CN1861118A - 构树果色素的制备方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及构树果色素的抗氧化作用及其用途。构树果色素是有效的自由基清除剂,具有抗氧化、抗游离基产生等作用,并可在衰老发生初期时就可预防和延缓衰老,还可增加组合物的渗透能力。超氧阴离子自由基、羟基自由基等活性氧自由基可导致多种疾病和病理生理现象的发生,如衰老、肿瘤、炎症、脑缺血等,其中老年痴呆已成为影响中国人口生活质量的重要致病原因;本发明发现新型的抗氧化活性部位构树果色素及其组合物,药理作用较强,性质稳定,安全低毒,效果明显,使用方便,针对性强,符合社会保健的主要发展趋势,为预防、诊断、检测、保护、治疗和研究抗衰老等相关疾病提供一种新的药物来源,具有较强的创新性和较大的临床应用潜在价值。
Description
技术领域
本发明涉及医药、食品和饮料等技术领域,具体地说是涉及中药楮实子的一种成分的制备方法及其用途,更具体地说是涉及构树果色素的制备方法及其用途。
背景技术
(一)中药楮实子的研究概况
1、概述
中药楮实子为桑科植物构树Broussonetia papyrifera(L.)Vent.的成熟果实,为常见的传统中药。然而,楮实子及其原植物在名称、应用等方面,本草记载与现代记载并不完全一致,有的实际上已随着历史变迁而发生变化。
构树原名楮,亦名穀,现代文献一般认为始载于《名医别录》,列入上品:“主阳痿水肿,益气,充肌肤,明目”。楮实子为其果实,始载于《素问病机保命集》:“楮实子丸,治水气,洁净府。”
在古文献研究整理过程中,发现楮实子具有益气、充肌肤,明目,久服不饥、不老,轻身功效,且可食可药。《本草蒙荃》也云:“赤者频服,不老不饥,筋力倍暗,行及奔马”。刘汉基《药性通考》载“楮实子,阴痿能强,水肿可退,充肌肤,助腰膝,益气力,补虚劳,悦颜色,壮筋骨,明目。补阴妙品,益髓神膏。”。
中国历版药典均有收载,历代医家也认为楮实为补益药,具有补肾、清肝、明目、利尿的功效,用于腰膝酸软,虚劳骨蒸,头晕目昏,目生翳膜,水肿胀满。现代研究也表明中药楮实子具有改善记忆、增强免疫等方面的作用。这些似都突出强调楮实补益的神奇功效,现代药典记载楮实子为补肾药,古本草也多记载有楮实子为强壮剂,是否真有此效,尚值得进一步研究。
2、植物分类与资源概况
构树,桑科落叶乔木,高达16m,茎叶有乳汁,嫩叶有柔毛,后脱落。叶互生,宽卵形至矩圆状卵形,长7~20cm,宽6~15cm,不***或不规则的3至5裂,先端尖,基部圆形或心形,边缘有粗锯齿,上面有糙毛,下面密生柔毛,三出脉;叶柄长2.5~8cm。花单性,雌雄异株;雄花序葇荑状,长6~8cm,萼4裂,雄蕊4;在江苏地区3月中旬萌芽长叶,4月中旬开花,花粉弹出;雌花序头状,直径1.2~1.8cm,成熟时可达3cm;雄花被片和雄蕊均为4;雌花苞片棒状,先端有毛,花被管状,花柱侧生,丝状。聚花果球形,径约3cm,肉质,7~9月为果熟期,成熟时红色,果熟后长时期挂存在树枝上。其中雄花序初生时应为葇荑状,但有时也会随环境发生某些***,而呈球状,并结有不育果,但此现象不普遍。11月初至12月上旬,叶片逐渐凋落。
构树属隶属于桑科Moraceae桑亚科Moroideae构树族broussonetieae。构树属Broussonetia L′Hert.Ex Vent.在分类学上位置为:离瓣花亚纲,单花被类,荨麻目,桑科(本科主产热带,约72属,1000种以上,中国入药者6属约35种),构树族Trib.BroussonetiaGaud.。构树属全世界共有5种,分布于亚洲东部及太平洋岛屿。构树是中国分布很广的乡土树种,分布于中国大部分地区,主要分布河北、山西以南各地,资源十分丰富,其蕴藏量十分大,中国本属有4种:构树组Sect.Broussonetia Corner有构树Broussonetiapapyrifera(L.)vent、小构树B.kazinoki Sieb.、藤构B.kaempferi Sieb.var.australis suzuki(原变种葡蟠B.kaempferi Sieb.var.kaempferi仅产于日本)三种,落叶花桑组Sect.Allaeanthus(Thw.)Corner中国仅落叶花桑一种Broussonetia kurzii(Hook.f.)Corner,主要分布于云南南部西双版纳至蒙自红河热带季雨林中,海拔200~600米地区。在国外锡金、不丹、印度东北部、缅甸北部、老挝、越南、泰国有分布。构树组除上述三种外,另还报导了一新种江西构B.jiangxiensis Z.X.Yu,sp.nov.主要分布于南昌梅岭、瑞金县、宜丰县。以及小构树的一变种乳阳小构树B.kazinoki Sieb.var.ruyangensis P.H.liang et X.W.Wei,var.nov.主要分布于广东乳阳。
构树在中国的分布十分广泛,这在上述古代本草的记载中也可看出,无论是滁州、明州,河南,还是荆杨、交广、幽州、中州、江南均分布,在《山海经》卷一南三经中也提到,“东三百里首山,其阴多穀柞,草多术莞……西五十里穀山,其同多穀,其下多桑,爽水出焉”。“近道虽有,荥阳(属河南)独多。每产废田”,“谷田久废,必生构”也可见构树的适应性很强,无论是沟边、路旁、山坡、庭园,构树都极易繁殖生长,并且普遍要比其伴生木本植物长得好。至于《齐民要术》云:“楮宜涧谷间种之,地欲极良”。实际上并非如此,只不过肥沃的土地构树能长得更好罢了。据发明人的调查,构树广泛分布于中国大部分地区,除新疆、黑龙江、内蒙古、宁夏、青海等以外的省区均有分布。构树、小构树、藤构的分布见表1。
构树野生或栽培,且多数为野生状态;生于海拔1400m以下的山坡、田野路旁、沟边、墙隙或林中。构树的繁殖力强,在温热、湿润的气候条件下能良好生长,对土壤要求不高,从沙壤土到粘壤土均能生长。
构树应用广泛,实用价值与经济价值较高。其纤维可制纸,构树的叶、枝、皮、根皮、乳汁、根皮、果实都可以作药用或食用;《本草纲目》、《图经本草》、《花镜》、《植物名实图考》等对此均有记载。如未成熟之果实,李时珍云:“半熟时水澡去子,蜜煎作果食”。《花镜》云:“结实红如杨梅,但无核而不堪食。……子亦可佐食”。据发明人研究,楮实未成熟果实确实含有较多的氨基酸、糖类,然味感甚一般。除嫩叶食用外,叶还可用于食疗,如药性论云:“叶干炒末,搜面作馎任食,主水痢。”
表1、构树属资源在中国的分布情况
植物 | 别名 | 分布 |
构树Broussonetiapapyrifera(L.)Vent. | 穀、构泡、野杨梅、楮、毛桃、大叶谷皮、棉藤、谷树、楮树、谷桨树,楮桃、谷皮树、沙皮树、大骨皮、酱黄木、纱纸树 | 江苏、浙江、河南、湖北、湖南、北京、山东、山西、甘肃、福建、安徽、四川、云南、贵州、陕西、广西、广东、秦岭、江西、河北、上海 |
小构树Broussonetiakazinoki Sieb.etZucc. | 楮皮、纸皮、细叶构皮柴、皮藤、谷皮藤、葡蟠、女谷、野构树、野构桃、构皮麻、小叶构、皮树花、棉花藤、酱叶树、尖叶楮皮、剥皮藤、杉皮藤、乳藤 | 浙江、安徽、福建、贵州、秦岭、陕西、湖南、云南、陕西、湖北、广东、河南、江西、台湾、江苏、贵州、四川、山西、广西 |
藤葡蟠Broussonetiakaempferi Sieb. | 藤构、藤葡蟠、尖叶楮皮、构桑、谷皮藤、葡蟠 | 福建、江西、浙江、湖北、广东、广西、四川、安徽、贵州、江苏、陕西、贵州 |
树皮、茎、叶均含鞣质,可提制栲胶;其叶还含有丰富的蛋白质,可以作为饲料,也可以用作养蚕;其皮或枝干含优质的纤维,可以用于造纸张,尤以宋金元时期为盛;例如,构树属三种植物的树皮纤维质优韧性强、拉力大,可制人造棉,作混纺和单纺纤维,制棉纸、高丽纸及北方宣纸用;亦可代麻用,供制绳索,织麻袋用。构皮洁白的韧皮纤维中含纤维素36.4%。纤维长度为5.5~11cm;单纤维长3.9~8.7mm,平均5.4~7.9mm;直径11.6~30.4um,平均19.8um;单纤维平均拉力为14.4g,是造纸的上等原料。其果实含有丰富的脂肪油,含量高可达40%,可供制肥皂,润滑油及油漆用。构树的雄花序拌面可蒸食,嫩叶也有食用价值,成叶富含蛋白,可作饲料;构树叶捣烂还可用于防治农业害虫,2倍水浸液,防治蚜虫效果为80%,叶的五倍水煮液,防治棉蚜虫杀虫率达86%,对28星瓢虫杀虫率为80.4%;对豆蚜为75.6%;对斜纹蛾为43%。
在药用方面,楮实及构树各个部分均有记载。楮实子《名医别录》载为上品:甘、寒,无毒。功用大补益,主治阴痿水肿、益气、充肌肤,明目,久服不饥、不老,轻身。《日华子本草》云:壮筋骨,助阳气,补虚劳,助腰膝,益颜色。《本草汇言》:健脾养肾,补虚劳,明目。《本经逢原》:“楮实,走肝肾血分,壮筋骨,益颜色。脾胃虚人禁用”。《抱朴子》:“楮实,赤者服之,老者成少,令人彻视见鬼神,道者染须年七十,眼之更少壮,到百四十岁,能行及走马。”《本草蒙荃》也云:“赤者频服,不老不饥,筋力倍暗,行及奔马”。刘汉基《药性通考》载“楮实子,阴痿能强,水肿可退,充肌肤,助腰膝,益气力,补虚劳,悦颜色,壮筋骨,明目。补阴妙品,益髓神膏。”,这些似乎都突出强调楮实补益的神奇功效,是否真有此效,尚值得进一步研究。
例如,构树各部分还具有较好的药用功效,构叶、茎等也具治瘾痒疹、脚气、脚癣等功效;叶捣汁服可治鼻衄、治痢疾;叶的胶质可擦治癣疮;叶及树皮中的乳汁,可敷蛇、虫、蜂、蝎、犬咬;树皮治水肿,利小便。果实用作强壮剂,性甘寒、无毒,有消水肿、壮筋骨、明目、健胃之效,能治阴痿水肿、益气、充饥、明目和治喉痹喉风。
另一方面,吴仪洛《本草从新》曰“楮实,陶隐居、苏颂、抱朴子,皆甚言其功。而方书用之为补者,除杨氏还少丹而外,不多见”。黄宫绣《本草求真》云:“骨鲠可用楮实煎汤以服,以纸烧灰存性调服,以治血崩血晕。脾胃虚人禁用,久服令人骨痿,岂非性属阴寒,虚则受其益,过则增其害之意乎。”楮实特别是久服令人骨痿,似乎与其壮筋骨有背,与济生秘览治骨哽也不能一致。
清.《本草思辩录》则认为:“楮实补阴伸阳,与纯补阴有之别。水肿者,阴不与阳化而水聚。肌肤不充者,阳不得阴济而气乏也。目不明者,阴不升而阳无光也。故楮实皆能胜任之。由于骨属肾,甘能损肾。肾伤于湿者,腰脚为之痿软,湿亦阴也。楮实甘寒益阴而不能益阳,久服骨何能不软。壮筋骨之说实是有误。”说明古人对楮实能否壮筋骨之功效有争论。
除了楮实以外,构树的叶及楮纸在古代也均有作药用的记载:《别录》云:“叶味甘,无毒。主小儿身热,食不生肌,可作浴汤。又主恶疮,生肉”。楮纸也可用于鼻衄、蓐中血晕、金疮出血等。楮树白色乳汁还可治皮肤瘙痒及蝎咬痛不止。此外,构树枝能治风疹,目赤肿痛,小便不利。嫩根或根皮有清热,凉血,利湿,祛瘀功效,可治咳嗽吐血,水肿,血崩,跌打损伤。楮树白皮即构树皮,古又称穀白皮,能行水,止血;治水肿气满、气短咳嗽,肠风血痢,妇人血崩。茎主瘾疹痒,单煮洗浴。现民间也有用其新鲜茎皮乳汁内服治水肿或外敷治癣。
构树还是一种优良的环保植物,构树对环境适应性强,耐干旱瘠薄,生长迅速,抗烟力强,叶上下表面粗糙,被细柔毛,其吸尘、除污、固沙固水能力都较强,可用于环保绿化和环境治理。
3.采制方法
构树主要是果实入药,药典收载的品种也是其果实,名楮实子。果实成熟时采收,洗净,晒干,除去灰白色膜状宿萼及杂质。关于采收时间,各地成熟时间并不一致,大致在农历8~9月间,即白露前后。
《名医别录》云:“八月、九月采实,日干,四十日成”。齐民要术云:“楮宜涧谷间种之,地欲极良。秋上楮子熟时,多收净淘,曝令燥”。《本草图经》:“八月、九月采,水浸去皮穰,收取中子”。宋《急救》:“去壳用米”。明《普济方》:“水淘去浮者,焙干”。明《瑶医》:“去膜,阴干”。清《钩元》:“去皮核”。从上看来,古代楮实的采收时间也多在八九月间,古代主要是指阴历。采收方法多是成熟果实水洗取子干燥。而现在采收方法一般已不用水洗,等楮实近成熟,晒干,捣舂,除去外衣,筛取果实晒干。而发明人经对照实验发现,仍待成熟时取实水洗晒干,时间既快,取得的果实又色泽红润,饱满,质量较佳。
至于炮炙方法,有用酒蒸方法,雷公云:“凡使,采得后用水浸三日,将物搅旋投水,浮者去之,然后晒干,却用酒浸一伏时了,便蒸,从已至亥出,焙令干用”。明《本草蒙荃》亦云:“待深秋采挖,浸水以去皮瓤,取中子曝干,投酒再浸昼夜,务蒸从已至亥,任用煎尝为丸”。明《入门》:“入药水沉去浮者,去皮酒浸蒸半日,焙干”。也有用酒浸、酒拌方法,宋《总录》:“酒浸一宿蒸熟”。明《原始》:“用酒浸一时焙干用”。明《医学》:“酒拌”。其它还有炒制法,宋《圣惠方》:“水淘去浮者微炒捣如泥”。现在临床应用中一般都是将楮实子干燥后直接用于配方应用,并无上述炮炙方法。宋《急救》也云:“去子微炒”。此外,还有熬成膏、捣成泥应用的,如明《医学》:“一斗,水二斗,熬成膏子”。宋《圣惠方》:“捣如泥。”
4.化学成分研究
