CN1829536A - 生物活性剂的改进的真皮内传送 - Google Patents
生物活性剂的改进的真皮内传送 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1829536A CN1829536A CN 200480021452 CN200480021452A CN1829536A CN 1829536 A CN1829536 A CN 1829536A CN 200480021452 CN200480021452 CN 200480021452 CN 200480021452 A CN200480021452 A CN 200480021452A CN 1829536 A CN1829536 A CN 1829536A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- diagnostic agent
- lacuna
- intradermal
- agent
- skin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明涉及传送一种或多种生物活性剂的方法和装置,特别是将诊断剂传送至受试者皮肤真皮内腔隙的方法和装置。本发明提供一种传送生物活性剂的改进方法,因为除了提供其他优势外,该方法还可使生物活性剂快速吸收至局部***、改善了对特定组织的寻靶、提高了生物利用度、提高了组织生物利用度、改善了组织特定药动学、提高了所用药物预选量的沉积、加快了生物药效学和生物药动学。本发明提供了经真皮内传送药物通过******快速转运药物的方法。本发明的方法特别用于诊断剂的传送。
Description
本申请要求2004年1月26日提交的美国临时申请No.60/538,473、2003年9月12日提交的美国临时申请No.60/502,225、2003年6月13日提交的美国临时申请No.60/477,950、和2003年7月25日提交的美国临时申请No.60/489,920的优先权,在此将它们整个引用为参考文献。
1.发明领域
[0001]本发明涉及传送一种或多种生物活性剂的方法和装置,特别是将诊断剂传送至受试者皮肤真皮内腔隙的方法和装置。本发明提供一种传送生物活性剂的改进方法,因为除了提供其他优势外,该方法还可使生物活性剂快速吸收至局部***、改善了对特定组织的寻靶、提高了生物利用度、提高了组织生物利用度、改善了组织特定药动学、提高了所用药物预选量的沉积、加快了生物药效学和生物药动学。本发明提供了通过******快速转运药物的方法,该******是药物经真皮内传送所进入的。本发明的方法特别用于诊断剂的传送。
2发明背景
2.1药物传送至皮肤
[0002]长期以来已认识到有效安全地传送诸如诊断剂等药剂的重要性。近来凸现的困难与确保大分子足够的生物利用度和再现性吸收有关,此大分子诸如为产自生物工程产业的蛋白(Cleland et al.,Curr.Opin.Biotechnol.12:212-219,2001)。长期以来应用常规针头为通过皮肤将药剂传送至人和动物提供了一种方法。一般情况下,注射避免了口服传送相关的粗糙条件,口服传送通常减小了大多数生物治疗的所需作用。注射还可提供比口服给药更快的治疗作用。为获得再现和有效的传送,同时便于应用并减轻常规针头为患者带来的恐惧和/或疼痛,在基于针头注射方面已经做出了很多努力。另外,某些经皮传送***彻底不用针头,仅依靠简单的疏水吸附、化学介质或外部驱动力,诸如离子电流或者电穿孔或热穿孔或者超声穿透,穿破角质层(皮肤的最外层),通过皮肤表面传送药剂。但是,一般情况下,这些传送***不能再现地来回穿过皮肤屏障,或者将药剂传送至皮肤表面下指定的深度。所以,临床效果是易变的。因此,相信机械地,诸如应用针头透过角质层,可为通过皮肤表面给药提供再现性最佳的方法,而且可控制和保障所用药剂的定位。
[0003]将药物传送至皮肤表面之下的方法几乎只有经皮注射或输注,即将药物通过皮肤传送至皮肤下的位置。经皮注射和输注包括皮下、肌内或静脉内给药途径,其中最常应用肌内(IM)和皮下(SC)注射。
[0004]解剖上,机体外表面由两种主要组织层构成,即外层的表皮及其下面的真皮,它们一起构成皮肤(复习请参见Physiology,Biochemistry,and Molecular Biology of the Skin,Second Edition,L.A.Goldsmith,Ed.,Oxford University Press,New York,1991)。表皮可再细分为5层,其总厚度为75-150μm。表皮下面为真皮,它包括2层,最外层部分称为真皮***层,内层部分称为真皮网织层。真皮***层包括大量微循环血管丛和淋巴丛。相反,真皮网织层相对而言是无细胞无血管的,由致密的胶原和弹性***构成。表皮和真皮下面是皮下组织,也称为皮下组织,它由***和脂肪组织组成。肌肉组织位于皮下组织之下。
[0005]如上所述,皮下组织和肌肉组织两者通常用作药剂,包括诊断剂的给药部位。然而,真皮很少被用作给药部位,而且这种情况可能至少部分是由于将针头精确定位在真皮内腔隙存在困难。另外,即使已知真皮,特别是真皮***层具有高度的血管供应,迄今仍不能很好地利用这种高度的血管供应获得优于皮下给药的药物吸收曲线。
[0006]在皮肤表面下给药以及将药物应用于真皮内腔隙区的一种方法常规用于芒图氏结核菌素试验中。在此方法中,用27或30号针头,以与皮肤表面呈小角度注射纯化蛋白衍生物(Flynn et al.,Chest 106:1463-5,1994)。但是,注射定位的不确定程度可导致一些假阴性结果。另外,此试验还涉及局部注射引起注射部位的反应,而且芒图氏方法不能使真皮内注射用于药物的全身给药。
[0007]一些研究组已经报告了通过所描述的“真皮内”注射进行全身给药。在这样的一个报告中,进行了皮下注射与所述“真皮内”注射的对照研究(Autret et al.,Theerapie 46:5-8,1991)。所试验的药剂为降钙素,它是一种分子量约为3600的蛋白。尽管表明该药物进行了真皮内注射,但是此注射应用4mm针头,以60°角度推到底。这样将会使注射定位的深度约为3.5mm,而进入较低的真皮网织层部分或者进入皮下组织,而不是进入血管化的真皮***层。事实上,如果该组注射入较低的真皮网织层部分,而不是进入皮下组织,将预期该药物或者在血管相对较少的真皮网织层中被缓慢吸收,或者扩散至皮下区域而产生在功能上与皮下给药和吸收相同的结果。所报告的在达到最大血浆浓度的时间、每个测定时间点的浓度以及曲线下面积方面,皮下给药和所述真皮内给药之间缺乏差异,可从这种实际上或功能上的皮下给药中得到解释。
[0008]类似的是,Bressolle等应用4mm针头在所述的“真皮内”注射中进行头孢他啶钠的给药(Bressolle et al.,J.Pharm.Sci.82:1175-1178,1993)。这样可造成注射深度在皮肤表面下4mm,产生实际上或功能上的皮下注射,尽管在本例中应该预期获得良好的皮下吸收,因为头孢他啶钠是亲水的而且分子量较低。
[0009]另一组报告了所述真皮内药物传送装置(美国专利No.5,007,501)。研究显示以慢速注射,而且注射部位要求在表皮下的区域,即表皮和真皮间的交界处,或者真皮或皮下组织内。但是,此文献既没有提供进行真皮内选择性给药的指导建议,也没有提出可从这种选择性给药中获得可能的药动学优势。
[0010]因此,在药剂给药方面,尤其是对于诊断剂来说,仍需要有效安全的方法和装置。
2.2用于疾病诊断的诊断剂传送
[0011]癌症是20世纪最重要的慢性疾病之一。美国癌症协会的癌症现状及数据(American Cancer Society′s Cancer Facts andFigures)显示,2003年将有超过130万美国人要接受癌症检查。在美国癌症的死亡率仅次于心脏病,占死亡病例的1/4。2002年,美国***估计癌症的总花费为1716亿美元,其中610亿美元为直接花费。预计随着美国人口的老龄化,癌症发病率也会提高,而且这种疾病的影响也会增加。目前放疗和化疗方法基本上建立于20世纪70和80年代,仍然没有进行重大的改变。这些治疗受到限制,因为它们对正常细胞和癌细胞都具有非特异性作用。另一个癌症治疗持续缓慢的原因是癌症的发生主要是在分子和细胞水平上调节打破的结果。尽管对细胞调节过程的科学理解正在快速发展,但是此知识的益处仍依赖于临床中在细胞和分子水平进行癌症的早期检测和描绘。
[0012]大量工作集中于改进癌症检测上。最近一项确定癌症及其扩散的进展是信号***活组织检查及基因定位方法。通常,这种外科方法确定肿瘤内及其周围引流区域的***网。基因定位此***网,可使外科医生看清患者的淋巴***,有助于癌生长的检测,并判定此疾病中淋巴受累情况。可更有效更精确地除去患病组织和受累***。受累***的位置和数目影响后续治疗方案的确定。此对于乳腺癌患者尤其重要。这种信号***基因定位方法应用放射性同位素标记示踪物和染剂的真皮内传送。示踪物有助于确定首先回流自肿瘤组织的信号***,而染剂可增强视觉效果。该组织和***一旦切除,守候的病理学家将快速对它们进行评价,他对***进行检查,并对癌症受累情况进行肉眼评价。在极大程度上,可确定巨大转移灶,而微小转移灶需要更长的术后检查。外科医生和病理学家一起决定将要切除多少其他的组织以及多少***。
[0013]这种现有的信号***活组织检查及基因定位方法存在一个难题,即它缺乏敏感性和特异性。通过肉眼观察鉴定癌症侵入***。在手术中不能检测到微小转移灶。所用试剂是非特异性的,而且无助于识别罕有细胞。在此方法中加入特异性试剂,可给组织学家和外科医生更特异更敏感的信号,此信号可用于识别组织中的罕有细胞,这样可提高敏感性。已经开发了这些试剂的真皮内传送,并用于替代皮下传送,因为真皮内传送可排除***周围组织的背景信号。这种现有手工真皮内传送由于在非淋巴组织中染色,所以可用于减小背景信号。尽管具有显著优势,但该方法在临床广泛应用存在很大障碍,即可靠地进行信号***活组织检查需要技术和经验。感染性疾病同样具有明显的发病率和病死率。例如,CDC估计全世界有4千2百万人感染HIV。目前诊断方法一般依赖于诊断谱的体外检测。但是,这样就丢失了疾病部位的信息。这些信息对于分期和治疗选择具有潜在的重要性。
[0014]本发明描述一种新的方法,该方法应用特异性检测试剂描述疾病,包括感染。
3.发明总结
[0015]本发明提供的方法用于将一种或多种生物活性剂应用于患者皮肤,此生物活性剂优选是诊断剂,其中将该生物活性剂传送至患者皮肤的真皮内(ID)腔隙。本发明部分基于发明人的意外发现,即与包括皮下传送和ID芒图氏传送等的常规传送方法相比,当将这些药物传送至ID腔隙时,它们就被快速转运至局部淋巴***,因此具有此处公开的优势。尽管不想被特殊作用机理所束缚,但按照本发明方法所传送的药物在体内通过局部淋巴***转运,被分泌至体循环和更深的组织环境中。然后例如肝脏、肾脏或脾脏可将该药物降解或代谢。尽管不想被特殊作用机理所束缚,但通过这里所述的方法,使胞外基质(ECM)的生物力学控制通过药物在真皮内腔隙的精确传送,可实现到局部***和***的快速摄取。
[0016]本发明提供一种传送生物活性剂的改进方法,因为除了提供其他优势外,该方法还可使生物活性剂快速吸收至局部***中;改善了对特定组织的寻靶,即改善了所传送药物在特定组织中的沉积,此特定组织即一起完成特定功能的细胞群或细胞层;提高了***的生物利用度;提高了组织生物利用度;提高了所用药物预选量的沉积;改善了组织特定药动学(即包括改善或改变生物药效学和生物药动学);加快了生物学和药学药效学(PD)以及加快了生物和药动学(PK)。本发明的这些优势优于传送生物活性剂的其他方法,它们将生物活性剂沉积在比真皮内腔隙更深的组织,包括例如皮下腔隙和肌内腔隙。本发明方法的这些优势尤其可用于诊断剂的传送。按照本发明方法进行诊断剂的真皮内传送,可将该诊断剂沉积在真皮内和淋巴腔隙,因此在这些腔隙中快速获得具有生物学意义的浓度。所以用较少诊断剂可完成快速诊断,并具有此处所述的显著优势。
[0017]真皮内传送生物活性剂改善特定组织中的组织生物利用度,此组织包括但不限于皮肤组织、淋巴组织(例如***)、粘膜组织、生殖组织、宫颈组织、***组织和由不同类型组织组成并执行特殊功能的机体任意部位,即器官,包括但不限于肺、脾、结肠、胸腺。在某些实施方式中,该组织包括与环境相互作用的任意组织或者易受环境影响的任意组织,例如皮肤、粘膜组织。本发明包括具有粘膜层的任意组织或器官。本发明涉及的其他组织包括但不限于血管******;淋巴组织(例如上皮相关淋巴组织和粘膜相关淋巴组织或MALT(MALT可再分为组织化粘膜相关淋巴组织(O-MALT)和弥散淋巴组织(D-MALT));初级淋巴组织(例如胸腺和骨髓);次级淋巴组织(例如***、脾、消化***的淋巴组织、呼吸***的淋巴组织和泌尿生殖***的淋巴组织)。本领域技术人员应当理解到次级MALT包括肠相关淋巴组织(GALT);支气管相关淋巴组织(BALT)和泌尿生殖***。MALT特别包括***;脾;与上皮表面相关的组织,诸如palentine和鼻咽扁桃体;小肠中的派伊尔氏淋巴集结;以及呼吸***和泌尿生殖***、皮肤和眼睛结膜中的各种小结。O-MALT包括扁桃体咽周淋巴环(palentine、舌的、鼻咽的和咽鼓管的)、食管小结和散布在从十二指肠至肛管的整个消化道中类似的淋巴组织。与生物活性剂传送至皮下(SC)腔隙或通过真皮内(ID)芒图氏法传送生物活性剂相比,按照本发明方法传送相同生物活性剂可提高组织生物利用度。当传送诊断剂至ID腔隙时,按照本发明方法传送此药物而提高组织生物利用度特别有用,因为它减少了进行每个诊断步骤所需诊断剂的用量,这些诊断剂难以获得而且昂贵。减小诊断剂用量还减小了诊断步骤相关副作用的可能性,例如毒性。
[0018]与生物活性剂传送至较深组织腔隙,诸如SC腔隙和IM腔隙相比,真皮内传送相同生物活性剂可提高特定组织中的组织生物利用度。可用本领域技术人员已知的方法和参数测定按照本发明方法传送这些药物所提高的组织生物利用度,例如应用本领域技术人员已知并公开于此的组织学方法测量特定组织中蓄积的药物总量。可替代的是,可将这些药物提高的组织生物利用度评价为药物存在于特定组织中的量、特定组织单位质量或体积中药物蓄积的量、单位时间内特定组织特定质量或体积中药物蓄积的量。
[0019]按照本发明方法传送的生物活性剂沉积在真皮内腔隙,首先以高生物利用度分布在给药部位局部的淋巴组织,然后通过淋巴传送更广泛地扩散至体循环中。在某些实施方式中,本发明方法对于深部组织中疾病、病症或感染的诊断特别有效,例如诸如肺等器官或组织中感染或者诸如阑尾或关节等器官或组织中炎症的体内检测。
[0020]生物活性剂,尤其是诊断剂的真皮内传送与包括SC传送和ID芒图氏传送等的常规传送相比,起效和清除更快。因此,当将诊断剂传送至受试者皮肤的ID腔隙时,本发明的方法具有几种优势。第一,此方法减小了诊断步骤引起的潜在副作用和不适。第二,它们可在单次诊断过程中快速和重复后续步骤的试验。第三,它们缩短了在昂贵医疗或成像设备中所需的时间。第四,它们利于实时生理学研究。第五,它们减小了未结合和未清除诊断剂产生的潜在背景信号。第六,与IV给药、SC注射、芒图氏注射或外科活组织检查所致疼痛相比,本发明方法所致疼痛减小。
[0021]按照本发明方法传送生物活性剂,包括诊断剂,优于常规传送方法,包括SC传送和ID芒图氏传送,因为例如应用病理组织学方法或本领域技术人员已知的方法进行测量,沉积在淋巴组织中此药物预选剂量的量升高,这些测量方法诸如为荧光激活细胞分选(FACS)和此处公开的成像方法。
[0022]在此应用时,传送至真皮内腔隙或者真皮内传送是指采用一种方法将生物活性剂应用于真皮内,此方法可使该药物易于到达血管化丰富的真皮***层,并且该药物可被快速吸收至毛细血管和/或***中,而获得全身生物利用。将药物定位在真皮上层区域可实现这种情况,真皮上层区域即真皮***层或血管化相对较少的真皮网织层上层部分,这样此药物可易于扩散至真皮***层内。将生物活性剂可控传送至真皮网织层内位于真皮***层下面的这种真皮腔隙中,而且此位置足以在真皮和皮下组织交界层之上,这样应该可以使该药物有效(向外)移动至(未被干扰的)血管和淋巴微小毛细管床(在真皮***层内),在这里,经过这些毛细管该药物可被吸收至循环中,其运输不会被任何其他皮肤组织腔隙隔绝。在某些实施方式中,生物活性剂主要定位的深度至少约为0.3mm,更优选至少约为0.4mm,最优选至少约为0.5mm,而且至多约为2.5mm,更优选至多约为2.0mm,最优选至多约为1.7mm,这样将获得该药物的快速吸收。尽管不想受到特殊作用机理的束缚,该生物活性剂的主要定位更深和/或进入真皮网织层的较低部位,这样可使药物被***吸收的效率较低,因为该药物在血管较少的真皮网织层或皮下腔隙中吸收将会变慢。
[0023]按照本发明方法传送的生物活性剂,包括诊断剂,将获得更高的最大浓度,而且可减小总给药量。因此,可减少剂量,获得经济效益,同时获得经济效益,因为较少量的药物或诊断剂必须被机体清除。
[0024]本发明的另一个益处是未改变生物活性剂,包括诊断剂的***清除率或固有清除机理。这表明,此给药途径未改变***清除的生物学机理。从法规的观点看是有优势的,因为在申请FDA批准之前,其降解和清除途径不需要重新研究。从药动学观点看也是有益的,因为它可预测给药方案。如果某些药物的清除是浓度依赖性的,则它们的清除更快。因为ID传送可获得更高的Cmax,清除率可被改变,尽管固有机理保持不变。
[0025]按照本发明方法生物活性剂ID传送相关的优势,不仅可通过基于微型装置的注射***获得,而且可通过其他传送***获得,诸如流体或粉末无针或无针冲击注射至ID腔隙,通过微型装置的增强离子电渗以及流体、固体或其他剂型直接沉积至皮肤。在特殊实施方式中,通过将针头或套管***受试者皮肤的真皮内腔隙而实现生物活性剂的给药。
[0026]按照本发明诊断剂的真皮内传送特别有益于疾病诊断,包括慢性和急性疾病,它们包括当不限于淋巴瘤,白血病,乳腺癌,黑素瘤,结肠癌,头颈癌,肺癌,包括微小转移癌的转移癌,例如HIV、RSV的病毒感染,诸如排斥反应的免疫疾病,代谢性疾病,淋巴***疾病或病症,影响***的疾病以及感染性疾病。按照美国国家卫生统计中心的定义,慢性疾病指一种持续三个月或更长时间的疾病或病症。尽管不想受限于特殊的作用机理,可将按照本发明方法传送的诊断剂沉积在真皮内腔隙,并可被淋巴***吸收,在淋巴***中它被特殊组织中的特殊细胞识别并结合,此表明细胞或疾病状态的存在。本发明可用于诊断程序,包括但不限于外科方法、活组织检查、非侵入性筛选和成像、以及影像引导的活组织检查。
[0027]本发明为诊断和/或检测疾病,例如癌症提供了改进的方法,它提高了敏感性,增加了药物沉积的量,提高了生物利用度,加快了所传送诊断剂的起效和清除。本发明的方法用于至少一种诊断剂的给药,该诊断剂用于疾病,特别是癌症的诊断,包括在可控速率、量和压力下将该药物传送至受试者皮肤的ID腔隙,以便该药物沉积在ID腔隙,并被******吸收。
[0028]本发明方法特别改进了常规癌症检测方法,该常规方法可用于检测肿瘤信号***,例如乳腺肿瘤信号***或者回流患者肿瘤的***,这是因为与应用常规传送方法,例如ID芒图氏方法,将预选量诊断剂传送至真皮内腔隙相比,本发明方法可将该诊断剂预选量的75%以上沉积在真皮内腔隙。
[0029]本发明提供了现有信号***活组织检查和基因定位外科法的改进方法,该方法提高了诊断剂至局部淋巴***的吸收和生物利用度。本发明提供的方法可用于至少一种检测肿瘤信号***的诊断剂的给药,此肿瘤信号***例如为乳腺肿瘤信号***或者回流患者肿瘤的***,该方法包括将此药物传送至患者皮肤真皮内腔隙,使此药物可转运至局部淋巴***。在其他实施方式中,本发明提供的方法可用于至少一种检测肿瘤信号***的诊断剂的给药,此肿瘤信号***例如为乳腺肿瘤信号***或者回流患者肿瘤的***,该方法包括将此药物传送至患者皮肤真皮内腔隙,使此药物的组织生物利用度高于ID芒图氏法传送该药物的生物利用度。在其他特殊实施方式中,本发明提供的方法可用于至少一种检测肿瘤信号***的诊断剂的给药,此肿瘤信号***例如为乳腺肿瘤信号***或者回流患者肿瘤的***,该方法包括将此药物传送至患者皮肤真皮内腔隙,使此药物的起效和清除快于ID芒图氏法传送该药物的起效和清除。
[0030]本发明的方法提供了改进的预测方法,它应用特异药物(与非特异药物相对)评价疾病治疗方案的有效性,例如通过检测细胞基因谱,评价根据时间的基因调解和表达。通常,细胞基因谱体外分析作为评价治疗效果的工具已用于评价根据时间的基因调解和表达。这些体外方法具有很多缺陷,包括但不限于不精确地,从机体分离细胞可引起RNA和DNA的破坏,因此改变标本的基因谱,应用来自离体的方法潜在地丢失了基因损伤的形态学部位的信息,而且在体内去除细胞外环境可影响细胞分化和调解。通过应用本发明的方法,当患者患病时,真皮内应用可连接和/或结合疾病特异标记的特异诊断剂可对该疾病进行评价。因此,本发明所传授的方法可影响医师对治疗的选择。
[0031]本发明的方法特别用于综合诊断和治疗的方法。疾病的准确诊断例如对于肿瘤学中是很需要的,在这方面几乎没有诊断剂表明哪种治疗选择将会肯定成功。本发明的方法通过应用制剂而为综合诊断和治疗提供了改进的方法,这些制剂包括一种或多种诊断剂与一种或多种治疗剂联合应用。本发明提供将诊断剂和治疗剂靶定到特殊组织中的特殊细胞的方法。在特殊实施方式中,本发明包括将制剂应用于患者皮肤的ID腔隙,此制剂包括一种或多种诊断剂与一种或多种治疗剂联合,这样诊断剂的特殊作用引起治疗剂的作用,例如生物学作用。按照本发明方法,靶向诊断剂传送与靶向治疗剂传送联合应用可提高对患者的护理水平。此实施方式表明真皮内治疗剂传送与诊断剂传送联合的优势。诊断剂和治疗剂联合传送至ID腔隙可为患者疾病治疗水平的提高提供一种方法。
3.1定义
[0032]在此应用时,“真皮内”指按照一种方法将生物活性剂应用至真皮内,此方法使该药物易于达到血管化丰富的真皮***层,并且可被快速吸收至毛细血管和/或***中,而具有***生物利用性。这些可由该药物在真皮上层区域的定位产生,即真皮***层,或者是血管相对较少的真皮网织层的上层部分,这样可使该药物易于扩散至真皮***层。在真皮网织层内低于真皮***层的真皮腔隙中,但足以在真皮和皮下组织交界层之上的生物活性剂的可控传送应当可将该药物有效(向外)移动至(未被干扰的)血管和淋巴微小毛细管床(在真皮***层内),在这里,经过这些微小毛细管该药物可被吸收至体循环中,其运输不会被任何其他皮肤组织腔隙隔绝。在某些实施方式中,生物活性剂主要定位的深度至少约为0.3mm,更优选至少约为0.4mm,最优选至少约为0.5mm,而且至多约为2.5mm,更优选至多约为2.0mm,最优选至多约为1.7mm,这样将获得该药物的快速吸收。尽管不想受到特殊作用机理的束缚,该生物活性剂的主要定位更深和/或进入真皮网织层的较低部位或者SC腔隙,这样可使药物被***吸收的效率较低。
[0033]在此应用时,“真皮内传送”指药物传送至真皮内腔隙,如Pettis等在WO02/02179A1(PCT/US01/20782)和美国专利申请No.09/606,909中所述,它们均在此整个引用为参考文献。
[0034]在此应用时,“ID芒图氏传送”指常规ID芒图氏结核菌素试验,其中应用27或30号针头和标准注射器以与皮肤呈小角度注射药物(例如参见Flynn et al.,Chest 106:1463-5,1994;它在此整个引用为参考文献)。芒图氏技术包括侧向将针头***皮肤,然后再将针头“迂回”至ID组织中。已知此技术操作困难,而且需要专门培训。传送定位不精确程度可导致大量假阴性测试结果。另外,此方法还使局部注射引起注射部位的反应,而且芒图氏方法不能使真皮内注射用于药物的全身给药。通过ID芒图氏法传送该药物时,针头基本上平行于皮肤表面,优选角度至多为30°,而且最好是在10°至15°之间。当正确操作时,注射液的芒图氏沉积可使该注射液在SC和ID组织中呈现椭圆型样式。如此所述的ID沉积使ID组织中所含注射液呈现圆形样式。当通过芒图氏方法传送药物时,针头的***角度优选以15°平行于皮肤表面。ID芒图氏法给药后,注射部位的组织学检查产生一种椭圆形沉积样式,而且传送的大量药物沉积在皮肤SC腔隙中,而不是ID腔隙中。临床上ID芒图氏法常用于诊断步骤,诸如检测肿瘤的信号***活组织检查,但是该方法难以操作,并需要专门培训,具有很大局限性,包括给药部位、注射并发症和患者不适。
