CN1856707A - 通过测定载脂蛋白c－i用于疾病诊断的方法 - Google Patents

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Abstract

用于疾病的诊断、早期检测、风险评估和进程控制的方法，在所述的方法中测定来自人患者血清或血浆样品中的载脂蛋白C－I和/或它的衍生物的量并基于显著偏离的健康的正常人测得的值的范围的结果而对疾病特别是肿瘤疾病或败血症的存在做出结论。本发明也涉及载脂蛋白C－I在治疗和预防疾病中的用途，其中疾病患者的血液中的载脂蛋白C－I的量或结合能力与正常人有明显不同。

Description

通过测定载脂蛋白C-1用于疾病诊断的方法
本发明涉及用于疾病的诊断、早期检测、风险评估和进程监控的方法，所述方法中，在来自人患者的血清或血浆样品中将蛋白质载脂蛋白C-I作为生物标记测定，并涉及载脂蛋白C-I作为治疗活性物质的用途。
首先应该说明在下面的描述中一般使用术语“诊断方法”时，该术语通常是对用于疾病的诊断、早期检测、风险评估和进程的监控，包括伴随治疗的进程监控的方法的简化表达，除非是由具体的内容给出在各处仅对特定限制的对象的测量。
而且，应该说明，在本申请的上下文中，术语“疾病”通常用于严重的慢性和特别是急性疾病而非用意于涉及认为可能是引起动脉硬化症的危险因素的脂肪代谢疾病。特别地，将肿瘤和败血症挑出称为“疾病”。然而，根据本发明的检测也能与诊断方法联合使用，所述的诊断方法用意在于提供有关患有其它疾病特别是急性心脏病如心肌梗塞、心绞痛和动脉闭塞性疾病或患糖尿病、突眼性甲状腺肿和克罗恩氏病的患者的状态的更进一步的信息。
与脂类(甘油三酸酯、胆固醇、磷脂)一起形成脂蛋白的蛋白称为“载脂蛋白”。载脂蛋白的一种重要的功能是使得非水溶性脂质能在血清或血浆中运输。基于脂蛋白在超速离心机的密度梯度中的移动行为，将其归为四种不同的密度类型：乳糜微粒、VLDL(来自：非常低密度脂蛋白)、LDL(来自：低密度脂蛋白)和HDL(来自：高密度脂蛋白)。另外，区分出了称为脂蛋白(a)的组。脂蛋白的脂质部分越小，其密度就越高。不同密度类型的脂蛋白不仅是基于结合在一起的脂质部分的含量而不同而且也与它们的组成有关。此外，可以把典型的载脂蛋白性质归于各个密度类型。
载脂蛋白是具有不同长度和氨基酸组成的蛋白，其归属于称为A-H的组，接下来在独立的组中不同蛋白之间进行区分并通过附上的数字表征。简化地仅将这些蛋白称为Apo A-I，代替全称如载脂蛋白A-I。不同的载脂蛋白的一级结构(氨基酸序列)是已知的，对于许多不同的载脂蛋白，特别是和脂质相关，有关空间结构的数据或具体的概念也已存在。在相关科学文献中可找到更多详细信息。
已知，与获取患者的脂肪代谢的测量数据相关，特别是为了早期检测动脉硬化症的风险或为了监控用降脂药物治疗患者的治疗，还测定目标载脂蛋白。利用在上述类型中的个别脂蛋白密度类型的脂蛋白中某种载脂蛋白独有地出现或至少占优地出现的这个事实并测定它的特异性，这样，通过测定脂蛋白的载脂蛋白部分，也可以测定后者在患者的血清或血浆中的比例。
也已经知道，由于影响载脂蛋白或切割载脂蛋白的酶的形成或本身表现为受体缺陷的重要作用，在个别的患者中发现不同于正常情况的脂蛋白特性以及载脂蛋白特性。而且据知，脂肪代谢的紊乱(继发性的异常脂蛋白血症)可作为其它疾病的结果出现，其中所述的这种紊乱是暂时性的并在治愈疾病后再次消失(参见(20)，186-189页；括号中的数字形式的参考文献指附带的参考文献目录)。只要脂肪代谢中的变化通过载脂蛋白组成中的变化表现出来，科学文献主要记载了涉及载脂蛋白A-I和A-II并通常反映了HDL的异常形式和异常浓度的那些变化。然而，载脂蛋白在作为用于诊断疾病的生物标记上没有起到任何显著的实际作用，其中所述的疾病也已知会伴随有脂肪代谢紊乱。
