菌、表葡菌、化脓链球菌和肺炎链球菌均有一定抗菌活性。其中对化脓性链球菌和肺炎链球菌的抗菌活性较强,MIC分别为0.8和1.56mg/mL,但对粪肠球菌的抗菌活性较弱,MIC≥50mg/mL;实施例2提取物对革兰氏阴性菌中铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌、普通变形杆菌、摩根变形杆菌、雷极变形杆菌、阴沟肠杆菌、醋酸钙不动杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸杆菌和流感嗜血杆菌均有一定抗菌活性,其中对摩根变形杆菌和流感嗜血杆菌的抗菌活性较强,MIC分别为3.125和6.25-12.5mg/mL对产气肠杆菌和肺炎克雷白杆菌的MIC均≥50mg/mL。
2以体外有明显抑菌作用的菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923做小鼠体内接种,结果表明,实施例2提取物具有明显抑制感染小鼠死亡率的作用。三剂量由大到小死亡抑制率分别为76.47%,58.82%和41.18%。感冒软胶囊在体外实验中效果不明显,但在体内实验中表现出一定的活性,其对感染小鼠死亡抑制率为52.94%。
实施例6
实施例2提取物对化学刺激所致疼痛及炎症肿胀的抑制作用。
[试验目的]观察实施例2提取物对醋酸所致小鼠疼痛的抑制作用。对巴豆油所致小鼠耳肿胀的抑制作用。
材料与方法
[受试药物]
实施例2提取物。批号及来源同前。用时以蒸馏水溶解药物至所需浓度。
[实验动物]
雄性KM小鼠,非近交系封闭群。体重:19.68±1.27g(醋酸扭体)。19.23±0.78g(巴豆油致炎)。由中国预防医学科学院微生物流行病研究所提供。合格证号:96-036号。每组12只。
[试剂]冰醋酸。分析纯。北京化学试剂厂。批号:001116。巴豆油。由中国医学科学院药用植物研究所植化室提供。
[试验仪器]AR1520/B电子天平(精密度0.0001g)。美国OHAUS有限公司。电子秒表,上海仪表厂生产。
[试验主要步骤]
1对醋酸所致小鼠扭体试验
将小随机分为6组,每组12只,连续给药3天,于第3天给药后1小时,每只鼠腹腔注射(IP)0.6%冰醋酸生理盐水(0.1mL/10g体重)。计算注射后15分钟内小鼠扭体次数和扭体潜伏期。
2对巴豆油所致小鼠耳肿胀的抑制作用
将小随机分为6组,每组12只,连续给药3天,于第3天给药后即时给小鼠左耳部涂以2%巴豆油(V/V)(20%无水乙醇和78%***配制)。4小时后处死小鼠,取左右耳,并用Φ9mm打孔器分别取左右耳组强。测重量。计算耳肿胀率[=(左耳重量-右耳重量)/右耳重量×100%]。肿胀抑制率[=(对照组肿胀率-给药组肿胀率)/对照组肿胀率×100%]。该试验为自身对照,右耳为空白对照,左耳涂巴豆油。
[给药途径与体积]灌胃,0.2mL/10g体重。
[试验对照]
1.空白对照:蒸馏水。
2.阳性药对照:
感冒软胶囊。北京同仁堂制药厂生产,批号:8170098。本品由羌活、麻黄、荆芥穗、川芎、薄荷等药物组成,具有散风解热的作用,用于外感风寒引起的头痛身热、鼻塞流涕、恶寒无汗、骨节酸痛、咽喉肿痛等症,450mg/粒。zz-3242-京卫药准字(1993)第004008号。
阿斯匹林。0.3g/片。具有解热镇痛的作用。批号:001208。北京市曙光制药厂生产。
[数据处理]试验数据以EXCEL软件处理。组间t检验。以P<0.05,P<0.01为显著性检验水平。
结果
表5-1不同药物对小鼠醋酸扭体的影响(x±s)
分组 | 剂量(mg/kg) | 扭体次数(次/15分钟) | 扭体抑制率(%) | 扭体潜伏期(秒) |
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 140840400200100 | 22.67±8.9214.17±10.56*14.50±9.78*12.91±7.62**12.09±7.63**11.75±9.49** | 37.4936.0443.0546.6748.17 | 242.33±33.07414.00±163.04**339.08±117.39*335.50±122.60*367.91±112.36*338.42±118.78* |
与对照组相比,*P<0.05,*P<0.01。n=12
表5-2不同药物对小鼠耳肿胀的影响(x±s)
分组 | 剂量(mg/kg) | n | 左耳重量(mg) | 右耳重量(mg) | 肿胀率(%) | 肿胀抑制率(%) |
对照组阿斯匹林感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 140840400200100 | 121012121211 | 24.57±3.8417.93±3.93**22.42±3.0520.24±4.4217.88±2.39**20.94±1.80* | 13.95±3.5311.56±1.5713.73±3.1713.68±2.3911.79±2.4314.55±3.49 | 81.97±32.2756.67±34.7*70.29±41.1447.55±20.07**53.72±24.96*50.99±36.05* | 30.8614.2541.9934.4637.79 |
与对照组相比,*P<0.05,*P<0.01。
讨论与结论
1实施例2提取物能够明显抑制醋酸引起的小鼠疼痛的扭体反应,延长反应的潜伏期。大中小三剂量扭体抑制率分别为43.05%、46.67%和48.17%。无明显量效关系。阳性药阿斯匹林和感冒软胶囊具有同样的效应,其扭体抑制率分别为37.49%和36.04%。
2实施例2提取物三剂量对巴豆油所致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用,大中小三剂量肿胀抑制率分别为41.99%34.46%和37.79%。阳性药阿斯匹林也有明显的抑制作用,其肿胀抑制率为30.86%。感冒软胶囊有抑制趋势,但无统计学意义,其肿胀抑制率为14.25%。
3结果表明,实施例2提取物对化学刺激所致疼痛及炎症肿胀均具有明显的抑制作用。
实施例7对小鼠对免疫功能的影响
[试验目的]观察实施例2提取物对小鼠碳粒廓清功能的影响。对小鼠脾脏T细胞转化能力的影响。
材料与方法
[受试药物]实施例2提取物。批号及来源同前。用时以蒸馏水溶解药物至所需浓度。
[实验动物]
雄性昆明种小鼠,非近交系封闭群。体重:20.48±1.07g(碳粒廓清),每组10只。。雌性昆明种小鼠19.66±0.78g(淋转),每组3只。。由中国预防医学科学院微生物流行病研究所提供。合格证号:96-036号。[试剂]印度墨汁。北京化工厂生产。批号991008。用时以生理盐水稀释(1∶4,V/V)。人参皂苷,含量92%。由北京医科大学天然与仿生药物国家重点实验室植化组提供。MTT(四氮唑兰),购自Sigma公司。RPMI1640培养基,购自Gibco公司,新生牛血清,购自浙江省金华清湖牛利用研究所(批号:001018)。巯基乙醇,分析纯,北京化工厂生产。[实验仪器]BIO-RAD 550型酶标仪。日本BIO-RAD公司。MCO-15AC CO2培养箱。日本SANYO公司。150-C洁净工作台。北京半导体设备一厂。CK-40倒置显微镜。日本OLMPUS公司。CK-30生物显微镜。日本OLMPUS公司。800型离心机,上海市手术器械厂生产。96孔培养板,美国CASTER公司产品。
[试验主要步骤]
1对小鼠碳粒廓能功能的影响[2]
将小随机分为6组,每组10只,连续给药3天,于第3天给药后1小时,每只鼠尾静脉注射生理盐水配制的印度墨汁。0.1mL/10g体重。分别于注射后0分和6分钟眶上静脉丛采血,每次采血25uL。采血后即刻加入2mL0.1%Na2CO3溶液中混匀。于675nm处测试吸光度(A675nm)。取小鼠肝、脾脏称重。计算k值[=(logA1-logA2)/(t2-t1)],碳粒廓清α值[=(3√k×体重g)/(肝重g+脾重g)]。A1:0分钟时吸光度。A2:6分钟时吸光度。
2对小鼠脾脏T细胞增殖能力的影响将小随机分为6组,每组3只,连续给药7天,于第7天给药后1小时,脱颈处死,即刻浸泡于75%乙醇中灭菌3分钟。取出后无菌条件下取脾脏,依文献[10-11]制备脾脏淋巴细胞,经1640液洗2遍后,用含20%新生牛血清的RPMI1640液调整细胞浓度至5×106个/mL,分别加入96孔板中,每孔100uL。在加入细胞之前,须先加入20mg/mLConA,每孔20uL.对照孔加入等体积的1640液。将培养板放入5%CO2培养箱中37℃54小时。54小时后取出每孔加入10mg/mLMTT液20uL,继续培养4小时,之后吸取上清,加入巯基乙醇,每孔200uL,在酶标仪570nm处测吸光值。计算T细胞增殖百分率[=(A加入ConA-A未加ConA)/A未加ConA×100%]
[剂量设置]
[给药途径与体积]灌胃,0.2mL/10g体重。
[试验对照]
1.空白对照:蒸馏水。
2.阳性药对照:感冒软胶囊。北京同仁堂制药厂生产,批号:8170098。本品由羌活、麻黄、荆芥穗、川芎、薄荷等药物组成,具有散风解热的作用,用于外感风寒引起的头痛身热、鼻塞流涕、恶寒无汗、骨节酸痛、咽喉肿痛等症,450mg/粒。zz-3242-京卫药准字(1993)第004008号。
[数据处理]试验数据以EXCEL软件处理。组间t检验。以P<0.05,P<0.01为显著性检验水平。
结果
表6-1不同药物对小鼠碳粒廓清能力的影响(x±s)
分组 | 剂量(mg/kg) | K值 | 肝脏重(g) | 脾脏重(g) | α值 |