[0035]在此应用时,皮下传送指药物沉积在患者皮肤的皮下层,深度大于2.5mm。
[0036]在此应用时,“药动学、药效学和生物利用度”均如Pettis等在WO02/02179A1(PCT/US01/20782,其优先权日期为2000年6月29日)所述。
[0037]在此应用时,“改善的药动学”指与常规给药方法相比,对于所用给定量的药物来说,生物利用度提高,滞后时间(Tlag)缩短,Tmax缩短,吸收速率更快,起效更快和/或Cmax提高。
[0038]在此应用时,“生物利用度”指给定剂量的药物到达血中的总量。通常将其测定为浓度/时间图中曲线下面积。
[0039]在此应用时,“滞后时间”指给药至达到可测定或可检测血液或血浆水平之间时间的延迟。Tmax表示药物达到最大血液浓度的时间,Cmax是给定剂量和给药方法所达到的最大血液浓度。起效时间是Tlag、Tmax和Cmax的函数,所有这些参数均影响达到可实现生物效应所需血液(靶组织)浓度的所需时间。通过目测图形结果可确定Tmax和Cmax,而且Tmax和Cmax经常可提供比较药物两种给药方法充足的信息。但是通过药动学分析可更精确地确定数值,这需要应用数学模型和/或本领域技术人员已知的其他方法。
[0040]在此应用时,术语“颗粒”包括任何形式的成分,它包括单体、聚合物、脂质、两亲物、脂肪酸、类固醇、蛋白以及其他可聚集、自组装或者可加工为颗粒的物质。颗粒还包括单层状、多层状、无规则弯曲轨迹和固体形态。代表性实例包括脂质体、微晶材料、微粒MRI造影剂、聚合小珠(即胶乳和HEMA),但是最优选中空颗粒,诸如微泡,它可用于超声成像。
[0041]在此应用时,“组织”指一起完成一种功能的一群或一层细胞,它们包括但不限于皮肤组织、淋巴组织(例如***)、粘膜组织、生殖组织、宫颈组织、***组织以及由不同类型组织组成并完成特定功能的机体任意部分,即器官,包括但不限于肺、脾、结肠、胸腺。在此应用时,组织包括与环境相互作用或者受环境影响的任意组织,例如皮肤、粘膜组织。
[0042]在此应用时,“组织-生物利用度”指一种特定组织中在体内生物学可利用的药物量。通常这些量被测定为活性,它可与结合、标记、检测、转运、稳定性、生物学作用或者可用于诊断和/或治疗的其他可测定的特性有关。另外,应当清楚“组织-生物利用度”的定义还包括可用于特定组织的药物量。“组织-生物利用度”包括蓄积在特定组织中该药物的总量,出现在特定组织中的药物量,单位质量/体积特定组织中蓄积的药物量,特定质量/体积的特定组织中单位时间蓄积的药物量。组织生物利用度包括特定组织或者一堆组织中体内可利用的药物量,此一堆组织诸如为构成脉管***和/或机体各种器官的组织(即由不同类型组织组成并且完成特定功能的一部分机体。实例包括脾、胸腺、肺、***、心脏和脑)。
[0043]在此应用时,“常规传送”指传送各种材料的任意方法,这些材料具有或者被认为具有提高的生物动力学和生物动力学,它类似于或者低于皮下传送。常规传送可包括皮下、离子电渗和真皮内传送方法,诸如授予Gross的美国专利5,800,420中所述的那些方法。
[0044]在此应用时,“生物学实体”包括但不限于细胞、细胞群或细胞集、细菌、病毒、病原体、蛋白、噬斑和寄生虫病原体。
[0045]在此应用时,“靶向传送”指应用真皮内传送至特异组织和/或器官和/或生物学实体,而不是通过常规传送方法进入或被认为进入这些组织和/或器官和/或生物学实体。
[0046]靶向组织包括但不限于给药部位附近的真皮内腔隙和局部***构,包括初级***、***、导管和***。靶向组织还包括但不限于皮肤组织、淋巴组织(例如***)、粘膜组织、生殖组织、宫颈组织、***组织以及由不同类型组织组成并完成特定功能的机体任意部分,即器官,包括但不限于肺、脾、结肠、胸腺;以及与环境相互作用或者受环境影响的任意组织,例如皮肤、粘膜组织。
[0047]在此应用时,“特异药物”包括诸如蛋白、免疫球蛋白(例如多特异Ig、单链Ig、Ig片段、多克隆抗体及其片段、单克隆抗体及其片段)、肽(例如肽受体、选择蛋白)、结合蛋白(麦芽糖结合蛋白、葡萄糖-半乳糖结合蛋白)、核苷酸、核酸(例如PNA、RNA、修饰RNA/DNA、适体)、受体(例如乙酰胆碱受体)、酶(例如葡萄糖氧化酶、HIV蛋白酶和逆转录酶)、碳水化合物(例如NCAM、唾液酸)、细胞(例如胰岛素及葡萄糖应答细胞)、噬菌体(例如丝状噬菌体)、病毒(HIV)、化学特异性剂(chemospecific agents)(例如cyptands、冠醚、boronates)。
[0048]在此应用时,“化学特异性剂”指与生物分子特异性结合的化学合成分子。化学特异性剂的实例包括但不限于PNA,诸如GeneTherapy Systems Inc.销售的GeneGRIPTM;SomaLogic销售的photoaptamer;唾液酸粘合剂,如Shinkai,S,et.al.J A.Chem.Soc.2001,123.10239-10244、Wang et al.,Current Organic Chemistry2002,6,1285-1317、Striegler,S.Current Organic Chemistry2003,7,81-102、Wang,et.al.,Bioorganic&Medicinal ChemistryLetters 2002,2175-2177中所述;以及检测碳水化合物的硼酸,如US 2002/0143475(碳水化合物的比色和荧光分析)所述。上述所有均在此整个引用为参考文献。
[0049]在此应用时,“非特异药物”包括一些化合物,诸如染剂、染剂轭合物、放射性核素或者诸如脂质体、胶体或胶乳粒子的形成成分。
[0050]在此应用时,“标记”指任何受体、分子或其他化学或生物学实体,在组织中可特异性地发现它们,此组织需要确定,特别是受疾病或病症影响的组织(例如转移灶)。当抗体用作示踪物时,标记则为抗原。抗原标记的实例包括CD4、CD8、CD90和此处提到的其他抗原标记,以及本领域已知的那些标记。这些标记的非限制实例包括:蛋白或受体,诸如用于乳腺癌的Her2/神经鞘或者表皮生长因子受体(EGFR)、用于黑素瘤的melastatin、用于淋巴瘤的CD22和用于HIV感染的HIV蛋白酶。标记还可是碳水化合物,诸如用于转移灶的唾液酸或者用于神经内分泌疾病或癌症的NCAM,用于糖尿病的葡萄糖或胰岛素应答的细胞,用于HIV或感染性疾病的病毒或噬菌体,用于疾病基因谱检测或疾病分子水平检测的核苷酸或核酸,诸如适配子。这种疾病的实例是弥散大B细胞淋巴瘤。
[0051]在此应用时,术语“病症”和“疾病”可以互换,指患者的健康状况。疾病包括机体功能、***或器官的中止、中断或者紊乱。疾病可包括任意障碍。
[0052]在此应用时,术语“癌症”指细胞异常失控生长所产生的肿瘤。在此应用时,癌症明确包括白细胞和淋巴瘤。术语“癌症”指一种疾病,它所含细胞具有转移至远端并具有表型特征的可能性,此表型特征与非癌细胞不同,例如在诸如软琼脂等三维基质中克隆的形成,或者在三维基膜或细胞外基质制剂中管形网状构造或网状基质形成。非癌细胞在软琼脂中不形成克隆,并在三维基膜或细胞外基质制剂中形成不同的球状结构。癌细胞在其进展过程中获得一组特征性功能能力,尽管是通过不同的机理。这些能力包括规避程序性死亡、生长信号自给自足、对抗生长信号不敏感、组织侵入/转移、无限解释的潜在性以及持续的血管生成。术语“癌细胞”指包括恶变前和恶性癌细胞两者。在某些实施方式中,癌症指良性肿瘤,它保持局限化。在其他实施方式中,癌指恶性肿瘤,它们侵入和破坏邻近机体结构,并扩散至远处部位。在另外其他实施方式中,癌与特异性癌抗原相关。
[0053]在此应用时,术语“患者”和“病人”可互换。在此应用时,患者优选为哺乳动物,诸如非灵长类(例如母牛、猪、马、猫、狗、鼠等)和灵长类(例如猴和人),最优选是人。
4、附图说明
[0054]附图1 小鼠*** 该图显示小鼠回流***的位置。
[0055]附图2A-2E ID传送至***
[0056]附图2A显示应用本发明方法真皮内传送1%伊凡斯蓝溶液1小时后深度染色的小鼠浅表腹股沟***。
[0057]附图2B显示在Yorkshire猪中真皮内(ID)与皮下(SC)注射伊凡斯蓝染剂的比较。猪的图显示注射部位。
[0058]附图2C ID和SC注射。箭头显示SC注射部位。
[0059]附图2D 尸解后的ID和SC注射。
[0060]附图2E ID和SC注射部位切除术,它显示伊凡斯蓝染剂从ID注射部位移动至腹股沟***,并将此染剂沉积在SC注射部位。
[0061]附图3A和附图3B ID传送至***
[0062]附图3A显示回流***中根据时间的CD90和CD4或CD8或CD19阳性的细胞百分率。
[0063]附图3B显示未注射、抗CD90-FITC抗体注射30分钟和1小时后小鼠***标记细胞悬浮液的流式细胞术图。
[0064]附图4A-4C ID传送至***
[0065]附图4A显示放大40倍的FITC抗体注射1小时后淋巴组织的体内荧光染色,它包括注射抗体部分。
[0066]附图4B显示放大40倍的FITC抗体注射1小时后细胞的H和E染色。
[0067]附图4C显示4A和4B的覆盖图。
[0068]附图5ID传送剖面图,它显示按照本发明方法真皮内传送后生物活性剂的路线。
[0069]附图6体内靶向诊断,它显示可用于淋巴***传送的潜在靶位图表。
[0070]附图7A和7B ID体内靶向诊断,它显示标记抗体ID和SC(SubQ)传送至小鼠***时间曲线的比较。
[0071]附图7A 传送方法。ID和SC传送至***的比较。
[0072]附图7B 应用ID传送的淋巴细胞增强检测。小鼠***中抗体标记细胞的时间曲线。
[0073]附图8 体内靶向诊断-应用,它显示该方法如何应用于乳腺肿瘤的图表和小鼠***中标记T细胞的实例。
[0074]附图9显示通过34号1.0mm针头,以45μl/分钟速率,在Yorkshire猪中注射50μl EB的结果。真皮网织层内的画圈区域分离自主要注射剂贮库,它显示回流***(蓝色)的横截面。
[0075]附图10和附图11显示通过34号1.0mm针头,以45μl/分钟速率,在Yorkshire猪中注射100μl EB的结果。
[0076]附图12和13显示通过34号1.0mm针头,以100μl/分钟速率,在Yorkshire猪胁腹两个部位真皮内注射100μl EB的结果。
[0077]附图14显示通过34号1.5mm针头,以100μl/分钟速率,在Yorkshire猪胁腹真皮内注射100μl EB的结果。
[0078]附图15显示在2mm处注射的***(蓝色)实例。在画圈区域可见横截面和纵切面。
[0079]附图16显示将真皮内注射的伊凡斯蓝染剂从注射部位移动至腹股沟***的***(蓝色)实例。插图是已切除腹股沟***的特写。
[0080]附图17A-17C显示根据时间的腹股沟***中注射荧光小珠的数量。真皮内与皮下注射比较。
[0081]附图17A 50nm小珠。
[0082]附图17B 1μm小珠。
[0083]附图17C 10μm小珠。
[0084]附图18A-18B 小鼠脾中CD8阳性T细胞的百分率。图表显示根据时间的小鼠脾中CD8阳性T细胞的百分率,它用CD90-FITC抗体进行标记。在小鼠中注射CD90-FITC抗体,既采用ID注射,也采用SC注射,而且监测脾脏的细胞相关信号。
[0085]附图19 IV注射12.5mg ICG后猪腹部血管***的影像。方框内为右腹股沟***位置。仅显示血管***,而无***。注射后连续成像30分钟,不显示***。
[0086]附图20A-20C DOSE SPARING-IV和显微操作针ID注射。应用34号的显微操作针深度1mm注射ICG后猪******和腹股沟***的即时影像。
[0087]附图20A 在猪腹部(左侧)的三次注射:顶部注射200μl的80μg/ml ICG;底部2次注射75μl的80μg/ml ICG。
[0088]附图20B 附图20A顶部注射后猪******和左腹股沟***的即时影像。
[0089]附图20C 右后腿上分开注射2次80μg/ml ICC后******和右腹股沟***的影像。表明每次注射的单个******分别回流至***中。
[0090]附图21A-21D ICG染剂移动速度的举例说明。应用34号深度1mm的显微操作针ID注射ICG。在猪左侧***链上进行注射。此次注射ICG移动计算为7cm/秒。
[0091]附图22 针头装置。按照本发明设计的针头组件的分解透视图。
[0092]附图23 针头装置。附图22实施方式的部分横截图。
[0093]附图24 针头装置。附图22的实施方式,它附带注射器形成一种注射装置。
[0094]附图25 ID注射操作法。一种进行ID注射的操作法的透视图。
[0095]附图26 ID注射操作法。第二种进行ID注射的操作法的透视图。
[0096]附图27 ID注射操作法。第三种进行ID注射的操作法的透视图。
[0097]附图28 ID注射操作法。第四种进行ID注射的操作法的透视图。
[0098]附图29A和29B 心绿色成像剂的ID传送。
[0099]附图29A 右后腿和左侧***链的注射。显示左侧和右侧腹股沟***。
[00100]附图29B 右后腿和左侧***链的注射。倒置图像。显示左侧和右侧腹股沟***。
[00101]附图30 芒图氏和ID传送的比较。芒图氏注射的照片清楚地显示针头的轨迹(经真皮通向贮存的蓝线)。大部分EB注射至SC中。应用34号1mm针头传送的照片表明注射剂完全在真皮内。已可见至***的回流(画圈处)。
[00102]附图31A和31B猪腹侧和背侧注射的作为***深度函数的最大和平均持续压力的图表。最大压力是输注开始100秒期间所记录的单次最高压力。平均持续压力是从100至300秒所有压力读数的平均值。每次注射配置的最大和平均持续压力被平均起来并绘制成图。
[00103]附图31A 作为针头长度的函数而绘制的平均背侧压力。在动物腹侧区进行所有输注。
[00104]附图31B 作为针头长度的函数而绘制的平均背侧压力。在动物背侧区进行所有输注。
[00105]附图33 体内染色。图表显示小鼠回流***中体内染色的T细胞和B细胞的百分率。
5、本发明的详细描述
[00106]本发明提供的方法用于将一种或多种生物活性剂应用于患者皮肤,此生物活性剂优选是诊断剂,其中将该生物活性剂传送至患者皮肤的真皮内(ID)腔隙。本发明部分基于发明人的意外发现,即与包括皮下传送和ID芒图氏传送等的常规传送方法相比,当将这些药物传送至ID腔隙时,它们就被快速转运至局部淋巴***,因此具有此处公开的优势。尽管不想被特殊作用机理所束缚,但按照本发明方法所传送的药物在体内通过局部淋巴***转运,被分泌至体循环和更深的组织环境中。然后例如肝脏、肾脏或脾脏可将该药物降解或代谢。尽管不想被特殊作用机理所束缚,但通过这里所述的方法,是胞外基质(ECM)的生物力学控制通过药物在真皮内腔隙的精确传送,可实现到局部***和***的快速摄取。
[00107]本发明提供一种传送生物活性剂的改进方法,因为除了提供其他优势外,该方法还可使生物活性剂快速吸收至局部***中;改善了对特定组织的寻靶,即改善了所传送药物在特定组织中的沉积,此特定组织即一起完成特定功能的细胞群或细胞层;提高了***的生物利用度;提高了组织生物利用度;提高了所用药物预选量的沉积;改善了组织特定药动学(即包括改善或改变生物药效学和生物药动学);加快了生物学和药学药效学(PD)以及加快了生物和药动学(PK)。本发明方法的这些优势尤其可用于诊断剂的传送。按照本发明方法进行诊断剂的真皮内传送,可将该诊断剂沉积在真皮内和淋巴腔隙,因此在这些腔隙中快速获得具有生物学意义的浓度。所以用较少诊断剂可完成快速诊断,并具有此处所述的显著优势。
[00108]真皮内传送生物活性剂改善特定组织中的组织生物利用度,此组织包括但不限于皮肤组织、淋巴组织(例如***)、粘膜组织、生殖组织、宫颈组织、***组织和由不同类型组织组成并执行特殊功能的机体任意部位,即器官,包括但不限于肺、脾、结肠、胸腺。在某些实施方式中,该组织包括与环境相互作用的任意组织或者易受环境影响的任意组织,例如皮肤、粘膜组织。本发明涉及的其他组织包括但不限于血管******;淋巴组织(例如上皮相关淋巴组织和粘膜相关淋巴组织或MALT(MALT可再分为组织化粘膜相关淋巴组织(O-MALT)和弥散淋巴组织(D-MALT));初级淋巴组织(例如胸腺和骨髓);次级淋巴组织(例如***、脾、消化***的淋巴组织、呼吸***的淋巴组织和泌尿生殖***的淋巴组织)。本领域技术人员应当理解到次级MALT包括肠相关淋巴组织(GALT);支气管相关淋巴组织(BALT)和泌尿生殖***。MALT特别包括***;脾;与上皮表面相关的组织,诸如palentine和鼻咽扁桃体;小肠中的派伊尔氏淋巴集结;以及呼吸***和泌尿生殖***、皮肤和眼睛结膜中的各种小结。O-MALT包括扁桃体咽周淋巴环(palentine、舌的、鼻咽的和咽鼓管的)、食管小结和散布在从十二指肠至肛管的整个消化道中类似的淋巴组织。与生物活性剂传送至诸如SC腔隙和IM腔隙的较深组织腔隙相比,真皮内传送相同生物活性剂可提高特定组织中的组织生物利用度。
[00109]与生物活性剂传送至皮下(SC)腔隙或通过真皮内(ID)芒图氏法传送生物活性剂相比,按照本发明方法传送相同生物活性剂可提高组织生物利用度。与生物活性剂传送至例如SC、IM等较深组织腔隙相比,按照本发明方法传送相同生物活性剂可获得提高的组织生物利用度。当传送诊断剂至ID腔隙时,按照本发明方法传送此药物而提高组织生物利用度特别有用,因为它减少了进行每个诊断步骤所需诊断剂的用量,这些诊断剂难以获得而且昂贵。减小诊断剂用量还减小了诊断步骤相关副作用的可能性,例如毒性。
[00110]可用本领域技术人员已知的方法和参数测定按照本发明方法传送这些药物所提高的组织生物利用度,例如通过测量特定组织中蓄积的药物总量,例如应用本领域技术人员已知并公开于此的组织学方法。可替代的是,可将这些药物提高的组织生物利用度评价为药物存在于特定组织中的量、特定组织单位质量或体积中药物蓄积的量、单位时间内特定组织特定质量或体积中药物蓄积的量。
[00111]按照本发明方法传送的生物活性剂沉积在真皮内腔隙,首先以高生物利用度分布在给药部位局部的淋巴组织,然后通过淋巴传送更广泛地扩散至体循环中。在某些实施方式中,本发明方法对于深部组织中疾病、病症或感染的诊断特别有效,例如诸如肺等器官或组织中感染或者诸如阑尾或关节等器官或组织中炎症的体内检测。
[00112]应用现有技术中的常用方法(例如MRI、X线、超声、CT、PET、SPECT、光学方法(荧光、生物发光、化学发光)、光声方法、RAMAN和SERS成像)或者现有技术中体外常用方法(例如组织学检查、流式细胞术)和公开于此的方法进行即时可见检测,在注射至淋巴***后的至少5分钟内、至少10分钟内、至少15分钟内、优选至多20分钟内,显示按照本发明方法传送的生物活性剂的即时转运和吸收,见6.2节。按照本发明的方法传送的药物被运输至淋巴***,并沉积在特定组织,速率至少为10cm/秒,优选至少为5-10cm/秒。本领域技术人员应当理解到,在此速率下该药物被运输至淋巴***,并沉积在特定组织,此速率依赖于各种参数,包括但不限于注射量、注射速度、该药物的生化和物理特性、注射部位。
[00113]在某些实施方式中,按照本发明方法传送的生物活性剂,包括诊断剂,特异性识别并结合它们所沉积的特定组织中的细胞。在其他实施方式中,按照本发明方法传送的生物活性剂被传送至ID腔隙,使药物预选剂量所沉积在靶组织中的量,与该药物传送至真皮内空间外相比,至少提高了0.1%,真皮内空间外诸如为皮下腔隙(SC)、肌内腔隙(IM)。本发明期待,药物预选剂量所沉积在靶组织中的量,与通过真皮内腔隙以外途径应用该药物而达到的量相比,提高了至少100%、至少150%、至少200%、至少250%、优选至少350%或3.5倍、至多1750%,真皮内腔隙以外途径例如SC、IM,因此被传送至较深组织腔隙中。
[00114]本发明包括的方法可将生物活性剂传送至ID腔隙,使该药物预选剂量所沉积在靶组织中的量,与该药物传送至真皮内空间外相比,至少提高了此处指定的量,真皮内空间外诸如为皮下腔隙(SC)、肌内腔隙(IM),这样可早至注射后3分钟时或者早至注射后3小时时测定这种量的增长。优选该药物在特定组织中沉积的增长可持续至少21天,至少27天。
[00115]在某些实施方式中,ID传送后沉积在特定组织中的生物活性剂浓度约为5纳克药物/50微克特定组织;10皮克药物/50微克特定组织;29纳克药物/50微克特定组织;10皮克药物/50微克特定组织至约29纳克药物/50微克特定组织;10皮克药物/50微克特定组织至约150纳克药物/50微克特定组织。
[00116]在其他实施方式中,ID传送后沉积在特定组织中的生物活性剂浓度,例如诊断剂浓度,约为10pg至15μg/50微克该特定组织,或者约为1cg至30ng/50微克该特定组织。
[00117]此处描述的真皮内方法与皮下传送不同,它提高所传送的生物活性剂的生物动力学、生物动力学和组织生物利用度,此生物活性剂剂包括诊断剂和治疗剂。按照本发明方法真皮内传送的生物活性剂被淋巴***吸收,并沉积于特定组织,而不需要“按摩”注射部位,此与其他常规传送方法不同,包括皮下传送。传送至皮下腔隙的生物活性剂不会沉积在靶组织和/或转运至淋巴***,除非按摩注射部位,诱导所传送药物的转运。尽管不想受到特殊作用机理的束缚,一些传送方法,诸如静脉注射,依赖于所讨论药物从体循环扩散至靶组织。生物活性剂扩散至该组织依赖于许多变量,而且体循环中发现的生物利用度不总是最适于给定靶组织的。限制传送药物的静脉和皮下方法,尤其是靶组织位于淋巴***中时。另外,如本发明所述,真皮内传送提供了一种可选择的转运机制,其中特定药物被传送至真皮内腔隙,并且它通过淋巴***和区域毛细管流至体循环中。尽管其他文献已描述到真皮内传送至******,但是没有一个人定义用于可靠进入这些组织的特定条件和装置。尽管不想受到特殊作用机理的束缚,按照本发明方法将生物活性剂传送至真皮内腔隙可提高间隙压力,此压力转而使******开放,而获得高速持续流动,直到液体流动结束。发明人已发现这种淋巴转运的发生相当快,可使药物快速进入******和体循环。本发明方法可使药物吸收至淋巴***中,而不是毛细管吸收,因此获得此处公开的优势,而不仅限于提高寻靶的速率和活性。
[00118]按照本发明方法传送的生物活性剂沉积在真皮内腔隙,首先以高生物利用度分布在给药部位局部的淋巴组织中,然后通过更广泛的淋巴传送扩散至体循环中。在某些实施方式中,对于深部组织中疾病、病症或感染的诊断,本发明的方法特别有效。
[00119]在某些实施方式中,本发明包括将一种生物活性剂靶向真皮内传送至特定生物实体,此生物实体包括但不限于细胞、一群或一堆细胞、细菌(例如大肠杆菌、肺炎杆菌、金黄色酿脓葡萄球菌、粪肠球菌、白色念珠菌、普通变形杆菌、浅绿葡萄球菌和绿脓杆菌)、病原体(例如B-嗜淋巴***状病毒(LPV)、Bordatella pertussis、博纳病病毒(BDV)、牛冠状病毒、脉络丛脑膜炎病毒、登革热病毒、一种病毒、大肠杆菌、埃博拉病毒、埃可病毒、埃可病毒-11(EV)、内毒素(LPS)、肠道细菌、肠孤儿病毒、肠道病毒、猫白血病病毒、***病毒、长臂猿白血病病毒(GALV)、革兰氏阴性细菌、幽门螺旋杆菌、乙肝病毒(HBV)、单纯疱疹病毒、HIV-1、人巨细胞病毒、人冠状病毒、甲型、乙型及丙型流感病毒、军团菌、墨西哥利什曼原虫、单核细胞增多症李司忒氏菌、麻疹病毒、脑膜炎双球菌、Morbilliviruses、鼠肝炎病毒、鼠白血病病毒、鼠γ疱疹病毒、鼠反转录病毒、鼠冠状病毒、鼠肝炎病毒、鸟型结核分枝杆菌-M、淋病双球菌、新城鸡瘟病毒、细小病毒B19、恶性疟原虫、痘病毒、假单胞菌、轮状病毒、Samonellatyphiurium、志贺氏菌属、T细胞嗜淋巴病毒1、牛痘病毒)、血小板、寄生虫药物。按照本发明方法一旦将药物传送至生物实体,则可应用本领域技术人员已知的和公开于此的任意检测、成像方法,对该实体进行检测和成像。本发明的方法包括传送生物活性剂的方法,该活性剂与生物实体特异性结合。