本申请涉及以诊断为目的测定载脂蛋白C-I。载脂蛋白C-I属于具有相对低的分子量的载脂蛋白组，称为载脂蛋白Apo C-I、Apo C-II和Apo C-III。这三种蛋白的一级结构是已知的(参见(1)、(2)，并对于载脂蛋白C-I，特别是参见(3))。关于载脂蛋白C-I和C-III的功能所知相对要少，并且还没有关于人血清或血浆中的载脂蛋白C-I的数量或形式和结合形式的变化取决于某些病理状态的文献记载。(1)-(18)的出版物是在涉及C组载脂蛋白或C-I载脂蛋白的科学文献中有代表性的出版物，特别是根据(11)的工作，很好地概述了有关于载脂蛋白C在脂蛋白代谢中的作用哪些是已知的。经描述的载脂蛋白C-I的生物学作用主要包括对胆固醇酯转移蛋白(CETP)的抑制、对属于LDL-受体(LDLR)的蛋白质(LRP)的抑制和对LDLR本身及VLDL-受体(VLDLR)的抑制，以及对卵磷脂-胆固醇乙酰转移酶(LCAT)的活化。
从所述的出版物的内容中不能推导出将载脂蛋白C-I作为生物标记测定能用于诊断例如败血症或肿瘤的疾病的认识，或暗示在所述的诊断内容中测定载脂蛋白C-I。
本发明是申请者***研究工作的结果，其目的在于研究患有败血症的患者的蛋白组成的变化并使获得的研究结果特定地可用于败血症和炎症的诊断。
这些研究的出发点是发现在有败血症的情况下激素原-原降钙素-急剧增加并发现将原降钙素作为败血症的生物标记检测对诊断和伴随治疗的过程监控有重大的实际价值(参见例如EP656121B1)。此外，由申请者通过不同的途径研究获得的涉及败血症患者的血清或血浆中的蛋白质组成中的变化，在例如已公布的专利申请EP 1 121 600 A2和更近期的另外的专利申请如WO 02/085937、WO 03/005035、WO 03/002600、EP 1 355 158 A1、EP 1 318 406 A1、EP 1 318 407A1和EP 1 355 159 A1以及该申请者的另外相关的仍未发表的专利申请中可以找到。参考上述的专利申请的内容，特别是关于对术语败血症的最新认识的说明和在败血症病例中测定生物标记的重要性。
因为一些研究已经表明许多通常仅认为是典型的肿瘤标志的生物标记(参见EP 1 318 402 A1、EP 1 318 403 A1、EP 1 318 404 A1和EP 1 318 405 A1)在败血症病例中的也显著增加，在研究败血病患者的样品的同时也不断增加考虑患有不同恶性肿瘤疾病的患者的血浆和血清样品。在许多研究的病例中，发现在败血症病例中处于上升水平的个别生物标记在肿瘤患者的病例中也是显著上升的。然而，许多案例也揭示了明显的不同，这就不允许以简化的观察方式将败血症和恶性肿瘤一般性地作为基本相似来处理。
在本申请中描述的发明是进一步研究方法的结果以用于测定蛋白，所述的蛋白因为它们在败血症患者或可能在患有其它严重疾病，特别是炎症疾病或肿瘤的患者中可测的量与健康的人相比有显著变化，有可能适合作为用于诊断目的的生物标记。为了这一目的，将败血症患者与明显健康的正常人的血清和血浆级分的HPLC图谱进行比较，并对HPLC色谱图谱的显著变化进行进一步的检测。这些研究提供了成为本发明的基础的结果，即当预先将这些样品在能与样品中的疏水性或亲脂性成分相互作用并能选择性结合这种成份(疏水性相互作用层析)的层析材料的柱上分离，患者的血清或血浆样品中HPLC洗脱图谱的明显变化是可检测的。如果随后将与层析材料结合的经分离的样品的组分以合适的方式洗脱，可获得初始血清或血浆样品的次级级分，其中成分特别能够与疏水性表面相互作用的蛋白质性质的成分得以选择性富集。应用于脂蛋白的这种方法的变体在(19)中有描述。
使用高效液相色谱(HPLC)分离患有败血症和其它疾病的患者的血浆或血清的这些级分提供了作为本发明基础的令人惊讶的认识，在健康的正常人的血清或血浆中处于显著水平的组分在败血症患者和某种其它患者的血清中减少很多或看上去完全不存在。对这种组分的特性的进一步研究表明，明显减少的组分是载脂蛋白C-I，该研究在后面有更详细的描述。后来的进一步研究，该研究也在下面有更详细地描述，随后得到了更令人惊讶的结果，在最初的前序评价中指出在败血症和肿瘤患者中平行变化的检验结果在实际上是明显相互区分的，并且使得能通过测定人患者的血清或血浆中的载脂蛋白C-I而清楚地区分败血症和肿瘤，这一认识可用于诊断目的。