构树及楮实的化学成分研究甚少,就目前其的化学研究表明:果实含皂式0.5%~1%、对-香豆酸、维生素B、C、胡萝卜素、环木波罗烯醇(cycloartenol)以有及黄酮醇色素类成分,种子油含饱和脂肪酸、油酸、亚油酸等。楮白皮含鞣质、异叶波罗密素(isocycloheterophylin)。构树茎含鞣质、木质素(lignin)。从构树的茎皮有及根皮中还分得了数种异戊二烯黄酮醇类化合物:构树醇E(broussoflavonol E,[8,2’,6-tri-(3,3-dimethylallyl)-5,7,3’,4’-tetrahydroxy-flavol])、构树醇F(broussoflavonol F,[8,3’-di-(3,3-dimethylallyl)-5,7,4’-trihydroxyflavol])、鲨烯(squalene)、二十八-1-醇(octacosan-1-ol)、二十四酸(lignocericacid)、4’-羟基-顺-肉桂酸二十八碳酯(4’-hydroxy-cis-cinnamic acid octacosyl ester)以及(-)marmesin(4’-hydroxy-trans-cinnamic acid tetracosyl,hexacosyl and octacosyl esters的混合物)、broussonaurone A[5-(2,2-dimethylallyl)-6,3’,4’-trihydro oxyaurone],broussoflavan A,butyrospermol acetate,erythrinasinate kazinols A and B,broussochalcones A and B。
另日本学者羽野芳生等从构树根皮中分离出3种新黄酮衍生物构树黄酮(broussoflavone A~C),从根皮的正己烷提取物中得到4种新的酚性成分构树酚A~D(kazinol A~D)。构树叶含有丰富的微量元素,尤以铁、锰、锌的含量较高,并含粗蛋白、粗脂肪、各种氨基酸。其中氨基酸的含量苷氨酸约占干物质的1.27%,胱氨酸1.12%,亮氨酸1.09%,其它还有苏氨酸、丝氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸等。
韩国有人对小构树果实的挥发性成分及脂肪酸成分进行了分析,挥发油中含有41种成分,包括4-碳(2.4)、7aldehydes(20%)、3ketones(1.0%)、7pterpenes(18.0%)、8acid(42%)、4alcs(4.2%)、5phenols(9.8%)。脂肪酸的主要组成为linoleic acid 19.61%、oleic acid 3.52%、palmitic acid 3.40%、stearic acid 0.85%、linolenic acid 0.39%。并对其果实的游离糖、氨基酸、有机酸、微量元素等进行了分析。
日本学者还对小构树的糖类成分随生长时间变化的分析,其中glucose为主要的糖类,其含量生长时间迅速提高,而frucose、sucrose增长较慢。Titratable acidity则在下降。多酚类,主要是assocd.tannins也在下降。L-ascorbic acid及total ascorbic acid增加。Dehydro-L-ascorbic acid则有波动。在成熟小构树果实中,L-ascorbic acid的含量较高,为44mg%,total ascorbic acid则为61mg%。
5.药理作用研究
5.1促进记忆作用 戴新民等报道,采用复杂食饵迷宫法对100%诸实液和50%楮实液进行观察,结果表明,楮实液普遍有缩短小鼠走迷宫取食所需时间,减少错误次数的作用趋势,用药1天(简称:d)有效,4d、5d有显著的效果。认为楮实对学习记忆影响,可能是特异性作用记忆过程本身,即作用于与学习记忆有关的脑机能部位,也可能通过非待异性改变机体机能状态。表明楮实液对正常小鼠的学习和记忆有显著的促进作用。采用一次训练被动回避性反应一跳台法,用楮实对四种化学药品所致记忆障碍的改善试验,结果表明,东莨菪碱引起的记忆障碍模型与老年性健忘症非常相似,楮实能有效地拮抗东莨菪碱阻抑小鼠的记忆获得,表明可能直接影响神经介质而发挥作用。50%楮实液对氯霉素造成的记忆巩固缺损有明显作用,实验结果表明能使小鼠测验时的错误次数显著减少,潜伏期显著延长。推断楮实除能改善机体的神经机能状态外,也许还通过影响脑内蛋白质的合成而发挥对记忆的良好作用。楮实对低浓度乙醇造成的记忆再缺损有显著的拮抗作用。楮实对亚硝酸钠中毒缺氧也有明显的保护作用,对亚硝酸钠造成的记忆巩固不良有明显的改善作用,表明楮实对小鼠学习和记忆的促进与提高机体耐缺氧能力、改善脑部氧代谢、促进需氧代材等多种途径有关。
5.2增强免疫作用 李瑞荃等以主含楮实的补肾复方“益视片”对实验性“肾阳虚”大鼠红细胞免疫功能的影响结果显示:与正常对照组比较,病理对照组大鼠红细胞C3b受体花环率明显下降(P≤0.05,红细胞免疫复合物花环率明显上升(P≤0.01,表明实验性“肾阳虚”大鼠红细胞免疫功能低下。与病理对照组比较,“益视片”治疗组大鼠红细胞C3b受体花环率明显升高(P≤0.05,红细胞免疫复合物花环率明显下降(P≤0.05,提示以楮实为主药的补肾复方“益视片”具有提高实验性“肾阳虚”大鼠红细胞免疫功能的作用。
5.3抗菌作用 楮树75%乙醇提取液体外对红色毛癣菌、堇色毛癣菌和铁色毛癣菌有抑制作用。平板打洞法表明,其枝、叶等的1∶1煎剂,对金黄色辫缫球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌有抑制作用。另外从构树切口木质部长出棕色组织的丙酮提取物也示有抗真菌作用。
5.4降血脂作用 张尊祥等采用生化分析法,测定老年痴呆患者血液中过氧化脂质(简称:LPO)、超氧化物歧酶(简称:SOD))、总胆固醇(简称:Tch)、甘油三醇(简称:TG)和高密度脂蛋白(简称:HDL)的水平,并与吡拉西坦组、对照组和用药前比较,结果显示血清中LPO、TC和TG水平有显著下降(P≤0.05,而SOD和HDL水平显著升高,楮实可能通过改变老年痴呆患者血液中的某些生化水平,通过提高血中HDL水平和体内SOD活性,直接淬灭体内过多的LPO,降低血中TC和TG水平,使老年痴呆患者病情得到缓解。
5.5抗氧化作用 构树叶提取物表明具有显著的抗氧化作用。
6.楮实的临床应用研究
6.1治疗老年痴呆 戴新民等报道用楮实治疗56例老年痴呆认知、生活自理能力及脑电图变化情况,并与15例吡拉西坦(脑复康)组比较,疗效标准以认知功能评定量表提高率及临床疗效综合评定。结果:对智力影响,楮实组总有效率为78.8%,吐拉西坦组为13.3%,有非常显著性差异;对生活自理能力楮实组总有效率为57.66%,吡拉西坦组未产生明显效果;楮实对脑电图异常从69.7%下降至42.44%,吡拉西坦组对脑电图异常率从66.66%下降至60.0%。说明楮实组的抗老年痴呆作用要强于吡拉西坦组。
6.2治疗肝炎 周德华用楮实子30~45g入煎剂,补脾肾而不温,利尿而不伤正,能软坚散瘀,治疗黄疸型肝炎有特殊疗效。赵新敏等用楮实、北沙参、生熟地等配伍治疗肝炎后肝硬化属肝肾阴虚症50例,治疗3个月,总有效率88%,HBSAg转阴率为67.7%。江杨清等伍用楮实等清肝胆湿热,养阴利水,治疗因黄疸半年,伴肝大腹水,发烧23d入院的患者。101d后,复查肝功能正常,血清胆红素0.8mg%。金实等报道了用楮实配伍成“扶正消使汤”治疗阴虚明显的肝硬化腹水65冽,总有效率90.7%,腹围平均缩小7.8cm,SGPT、TTT、A、G治疗前后均有非常显著性差异(P<0.01,MAO有显著性差异(P<0.01)。季泉盛等治疗热毒瘀络型的肝硬腹水37例,用楮实、桅子、大黄等伍用,显效27例,好转6例,无效4例。此外还有报道楮实配伍各种中药对慢性活动性肝炎、肝肿大、迁延性肝炎都取得了良好的效果。
6.3治疗肾病 周仲瑛等用楮实子补益肝肾,调整内分泌失调,取其补阴气,助阳气,利水之功,治疗更年期面浮胫肿有特殊效果,并认为楮实子补肝肾之功与枸杞子相仿,利水消肿与泽泻相似,兼有二者之长而无助水伤阴之弊,治阴亏水肿收效甚佳,故称之为扶正利水之效。武志宏伍用诸实子、熟地、山茱肉等组成健肾丸防治肾病复发,赖祥林等用楮实、茯苓、金樱子、车前子等治疗慢性肾炎用麻肾气虚型患者,蓝华生等以健运脾胃为主,采用黄芪伍用楮实子等治疗慢性肾功衰竭兼水肿者都有一定的效果。
6.4治疗眼科疾病 杨元璋等用楮实子为主药制成“陈氏驻景九”,取其补养肝肾之功治疗中心性视网膜炎,效果满意,治疗多例均使视力恢复正常。王明芳等伍用楮实等治眼底出血也取得了一定疗效。此外对肝肾不足型角膜炎翳陷、变性近视、多种老年痴呆等疾患、青少年近视、眼底水肿而体虚者、肝肾不足型中心性浆液性脉络膜视网膜病变、缺血性视***病变及孔源性视网膜脱离复位术后诸证都取得了疗效。
6.5治疗***不育 朱明达报道了应用楮实子研制“还少丹”加味治疗***41例,其中包括阳萎、早泄、滑精、不***和***异常各类患者。结果痊愈57例,总有效率为89.8%。用楮实子、菟丝子、枸杞子等组成的“生精助育汤”治疗男性不育也有较好效果。另外,以楮实子、益母草、女贞子等为基本方从肝肾论治,对***症多有效果。
6.6其它应用 唐幼麟等用威灵仙与楮实子各等量,组成“化铁丸”,用楮实子、茯苓、公丁香三味组成“楮桃丸”,治疗晚期血吸虫病肝脾肿大伴发轻度腹水129例,追踪观察表明,有80%以上的肝脾肿大有不同程度缩小,体征、体力也得到改善。江克明等报道用楮实配丹参取其补肾纳气之功治老年早博如高血压心脏病早博和肺原性心脏病早博。许继平等报道伍用猪实拟方“扶肺煎”治疗中、晚期肺癌63例,结果对患者低下的B淋转、T淋转、C3均有明显的提高作用(P<0.01、P<0.05),并证明存活率较化疗组延长。姚天源用鹿角霜、楮实子、鹿蹄草等制“补肾通痹汤”治疗肥大性腰椎炎280例,结果:痊愈162例,显效81例,有效32例,总有效率98.2%。樊莹介绍了周仲瑛用楮实子治疗属***亏损、体虚者的震颤麻痹,取得较为理想的临床效果。
(二)老年痴呆症的研究进展
1、概述
痴呆症包括阿尔茨海默症(Alzheimer’s Disease,或称阿尔兹海默症,简称AD)、多重梗塞型痴呆(Multimfarct Dementia)、酒精性痴呆(Alcoholic Dementia)及正常脑压水脑症(Normal Pressure Hychocephalus)。
AD是一种慢性原发、进行性脑变性疾病,是发生于老年期或老年前期的一种进行性的神经退行性疾病,是进入暮年后的一种常见病态反应,属于非正常衰老状态的早老性痴呆病症。由于AD好发病于60岁以上老年人,所以习惯被称为老年痴呆症或早老性痴呆症。
AD以记忆减退、认知障碍,行为异常和语言能力丧失位特征,主要表现为大脑皮层获得性高级功能的全面障碍和认知功能明显受损,脑功能退化衰亡,即记忆功能迅速衰减及识别能力障碍,并伴有行为或人格方面的改变。
该类疾病病程一般较长,约为3~20年。对AD患者常年的护理费用是巨大的,不仅对整个社会的医疗保障***有极大影响,对中国未来社会的小家庭模式也是极大的挑战。因此,其发生给社会、家庭均带来了沉重的经济负担和精神负担,也给患者自身带来极大的痛苦。目前,该疾病仍是全球较为棘手的病症之一,积极研究开发新的治疗方法是一件刻不容缓的事情。
2、病理表现及发病机制
AD的主要病理表现是在前脑基底、海马和大脑皮层细胞外神经炎斑的形成,细胞内神经纤维缠结的出现以及神经细胞和突触数目的减少。斑点主要由淀粉样前体蛋白(简称:APP)的蛋白水解产物β淀粉样蛋白(简称:Aβ)聚集组成。在正常情况下,APP水解产物是可溶性的Aβ40,而在病理条件下,APP水解产物是长的易形成纤维的Aβ1-42,它先以一种未成熟的、非纤维状的分散的斑点形式存在,最终经过构象改变,聚合成一种有毒的纤维状物质,即形成斑点。神经纤维缠结主要存在于锥状神经元的胞内和异常的神经轴突中,为一非水溶性结构,其主要组成为直径10nm的双螺旋纤维结构(简称:PHF),主要成分是一种微管结合蛋白,即tau蛋白,正常的tau蛋白能稳定微管蛋白的相互作用,而PHFs中的tau蛋白则以超磷酸化的形式存在。
AD的病因学复杂,目前主要有两种假说:tau蛋白假说和淀粉样蛋白假说。tau蛋白假说的主要论点是:由于tau蛋白的超磷酸化导致微管蛋白的不稳定,引起高尔基体结构发生改变,从而影响APP的代谢,产生过量的Aβ。该假说还未在细胞或者动物个体水平得到证实。淀粉样蛋白假说的主要论点是:在细胞外神经病变发生的周围淀粉样蛋白的聚集,导致神经炎斑的形成和随后神经纤维缠结的形成。因此,淀粉样蛋白是AD病理链形成的起因。支持淀粉样蛋白假说的证据很广泛。
在AD病人中,对神经元的功能缺失和死亡起关键警示作用的是APP的蛋白水解过程,由此导致了Aβ的产生增加,并在大脑中以神经毒性形式聚集。Aβ是一种含有40~43个氨基酸的蛋白结构,一部分嵌在细胞膜内,另一部分则裸露在细胞外。Aβ蛋白的前身是淀粉样前体蛋白(简称:APP),共长695~770个氨基酸,其绝大部分裸露在细胞外,一小部分嵌在细胞膜内及细胞质中。能够切除APP的3种酶是:α分泌酶、β分泌酶(beta-siteAPP-cleaving enzyme,简称:BACE)及γ分泌酶。Aβ的形成需要APP在β分泌酶作用下断裂形成N端的Aβ和在γ分泌酶作用下断裂形成C端的Aβ。α分泌酶能够在Aβ内部断裂APP,从而阻碍了Aβ的形成。由α分泌酶及γ分泌酶切除之产物则比Aβ小一点,称为P3蛋白。Aβ及P3皆会自细胞膜上游离出去,其中游离的Aβ又会自行凝聚成团,形成所谓的斑点。