[00120]如本发明所述,与其他传送方法相比,对真皮内腔隙直接寻靶可使包括诊断剂的生物活性剂作用起效更快,而且生物利用度更高,包括组织生物利用度,其他传送方法包括皮下和ID芒图氏传送。发明人已经发现,通过可控ID给药,按照本发明方法传送的药物可被快速吸收,并全身分布,这种可控ID给药可选择性进入真皮微小毛细血管和微小毛细***,这样这些药物将会发挥其优势作用,比SC给药和ID芒图氏传送更快。另外,发明人已发现药物传送至ID腔隙可利用真皮胞外基质和***中真皮微循环和流体静压与渗透压之间的相互作用。是在皮肤中真皮间质,血液和淋巴***相互作用。当血液流动至最小的毛细血管,血浆和蛋白则被迫使出来,进入间质腔隙。渗透压和生物机械力使此流体通过间质,并灌注至局部初级***中。初级***对于大分子是可渗透的,因此可保持组织腔隙内的渗透压和流体静压。淋巴的典型流速是血液流速的1/10-1/100倍。淋巴***由5种主要管道组成。它们包括真皮中发现的毛细***和收集管、***、淋巴干和淋巴导管。当间质流体流至毛细***中时,则形成淋巴。然后它回流至收集管中。收集管通过至少一个,但通常为几个***丛。离开***,则回流至较大的淋巴干,然后再导入淋巴导管。淋巴导管又将淋巴返回至血流中,完成此循环(Swartz,M.A.2001,Adv.DrugDel.Rev.50:3-20)。这种淋巴***流动是单向的,毛细***是初级流体收集管道。在间质中,毛细***主要任务是保持组织中的流体静压和渗透压。这是通过毛细固着丝和胞外基质(ECM)的相互作用实现的。当流体充满间质时,组织压力升高,并施压于ECM,充分伸展该组织,而且适当固定***的固着丝被ECM牵拉。这种运动将毛细***拉开,使流体从该组织中快速流出,以便重建适宜的流体静压和渗透压。因此,ECM的机械完整性在淋巴功能中起着重要的作用。广泛或慢性的ECM降解最终可使***对于间质的变化失去反应,而导致功能丧失(Swartzet al.,1999,J Biomech.32(12):1297-307)。尽管不想受到特殊作用机理的束缚,但是是通过间质中药物的精确传送,ECM的生物机械作用才能实现本方法所述的快速吸收至局部***和***。
[00121]组织压力对流体的吸收起很大作用的同时,其他因素也起作用。这些包括所用药剂的浓度、大小、电荷和分子量,以及这些特性与真皮内周围组织环境之间的相互作用(Charman et al.,1992Lymphatic Transport of Drugs,Boca Raton:CRC Press Inc.)。这些因素的作用有赖于进入间质的精确性和再现性。即使已知真皮,尤其是真皮***层具有高度多血管性,然而至今仍不清楚,可以利用这种高度的多血管性,以及ECM和******之间的相互作用,而使所用药物的吸收曲线优于真皮给药的可替代途径。
[00122]真皮内传送的生物活性剂,尤其是诊断剂,与常规传送方法相比,具有更快的起效和清除率,此常规传送方法包括SC传送和ID芒图氏传送。当将一种诊断剂传送至患者皮肤的ID腔隙时,这些特性可具有几种优势。首先,它减少了诊断步骤带来的潜在副作用和不适。其次,它可在单次诊断中进行快速而重复的连续步骤试验。第三,它缩短了昂贵医疗或影像设施中所需的时间。第四,它促进了生理学的实时研究。第五,它减小了未结合和未清除诊断试剂所产生的潜在的背景信号。第六,与IV给药、SC注射或外科活组织检查相比,它使患者的疼痛减小。
[00123]按照本发明方法传送生物活性剂,包括诊断剂,优先于传统传送方法,包括SC传送和ID芒图氏传送,因为当用组织病理学方法和本领域技术人员已知的其他方法,诸如流式细胞术(FACS)或成像法,进行测定时,可见该药物预选剂量沉积在淋巴组织中的量得到增高。
[00124]在此应用时,传送至真皮内腔隙或者真皮内传送的意思是指,将生物活性剂传送至真皮中,以便该药物易于到达富含血管的真皮***层,并且该药物被快速吸收至毛细血管和/或***中,而变成全身生物可利用的。这种情况可产生于该药物在真皮上层区域的定位,即真皮***层或者血管相对较少的真皮网织层的上层部分,这样可使该药物易于扩散至真皮***层中。将生物活性剂可控传送至真皮网织层中位于真皮***层下面,但足以在真皮和皮下组织交界之上的真皮腔隙中,这样可使该药物有效(向外)移动至(未受干扰的)微小毛细血管和毛细***床(在真皮***层中),在此处通过这些微小毛细管道,该药物可被吸收至体循环中,其运输不会被任何其他皮肤组织腔隙隔绝。在某些实施方式中,生物活性剂主要定位的深度至少约为0.3mm,更优选至少约为0.4mm,最优选至少约为0.5mm,而且至多约为2.5mm,更优选至多约为2.0mm,最优选至多约为1.7mm,这样将获得该药物的快速吸收。尽管不想受到特殊作用机理的束缚,该生物活性剂的主要定位更深和/或进入真皮网织层的较低部位,这样可使药物被***吸收的效率较低,因为该药物在血管较少的真皮网织层或皮下腔隙中吸收将会变慢。
[00125]按照本发明方法传送的生物活性剂,包括诊断剂,将获得更高的最大浓度。发明人已发现应用于ID腔隙的药物可被更快地吸收,而且大丸药给药可产生更高的初始浓度。因此,可减少剂量,获得经济效益,同时获得生理学效益,因为较少量的药物或诊断剂必须被机体清除。
[00126]按照本发明,例如,应用基于显微操作针的注射和输注***或者本领域技术人员已知的其他方法,可精确地定位于真皮内腔隙,通过这样而完成直接真皮内(ID)给药。特殊装置包括公布于2002年1月10日的WO01/02178和WO02/02179,公布于2002年12月17日的美国专利No.6,494,865和公布于2003年5月27日的美国专利No.6,569,143中公开的装置,所有这些在此整个引用为参考文献,以及附图22-24中例举的那些装置。2000年6月29日提交的美国申请No.09/606,909中描述的基于显微套管针和显微操作针的方法学和装置,它也在此整个引用为参考文献。应用1999年10月14日提交的美国申请No.417,671中所述装置和方法,标准钢套管针也可用于真皮内传送,它在此整个引用为参考文献。这些方法和装置包括通过穿透深度有限(通常为10μm至2mm)的小号(30G或更小)“显微套管针”传送药物,其穿透深度由该套管针的总长度规定,或者由超过限制深度的插孔特征的套管针总长度规定。
[00127]接受本发明真皮内传送的受试者为哺乳动物,优选是人。通过一种针头或套管针,可将按照本发明方法传送的生物活性剂(含或不含示踪剂)传送至真皮内腔隙,这种针头或套管针的长度通常约为300μm至5mm。这种针头或套管针的长度优选约为300μm至1mm,***受试者皮肤内的出口深度为1mm至3mm。优选使用30-36号的小号针头或套管针,更优选31-34号。针头或套管针出口***的深度优选为0.3mm(300μm)-1.5mm。
[00128]通过本发明方法,不仅应用微型装置注射***,而且应用其他传送***,均可获得提高的药动学参数,这些其他传送***诸如为将流体或粉末注射至ID腔隙的无针或无针冲击注射、通过微型装置提高的离子移动、以及流体、固体或其他剂型在皮肤中的直接沉积。在特殊实施方式中,通过将针头或套管针***患者皮肤的真皮内腔隙而实现该生物活性剂的给药。
[00129]按照本发明诊断剂的真皮内传送在包括慢性和急性疾病的诊断中很有优势,这些疾病包括但不限于淋巴瘤;黑素瘤;白血病;乳腺癌;结肠癌;转移癌;淋巴***疾病;累及***的各种疾病,例如腋窝、politeal、舌的***;病毒性疾病,例如HIV;免疫性疾病,诸如排斥反应、代谢紊乱;以及感染性疾病。尽管不想受到特殊作用机理的束缚,按照本发明方法传送的诊断剂被真皮内腔隙吸收,并被传送至淋巴***,在淋巴***中它的识别和结合显示细胞或疾病状态的存在。本发明可用于诊断方法,包括但不限于外科方法、活组织检查、非侵袭性筛查和影像导向活组织检查。
[00130]本发明为癌症检测和/或诊断提供了改进的方法,该方法改善了灵敏度、药物的沉积量、组织生物利用度,使所传送诊断剂的起效和清除更快。另外本发明的方法还特别改进了检测肿瘤的常见癌症检测方法,例如人类患者的乳腺癌,因为该诊断剂预选量的75%以上被沉积在真皮内腔隙,而通过该药物的常规传送方法则将相等预选量的药物传送至真皮内腔隙,这些常规方法例如ID芒图氏方法。
[00131]本发明为现有信号***活组织检查方法和描绘外科方法提供改进的方法,该方法提高了诊断剂在局部淋巴***中的吸收和生物利用度。本发明提供的方法可应用至少一种诊断剂检测肿瘤信号***,例如乳腺肿瘤信号***,或者回流人类患者肿瘤的***,该方法包括将该药物传送至人类患者皮肤的真皮内腔隙,使该药物转运至局部淋巴***。在其他实施方式中,本发明提供的方法可应用至少一种诊断剂检测肿瘤信号***或者回流人类患者肿瘤的***,该方法包括将该药物传送至人类患者皮肤的真皮内腔隙,使该药物的组织生物利用度高于通过ID芒图氏方法传送相同药物时的组织生物利用度。在另外其他的特殊实施方式中,本发明提供的方法可应用至少一种诊断剂检测肿瘤信号***,例如乳腺肿瘤信号***,或者回流人类患者肿瘤的***,该方法包括将该药物传送至人类患者皮肤的真皮内腔隙,使该药物的起效和清除快于通过ID芒图氏方法传送相同药物时的起效和清除。
[00132]本发明的方法提供了改进的预测方法,它应用特异性药物(而非非特异性药物)评价疾病治疗方案的治疗效果,例如通过监测细胞基因谱而评价根据时间的基因调解和表达。通常细胞基因谱的体外分析已用于评价根据时间的基因调解和表达,应用它作为评价治疗效果的工具。这种体外方法有很多缺陷,包括但不限于不精确,从机体摘除细胞可导致RNA和DNA破坏,因此改变标本的基因谱;应用来自体内方法,基因损伤的形态学部位的信息潜在地丢失;以及离开体内细胞外环境可影响细胞分化和调解。当病人存在疾病的标记时,采用本发明的方法,真皮内应用可连接和/或结合疾病特异性标记的特异性诊断剂,可对该疾病进行评价。因此,本发明的方法影响医师对治疗的选择。
[00133]运用例如基因组学和蛋白组学技术,本发明的方法特别可用于疾病或病症中受损细胞代谢的确定。在特殊实施方式中,本发明方法所提供的改进方法可用于癌症的预测,特别是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。可将用于鉴别DLBCL有无活动性增生途径的特异药物传送至ID腔隙,使其运输至整个淋巴***。一种药物的结合将会显示预后良好或不佳,因此提高治疗效果。在其他特殊实施方式中,本发明方法提供的改进方法可用于与NFkb途径中信令受损相关疾病的诊断,这是通过将药物传送至ID腔隙,使该药物运输至特殊细胞,该药物与此细胞结合而实现的。可在体内肉眼观察到这种结合的信号。该药物的结合表明此途径中损伤的存在,并且可随着治疗进展,用于评价治疗效果和潜在耐药性的发生。
[00134]本发明的方法特别可用于诊断和治疗整合的方法,优选包括需要补充和/或同时诊断和监测。准确诊断疾病例如在肿瘤学中在很大程度上是一种未能得到满足的需要,几乎没有诊断剂可显示哪种治疗选择将会成功,并具有一定的可靠性。本发明的方法可传送药物,该药物可特异性地识别特定组织中的细胞,例如癌细胞。这些药物包括但不限于抗体,优选此处公开的治疗性单克隆抗体。在特殊实施方式中,本发明包括将赫赛汀传送至患者皮肤的ID腔隙中,以改善诊断和治疗,赫赛汀是Her2/neu阳性乳腺癌的一种特异性单克隆抗体。本发明方法在Her2/neu阳性癌细胞诊断的传统方法上改进了癌症患者的诊断,这种传统方法可鉴别出将会从这种治疗中最可能获益的人群,同时排除不可能获益的那些。目前,这种鉴别出将会从特定治疗中最可能获益人群的体外诊断实验结果含糊或不清楚。通过应用本发明方法,可增强对Her2/neu阳性细胞的鉴别。因此,体内真皮内应用赫赛汀或可识别编码Her2/neu的mRNA的核酸,对于适于整合诊断和监测的那些个体来说,这样就提供了识别能力。应用本发明方法,可使细胞保持完整,从而为阳性鉴别提供了更大的机会。
[00135]应用本发明整合的诊断方法,本发明方法为疾病、病症或感染的个性化治疗提供了改进的方法。本发明的方法适于现有个性化和非个性化治疗方案。本发明方法可对患者的治疗方案进行连续监测。当未来个性化治疗需要整合诊断时,现有非个性化治疗方案也可从本发明的个性化诊断中获益。例如,诊断为弥散性大B细胞淋巴瘤的患者通常可接受CHOP治疗。对这种联合药物治疗方案疗效的监测受限于临床变化和间断的非特异性影像和活组织检查。连续监测治疗效果的能力将会早期发现耐药性和转移。在治疗性鸡尾酒应用特异性真皮内诊断剂或者与现有治疗结合,将会达到此目的。
[00136]本发明的方法可将含有一种或多种诊断剂的制剂与一种或多种治疗药物联合应用。本发明的方法可将诊断剂和治疗药物靶向于目标细胞。在特殊实施方式中,本发明包括将与治疗药物联合的诊断剂传送至患者皮肤的ID腔隙,这样使该诊断剂的特异性作用可引发治疗药物的作用。按照本发明方法,诊断剂靶向传送与治疗药物靶向传送结合可提高患者效果。此实施方式描述了真皮内治疗传送与诊断传送联合的优势。将诊断剂和治疗药物联合传送至ID腔隙,为改善患者疾病的治疗提供了一种有力的工具。
[00137]在其他实施方式中,本发明使例如诊断剂的特异性药物可用于体内结合和/或检测一种细胞事件或疾病状态。因此,本发明提供了筛选方法,以确定需要结合目标细胞的特异性药物。在某些实施方式中,本发明的方法可用于体内组合库的筛选,不论是生物学还是化学,以确定库中适于进行实验的药物(例如诊断性部位或部分或者治疗性靶位或部分)。应用本发明方法在体内筛选药物的能力可鉴别罕见细胞和疾病状态。
[00138]在特殊实施方式中,本发明应用一种目标动物模型,可将药物库注射在其真皮内,并根据时间监测它们的作用。可监测的作用包括,例如症状的缓解或者与目标组织和/或细胞的结合。在优选特殊实施方式中,一种动物肿瘤模型,例如淋巴瘤小鼠模型,可用于筛选生物活性剂,可真皮内传送此生物活性剂,将其运输至***。这样可在体内检测癌细胞状态,并可能确定转移的活性触发器以及治疗和诊断剂的潜在靶位。然后这些结果将会用于开发人和其他物种新的诊断。
5.1本发明的组合物
[00139]本发明涉及的组合物包括一种或多种溶液形式的生物活性剂、它们的特殊形式以及它们的混合物。可从各种物种中获得本发明方法所用的组合物,或者可按照本领域技术人员已知的各种重组DNA技术产生。含有一种或多种生物活性剂的组合物可来自不同的动物物种,包括但不限于猪、牛、羊、马等。通过标准重组DNA技术可改变这些药物的化学状态,从而产生不同化学式并具有不同相关状态的药物。
[00140]本发明方法中所用的生物活性剂包括各种分子,它既可特异性也可非特异性结合体内的分子,而且可在体内产生生物学作用。这些生物活性剂既可以是天然产生的分子,也可以是应用本领域技术人员已知的常用方法应用合成过程或重组过程产生的分子。本发明生物活性剂可特异性或非特异性识别特定组织中特定细胞上的识别部位。同已知的生物学实体一样,这些特异性药物经常具有结构性或功能性特性。这些生物活性剂既可是天然产生的识别分子,也可是应用本领域技术人员已知的常用方法应用合成过程或重组过程产生的分子。
[00141]在其他实施方式中,该生物活性剂性质上是一种仿生物质,含有天然产生的结构motif,同时还加入了其他或修饰功能基团,以便于运输、寻靶、增强结合、稳定性或检测。
[00142]可用于本发明方法中的生物活性剂实例包括但不限于免疫球蛋白(例如多特异性Ig、单链Ig、Ig片段);蛋白;肽(例如肽受体、PNA、选择蛋白、结合蛋白(麦芽糖结合蛋白、葡萄糖结合蛋白))、核苷酸、核酸(例如PNA、RNA、修饰RNA/DNA、适体)、受体(例如乙酰胆碱受体)、酶(例如葡萄糖氧化酶、HIV蛋白酶和逆转录酶)、碳水化合物(例如NCAM、唾液酸)、细胞(例如胰岛素及葡萄糖应答细胞)、噬菌体(例如丝状噬菌体)、病毒(例如HIV)、chemospecific agents(例如cyptands、冠醚、boronates)。
[00143]可用于本发明特别优选的生物活性剂是治疗性抗体,它们可进行诊断性使用,它们包括但不限于HERCEPTIN(Trastuzumab)(Genentech,CA),它是一种人化抗-HER2单克隆抗体,用于治疗转移性乳腺癌患者;REOPRO(abciximab)(Centocor),它是一种血小板上的抗-糖蛋白IIb/IIIa受体,用于预防血液凝块形成;ZENAPAX(daclizumab)(Roche Pharmaceuticals,瑞士),它是一种免疫抑制的人化抗-CD25单克隆抗体,用于预防肾脏同种移植物的急性排斥反应;PANOREXTM,它是一种鼠抗-17-IA细胞表面抗原IgG2a抗体(GlaxoWellcome/Centocor);BEC2,它是一种鼠抗-基因型(GD3表位)IgG抗体(ImClone System);IMC-C225,它是一种嵌合的抗-EGFR IgG抗体(ImClone System);VITAXINTM,它是一种人化抗-αVβ3粘合素抗体(Applied Molecular Evolution/MedImmune);Campath 1H/LDP-03,它是一种人化的抗CD52 IgG1抗体(Leukosite);Smart M195,它是一种人化的抗-CD33 IgG抗体(Protein Design Lab/Kanebo);RITUXANTM,它是一种嵌合的抗-CD20 IgG1抗体(IDECPharm/Genentech、Roche/Zettyaku);LYMPHOCIDETM,它是一种人化的抗-CD22 IgG抗体(Immunomedics);ICM3,它是一种人化的抗-ICAM3抗体(ICOS Pharm);IDEC-114,它是一种primatied抗-CD80抗体(IDECPharm/Mitsubishi);ZEVALINTM,它是一种放射性标记的鼠抗-CD20抗体(IDEC/Schering AG);IDEC-131,它是一种人化的抗-CD40L抗体(IDEC/Eisai);IDEC-151,它是一种primatized抗-CD4抗体(IDEC);IDEC-152,它是一种primatized抗-CD23抗体(IDEC/Seikagaku);SMART抗-CD3,它是一种人化的抗-CD3 IgG(Protein Design Lab);5G1.1,它是一种人化的抗-补体因子5(C5)抗体(Alexion Pharm);D2E7,它是一种人化的抗-TNF-α抗体(CAT/BASF);CDP870,它是一种人化的抗-TNF-αFab片段(Celltech);IDEC-151,它是一种primatized抗-CD4 IgG1抗体(IDEC Pharm/SmuthKline Beecham);MDX-CD4,它是一种人抗-CD4IgG抗体(Medarex/Eisai/Genmab);CDP571,它是一种人化的抗-TNF-αIgG4抗体(Celltech);LDP-02,它是一种人化的抗-α4β7抗体(LeukoSite/Genent ech);OrthoCloneOKT4A,它是一种人化的抗-CD4 IgG抗体(Ortho Biotech);ANTOVATM,它是一种人化的抗-CD40L IgG抗体(Biogen);ANTEGRENTM,它是一种人化的抗-VLA-4 IgG抗体(Elan);和CAT-152,它是一种人化的抗-TGF-β2抗体(Cambridge Ab Tech)。
[001]按照本发明可应用的其他抗体实例见面下表1。
表1:本发明可应用的治疗癌症的单克隆抗体
公司 | 产品 | 疾病 | 靶位 |
AbgenixAltaRex | ABX-EGFOvaRexBravaRex | 癌症卵巢癌转移癌 | EGF受体肿瘤抗原CA125肿瘤抗原MUC1 |
Antisoma | Theragyn(pemtumomabytrrium-90)Therex | 卵巢癌乳腺癌 | PEM抗原PEM抗原 |
BoehringerIngelheim | blvatuzumab | 头和颈癌症 | CD44 |
Centocor/J&J | PanorexReoProReoProReoPro | 结肠直肠癌PTCA急性MI局部缺血性中风 | 17-1Agp IIIb/IIIagp IIIb/IIIagp IIIb/IIIa |
Corixa | Bexocar | NHL | CD20 |
CRCTechnology | MAb,基因型105AD7 | 结肠直肠癌疫苗 | gp72 |
Crucell | Anti-EpCAM | 癌症 | Ep-CAM |
Cytoclonal | MAb,肺癌 | 非小细胞肺癌 | NA |
Genentech | HerceptinHerceptinRituxanRituxan | 转移乳腺癌早期乳腺癌复发性/难治性低级或滤泡性NHL中级和高级NHL | HER-2HER-2CD20CD20 |
MAb-VEGFMAb-VEGFAMD Fab | NSCLC,转移性结肠直肠癌,转移性年龄相关性黄斑变性 | VEGFVEGFCD18 | |
E-26(2nd gen.IgE) | 变应性哮喘和鼻炎 | IgE | |
IDEC | Zevalin(Rituxan+钇-90) | 低级滤泡性,复发性或难治性,CD20-阳性,B细胞NHL和Rituximab-难治性NHL | CD20 |
ImClone | Cetuximab+innotecanCetuximab+顺铂&放射疗法Cetuximab+双氟脱氧胞苷Cetuximab+顺铂+5FU或TaxolCetuximab+卡铂+紫杉醇Cetuximab+顺铂Cetuximab+放射疗法BEC2+BacillusCalette GuerinBEC2+BacillusCalette GuerinIMC-1C11 | 难治性结肠直肠癌新近诊断的或复发性头和颈部癌症新近诊断的转移性胰腺癌复发性或转移性头和颈部癌症新近诊断的非小细胞肺癌头和颈部癌症(广泛不能治愈的局域性疾病和远端转移癌)局部晚期头和颈部癌症小细胞肺癌黑素瘤结肠直肠癌,伴随肝转移 | EGF受体EGF受体EGF受体EGF受体EGF受体EGF受体EGF受体mimics神经节苷脂GD3mimics神经节苷脂GD3VEGF-受体 |
ImmonoGen | nuC242-DM1 | 结肠直肠、胃和胰腺癌 | nuC242 |
ImmunoMedics | LymphoCideLymphoCide Y-90CEA-CideCEA-Cide Y-90CEA-Scan(Tc-99m-标记的阿西莫单抗 | 非何杰金淋巴瘤非何杰金淋巴瘤转移固体肿瘤转移固体肿瘤结肠直肠癌(放射成像) | CD22CD22CEACEACEA |
CEA-Scan(Tc-99m-标记的阿西莫单抗)CEA-Scan(Tc-99m-标记的阿西莫单抗)CEA-Scan(Tc-99m-标记的阿西莫单抗)LeukoScan(Tc-99m-标记的硫索单抗)LymphoScan(Tc-99m-标记)AFP-Scan(Tc-99m-标记) | 乳腺癌(放射成像)肺癌(放射成像)术中肿瘤(放射成像)软组织感染(放射成像)淋巴瘤(放射成像)肝7宝石细胞癌(放射成像) | CEACEACEACEACD22AFP | |
Intracel | HumaRAD-HN(+钇-90)Huma SPECT | 头和颈部癌症结肠直肠成像 | NANA |
Medarex | MDX-101(CTLA-4)MDX-210(her-2过表达)MDX-210/MAK | ***和其他癌症***癌癌症 | CTLA-4HER-2HER-2 |
MedImmune | Vitaxin | 癌症 | αvβ3 |
Merck KGaA | MAb 425IS-IL-2 | 各种癌症各种癌症 | EGF受体Ep-CAM |
Millennium | Campath(阿来组单抗) | 慢性淋巴细胞白血病 | CD52 |
NeoRx | CD20-链霉亲和素(+生物素-钇90)Avidic in(白蛋白+NRLU13) | 非何杰金淋巴瘤转移癌 | CD20NA |
Peregrine | Oncolym(+碘-131)Cotara(+碘-131) | 非何杰金淋巴瘤不可切除恶性神经胶质瘤 | HLA-DR 10βDNA相关蛋白 |
PharmaciaCorporation | C215(+葡萄球菌肠毒素)MAb,肺/肾癌症他那可单抗(C242+葡萄球菌肠毒素) | 胰腺癌肺和肾癌结肠和胰腺癌 | NANANA |
ProteinDesign Labs | NuvionSMART M195SMART 1D10 | T细胞恶性肿瘤AMLNHL | CD3CD33HLA-DR抗原 |