本发明的一项任务是发现一种新颖的适合用于诊断检测的蛋白生物标记并使其可用于诊断目的，其在人血清或血浆中存在的量与在看上去健康的正常人中发现的量明显不同并因此其测定构成了一种有价值的诊断辅助手段。
该任务是通过如权利要求1中所述的方法达到。
优选的实施方案，特别是关于在败血症患者、肿瘤患者和患有其它疾病的患者中的诊断应用在附属权利要求书中给出。
在本申请或权利要求中，除了载脂蛋白C-I，还指“其衍生物”作为待测定的种类，由此应该理解为特别是片段和聚合体，特别是在各个选择的检测方法中如同游离蛋白载脂蛋白C-I的那些衍生物。所述“衍生物”可以例如是缺少个别氨基酸或氨基酸序列的载脂蛋白C-I分子或例如通过聚合在空间上或结构上经改变的完整载脂蛋白C-I分子。
使得能使用载脂蛋白C-I作为生物标记的新发现说明，在患有相关疾病的患者中，与看上去健康的正常人相比其可测量的载脂蛋白C-I的量减少了很多。以此可以做出结论，在上述的疾病的情况中载脂蛋白C-I形成的量不足，被消耗和/或不正常结合，与健康人相比以载脂蛋白C-I缺乏进行判断。
根据进一步方面，本发明因此也涉及将载脂蛋白C-I用作治疗剂来治疗与疾病相关的载脂蛋白C-I不足的状况或用于制备治疗疾病的药物，上述的疾病在诊断水平上自身表现为可测量的载脂蛋白C-I量明显减少。
本发明的这些方面形成了权利要求10的主题。
在简介和用来参考的权利要求中反映的事实和待保护的指导在下文中通过实验数据和附属图形的参考进行了详细地解释，对用于本描述中的个别术语的含意进行了补充说明。因此下列实施例用于对专利的权利要求书的说明和对目前所作的一般实施的更精确的说明。
在图中：
图1显示已经用(a)看上去健康的正常人、(b)患有恶性肿瘤疾病的患者和(c)败血症患者的血清或血浆上样的辛烷基琼脂糖凝胶层析柱，在用磷酸盐缓冲液(PBS)对经上样的柱进行其间启动的洗涤后，用乙酸(50mM)可洗脱的血清和血浆级分的反相C18HPLC的洗脱曲线。
图2显示看上去健康的正常人和患有不同疾病(败血症、肿瘤、心肌梗塞、心绞痛、动脉阻塞性疾病、克罗恩氏病、突眼性甲状腺肿、自体免疫性甲状腺炎、糖尿病I型、糖尿病II型、类风湿性关节炎、老年性痴呆症、HIV阳性血清，每一病例进行独立地临床确认诊断)的患者样品中可洗脱的载脂蛋白C-I相对量，该量通过对图1中显示的类型的HPLC洗脱曲线的谱峰积分获得。
图3显示用两种亲和纯化多克隆载脂蛋白C-I抗体操作的夹心免疫检测法的标准曲线，其通过用合成的载脂蛋白C-I作为标准而获得。
图4显示使用载脂蛋白C-I夹心免疫检测法对看上去健康的正常人、败血症患者和肿瘤患者的血清或血浆中的载脂蛋白C-I直接测定的结果，其典型的校准曲线在图3中显示；并且
图5显示已经用辛基琼脂糖凝胶处理各个样品后，进行重复测定的结果，其结果在图4中显示。
实施的试验及获得的结果的描述
A.色谱研究
1.获得含有结合至疏水表面并能从上洗脱的人血清/血浆的组分的血清或血浆级分
每一实验中，将看上去健康的正常人和患有许多独立地临床上经诊断的疾病的患者的0.5ml血清/血浆样品与0.5ml辛基琼脂糖凝胶层析材料(来源：Pharmacia公司；0.25ml包装的材料，在PBS中洗涤)在PBS中混合，于室温孵育10分钟并轻微摇晃。其后，将混合物填入聚丙烯柱(直径为5mm)，通过用20ml PBS洗涤将未结合的物质从与辛基琼脂糖凝胶材料结合的物质中分离出来。
通过用50mM乙酸(pH 2.5)的洗脱将结合至辛基琼脂糖凝胶材料的物质(蛋白质)解吸附。
2.反相C18HPLC
在每一情况下将从辛基琼脂糖凝胶柱获得的乙酸洗脱液直接通过在μBondapak C18柱(3.9×300mm，Millipore、Waters)上的反相C18 HPLC分析。