以神经退行级联的特殊位点为靶点的药物正在研发中,由于在AD病理形成过程中,从APP转化成神经毒性的Aβ形式是一个决定性事件,研发能够阻断β分泌酶或γ分泌酶的药物是一个热点。能够降低Aβ生成的特殊的γ分泌酶抑制剂被开发出来,但由于它有阻断γ分泌酶断裂Notch和其它蛋白底物的副作用,它在人体的应用并不可行。BACE缺乏的小鼠能降低Aβ的生成而无明显异常生理现象,证实BACE抑制剂能够减少Aβ生成而无明显副作用,但是有可能存在除APP外的其他的有重要生理学意义的BACE的底物,抑制它们的形成可能引起其他严重问题。尽管在抑制β分泌酶和γ分泌酶方面作了许多努力,直接作用于α分泌酶却被忽视。目前极少有人考虑以α分泌酶作为药物靶点,α分泌酶在Aβ序列内部断裂,产生一条大的、可溶性的细胞外片段(简称:sAPPa)和一条小的细胞内片段(简称:C83),这些片段并未表现出病理毒性,并且sAPPa还可能具有神经保护性能。由于α分泌酶和β分泌酶竞争APP,促进α分泌酶能够导致减少的病理性片段。理论上,直接或间接的α分泌酶的促进剂都有利于AD治疗。
3、流行病学情况
随着发达国家和发展中国家人均寿命的提高,患痴呆症的老年人数迅速增加。在所有的痴呆症中,以AD所占的比例最高(约50%~60%)。
据资料报道,随着年龄的增长,在人体组织老化和基因的影响下,痴呆现象的发生率不断升高;其中,AD随年老急剧上升,从60岁起,每4年~5年上升一倍;AD的发病率在65岁左右的老年人中约占10%,在85岁以上的老年人中约占47%,已经成为人类的第四号杀手。
过去学术界曾认为中国是AD低危险性国家,然而,早前于安徽屯溪召开的第二届中国老年人痴呆症和抑郁症学术研讨会暨国际老年痴呆学术研讨会上,这一观点受到挑战。有5份研究报告表明,中国也是AD高危国家,这次会议报道的大量研究成果还表明,中国对AD的研究正在迅速接近国际先进水平。
目前全球的AD病人估计在1200万左右,中国现有老年痴呆患者大约为300万~400万,且呈迅速上升趋势,确诊后一般约7年~9年内死亡。有资料表明,中国60岁以上人口早在1998年已达1.2亿,并以年均3.2%的速度递增,大大高于人口增长速度。75岁以上的老人有2000万,80岁以上老人有800万,并以年均5.4%的速度增加,下世纪中叶可达4亿左右,将成为世界上老龄人口最多的国家。
1988年中美上海调查研究表明,中国65岁以上老年人的痴呆发生率为4.6%,其中AD的比重为63%,多发梗塞性痴呆为28%,脑组织损伤后遗症、化学药物中毒以及神经***失调或营养缺乏导致的痴呆约占10%。
上海的流行病学调查显示,中国55岁、65岁以上痴呆的患病率分别为2.57%和4.6%。北京老年病医疗研究中心对北京地区2788名60岁以上老人的调查发现,有208名老人患有痴呆症,患病率达7.5%。其中女性病人139人,患病率达9.7%,显著高于男性的5.8%。他们的研究还表明,高龄、低教育水平、居住在农村是老年痴呆症的高危因素。而解放军总医院对1728名离退休老干部的调查表明,有痴呆家庭史、“文革”中受迫害、电磁场暴露、脑外伤亦是老年痴呆症的危险因素。在广州城区75岁以上老年人痴呆患病率的调查中,AD患病率为7.49%。
4、老年痴呆症的治疗药物
AD是老年人的常见病之一,是一种渐进性的神经功能退化性失调症,目前本病的病因尚未得到充分阐明,一直是治疗上的一个棘手问题。
抗痴呆药物的研究和开发已引起世界各国医药界的高度重视。近年来,随着对老年人神经生理、生化、药理等方面研究的不断深入,导致相关药物的开发研究不断取得进展。2001年有1270多种产品投放市场,这些产品中90%是80年代发现、90年代研究与开发成功的,此类药物开发的新产品数目超过了任何其它治疗类药物开发的数目。
经过近10年的临床表明,乙酰胆碱酯酶(简称:AChE)抑制剂对AD具有一定的治疗作用,其主要药物他克林、利斯的明、多奈哌齐、加兰他敏已是这一领域中的代表性品种,从而也推动了痴呆治疗药品市场的发展进程。
(1)脑代谢激动剂
研究发现,老年痴呆症患者存在有糖代谢及核酸、蛋白质、脂质等代谢***障碍,同时其脑血流量及耗氧量明显低于同龄正常人。因此,脑代谢激动剂和脑循环改善剂,特别是具有脑血管扩张作用的脑代谢激动剂就成为治疗本病可供选用的药物。此类药物有吡拉西坦、脑复康、吡硫醇、脑复新、氢化麦角碱、喜得镇、都可喜、长春胺、长效长春胺、长春乙酯、尼莫地平、尼莫通、桂利嗪、环扁桃酯、氯酯醒、己酮可可碱、巡能泰、麦角溴烟酯等。这些药物对老年痴呆症的某些症状如记忆力减退、适应环境能力降低等,有程度不同的改善作用。
(2)拟胆碱药
现已知脑内乙酰胆碱含量与记忆密切相关,老年或痴呆病人脑内乙酰胆碱量减少,补充胆碱类药物能改善其记忆和思维能力。但直接给予胆碱或卵磷脂并不能使乙酰胆碱增加。有人试以胆碱或卵磷脂与能通过血脑屏障的胆碱酯酶抑制剂毒扁豆碱合用于本病患者,可使其记忆力有提高,而单独给予卵磷脂效果不明显。另有人单用毒扁豆碱给本病患者静注,记忆测定成绩较安慰剂提高约20%,并发现对行为障碍也有效。研究认为,胆碱酯酶抑制剂可延迟乙酰胆碱的代谢分解,从而延长突触后受体的兴奋。另外,国内研制的哈伯因(石杉碱甲),系中国学者从石杉属植物千层塔中分离到的一种新生物碱,药理实验证明,本品具有很强的拟胆碱活性,是一种高效、可逆的胆碱酯酶抑制剂。
(3)乙酰胆碱酯酶抑制剂(Acetylcholinesterase Inhibitors)
乙酰胆碱酯酶抑制剂包括毒扁豆碱(商品名Synapton,Forest实验室生产)、四氢氨基吖啶(他克林,商品名Cognex,Parke-Davis公司生产)、donepezil(商品名Aricept,辉瑞/卫材公司生产)、metrifonate(拜耳公司生产)和rivastigmine(商品名Exelon,诺华公司生产)。这些化合物通过抑制乙酰胆碱酯酶在神经腱内浓缩乙酰胆碱,并能持续更长的作用时间。
四氢氨基吖啶是第一个通过FDA并在临床上治疗阿尔茨海默病的胆碱酯酶抑制剂,但规定仍需作改进。该品生物利用度要低于rivastigmine和donepezil,并有较大的副作用。多奈哌齐(Donopozil)是第二代也是第二个被美国FDA特许用于治疗阿尔默海茨病(老年痴呆)的胆碱酯酶抑制剂,于1997年被FDA批准用于临床,可促进轻、中度老年痴呆病人的认知能力以及改善病人的精神状态和保持脑功能活性等作用。与第一代胆碱酯酶抑制剂相比,该品有多项优点:(1)作用时间长,每日只须口服一次;(2)药效强、疗效高;(3)安全性高、选择性高,药物不良反应小。目前该品已进入中国销售,国内也有厂家生产。
Sanochemia Pharmazeutika AG公司(维也纳、奥地利)宣布第一个在欧洲上市的乙酰胆碱酯酶抑制剂-Reminyl(加兰他敏)。该品被批准在瑞典上市,并报送欧盟以期获准进入欧洲其它市场。
麦的NeuroSearch公司最近利用NS2330进行临床研究开发。NS2330增加多巴胺和去甲肾上腺素的活性,同时也激活其抑制机制以刺激乙酰胆碱在大脑皮层(包括感知部位)的释放。这样所有三个神经传递素的功能都将受到阿尔茨海默病的影响。该公司希望NS2330能够具有较好的治疗效果,目前该药的I期临床工作已经完成,FDA也同意该公司继续II期临床工作。
其它用来研究的化合物还包括xanomeline(诺和诺德/礼来公司生产)、besperidine(赫司特公司生产)和talsaclidine(勃林格殷格翰/法玛西亚普强公司)。
①他克林
他克林的化学名为四氢氨基吖啶(简称:THA),商品名Cognex,该药是美国华纳—兰伯特公司开发并第一个上市的中枢***的非竞争、可逆性胆碱酯酶抑制剂,1993年获得FDA批准后首先在美国上市,是改善AD认知症新药和老年益智药物,同年在英国、法国、加拿大等国上市,其化合物专利于1996年到期,目前市场上主要是美国派德—戴维斯的产品。
他克林尤其对女性AD症具有显著的疗效,与卵磷脂合用可获得理想的效果,能明显改善患者的记忆力,因此他克林已被认为是治疗、预防早老性痴呆仅有的几种药物之一。
他克林的不足之处是对肝功能及转氨酶指数有较大影响,制约了市场的开发,其销售额的增长也远不如其它AD药物。经过进一步的研究,在他克林母核的基础上加成筛选,由德国赫斯特鲁塞尔公司研制出维那克林。该药是他克林1位羟基衍生物,其药物作用机制得到相应的改善,但仍有一些不良反应,随着医学的发展,将被新一代乙酰胆碱酯酶抑制剂所替代。
②多奈哌齐
多奈哌齐是具有高度选择性、可逆性治疗AD的药物,为第二代中枢性乙酰胆碱酯酶抑制剂,是日本卫材制药公司开发的药物,1996年11月25日获得FDA的特许批准用于临床,商品名安理申。1997年初首先在美国上市,由卫材/辉瑞共同开发全球市场,1999年10月安理申在中国上市,目前已形成了世界50多个国家地区的销售网络。
多奈哌齐是第二个获准治疗老年痴呆症的药物,其最大优势是治疗达标剂量小、毒副作用低,耐受性好。专家普遍认为,该药在AD治疗药物中处于领先地位,在四个主要品种中占据了60%的市场份额,预计这一优势将延续到能够对疾病治疗产生重要影响的新药问世为止。
据Pharma Business杂志报道:在2000年全球最畅销500种药品中,日本卫材公司销售额为4.31亿美元,辉瑞公司的销售额为1.19亿美元,分别比上一年增长了27.3%和30.8%。2001年多奈哌齐在全球排第101名,销售额合计约6.83亿美元,2002年在全球超过了1100亿日元,已是AD市场中的佼佼者。
2001年中国医药研究开发中心、重庆桑田药业开发了多奈哌齐原料药及其片剂产品,国家药品监督管理局批准其以四类新药生产。
③利斯的明
利斯的明是氨基酸甲酸类脑选择性胆碱酯酶抑制剂,属于该类药的第二代产品,由瑞士诺华制药英国公司开发,商品名艾斯能,1997年12月首先在瑞士上市,次年在英国上市。2000年4月21日获得FDA批准,同年6月底在美国上市,从而扩展了阿尔茨海默症治疗药物市场的格局。
研究结果显示:该药虽然半衰期相对较短,但对胆碱酯酶抑制作用可达10小时,该药不经肝脏及P450代谢,对轻、中度早老性痴呆症耐受性较好,同时具有抑制脑内的丁酰胆碱酯酶作用,在欧洲、美国等45个国家进行的一项前瞻性、随机多中心双盲研究中获得较高的评价。
由于利斯的明在药物市场中获得越来越多的份额,2000年的销售额比上一年增长了83%,为1.195亿美元,2001年利斯的明在全球销售额增加101%,已达2.4亿美元。
④加兰他敏
加兰他敏属于第二代乙酰胆碱酯酶抑制剂药物,其药物成份与欧洲山区水仙花鳞茎提取的生物碱相同,该植物药在一些国家、地区已经有过30多年的临床应用,用于治疗逆转神经肌肉阻滞、重症肌无力和幼儿脑型麻痹症等。
加兰他敏是希雷与强生公司合作开发的化学合成药物,制剂有片剂、胶囊、口服液等,临床用于改善AD患者总体功能。该药具有双重作用机制,能较好的刺激和抑制乙酰胆碱酯酶,并且能够调节脑内的烟碱受***点,可显著改善轻、中度早老性痴呆病人的认知功能,延缓脑细胞功能减退的进程。
加兰他敏于2000年7月被欧盟批准后在英国、爱尔兰首次上市,2001年获美国FDA许可用于治疗阿尔茨海默症,现已在25个国家上市。希雷公司负责在英国、爱尔兰的销售,强生公司负责美国和其它欧洲国家的销售。国外报道2001年加兰他敏销售额为1.36亿美元。
1998年上海申兴制药厂已生产加兰他敏原料药,1999年国家药品监督管理局批准苏州第六制药厂生产四类新药氢溴酸加兰他敏胶囊,2001年上海申兴产量同比增长3倍,年产量达到30kg。该药进入市场后,临床推广长足迈进,2000年已在中国主要城市重点医院抗痴呆药品中崭露头角。
近几年,乙酰胆碱脂酶抑制剂已成为AD的一线治疗药物,确认了其有效缓解认知功能障碍的地位,产品销售量占据了抗痴呆药物中的最大份额,研究表明石杉碱甲、毒扁豆碱、美曲磷脂对阿尔茨海默症也有一定的治疗作用,中科院上海药物所开发的石杉碱甲化合物已申请了国际专利,其作用机制正在进行深入的研究,北京四环制药、宁波立华制药、上海汉殷药业和上海医科大学红旗药厂获得了新药证书和生产文号。
(4)钾通道阻滞剂
研究表明,非选择性的钾通道阻滞剂通过延迟去极化和延长突触前神经末梢的钙流入引起神经递质(包括Ach)释放增加。若要想这类药物用于治疗老年痴呆,则所用药物应具备能增加乙酰胆碱的释放而不减少膜磷脂酰胆碱组成的优点,而减少膜磷脂酰胆碱的组成可能是AchE抑制剂存在的副作用。磷脂酰胆碱是胆碱的贮存库,被神经元用来合成Ach。膜磷脂酰胆碱的损失使乙酰胆碱的合成受到限制,导致胆碱输出量减少。临床研究已表明非选择性钾通道阻滞剂对改善患者的识别能力仅有中度作用,其作用不强可能是这些药物的中枢神经***穿透力低,选择性差或活性不够等,有待于进一步研究加以完善。
(5)谷氨酸受体调控剂
在老年疾呆症患者的大脑中,皮质皮层和离皮层途径的锥体细胞发生了神经纤维混乱和退化。据报道,这些锥体细胞以谷氨酸为兴奋递质。这些神经元受损,功能丧失时会导致老年痴呆症;但若功能过强,则会产生兴奋性毒性,引起神经元死亡,造成多种神经退化性疾病。因此,调控退化的谷氨酸神经元的突触活性有望治疗老年痴呆症。研究表明,直接活化突触后受体将有利于谷氨酸的传递,其部分激动剂具有这样的优点,即当内源性谷氨酸低于正常水平时起激动剂作用,而当谷氨酸释放过量时起拮抗剂作用,因此,部分激动剂会对兴奋毒性情况产生神经保护作用。已有报道的药物如美金刚胺(memantine),当谷氨酸以病理量释放时,美金刚胺会减少谷氨酸的神经毒性作用;当谷氨酸释放过少时,美金刚胺可以改善记忆过程所需谷氨酸的传递,临床研究表明,美金刚胺用于老年痴呆症患者具有较好的耐受性,在精神病理学和行为测定中产生温和的有统计学意义的显著改善。
(6)5-羟色胺3受体拮抗剂
5-羟色胺3(简称:5-HT3)受体拮抗剂原用于止吐,现有研究根据5-HT3受体在大脑中的分布状态,推测此类拮抗剂应有其它中枢神经***的作用。如5-HT3拮抗剂昂丹司琼