Titan | CEAVac | 结肠直肠癌,晚期 | CEA |
TriGemTriAb | 转移黑素瘤和小细胞肺癌转移乳腺癌 | GD2-神经节苷脂MUC-1 | |
Trilex | CEAVacTriGemTriAb | 结肠直肠癌,晚期转移黑素瘤和小细胞肺癌转移性乳腺癌 | CEAGD2-神经节苷脂MUC-1 |
ViventiaBiotech | NovoMAb-G2放射性标记Monopharm CGlioMAb-H(+gelonintoxin) | 非何杰金淋巴瘤结肠直肠和胰腺癌gliorna,黑素瘤和成神经细胞瘤 | NASK-1抗原NA |
Xoma | RituxanRituxanING-1 | 复发性/难治性低级或滤泡NHL中级和高级NHLAdenomcarcinoma | CD20CD20Ep-CAM |
[00144]在一种特殊实施方式中,本发明涉及的组合物包括生物活性剂,该生物活性剂包括一种或多种诊断剂。在另一种特殊实施方式中,本发明涉及的组合物包括生物活性剂,该生物活性剂包括至少一种诊断剂和至少一种治疗剂。在一种实施方式中,该生物活性剂包括一种标记,该标记可识别特定疾病或病症(例如癌症)的细胞类型,连同一种治疗剂,例如可杀死患病细胞的药物。例如,可将识别不良细胞类型的标记与一种毒素结合,该毒素可使靶细胞失活或者杀死靶细胞。
[00145]可用于本发明组合物中的治疗剂包括但不限于化疗药物、放疗药物、激素治疗药物、免疫治疗药物、免疫调制药物、抗炎药物、抗生素、抗病毒药物和细胞毒药物。
[00146]抗炎药物的非限制性实例包括非甾类抗炎药物(NSAID)、甾类抗炎药物、β激动剂、抗胆碱能药物和甲基黄嘌呤。NSAID的实例包括但不限于阿司匹林、布洛芬、塞来考昔(CELEBREXTM)、双氯芬酸(VOLTARENTM)、依托度酸(LODINETM)、非诺洛芬(NALFONTM)、消炎痛(INDOCINTM)、酮咯酸(TORADOLTM)、噁丙嗪(DAYPROTM)、萘丁美酮(RELAFENTM)、舒林酸(CLINORILTM)、托美丁(TOLECTINTM)、罗非考昔(VIOXXTM)、萘普生(ALEVETM、NAPROSYNTM)、酮洛芬(ACTRONTM)和萘丁美酮(RELAFENTM)。这些NSAID通过抑制环氧合酶(例如COX-1和/或COX-2)而起作用。甾类抗炎药物的实例包括但不限于糖皮质激素、***(DECADRONTM)、可的松、氢化可的松、强的松(DELTASONETM)、强的松龙、氟羟强的松龙、水杨酰偶氮磺胺吡啶和eicosanoid,诸如***素、血栓烷和白三烯。
[00147]免疫调制药物的实例包括但不限于氨甲喋呤、ENBREL、REMICADETM、来氟米特、环磷酰胺、环孢菌素A和大环内酯类抗生素(例如FK506(他克莫司))、甲基强的松龙(MP)、皮质类固醇、类固醇、霉酚酸吗啉乙酯、雷帕霉素(sirolimus)、咪唑立宾、脱氧精胍素、malononitriloaminde(例如leflunamide)、T细胞受体调制剂和细胞因子受体调制剂、皮质类固醇、细胞因子激动剂、细胞因子拮抗剂和细胞因子抑制剂。
[00148]抗生素的实例包括但不限于大环内酯类(例如妥布霉素(Tobi))、头孢菌素(例如头孢氨苄(Keflex)、头孢拉定(Velosef)、头孢呋辛(Ceftin)、头孢罗齐(Cefzil)、头孢克洛(Ceclor)、头孢克肟(Suprax)或头孢羟氨苄(Duricef))、克红霉素(例如克红霉素(Biaxin))、红霉素(例如红霉素(Emycin))、青霉素(例如青霉素V(V-Cillin K或Pen Vee K))或喹诺酮类(例如氧氟沙星(Floxin)、环丙氟哌酸(Cipro)或氟哌酸(Noroxin))、氨基糖甙类抗生素(例如安普霉素、阿贝卡星、班贝霉素、布替罗星、地贝卡星、新霉素、十一烯酸盐、奈替米星、巴龙霉素、核糖霉素、西索米星、和大观霉素)、酰胺醇抗生素(例如叠氮氯霉素、氯霉素、氟砜尼可、和甲砜霉素)、安沙霉素抗生素(例如利福安和利福平)、碳头孢烯(例如氯拉卡比)、碳杂青霉烯(例如比阿培南和亚胺培南)、头孢菌素(例如头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢羟唑、头孢曲秦、头孢匹胺、和头孢匹罗)、头霉素(例如头孢拉宗、头孢美唑、和头孢米诺)、单菌霉素(例如安曲南、卡芦莫南、和泰格莫南)、氧碳头孢烯(例如氟氧头孢、和拉氧头孢)、青霉素(例如美西林、匹美西林、阿莫西林、氨苄西林甲戊酯、苄基青霉酸、苄青霉素钠、依匹西林、芬贝西林、氟氯青霉素、醋甲西林、氢碘喷沙西林、苯乙苄胺青霉素O、青霉素O、青霉素V、苄星青霉素、哈胺青霉素V、青四环素、和青霉素钾)、林肯酰胺(例如克林霉素和林可霉素)、安福霉素、亚枯草霉素、卷曲霉素、粘霉素、恩迪拉霉素、恩威霉素、四环素(例如阿哌环素、金霉素、氯莫环素和去甲基金霉素)、2,4-二氨基嘧啶(例如溴莫普林)、硝基呋喃(例如呋喃他酮和呋喃氯铵)、喹诺酮及其类似物(例如西诺沙星、克林沙星、氟甲喹和格帕沙星)、磺胺类(例如磺胺乙酰甲氧吡嗪、苄磺胺、诺丙磺胺、邻苯二甲酰磺乙酰胺、磺胺柯定和磺胺西汀)、砜(例如麝酚砜、葡萄糖砜钠和苯丙砜)、环丝氨酸、莫匹罗星、氯霉素、红霉素、青霉素、链霉素、万古霉素、甲氧苄啶磺胺甲噁唑和薯球蛋白。
[00149]抗病毒药物的实例包括但不限于蛋白酶抑制剂、核苷逆转录酶抑制剂、非核苷逆转录酶抑制剂和核苷类似物、齐多夫定、阿昔洛韦、gangcyclovir、阿糖腺苷、疱疹净、三氟胸苷和利巴韦林,以及膦甲酸、金刚烷胺、金刚乙胺、沙喹那韦、茚地那韦、氨普萘韦、洛匹那韦、利托那韦、α-干扰素;阿德福韦、克来夫定、恩替卡韦和普来可那立。
[00150]可用于本发明的其它治疗剂包括并不局限于α1-胰蛋白酶抑制药、血管生成抑制、Antisense、布托啡诺、降钙素及类似物、西利酶、COX-II抑制剂、皮肤病药、双氢麦角胺、多巴胺受体激动药和拮抗剂、脑啡肽和其它阿片样肽、表皮生长因子、红细胞生成素及类似物、促卵胞生成激素、G-CSF、高血糖素、GM-CSF、格拉司琼、生长激素及类似物(包括生长激素释放激素)、生长激素拮抗剂、水蛭素和水蛭素类似物例如二价水蛭素、IgE抑制剂、胰岛素、促胰岛素及类似物、***、干扰素、白介素、促黄体生成激素、促黄体激素释放激素及类似物、肝素、低分子肝素以及其它天然的、修饰的和合成的氨基葡聚糖、M-CSF、甲氧氯普胺、咪达***、单克隆抗体、Pegylated抗体、Pegylated蛋白或用亲水的或疏水的聚合物或附加的功能基团修饰的任意蛋白、融合蛋白、单链抗体片断或与附着蛋白、大分子、或附加的功能基团结合的等同物、麻醉性镇痛药、尼古丁、非甾类抗炎药、低聚糖、昂丹司琼、甲状旁腺激素及类似物、甲状旁腺激素拮抗剂、***素拮抗剂、***素、重组可溶性受体、东莨菪碱、5-羟色胺促进剂和拮抗剂、昔多芬、特布他林、血栓溶解剂、组织纤维蛋白溶酶原激活剂、TNF、和TNF拮抗剂、疫苗、具有或不具有载体/佐剂,包括预防性和治疗性抗原(包括并不局限于亚单位蛋白、肽和多糖、多糖轭合物、类毒素、基于遗传的疫苗、减活的、重配株、灭活的、全细胞、病毒的和细菌的载体)联合,成瘾,关节炎,霍乱、***成瘾、白喉、破伤风、HIB、莱姆(氏)病、脑膜炎双球菌、麻疹、腮腺炎、风疹、水痘、黄热病、呼吸道合胞病毒、螨生日本脑炎、肺炎球菌、链球菌、伤寒、流行性感冒、肝炎、包括甲型、乙型、丙型和戊型肝炎,中耳炎、狂犬病、狂犬病、HIV、副流感、轮状病毒、EB病毒、CMV、衣原体、非典型嗜血杆菌、粘膜炎莫拉菌、人***状瘤病毒、结核包括BCG、淋病、哮喘、动脉粥样硬化、疟疾、大肠杆菌、阿耳茨海默(氏)病、幽门螺旋杆菌、沙门氏菌、糖尿病、癌症、单纯性疱疹、人绒毛状瘤以及包括所有主要治疗的类似的其它物质,例如用于普通感冒,抗成瘾,抗过敏,抗呕吐,抗肥胖,抗骨质疏松症的药物,抗感染药,镇痛药、麻醉剂、减食欲剂、抗关节炎药、止喘药,抗惊厥剂,抗抑郁药、抗糖尿病药,抗组胺剂,抗炎剂、抗偏头痛制剂、抗晕动制剂、止恶心药、抗肿瘤药、抗帕金森(氏)综合征药物、止痒剂、抗精神病药物,解热药、抗胆碱能药,苯并二氮卓类拮抗药、血管扩张剂、包括全身,冠状,周围和脑,骨刺激剂,中枢神经***兴奋药,激素、***,免疫抑制剂、肌松药,抗副交感神经药、拟副交感神经药、***素、***素、肽、多肽和其它大分子,精神***、镇静药以及性功能减退和镇定剂。
[00151]一种生物活性剂,例如一种诊断剂可以与一种治疗部分结合,例如一种细胞毒素(例如一种细胞生长抑制剂或一种细胞***剂)、一种治疗剂或一种放射性元素(例如α-放射源、γ-放射源等等)。细胞毒素或细胞毒素剂包括任何对细胞有害的药物。实例包括紫杉醇(paclitaxol)、细胞松弛素B、短杆菌肽D、菲啶溴红、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、鬼臼噻吩甙、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、普卡霉素、放线菌素D、1-去氢睾甾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、***、和嘌罗霉素和它的类似物或同系物。治疗剂包括并不局限于,抗代谢物(例如、氨甲喋呤,6-巯嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺)、烷化剂(例如、氮芥、thioepa苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、cyclothosphamide、白消安、二溴甘露醇、链唑霉素、丝裂霉素C、和顺铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环类抗生素(例如、柔红霉素(原道诺霉素)和阿霉素)、抗生素(例如、更生霉素(原放射菌素)、博来霉素、普卡霉素、和安曲霉素(AMC))、以及抗有丝***剂(例如,长春新碱和长春碱)、***和adriomycin。
[00152]另外,生物活性剂可与治疗部分轭合,此治疗部分诸如可用于轭合放射性金属离子的放射性物质或大环螯合剂(见上面例如放射性物质)。在某些实施方式中,大环螯合剂为1,4,7,10-四氮杂十二烷-N,N′,N″,N″-四乙酸(DOTA),它可通过连接分子附着于抗体。这些连接分子是本领域所共知的,它们描述于Denardo et al.,1998,Clin Cancer Res.4:2483-90;Peterson et al.,1999,BioconjugChem.10:553;以及Zimmerman et al.,1999,Nucl.Med.Biol.26:943-50中,这些文献均在此整个引用为参考文献。
[00153]将这些治疗部分轭合于生物活性剂的技术是熟知的,此生物活性剂例如为抗体,例如参见Arnon et al.,″MonoclonalAntibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy″,inMonoclonal Antibodies And Cancer Therapy,Reisfeld et al.(eds.),1985,pp.243-56,Alan R.Liss,Inc.);Hellstrom et al.,″Antibodies For Drug Delivery″,in Controlled Drug Delivery(2nd Ed.),Robinson etal.(eds.),1987,pp.623-53,MarcelDekker,Inc.);Thorpe,″Antibody Carriers Of Cytotoxic AgentsIn Cancer TheraPy:A Review″,in Monoclonal Antibodies′84:Biological And Clinical Applications,Pinchera et al.(eds.),1985,pp.475-506);″Analysis,Results,And Future ProspectiveOf The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In CancerTherapy″,in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection AndTherapy,Baldwin et al.(eds.),1985,pp.303-16,AcademicPress;以及Thorpe et al.,Immunol.Rev.,62:119-58,1982。
[00154]在一些实施方式中,本发明组合物包括有效量的生物活性剂和一种或多种其他添加剂。可用于本发明组合物的添加剂包括,例如湿润剂、乳化剂或者pH值缓冲剂。本发明组合物可包含一种或多种其他赋形剂,诸如糖和多元醇。药物可接受的载体、稀释剂和其他赋形剂的其他实例见于Remington′s Pharmaceutical Sciences(MackPub.Co.N.J.最新版),它在此整个引用为参考文献。
[00155]本发明包括的组合物中,生物活性剂为微粒形式,即它不完全溶解在溶液中。在一些实施方式中,至少30%、至少50%、至少75%的生物活性剂为微粒形式。尽管不想受到特殊作用方式的束缚,本发明组合物中的生物活性剂为微粒形式,这些组合物中至少具有一种促进该生物活性剂沉淀的药物。可用于本发明组合物的沉淀剂可为蛋白质的,例如鱼精蛋白,它是一种阳离子聚合物;或者可为非蛋白质的,例如锌或其他金属或聚合物。
[00156]在一些实施方式中,示踪剂可与生物活性剂同时应用,以便于该生物活性剂的示踪和检测。示踪剂可包括但不限于可见染剂、荧光染剂、放射性同位素、微泡或磁自旋标记。通过常规技术可易于观察这些示踪剂。可应用本领域已知方法,应用来自体外或体内侵袭性或非侵袭性地进行标记药物或示踪剂的检测。
[00157]所传送或应用的生物活性剂的形式包括:在其药物可接受的稀释剂或溶剂中的溶液;乳剂;悬浮液;凝胶;微粒,诸如既可悬浮也可分散的微小颗粒和纳米颗粒,以及原位形成的赋形剂。本发明组合物可为适于真皮内传送的任何形式。在一种实施方式中,本发明真皮内组合物为可流动可注射的介质,即低粘性组合物,它可在注射器或笔中注射。这种可流动可注射的介质可为液体。可替代的是,这种可流动可注射的介质为液体,其中悬浮了微粒物质,这样使该介质可保持其流动性,以便可被注射,并可置于注射器中,例如可在注射器中进行应用。
[00158]本发明包括的制剂含有至少一种生物活性剂,其中该药物的浓度约为20μg/ml-100mg/ml。在特殊实施方式中,该药物的浓度约为10mg/ml。在另一特殊实施方式中,该药物的浓度约为100mg/ml。在一些实施方式中,按照本发明方法传送药物的量约为5-10μg。
[00159]本发明还包括包含颗粒试剂的组合物及其传送方法,这些颗粒试剂用于诊断和/或治疗。简要地说,规定形状和表面特性的颗粒可被悬浮在液体介质中,并且可通过显微操作针传送至真皮内腔隙,例如通常在表皮下小于5mm,而且优选在表皮下1-3mm。然后通过******将这些颗粒运输至***。颗粒移动速率可根据颗粒大小和表面电荷而定。
[00160]在此应用时,名词“颗粒”包括各种形式的成分,包括单体、聚合物、脂质、两亲物、脂肪酸、类固醇、蛋白和已知可聚集、自装配或可被处理为颗粒的其他物质。颗粒还包括单层状、多层状、无规则弯曲轨迹和固体形态,包括但不限于脂质体、微晶物质、微粒MRI造影剂、聚合小珠(即胶乳和HEMA),但最优选中空颗粒,诸如微泡,它对于超声成像特别有用。
[00161]在一种优选实施方式中,本发明包括的颗粒由一种或多种生物活性剂组成,这些生物活性剂包括治疗剂和诊断剂,它们可产生所述颗粒的部位选择性非侵袭性溶解,以传送该药物。在特殊实施方式中,本发明包括的组合物包括超声造影剂(例如微泡),其中含有治疗剂和/或诊断剂,例如阿霉素。尽管不想受到特殊作用机理的限制,一旦被引入,此颗粒将被主动或被动地运输至区域和局部回流***。当这些颗粒进入这些组织,超声探头将会检测到它们的存在,并在适当的频率下,将这些颗粒打开;然后它们的内容物扩散至邻近组织,这样可仅仅在疾病部位出现高的局部药物浓度,而且不需要***传送。另外,该颗粒还可包括一种诊断剂,这样可将药物的分散限制在邻近组织中,以便进行其他分析。
[00162]此颗粒传送***的优势包括但不限于:(1)通过靶向ID传送,改善对淋巴***组织的寻靶。应用这些传送***,在淋巴组织中产生疾病反应,并且直接进入此过程可获得更大的治疗效果,并提高诊断能力;(2)提高治疗和诊断结果。将治疗剂局部传送至最理想的目标组织,由于改变了PK和PD曲线,这样可使临床效果获得提高。按照本发明方法进行局部传送,为了获得所需临床或诊断结果,所用药物可少于惯用的***性传送,这样相关副作用将会减少。因为本发明方法在局部传送高浓度的药物,所以可提高诊断性评价的敏感性和速度。
[00163]将此处所述的颗粒传送至真皮内,并且它们可为非特异性非组织结合,或者特异性组织和/或细胞结合(即该颗粒可与特定生物实体结合,或者可在其上附着一种寻靶分子),而且可通过各种方法与治疗部分或诊断部分结合。这些颗粒本身可为治疗剂或诊断剂,或者它们可将诊断剂或治疗剂封入其内,包载诊断剂或治疗剂,或者可与诊断剂或治疗剂结合。本发明包括所有药物种类和诊断剂。本发明所用的治疗剂或诊断剂,以及本发明的组合物可能是或者可能不是细胞或组织靶向的。
[00164]在一些特殊实施方式中,这些颗粒包括一种或多种诊断剂。尽管不想受到特殊作用机理的束缚,应用本领域已知成像方法和此处公开的方法,这些颗粒可为罕见事件提供所需的信号放大。
[00165]在一些实施方式中,颗粒试剂还可包括治疗剂,这些治疗剂可被颗粒运送至淋巴***,并在颗粒组合物所确定的速率下传送。在某些特殊实施方式中,这些颗粒包括的治疗剂与一种或多种诊断剂联合使用。尽管不想受到特殊作用机理的束缚,这些颗粒广泛地将药物靶向释放至特定组织和/或器官,而不是释放至体循环。因此,减小了毒性,并使疗效最大化。
[00166]在特殊优选实施方式中,本发明方法中所用的组合物由纳米颗粒组成。
[00167]本发明此方面的一种优选实施方式涉及一种包括非特异性小微泡的组合物,以及一种方法,该方法应用真皮内方法将该组合物传送至特定组织,例如淋巴组织,或者传送至特定器官。尽管不想受到特殊作用机理的束缚,该微泡将被快速运输通过淋巴循环,而且例如使用超声成像,可对它们进行检测。因此,本发明提供了改进的方法,该方法用于检测癌转移至例如信号***,和/或提供了改进的方法,该方法用于评价淋巴水肿,例如与广泛腋窝***解剖相关的常见发病率。本发明方法对常规癌症诊断学进行了改进,此诊断方法例如公开如下的方法:Creager,A.J.;Geisinger,K.R.;Shiver,S.A.;Perier,N.D.;Shen,P.;Shaw,J.;Young,P.R.;Levine,E.A.″Intraoperative Evaluation of Sentinel Lymph NodesforMetastatic Breast Carcinoma by Imprint Cytology″Mod Pathol2002,15(11),1140-1146。
[00168]本发明其他特殊实施方式包括:通过真皮内传送氧敏感颗粒而进行缺氧检测。
[00169]可将本发明真皮内组合物制备为单位剂量形式。每小瓶的单位剂量可含有0.1至0.5mL组合物。在某些实施方式中,本发明真皮内组合物的单位剂量形式所含组合物可为50μL-100μL、50μL-200μL或者50μL-500μL。如果必要,通过在每个小瓶中加入无菌稀释剂,可将这些制剂调节至所需浓度。不是大量应用按照本发明方法所应用的组合物,大量应用可使真皮内空间过度负荷,导致分隔为一个或多个其他腔隙,诸如SC腔隙。
5.2诊断应用
[00170]本发明为疾病、病症或感染的检测和/或诊断提供了改进的方法,该方法改善了灵敏度、药物的沉积量、组织生物利用度,使所传送的生物活性剂的起效和清除更快,此生物活性剂例如为诊断剂。此生物活性剂,特别是公开与此的诊断剂,可用于诊断目的,以对疾病、病症或感染进行检测、诊断或监测。本发明提供的方法可用于至少一种诊断剂的给药,以对疾病进行检测,特别是癌症,它包括将该药物以可控的速率、容积和压力传送至患者皮肤的ID腔隙,以便将此药物沉积在ID腔隙,并被***道***吸收。
[00171]本发明的方法包括将诊断上有效优选无毒量的药物应用于哺乳动物,这样通过此处公开和本领域技术人员已知的方法可使该药物成像并被检测,而且具有足够的分辨力,这些已知方法例如超声或磁共振成像,以显现节内结构。优选将按照本发明方法应用的药物沉积在特定组织中,例如***;而且在该患者中使该药物成像。对药物进行成像可在给药后2周内左右,给药后1月内左右,给药后2月内左右,或者给药后3月内左右。
[00172]在某些实施方式中,本发明提供了检测或诊断疾病、病症或感染的方法,该方法包括:(a)将一种或多种诊断剂传送至患者皮肤的ID腔隙;(b)应用一种或多种药物检测特异性基因的表达,该药物可与表达特异性基因的细胞结合,此特异性基因已知具有异常表达或水平,从而导致患者疾病、病症或感染的发生;(c)将基因表达水平与对照水平比较,例如正常组织样本中的水平,因此当测定水平高于对照水平时即表明存在疾病、病症或感染。
[00173]本发明的一个方面是检测和诊断人的疾病、病症或感染。在一种实施方式中,诊断包括:(a)通过将药物传送至患者皮肤ID腔隙,给患者应用有效量的标记生物活性剂,以便该药物可特异性的与靶组织中的细胞结合;(b)给药后等待一定时间间隔,使患者一些部位的标记药物达到优选浓度,在这些部位标记药物与靶组织发生特异性结合(并且使未结合标记药物被清除至背景水平);(c)测定背景水平;(d)测定患者中该标记药物,以便标记药物的测定值大于背景水平,表明该患者存在疾病、病症或感染。按照此实施方式,用成像部分标记此药物,应用本领域技术人员已知的成像***可检测该成像部分。通过各种方法可测定背景水平,包括将被测定标记药物的量与标准值进行比较,此标准值是针对特定***事先测定的。
[00174]本发明为现有信号***活组织方法和基因定位外科方法提供了改进的方法,该方法提高了诊断剂在局部淋巴***中的吸收和生物利用度。本发明的方法用于至少一种诊断剂的给药,该诊断剂用于肿瘤的检测,例如乳腺肿瘤,或者用于回流患者肿瘤***的检测,该方法包括将药物传送至患者皮肤的真皮内腔隙,以便该药物可运输至局部淋巴***。在其他实施方式中,本发明提供的方法用于至少一种诊断剂的给药,该诊断剂用于检测一种肿瘤或回流患者肿瘤的***,此方法包括将药物传送至患者皮肤的真皮内腔隙,以便此方法获得的该药物组织生物利用度高于ID芒图氏方法传送相同药物时的组织生物利用度。在其他特殊实施方式中,本发明的方法用于至少一种诊断剂的给药,该诊断剂用于检测一种例如乳腺肿瘤的肿瘤或回流患者肿瘤的***,此方法包括将该药物传送至患者皮肤真皮内腔隙,以便该药物的起效和清除快于ID芒图氏方法传送相同药物时的起效和清除。
[00175]本发明的方法特别用于改进常规癌症检测方法,该方法用于检测肿瘤,例如乳腺肿瘤,或者回流患者肿瘤的***,因为与应用常见传送方法例如ID芒图氏方法将相同预选量的药物传送至真皮内腔隙相比,此方法可将该诊断剂预选量的75%以上被沉积在真皮内腔隙。
[00176]在特殊实施方式中,本发明包括癌症的诊断方法,该方法包括下列:将特异抗体真皮内注射至目标组织中及其周围,此特异抗体是针对特定细胞类型的,即乳腺癌,用一种染剂对其进行标记,此染剂暴露于特异光源下可被检测。外科医生应用惟一的光源(手持或加入另一种仪器中(例如特别设计的镜片)),沿着***中标记抗体的路径寻找转移瘤和癌扩散。在可替代的实施方式中,此标记物是放射性或磁性的,可用适当的外部光源追踪此标记物,而且在某些情况下,该标记物可为一种不能被检测的物质,除非特异性药物与其靶位结合。本发明的诊断剂可特别用于确定癌症的预后,因为肿瘤附近的氧浓度经常显示对放射疗法(例如参见Lo et al.,1995,Biochemistry 20,11,727-11,730)和光动力疗法(例如参见Mcllroyet al.,1998,J Photochem Photobiol,43,47-55)的敏感性。