将由流动相A(95体积的水，5体积的乙腈，0.1体积的三氟乙酸的混合物)和流动相B(10体积的水，90体积的乙腈，0.1体积的三氟乙酸)形成的梯度用于HPLC层析。
对HPLC柱上载乙酸洗脱液后，以下面的流动相A/流动相B形成的梯度进行分析：
t＝0-5分钟从100/0(A/B)至65/35(A/B)
t＝5-20分钟从65/35(A/B)至40/60(A/B)
t＝20-22分钟从40/60(A/B)至0/100(A/B)
流速为1ml/分钟。在214nm连续地测量柱的洗脱物的吸收值。
图1显示样品的级分的三种典型洗脱曲线，所述样品来自看上去健康的正常患者(a)、患有不同肿瘤疾病的患者(b)和患有败血症的患者(c)。
令人惊讶地发现上述人群的HPLC洗脱曲线彼此之间相当地且***地不同。对本申请关键的洗脱带是在17.05分钟时洗脱的带。
对所研究的所有血清和血浆通过谱峰积分的方式相对地量化这些洗脱带，并且对大量对照和患者样品，以这种方式测定的物质的相对量在图2中以图形显示。特定地，研究了下面的样品：
来自肿瘤患者的42件样品(9×肠癌、7×支气管癌、13×乳癌、8×卵巢癌、5×胰腺癌)、来自败血症患者的22件样品、来自心肌梗塞患者(Hi)的7件样品、来自心绞痛患者(APe)的4件样品、来自动脉阻塞性疾病(AVK)的5件样品、来自克罗恩氏病(MC)患者的6件样品、来自突眼性甲状腺肿患者的11件样品、来自自体免疫性甲状腺炎(AIT)患者的4件样品、来自糖尿病I型(D-型1)患者的10件样品、来自糖尿病II型(D-型II)患者的6件样品、来自类风湿性关节炎(RA)患者的3件样品、来自老年性痴呆症(AD)患者的2件样品和来自HIV阳性血清患者的6件样品。
由图2直接看出，对于健康的正常人的样品，发现对应于在17.05分钟测量的峰的物质明显地是正值。在来自患有疾病的那些患者的样品中，非常特别显著的是在来自败血症患者、肿瘤患者、患有明显/急性的心脏疾病(Hi、APe、AVK)的患者和患有克罗恩氏病的患者的样品中，测定出同一物质的高度显著减少的份额。对于患有糖尿病I型和糖尿病II型的患者，虽然没有减少到同样的程度，但与健康的人相比也测定出明显减少的值。对于患有突眼性甲状腺肿、自体免疫性甲状腺炎、类风湿性关节炎、老年性痴呆症的患者和HI V阳性血清患者，相应的浓度偏差较小或在统计上不显著。
获得的独立样品组的所测定的相应量的平均值总结于下面的表格中：
  样品类型   平均值(相对的吸收单位)
  对照   640
  败血症   30
  肿瘤   80
  心肌梗塞   80
  心绞痛   140
  动脉阻塞性疾病   80
  克罗恩氏病   80
  突眼性甲状腺肿   320
  自体免疫性甲状腺炎   1130
  糖尿病I型   180
  糖尿病II型   200
  类风湿性关节炎   1130
  老年性痴呆症   440
  HIV阳性血清   480
3.用于样品定性的洗脱带的鉴定(在17.5分钟时洗脱的带)
为了进行鉴定，将对应于该洗脱带的洗脱物质收集、干燥(speedvac)并将其进行肽分析。在对N-端的序列分析中测定了序列TPDVS。通过质谱法(ESI MS)测定的分子量为6630±15D。这些结果明显与人载脂蛋白C-I的已知数据(参见例如(3))相关，所述人载脂蛋白C-I具有根据SEQ ID No.1(也参见SWISS PROT Accession No.3660227)的肽序列并且其理论分子量为6627D。
在胰蛋白酶消化这种物质并随后进行质谱分析(ESI MS；“胰蛋白酶-酶解图谱法”)后，完全证实了所述归类。
在本申请的上下文中，可通过所描述的层析方法测定的载脂蛋白C-I也指的是“游离载脂蛋白C-I”。它具有从血清或血浆(PBS稀释液中)样品结合至疏水性分子结构如疏水性辛基琼脂糖凝胶层析材料的辛基基团上的性质，在典型的蛋白洗脱条件下，特别是用稀释的乙酸可以将其从所述的疏水分子结构上洗脱。然而，术语“游离载脂蛋白C-I”的使用并不一定表示通过疏水性相互作用层析法分离的物质必须在初始的样品中以完全游离的形式存在。在本发明中使用该术语的上下文中，在实验条件下与辛基琼脂糖凝胶接触而载脂蛋白C-I在层析材料上的结合被裂解的缔合物或聚集物，还有具有脂质的缔合物或聚合物，也可认为是“游离载脂蛋白C-I”。