枢复宁能改善胆碱能神经功能正常和不足的动物如鼠、狨等的识别能力;在50岁以上与老年有关的记忆力受损(AAMI)病人的临床试验中,昂丹司琼能使相当于丧失6年的记忆力得到改善。因此,昂丹司琼及其他5-HT3受体拮抗剂(托烷司琼、格拉司琼等有可能给老年痴呆患者带来福音。
(7)天然药物方面的研究
现今很多医药公司还把目光移向天然药物,试图从中开发出有效的治疗药物。在这方面同样也取得了一定的进展。
①阿朴脂蛋白E4(ApoE4)
众所周知,阿尔茨海默病的发病情况与遗传基因有着较为紧密的联系,阿朴脂蛋白E4ApoE4是特别值得让大家去注意并朝着治疗和预防阿尔茨海默病的方向进行研究。在药物开发中,ApoE4已经进行过人体药物临床试验,并极有可能成为疗效比较确切的药品。
②β-淀粉素(体)(Beta-amyloid)
β-淀粉素是一种不能溶解的多肽。该种物质能够有效防止激烈氧化过程中导致的二乙基溴乙酰胺的破坏。在从事阿尔茨海默病研究理论中就是利用β-淀粉素限制自由基的产生以及清除自由基,以防止自由基所带来的损害。这种类型的化合物包括idebenone(武田公司、Osaka日本),该化合物既是一种自由基的清道夫也是某种神经增长因子的刺激物。早期研究表明,idebenone能有效治疗中度痴呆症。尽管葛兰素威康公司(英国)和美国家用产品公司已经在少数一些国家上市,但它已经从日本退出市场,而且其III期临床试验已经被停止。
(8)其它类型药物的研究进展
2000年上半年,一些研究表明,***替代疗法可以较明显地延缓妇女阿尔茨海默病的发作,并能降低阿尔茨海默病的病情严重化。个别临床研究也发现***治疗能够提高感知度。***对抗氧剂和抗炎药的作用能力可以减少发病的机率,推动乙酰胆碱的产生、促进神经细胞的生长和存活。
2000年年中,日本的Toyama Chemical公司期望开始在英国进行T-588的II期临床研究,并能在美国进行较早的试验。在纽约大学的合作下,公司发现T-588可以保护大脑神经细胞。
日本藤泽制药公司的FK-960在日本和美国进行。该药能够提高感知度,具有新的作用机制。在最近有关研究报道是表明,咀嚼可以防止上年纪的人记忆力衰退,但其作用机制现在仍然没有明确。研究人员通过研究小鼠的遗传改变来研究人体老化的迹象。实验表明,拔除牙齿以防止咀嚼的小鼠的记忆力要逊于正常对照小组。此外,研究人员还研究了咀嚼时大脑的活动情况,并发现下巴的活动可以增强脑部海马区的信号。
来自肯塔基州立大学的研究人员发现减少食用量可以保护大脑避免因年龄引起紊乱,这种紊乱类似于阿尔茨海默病。最近出版的研究论文表明,通过喂养减少食物量的小鼠,研究人员发现它们大脑的损伤能减少。对热量摄入量和人体神经变性疾病的研究还没有开始,但有一些相关性研究显示,相比于美国和加拿大,中国和日本由于摄入较少的热量,因此相应的阿尔茨海默病的发病率也减少。
加拿大的神经生物技术公司在2000年上半年宣布了一个较为确切的产品memantine。该产品是一种非竞争性N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)阻断剂,在美国进行了III期临床试验,主要用于治疗阿尔茨海默病。
5、老年痴呆症的市场发展前景
2000年世界七大药品市场表明,AD药品市场已从90年代中期的4亿多美元增长了近一倍,2001年全球AD市场价值已近12亿美元;国外分析家预测在未来十年内AD患者将会增加到20%左右,AD药品市场的增长速度将有较大幅度的上升。
由于患者的不断增多,AD治疗药物的市场销售额也一直在稳步增长。90年代该类药物已成为畅销药物,1995年世界销售额已达50亿美元。21世纪初,该类药物的销售额超过了排列在前三位的治疗心血管病药物、治疗胃肠道病药物和抗感染药物市场的份额,其发展势头看好。
目前,该类疾病已越来越受到中国国家和社会的高度重视,而且由于该类疾病类似于糖尿病等富贵病,一样需要长期服用治疗药物,因此其用药市场随着人口老龄化而逐渐扩大,市场前景看好。基于此,为及时了解中国治疗AD药物的市场状况,中国国家食品药品监督管理局南方医药经济研究所信息中心选取中国六个主要用药城市(北京、上海、广州、南京、杭州、成都)的百家抽样医院、60名医生专家和120名消费者,对中国国内老年痴呆症用药市场(1999年及2000年)及其主要竞争品种进行了全面的市场调研活动。
(1)1999年~2000年中国治疗老年痴呆药物医院用药金额情况分析
从1999年~2000年六城市(北京、上海、广州、南京、杭州、成都)抽样医院治疗老年痴呆症用药金额构成情况来看,2000年六城市抽样医院销售总金额较1999年同比增长28.49%。而在治疗老年痴呆药主要品种中,使用金额百分比较大的品种排名依次为吡拉西坦、银杏叶制剂、氢化麦角碱、阿米三嗪/萝巴新、阿尼西坦、尼麦角林、胞磷胆碱、石杉碱甲、多奈哌齐、吡硫醇、长春西汀、加兰他敏、氯酯醒、艾地苯醌。其中前四位品种市场份额(金额百分比)较大。
具体品种中,吡拉西坦的市场份额(金额百分比)2000年较1999年上升了8个百分点,仍居首位,金额增长率达55.59%。银杏叶制剂、氢化麦角碱保持较稳定的市场份额,使用金额都保持一定的增长。使用金额增长较快的品种有石杉碱甲、加兰他敏,其中加兰他敏增长幅度最高。阿米三嗪/萝巴新、阿尼西坦、尼麦角林、胞磷胆碱、长春西汀和吡硫醇总体市场出现萎缩,而艾地苯醌基本退出市场竞争。多奈哌齐由于是较新的品种,在1999年未见销售,但在2000年市场份额(使用金额百分比)占0.45%,显示出一定的市场潜力。
(2)1999年~2000年中国治疗老年痴呆药物医院用药金额走势分析
从1999年~2000年六城市老年痴呆用药金额走势情况来看,2000年整体用药水平要明显高于1999年整体用药水平,出现上升趋势。其中1999年用药金额高峰期和2000年用药金额高峰期均出现在二季度(2000年用药量高峰期是第三季度),表明在2000年二季度高价品种的使用量相对要高。从六城市用药情况中可以反映出中国城市的一个用药趋势。
(3)主要用药城市医院用药情况分析
从各品种在各城市的用药金额排序情况来看,其销售情况表现得较好的品种主要有银杏叶制剂、吡拉西坦、氢化麦角碱和阿米三嗪/萝巴新。其中银杏叶制剂2000年在上海、广州、杭州和成都地区排在第一位,在北京地区排名第二,南京地区排名第三,表现得相当好,较1999年有所增长,其几个主打品牌达纳康、银杏天保、活血宁胶囊、百路达胶囊、天保宁、银可络的市场反应有口皆碑;其次表现较好的则为吡拉西坦,该品2000年在北京和南京地区占据第一的位置,在其它几个城市也是前三名之列,只有在杭州地区较弱(排名第5);氢化麦角碱总体情况排在第三位,不过2000年排名较1999年排名有所提高。氢化麦角碱在各城市的排名基本保持不变,并在个别城市如上海和成都地区排名上升,而在南京地区排名下降一个位置。
(4)其它方面的市场评价
随着治疗AD药物临床推广的普及,AD已越来越受到社会和家庭的重视,从调查的医生信息反馈来看,68%的医生认为社会大众已经开始关心和重视AD,与此同时,8.16%的医生认为市场供给严重不足,63.2%的医生认为市场供给不足。可见,AD用药市场供给不足,市场仍有空间,有近八成医生认可市场前景较好。
同样,随着近年来OTC市场的蓬勃发展,有相当部份品种(口服剂型)也在零售药店中进行销售,由于长期服药的特点,越来越多的患者选择直接从药店进行购药治疗。从中国国家药品监督管理局南方医药经济研究所零售研究部对这类药品的监测结果显示,银杏叶制剂的市场份额(销售金额百分比)约占市场的4成左右,中成药较受零售市场的青睐,都可喜(阿米三嗪/萝巴新)的市场份额约占3成左右,其余品种则占据余下的市场份额。从所调查的消费者情况反映,有67.80%的消费者是从医院药房获得所需药品的;而有27.97%的消费者直接到药店购买;4.24%的病患者从所在单位门诊部获得;还有0.85%的病患者到批发商处购买。这表明,目前来说,医院虽然是老年人用药的主要销售渠道,但也可以看出,零售渠道也占有不可忽视的比例。
AD的治疗占世界药品市场的第七位,到2005年底价值61亿美元。而目前抗AD药物主要是缓解症状,并不遏制病情的发展。因此,研究出一种有效的治疗方法来阻止潜在的发病过程是很必要的,所以本发明认为研制用于预防、诊断、检测、保护和治疗AD等方面的产品特别是药物能够具有显著的社会效益和经济效益。
(三)常用中草药有效成分的提取分离方法
1、溶剂提取法
(1)原理:溶剂提取法是根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性质,选用对活性成分溶解度大,对不需要溶出成分溶解度小的溶剂,而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。当溶剂加到中草药原料(需适当粉碎)中时,溶剂由于扩散、渗透作用逐渐通过细胞壁透入到细胞内,溶解了可溶性物质,而造成细胞内外的浓度差,于是细胞内的浓溶液不断向外扩散,溶剂又不断进入药材组织细胞中,如此多次往返,直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡时,将此饱和溶液滤出,继续多次加入新溶剂,就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草药成分在溶剂中的溶解度直接与溶剂性质有关。溶剂可分为亲水性有机溶剂及亲脂性有机溶剂,被溶解物质也有亲水性及亲脂性的不同。有机化合物分子结构中亲水性基团多,其极性大而疏于油;有的亲水性基团少,其极性小而疏于水。各类溶剂的性质,同样也与其分子结构有关。这样,发明人就可以通过对中草药成分结构分析,去估计它们的此类性质和选用的溶剂。总的说来,只要中草药成分的亲水性和亲脂性与溶剂的此项性质相当,就会在其中有较大的溶解度,即所谓“相似相溶”的规律。这是选择适当溶剂自中草药中提取所需要成分的依据之一。
(2)溶剂的选择:运用溶剂提取法的关键,是选择适当的溶剂。溶剂选择适当,就可以比较顺利地将需要的成分提取出来。选择溶剂要注意以下三点:①溶剂对有效成分溶解度大,对杂质溶解度小;②溶剂不能与中药的成分起化学变化;③溶剂要经济、易得、使用安全等。常见的提取溶剂可分为以下三类:
①水:水是一种强的极性溶剂。中草药中亲水性的成分,如无机盐、糖类、分子不太大的多糖类、鞣质、氨基酸、蛋白质、有机酸盐、生物碱盐及苷类等都能被水溶出。为了增加某些成分的溶解度,也常采用酸水及碱水作为提取溶剂。
②亲水性的有机溶剂:也就是一般所说的与水能混溶的有机溶剂,如乙醇(又称:酒精)、甲醇(又称:木精)、丙酮等,以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比较好,对中草药细胞的穿透能力较强。亲水性的成分除蛋白质、粘液质、果胶、淀粉和部分多糖等外,大多能在乙醇中溶解。难溶于水的亲脂性成分,在乙醇中的溶解度也较大。还可以根据被提取物质的性质,采用不同浓度的乙醇进行提取。用乙醇提取比用水量较少,提取时间短,溶解出的水溶性杂质也少。乙醇为有机溶剂,虽易燃,但毒性小,价格便宜,来源方便,有一定设备即可回收反复使用,而且乙醇的提取液不易发霉变质。由于这些原因,用乙醇提取的方法是历来最常用的方法之一。甲醇的性质和乙醇相似,沸点较低(64℃),但有毒性,使用时应注意。
③亲脂性的有机溶剂:也就是一般所说的与水不能混溶的有机溶剂,如石油醚、苯、氯仿、***、乙酸乙酯、二氯乙烷等。这些溶剂的选择性能强,不能或不容易提出亲水性杂质。但这类溶剂挥发性大,多易燃(氯仿除外),一般有毒,价格较贵,设备要求较高,且它们透入植物组织的能力较弱,往往需要长时间反复提取才能提取完全。如果药材中含有较多的水分,用这类溶剂就很难浸出其有效成分,因此,大量提取中草药原料时,直接应用这类溶剂有一定的局限性。
(3)提取方法:用溶剂提取中草药成分,常用浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法及连续回流提取法等。同时,原料的粉碎度、提取时间、提取温度、设备条件等因素也都能影响提取效率,必须加以考虑。
①浸渍提取法(简称:浸渍法):浸渍法系将中草药粉末或碎块装入适当的容器中,加入适宜的溶剂(如乙醇、稀醇或水),浸渍药材以溶出其中成分的方法。本法比较简单易行,但浸出率较差,且如用水为溶剂,其提取液易发霉变质,须注意加入适当的防腐剂。
②渗漉提取法(简称:渗漉法):渗漉法是将中草药粉末装在渗漉器中,不断添加新溶剂,使其渗透过药材,自上而下从渗漉器下部流出浸出液的一种浸出方法。当溶剂渗进药粉、溶出成分比重加大而向下移动时,上层的溶液或稀浸液便置换其位置,造成良好的浓度差,使扩散能较好地进行,故浸出效果优于浸渍法。但应控制流速,在渗渡过程中随时自药面上补充新溶剂,使药材中有效成分充分浸出为止。或当渗滴液颜色极浅或渗涌液的体积相当于原药材重的10倍时,便可认为基本上已提取完全。在大量生产中常将收集的稀浸出液作为另一批新原料的溶剂之用。
③煎煮提取法(简称:煎煮法):煎煮法是中国最早使用的传统的浸出方法。所用容器一般为陶器、砂罐或铜制、搪瓷器皿,不宜用铁锅,以免药液变色。直火加热时最好时常搅拌,以免局部药材受热太高,容易焦糊。有蒸汽加热设备的药厂,多采用大反应锅、大铜锅、大木桶,或水泥砌的池子中通入蒸汽加热。还可将数个煎煮器通过管道互相连接,进行连续煎浸。