[00177]在一种实施方式中,本发明提供的方法特别用于癌转移的诊断。在此诊断方法中,将生物活性剂真皮内传送至怀疑存在肿瘤的部位,并将此生物活性剂运输至局部淋巴***,以便识别此淋巴***,包括回流肿瘤部位的***。然后对识别的***进行显微检查,确定癌细胞是否已经转移至该***中,即已发生癌转移。进一步传送至更远的淋巴组织为生物活性剂的快速传送和组织生物利用度的提高提供了一种惟一的模式。例如,ProstaSointTM(Cyt ogen)是一种111In标记的单克隆抗体,它可用于对***癌进行分期;99TC标记抗CD-15单克隆抗体已用于对非特征性阑尾炎进行高度敏感而特异的鉴别(Kipper,S.L.et.al.Journal of Nuclear Medicine 200041(3),449-455)。本发明包括将Cyt ogen应用于患者皮肤的ID腔隙,以提供一种针对***癌的改进的诊断方法。
[00178]本发明包括的方法用于至少一种诊断剂的给药,该诊断剂用于检测肿瘤或回流患者肿瘤的***,该方法包括将此药物传送至患者皮肤的真皮内腔隙,以便使该药物运输至局部淋巴***。与按照ID芒图氏方法传送相同药物相比,按照本发明方法传送诊断剂具有更高的组织生物利用度,更快的起效和清除。与按照ID芒图氏方法传送相同药物相比,该药物预选剂量沉积在淋巴组织中的量最优选提高了至少100%、至少150%、至少200%、至少250%、至少300%、至少350%。在另一种优选实施方式中,与将相同药物传送至更深的组织腔隙(例如SC腔隙、IM腔隙)相比,该药物预选剂量沉积在淋巴组织中的量最优选提高了至少100%、至少150%、至少200%、至少250%、至少300%、至少350%。
[00179]在一种优选实施方式中,本发明提供的改进方法用于诊断肿瘤细胞的转移,包括:传送生物活性剂,它可在体内被运输至淋巴***;追踪该生物活性剂,确定回流患病部位的淋巴***;以及对淋巴***进行显微检查,确定转移。
[00180]本发明的目的是提供一种将生物活性剂传送至患者的方法,此生物活性剂例如为诊断剂,该方法包括,将生物活性剂传送至患者皮肤的真皮内腔隙,在此处该生物活性剂与疾病或病症的标记进行特异性连接或结合。优选地,与常规传送方法相比,这种生物活性剂具有提高的生物动力学或组织生物利用度。
[00181]本发明提供的方法可用于诊断具有特异性标记的疾病、病症或感染,该方法是按照公开于此的方法应用针对所述疾病或病症的生物活性剂;追踪该生物活性剂;确定所述药物是否发生特异性结合,这种结合表明该疾病或病症存在可能性。本发明的生物活性剂可诊断性地用于监测疾病、病症或感染的进展,以确定所用治疗方案的有效性,此是临床试验方法的组成部分。
[00182]本发明的方法提供了改进的确定预后的方法,它应用特异性药物(而不是非特异性药物)评价疾病治疗方案的疗效,例如,在评价按照时间的基因调节和表达中监测细胞基因谱。通常,细胞基因谱的体外分析已用于评价按照时间的基因调节和表达,此成为评价疗效的一种工具。这些体外方法存在很多缺陷,包括但不限于不准确;从机体取出细胞可导致RNA和DNA的破坏,因此改变标本的基因谱;应用出自体内的方法,潜在地丢失了基因损害形态学部位的信息;以及从体内细胞外环境取出可影响细胞分化和调节。当患者存在疾病时,通过使用本发明方法,特异性诊断剂的真皮内给药可用于该疾病的评价,这种特异性诊断剂可与特异性标记连接和/或结合。因此,本发明的方法可影响医生对治疗的选择。
[00183]本发明的方法可特别用于综合诊断和治疗的方法。例如在肿瘤学中在很大程度上仍需要准确地诊断疾病,在肿瘤学中几乎没有诊断剂可表明哪种治疗将会可靠地成功。本发明方法提供了改进方法,该方法通过应用制剂而用于综合诊断及治疗,此制剂中包括一种或多种诊断剂,它们与一种或多种治疗剂联合使用。本发明提供的方法将诊断剂和治疗剂导向特定组织中的特定细胞。在特殊实施方式中,本发明包括将制剂传送至患者皮肤的ID腔隙,该制剂含有一种或多种诊断剂,它们与一种或多种治疗剂联合使用,以便该诊断剂的特异作用可引发该治疗剂的作用,例如生物学作用。按照本发明的方法,靶向诊断剂传送与靶向治疗剂传送联合使用可提高患者的治疗效果。本实施方式描述了真皮内治疗剂与诊断剂联合传送的优势。诊断剂与治疗剂联合传送至ID腔隙,为提高患者疾病的治疗效果提供了有力的方法。
[00184]在某些实施方式中,本发明包括在外部筛选步骤(即***X线照相术或其他成像***)之前,在目标区域重复真皮内应用一种或多种标记的特异性药物(例如抗体)。然后在此过程中监测每种特异性药物。特异性药物可为诊断工具包的一部分,此工具包具有预选填充的注射器或传送装置。在一种实施方式中,通过重复应用诊断疾病、病症或感染的方法而对疾病、病症或感染进行监测,例如初次诊断后1个月、初次诊断后6个月或者初次诊断后1年。
[00185]本发明提供的方法还用于将生物活性剂传送至患者,其中可将该生物活性剂应用于患者的真皮内腔隙,并在体内运输至局部淋巴***。因此,在该生物活性剂例如被肝脏、肾脏或脾脏***、降解或代谢之前,它可到达局部淋巴***。在某些实施方式中,该生物活性剂包括免疫球蛋白、蛋白或肽、核苷酸、多核苷酸或核酸、神经原受体的配体、酶、碳水化合物、细胞治疗药物、chemospecific药物、或者它们的联合。另外,该生物活性剂可同时联合应用一种示踪剂,或者可对该生物活性剂本身进行标记,以便它在体内可被追踪。可通过来自体内的流式细胞术、组织学方法或者其他本领域已知的来自体内的技术对该示踪剂或自标记生物活性剂进行追踪和检查,或者也可在体内应用SPECT、PET、MRI、荧光方法、发冷光方法、生物发光方法、光学成像、光声成像、RAMAN和SERS或者本领域已知的在体内成像的其他技术。
[00186]对于通过注射应用的药物来说,特别是通过针头或套管针出口***的深度、出口暴露的高度(垂直升高)、给药量和给药速率来控制靶定组织的深度。在没有不当经验的情况下,本领域技术人员可确定适当的参数。
[00187]本发明包括采用外科和非外科的方法应用一种或多种诊断剂。对于适宜的药物,所使用的成像是通过外科部位以外的外部监测器(即MRI、PET、CAT扫描或***X线照相术)进行的。可用于疾病的非外科方法包括但不限于乳腺癌、淋巴瘤、结肠直肠和***癌成像和筛选,罕见细胞的早期检测,此罕见细胞提示疾病状态、诸如类风湿性关节炎的慢性疾病以及诸如HIV的血液病原体。
[00188]将生物活性剂与可检测物质结合,这样可便于检测。可检测物质实例包括各种酶、辅基、荧光物质、发光物质、生物发光物质、放射性物质、阳电子发射物质、可见染剂、荧光染剂、放射性同位素、磁自旋标记物、以及非放射性顺磁金属离子。可直接将可检测物质与生物活性剂结合或轭合,也可应用本领域已知的技术通过中间体(诸如本领域已知的连接物)进行间接的结合。参见,例如:美国专利No.4,741,900涉及的金属离子,可将它与本发明中用于诊断剂的抗体轭合。通过将生物活性剂与可检测物质结合可实现这种诊断和检测,可检测物质包括但不限于各种酶,包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶;辅基络合物,诸如但不限于链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素;荧光物质,诸如但不限于7-羟香豆素、荧光素、异硫氰酸荧光素、碱性蕊香红B、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯orphycoerythr in;发光物质,诸如但不限于鲁米诺;生物发光物质,诸如但不限于萤虫素酶、萤虫素和水母素;放射性物质,诸如但不限于铋(213Bi)、碳(14C)、铬(51Cr)、钴(57Co)、氟(18F)、钆(153Gd、159Gd)、镓(68Ga、67Ga)、锗(68Ge)、钬(166Ho)、铟(115In、113In、112In、111In)、碘(131I、125I、123I、121I)、镧(140La)、镥(177Lu)、锰(54Mn)、钼(99Mo)、钯(103Pd)、磷(32P)、镨(142Pr)、钷(149Pm)、铼(186Re、188Re)、铑(105Rh)、钌(97Ru)、钐(153Sm)、钪(47Sc)、硒(75Se)、锶(85Sr)、硫(35S)、锝(99Tc)、铊(201Ti)、锡(113Sn、117Sn)、氚(3H)、氙(133Xe)、镱(169Yb、175Yb)、铱(90Y)、锌(65Zn);阳电子发射金属,使用各种阳电子发射X线断层照相术;以及非放射性顺磁金属离子。
[00189]本发明包括本领域已知和在此举例的各种检测方法,包括但不限于来自体内或体内的、侵袭性或非侵袭性的。进行本发明方法的标记药物和生物活性剂的检测,可应用光学方法(例如时间分辨和生存期荧光光谱学、发光或生物发光、化学发光);流式细胞术、红外区荧光法、组织学检查、超声检查超声成像、光声光谱学、拉曼光谱学和表面增强拉曼光谱学。在优选实施方式中,通过体内成像对生物活性剂进行检查和定位追踪。本领域已知各种适宜的体内成像方法可用于本发明方法中,它们例如包括SPECT、光学成像、光声光谱学、RAMAN和SERS CAT、PET。
[00190]本领域技术人员将会理解到,患者和成像***的大小将决定影像部分的量,这部分量对于产生诊断影像是必须的。在放射性同位素部分的情况下,对于人来说,被注射放射性的量正常范围约为5-20毫居里的99Tc。然后被标记抗体将优选蓄积于含有特异性蛋白的细胞部位。体内肿瘤成像描述于S.W.Burchiel et al.,“Immunopharmacokinetics of Radiochemical Antibodies and TheirFragments.”(肿瘤成像第13章:The Radiochemical Detection ofCancer,S.W.Burchiel and B.A.Rhodes,eds.,Masson PublishingInc.(1982);在此将它整个引用为参考)。根据几个变量,包括所用标记物的类型和给药方式,给药后的时间间隔为6-48小时或者6-24小时或者6-12小时,以便使患者给药部位的标记分子达到优选浓度,并且使未结合标记分子被清除至背景水平。在另一种实施方式中,给药后的时间间隔为5-20天或者5-10天。
[00191]应用本领域已知体内扫描的方法可检测患者中标记分子的存在。根据所用标记物类型选择这些方法。熟练技工将会确定检测特殊标记物的适当方法。本发明诊断方法中可用的方法和装置包括但不限于计算机X线断层照相术(CT)、诸如阳电子发射断层照相术(PET)的全身扫描、磁共振(MRI)、单光子发射计算机化断层显像(SPECT)、X线、光学(分光光度分析)成像和声图描记法。
[00192]在特殊实施方式中,用放射性同位素标记生物活性剂,并用放射应答外科仪器对患者进行检测(Thurston等的美国专利No.5,441,050)。在另一种实施方式中,用荧光化合物标记生物活性剂,并用荧光应答扫描仪器对患者进行检测。在另一种实施方式中,用阳电子发射金属标记生物活性剂,并用阳电子发射X线断层照相术对患者进行检测。在另一种实施方式中,用顺磁标记物标记生物活性剂,并用磁共振(MRI)对患者进行检测。
[00193]本发明包括按照本发明方法传送的体内显像剂。应用适当的成像模式可检测这些药物。成像模式包括但不限于超声、MRI、CT、PET、SPECT、荧光、化学发光、生物发光、X线和光声成像。本发明包括疾病、病症或感染的体内成像,它应用公开于此的生物活性剂和其他药物,例如示踪剂,显像剂。一旦将生物活性剂传送至患者,该患者可被适当地成像,这可在注射过程中、注射后即刻、和/或注射后指定时间进行。所得影像可为连续的(实时的)或者断续的。应用这些影像可以定位结构,即***;鉴别结构特征,包括梗阻、该药物流速;以及鉴别罕见事件。
[00194]本发明包括:通过一种或多种成像技术,传送适用于成像的造影剂。本领域已知的各种造影剂均适于本发明的方法和组合物。在某些实施方式中,这些造影剂具有特定形式,而且在给药后优先被淋巴***吸收。这些造影剂可为不透射线的物质、MRI成像剂、超声成像剂以及任何其他造影剂,此造影剂可适用于动物机体成像的装置。本发明方法中所用的造影剂优选无毒和/或无放射性的。存在两大类造影剂:顺磁性和超顺磁性;这两种都符合本发明的方法。顺磁剂具有不成对电子自转,它利于核的松弛,此核通常为水质子,它可紧密地接近这些顺磁剂(在1nm内)。这些药物既降低T1也降低T2,它们在uM浓度是有效的,而且可将它们加入生物分布和毒性曲线良好的螯合物中。Schering的专利产品GdDTPA(二亚乙基三胺五乙酸钆)是几种市售的这类药物中一个突出的实例。在某些实施方式中,将造影剂加入大分子中,避免它们被体循环吸收。应用本领域技术人员已知的方法可实现与白蛋白、其他适宜大小的生物分子、胶乳、右旋糖酐、聚苯乙烯或其他无毒天然或合成聚合物的联合使用,或者将其封入脂质体中。
[00195]本发明还包括非特异性造影剂,它们包括但不限于:MRI造影剂(例如钆、顺磁颗粒、超顺磁颗粒)、超声造影剂(例如微泡)、CT造影剂(例如放射性标记)、X线造影剂(例如碘)、PET造影剂(例如各种2光子发射体,F19,氟脱氧葡萄糖)、光声造影剂(例如染剂、各种吸光分子)、光学造影剂(例如荧光剂:CY5、squaraines、近红外染剂,即吲哚菁绿、镧系荧光剂(例如铕、铽))。
[00196]在一种特殊实施例中,按照此处描述的方法传送微泡超声造影剂。将超声探头或者置于注射部位或者置于区域***。尽管不想受到特殊作用机理的束缚,可将该造影剂传送至真皮内腔隙,它可即刻通过***并到达***。当造影剂通过探头下面时,超声探头检测该造影剂。可获得诊断流速和结构信息,包括梗阻。在此实施方式中,可以连续(实时)或间断方式获得影像。
[00197]在特殊实施方式中,本发明包括的方法用于诊断一种疾病,此疾病可累及***,该方法对本领域已知的传统淋巴系造影术进行了改进。本发明的方法包括应用超声或磁共振成像。本发明的方法包括将诊断上有效的、无毒剂量的、非放射性的造影剂应用于哺乳动物,这样通过超声或磁共振成像,该药物是可成像的,并具有足够的分辨度,这样可使节内结构呈现可见性;让该造影剂集中于***;以及应用磁共振成像或超声对哺乳动物的***进行成像,其中该造影剂处于这些***中,成像在给药约2周内进行,在给药约2月内进行或者在给药约3月内进行。
[00198]在某些实施方式中,磁共振成像还包括附加步骤,此步骤在注射该药物前确保对患者进行预成像,此药物即造影剂。在某些实施方式中,可获得按照时间的注射后多次成像,并与预成像进行比较。本发明包括的方法应用公开于此并且本领域技术人员已知的方法可用于***的检测和定位,以及其他组织、器官和生物学实体的信息,这些方法包括CT、PET、SPECT、光学(例如荧光剂、化学发光剂)成像和X线成像。
5.2.1疾病
[00199]本发明的方法可以用于改进癌症和相关疾病的诊断,这些疾病包括但不限于以下:白血病包括但不限于急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病例如成髓细胞性、早幼粒细胞性、骨髓单核细胞性、单核细胞性、红白血病性白血病以及骨髓增生异常综合征;慢性白血病,例如但不局限于慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞性白血病;真性红细胞增多症;淋巴瘤例如但不局限于何杰金氏病、非何杰金氏病;多发性骨髓瘤例如但不局限于郁积型多发性骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、浆细胞性白血病、孤立性浆细胞瘤以及髓外浆细胞瘤;特发性巨球蛋白血症;不明性质的单克隆性丙种球蛋白病;良性单克隆性丙种球蛋白病;重链疾病;骨和***肉瘤例如但不局限于骨肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因氏肉瘤、恶性巨细胞瘤、骨纤维肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤(血管肉瘤)、纤维肉瘤、卡波济氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、***肉瘤、神经鞘瘤、横纹肌肉瘤、滑液肉瘤;脑肿瘤包括但不限于神经胶质瘤、星细胞瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜细胞瘤、间胶质瘤、非神经胶质瘤、听神经鞘瘤、颅咽管瘤、成神经管细胞瘤、硬脑脊膜肉瘤、松果体瘤、成松果体细胞瘤、原发脑淋巴瘤;乳腺癌包括但不限于腺癌、小叶(小细胞)癌、导管内癌、髓质乳腺癌、粘蛋白乳腺癌、管状乳腺癌、***状乳腺癌、佩吉特氏病和炎症性乳腺癌;肾上腺癌,包括但不限于嗜铬细胞瘤和肾上腺皮质癌;甲状腺癌例如但不限于***状或滤泡甲状腺癌、髓状甲状腺癌和退行发育甲状腺癌;胰腺癌,包括但不限于胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、舒血管肠肽瘤、生长激素释放抑制因子分泌型肿瘤以及类癌瘤或胰岛细胞瘤;垂体后叶素瘤包括但不限于库兴氏病、催乳素分泌型肿瘤、肢端肥大症和尿崩症;眼部肿瘤包括但不限于黑素瘤例如虹膜黑素瘤、脉络膜黑素瘤和睫状体黑素瘤,和视网膜母细胞瘤;***癌,包括但不限于鳞状上皮细胞癌、腺癌和黑素瘤;外阴癌,包括但不限于鳞状上皮细胞癌、黑素瘤、腺癌、基底细胞癌、肉瘤和佩吉特氏病;子***,包括但不限于鳞状上皮细胞癌和腺癌;子宫癌,包括但不限于子宫内膜癌和子宫肉瘤;卵巢癌,包括但不限于卵巢上皮癌、交界瘤、生殖细胞瘤和间质肿瘤;食管癌,包括但不限于鳞状细胞癌、腺癌、腺样囊癌瘤、粘液表皮样癌、腺鳞状癌瘤、肉瘤、黑素瘤、浆细胞瘤、疣状癌和燕麦[形]细胞(小细胞)癌;胃癌,包括但不限于腺癌、真菌样生长(息肉状的)、溃疡性、浅表扩展性、弥漫扩展性、恶性淋巴瘤、脂肉瘤、纤维肉瘤和癌肉瘤;结肠癌;直肠癌;肝癌,包括但不限于肝细胞癌和肝胚细胞瘤;胆囊癌,包括但不限于腺癌;胆管癌,包括但不限于***状、结节性和弥漫性低分化淋巴瘤;肺癌,包括但不限于非小细胞性肺癌、鳞状上皮细胞癌(表皮样癌)、腺癌、大细胞癌和小细胞性肺癌;睾丸癌,包括但不限于生殖细胞瘤、***瘤、退行发育性、标准性(典型性)、***性、非***瘤、胚胎性癌、畸胎瘤癌瘤、绒毛膜癌(卵黄囊瘤);***癌,包括但不限于腺癌、平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤;penal癌;口腔癌,包括但不限于鳞状上皮细胞癌;基底癌;唾液腺癌,包括但不限于腺癌、粘液表皮样癌和腺样囊性癌;咽癌,包括但不限于鳞状上皮细胞癌和疣;皮肤癌,包括但不限于基底细胞癌、鳞状上皮细胞癌和黑素瘤、浅表扩展性黑素瘤、结节性黑色素瘤、恶性痣黑色素瘤、肢端黑色素瘤;肾癌,包括但不限于肾细胞癌、腺癌、肾上腺样瘤、纤维肉瘤、移行细胞癌(肾盂和/或子宫);维尔姆斯氏肿瘤;膀胱癌,包括但不限于移行细胞癌、状上皮细胞癌、腺癌、癌肉瘤。另外,肿瘤包括粘液肉瘤、成骨肉瘤、内皮肉瘤、内皮肉瘤、间皮瘤、滑膜瘤、成血管细胞瘤、上皮癌、囊腺癌、支气管癌、汗腺癌、皮脂腺癌、***状癌和***状腺癌(复习这些疾病,参见Fishman et al.,1985,Medicine,2d Ed.,J.B.Lippincott Co.,Philadelphia和Murphy et al.,1997,Informed Decisions:The Complete Book of Cancer Diagnosis,Treatment,and Recovery,Viking Penguin,Penguin Books U.S.A.,Inc.,United States of America)。因而,本发明的方法和药物还可以用于诊断多种癌症和其它非正常增生性疾病,包括(但不限于)下列:癌症,包括膀胱、乳腺、结肠、肾、肝、肺、卵巢、胰腺、胃、宫颈、甲状腺和皮肤的癌症;包括鳞状上皮细胞癌;淋巴***的造血肿瘤,包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、Berketts淋巴瘤;骨髓***的造血***肿瘤,包括急性和慢性髓细胞性白血病和前髓细胞性白血病;间质来源的肿瘤,包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤;其它的肿瘤包括黑素瘤、***瘤、tetratocarcinoma、成神经细胞瘤和神经胶质瘤;中枢和周围神经***的肿瘤,包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、和神经鞘瘤;间质来源的肿瘤,包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤;以及其它肿瘤,包括黑素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、***瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎癌。预期通过本发明的方法和组合物还可以治疗由脱噬作用中发生畸变引起的肿瘤。这样的肿瘤可以包括但不限于滤泡性淋巴瘤、p53突变所致的癌、乳腺、***和卵巢的激素依存性肿瘤以及癌前期病变例如家族性腺瘤性息肉病和骨髓增生异常综合征。在特殊的实施方式中,通过本发明的方法和组合物,可更有效地诊断卵巢、膀胱、乳腺、结肠、肺、皮肤、胰腺或子宫中的恶性肿瘤或异常增生的变化(例如组织变形和发育异常),或者过度增生的疾病。在其它的特殊实施方式中,通过本发明的方法和组合物可更有效地诊断肉瘤、黑素瘤或者白血病。
[00200]通过应用本发明的药物可更有效地诊断与癌症抗原相关的癌症,例如但不限于通过本发明的方法和组合物可更有效地诊断与下列癌症抗原相关的癌症。KS 1/4泛癌抗原(Perez and Walker,1990,J.Immunol.142:32-37;Bumal,1988,Hybridoma 7(4):407-415)、卵巢癌抗原(CA125)(Yu et al.,1991,Cancer Res.51(2):48-475)、***酸性磷酸盐(Tailor et al.,1990,Nucl.Acids Res.18(1):4928)、***特异性抗原(Henttu and Vihko,1989,Biochem.Biophys.Res.Comm.10(2):903-910;Israeliet al.,1993,Cancer Res.53:227-230)、黑素瘤相关抗原p97(Estinet al.,1989,J.Natl.Cancer Instit.81(6):445-44)、黑素瘤抗原gp75(Vijayasardahl et al.,1990,J.Exp.Med.171(4):1375-1380)、高分子量黑素瘤抗原(HMW-MAA)(Natali et al.,1987,Cancer 59:55-3;Mittelman et al.,1990,J.Clin.Invest.86:2136-2144))、***特异性膜抗原、癌胚抗原(CEA)(Foon et al.,1994,Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.13:294)、多形上皮粘蛋白抗原、人乳脂肪球抗原、结肠直肠肿瘤相关抗原例如:CEA、TAG-72(Yokata et al.,1992,Cancer Res.52:3402-3408)、CO17-1A(Ragnhammar et al.,1993,Int.J.Cancer 53:751-758);GICA 19-9(Herlyn et al.,1982,J.Clin.Immunol.2:135)、CTA-1和LEA、伯基特淋巴瘤抗原38.13,CD19(Ghetie et al.,1994,Blood 83:1329-1336)、人B-淋巴瘤抗原抗原-CD20(Reffet al.,1994,Blood83:435-445)、CD33(Sgouros et al.,1993,J.Nucl.Med.34:422-430)、黑素瘤特异性抗原例如神经节苷脂GD2(Saleh et al.,1993,J.Immunol.,151,3390-3398)、神经节苷脂GD3(Shitara etal.,1993,Cancer Immunol.Immunotlier.36:373-380)、神经节苷脂GM2(Livingston et al.,1994,J Clin.Oncol.12:1036-1044)、神经节苷脂GM3(Hoon et al.,1993,Cancer Res.53:5244-5250)、特异性移植性型肿瘤的细胞表面抗原(TSTA)例如病毒诱导的肿瘤抗原包括T-抗原DNA肿瘤病毒和RNA肿瘤病毒的被膜抗原、癌胚抗原-α-胎蛋白例如结肠的CEA、结肠肿瘤癌胚抗原(Hellstrom et al.,1985,Cancer.Res.45:2210-2188)、分化抗原例如人肺癌抗原L6,L20(Hellstrom et al.,1986,Cancer Res.46:3917-3923)、纤维肉瘤抗原、人白血病T细胞抗原-Gp37(Bhattacharya-Chatterjee etal.,1988,J.of Immun.141:1398-1403)、拟糖蛋白、鞘类磷脂、乳癌抗原例如EGFR(表皮生长因子受体),HER2抗原(p185HER2)、多形上皮粘蛋白(PEM)(Hilkens et al.,1992,Trends in Bio.Chem.Sci.17:359)、恶性人淋巴细胞抗原-APO-1(Bernhard et al.,1989,Science 245:301-304)、分化抗原(Feizi,1985,Nature 314:53-57)例如在胎儿红细胞和原内胚层中发现的I抗原、在胃腺癌中发现的I(Ma),在乳腺上皮细胞中发现的M18和M39、在髓样细胞中发现的SSEA-1、在结肠直肠癌中发现的VEP8、VEP9、My1、VIM-D5、和D156-22、在结肠腺癌中发现的TRA-1-85(血型H)、C14、在肺腺癌中发现的F3、在胃癌中发现的AH6、在胚胎癌性细胞中发现的Y半抗原Ley、在A431细胞中发现的TL5(血型A)、EGF受体,在胰腺癌中发现的E1序列(series)(血型B)、在胚胎癌性细胞、胃腺癌中发现的FC10.2、在腺癌中发现的CO-514(血型Lea)、在腺癌中发现的NS-10、在结肠腺癌中发现的CO-43(血型Leb)、G49、EGF受体,(血型ALeb/LeY)、在结肠癌胃癌粘蛋白中发现的19.9、在骨髓细胞中发现的T5A7、在黑素瘤中发现的R24、在胚胎癌性细胞中发现的4.2,GD3,D1.1,OFA-1,GM2,OFA-2,GD2,M1:22:25:8以及在4-8-细胞***期胚胎中发现的SSEA-3、SSEA-4。在另一个实施方式中,该抗原是一个来源于皮肤T细胞淋巴瘤的T细胞受体衍生的肽(参见Edelson,1998,The CancerJournal