因而这种“疏水性分子结构”也可以是疏水性层析材料表面的部分。然而它们可能也是具有疏水结构区的独立的分子，其可通过这种分子与载脂蛋白C-I的键结进行，例如具有可进行标记并例如可在同源检测法中用来标记样品液体中的载脂蛋白C-I的疏水性结构的分子。当样品中的载脂蛋白C-I的可用于这种结合的区域没有被其它物质如脂蛋白中的脂质阻断时，就表现出这种结合至“疏水性分子结构”的能力。即使当，例如，提及测定了结合至辛基琼脂糖凝胶上的载脂蛋白C-I的那些部分，这并不表示在测定中真正需要利用与辛基琼脂糖凝胶的结合。更确切地，这种揭示应该理解为待检测的物质的一种性质，即使这种性质由完全不同的方法测定。例如，相应的载脂蛋白C-I可能与通过免疫检测法所测定的是相同的，所述方法如下面描述。
B.血清/血浆中的载脂蛋白C-I的直接免疫诊断的测定。
1.载脂蛋白C-I的免疫检测法
为了对血清中的载脂蛋白C-I进行直接免疫诊断测定，以下面描述的部分建立了夹心型免疫测定：
a)经包被的管：将聚苯乙烯小管(Greiner)用商购可得的对抗载脂蛋白C-I的多克隆亲和纯化抗体(来源：Acris Antibody，BadNeuheim，德国)包被。根据用户手册，该抗体通过用人Apo C-I免疫家兔而获得并用人载脂蛋白C-I在琼脂糖凝胶亲和柱上纯化。为了包被，将300μl PBS中的0.2μg抗体结合至已经用绵羊抗-兔I gG抗体(Sigma)包被的聚苯乙烯小管(Greiner，德国)。于室温在18小时后完成所述结合。随后用PBS中3ml的0.5％牛血清白蛋白(BSA)将小管洗涤两次。将它们在真空中干燥后，将该小管用作载脂蛋白C-I免疫检测的固相。
b)丫啶酯标记的抗体：将100μl PBS中100μg另一种抗人载脂蛋白C-I的抗体(来自家兔；来源：Academie Bio-Medical Company，Texas，美国)与10μg丫啶-NHS-酯(在10μl乙腈中)起反应。于室温孵育10分钟后，通过在SW 300(Waters)上用HPLC分离反应混合物的未反应的组分进行经标记的抗体的纯化。为将其用于免疫检测，将含有0.5％BSA和1mg/ml兔IgG的PBS中的经标记抗体调整为约1百万RLU/300μl(RLU＝相对光单位)用以饱和小管壁。
2.对血清或血浆样品中的载脂蛋白C-I实施免疫诊断检测
用PBS、0.5％BSA以1∶10000将血清或血浆样品稀释。在每一实验中将其300μl吸移至上述的用固定化抗体包被的小管中并随后于室温摇晃(Heidolph旋转摇晃器上300转/分钟)孵育4小时。用PBS(用各1ml PBS充满并倒出四次)将小管内容物洗出，将结合至小管壁上的载脂蛋白C-I与每小管300μl的丫啶酯标记的抗-载脂蛋白C-I抗体在室温下、300转/分钟反应20小时。其后，用各1ml的PBS洗涤5次移除未结合的标记抗体，并以已知的方式在Berthold 952T照度计测量剩余的化学发光。
将合成的载脂蛋白C-I用于校准检测法。获得的用于上述检测法的典型的标准曲线图在图3中显示。
3.结果
借助于所描述的夹心型的免疫检测法，检测也用于色谱研究的看上去健康的正常人的对照血清，以及检测败血症及肿瘤样品。对来自败血症患者的样品的测定基本上证实了HPLC研究的结果，从中获得了与正常人相比显著减少的载脂蛋白C-I测量值。在测定来自肿瘤患者的样品中，在色谱研究中测得同样减少的浓度，然而，所获得的测量值有增加的趋势。结果在图4中用图表示。
为了核实关于一方面在色谱测定中和另一方面在免疫诊断测定中对肿瘤患者的不同结果是否归因于前述的使用疏水性相互作用层析中的选择步骤的问题，在进一步测定在免疫测定中的样品之前，用辛基琼脂糖凝胶处理以结合载脂蛋白C-I的“游离”部分。