④加热回流提取法:应用有机溶剂加热提取,需采用回流加热装置,以免溶剂挥发损失。小量操作时,可在圆底烧瓶上连接回流冷凝器。瓶内装药材约为容量的20%~60%,溶剂浸过药材表面约1~2cm。在水浴中加热回流,一般保持沸腾3~6小时,放冷过滤,再在药渣中加溶剂,作第二、三次加热回流分别约半小时,或至基本提尽有效成分为止。此法提取效率较冷浸法高,大量生产中多采用连续提取法。
⑤连续回流提取法:应用挥发性有机溶剂提取中草药有效成分,不论小型实验或大型生产,均以连续提取法为好,而且需用溶剂量较少,提取成分也较完全。实验室常用脂肪提取器或称索氏提取器。连续提取法,一般需数小时才能提取完全。提取成分受热时间较长,遇热不稳定易变化的成分不宜采用此法。
2、分离和纯化方法:
上述提取法所得到的中草药提取液或提取物仍然是混合物,需进一步除去杂质,分离并进行精制。
(1)溶剂分离法:一般是将上述总提取物,选用三、四种不同极性的溶剂,由低极性到高极性分步进行提取分离。水浸膏或乙醇浸膏常为胶状物,难以均匀分散在低极性溶剂中,故不能提取完全,可拌入适量惰性填充剂,如硅藻土或纤维粉等,然后低温或自然干燥,粉碎后,再以选用溶剂依次提取,使总提取物中各组成成分,依其在不同极性溶剂中溶解度的差异而得到分离。利用中草药化学成分,在不同极性溶剂中的溶解度进行分离纯化,是最常用的方法。
(2)溶剂萃取法:
①萃取法:溶剂提取萃取法又简称萃取法,是利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法。萃取时如果各成分在溶剂中分配系数相差越大,则分离效率越高;如果在水提取液中的有效成分是亲脂性的物质,一般多用亲脂性有机溶剂,如苯、氯仿或***进行萃取,如果有效成分是偏于亲水性的物质,在亲脂性溶剂中难溶解,就需要改用弱亲脂性的溶剂,例如乙酸乙酯、丁醇等。还可以在氯仿、***中加入适量乙醇或甲醇以增大其亲水性。提取黄酮类成分时,多用乙酸乙脂和水萃取。提取亲水性强的皂苷则多选用正丁醇、异戊醇和水作萃取。不过,一般有机溶剂亲水性越大,与水作萃取的效果就越不好,因为能使较多的亲水性杂质伴随而出,对有效成分进一步精制影响很大。
②逆流连续萃取法:是一种连续的溶剂萃取法。其装置可具有一根、数根或更多的萃取管。管内用小瓷圈或小的不锈钢丝圈填充,以增加溶剂萃取时的接触面。如果一种中草药的水浸液需要用比水轻的苯、乙酸乙酯等进行萃取,则需将水提浓缩液装在萃取管内,而苯、乙酸乙酯贮于高位容器内。萃取是否完全,可取样品用薄层层析、纸层析及显色反应或沉淀反应进行检查。
③逆流分配法:逆流分配法又称逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法与溶剂逆流萃取法原理一致,但加样量一定,并不断在一定容量的溶剂中,经多次移位萃取分配而达到混合物的分离。
④液滴逆流分配法:液滴逆流分配法又称液滴逆流层析法。为近年来在逆流分配法基础上改进的溶剂萃取法。对溶剂***的选择基本同逆流分配法,但要求能在短时间内分离成,并可生成有效的液滴。由于移动相形成液滴,在细的分配萃取管中与固定相有效地接触、摩擦不断形成新的表面,促进溶质在溶剂中的分配,故其分离效果往往比逆流分配法好。
(3)大孔吸附树脂法:大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的一类有机高聚物吸附剂,具有良好的吸附性能,近十余年来逐渐被应用于中草药化学成分的提取分离和中药新药的开发研制。
大孔吸附树脂为吸附和筛选原理相结合的分离材料。它的吸附性是由于范德华引力或生成氢键的结果。筛选原理是由于其本身多孔性结构所决定。由于吸附和筛选原理,有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小,在大孔吸附树脂上经一定的溶剂洗脱而分开。这使得有机化合物尤其是水溶性化合物的提纯得以大大简化。大孔吸附树脂的骨架由苯乙烯和二乙烯苯缩聚而生成,由于改性剂的加入,大孔吸附树脂的极性发生改变,按照树脂的表面性质,吸附树脂一般分为非极性、中极性和极性三类。
非极性吸附树脂是由偶极矩很小的单体聚合物制得的不带任何功能基的吸附树脂。典型的例子是苯乙烯-二乙烯苯体系的吸附树脂,如D101、XAD-1、DiaionHP-10大孔吸附树脂。
中极性吸附树脂指含酯基的吸附树脂,如丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯与双甲基丙烯酸酯等交联的一类共聚物。它是在非极性大孔吸附树脂的基础上,加入丙烯酸甲酯或丙烯腈缩聚而成,如中国国内经常使用的AB-8大孔吸附树脂。
极性吸附树脂是指含酰胺基、腈基、酚羟基等含氮、氧、硫极性功能基的吸附树脂。此外,有时把含氮、氧、硫等配体基团的离子交换树脂称作强极性吸附树脂,强极性吸附树脂与离子交换树脂的界限很难区别。极性大孔吸附树脂可以由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酰胺或亚砜类缩聚而成,如日本三菱化工的Diaion HP 2MG、美国Rohm-hass公司的XAD-10,XAD-9大孔吸附树脂。
与活性炭和其它吸附剂相比,大孔吸附树脂具有很多的优点,如对某种物质的吸附选择性较高;物理化学稳定性和机械强度较好;品种规格较多,可根据需要改变树脂物理或化学结构;吸附树脂一般为球状颗粒,流体阻力较小等等。因而被广泛应用于化工、医药等领域,近年来关于大孔吸附树脂在天然产物提取分离中的应用研究报道越来越多。大孔吸附树脂对中草药化学成分如生物碱、黄酮、皂苷、香豆素及其他一些苷类成分都有一定的吸附作用。对糖的吸附能力很差,对色素的吸附能力较强。
(4)沉淀法:是在中草药提取液中加入某些试剂使产生沉淀,以获得有效成分或除去杂质的方法。如铅盐沉淀法:铅盐沉淀法为分离某些中草药成分的经典方法之一。由于醋酸铅及碱式醋酸铅在水及醇溶液中,能与多种中草药成分生成难溶的铅盐或络盐沉淀,故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。然后将铅盐沉淀悬浮于新溶剂中,通以硫化氢气体,使分解并转为不溶性硫化铅而沉淀。
(5)盐析法:盐析法是在中草药的水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达到饱和状态,可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出,而与水溶性大的杂质分离。常用作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。
(6)透析法:透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜,而大分子物质不能通过半透膜的性质,达到分离的方法。反之也可将大分子的杂质留在半透膜内,而将小分子的物质通过半透膜进入膜外溶液中,而加以分离精制。
(7)结晶、重结晶和分步结晶法:鉴定中草药化学成分,研究其化学结构,必须首先将中草药成分制备成单体纯品。在常温下,物质本身性质是液体的化合物,可分别用分馏法或层析法进行分离精制。一般地说,中草药化学成分在常温下多半是固体的物质,都具有结晶体的通性,可以根据溶解度的不同用结晶法来达到分离精制的目的。
3、常用干燥方法
(1)真空干燥:是基于这样一基本原理:水的饱和蒸气压与温度紧密相关,在真空状态下,水的沸点降低,即在真空下操作也就是在低温下操作,可避免在高温下营养成分如维生素等的破坏,同时提高了干燥速度。真空干燥在食品、制药、化工等行业有广泛的应用,中国也开发和引进了各种真空干燥设备,其结构形式多种多样。常用的形式主要有箱式真空干燥器、双锥式真空干燥器、带式真空干燥器等。这些传统的真空干燥装置主要采用热风,蒸汽或电等加热,利用热传导、对流或辐射原理将热量从外部传到物料内部。真空干燥具有干燥温度低,干燥室内相对缺氧,可避免脂肪氧化,色素褐变等一系列优点,适合于热敏感性食品物料的干燥,此外设备成本、干燥费用也相对较低。
(2)喷雾干燥:是流化技术用于液态物料干燥的一种方法。因是瞬间干燥,特别适用于热敏性物料,故所得产品质量好,保持原来的色香味,且易溶解。利用喷雾干燥来制备微囊的研究正在进行,它是将心料混悬在衣料的溶液中,经离心喷雾器将其喷入热气流中,所得的产品是衣料包心料而成的微囊,这种微囊粉末可采用于直接压片,也可制备胶囊剂、糖浆剂或混悬剂。
(3)冷冻干燥:是将干燥液体物料冷冻成固体,在低温减压条件下利用冰的升华性能,使物料低温脱水而达到干燥的一种方法。由于物料在高度真空及低温条件下干燥,故对某些极不耐热物品的干燥很适合。王大林报道了一种喷雾通气冻干新技术,是利用冷的空气或氮气作为介质,迅速流经冻结物使水升华,喷雾冻干制得的产品微粒小、干燥快、时间短、均匀、流动性好,并具良好的速溶性。近年来,对膏状物料和粘稠物料干燥的研究取得了较大进展,流态化技术、喷射技术、惰性载体技术,则是在此研究基础上发展起来的。旋转闪蒸干燥机、热喷射气流干燥机、惰性载体干燥机均适合热敏性物料和膏状物料的干燥。这些新的研究成果用于中药制剂生产,将大大改善中药加工的技术水平,提高生产效率。
(4)远红外加热干燥法:是一项新的干燥技术,其干燥原理是将电能转变为远红外辐射,从而被药材的分子吸收,产生共振,引起分子和原子的振动和转动,导致物体变热,经过热扩散、蒸发和化学变化,最终达到干燥的目的。远红外干燥可节省电能20%~50%,效果较好。
(5)微波干燥法:是一项20世纪60年代迅速发展起来的新技术,微波干燥实际上是通过感应加热和介质加热,使被干燥物中的水分和脂肪不同程度地吸收微波能量,并把它转变为热量从而达到干燥的目的。微波干燥可杀灭微生物和霉菌,并具有消毒作用。目前中国生产的微波加热成套设备有915mhz和2450mhz两个频率。
经文献检索等,到目前为止,尚未发现有中药楮实子的活性部位构树果色素用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究抗氧化及其相关疾病方面的报道。
发明内容
本发明所需要解决的技术问题是公开了中药楮实子的活性部位构树果色素具有抗氧化作用,该活性部位是用于制备抗氧化产品的活性成分,以克服现有技术存在的上述缺陷。
也就是说,本发明意在明确了制备抗氧化产品的活性成分,以及抗氧化产品的应用。
所述的抗氧化产品是指用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究因过氧化引起的疾病如老年痴呆等的起因、早期发生发展,或后期的发病,以及过氧化引起的相关疾病的产品中的一种或多种;也就是说主要针对过氧化的起因、发生发展到后期的发病全过程。
所述的抗氧化产品是包括医药、食品或饮料等领域产品中的一种或多种,例如包括药物、试剂、食品、保健食品、添加剂或饮料等中的一种或多种,优选药物、保健食品或添加剂等中的一种或多种,进一步优选药物。
所述的因过氧化引起的疾病及其相关疾病是包括老年性疾病等各类疾病等中的一种或多种,所述的老年性疾病是包括痴呆症等各类老年疾病等中的一种或多种,所述的老年性疾病的相关疾病是包括衰老、肿瘤、炎症、脑缺血等疾病和病理生理现象中的一种或多种;优选痴呆症,进一步优选阿尔茨海默症、多重梗塞型痴呆、酒精性痴呆及正常脑压水脑症等中的一种或多种,再优选阿尔茨海默症。
(一)技术构思
1、概述
随着世界范围内的回归自然热,人们越来越崇尚应用天然植物治疗疾病及保健。目前世界上有120多个国家和地区使用传统药物,欧洲一些国家在植物药的有关法规中明文列出被认可允许在药店以药物或OTC药物销售的药用植物(法国196种,德国128种)。美国FDA(食品和药品管理局)提出了把植物产品作为药品进行申报的草案,将对草药进行立法,把草药作为治疗药物纳入医疗保险而不再是作为营养补剂和替代药物,也为中药的现代化和国际化发展提供了新的机遇和广阔前景。
自主开发创新药物是中国目前的一项紧迫任务,中国医药学具有悠久的历史,在预防和治疗疾病方面也积累了丰富的经验,因此积极寻找有效的活性成分或者其组合物或者是在现有化合物中探寻未经发现的奇妙药理用途,是新药研究、开发的一条有效途径。
随着人口的老龄化现象在中国日趋严重,衰老及老年痴呆症、骨质疏松症等疾病严重影响老年人的生活与健康。从中药中寻找开发具有这方面活性的先导化合物或新药,也会具有较好的社会效益与经济效益。
为了从中国传统中药中筛选开发抗氧化抗衰老的新药,并为开发中国特有中药楮实子资源,建立中药楮实子科学的质量评价体系,阐明楮实子补肾作用机理及其抗氧化抗衰老的物质基础与分子机理,在国家自然科学基金与联合利用研究基金资助下,开展了本发明的研究,具有良好的药用价值和广阔的开发应用前景。
2、探讨抗氧化抗衰老的机理
中医把肾看作是人身体最重要的部分,认为肾“先天之本”,是元阴元阳(机体各脏阴阳的根本)之所。正如陈自明在《妇人良方》中指出,夫人之生,以肾为主,人之病多由肾虚而致。五脏之阴非此不能滋;五脏之阳非此不能发。肾藏精,主水,主生殖,主骨生髓,肾气盛衰关系着人本的生老病死。
中医认为,肾乃“先天之本”,肾藏精,主水,主生殖,主骨生髓,肾气盛衰关系着人的生老病死。肾虚会导致不同程度的神经、内分泌、免疫***的功能紊乱。肾虚证都有不同程度的神经、内分泌、免疫***的功能紊乱。肾虚也是骨质疏松症、老年性痴呆发病的重要因素,运用补肾中药则能改善这些症状。
通过应用补肾中药,则可能不同程度地改善这些症状。根据“肾主骨”“肾藏精、主骨”,骨质疏松属中医“肾虚骨萎”的范畴。根据理论上推测,补肾中药楮实子可能对骨质疏松有效,经发明人初步实验证实确实具有作用。如能从楮实子中开发研制出抗骨质疏松的新药,将会有较大的经济效益和社会效益。近2年的药理与临床研究也表明,该药还具有抗老年痴呆或延缓老年痴呆的作用,具有开发成为治疗老年性疾病新药的潜力。