4:62)。
[00201]本发明的生物活性剂,特别是公开于此的诊断剂,可用于诊断目的以检测、诊断或监控感染(例如***炎、肺炎、***炎、链球菌、RSV)。可以通过本发明的药物进行检测、诊断或监控的感染性疾病,它包括但不限于病毒、细菌、真菌、原虫和病毒的传染原引起的疾病。
[00202]使用本发明药物结合本发明的方法,可以检测、诊断或监测病毒性疾病,它包括但不限于甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、流行性感冒病毒、水痘病毒、腺病毒、单纯性疱疹I型(HSV-I)病毒、单纯性疱疹II型(HSV-II)病毒、牛疫、鼻病毒、埃可病毒、轮状病毒、呼吸道合胞病毒、***瘤病毒、乳多泡病毒、细胞巨化病毒、棘状病毒、虫传病毒、汉坦病毒、柯萨奇病毒、流行性腮腺炎病毒、麻疹病毒、风疹病毒、脊髓灰质炎病毒、天花、EB病毒、人免疫缺陷病毒I型(HIV-I)、人免疫缺陷病毒II型(HIV-II)以及例如病毒性脑膜炎、脑炎、登革热或天花等病毒性疾病病原引起的疾病。
[00203]使用本发明的药物结合本发明的方法,可检测、诊断或监测细菌性疾病,该疾病是由细菌引起的,包括但不限于立克次体、支原体、奈瑟氏菌、S.肺炎、博氏疏螺旋体(莱姆氏病)、炭疽杆菌(炭疽)、破伤风菌、链球菌、葡萄球菌、分支杆菌、破伤风菌、百日咳、霍乱、瘟疫、白喉、衣原体、金黄色酿脓葡萄球菌和军团杆菌。
[00204]使用本发明的药物结合本发明的方法,可检测、诊断或监测原虫病,该疾病是由包括但不限于利什曼原虫、kokzidioa、锥虫或疟原虫的原虫引起的。
[00205]使用本发明的药物结合本发明的方法,可检测、诊断或监测寄生虫病,它是由包括但不限于衣原体和立克次体的寄生虫引起的。
5.3生物活性剂的真皮内给药
[00206]本发明包括用于生物活性剂特别是诊断剂的真皮内给药的方法,在此所述和举例说明的是指受试者皮肤的真皮内间隔,优选直接并有选择地靶向真皮内间隔尤其是完全不用经过真皮脉管***。一旦制备用在本发明的方法中的生物活性剂,尤其是诊断剂,该药剂一般被转移到用于真皮内给药的注射器,例如注射器或笔。可以在商业上制备生物活性剂尤其是诊断剂,例如特定地为真皮内注射而设计的小瓶或药筒。使用任何现有技术公知的或WO01/02178(2002.1.10公开)和WO02/02179(2002.1.10公开)披露的皮内装置和方法给药本发明的生物活性剂,尤其是诊断剂;美国专利No.6,494,865(2002.12.17公开)和美国专利No.6,569,143(2003,3,27公开)在此引入作为参考。
[00207]生物活性剂真皮内给药的方法,特别是将诊断剂靶向真皮内间隔的实际方法不是关键性的,只要它能穿透受体的皮肤到达期望的真皮内空间的目标深度而不穿透它即可。在多数情况下,装置将穿透皮肤到大约0.5-2毫米的深度。本发明包括常规的注射针、导管或所有已知种类的显微针,采用单针或复杂的多针阵列(needle arrays)的方式。真皮通路元件可由包括冲击注射装置的无针型装置所构成。在此所用术语“针”和“这些针”是指包括所有具有剖口或甚至无尖端的类似针的结构。在此所用术语显微针是指包括30号的结构,当这样的结构实际上是圆柱型时,其具有更小且一般约31-50号的结构。显微针所包括的非圆柱型结构将具有同等的直径,其包括锥体、矩形、八角形、楔形以及其它几何形状。它们也可以具有任何剖口,组合剖口或没有尖端。本发明的方法还包括冲击流体注射装置、粉末喷射输送装置、压电、电动、电磁辅助输送装置以及气态辅助输送装置,它们都直接穿透皮肤,为给药提供通路或直接将物质输送到真皮间隔内的靶向位置。
[00208]然而优选地,该装置具有控制将皮肤穿透到真皮内间隔内所需深度的构造方式。最典型地可以采取与针相连的支持结构或平台形式通过扩大的区域或与真皮通路元件装置的轴相联的针芯完成。真皮通路元件装置中显微针的长度在制造过程中容易变形,通常制造成小于2毫米的长度。为了进一步减轻注射或输注中产生的疼痛及其它感觉,显微针也是非常尖锐和特小号规格。在本发明中它们可作为独立的单腔显微针形式使用,或者以线形排列或二维矩阵形式组合或制造成多个显微针组以加快输送速率或增加在给定时间内的输送量。针可从底端、侧面或两处俱喷射其物质。显微针可被合并到许多装置中,例如:固定器(holders)和护罩,它们也可以起到限制穿透深度的作用。本发明的真皮通路元件装置也可能合并有储藏库,在使用泵或其它手段通过加压来输送药物或其它物质之前,该储藏库可用于容纳药物。或者,容纳真皮通路元件的装置可以和这样的附加设施在外部相连。
[00209]真皮内给药方法包括基于显微针的注射和注入体系或任何其他精确靶向到真皮内间隔的方式。真皮内给药方法不但包括基于注射方式的微装置,而且包括其他例如少针或无针的冲击流体或粉末冲击注射到真皮内间隔内,提高通过微装置的离子电渗和控制流体、固体或其他剂型的沉积物到皮肤。
[00210]本发明提供一种输送生物活性剂尤其是诊断剂到受试者皮肤的真皮内间隔的改进方法,包括提供给药装置的步骤,例如图22-24中举例说明的那些东西,包含具有前端针尖的针管和携包含在给药装置中的药剂保持液体流动的针管,还包括围绕针管的限制器部分,限制器部分包括皮肤接合面,针管的针尖从限制器部分伸出超过皮肤接合面的距离等于约0.5mm-3.0mm,针管相对于限制器部分皮肤接合面的水平面具有固定的方位角,***针尖到动物的皮肤内,皮肤的表面与限制器部分的皮肤接合面接合,使得限制器部分皮肤接合面限制针管尖穿透到动物皮肤的真皮层,然后通过针管尖从给药装置排出内容物到动物的皮肤内。
[00211]在其他的优选方案中,本发明包括在患者的皮肤上选择注射部位,在排出生物活性剂之前清洁患者皮肤上的注射部位。另外,该方法包括用生物活性剂尤其是本发明的诊断剂充满给药装置。更进一步地,该方法包括按压对着患者皮肤的限制器部分的皮肤接合面并且施加压力,从而拉伸患者的皮肤,然后在注射药剂之后从皮肤抽出针管。更进一步,***前端针尖到皮肤的步骤进一步地定义为前端针尖***到皮肤约1.0mm-2.0mm的深度,并且最优选地到皮肤1.5mm+0.2-0.3mm的深度。图25-28举例说明本发明的真皮内方式的具体实施例。
[00212]在一优选方案中,***前端针尖到动物皮肤的步骤进一步地定义为成一定角度***前端针尖到皮肤内,通常垂直于皮肤约在十五度内,角度最优选地通常是垂直于皮肤成九十度,(偏差)在约5度内,相对于皮肤接合面的固定方位角更进一步定义为垂直。在优选的方案中,环绕针管的限制器通常具有平坦的皮肤接合面。此外,该给药装置包括的注射器具有圆筒并在圆筒内备有活塞而且活塞被推压以通过针管的针尖从给药装置排出药剂,例如,见图22-24。
[00213]在优选的方案中,从给药装置排出生物活性剂尤其是诊断剂被进一步定义为一只手紧握皮下注射针并且用另一只手的食指压下活塞,然后通过一只手紧握皮下注射针并且用另一只手的拇指压下皮下注射针上的活塞从给药装置排出药剂,***前端针尖到动物皮肤的步骤更进一步地定义为用限制器推压动物的皮肤。另外,该方法可以更进一步地包括把针头部件加到注射器圆筒尖端,所用针头部件包括针管和限制器在内,并且可以包括在加上针头部件之前暴露圆筒尖端的步骤,另外从圆筒尖端除去帽罩。或者,***前端针尖到患者皮肤的步骤可以更进一步地定义为同时地用一只手紧握皮下注射针并推压对着动物皮肤的限制器从而拉伸动物的皮肤,用一只手的食指推压活塞排出药剂或用一只手的姆指推压活塞排出药剂。该方法更进一步地在药物已经把注入到患者的皮肤之后从患者皮肤中抽出针管的前端针尖。更进一步,该方法包括***前端针尖到皮肤,优选约1.0mm-2.0mm的深度,并且最优选1.5mm+0.2-0.3mm的深度。
[00214]优选地,在***针管24(见图22-24)之前,选择并清洁患者皮肤上的注射部位。在选择和清洁部位之后,针管24的前端通常成90度的角度被***患者的皮肤中直到皮肤接合面42接触皮肤为止。皮肤接合面42防止针管42从皮肤真皮层穿过并注入药剂到皮下层。当针管42被***皮肤时,药剂被注入真皮内。可以预装药剂填到注射器60内,或者在前基本上地和仅在制成注射剂之前贮备在其中。实施注射的若干方法变化可能取决于个人偏好和注射器类型的使用。无论如何,由于皮肤接合面42阻止更进一步渗透,针管42的穿透最优选不超过大约1.5mm。
[00215]此外,在真皮内注射给药的过程中,针管42的前端40被嵌入到皮肤真皮层,在注射生物活性剂尤其是本发明的诊断剂的过程中导致适当量的反压。为了到达最小限量强度的压力,使用者必须应用注射器的柱塞杆66,优选小内径的注射器圆筒60例如0.183″(4.65mm)或更小。因此当生物活性剂尤其是诊断剂被排出注射器以完成注射时,本发明的方法包括选择具有足够宽度的内径的注射器用于注射以产生足够克服真皮层反压的力量。
[00216]另外,由于一般采用小容量生物活性剂尤其是诊断剂注射时进行真皮内注射,例如,大约不超过0.5ml,并优选约0.1ml,优选小内径的注射器圆筒60减小死角,它在注射完成后使得在注射器的塞子70和瓶肩之间收集浪费的药剂。还因为药剂的小容量,例如大约0.1ml,优选小内径的注射器圆筒在***塞子的过程中减小在药剂和塞子70之间前面间隔的空气。更进一步地,小内径提高检验能力并显示在注射器圆筒内的药剂容量。
[00217]如图25所示,一只手112可以紧握注射器60并用另一只手116的食指推压活塞114。或者,当一只手持注射器60时,可以通过另一只手116推压活塞66。在每个变化中,推压患者的皮肤,并用限制器26上的皮肤接合面42拉伸。皆不通过一只手112或另一只手116接触皮肤。
[00218]另外的变化具有用于给药本发明真皮内注射的验证作用。此变化包括推压活塞66的同一只手握住注射器60。当活塞被一只手112的拇指120同时推压时,这只手112握住注射器60。当进行注射时,此变化包括用另一只手114拉伸皮肤。或者,如图26所示,当皮肤被另一只手116拉伸时,反握并用一只手112的食指122推压活塞。
[00219]本发明的方法引起所给药的药剂药物动力学的改善。“改善的药物动力学”表示测定时获得药物动力学参数的提高,例如,通过标准药物动力学参数例如最大血浆浓度的时间(Tmax),最大血浆浓度量(Cmax)或最低可检测血液或血浆浓度的时间(Tlag)。通过提高吸收方案,它表示上述药物动力学参数测定时吸收增加或变大。以现有技术常规地完成药物动力学参数的测定和最低有效浓度的测定。与标准给药途径例如皮下给药或肌内给药相比,获得的数值被认为是提高的。在上述的比较中,尽管不一定重要,优选给药到真皮内层并给药到参照位置例如涉及相同剂量水平的皮下给药,例如,给药相同数量和浓度的药剂以及相同的运输载体和按照每单位时间数量和容积相同的给药率。因此,例如,优选在5分钟内以例如100μg/ml的浓度和每分钟100μl的速率将所予药物给药到真皮与在5分钟内以相同的100μg/ml的浓度和每分钟100μl的速率给药相同药剂到皮下间隔相比较。
[00220]上述PK和PD的好处通过真皮毛细管层精确直接靶向最优实现。例如,通过使用小于大约250微米外径和小于2mm浮露长度的显微针***完成。上述的***可以使用不同的材料包括钢、硅、陶瓷及其他金属、塑料、聚合体、糖、生物学与或可生物降解的材料和/或及其化合物的已知方法构成。
[00221]已经发现真皮内给药方法某一性能提供临床上有用的PK/PD和精确剂量。例如:已经发现在皮肤内针头出口的置放显著地影响PK/PD参数。有剖口的常规或标准规格针头出口具有相对大的外露高度(出口的垂直高度)。尽管针尖可能置于真皮内间隔的预定深度,针头出口大的外露高度使得递送的药剂在靠近皮肤表面的浅近深度被沉积。结果,由于皮肤本身的反压作用,药剂趋向流出皮肤并且压力增大使注射或输液的液体聚积并漏入皮肤的低压区,例如皮下组织。也就是说,当被放入真皮内间隔的浅近深度中时,相同外露高度的出口不能有效地密封,有较大外露高度的针出口将在更大的深度仍然有效地密闭。一般地,针头出口的外露高度可以是0到约1mm。外露高度0mm的针出口没有剖口而且位于针的顶端。在这种情况下,出口的深度与针的穿透深度相同。由剖口形成或经针的侧面的开口形成的针出口具有可测量的外露高度。可以认为单针可以具有不止一个适于药剂传递到真皮间隔的开口或出口。
[00222]此外发现在ID给药的过程中控制注射或输液的的压力,可以抵消作用的高反压。在液体交界面上直接置恒定压力可以获得更恒定的传递速度,它可以优化吸收并得到改善的药物动力学。还可以控制传递速度和容积以防止在传递位置形成水疱并且防止反压推动真皮通路元件脱离皮肤和/或进入皮下区域内。仅使用公知技术可以在实验上测定得到这些效果的适当的传递速度和容积。在允许扩大液体分配的多针之间增加间隔并且增加传递速度或加大液体容量。
[00223]用于实现本发明的给药方法包括生物活性剂灌注和输液给药到人或动物受试体。灌注剂量是在相对的短期时间后以单容量单位传递的单剂量,一般小于约10分钟。输液给药包括在相对延长的时限后以所选定的可以是恒定或变化的速率给药,一般大于约10分钟。真皮通路工具被置于接近受试者皮肤用于给药,它在真皮内间隔内提供直接的靶向通路并且传递或给药药剂或多剂到可以局部起效或被血流吸收并有组织地分配的真皮内间隔内。真皮通路工具可以被连接到包含药剂或多药剂的贮库以被传递。
[00224]从贮库传递到真皮内间隔可以被动地,不施加外压力或其他的推进方式,和/或主动地,施加压力或其它的推进方式到被传递的药剂或多药剂。优选压力产生方式的例子包括泵、注射器、笔、弹性膜、气压、压电、电动、电磁或渗透泵或贝氏弹簧或冲洗或其组合。如果需要,通过压力产生方式能可变地控制药剂的输送速度。
[00225]在一些实施例中,本发明包括通过组合在皮肤内传递到两个或更多间隔或深度的优点用于控制给药生物活性剂药物动力学的方法。具体而言,本发明提供了一种用于传递生物活性剂尤其是在此所述的诊断剂到SC和ID浅间隔以获得混合pK方案的方法,它部分类似于通过ID传递获得而且另一个部分类似于通过SC传递获得。这提供了生物活性剂尤其是诊断剂的快速和高峰值的起始水平以及较低地延长药剂的循环水平。上述方法在2003.5.6登记的美国申请号No.10/429,973中公开,在此引入作为参考。在一些实施例中,生物活性剂尤其是诊断剂被给药到一个部位或包括两个或更多间隔的部位。在其他的实施例中,生物活性剂尤其是诊断剂被给药到各自包括一或多间隔的多重部位。
[00226]本发明的方法包括使用具有逻辑元件包括生理模型,基于模型的规则或平均流动法、治疗药物动力学模型、监控信号处理算法、预测控制模型或其组合的算法来控制生物活性剂尤其是诊断剂的给药。
[00227]本发明的方法包括将浅SC和ID给药组合而获得改善的PK结果的方法。这些结果不是单独使用一个传递间隔或另一个能完成的。经特有装置结构和/或计量方法的多重部位沉积可以获得唯一且有益的结果。以下的技术原则在于显微针传递的PK结果是沉积深度和给药液体的模式所特有的,可以经由设计与实施的装置或通过例如ID间隔体液过多的技术控制上述的沉积。
[00228]另外,本发明包括用于SC注射具有小于5mm长度的针(显微或其他)。浅SC传递到大约3mm的深度获得与使用常规技术到深SC大同小异的PK。浅SC传递的单独应用获得更多从未披露过的控制方案。实际上,小于5mm的预定深度已经被视为不在SC内。
[00229]通过装置设计或技术的混合传递产生两相或者混合动力曲线。装置长度(1mm vs.2mm vs.3mm)的微小差别在PK结果上产生明显的差别。类似SC的方案可以由针长度得到,通常采用在ID间隔内定位针的末端。浅SC递送比标准SC递送在PK结果上更一致和均匀。除了别的因素外,通过***针或套出口的深度、出口的外露高度(垂直高度)、给药容量和给药速度控制靶组织深度的限度。本领域的技术人员不用过多的实验可以测定适宜的参数。
[00230]本发明包括在此公开的真皮内给药本发明的组合物和其他给药路线的联合。包括,例如皮下-真皮内界面、鼻内(IN)、肠胃外给药(例如,肌内、腹内、静脉内和皮下)、硬膜外和粘膜(例如,鼻内和口服途径)。该组合物可以通过任何方便的途径给药,例如,通过输液或快速浓注,通过上皮细胞或粘膜皮肤内层吸收(例如,口腔粘膜、直肠和肠内粘膜)和偕其它生物活性剂给药。给药可以是全身或局部的。另外,还可以采用肺部给药,例如,使用吸入器或喷雾器和有雾化剂的制剂。见,例如,美国专利6,019,968;5,985,320;5,985,309;5,934,272;5,874,064;5,855,913;5,290,540;和4,880,078;和PCT申请Nos.WO92/19244;WO97/32572;WO97/44013;WO98/31346;和WO99/66903,在此分别引入作为参考,
5.3.1用于真皮内给药的装置
[00231]使用任何现有技术公知或WO01/02178(2002.1.10公开)和WO02/02179(2002.1.10公开)和WO02/021799(2002.1.10公开),美国专利No.6,494,865,(2002.10.17公开)和美国专利No.6,569,1公开的皮内装置和方法给药生物活性剂,尤其是本发明的诊断剂;在此全部引入作为参考
[00232]优选地,根据本发明的方法用于真皮内给药的装置具有结构上的手段,用于控制皮肤穿透到真皮内间隔内的预定深度。最典型地可以采取与针相连的支持结构或平台形式通过扩大的区域或与真皮通路元件的轴相关的针芯完成。真皮通路元件的显微针长度在制备过程中容易变形,通常制成小于2mm长度。此外显微针非常尖锐而且很小的规格,进一步地降低注射或输液过程中疼痛及其他感觉。它们可以用于本发明作为独立的单管显微针或以线性阵列或二维阵列组合或装配成多重显微针,以便在给定的时间期限内增加传递速度或所传递物质的数量。针可以从末端、侧面或两处俱喷射其内容物。显微针可以结合到各种装置上,例如还可以用于限制穿透深度的固定器和护罩。本发明的真皮通路元件也可以在传递或泵送或在压力下传递药物或其他物质的不同方式之前合并到含内容物的贮库中。或者,固定真皮通路元件的装置可以从外部连接到这样的附加部分。
[00233]真皮内给药方法包括基于显微针的注射和注入体系或任何其他精确靶向到真皮内间隔的方式。真皮内给药方法不但包括基于注射方式的微装置,而且包括其他例如少针或无针的冲击流体或粉末冲击注射到真皮内间隔内,提高微装置的离子电渗和控制流体、固体或其他剂型的沉积物到皮肤内。
[00234]在一些实施例中,本发明提供的给药装置包括用在进行真皮内注射的针部件。针部件备有可附在预注容器例如注射器等等上的接头。针组件由接头支承并具有前端延伸远离接头的中空主体。限制器围绕针并朝针的前端延长远离接头。具有皮肤接合面的限制器可以被用于接触动物例如人的皮肤。针前端延长远离皮肤接合面所选距离,使得限制器限制针穿透动物皮肤的数量或深度。
[00235]在特定的实施例中,用在本发明方法中的皮下注射针部件包括实现本发明必需的组件,传递生物活性剂包括诊断剂到受试者皮肤的表层,优选人受试者的皮肤,包括提供给药装置的步骤,包含具有前端针尖的针管和与包含在给药装置中的药剂保持液体流动的针管,还包括围绕针管的限制器部分,限制器部分包括皮肤接合面,针管的针尖从限制器部分伸出超过皮肤接合面的距离等于大约0.5mm-3.0mm,针管相对于限制器部分皮肤接合面的水平面具有固定的方位角,***针尖到动物的皮肤内,皮肤的表面与限制器部分的皮肤接合面接合,使得限制器部分皮肤接合面限制针管尖穿透到动物皮肤的真皮层,然后通过针管尖从给药装置排出内容物到动物的皮肤内。
[00236]在一特定的实施例中,本发明包括如图22-24所公开的一种药物给药装置,举例说明,药物给药装置可用于实践本发明的方法以完成图25-28所说明的真皮内注射。图22-24描述的装置10包括可以附加于注射器圆筒60的针部件20。可以采用的给药装置其它形式包括美国专利No.5,279586,美国专利申请No.09/027,607和PCT申请No.WO00/09135所公开的笔类型,在此全部引入作为参考。
[00237]针部件20包括支承针管24的针芯22。限制器26容纳至少针芯22的一部分使得限制器26通常环绕针管24,宜见图22。
[00238]针芯22的一端30能够固定到注射器的接收器32。根据本发明用于包含被真皮内传递的内容物的各种注射器类型可以采用针组合式样,下列给出若干例子。针芯22的相反端优选包括在限制器26内嵌套接触支承面36的外延部分34。优选在限制器26上提供大量的肋纹38以具有结构完整性并便于持握针部件20。
[00239]通过适当设计该部分的尺寸,在前端或针24的尖端40和限制器26上的皮肤接合面42之间距离“d”可以紧密地被调节。距离d″优选在约0.5mm到约3.0mm的范围内,并且大多数优选约1.5mm±0.2mm-0.3mm。当针管24的前端40延长超过皮肤接合面42的距离在上述的范围内时,由于针不能穿透比动物一般真皮层更厚的深度而确保真皮内注射。典型地,皮肤外层表皮具有50-200微米的厚度和皮肤内部厚层真皮具有1.5-3mm的厚度。按此顺序,真皮层下面是皮下组织(有时也被认为是真皮下组织层)和肌肉组织。
[00240]如宜见图22,限制器26包括针管24伸出的前端40从中伸出的开口44。根据特殊位置的要求可以调节开口44和前端40之间的尺寸关系。在举例说明的实施例中,皮肤接合面42通常是平坦的或是平面并且持续提供对着动物皮肤的针部件20稳固的置放。尽管没有特定说明,有利的是已有通常平坦的皮肤接合面42包括以肋纹形式增加的部分或凹槽形式的凹进部分以便增强稳定性或者便于针的附属装置保护针尖40。另外,沿着限制器26侧面的肋纹38可以延长超过皮肤接合面42的平面。
