CN1873413B - 全血质控物及生产工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种全血质控物及生产工艺，其组分包括血液、抗聚剂、固定剂及保护剂，其配合比例按400ml血液计是，抗聚剂30～80ml/400ml，固定剂0.5～3.0ml/400ml，保护剂3～15ml/400ml。其生产工艺是先按比例分别配制抗聚剂、固定剂及保护剂，将三组分混合均匀，采集健康人血，按比例加入上述混合液中混匀，再进行安全性检查，过滤，再混匀15分钟后进行分装、定值，包装后对定值进行验证，确定瓶间差，得合格全血质控物。本发明产品稳定期长，在直方图上显示与临床全血标本完全一致，且工艺简洁，血液不易被污染，在批量生产中能有效控制瓶间差。主要用于血液验证，适用于各类阻抗型血细胞分析仪和手工操作。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物制品试剂及生产工艺，特别是涉及一种全血质控物及生产工艺。
背景技术
全血质控物是一种用于临床实验室血细胞分析过程中质量控制的物质，主要用于白细胞、红细胞、血色素及血小板等血液学检验。目前，生产全血质控物多采用成品库血进行配制，保养库血的主要成分为枸橼酸、枸橼酸钠、葡萄糖、磷酸二氢钠、腺嘌呤；固定剂为单一成分戊二醛，易引起血小板聚集及细胞形态的改变，保养时间一般为1～3个月，稳定性较差。中国专利1263200公开了一种血液学细胞三分类全血质控物，采用禽类血和蹄科动物血分别代替质控物中的白细胞和血小板，由于在实际工作中与临床标本存在基础效应，直方图显示与临床标本不同，可能出现室内质控结果好，而仪器状态并不在控的情况。另方面该生产工艺为单组分(红细胞、白细胞及血小板)生产再组合，制作步骤繁琐，血液易污染，且为混悬液，不易均匀，多需搅拌，不利于细胞膜的保护，易引发容血。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点，提供一种保值期较长，稳定性好，在直方图上显示与临床全血标本完全一致，且生产工艺简单，血液不易污染，能在批量生产中有效控制瓶间差的全血质控物及其生产工艺。
本发明全血质控物组分包括血液、抗聚剂、固定剂及保护剂，其配合比例按400ml血液计是，抗聚剂30～80ml/400ml血液，固定剂0.5～3.0ml/400ml血液，保护剂3～15ml/400ml血液。其中，血液是健康人的同型血；抗聚剂配方按1升水中各组分重量计是，枸橼酸2.0～4.5g/L，枸橼酸钠22.5～45.0g/L，EDTA-Na60.0～120.0/L，葡萄糖20.0～45.0/L，磷酸二氢钠1.2～4.7，腺嘌呤0.1～0.4。其作用是抗血小板聚集，维持细胞营养及渗透压；固定剂中各组分含量按体积比计是，乙醇∶戊二醛＝30～90ml∶1.5～3.5ml，所用乙醇为95％乙醇。其作用是维持细胞膜的完整性；保护剂配方按1升水中所含各组分重量计是，阿司匹林0.8～2.5g，潘生丁0.3～0.8g，青霉素1300～2600万单位。其作用是防止细菌生长，维持细胞形态。
本发明全血质控物的生产工艺步骤如下：
1)按上述比例分别配制抗聚剂、固定剂及保护剂，将三组分混合均匀，得混合液，于2～8℃温度下保存时间小于24小时，待用；
2)采集健康人血(同型血)，按比例加入步骤1)的混合液中，并及时混匀，得血液混合物；
3)将步骤2)所得血液混合物进行安全性检查。即按常规方法检查乙肝表面抗原(HbbAg)、丙肝抗原(抗-HCY)、艾滋病抗体(HIY)及梅毒等传染性指标是否为阴性；
4)将经安全性检查后的血液混合物过滤；
5)将过滤后的血液混合物置全自动混匀机上混匀15分钟，进行分装；
6)对分装的血液混合物定值，得全血质控物。即按常规规方法测定主要指标白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hgb)及血小板(PLT)值，收集数据后计算变异系数，对数据进行异常值检验，再确定平均值，即靶值。
7)包装后对定值进行验证，确定瓶间差。即检查主要指标的批内瓶间差(C V％)是否满足WBC≤3％、RBC≤2％、Hgb≤1％、HCT≤3％、MCV≤3％、MCH≤3％、MCHC≤3％及PLT≤5％。
本发明全血质控物的优点在于稳定期长，试剂盒在2～8℃温度下可贮存9个月，开瓶后在2～8℃温度下可稳定15天，在直方图上显示的结果与临床血全标本性质一致，克服了国外同类产品存在的因与人血不同所存在的基质效应，瓶间差小，浓度控制水平合理，且价格便宜，作为临床实验室血细胞分析过程质量控制物质主要用于血液学检验。适用于各类阻抗型血细胞分析仪和手工操作；本发明全血质控物生产工艺的优点在于工艺简洁，生产过程中血液不会被污染，混合均匀，在显微镜下各类细胞核及胞浆清晰可见，胞膜完整，无聚集现象，能在批量生产中有效地控制瓶间差。
具体实施方式
实施例1：
本发明全血质控物配方：
1)O型血液 400ml
2)抗聚剂 35ml/400ml血液
其中，抗聚剂配方按1升水中各组分重量计是：
枸橼酸 2.22g/L
枸橼酸钠 26.3g/L
EDTA-Na 60g/L
葡萄糖 25g/L
磷酸二氢钠 2.25g/L
腺嘌呤 0.275g/L
3)固定剂 0.8ml/400ml血液
其中，固定剂配方按体积比计是：
乙醇∶戊二醛＝30ml∶1.8ml
4)保护剂 15ml/400ml血液
其中，保护剂配方按1升水中所含各组分重量计是：
阿司匹林 1.7g
潘生丁 0.3g
青霉素- 1300万单位
首先按上述比例分别配制抗聚剂、固定剂及保护剂，将三组分混合均匀，得混合液，于2～8℃温度下保存时间小于24小时，待用；采集健康人血400ml加入混合液中，并及时混匀，得血液混合物；将所得血液混合物进行安全性检查，检查结果如表1所示；过滤；将过滤后的血液混合物置全自动混匀机上混匀15分钟，进行分装；对分装的血液混合物进行定值，得全血质控物，定值结果如表3所示；对定值进行验证，确定瓶间差，其结果如表4所示。放置10个月后进行稳定性观察，其结果如表2所示。
实施例2：
本发明全血质控物配方：
1)A型血液 400ml
2)抗聚剂 50ml/400ml血液
其中，抗聚剂配方按1升水中各组分重量计是：
枸橼酸 3.0g/L
枸橼酸钠 35.0g/L
EDTA-Na 90g/L
葡萄糖 35.0g/L
磷酸二氢钠 1.25g/L
腺嘌呤 0.175g/L
3)固定剂 1.5ml/400ml血液
其中，固定剂配方按体积比计是：
乙醇∶戊二醛＝60ml∶2.2ml
4)保护剂 8ml/400ml血液
其中，保护剂配方按1升水中所含各组分重量计是：
阿司匹林 1.0g
潘生丁 0.6g
青霉素- 2600万单位
首先按上述比例分别配制抗聚剂、固定剂及保护剂，将三组分混合均匀，得混合液，于2～8℃温度下保存时间小于24小时，待用；采集健康人血400ml加入混合液中，并及时混匀，得血液混合物；将所得血液混合物进行安全性检查，检查结果如表1所示；过滤；将过滤后的血液混合物置全自动混匀机上混匀15分钟，进行分装；对分装的血液混合物进行定值，得全血质控物，定值结果如表5所示；对定值进行验证，确定瓶间差，其结果如表6所示。放置10个月后进行稳定性观察，其结果如表2所示。
实施例3：
本发明全血质控物配方：
1)B型血液 400ml
2)抗聚剂 80ml/400ml血液
其中，抗聚剂配方按1升水中各组分重量计是：
枸橼酸 4.0g/L
枸橼酸钠 32.0g/L
EDTA-Na 110g/L
葡萄糖 45.0g/L
磷酸二氢钠 4.00g/L
腺嘌呤 0.375g/L
3)固定剂 10ml/400ml血液
其中，固定剂配方按体积比计是：
乙醇∶戊二醛＝90ml∶3.0ml
4)保护剂 15ml/400ml血液
其中，保护剂配方按1升水中所含各组分重量计是：
阿司匹林 2.5g
潘生丁 0.8g
青霉素- 2000万单位
首先按上述比例分别配制抗聚剂、固定剂及保护剂，将三组分混合均匀，得混合液，于2～8℃温度下保存时间小于24小时，待用；采集健康人血400ml加入混合液中，并及时混匀，得血液混合物；将所得血液混合物进行安全性检查，检查结果如表1所示；过滤；将过滤后的血液混合物置全自动混匀机上混匀15分钟，进行分装；对分装的血液混合物进行定值，得全血质控物，定值结果如表7所示；对定值进行验证，确定瓶间差，其结果如表8所示。放置10个月后进行稳定性观察，其结果如表2所示。
表1：本发明血液混合物安全性检查结果
表2：全血质控物长期稳定性观察结果
| 批号 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | |||
| 保存时间 | 10个月 | 9个月 | 8个月 | |||
| 监测结果 | 靶值 | 测定值 | 靶值 | 测定值 | 靶值 | 测定值 |
| WBC | 4.3(3.7-5.0) | 4.2 | 4.2(3.6-4.8) | 4.2 | 4.4(3.7-5.1) | 4.5 |
| RBC | 3.87(3.64-4.10) | 3.95 | 3.90(3.67-4.13) | 3.95 | 4.05(3.81-4.29) | 4.07 |
| HGB | 125(116-134) | 124 | 122(113-131) | 120 | 127(118-136) | 125 |
| PLT | 125(94-156) | 124 | 124(93-155) | 134 | 103(77-129) | 110 |
表3：实施例1全血质控物定值结果
| SysmexK、F系列 | AbbottCD系列 | CoulterJT系列 | |||||
| 项目 | 单位 | 均值 | 参考范围 | 均值 | 参考范围 | 均值 | 参考范围 |
| WBC | ×109/L | 4.3 | 3.7-5.0 | 4.3 | 3.7-5.0 | 4.7 | 4.0-5.4 |
| RBC | ×1012/L | 3.87 | 3.64-4.10 | 3.86 | 3.63-4.09 | 3.82 | 3.59-4.05 |
| Hgb | g/L | 125 | 116-134 | 125 | 116-134 | 125 | 116-134 |
| PLT | ×109/L | 125 | 94-156 | 127 | 95-159 | 132 | 99-165 |
表5：实施例2全血质控物定值结果
| SysmexK、F系列 | AbbottCD系列 | CoulterJT系列 | |||||
| 项目 | 单位 | 均值 | 参考范围 | 均值 | 参考范围 | 均值 | 参考范围 |
| WBC | ×109/L | 4.2 | 3.6-4.8 | 4.2 | 3.6-4.8 | 4.5 | 3.8-5.2 |
| RBC | ×1012/L | 3.90 | 3.67-4.13 | 3.88 | 3.65-4.11 | 3.85 | 3.62-4.08 |
| Hgb | g/L | 122 | 113-131 | 122 | 113-131 | 122 | 113-131 |
| PLT | ×109/L | 124 | 93-155 | 127 | 95-159 | 130 | 98-163 |
表7：实施例3全血质控物定值结果
| SysmexK、P系列 | AbbottCD系列 | CoulterJTJT系列 | |||||
| 项目 | 单位 | 均值 | 参考范围 | 均值 | 参考范围 | 均值 | 参考范围 |
| WBC | ×109/L | 4.4 | 3.7-5.1 | 4.4 | 3.7-5.1 | 4.8 | 4.1-5.5 |
| RBC | ×1012/L | 4.05 | 3.81-4.29 | 4.02 | 3.78-4.26 | 3.98 | 3.74-4.22 |
| Hgb | g/L | 127 | 118-136 | 127 | 118-136 | 127 | 118-136 |
| PLT | ×109/L | 102 | 77-129 | 107 | 80-134 | 110 | 83-138 |
表4：实施例1瓶间差测定结果：(仪器SE9500 20瓶一瓶测定一次)
| WBC | RBC | HGB | HCT | MCV | MCH | MCHC | PLT | |
| XSCV | 4.34.354.274.394.294.114.194.254.294.284.284.514.274.44.364.374.234.464.494.274.320.12.30 | 3.893.943.963.913.913.913.863.853.923.963.883.973.933.883.93.863.933.923.883.873.910.00.90 | 1231281251251251251231241251241241261241241251251241241251251251.10.87 | 3434.434.634.334.134.233.733.734.234.733.934.734.53434.133.834.334.23433.934.20.30.89 | 87.487.387.487.787.287.587.387.587.287.687.487.487.887.687.487.687.387.287.687.687.50.20.20 | 31.632.531.632323231.932.231.931.33231.731.63232.132.431.631.632.232.331.90.30.98 | 3623723613643673653653683653573663633593653673703623633683693653.71.01 | 1261281311191241261231211261201211231301281241231231251311191253.72.98 |
表6：实施例2瓶间差测定结果：(仪器SE9500 20瓶一瓶测定一次)
| WBC | RBC | HGB | HCT | MCV | MCH | MCHC | PLT | |
| XSCV | 4.24.24.24.24.14.14.14.24.24.24.244.14.24.14.24.24.24.14.24.150.071.64 | 3.853.933.893.933.893.893.913.923.933.873.923.893.923.943.893.913.893.873.953.853.900.030.72 | 1221221221221211211211211211211221211221221201241221221221211220.800.66 | 32.132.732.432.632.332.332.432.432.43232.332.132.532.53232.332.431.932.531.832.30.230.72 | 83.483.283.383838382.982.782.482.782.482.582.982.582.382.683.382.482.382.682.80.350.42 | 31.73131.43131.131.130.930.930.831.331.131.131.13130.831.731.431.530.931.431.20.270.88 | 3803733773743743753733733733783783773753753753843773823753813773.160.84 | 1281211191271271221221191251241231271241201301251261251271231243.252.61 |
表8：实施例3瓶间差测定结果：(仪器SE9500 20瓶一瓶测定一次)
| WBC | RBC | HGB | HCT | MCV | MCH | MCHC | PLT | |
| XSCV | 4.44.184.474.484.274.44.434.184.444.624.514.454.464.544.34.414.324.214.354.244.380.122.81 | 4.084.044.094.044.034.094.034.064.094.114.14.074.124.13.94.064.044.053.993.994.050.051.27 | 1281251281301261281261271271301271271291301181321291251271271272.832.22 | 43.342.943.642.842.643.542.74343.543.743.643.343.843.441.44342.542.842.141.743.00.661.54 | 1061061071061061061061061061061061061061061061061051061051051060.450.42 | 31.330.831.332.131.231.431.331.231.131.530.931.331.231.730.232.431.930.831.931.831.40.511.62 | 2952902933032952952962942932962902942933002843063032923023042965.541.87 | 10798.398.497.510310510510510710210510396.110510110298.511393.81071034.574.46 |
表9：本发明产品与国外同类产品比较
| 公司名称 | 美国贝克曼库尔特、美国雅培、日本SYSMEX公司 | 四川省迈克科技有限责任公司 |
| 成分 | 动物有核红细胞或胶乳颗粒等替代品 | 健康人血 |
| 稳定期 | 3个月 | 2～8℃稳定期可达9个月，开瓶后2～8℃稳定期达到15天 |
| 直方图上的显示结果 | 在直方图上显示与临床全血样本的直方图不同 | 在直方图上显示与临床全血标本性质完全一致。 |
| 对仪器的适用性 | 只适应单一机型 | 可适应多种机型 |
| 每支售价 | 不低于225元人民币 | 50元以内 |
Claims (2)
1.一种全血质控物，其特征在于组分包括血液、抗聚剂、固定剂及保护剂，其配合比例按400ml血液计是，抗聚剂30～80ml，固定剂0.5～3.0ml，保护剂3～15ml，其中，血液是健康人的同型血；抗聚剂配方按1升水中所含各组分重量计是，枸橼酸2.0～4.5g，枸橼酸钠22.5～45.0g，EDTA-Na 60.0～120.0g，葡萄糖20.0～45.0g，磷酸二氢钠1.2～4.7g，腺嘌呤0.1～0.4g；固定剂配方按体积比计是，乙醇∶戊二醛＝30～90ml∶1.5～3.5ml；保护剂配方按1升水中所含各组分重量按计是，阿司匹林0.8～2.5g，潘生丁0.3～0.8g，青霉素1300～2600万单位。
2.一种权利要求1全血质控物的生产工艺，其特征在于步骤如下：
1)按权利要求1所述比例分别配制抗聚剂、固定剂及保护剂，将三组分混合均匀，得混合液，于2～8℃温度下保存时间小于24小时，待用；
2)采集健康人血，按比例加入步骤1)的混合液中，并及时混匀得血液混合物；
3)将步骤2)所得血液混合物进行安全性检查；
4)将经安全性检查后的血液混合物过滤；
5)将过滤后的血液混合物置全自动混匀机上混匀15分钟，进行分装；
6)对分装的血液混合物进行定值，得全血质控物；
7)包装后对定值进行验证，确定瓶间差。
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