发明人在前期治疗骨质疏松症作用机制的研究中,初步发现补肾中药楮实子具有较好的抗骨质疏松作用,并且楮实子具有分布广,资源多,而且历版中国药典均有收载。
3、寻找能够用于制备抗氧化产品的化合物或组合物的理论设想与研究基础
构属多种植物国内外虽有一些研究报道,但并未受到人们足够的重视,尚未能得到有效的开发利用。迄今为止,其补肾作用以及抗老年痴呆、抗骨质疏松的物质基础究竟是什么,通过什么途径而起作用,值得作进一步的研究,且有关的化学成分尚无报导。
对构树、楮实进行了本草考证,结果认为构树在《神农本草经》以前就有记载,药用的记载始于《名医别录》,列为上品。楮实子之名始载于《素问病机保命集》。楮实、楮桃、楮实子含义并非完全一致,楮实子是构树果实而非种子。新华本草纲要等书记载有误,应予纠正。穀树、壳树、桑穀、穀桑、谷树、壳树均指构树,楮与构也是同一种植物,而非二种。此外对古代与现代楮实子的采收方法、分布及其应用进行了比较考证。
基于此,发明人拟对构属植物进行生药学研究,对楮实子抗骨质疏松、老年痴呆活性成分进行筛选研究,以阐明其作用的物质基础。对于科学评价楮实子,合理开发利用中国中药资源,开发防治老年性疾病的中药新药,改善老年人的生活质量具有较重大的经济价值和社会意义
(二)中药楮实子新的活性部位
构树果色素的制备方法包括如下步骤:
①取构树果,加丙酮等有机溶剂于室温下浸泡,得浸出液;
②将浸出液过滤、蒸馏回收丙酮等有机溶剂,得到构树果色素产品。
构树果色素易溶于水,用蒸馏水可配制成10%色素水溶液;能溶于甲醇、乙酸等强极性溶剂,不溶于无水乙醇、氯仿、苯、***等弱极性有机溶剂中。
该色素水溶液对热稳定,在加热100℃情况下颜色仍保持不变,且对光极不稳定,自然光下放置1d,颜色开始变淡变黄;该构树果色素水镕液在pH1~8范围内均为桔红色,PH9~12范围内颜色变深至蓝色。
(三)构树果色素的药理作用研究
1.构树果色素体外抗氧化研究
1.1.构树果色素对超氧阴离子自由基的清除作用(Ponti V,Dianzani MV,CheesemanKJ,et al.Studies on the reduction of nitroblue tetra-zolium chloride mediated through the action ofNADH and phenazine methosulate[J].Chem Biol Interact,1978,23:281)
在16mmol/LTris-HCl缓冲液(pH8.0)中含NADH 73μmol/L,PMS 15μmol/L,NBT 50μmol/L产生O2-,空白管不加PMS,对照管不加构树果色素(简称:FBH),FBH的终浓度为20mg/L、40mg/L、80mg/L、160mg/L,总体积为3ml,于560nm处测吸收度,计算抑制率。结果显示,FBH能明显清除NADH-PMS-NBT***产生的超氧阴离子自由基,且呈量效关系(表2)。
表2、Scavenging effect of FBH on O2-produced by pyrogallic acid
Group | Conc.(mg/L) | Conc.of O2 -(A560nm) | Clearance rate(%) |
Control | 0 | 0.8846±0.0110 | - |
FBH | 20 | 0.6235±0.0098* | 29.52 |
40 | 0.4874±0.0103** | 44.90 | |
80 | 0.3996±0.0091** | 54.83 | |
160 | 0.3012±0.0101** | 65.95 |
n=4,
x±s,*P<0.05 **P<0.01 vs control group
1.2.FBH对H2O2***产生的羟基自由基的清除作用 以Smirnoff等(Smirnoff N,Cumbes Q J.Hyroxyl radical scavenging activity of compatible solutes.[J].Phytochemistry,1989,28(4):1057-1060.)的方法为基础并改进。即采用亚铁离子催化过氧化氢产生羟自由基(·OH)方法。以·OH氧化水杨酸所得产物的吸收度示·OH多少,吸收度越大,·OH越多,3mL反应液中含0.15mol/L FeSO4,6mmol/L H2O2,2mmol/L水杨酸钠和不同质量浓度的FBH,最后加H2O2启动反应,37℃反应1h,在510nm处测定吸收度,吸收度越小,清除效果越好。按照下式计算清除率:清除率=[A0-(Ai-Ai0)]/A0×100%(A0为对照,不加FBH时的吸收度;Ai为某质量浓度的FBH时的吸收度,Ai0为无水杨酸时的FBH吸收度值)。结果表明,FBH能显著清除H2O2***产生的羟基自由基,且呈量效关系(见表3)。
表3、Scavenging activities of FBH for·OH produced by H2O2 system
Group | Conc.(mg/L) | A510nm | Clearance rate(%) |
Control | 0 | 0.9146±0.0110 | - |
FBH | 20 | 0.8135±0.0098* | 20.46 |
40 | 0.6874±0.0103* | 30.12 | |
80 | 0.5962±0.0091** | 37.13 | |
160 | 0.5611±0.0108** | 39.28 |
n=4,
x±s,*P<0.05 **P<0.01 vs control group
1.3.FBH对诱导的H2O2小鼠红细胞溶血作用的影响(Wu YJ,Li WG,Zhang ZM,et al.Antioxidative activity of 4-oxy-and 4-hydroxy-nitroxides in tissues and eyethrocytes fromrats[J].Acta Pharmacol Sin,1997,18:150)小鼠经眼球取血,肝素抗凝,4℃离心3000r/min,10min,得红细胞,用冰冷生理盐水溶液洗3次,制成0.5%悬浮液。取红细胞悬液1ml,模型管加H2O2(使终浓度为100mmol/L),受试物管中加入H2O2(终浓度为100mmol/L)以及不同浓度的FBH(终浓度分别为20,40,80,160mg/L),同时设未诱导溶血的空白对照管。上述各管混匀后37℃水浴中温育1h,以生理盐水稀释5倍,离心3000r/min,10min,上清液在415nm波长处测吸收度。计算溶血率及抑制率:
溶血率=(A受试物/A模型组)×100%,抑制率=(模型组溶血率-受试物溶血率)/(模型组溶血率-空白组溶血率)×100%
与对照组比,H2O2明显诱导了红细胞溶血的发生,模型组的吸收度值明显升高(P<0.01);同时FBH对由H2O2引起的该效应均有抑制作用,并表现出一定的量效关系(表4)。
1.4.FBH对肝组织匀浆脂质过氧化的作用(龚国清,刘同征,李立文,等。西红花酸的体外抗氧化作用的研究[J]。中国药科大学学报,2001,32(4):306-309)小鼠脱颈椎处死,迅速取肝,置于4℃PBS中洗净表面残血,用滤纸吸干,制成10%的匀浆备用。取上述组织匀浆1ml,加入不同浓度的FBH溶液0.5ml,(终浓度分别为20mg/L、40mg/L、80mg/L、160mg/L),以DMSO为阳性对照药(终浓度为1.5μmol/L),终反应体积为1.5ml。37℃水浴中温育,且于不同时间点吸取0.1ml混悬液,按丙二醛测定试剂盒操作测定MDA的生成量(见图1)。由图1可见,肝匀浆在自氧化的过程中,氧化产物MDA生成量是随时间的延长而增加的,在0~1小时间,MDA的含量增长最快,在以后增长较缓慢。在各个时间段中,FBH和DMSO对肝匀浆的自氧化有显著的抑制作用,且FBH呈现良好的量效关系。
表4、Effect of FBH on the hemolysis of mouse RBC induced H2O2
Group | Conc.mg/L | A415nm | Hemolysis rate(%) | Clearance rate(%) |
Control | - | 0.058±0.021 | 13.65 | - |
Model | - | 0.425±0.085△△ | 100 | - |
FBH | 20 | 0.361±0.024* | 84.94 | 17.44 |
40 | 0.314±0.038** | 73.88 | 30.25 | |
80 | 0.302±0.043** | 71.06 | 33.51 | |
160 | 0.288±0.025** | 67.76 | 37.34 |
n=4,
x±s,△△P<0.01 vs control group *P<0.05 **P<0.01 vs model group
1.5.FBH对Vit C-Fe2+***诱导肝线粒体氧化损伤的影响(罗景慧,杨迎暴,林永成,等。海洋真菌Halorosellina oceanicum 323代谢产物的体外抗菌素氧化活性研究[J]。中药材,2004,27(3):188-192)
1.5.1.线粒体的制备 昆明种小鼠,脱颈椎致死,取肝脏置于预冷至0℃~4℃的0.25mol/L,pH7.4的蔗糖溶液中洗涤,洗净血液,用滤纸吸去肝组织表面的溶液,称重,以1∶8的比例加入预冷的蔗糖溶液,将肝组织用剪刀剪碎,置于匀浆器中打成匀浆,以低温离心10min,取上清液低温离心10min,分离沉淀,用预冷的0.25mol/L的蔗糖溶液洗涤两次,每次离心10min,即得到纯化的线粒体,沉淀物用缓冲液(Tris-HCl 20mmol/L,pH7.0,KCl 175mmol/L)混悬,取线粒体混悬液涂片,用1%的詹纳斯绿B液染色20min,覆上盖玻片,显微镜鉴定,线粒体蓝绿色,呈小棒状或者哑铃状。用双缩脲测定线粒体蛋白含量。
1.5.2.FBH对Vit C-Fe2+***诱导肝线粒体形态改变的影响 反应体系为:反应体积3ml,0.1mmol/LVitC,5μmol/L FeSO4,含有1.0mg线粒体蛋白质,加入各种浓度的FBH或者缓冲液,37℃水浴中温育30min。于520nm处测线粒体悬液的浊度变化。光密度的下降表示线粒体膨胀度增加。结果表明FBH能明显抑制由FeSO4/Vit C所引起的线粒体的形态改变效应(见图2)。与对照组比较差异具有统计学意义。
2.讨论
超氧阴离子自由基、羟基自由基等活性氧自由基是在机体代谢过程中产生的。在生理状态下,活性氧自由基处于较低的水平,其产生和与清除处于动态平衡,但在某些病理情况下,这种平衡被打破,将导致机体损伤。其中羟基自由基的危害最大,可导致多种疾病的发生,许多病理生理现象如衰老、肿瘤、炎症、脑缺血等均与氧自由基有密切联系。本研究采用H2O2和Fe2+***产生羟基自由基,利用NADH-PMS-NBT***产生超氧阴离子自由基,来研究FBH的清除自由基活性,结果表明FBH于体外可清除O2-、·OH。
另一方面活性氧可促发多不饱和脂肪酸的脂质过氧化(简称:LPO),反应中产生的各种中间过氧化产物也具有损伤作用,LPO反应的终产物丙二醛(简称:MDA)可使含氨基的蛋白质、核酸、脑磷脂发生交联并丧失其活性。本研究结果显示FBH能显著地抑制H2O2诱导的小鼠红细胞溶血和降低肝匀浆自氧化产物MDA的含量。
线粒体是细胞内能量代谢的主要场所,参与包括自由基生成、脂质代谢等在内的许多生理和生化过程。近年来的研究还表明,线粒体是多类药物的细胞内靶点。因此维持其结构和功能正常对生物体的正常活动有着至关重要的意义。本研究证实FBH可降低Vit C-Fe2+***诱导肝线粒体的肿胀,表明其对自由基过度生成而引起的线粒体功能损伤有一定的保护作用。
以上结果说明FBH有明显的体外抗氧化作用,又是一种天然水溶性色素,对于进一步开发成抗衰老药物或保健食品辅料有较大的参考价值。
(四)构树果色素的用途
本发明的目的是提供一种用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究抗氧化及其相关疾病的产品,是包括医药、食品或饮料等领域产品中的一种或多种,例如包括药物、试剂、食品、保健食品、添加剂或饮料等中的一种或多种,优选药物、保健食品或添加剂等中的一种或多种,进一步优选药物。
本发明通过药理活性筛选证明,构树果色素是预防、诊断、检测、保护、治疗和研究抗氧化及其相关疾病的合适产品。
1、构树果色素及其组合物的使用方法与要求
本发明构树果色素可以单独或与其它活性组分再进一步联合使用,包括用于制备用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究抗氧化及其相关疾病的产品,是包括医药、食品或饮料等领域产品中的一种或多种,例如包括药物、试剂、食品、保健食品、添加剂或饮料等中的一种或多种,优选药物、保健食品或添加剂等中的一种或多种,进一步优选药物。
在具体使用方面,本发明构树果色素能够单独使用,还能够与其他许多化学物质一起使用。无论这些化学物质是否具有生物活性或具有治疗疾病的功能,包括辅助功能如协同放大作用、拮抗或缓解组合物的副作用等,这些化学物质是包括医药学上可接受的载体、食品、天然产物、化学合成药物或人类用药等中的一种或多种;优选包括医药学上可接受的载体或者食品等中的一种或多种;进一步优选医药学上可接受的载体。
本文使用的“医药学上可接受的载体”包括任何和所有的生理适用的溶剂、分散介质、胞衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂或吸收延迟剂等中的一种或多种。医药学上可接受载体的例子包括一种或多种的水、盐水、磷酸缓冲盐水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其组合物中的一种或多种。在许多情况下,在该组合物中最好包括等渗剂,例如,糖、诸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇或氯化钠等中的一种或多种。医药学上可接受载体还可以包含少量的辅助物质,例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲液等中的一种或多种,它们增强了该组合物的有效期或效力。
从具体的分类上看,所说的医药学上可接受的载体是指医药学领域常规的药物载体,包括赋形剂,如淀粉或水等中的一种或多种;润滑剂,如甘油、硬脂酸镁或聚乙二醇等中的一种或多种;崩解剂,如琼脂、碳酸氢钠或微晶纤维素等中的一种或多种;吸收促进剂,如季铵化合物等;填充剂,如淀粉或乳糖等中的一种或多种;粘接剂,如预胶化淀粉、糊精、纤维素衍生物、藻酸盐或明胶等中的一种或多种;渗透压调节剂,如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一种或多种;稀释剂,如水等;表面活性剂,如十六烷醇等;吸附载体,如高岭土或皂粘土等中的一种或多种;另外,还可以在组合物中加入其它辅剂,如香味剂或甜味剂等中的一种或多种。
例如,将构树果色素溶解、混悬或乳化于适宜的水性溶剂中(例如,蒸馏水、生理盐水等中的一种或多种)或油性溶剂中(例如,植物油例如橄榄油、芝麻油、玉米油或丙二醇等中的一种或多种)中,即可制得注射制剂,其中溶剂中可含有分散剂(例如,聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油60或聚乙二醇等中的一种或多种)、渗透压调节剂(例如,氯化钠、甘油、D9-甘露糖、D-山梨醇或葡萄糖等中的一种或多种)。在这种情况下,如有必要,可加入添加剂,例如增溶剂(例如,水杨酸钠或醋酸钠等中的一种或多种)、稳定剂(例如,人血清白蛋白等)、止痛剂等。
本发明构树果色素还可以以组合物的形式联合使用,特别是与用其它化学物质如药物对动物尤其是哺乳动物包括人或其他动物进行治疗所用的组合物或者是类似的组合物。所述哺乳动物,包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、猪、马、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、猕猴或恒河猴等中的一种或多种,优选人、小鼠、大鼠、猴、猪、兔或犬等中的一种或多种,进一步优选人、大鼠或猴等中的一种或多种。例如,可以将本发明组合物加入适于给与受治疗者的药用组合物中。通常,该药用组合物包含本发明组合物和药学上可接受的载体。
构树果色素及其药物组合物可以有各种形式,包括液体、半固体或固体等剂量形式中的一种或多种;其中所说的药物组合物,包括治疗有效量的组合物为活性成分,以及一种或多种医药学上可接受的载体。
该药物组合物可以采用本领域公知的常规生产方法制成各种剂型,例如使活性成分与一种或多种载体混合,然后将其制成所需的剂型。所述的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂或注射剂等中的一种或多种,采取口服或注射(包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一种或多种)、粘膜透析等中的一种或多种给药途径进行抗氧化及其相关疾病的预防、诊断、检测、保护、治疗或科学研究。
该药物组合物一般必须无菌且在生产储存条件下稳定。可以将该组合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂质体或其它适合于高药物浓度的有序结构。通过将所需量的构树果色素或其组合物与所需上述成分的一种或组合一起加入适当的溶剂中并接着进行除菌过滤制备无菌注射液。一般而言,通过将该组合物加入含有基本分散介质和所需的上述其它成分的无菌溶液中制备分散液。在用于制备无菌注射液的无菌粉剂的情况下,推荐的制备方法是真空干燥和冷冻干燥。例如,通过诸如卵磷脂的包衣、在分散液的情况下通过保持所需颗粒大小和通过使用表面活性剂,可以保持溶液的适当流动性。通过在该组合物中包括延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸盐或明胶)可以达到注射组合物的延长吸收。
用于患者时,本发明所述的构树果色素剂量为5~20mg/kg·d,该剂量或用量通常是根据患者或使用者的年龄和体重以及身体状况或患者症状的状况来决定。
本发明构树果色素及其药用组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的构树果色素。“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间下有效达到所需治疗效果的量。构树果色素的治疗有效量可以根据诸如个体的病况、年龄、性别和体重以及该组合物在该个体引起所需反应的能力等因素而变化。治疗有效量亦指该组合物的有益治疗效果超过其任何毒性或有害效果的量。“预防有效量”是指在必要剂量和时间下有效达到所需预防效果的量。因为预防剂量用于患病前或疾病早期的受治疗者,预防有效量通常小于治疗有效量。构树果色素的治疗或预防有效量的典型的非限制性范围是5~20mg/kg,更优选为5~10mg/kg。应注意,剂量值将根据欲减轻的疾病类型和严重性变化,也就是说用于患者时,构树果色素的剂量或用量,通常根据患者或使用者的年龄和体重以及身体状况或患者症状的状况来决定。另外,应理解,对于任何特定受治疗者,应随着时间根据个体需要和给与或监督给与所述构树果色素的人的专业判断调整特定剂量制度,并且本文设定的剂量范围仅为例证性的,并不会限制要求保护的构树果色素的范围或实践。
也就是说,需要根据治疗的对象、给药途径、所治疗疾病和状况等,变化构树果色素的每次和/或每日的剂量或用量。例如,经静脉给予哺乳动物,尤其是成年人(如体重60kg),所述构树果色素的单剂量约为5~10mg,优选约10mg,优选每日给药1~3次。可以调整剂量单位,以提拱最佳所需反应(例如,治疗或预防应答)。例如,可以单次大剂量给药,可以在一段时间内给予几个均分量或根据治疗情况的迫切性按比例降低或增加剂量。配制易于给药和剂量统一的剂量单位形式的非肠道组合物尤其有利。本文使用的剂量单位形式,指适于欲治疗的哺乳动物受治疗者的单元剂量的物理分离单位;每个单位含有预定量的计算用于与所需药用载体一同产生所需治疗效果的活性物组合物。本发明的剂量单位形式的规格,由以下确定并直接取决于以下(a)该组合物的独特特征和欲达到的特定治疗或预防效果,和(b)在混合这种用于治疗个体敏感性组合物的技术中的内在限制。
2、构树果色素及其组合物的药物剂型和给药途径
本发明所述的构树果色素及其组合物制备的用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究抗氧化及其相关疾病的产品,其中按照饮料、食品技术领域的要求制备的产品能够用于预防、保护和治疗抗氧化及其相关疾病;按照医药技术领域的要求制备的产品能够用于患者的治疗或保健,既能够单独直接用于制备治疗或保健的药物,也能够与许多化学物质进行混合或组合,直接或间接用于制备治疗或保健的药物。这里所述的化学物质与本节上文中所述的相同。
在本发明中,所需物料包括本发明的原料、上述配套使用的化学物质等,均应根据实际情况和需要,采用食品级或药用级的物料。
本发明所述的构树果色素及其药物组合物,可以用本领域已知的各种方法给药,尽管在许多治疗用途中推荐的给药途径/给药方式是眼药水外用或经球旁注射法行眼内注射法给药。但是,技术人员会理解给药途径/给药方式随所需的结果而变化。在某些具体实施中,该活性化合物可以与保护该化合物免于快速释放的载体一同制备,例如空释制剂,包括移植物传递***、透皮贴传递***或微囊传递***等中的一种或多种。此外,还可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物,例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羟基乙酸、胶原蛋白、聚正酯或聚乳酸等中的一种或多种。制备这种制剂的许多方法均已申请专利或一般为本领域技术人员所知(参见例如Sustained and Controlledrelease Drug Delivery Systems,J.R.Robinson编辑,Marcel Dekker,Inc.,纽约,1978)。
本发明所述的构树果色素及其药物组合物,通常通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药等中的一种或多种方式,施用于需要这种治疗的患者。
用于口服时,可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂或胶囊等中的一种或多种。在实施时,本发明构树果色素可以与惰性稀释剂或可同化的食用载体一同口服。构树果色素(和其它成分,如果需要)亦可以包于硬或软壳明胶胶囊、压制成片剂或直接加入受治疗者的膳食中。关于口服治疗给药,可以将构树果色素与赋形剂一起加入并以可食片剂、胶囊、悬液、糖浆或糯米纸囊剂等中的一种或多种形式使用。
为了以非肠道给药之外给予本发明构树果色素,可能需要用防止其失活的材料对该组合物包衣或与该组合物一同给予。亦可以将补充的活性化合物加入该组合物中。在具体实施时,将本发明构树果色素与一种或多种可以用于治疗疾病的其它治疗药物共配制和/或共给予。这种联合使用,可以优越地利用较低剂量的该给予的治疗药物,因此避免可能的毒性或与各种单一疗法相关的并发症。
如果要制成液体制剂如水剂、油悬浮剂或其它液体制剂中的一种或多种,如糖浆、酊剂或酏剂等中的一种或多种;用于肠胃外给药时,可将其制成注射用的溶液剂、水剂或油性悬浮剂等中的一种或多种。
以上所述的使用形式中,优选的形式是片剂、粉剂、粒剂或胶囊等中的一种或多种,进一步优选胶囊。
本发明的主要适合对象是中老年人群,选择胶囊用于预防,则每天一次,抑制过氧化变性、延缓衰老。
综上所述,本发明对构树果色素进行了理论探索,经过大量的实验研究特别是长期的药理学试验,发现所述及的构树果色素有显著的预防、诊断、检测、保护、治疗和研究抗氧化及其相关疾病的活性。因此,构树果色素特别是其药物组合物可用于制备抗氧化产品,是包括医药、食品或饮料等领域产品中的一种或多种,例如包括药物、试剂、食品、保健食品、添加剂或饮料等中的一种或多种,优选药物、保健食品或添加剂等中的一种或多种,进一步优选药物,再优选以本发明构树果色素及其组合物为原料制备而成的药物。
(五)技术特长
本发明***性地研究构树果色素,对构树果色素的药用用途进行开发,发现了该化合物能够用于抗氧化,构树果色素是有效的自由基清除剂,另外还可增加组合物的渗透能力;副作用小,外用为主;药物释放快,所需剂量小,符合预防为主的原则,可以替代目前常用的老年痴呆等抗氧化相关疾病的药物。
现有产品的抗氧化作用,有些机理不明或未得到实验的确切证明;而发明人发现构树果色素或其组合物同时具有抗氧化、抗游离基的产生等作用,并可在衰老发生初期时就可预防和延缓衰老。
本发明通过实验研究结果,还证实了抗氧化的作用,故需尽早防治,以预防为主;用药方便,口服为主,随时可用;适应人群广泛,包括中老年易感人群。
(六)构树果色素的开发应用前景
目前世界天然药物贸易额加上保健品和化妆品,已超过400亿美元。中国作为一个传统医药大国,中药年出口额占国际市场份额2%还不到,另一方面,随着全球经济一体化进程加快,中国加入世界贸易组织后,国内市场受国际医药大市场冲击的广度和深度将进一步加剧,近几年甚至还有下降。中国中药出口下降的重要原因之一就是中药材的质量不稳定,直接影响了中成药的质量,也严重阻碍了中药的现代化进程。
中国拥有世界上最丰富的药用植物种质资源,据1995年全国中药资源普查结果表明,已被应用的植物来源中药有11118种(包括208个种下单位),国家有关部门也正在不断加大对中药研究、开发的扶持力度,如95攻关项目,攀登计划,973计划均十分重视中药。目前全国约有2500余家中医院,1000余家中药工业企业,加上国外需求不断增加,中药材消耗量十分巨大。全国现有600多个中药材生产基地,栽培面积约600万亩,全国经营生产的中药材有1000多种,经常使用的400余种,常年栽培的100余种,而选育的优良中药材品种,不到10种,除少数品种外,大多数中药材形不成规模,存在问题较多,例如由于农药残留量与重金属含量超标等问题常常制约着中国中药的出口。因此一方面要提高中药材的质量,保持质量稳定可控,就必须要实施中药材GAP,形成规模化生产,在产量数量上保证对中药材的需要,另一方面,必须要大力推进中药资源的现代开发研究,加大科技含时,提高产品附加值。
老年痴呆已成为影响中国人口生活质量的重要致病原因,本发明设计的新型的抗氧化产品构树果色素及其组合物,综合考虑了社会保健需要的主要趋势,抓住重点,针对性强;构树果色素制剂外用为主,使用方便,具有较强的创新性和较大的临床应用潜在价值。
构树果色素药理作用较强,性质稳定,使用制备的制剂质量稳定,预防、诊断、检测、保护、治疗和研究抗氧化及其相关疾病的效果明显,故其更适于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究抗氧化及其相关疾病产品的工业化生产,为预防、诊断、检测、保护、治疗和研究抗氧化及其相关疾病提供了一种新的药物来源。
本发明构树果色素安全低毒,其原料来源丰富、价廉,制备工艺简单,且使用范围较广,因此容易推广应用,研制预防、诊断、保护和治疗因过氧化引起的疾病等方面产品特别是治疗老年痴呆等疾病的药物,能够在较短的时间内产生显著的社会效益和经济效益。
总之,本发明开发构树果色素的新用途,积极适应了现代健康、医疗需求,以及科研领域的工作需要和人性化服务的需要,是用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究抗氧化及其相关疾病等方面的安全原料。
附图说明
图1表示:构树果色素对肝组织匀浆脂质过氧化的作用
Fig1.Effect of FBH on MDA production of liver homogenate induced by auto-oxidation(
x±s,n=4,*P<0.05 **P<0.01 vs control group)
图2表示:FBH对Vit C-Fe2+***诱导肝线粒体氧化损伤的影响
Fig2.Effect of FBH on the dilataltion of liver mitochondria induced by Vit C-Fe2+ system(
x±s,n=6 *P<0.05 **P<0.01 vs model group)。
具体实施方式
本发明研究了现有物质构树果色素的新的药理作用和新的用途,提供了一种能够用于制备抗氧化及其相关疾病的预防、诊断、保护、研究和治疗等产品的原料,便于医疗行业和相关行业如食品、饮料等领域的安全使用。
(一)构树果色素的提取方法
1.材料
1.1.药材 新鲜成熟的构树果。
1.2.动物 昆明种小鼠,雌雄兼用,体重30±3g,由第二军医大学实验动物中心提供。
1.3.仪器 离心机(AnKe TDL-5型离心机,上海安亭科学仪器厂);紫外分光光度计(UV-1100,上海天美科学仪器有限公司);恒温水浴槽(HWS24型电热恒温水浴锅,上海一恒科技有限公司)。
1.4.试剂 还原型辅酶I(简称:NADH-2Na)为Sigma产品;硫代巴比妥酸(简称:TBA)及吩嗪硫酸甲酯(简称:PMS)为上海生化试剂厂产品,氮蓝四唑(简称:NBT)为上海前进试剂厂生产;MDA生物试剂盒,南京建成生物工程研究所生产。丙酮、无水乙醇、甲醇、氨水、冰醋酸等试剂(分析纯)、TLC硅胶板。
2.实验方法
2.1.构树果色素的制备 采摘新鲜成熟的构树果实,经第二军医大学生药教研室郑汉臣教授鉴定。晾干后捣烂成浆,加丙酮于室温下浸泡,倾出浸泡液,再次加入丙酮浸泡至构树果浆无色为止。合并浸出液,经过滤、蒸馏回收丙酮,得到构树果色素产品。用蒸馏水配制成10%色素水溶液,进行TCL分析,展开剂为正丁醇∶冰醋酸∶水(4∶1∶5)。
2.2.构树果色素的理化性质
2.2.1.溶解性 构树果色素易溶于水,能溶于甲醇、乙酸等强极性溶剂,不溶于无水乙醇、氯仿、苯、***等弱极性有机溶剂中。
2.2.2.耐热实验 配制0.2%色素水溶液,水浴加热至沸0.5~1.0h,观察颜色变化。结果表明该色素水溶液对热稳定,在加热100℃情况下颜色仍保持不变。
2.2.3.色素的耐光性 将构树果色素水溶液于自然光下放置0.5d、1d、2d及5d,以避光存放的色素水溶液作对照,分别观察其颜色变化。结果表明该色素水溶液对光极不稳定,自然光下放置1d,颜色开始变淡变黄。
2.2.4.pH的影响 构树果色素水镕液在pH1~8范围内均为桔红色。PH9~12范围内颜色变深至蓝色。
(二)构树果色素的常用剂型
本发明制备液体制剂一般采用常规制备方法,取构树果色素或其组合物,加入辅料,加入蒸馏水进行稀释,滤去不容物,装瓶,灭菌,封口即得。
本发明制备粉针剂一般采用常规的冷冻干燥法,以水作为溶媒,其步骤为:取构树果色素或其组合物,加入赋形剂,加水溶解,加入活性炭,过滤除菌,灌装,半轧塞,冷冻干燥,压塞轧盖即可。所用的赋形剂选自甘露醇、水解明胶、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷等中的一种或几种。每瓶含构树果色素或其组合物10~100mg。
本发明制备粉针剂也可采用喷雾干燥法,以水作为溶媒,其步骤为:取构树果色素或其组合物,加或不加赋形剂(赋形剂同上),加水溶解,加入活性炭,过滤除菌,喷雾干燥,无菌分装,压塞轧盖即可。每瓶含构树果色素或其组合物10~100mg。
本发明制备小针剂时,以注射用水作为溶媒配制即可,也可加适量辅料,辅料选自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸苄酯、二甲基乙酰胺中的一种或几种。每支含构树果色素10~100mg。
本发明制备葡萄糖输液或氯化钠输液,以注射用水作为溶媒,加入适量葡萄糖或氯化钠配制即可,也可加适量辅料,辅料选自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸苄酯、二甲基乙酰胺中的一种或几种。每瓶含构树果色素10~100mg。
本发明制备片剂、胶囊、颗粒剂、口服液等口服制剂,辅料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸盐等,按常规技术制备。
在本发明中,以上所述的具体实施方式和以下所述的实施例均是为了更好地阐述本发明,并不是用来限制发明的范围。
下面通过实施例对本发明作详细描述。
实施例1、构树果色素粉针剂的制备
取构树果色素38g,加入甲基纤维素20g,加5000ml注射用水,搅拌使其溶解;加注射用水至10,000ml,加3.0g针用活性炭,充分搅拌30分钟;脱炭过滤;用0.22μm微孔滤膜过滤;灌装到无菌的西林瓶中,每瓶2ml,半轧塞;冷冻干燥,再压塞轧盖即可。
实施例2、构树果色素粉针剂的制备
(1)处方
注射用构树果色素 38g
甘露醇 40g
注射用水 加至10000ml
共制成 5000瓶
(2)制备工艺
按以上处方称取处方量构树果色素,加入到适量注射用水中,搅拌使其溶解;加入处方量甘露醇,搅拌使完全溶解,加注射用水至全量;加入液体量的0.1%针用活性炭,充分搅拌30分钟;脱炭过滤;用0.22μm微孔滤膜过滤;灌装,半轧塞;冷冻干燥,压塞轧盖。共制得4867瓶,成品率为97.35%。
实施例3、构树果色素粉针剂的制备
取构树果色素38g,加5000ml注射用水,搅拌使其溶解;加注射用水至10,000ml,加1g针用活性炭,充分搅拌30分钟;脱炭过滤;用0.22μm微孔滤膜过滤;冷冻干燥得无菌粉末,分装成1000瓶。
实施例4、构树果色素粉针剂的制备
取构树果色素40g,加入乳糖50g,加5000ml注射用水,搅拌使其溶解;加注射用水至10,000ml,加1.5g针用活性炭,充分搅拌30分钟;脱炭过滤;用0.22μm微孔滤膜过滤;喷雾干燥得无菌粉末,分装成1000瓶。
实施例5、构树果色素小针剂的制备
取构树果色素5g,加500ml注射用水,搅拌使其溶解;加注射用水至1000ml,用0.22μm微孔滤膜过滤;分装灌封,每瓶10ml,灭菌即可。
实施例6、构树果色素小针剂的制备
取构树果色素10g,加入丙二醇3g,加1000ml注射用水,搅拌使其溶解;加注射用水至2000ml,加1.5g针用活性炭,充分搅拌30分钟;脱炭过滤;用0.22μm微孔滤膜过滤;分装灌封,每瓶5ml,灭菌即可。
实施例7、构树果色素片剂的制备方法1
取构树果色素计80g,微晶纤维素80g、乳糖15g、预胶化淀粉60g,过筛,混合均匀,用适量10%PVP乙醇溶液制软材,制粒,干燥,加入硬脂酸镁3g,整粒,压片,制成1000片。
实施例8、构树果色素片剂的制备方法2
(1)处方
构树果色素 1000.0g
微晶纤维素 1170.0g
预胶化淀粉 690.0g
乳糖 125.0g
5%PVP无水乙醇 适量
硬脂酸镁 15.0g
共制成 10000片
(2)制备工艺
按以上处方分别称取处方量的主药与辅料,按等量递加法混合均匀后照处方工艺项下进行制软材、制颗粒,干燥,整粒等过程,计算好片重后用单冲压片机和10.5mm浅凹冲模压片,控制裸片硬度5-7kg,共制得片剂9698片,成品率为96.98%。
采用滚转喷雾法包衣,包衣工艺如下:
包衣液的配制:胃溶薄膜衣料:85G61235,由上海卡乐康包衣技术有限公司提供
包衣工艺:将待包衣裸片(硬度5kg-7kg)放入包衣锅中,启动搅拌装置和鼓风加热装置,待裸片温度升至40℃时,开始打开喷枪对准片床的上1/3处喷入包衣液包衣,控制片床温度38℃-42℃,气磅压力6kg,包衣液流速为50mL/min,包衣膜重占包衣片重的3%。
实施例9、组合物粉针剂的制备
取上述得到的组合物30g,加入右旋糖苷30g,加500ml注射用水,搅拌使其溶解;加注射用水至2000ml,加3.0g针用活性炭,充分搅拌30分钟;脱炭过滤;用0.22μm微孔滤膜过滤;灌装到无菌的西林瓶中,每瓶2ml,半轧塞;冷冻干燥,再压塞轧盖即可。
实施例10、组合物粉针剂的制备
(1)处方
注射用组合物半成品 150g
甘露醇 400g
注射用水 加至10000ml
共制成 10000瓶
(2)制备工艺
按以上处方称取处方量组合物,加入到适量注射用水中,搅拌使其溶解;加入处方量甘露醇,搅拌使完全溶解,加注射用水至全量;加入液体量的0.1%针用活性炭,充分搅拌30分钟;脱炭过滤;用0.22μm微孔滤膜过滤;灌装,半轧塞;冷冻干燥,压塞轧盖。共制得9735瓶,成品率为97.35%。
实施例11、组合物粉针剂的制备
取上述得到的组合物60g,加500ml注射用水,搅拌使其溶解;加注射用水至1000ml,加1g针用活性炭,充分搅拌30分钟;脱炭过滤;用0.22μm微孔滤膜过滤;冷冻干燥得无菌粉末,分装成1000瓶。
实施例12、组合物粉针剂的制备
取上述得到的组合物40g,加入乳糖50g,加100ml注射用水,搅拌使其溶解;加注射用水至1000ml,加1.5g针用活性炭,充分搅拌30分钟;脱炭过滤;用0.22μm微孔滤膜过滤;喷雾干燥得无菌粉末,分装成1000瓶。
实施例13、组合物小针剂的制备
取上述得到的组合物5g,加100ml注射用水,搅拌使其溶解;加注射用水至1000ml,用0.22μm微孔滤膜过滤;分装灌封,每瓶10ml,灭菌即可。
实施例14、组合物小针剂的制备
取上述得到的组合物10g,加入丙二醇30g,加200ml注射用水,搅拌使其溶解;加注射用水至1000ml,加1.5g针用活性炭,充分搅拌30分钟;脱炭过滤;用0.22μm微孔滤膜过滤;分装灌封,每瓶5ml,灭菌即可。
实施例15、组合物氯化钠输液的制备
取上述得到的组合物1g,加入氯化钠90g,加1000ml注射用水,搅拌使其溶解;加注射用水至10000ml;用0.22μm微孔滤膜过滤;分装灌封,每瓶250ml,灭菌即可。
备注:在本发明的图、表中的FBH均表示:构树果色素;
Min均表示:分钟;
A520nm均表示:波长在520纳米(简称:nm)处。
Claims (10)
1.构树果色素在制备抗氧化产品中的应用。
2.构树果色素的组合物在制备抗氧化产品中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的构树果色素的应用,其特征在于,所述的抗氧化产品是指用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究因过氧化引起的疾病的起因、早期发生发展,或后期的发病,以及过氧化引起的相关疾病的产品中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的构树果色素的应用,其特征在于,所述的抗氧化产品是包括医药、食品或饮料领域产品中的一种或多种。
5.根据权利要求4所述的构树果色素的应用,其特征在于,所述的抗氧化产品是包括药物、试剂、食品、保健食品、添加剂或饮料中的一种或多种。
6.根据权利要求1或2所述的构树果色素的应用,其特征在于,所述的因过氧化引起的疾病及其相关疾病是包括老年性疾病各类疾病中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述的构树果色素的应用,其特征在于,所述的老年性疾病是包括痴呆症各类老年疾病中的一种或多种。
8.根据权利要求7所述的构树果色素的应用,其特征在于,所述的痴呆症是包括阿尔茨海默症、多重梗塞型痴呆、酒精性痴呆及正常脑压水脑症中的一种或多种。
9.根据权利要求8所述的构树果色素的应用,其特征在于,所述的痴呆症是阿尔茨海默症。
10.根据权利要求1或2所述的构树果色素的应用,其特征在于,所述的构树果色素的制备方法包括如下步骤:
①取构树果,加丙酮等有机溶剂于室温下浸泡,得浸出液;
②将浸出液过滤、蒸馏回收丙酮等有机溶剂,得到构树果色素产品。
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