[00241]无论皮肤接合面42的形状或轮廓,优选的方案通常包括接触皮肤足够平坦或平整的表面积便于相对于患者皮肤的注射器稳固。在最优选的方案中,皮肤接合面42便于保持注射器以通常垂直的方向相对于皮肤表面并便于在注射的过程中施加对皮肤的压力。因此,优选的方案中,限制器具有至少5mm的尺寸或外径。主要尺寸取决于应用和包装限制,但适当的直径是小于15mm或更优选11-12mm。
[00242]重要的是注意到,尽管图22和23举例说明针芯22从限制器26分开的上下两件的部件,但是,用在本发明中的装置不受此方案的限制。对图22和23中所示的实例,从单块的塑料材料整体地制成针芯22和限制器26是可以替换的。另外,在图24中所述的位置上有可能黏附或相反地固定针芯22到限制器26以便针部件20在部件上成为单片部件。
[00243]具有针芯22和限制器26提供的优点是使得真皮内注射针适于制造。优选的针尺寸是小规格的皮下注射针,熟知的是30号或31号针。具有这样小直径的针存在的难题是制造足够短的针以防止过度穿透过动物的真皮层。限制器26和针芯22便于应用总长度大于针的有效长度的针24,它在注射过程中穿透个体组织。采用按此方法设计的针部件,制造力提高因为更长的针在制造和装配过程中可以持握,同时仍然得到便于完成真皮内注射的短针的优点。
[00244]图24说明针部件20固定到药物容器例如注射器60上组成装置10。通常圆柱形的注射器主体62按照现有技术用塑料和玻璃制成。注射器主体62提供在注射过程中包含被给药内容物的贮库64。如现有技术柱塞杆66在一端有手调激活轮缘68,在相反端带有塞子70。贯穿贮库64的柱塞杆66的手动推动使贮库64内容物依照要求从针的末端40排出。
[00245]针芯22可以用各种已知的方式固定到注射器主体。在一个实例中,内部的针芯22和外部的注射器主体62出口部分72之间提供紧配合。在另一个实例中,常规Luer方案使得针芯22固定在注射器60的末端上。如从图6可以理解,这样所设计的针部件易于适合多种的常规注射器式样。
[00246]此发明提供一种适用于各种注射器类型的真皮内注射针注射器。因此,此发明提供了便于以经济的方式在大规模生产上制造和组装真皮内注射针的重要优点。
[00247]在***针管24之前,选择并清洁动物皮肤上的注射部位。在选定并清洁该部位之后,针管24的前端40通常成90度的角度***动物的皮肤中直到皮肤接合面42接触皮肤为止。皮肤接合面42防止针套42从皮肤真皮层穿过并且注射内容物到皮下层。
[00248]当针套42被***皮肤时,内容物被注入真皮内。内容物可以预填充到注射器60内,或者在注射之前即刻或贮备在其中。实施注射的若干方法变化可能取决于个人偏好和注射器类型的使用。无论如何,针套42的穿透最优选不超过约1.5mm因为皮肤接合面42阻止更进一步穿透。
[00249]此外,在真皮内注射给药的过程中,针套42的前端40被嵌入到皮肤真皮层,在注射内容物的过程中引起适量的反压。反压可以是在每平方英寸76磅的状态。为了到达最小限量强度的压力,使用者必须给注射器,优选小内径的注射器圆筒60例如0.183″(4.65mm)或更小的柱塞杆66施力。因此本发明的方法包括选择用于注射的具有足够宽度内径的注射器以产生足够克服当内容物被排出注射器以完成注入时真皮层反压的力量。
[00250]另外,由于一般采用小容量待注射物质进行真皮内注射,例如,大约不超过0.5ml数量级,并优选约0.1ml,优选小内径的注射器圆筒60以减小死角,它在注射完成后使得在注射器的塞子70和瓶肩之间留有浪费的药剂。还因为药剂的容量小,例如大约0.1ml数量级,优选小内径的注射器圆筒,以在***塞子的过程中减小在药剂和塞子70之间前面间隔的空气。更进一步地,小内径提高检验能力并显示在注射器圆筒内的药剂容量。
[00251]如图22-24所示,一只手112可以紧握注射器60并用另一只手116的食指114挤压活塞66。或者,如图8-10所示,当一只手持注射器60时,可以通过另一只手116的拇指118挤压活塞60。在每一变化中,推压动物的皮肤,并用限制器26上的皮肤接合面42拉伸。第一只手112或另一只手116皆不接触皮肤。
[00252]另外的变化具有供本发明真皮内注射给药的验证作用。此变化包括推压活塞66的同一只手握住注射器60。图22表示一只手112握住注射器60,而这只手112的拇指120同时推压活塞。当进行注射时,此变化包括用另一只手拉伸皮肤。或者,如图22所示,当皮肤被另一只手116拉伸时,反握并用一只手112的食指122推压活塞。然而,可以认为用手拉伸皮肤是不必要的并且仅仅表示变化超出使用标准技术的习惯。
[00253]在如上所述的每个变化中,仅***针管24大约1.5mm到动物的皮肤内。在给药该注射剂之后,从皮肤中拔出针管24并且以适当方式抛弃注射器60和针部件20。每一变化应用在临床试验上以测定针部件20和所介绍的真皮内注射给药方法两者的有效性。
6.实施例
[00254]下列实施例是举例说明,并不应当被视作限制本发明的范围。例如熟练技术人员想到的那些适当变化在此可以作出而不背离本发明的范围。
6.1染色法和体内示踪
[00255]材料和方法。在IACUC协议批准下实施体内细胞染色和所有下列试验。6-8星期大小的Balb/c小鼠(Charles RiverLaboratories Raleigh,NC)被麻醉(异氟烷、Abbott Laboratories,Chicago,IL)并且使用34号针的标准注射器真皮内注入1%的伊文思蓝染液。注射后一小时解剖鼠并观察染料的位置。小鼠和人一样具有若干易于检测引流***的主要类群。
[00256]结果。图1说明腹股沟***被靶向注射。图2表明腹股沟浅***被染料高度着色。在注射部位残留的染料还没有被运送到***。因此,注射一小时后,经暗着色所证实,染料显然已经被转运到***。
6.2染料着色和体内追踪:SC和ID传递的比较(实施例1A)
[00257]材料和方法。体内细胞染色和下列所有试验经过IACUC协议批准实施。一头20-25kg的约克夏猪(Charles RiverLaboratories,Raleigh,NC)被麻醉(异氟烷,Abbott Laboratories,Chicago IL)并用1%伊文思蓝染液(1)真皮内注射,与皮肤垂直使用34号1mm长度针的标准注射器;或(2)皮下注射,以约30度的角度皮下使用25号/半英寸(14mm)的针(深度约7mm)的标准注射器。如图2B所示,在猪左背侧面膈膜以下紧接着另外一个进行注射。在ID注射的过程中肉眼观察注意染料从注射部位直接转运,朝局部的引流***腹股沟结移动。通过皮肤可见该转运而且非常迅速地以高达每秒10cm的速度穿透组织。对皮下注射的染料的直观检查表明染料没有明显的转运。猪被无痛处死并且注射后10分钟解剖然后观察染料的位置。
[00258]结果。如图2C到2D证实,ID注射染料迅速地通过淋巴脉管***移动到腹股沟结,而皮下注射染料保留在注射部位并且不转运到腹股沟结。因此,用于药剂快速靶向给药到淋巴***,ID注射显然优于皮下(注射)。
6.3抗体染色和流式细胞计量术(实施例2)
[00259]材料和方法。该模型采用标有大鼠抗-CD90(T细胞标记)抗体的荧光素(FITC)。CD90是存在于成熟T淋巴细胞上的标记。此试剂提供在体内特定地标记驻留在***的细胞的可能。在背面使用34G 1mm针/导管装置经由单次快速灌注真皮内注射引入抗体。随时间的过去通过流式细胞计量术和相应组织切片的组织学检查监测抗体到腹股沟***的运送(见实施例3)
[00260]如上所述,麻醉6-8星期大小的Balb/c小鼠,使用大鼠抗-CD90 CD90(T细胞标记)单克隆抗体(克隆30-H12Pharmingen,BD Biosciences,San Jose,CA,特定用于胸腺细胞、T淋巴细胞和一些树状细胞)以1μg/每克小鼠,采用34G真皮内装置(针/导管构型)快速灌注方式真皮内注射总量50μl(20-25μls/脱毛小鼠的背下侧)。注射后在适当时候处死小鼠,然后除去腹股沟***及其他适宜的组织(脾、胸腺、肾)并且准备流式细胞计量术分析或组织学检查(实施例3)。抗体数量可以低至5μg/小鼠。
[00261]组织置于含10ml冷RPMI缓冲液(RPMI 1640,5%FBS、1%Pen/Strep 0.5%β-巯基乙醇,Invitrogen Life Technologies,Carlsbad CA)的陪替氏培养皿用于***、胸腺和肾的流式细胞计量分析。脾置于10ml冷红细胞溶解缓冲液(0.16MNH4Cl(Sigma,St.Louis,MO,10mM KHCO3)。在无菌条件下经200μ网筛过滤组织制备单细胞悬浮液(VWR Scientific Products,West Chester,PA)。使用最终细胞溶液的1∶20稀释液统计细胞。在4℃以1500rpm离心细胞15分钟。吸取上层清液,然后用5ml RPMI缓冲液冲洗细胞一次,尽早离心。吸取上层清液,然后细胞再悬浮在2-4×108细胞/ml的Pharmingen染色缓冲液中(Pharmingen,BD Biosciences,San Jose,CA)用于流动染色。25μl约1×107细胞的再悬浮细胞被加至96孔的培养皿中。25μl的染色混合物被加至孔中的细胞并通过移液管混合。该混合物由下列每个在Pharmingen染色缓冲液中0.01mg/ml的标记抗体组成CY5PE-MAC1(Caltag Laboratories Burlingame,CA)、CY5PE-GR1、APC-CD19、PE-CD4、APC-Cy7-CD8(Pharmingen,BDBiosciences,San Jose,CA)。
[00262]细胞/染料混合物在黑暗中4℃下培养1小时。用150μls的FacsFlow缓冲液(Pharmingen)冲洗孔并以1500rpm在4℃离心5分钟。吸取上层清液然后重复冲洗。冲洗过的细胞再悬浮在1ml的冷FacsFlow缓冲液并在黑暗中保持冷冻直到使用FACS Vantage SE通过流式细胞计量术分析为止。细胞分析分选粒细胞和巨噬细胞。
[00263]除去***并且在体外连同供B细胞鉴别反应的CD19一起使用T细胞标记CD4和CD8染色细胞用于分析。注射的抗体含Fc区并且预期在B细胞上接合Fc受体。
[00264]结果。由流式细胞计量术得到图3A和3B所示的结果并且表示在仅15分钟内,抗体从真皮内隔室快速转运到***,在T细胞上连续结合CD90分子然后通过Fc受体被B细胞吸收。以大于20%的频率观察FITC+细胞直至2小时。结合标记抗体的细胞百分比随着时间的过去波动如循环T细胞流入然后流出***。直到在注射后6-10小时为止,不会在脾内发现抗体标记的细胞。标记抗体皮下给药的尝试遇到混淆的结果是环绕***的组织包含抗体的高背景信号并且不能区别于特定的***信号。常规的观测数据表明与皮下给药相比真皮内给药的吸收和信号更强。
6.4组织学检测(实施例3)
[00265]材料和方法。通过组织学检查在每个时间点检测如实施例2得到的引流腹股沟***组织切片。采集的组织制备成在OCT介质中的冷冻切片(Triangle Biomedical Sciences Durham NC)。样本在干冰/2-甲基丁烷中快速冷冻然后在-80℃下贮存直到切片。以12微米的深度将组织连续切片并且粘附在聚-L-赖氨酸(Sigma)的涂层玻璃载玻片上。粘合的组织切片进行溶血素(Sigma)和伊红Y(Sigma)染色并且在VectaMount溶液中嵌好(Vector Laboratories,Burlingame CA)然后干燥。使用Nikon Eclipse TE300共焦显微镜实施显微镜检验。
[00266]结果。用苏木精和曙红(H&E)染色切片然后在显微镜下的检查。图4a-4c表示注射荧光素标记的抗-CD90抗体一个小时后小鼠的***组织。如此所证实,注射的荧光抗体在体内(图4A)结合到组织中的细胞上表明它一直保持生物活性和信号。小鼠模型说明诊断剂成功的靶向给药到淋巴***。
6.5在皮肤中以不同深度、容量和速度施用染料(实施例4-9)。
[00267]材料和方法。下列试验经过IACUC协议批准实施。大约20-25公斤的约克夏猪(Charles River Laboratories,Raleigh,NC)被麻醉(甲苯噻嗪4mg/kg,赛拉嗪2mg/kg和***2mg/kg并在2%异氟烷中维持)然后使用标准注射器和34号针用1%伊文思蓝(EB)染液以不同容量和针穿透深度真皮内注射。人为控制注射容量和速度或用Harvard Apparatus PhD 2000程序控制泵控制。
[00268]包括注射材料和周围组织的注射部位的皮肤在注射后立即切除。组织在干冰/2-甲基丁烷中快速冷冻然后在-80℃下贮存直到切片。经由针***点纵向地切开冷冻组织然后立即显微检查和拍照。使用具有Nikon FX 35PX 35mm照相机架的Nikon SMZ-U解剖显微镜实施显微镜检验。或者,在注射后,猪被无痛处死然后切除组织并拍照。
6.5.1使用34G,1.0mm针以45μl/min的速度ID给药50μl(实施例4)
[00269]麻醉后的约克夏猪在一侧胁肋通过34G,1.0mm针以45μL/min的速度真皮内注射50μl的EB。切除注射部位2cm2的切片然后如上所述处理。结果如图9所示。真皮网织层内的环形区域从主要注射贮库分离出来,表示引流***的纵向切片(蓝色)
6.5.2使用34G,1.0mm针以45μl/min速度ID给药100μl(实施例5)
[00270]麻醉过的约克夏猪在一侧胁肋通过34G,1.0mm针以45μL/min的速度真皮内注射100μl的EB。切除皮肤部位,在甲基丁烷中快速冷冻然后沿针***点纵切。结果如图10和11所示。在图10中,在主要注射部位右边的真皮网织层内环绕蓝色区域表示引流***纵向的切片。相反,在相同的圆周内(红斑)显示了真皮***层下的毛细血管。在图11中,在注射部位的周围至少五个清晰的区域内可以看到***(蓝色斑点)。
6.5.3用34G,1.0mm针以100μl/min的速度ID给药100μl(实施例6)
[00271]麻醉后的约克夏猪,在一侧胁肋两个部位上通过34G,1.0mm针以100μl/min的速度真皮内注射100μl EB。在切除前让贮库在皮肤中保留5分钟。结果如图12和13所示。在图12中,通过猪的皮肤可以清楚地看到***(蓝色),从注射点向引流***转移(在白色的纱布下)。在图13中,外科切除证实在切除的组织样本中和在图12中预先看到的引流路径。
6.6用34g,1.5mm的针以100μl/min的速度ID给药100μl(实施例7)
[00272]麻醉后的约克夏猪在一侧胁肋通过34G,1.5mm的针以100μl/min的速度真皮内注射100μl的EB。注射后立即切除注射部位周围2cm2的部分,在甲基丁烷中快速冷冻然后沿注射点纵切。如图14所见,EB从针管穿过并且开始在真皮内间隔产生压力。当足够压力产生时,淋巴脉管***打开同时维持EB的快速转运直到EB传递结束为止。图14说明由1.5mm注射(圆圈)可以看到***的实施例。
6.7用34G,2mm的针以45μl/min ID给药50μl(实施例8)
[00273]麻醉后的约克夏猪在一侧胁肋通过34G,2mm针以45μl/min速度真皮内注射EB50μl。在注射后立即切除注射部位周围2cm2的部分,在甲基丁烷中快速冷冻然后沿针***点纵切。结果如图15所示。
6.8用34G,1mm的针/导管ID给药200μl(实施例9)
[00274]麻醉过的约克夏猪用34G,1mm的针/导管在右蹄人工真皮内注射200μl的EB。几秒种内,染料从注射部位移动到引流的腹股沟***;通过皮肤可以看到移动速度,大约20cm/秒。注射后20分钟切除从注射部位到引流腹股沟***的组织表明通过淋巴脉管***远程运送到深处组织。结果如图16所示。
6.9微球给药到皮肤(实施例10)ID V.SC
[00275]下列实例描述与皮下给药相比,真皮内给药用于靶向局部淋巴***的优点。
[00276]材料和方法。体内微粒注射和下列的试验经过IACUC协议批准实施。6-8星期,16-20g大小的Balb/c小鼠(Charles RiverLaboratories Raleigh,NC)被麻醉(异氟烷、Abbott Laboratories,Chicago,IL)并且注射(1)芒图氏类型采用荧光素标记的微球(Spherotech Inc.Libertyville,IL)50nm,100nm,1μm或10μm的规格用作背部真皮内注射的快速灌注,使用34G,1mm长度的真皮内装置(针/导管构型)或(2)使用30G针,半英寸/注射器装置背侧皮下快速灌注总量60μl(30μl/脱毛小鼠的背下侧)。不同大小则给药微球的数量不同。然而,各自放置微球在内的所有小鼠容纳相同数量的微球。注射后在适当时候处死小鼠,然后除去腹股沟***并且准备流式细胞计量术分析。
[00277]为了流式细胞计量术分析,组织置于含10ml冷无菌H20的陪替氏培养皿中以便细胞溶解。在无菌条件下经200μ网筛滤过搅碎组织制备单细胞悬浮液(VWR Scientific Products,West Chester,PA)产生细胞/微球悬浮液。在4℃以1500rpm离心细胞/微球悬浮液5分钟。吸取上层清液,然后沉淀小团再悬浮在Pharmingen facsflow缓冲液中(Pharmingen,BD Biosciences,San Jose,CA)并且在黑暗中继续冷冻直到使用FACS Vantage SE通过流式细胞计量术分析为止。分析是用于荧光信号的检测并且计数出现在样品中的微球的数量。
[00278]结果。图17所示的结果表明对于所有测试过大小的微球,经真皮内递送微球到***的改进超过皮下注射。
6.10特效试剂ID对SC传递到脾组织的比较
[00279]在此附上靶向真皮内(ID)给药优点的附例。此实例表示ID靶向制剂给药到脾与皮下给药相比的改进/增强。
[00280]材料和方法。
[00218]动物管理:下列实验经过IACUC协议批准实施。6-8星期大小,16-20g的Balb/c小鼠(Charles River Laboratories,Raleigh NC)被麻醉(acepromozine、甲苯噻嗪、***)然后使用标准注射器和34号(34G)1mm针/导管真皮内注射(ID)(改进的芒图氏试验)或使用标准注射器和27号的针皮下注射(SC)。
[00282]荧光抗体注射。麻醉过的6-8星期大小的Balb/c小鼠如上所述用20μgs异硫氰酸荧光素FITC)标记大鼠抗-CD90(T细胞标记)单克隆抗体(克隆30-H12pharmingen,BD Biosciences,San Jose,CA,特定地用于胸腺细胞、T淋巴细胞和一些树状细胞)单次快速灌注方式注射总量50μls(20-25μls/脱毛小鼠的背下侧)。在注射后适当时候处死小鼠,然后除去脾并且准备流式细胞计量术分析。
[00283]流式细胞计量术:为了流式细胞计量术分析,组织置于含10ml冷红细胞溶解缓冲液(0.16M NH4Cl(Sigma St.Louis,MO),10ml KHCO3)中。在无菌条件下经200μ网筛滤过搅碎组织制备单细胞悬浮液(VWR Scientific Products,West Chester,PA)。使用最终细胞溶液的1∶20稀释液统计细胞。在4℃以1500rpm离心细胞15分钟。吸取上层清液,然后用5ml RPMI缓冲液冲洗细胞一次,尽早离心。吸取上层清液,然后细胞再悬浮在2-4×108细胞/ml的Pharmingen染色缓冲液中(Pharmingen,BD Biosciences,San Jose,CA)用于流动染色。约1×107细胞,25μl的再悬浮细胞被加至96孔的培养皿中。染色混合物,25μl被加至孔中的细胞并通过移液管混合。该混合物由下列每个在Pharmingen染色缓冲液中适当地为0.01mg/ml的标记抗体组成CY5PE-MAC1(Caltag Laboratories Burlingame,CA)、CY5PE-GR1、APC-CD19、PE-CD4、APC-Cy7-CD8(Pharmingen,BD Biosciences,San Jose,CA)。细胞/染料混合物在黑暗中4℃下培养1小时。用150μls的FacsFlow缓冲液(Pharmingen)冲洗孔并以1500rpm在4℃离心5分钟。吸取上层清液然后重复冲洗。冲洗过的细胞再悬浮在1ml的冷FacsFlow缓冲液并在黑暗中保持冷冻直到使用FACS Vantage SE通过流式细胞计量术分析为止。细胞分析分选粒细胞和巨噬细胞。
[00284]结果:图18表示在小鼠的脾上,注射后随着时间的过去注射的CD90-FITC抗体结合到T细胞。脾上抗体的初始出现是在注射1小时后。延迟信号可以归咎于试验所用的深度麻醉。然而,ID注射过的小鼠中注射后抗体标记过的细胞百分比一直高于SC注射过的小鼠,表明不但是经ID注射可到达脾并且组织生物利用率更高。
6.11测心绿成像剂的传递(靛氰绿;″ICG″)
[00285]在此附上的是用于测心绿(靛氰绿″ICG″)传递的真皮内靶向给药应用附例,靛氰绿是被批准用于临床应用的体内成像剂。此实例表示在上述专利中所述的靶向给药应用。此实例补充在前的实施例表示伊文思蓝给药到猪并表示近红外的(NIR)染料的给药、淋巴流速和节省的剂量(dose sparing)。
材料和方法
[00286]动物管理:全部的实验经过IACUC协议批准实施。大约20-25公斤的约克夏猪(Charles River Laboratories,Raleigh,NC)被麻醉(telazol/赛拉嗪/***混合(35,17.5,17.5mg/kg各自地,继之以连续吸入异氟烷)然后使用标准34G,1mm的针/导管和标准注射器真皮内注射。使用27G,半英寸针实施静脉注射并通过静脉导管传递。在整个过程中所有恢复的猪***管并且水合。
[00287]染料注射:如上所述ID注射约克夏猪,使用无菌水中200μl的250mg/ml靛氰绿(ICG)(Fluka Chemical Corp.Milwaukee,WI)。注射部位包括右后腿和左侧***链的第一个和第二个***。为了测定淋巴流速,额外注射200μl和75μl的80μg/ml的靛氰绿。如上所述用5ml的2.5mg/mL ICG施行静脉注射。
[00288]图象采集:使用备有750nm激励滤光器(Omega Optical,Brattleboro,VT)的钨丝灯(Dolan Jenner Lawrence MA),备有790nm长通发射过滤器(Omega Optical)的CCD摄像机(KowaCo.,Supercircuits CCTV camera model b/w Hi-Res ExVision)和Canon ZR-20微型-DV摄录机获得近红外图像。从注射开始直到注射后40分钟获取图像。使用Adobe Premier v6.01编辑软件处理图像。通过***输液的速度取决于薄膜厚度(film footage)。
[00289]结果:如此所证实,图像表示得到淋巴脉管***的精确靶向。(图19-21和29A和B)***和***易于显现。通过***的速度受注射量、输液速度和输液材料特性的影响。以80μg/ml ICG的浓度,测定通过***的速度为5-10cm/秒。另外,观察节省剂量的效果(图20和21)。静脉注射12.5mgs的ICG,同时照明循环的脉管***,不照明***或任何***。ID注射少于一千倍的ICG,6和16μg,照明淋巴脉管***和引流腹股沟***。这些结果表现出成像剂ID递送可改善敏感性并同样地表明当使用先进的成像技术时,进一步降低药量可以用于得到期求的结果。
6.12ID和芒图氏注射的比较
[00290]在此附上的是靶向真皮内(ID)给药优点的附例。这些实施例表示靶向给药的改进/增强超过目前芒图氏注射实际应用。
[00291]材料和方法。下列实验是经IACUC协议批准实施。大约20-25kg的约克夏猪(Charles River Laboratories,Raleigh,NC)被麻醉(甲苯噻嗪4mg/kg,赛拉嗪2mg/kg,和***2mg/kg和2%异氟烷维持)和采用34G 1mm针真皮内或者使用27G针的标准芒图氏注射器注射1%伊文思蓝(EB)染液。人为控制注射量和速度或使用Harvard Apparatus PhD 2000程序控制泵控制。
[00292]包括注射的材料和周围的组织的注射部位的皮肤在注射后立即切除。组织在干冰/2-甲基丁烷上快速冷冻然后贮存在-80℃直到切片为止。沿针***点纵切冷冻的组织然后立即显微检查和拍照。使用带NikonFX 35PX 35mm照相机支架的Nikon SMZ-U解剖显微镜实施显微镜检查。