对照组人参皂苷感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 150840400200100 | 0.016±0.0060.017±0.0070.027±0.011*0.026±0.011*0.023±0.0080.025±0.005** | 1.507±0.2421.373±0.2421.517±0.4581.469±0.1131.372±0.1311.324±0.371 | 0.191±0.0590.199±0.100.172±0.0630.146±0.0340.153±0.0460.123±0.041 | 3.341±0.9013.859±1.9284.312±1.012*4.071±0.532*4.241±0.684*4.649±1.075** |
与对照组相比,*P<0.05,*P<0.01。n=10
表6-2不同药物对小鼠脾脏T淋巴细胞增殖能力的影响(x±s)
分组 | 剂量(mg/kg) | A570nm(加入ConA) | A570nm(未加ConA) | 增殖率(%) |
对照组人参皂苷感冒软胶囊实施例2提取物实施例2提取物实施例2提取物 | 150840400200100 | 0.206±0.04340.312±0.0220.206±0.08020.289±0.04170.182±0.02030.195±0.0233 | 0.185±0.0240.214±0.0219*0.183±0.0950.1973±0.0150.138±0.0430.167±0.371 | 10.50±9.5347.17±23.86#17.63±17.5746.99±22.83##32.25±16.1720.39±22.45 |
与对照组相比,#P=0.0688,##P=0.063。n=3
与对照组相比,*P<0.05。
讨论与结论
1实施例2提取物能够明显增强小鼠外周淋巴细胞的吞噬能力,三剂量组均有明显作用,与对照组相比差异有显著性,但无明显量效关系。感冒软胶囊也具有明显的作用。人参皂苷未表现出明显的作用。其原因尚待进一步研究。
2实施例2提取物三剂量对小鼠脾T细胞增殖能力有一定的促进作用。其增殖率分别为对(46.99±22.83)%,(32.25±16.17)%和(20.39±22.45)%。对照组为(10.50±9.53)%。人参皂苷增殖率为(47.17±23.86)%。明显高于对照组。但由于对照组标准差过大,故无统计学意义,其P值分别为0.0688(人参皂苷)和0.063(实施例2提取物大剂量)。感冒软胶囊无明显作用。
3综上表明,实施例2提取物对正常小鼠特异性和非特异性免疫功能均有一定的促进作用。其中对非特异性免疫功能作用更加明显。
Claims (10)
1.组合物,其包括来自植物的羌活、独活、葛根、黄芩和黄连。
2.提取物,其特征在于:该提取物是来自植物的羌活、独活、葛根、黄芩和黄连混合物的C1-4烷基醇提取物。
3.药物制剂,所述制剂包括权利要求2的提取物。
4.药物制剂,其中所述制剂为片剂、胶囊、口服液、悬浮液或注射液。
5.权利要求3或4的制剂,其中所述制剂的单位剂型中含0.1-0.8g权利要求2的提取物。
6.权利要求2的提取物,其中所述提取物含不得低于6.5%的总香豆素。
7.权利要求2的提取物,其中所述提取物含不得低于24.3%的总黄酮。
8.权利要求2的提取物,其中所述提取物含不得低于19.2%的总生物碱。
9.权利要求2提取物的制备方法,其包括:
a.用含水C1-4烷基醇提取羌活、独活、葛根、黄芩和黄连的混合物;
b.过滤a)中提取液,减压浓缩滤液至浸膏,其相对密度为1.15-1.20;
c.将b)中浸膏与水搅拌,室温静置,抽滤;
d.干躁c)中抽滤后的沉淀物。
10.权利要求1的组合物或权利要求2的提取物在制备用于预防或治疗发烧、由病毒引起的感冒,炎症或与免疫功能有关症状或疾病的药物中的用途。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2005100890038A CN1907350B (zh) | 2005-08-02 | 2005-08-02 | 组合物,其提取物及它们的药物用途 |
HK07104771.0A HK1098361A1 (en) | 2005-08-02 | 2007-05-04 | Composition, extract thereof and their pharmaceutical use |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2005100890038A CN1907350B (zh) | 2005-08-02 | 2005-08-02 | 组合物,其提取物及它们的药物用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1907350A true CN1907350A (zh) | 2007-02-07 |
CN1907350B CN1907350B (zh) | 2011-09-28 |
Family
ID=37698687
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2005100890038A Active CN1907350B (zh) | 2005-08-02 | 2005-08-02 | 组合物,其提取物及它们的药物用途 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN1907350B (zh) |
HK (1) | HK1098361A1 (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102526279A (zh) * | 2012-02-12 | 2012-07-04 | 贾奎 | 一种治疗急性脑血管病引起的中枢性高热的中药组合物及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1362210A (zh) * | 2001-01-08 | 2002-08-07 | 杨孟君 | 纳米葛根芩连制剂药物及其制备方法 |
-
2005
- 2005-08-02 CN CN2005100890038A patent/CN1907350B/zh active Active
-
2007
- 2007-05-04 HK HK07104771.0A patent/HK1098361A1/xx unknown
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102526279A (zh) * | 2012-02-12 | 2012-07-04 | 贾奎 | 一种治疗急性脑血管病引起的中枢性高热的中药组合物及其制备方法 |
CN102526279B (zh) * | 2012-02-12 | 2013-08-28 | 贾奎 | 一种治疗急性脑血管病引起的中枢性高热的中药组合物及其制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HK1098361A1 (en) | 2007-07-20 |
CN1907350B (zh) | 2011-09-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1309399C (zh) | 复方双黄连制剂及制备方法 | |
CN1154488C (zh) | 免疫抑制剂 | |
CN1990484A (zh) | 水飞蓟宾酯类衍生物及其制备方法和用途 | |
CN101040915A (zh) | 一种双黄连注射液的制备方法及其成分检测方法 | |
CN1481832A (zh) | 头花蓼提取物及其制备方法和用途 | |
CN1698816A (zh) | 一种消肿止痛涂膜剂及其制备方法 | |
CN1245198C (zh) | 一种治疗糖尿病的中药组合物及其制备方法 | |
CN1957999A (zh) | 一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法 | |
CN1711099A (zh) | 具有抗肿瘤和抗毒活性的提取物 | |
CN1483466A (zh) | 头花蓼提取物及其药物组合物制剂 | |
CN1907350A (zh) | 组合物,其提取物及它们的药物用途 | |
CN1769292A (zh) | 一种半枝莲总黄酮的制备方法和质量控制方法 | |
CN1939414A (zh) | 一种具有抗菌消炎作用的药物组合物 | |
CN1251677C (zh) | 一种以20(s)-原人参二醇为有效成分的抗癌辅助药物及应用 | |
CN1883685A (zh) | 一种安宫牛黄纳米中药制剂及其制备方法 | |
CN1947749A (zh) | 一种由头花蓼和茯苓制成的药物组合物 | |
CN101032550A (zh) | 治疗糖尿病及其并发症的药物组合物及其制备方法和用途 | |
CN1207030C (zh) | 一种具有抗肿瘤、抗自由基损伤和调节免疫的天然生物反应调节剂 | |
CN1650996A (zh) | 一种药物组合物及其制备方法和应用 | |
CN1923212A (zh) | 滇重楼茎叶单体皂苷在制药中的应用 | |
CN1566136A (zh) | 白头翁总皂苷及提取方法,以及医药用途和药物制剂 | |
CN1566061A (zh) | 一种新的天然药物有效部位-尾叶香茶菜总二萜 | |
CN1194678C (zh) | 硫普罗宁冻干粉针注射剂 | |
CN1336233A (zh) | 一种***的药物 | |
CN1269491C (zh) | 板蓝根提取物组合物及其制备方法和用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1098361 Country of ref document: HK |
|
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: GR Ref document number: 1098361 Country of ref document: HK |