4.用辛基琼脂糖凝胶处理样品
将如免疫测定中描述的已经测定的相同的150μl血清或血浆样品与200μl辛基琼脂糖凝胶(Pharmacia，50μl PBS中的凝胶)混合并于室温轻微摇晃地孵育一小时，之后用离心法(15分钟2000G)将其上结合有载脂蛋白C-I部分的辛基琼脂糖凝胶分离。将所获得的上清液以1∶5000稀释于PBS/0.5％BSA中并随后如上描述在免疫检测法中测定。
获得的结果在图5中显示。显然，作为用辛基琼脂糖凝胶处理的结果，用上述的夹心型免疫检测法的测量中可测定的所有“游离”载脂蛋白C-I已经与辛基琼脂糖结合，所以在上清液中不再能检测到载脂蛋白C-I。对经处理的败血症样品做了类似的观测，在所述的观测中，通过用辛基琼脂糖凝胶处理将大部分可测定的与正常样品相比已经减少了很多的载脂蛋白C-I移除。
令人惊讶地是，然而用辛基琼脂糖凝胶处理不能将在描述过的类型的免疫检测法中可测定的载脂蛋白C-I从肿瘤患者的样品中移除。
C.讨论
所述的发现表明至少大部分的肿瘤患者的血清或血浆中的载脂蛋白C-I以一种形式存在，所述的形式中载脂蛋白C-I丧失了结合至疏水表面的能力，但仍然能在免疫检测法中以免疫反应性被测到。对这些观察到的结果可能的解释是，在载脂蛋白C-I存在于肿瘤患者的血清中的情况下，可用于疏水性相互作用的分子区域被饱和了或受到阻断，并且不能被结合配对体从辛基琼脂糖凝胶挤走。这些结合配对体的性质至今未知。然而，不能排除它们是肿瘤特异性物质，所述这种物质作为或基于对例如载脂蛋白C-I的疏水性结合配对体的钝化，对肿瘤发展起重要作用，例如通过对自然免疫反应的不利影响或通过积极促使肿瘤生长。虽然在用免疫诊断方法研究的样品中没有观察到载脂蛋白C-I部分的显著减少，但平行的层析研究表明这不是上述意义中的“游离”，而是以另一种具有降低的与疏水性结合配对体的结合能力的形式存在。“游离”，即结合至疏水性结合配对体上的载脂蛋白C-I如在其它疾病如败血症中的情况，相反在肿瘤患者的血清中下降。
基于所述的发现，可以猜测通过外源供给载脂蛋白C-I来补偿在“游离”脂蛋白C-I的份额减少的意义上的被破坏的平衡对于肿瘤患者是有利的，并由此例如通过用外源的载脂蛋白C-I饱和肿瘤典型的结合配对体和提供额外的游离载脂蛋白C-I而对病理过程产生积极影响。
类似地观点，即用于补偿“游离”载脂蛋白C-I的被破坏的水平的载脂蛋白C-I的外源供给是有利的，也可应用于其它疾病例如败血症的情况中。在败血症病例中如果载脂蛋白C-I的产生被破坏，外源性供给能补偿由此导致的不足。如果在败血症患者的血清/血浆中“游离”载脂蛋白C-I的减少归因于通过结合至病理组织结构或可能地不可溶性细菌结构使得载脂蛋白C-I从循环中去除，则载脂蛋白C-I的外源供给能补偿所导致的不足或使病理组织中或细菌结构上的结合位点的饱和。通过监控由于外源供应而增加的游离载脂蛋白的浓度或受治患者血液样品中载脂蛋白的免疫反应性可以测定，每种情况下所需的量可以以简单的方式监控。
因此本发明也使得能将载脂蛋白C-I或其合适的衍生物、或模拟其生理行为的化合物具有新颖的治疗用途，其用于***、败血症以及其它与相对于健康人可观察到的游离载脂蛋白C-I的减少有关的疾病。
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                   序列表
<110>B.R.A.H.M.S Aktiengesellschaft
<120>通过测定载脂蛋白C-I诊断疾病的方法
<130>4118PCT
<140>
<141>
<160>1
<170>PatentIn Ver.2.1
<210>1
<211>57
<212>PRT
<213>智人
<400>1
Thr Pro Asp Val Ser Ser Ala Leu Asp Lys Leu Lys Glu Phe Gly Asn
1                 5                  10                  15
Thr Leu Glu Asp Lys Ala Arg Glu Leu Ile Ser Arg Ile Lys Gln Ser
             20                  25                  30
Glu Leu Ser Ala Lys Met Arg Glu Trp Phe Ser Glu Thr Phe Gln Lys
         35                  40                  45
Val Lys Glu Lys Leu Lys Ile Asp Ser
     50                  55

Claims (10)

1.用于疾病诊断、早期检测、风险评估和进程监控的方法，其特征在于，在人患者的血清或血浆中测定载脂蛋白C-I和/或它的衍生物的含量，并且基于明显偏离于健康正常人的测定值范围的测定结果而确定疾病的存在。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，测定所有存在于样品中的具有结合疏水性分子结构(“游离载脂蛋白C-I”)能力的载脂蛋白C-I级分。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，测定所有存在于样品中的通过夹心型免疫检测法(“载脂蛋白C-I免疫反应性”)在样品中可直接测定的载脂蛋白C-I级分。
4.如权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，实施所述的方法用于疾病的诊断、早期检测、风险评估和进程监控，上述的疾病选自肿瘤、败血症、急性心脏疾病、糖尿病、突眼性甲状腺肿和克罗恩氏病。
5.如权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，实施所述的方法用于败血症的诊断、早期检测、风险评估和进程监控，并将患者的血清或血浆样品中结合至疏水性分子结构的载脂蛋白C-I(“游离载脂蛋白C-I”)的相对于健康的正常人显著降低的比例，和/或下降的载脂蛋白C-I免疫反应性与败血症状态相关联。
6.如权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，实施所述的方法用于肿瘤的诊断、早期检测、风险评估和进程监控，并将患者的血清或血浆样品中结合至疏水性分子结构的载脂蛋白C-I(“游离载脂蛋白C-I”)的相对于健康的正常人显著降低的比例，以及升高的载脂蛋白C-I免疫反应性与肿瘤疾病相关联。
7.如权利要求6中所述的方法，其特征在于，当患者的血清或血浆样品中发现升高的载脂蛋白C-I免疫反应性时，通过额外的对照检测检查该测量值，在所述的对照检测中，实施检查以测定样品中可检测免疫反应性的值是否由于用具有疏水表面的吸附剂处理样品而明显地改变，当该值没有偏离或没有显著偏离初始测定值时，肿瘤疾病的存在得以高可能性的确定。
8.如权利要求1-7中任意一项所述的方法，其特征在于，将结合至疏水性分子结构上的载脂蛋白C-I(“游离载脂蛋白C-I”)通过使血清或血浆样品进行疏水性相互作用层析而得以测定，其中载脂蛋白C-I与层析材料结合，并随后测定洗脱蛋白级分中的载脂蛋白C-I。
9.如权利要求8中所述的方法，其特征在于，将辛基琼脂糖凝胶用作层析材料，通过洗涤层析材料将未结合的样品组分移除，所结合的蛋白质用稀释的酸特别是乙酸洗脱，并且随后通过HPLC和/或免疫诊断法测定洗脱液中的载脂蛋白C-I的量。
10.载脂蛋白C-I在用于制备经注射施用的药物中的用途，其中所述的药物用于治疗处理败血症或肿瘤疾病。
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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