[00293]在三头麻醉的约克夏猪的一侧胁肋经由34G,1.0mm针以45μl/min的速度真皮内注射25μl的EB或者用27G针作标准芒图氏注射。切除注射部位周围2cm2的部分并且如上所述处理。实施各种注射总共三次。在皮肤内的贮库宽度、高度和总深度进行测定和用t-Test(两样本假定不等方差)计算数据。
[00294]结果。34G,1mm针ID注射的平均数具有显著(p=0.05)小于芒图氏注射的宽度。由于组织的低密度,预计在SC间隔内宽度更大。注射后区域内的注射液趋向仅在真皮下横向扩散。在注射的总高度之间没有显著差异(p=0.45)。然而,组织样本内的深度表现出显著差异(p=0.03)。1mm针头的平均较低深度小于芒图氏注射。
[00295]结果表明在芒图氏和34G真皮内注射之间的显著性差别(见图30)。34G 1mm针在浅层给药化合物,与标准芒图氏方法可以完成的相比较,更多地重复进入到ID间隔内。
6.13输液压差作为针***深度和组织环境的函数
[00296]这些实例表明ID给药所观察到的差别作为输液压力、针***深度和组织环境的函数。
材料和方法:
[00297]动物管理:所有的试验经IACUC协议批准实施。大约20-25kg的约克夏猪(Charles River Laboratories,Raleigh,NC)被麻醉(telazol/甲苯噻嗪/***混合物(分别为35,17.5,17.5mg/kg)和2%异氟烷维持)然后采用34G 1.0、1.5、2.0或3.0mm针/导管和500μl Hamilton注射器真皮内注射(90度)。导管包含WPI压力计以测定注射压力。使用Harvard Apparatus PhD 2000程序控制泵控制注射量和速度。在整个过程中所有恢复的猪***管和水合。
[001]如上所述麻醉过的猪以100μl/小时速度注入100μl的盐水/注射。在背侧和腹侧完成注射。用各个针结构实施多次注射(4)并且在整个注射过程中连续地记录压力测量值。
[00298]结果:图31A和B描述作为针深度函数的所记录的最大和持续压力平均数。如图31所示,在真皮内输液的过程中传递压力取决于由针长度控制的穿透深度。使用1和1.5mm针的输液具有最高的压力而在(使用)2和3mm针的时候记录下较低的压力。可以发现高压注射伴随有典型的气泡形成(皮肤膨胀和变苍白)而低压注射较少或没有气泡。这些压力差主要起作用的因素是真皮内组织对皮下组织的液体沉积。由于针的深度接近然后达到皮下组织时输液压力降低。观察到背侧区域的皮肤与腹侧区域相比较提供更大的输液阻力;然而随针深度增加,两个区域阻力减少的趋势相同。表1表示使用不同长度的34号的针在体内真皮内输液的过程中背压的概况。
表1.在体内真皮内输液的过程中使用不同长度的34号针的反压力。
压力(mmHg)
深度(mm) | 腹侧持续值 | 腹侧最大值 | 背侧持续值 | 背侧最大值 |
11.523 | 367321202103 | 1014552440329 | 19971372315 | 27831575336 |
6.14给药抗体混合物到淋巴***
[00299]这些实施例表示单克隆抗体混合物的ID给药及其在引流***中结合到靶细胞。此外,撰写方法部分用于解释已在专利中的CD90-FITC的单一的单克隆抗体注射或者如这里给药的混合物。
材料和方法:
[00300]
动物管理:所有的试验经IACUC协议批准实施。6-8星期大小16-20g的Balb/c小鼠(Charles River Laboratories Raleigh,NC)被麻醉(异氟烷、Abbott Laboratories,Chicago,IL)并且使用34号1mm的针/导管的标准注射器真皮内注射(改良的芒图氏法)。
[00301]
荧光抗体注射。麻醉的6-8星期大小的balb/c小鼠,如上所述用总共20μg的异硫氰酸荧光素(FITC)标记大鼠抗CD90(T细胞标记)单克隆抗体(克隆30-H12 pharmingen,BD Biosciences,San Jose,CA,特定用于胸腺细胞、T淋巴细胞和一些树状细胞)或FITC大鼠抗-CD90和藻红蛋白(PE标记大鼠抗-CD19(B细胞标记,克隆1D3 Pharmingen,BD Biosciences,San Jose,CA,特定用于所有发育阶段的B淋巴细胞)的混合物,单克隆抗体混合物的(10∶8μg各自地总数)按快速灌注方式使用34G真皮内装置(针/导管配置)真皮内注射总量50μl(20-25μl/脱毛小鼠的背侧)。注射后在适当的时间处死小鼠,取出腹股沟浅***及其他适当的组织(脾、胸腺、肾),然后准备流式细胞计量术分析或组织学检查。
[00302]
流式细胞计量术:为了流式细胞计量术分析,组织置于含10ml冷RPMI缓冲液(RPMI 1640,5%FBS,1%Pen/Strep,0.5%β-巯基乙醇,Invitrogen Life Technologies Carlsbad,CA)的陪替氏培养皿用于***、胸腺和肾的分析。脾置于10ml冷红血球溶解缓冲液(0.16M NH4Cl(Sigma,St.Louis MO)10mM KHCO3)中。在无菌的情况下经200μ的网筛滤过搅拌组织制备单细胞悬浮液(VWRScientific Products West Chester,PA)。从最终的细胞溶液中使用1∶20稀释液进行细胞统计。在4℃以1500rpm离心细胞15分钟。吸取上层清液,使用5ml RPMI缓冲液冲洗细胞一次,尽早离心。吸取上层清液,细胞再悬浮在pharmingen染色缓冲液(Pharmingen,BDBiosciences San Jose,CA)以2-4×108细胞/ml用于流动染色。25μl约1×107细胞的再悬浮细胞被加至到96孔的培养皿。25μl染色混合物被加至孔中的细胞并且用移液管混合。该混合物由下列每个在Pharmingen染色缓冲液中0.01mg/ml的标记抗体组成:CY5PE-MAC1(Caltag Laboratories Burlingame,CA),CY5PE-GR1、APC-CD19(CD90仅注射小鼠和对照)、PE-CD4、APC-Cy7-CD8(Pharmingen,BD Biosciences,San Jose,CA)。幼鼠用上述标记抗体以及FITC-CD90染色。
[00303]黑暗中在4℃培养1小时细胞/染料混合物。用150μlFacsFlow缓冲液(pharmingen)冲洗孔并在4℃以1500rpm离心5分钟。吸取上层清液然后反复冲洗。冲洗过的细胞再悬浮在1ml冷FacsFlow缓冲液中并继续在黑暗中冷冻直到采用FACS Vantage SE通过流式细胞计量术分析为止。细胞分析分选粒细胞和巨噬细胞。
[00304]结果:图32表明在小鼠的引流***体内标记的T和B细胞。体内染色对照表明可利用的T和B细胞数目各自是80和9%。在此测定的情况不染色***中所有可利用的细胞,抗体浓度不优化,但观察到使用单克隆抗体混合物的体内染色特异性。
Claims (61)
1、将至少一种生物活性剂应用于人患者的方法,该方法包括将该活性剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,从而与将该活性剂传送至更深组织腔隙相比,这样传送的活性剂在特定组织中具有更高的组织生物利用度。
2、权利要求1的方法,其中更深的组织腔隙是皮下腔隙。
3、权利要求1的方法,其中更深的组织腔隙是肌内腔隙。
4、权利要求1的方法,其中在每50ug特定组织中蓄积的该活性剂为约10pg-约30ng。
5、权利要求1的方法,其中在每50ug特定组织中蓄积的该活性剂为约10pg-约15μg。
6、权利要求1的方法,其中在每50ug特定组织中蓄积的该活性剂为约1cg-约30ng。
7、将至少一种诊断剂应用于人患者的方法,该方法包括将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,从而与将该诊断剂传送至皮下腔隙相比,这样传送的诊断剂起效更快。
8、将至少一种诊断剂应用于人患者特定组织的方法,该方法包括将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,从而与将该诊断剂传送至皮下腔隙相比,这样传送的诊断剂预选剂量沉积在特定组织中的量升高。
9、将至少一种诊断剂应用于人患者的方法,该方法包括将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,从而与通过I D芒图氏方法传送该诊断剂相比,这样传送的诊断剂具有更高的组织生物利用度。
10、将至少一种诊断剂应用于人患者的方法,包括将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,与通过ID芒图氏方法传送该诊断剂相比,这样传送的诊断剂起效更快。
11、将至少一种诊断剂应用于人患者特定组织的方法,该方法包括将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,与通过ID芒图氏方法传送该诊断剂相比,这样传送的诊断剂预选剂量沉积在特定组织中的量升高。
12、将至少一种生物活性剂应用于人患者特定组织的方法,该方法包括将该活性剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,以便将该活性剂沉积在特定组织中,其中该活性剂特异性识别此特定组织中存在的细胞。
13、应用一种制剂的方法,该方法包括将该制剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,以便将该制剂沉积在特定组织中,其中该制剂包括第一种靶向制剂和第二种制剂,这样使第一种靶向制剂可特异性识别此特定组织中存在的细胞。
14、将至少一种用于乳腺肿瘤检测的诊断剂应用于人患者的方法,该方法包括以可控速度、量和压力将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,以便将该诊断剂沉积在患者皮肤的真皮内腔隙。
15、将至少一种用于乳腺肿瘤检测的诊断剂应用于人患者的方法,该方法包括将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,从而与通过传统ID芒图氏方法将该相同预选量的诊断剂传送至真皮内腔隙相比,这样传送的诊断剂预选量的75%以上被沉积在真皮内腔隙中。
16、将至少一种用于乳腺肿瘤检测的诊断剂应用于人患者的方法,该方法包括将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,使该诊断剂可被运输至局部淋巴***。
17、将至少一种用于乳腺肿瘤检测的诊断剂应用于人患者的方法,该方法包括将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,从而与通过ID芒图氏方法传送该诊断剂相比,这样传送的诊断剂具有更高的组织生物利用度。
18、将至少一种用于乳腺肿瘤检测的诊断剂应用于人患者的方法,该方法包括将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,从而与通过ID芒图氏方法传送该诊断剂相比,这样传送的诊断剂起效更快。
19、将至少一种用于乳腺肿瘤检测的诊断剂应用于人患者的方法,该方法包括将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,从而与通过ID芒图氏方法传送该诊断剂相比,这样传送的诊断剂预选剂量沉积在淋巴组织中的量升高至少300%。
20、权利要求1、7、8、9和10中任一的方法,其中该特定组织选自淋巴组织、粘膜组织、***、皮肤组织、生殖组织、宫颈组织、***组织、肺、脾、结肠、胸腺、骨髓、血淋巴组织和淋巴组织。
21、权利要求20的方法,其中淋巴组织选自上皮相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、初级淋巴组织和次级淋巴组织。
22、将至少一种诊断剂应用于人患者的方法,该方法包括将预选量的该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,从而与通过传统ID芒图氏方法将相同预选量的该诊断剂传送至真皮内腔隙相比,这样传送的诊断剂预选量的75%以上被沉积在真皮内腔隙中。
23、将至少一种诊断剂应用于人患者的方法,该方法包括通过一种针头将该诊断剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,此针头的长度足以穿透真皮内腔隙,而且出口的深度在真皮内腔隙内,以便将该诊断剂沉积在真皮内腔隙中,其中此针头不是以15度的角度***,这样不会在沉积部位形成椭圆型的团块。
24、将至少一种生物活性剂应用于人患者特定组织的方法,该方法包括将该活性剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,其中将此活性剂沉积在该特定组织中,而且该活性剂与此特定组织中疾病的标记结合。
25、权利要求24的方法,其中与相同活性剂传送至皮下腔隙相比,该活性剂的组织生物利用度更高。
26、权利要求24的方法,其中与通过ID芒图氏方法传送相同活性剂相比,该活性剂的组织生物利用度更高。
27、权利要求24的方法,其中该疾病为癌症、免疫性疾病、感染性疾病、淋巴***疾病或者代谢性疾病。
28、权利要求24的方法,其中癌症选自淋巴瘤、白血病、乳腺癌和结肠直肠癌。
29、权利要求1、7、8、9和10中任一的方法,其中通过一种针头或套管针应用该诊断剂。
30、权利要求1、7、8、9和10中任一的方法,其中该针头或套管针的出口***深度为约300um-约3mm。
31、权利要求1、7、8、9和10中任一的方法,其中该针头或套管针为30-36号。
32、权利要求1、7、8、9和10中任一的方法,其中该针头或套管针为31-34号。
33、权利要求1、7、8、9和10中任一的方法,其中该生物活性剂选自肽、多肽、蛋白、核苷酸、多核苷酸、核酸、受体的配体、酶、碳水化合物、治疗剂、化学特异性药物、抗体、单克隆抗体、多克隆抗体和抗体片段。
34、权利要求33的方法,其中化学特异性药物选自PNA、光适配子、唾液酸粘合剂、二硼酸和硼酸。
35、权利要求24的方法,其中特定组织是在特定组织中的肿瘤细胞上或其周围。
36、权利要求24的方法,还包括同时应用示踪剂。
37、权利要求36的方法,其中在体内实时检测该示踪剂。
38、权利要求36的方法,其中在患者离体检测该示踪剂。
39、权利要求36的方法,其中通过流式细胞术检测该示踪剂。
40、权利要求36的方法,其中通过组织学检查检测该示踪剂。
41、诊断人患者中疾病的方法,此疾病具有特异性标记,该方法包括(a)将生物活性剂应用于人患者皮肤的真皮内腔隙中,其中该活性剂被沉积在具有标记的特定组织中;(b)追踪该活性剂;(c)对该活性剂进行成像;以及(d)确定该活性剂是否发生特异性结合,其中特异性结合的存在提示存在该疾病的可能性。
42、权利要求41的方法,其中在体外对该活性剂进行成像。
43、权利要求41的方法,其中在体内对该活性剂进行成像。
44、权利要求41的方法,其中该疾病选自癌症、免疫性疾病、感染性疾病、淋巴***疾病或者代谢性疾病。
45、权利要求41的方法,通过超声、MRI、CT、PET、SPECT、X线、荧光、化学发光、生物发光、光声或光学方法进行所述成像。
46、权利要求41的方法,其中实时获得成像。
47、权利要求41的方法,其中间断获得成像。
48、权利要求41的方法,该方法还包括应用一种造影剂。
49、权利要求41的方法,其中该造影剂选自不透射线的物质、MRI成像剂、超声成像剂和光学成像剂,以便该药物适于此成像方法。
50、将一种制剂应用于人患者的方法,此制剂包括至少一种诊断剂,该方法包括以可控速度、量和压力将该制剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,以便将该制剂沉积在患者皮肤的真皮内腔隙。
51、权利要求50的方法,其中该制剂包括颗粒,而且其中该颗粒的直径为约20微米-约1nm。
52、权利要求50的方法,其中该颗粒选自脂质体、聚合小珠、微粒MRI造影剂、中空颗粒、微泡和微晶小珠。
53、权利要求50的方法,其中该制剂包括纳米颗粒,而且其中该纳米颗粒的直径为约1nm-约20微米。
54、权利要求50的方法,其中这种至少一种诊断剂的浓度约为10mg/mL。
55、权利要求50的方法,其中这种至少一种诊断剂的浓度约为100mg/mL。
56、权利要求50的方法,其中这种至少一种诊断剂的浓度约为20ug/mL-100mg/mL。
57、权利要求50的方法,其中所传送的这种至少一种诊断剂的量约为5-10ug。
58、权利要求50的方法,其中该制剂包括至少一种附加分子,它选自治疗剂、示踪剂、赋形剂、添加剂、化学特异性药物和标记物。
59、将至少一种生物活性剂应用于人患者的方法,该方法包括将该活性剂传送至人患者皮肤的真皮内腔隙,使该活性剂与生物实体特异性结合。
60、权利要求59的方法,其中该生物活性剂为诊断剂。
61、权利要求59的方法,其中该生物实体选自细胞、细胞团或细胞集、细菌、病毒、病原体、蛋白、噬斑和寄生介质。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US47795003P | 2003-06-13 | 2003-06-13 | |
US60/477,950 | 2003-06-13 | ||
US60/489,920 | 2003-07-25 | ||
US60/502,225 | 2003-09-12 | ||
US60/538,473 | 2004-01-26 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1829536A true CN1829536A (zh) | 2006-09-06 |
Family
ID=36947496
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN 200480021452 Pending CN1829536A (zh) | 2003-06-13 | 2004-06-14 | 生物活性剂的改进的真皮内传送 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN1829536A (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106990048A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-07-28 | 厦门大学 | 一种基于光声成像技术的活细菌检测方法 |
CN109738387A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-05-10 | 佛山科学技术学院 | 一种基于吲哚箐绿的光学相干层析成像方法和装置 |
CN113877048A (zh) * | 2021-09-30 | 2022-01-04 | 刘成凤 | 一种用于肿瘤内科的化疗泵结构 |
-
2004
- 2004-06-14 CN CN 200480021452 patent/CN1829536A/zh active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106990048A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-07-28 | 厦门大学 | 一种基于光声成像技术的活细菌检测方法 |
CN109738387A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-05-10 | 佛山科学技术学院 | 一种基于吲哚箐绿的光学相干层析成像方法和装置 |
CN113877048A (zh) * | 2021-09-30 | 2022-01-04 | 刘成凤 | 一种用于肿瘤内科的化疗泵结构 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2004264839B2 (en) | Improved intra-dermal delivery of biologically active agents | |
Hartshorn et al. | Nanotechnology strategies to advance outcomes in clinical cancer care | |
US20070088414A1 (en) | Particulate formulations for intradermal delivery of biologically active agents | |
KR101866893B1 (ko) | Tlr 아고니스트의 치료적 용도 및 병용 요법 | |
CN1698580A (zh) | 用于肠胃外给药的延迟释放制剂及其制备方法 | |
US20210220494A1 (en) | Compositions and methods for targeted particle penetration, distribution, and response in malignant brain tumors | |
CN1878545A (zh) | 甲状腺激素类似物及其使用方法 | |
JP2021500932A (ja) | 全身送達のためのプラットフォーム腫瘍溶解性ベクター | |
CN111712232A (zh) | 用于治疗癌症的新型的基于重组质膜的囊泡 | |
JP2020533340A (ja) | サポニンを含むリポソーム製剤および使用方法 | |
KR20190038540A (ko) | 세포 표적화된 약학적으로 활성인 물질 또는 표지 전달 시스템 | |
JP2022058444A (ja) | 癌の状態を治療及びモニタリングする方法 | |
JP2022130585A (ja) | 癌幹細胞を標的とした癌ワクチン | |
US20220193275A1 (en) | Inducing favorable effects on tumor microenvironment via administration of nanoparticle compositions | |
JP2021502334A (ja) | Axlデコイ受容体を用いる転移性癌の治療方法 | |
Weng et al. | Antibody–exatecan conjugates with a novel self-immolative moiety overcome resistance in colon and lung cancer | |
JP2011519266A (ja) | 免疫反応の調節 | |
JP2017502040A (ja) | ペプチド核酸系薬剤を用いて癌を処置するための方法及び組成物 | |
CN113661236A (zh) | 治疗癌症的方法 | |
CN1867252A (zh) | 多糖与用于癌症治疗的化疗剂的共同给药 | |
EP3108884A1 (en) | Composition for prevention or treatment of treatment-resistant cancer | |
Andersen et al. | Immunotherapy approaches for adult glioma: knowledge gained from recent clinical trials | |
CN1829536A (zh) | 生物活性剂的改进的真皮内传送 | |
US10155024B2 (en) | Composition for preventing or treating B-cell lymphoma comprising IL-21 expressing mesenchymal stem cells | |
CN1139384C (zh) | 用于与细胞毒性剂***的基于类黄酮的治疗组合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |