CN1789214A - 一种大豆用生物制剂及其生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及农业微生物应用技术，是一种大豆用生物制剂及其生产方法，由有机载体，大豆根瘤菌、自生固氮菌、放线菌组成，分A、B两组发酵后，按1∶1混合；A组有机载体与微生物菌群种子液的重量/体积比为，有机载体：大豆根瘤菌：自生固氮菌＝100∶15－25∶5－15，大豆根瘤菌种子液与自生固氮菌种子液中每毫升的活菌数≥8亿个；B组有机载体与微生物菌群种子液的重量/体积比为，有机载体：放线菌＝100∶25－35，放线菌种子液中每毫升活菌平皿计数≥2千万个。本发明所需要菌种数目少，载体来源广泛且价格低廉，生产工艺操作简单，周期短，成本低；产品质量高，应用效果好；对环境友好，属绿色微生物有机肥料，易于推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及农业微生物应用技术，具体的说是一种大豆用生物制剂及其生产方法。
背景技术
我国微生物肥料研究可以追溯到上世纪30年代，我国著名土壤微生物学专家张宪武教授1937年发表第一篇大豆根瘤菌研究与应用文章，至今已有近80年历史。20世纪50年代初中国科学院林业土壤研究所科研人员在张宪武教授带领下，在东北地区150万公顷土地上大面积推广大豆根瘤菌接种剂技术，平均增产大豆10％以上。原苏联微生物学者也在固氮菌、磷细菌、硅酸盐细菌的研究工作中取得了突破，并在土壤培肥地力中大面积推广应用，取得了良好效果。1958年我国农业发展纲要把细菌肥料列为一项重要的农业技术措施，对微生物肥料的研究与应用，起到积极促进作用。
当前，植物根际促生菌PGPR的研究异常活跃。1977年Broalbent等人分离得到一株枯草芽孢杆菌(Bacillus.subtilis A13)并成功进行了应用。1988年美国Weller报道了枯草芽孢杆菌A13主要是能抑制植物病原真菌，并促进多种植物生长，可以提高胡萝卜产量48％、燕麦产量33％、花生37％，应用面积已经达到400万公顷。我国田间应用PGPR生物制剂始于1979年，到1994年增产菌应用面积已达3930万公顷。用海洋放线菌MB-97制成的PGPR生物制剂，应用始于1997年，在大豆上应用已经有2万公顷，平均增产10.0～20.0％。用海洋细菌9912制成的PGPR生物制剂，应用始于2000年(田间试验示范阶段)，在大豆、蔬菜等经济类作物中应用，平均增产10.0～18.9％。
大豆用生物制剂，是在微生物肥料基础上发展起来的一种高效、无毒、无污染、无公害的PGPR型生物肥料。在美国、巴西、俄罗斯等发达国家，已经有这方面的产品，他们从环境保护、资源再生利用、培肥地力和对作物的专一性等方面考虑，结合微生物液固两相发酵技术，对城市生活垃圾、大型养殖场的粪便和活性污泥等进行无害化处理，生产制造高效益、无污染的各种专用型微生物制剂。
微生物肥料研究，从1937年大豆根瘤菌研究与应用开始，到固氮菌、磷细菌、硅酸盐细菌、放线菌的应用，到今天的植物根际促生菌PGPR的研究与应用，人们长常常从应用研究的角度出发，将微生物与植物作为一个有机整体来考虑，既多菌株、多功能又针对作物某些特点来研制和生产某些专一型肥料。1979年王书锦、薛德林等人在东北地区分离得到多株快生型和慢生型大豆根瘤菌菌株，并在大豆的结瘤固氮、增产机理等方面进行了深入研究，并将分离得到的高固氮活性大豆根瘤菌QB1130，在黑龙江三江平原地区进行了大面积应用取得了良好的增产效果。1983年王书锦、薛德林等人在黑龙江三江平原低湿耕地培肥地力上采用生物活化土壤肥力，在大豆、水稻、小麦、玉米上大面积应用固氮菌、磷细菌、硅酸盐细菌取得了良好的增产效果。1997年王书锦、胡江春、薛德林等人在防治大豆重迎茬病害中应用海洋放线菌取得了重茬不减产、迎茬可以增产的防病减毒和增加大豆产量的双重效果。
大豆根瘤菌是利用微生物生命活动及其代谢产物，提高大豆的结瘤和固氮能力，为大豆提供氮素营养促进大豆生长；自生固氮菌是通过固定空气中氮素，供应作物氮素营养，促进作物生长；放线菌是通过菌体及其代谢产物分泌的抗生素，防病、减毒、刺激作物生长。将三种菌组合起来制成的PGPR大豆专用型生物制剂，比单一剂型增产效果显著，并有抗病、减毒、改善作物品质功效。随着微生物肥料研究工作的深入和应用范围拓宽，人们已经把微生物、肥料和环境作为一个整体来研究，单一菌种向复合菌种转化；单纯生物菌剂向复合PGPR型生物肥转化；单一剂型向多元剂型转化；实际上微生物肥料已由低级向高级、低效向高效，向综合型、专一型、集约型产业化方向发展。
发明内容
本发明的目的在于提供一种所需菌种数目少，原料来源广泛，工艺操作简单，生产成本低廉的大豆用生物制剂及其生产方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
大豆用生物制剂，由有机载体，大豆根瘤菌、自生固氮菌、放线菌组成，分A、B两组发酵，按1∶1混合，制成大豆用生物制剂。A组有机载体与微生物菌群种子液的重量/体积比为，有机载体：大豆根瘤菌∶自生固氮菌＝100∶15-25∶5-15，大豆根瘤菌种子液与自生固氮菌种子液中每毫升的活菌数≥8亿个；B组有机载体与微生物菌群种子液的重量/体积比为，有机载体∶放线菌＝100∶25-35，放线菌种子液中每毫升活菌平皿计数≥2千万个。原料的含水量应为20-30％，C∶N＝20～25∶1。
有机载体为草炭土和/或腐植酸土；
大豆用生物制剂的制备及其生产方法，具体步骤为：以草炭土、腐植酸土等有机载体为原料，加入已知的工厂化两级发酵生产大豆根瘤菌、自生固氮菌和放线菌种子液为微生物菌群对已灭菌的有机载体进行大剂量接种，在室温条件下，经过固体发酵培养，生产制造高浓度的具有高固氮活性并有防病作用的大豆用生物制剂。
固体发酵过程中，A组原料与微生物菌群种子液的重量/体积比为，有机载体∶大豆根瘤菌∶自生固氮菌＝100∶15-25∶5-15。B组原料与微生物菌群种子液的重量/体积比为，有机载体∶放线菌＝100∶25-35；灭菌消毒后原料的含水量应为20-40％，C∶N＝20～25∶1，并且根据原料的不同，添加不同的碳源和氮源，控制酸碱度，控制含氧量(通风翻倒)；
所述原料的含水量应为20-30％；活菌数大豆根瘤菌种子液与固氮菌种子液中每毫升的活菌数至少分别为8亿个。放线菌种子液中每毫升活菌平皿计数≥2千万个。(发酵罐培养时随时取样测定，采用血球计数法在光学显微镜下直接计算菌数)；
大豆根瘤菌种子液进行发酵培养，培养基的重量组成为：葡萄糖1-3％、硫酸镁0.01-0.05％、氯化钠0.01-0.05％、碳酸钙0.1-0.3％、余量为水、PH7.0-7.2；通气量为1∶0.3-0.6，培养温度为28℃，时间为48小时；较佳重量组成为：葡萄糖1％、磷酸氢二钾0.05％、硫酸镁0.02％、酵母膏0.1％、氯化钠0.01％、碳酸钙0.2％、0.1％硼酸0.2ml、0.1％钼酸钠0.2ml、余量为水、PH7.0；通气量为1∶0.5。
自生固氮菌种子液进行发酵培养，培养基的重量组成为：甘露醇1-2％、磷酸氢二钾0.01-0.05％、硫酸镁0.01-0.05％、氯化钠0.01-0.05％、碳酸钙0.2-0.8％、硫酸钙0.01-0.03％、余量为水、PH7.0-7.2；通气量为1∶0.3-0.5，培养温度为28℃，时间为48小时；较佳重量组成为：甘露醇1％、磷酸氢二钾0.02％、硫酸镁0.02％、氯化钠0.02％、碳酸钙0.5％、硫酸钙0.02％、余量为水、PH7.0；通气量为1∶0.5。
放线菌种子液进行发酵培养，培养基的重量组成为：可溶性淀粉1～3％、硫酸镁0.02～0.08％、磷酸二氢钾0.03～0.08％、氯化钠0.03～0.08％、硝酸钾0.1～0.5％％、余量为水；PH7.0～7.2；通气量为1∶0.3～0.5，发酵培养温度为28℃，时间为48小时；较佳重量组成为：可溶性淀粉2％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.05％、氯化钠0.05％、硝酸钾0.1％、余量为水、PH7.0、通气量为1：：3.5。
本发明具有如下优点：
1.操作简单，成本低，易于推广。本发明吸取有关微生物肥料生产方法的优点，采用已知的大豆根瘤菌、自生固氮菌和放线菌等菌种为微生物菌群，以草炭土、腐植酸土等有机载体为原料，经过液固两相发酵，变低值的草炭土、腐植酸土为高质量的具有高固氮活性并具有防病作用的大豆专用生物制剂。
2.生产周期短，质量高。本发明采用微生物液体与固体相结合发酵技术，对原料大剂量接入微生物菌群，可较好解决固体发酵过程中，发酵周期长，容易污染，各种发酵条件难以控制等问题。并能充分利用基质中的碳源、氮源，在适应微生物生长条件下，保证了产品质量。
3.产品应用效果好。本发明采用的微生物菌群及其菌体代谢产物，能够使作物结瘤率提高，固氮能力提高并能分泌多种植物激素，可以促进作物生长，增强作物抗逆性、提高作物产量、改善作物品质，并具有防病作用；同时，又能培肥地力，保护生态环境，是一种符合人类健康要求的绿色微生物有机肥料；经大量田间试验结果表明，可使大豆增产10％以上。
总之，本发明采用的生产原料来源广泛、价格低廉；采用优选的高固氮活性大豆根瘤菌、自生固氮菌和植物根际促生菌PGPR放线菌微生物菌群，增产效果明显；采用的液体与固体两相发酵，保证了产品质量；制造生产的大豆用生物制剂田间试验结果表明：既有增产作用，又有防病作用；既培肥了地力，又改善了生态环境；属绿色有机肥料，易于推广应用。
具体实施方式
1.大豆根瘤菌(与大豆能够共生，产生根瘤，固定空气中氮素，供应作物氮素营养，产生激素刺激作物生长)菌群液体种子发酵步骤如下：
种子液发酵培养基的重量组成为：葡萄糖1-3％、硫酸镁0.01-0.05％、氯化钠0.01-0.05％、碳酸钙0.2-0.6％、余量为水、PH7.0-7.2；通气量为1∶0.3-0.6，培养温度为28℃，时间为48小时。
1)种母活化：将大豆根瘤菌(Rhizobium japonicum)种母进行活化；种母活化用斜面培养基组成为：葡萄糖10g、磷酸氢二钾0.5g、硫酸镁0.2g、氯化钠0.2g、碳酸钙2.0g、琼脂18g、蒸馏水1000mL、PH7.0；一个大气压18分钟灭菌；
2)发酵罐接种与发酵培养：大豆根瘤菌发酵进入对数生长旺盛时期时为放罐标志，镜检菌体整齐，健壮，无污染，含活菌可达到8亿/ml以上，(采用血球计数法在光学显微镜下直接观察计算菌数)培养液呈乳白色无异味，可供扩大发酵培养用；
3)在显微镜下观察大豆根瘤菌细胞形态，可以看到两端圆钝的杆状菌体，它的大小在(4.3×0.7)～(1.7×0.6)μm之间，好氧，革兰氏阴性，慢生型大豆根瘤菌侧生1根鞭毛，快生型大豆根瘤菌2-5根或多根鞭毛，在刚果红培养基上能够很好生长；在平皿培养基中生长3-4天观察，单菌落呈圆形，***，白色，湿润而且有光泽，培养日久，菌落颜色逐渐变成乳白色，菌落表面有粘性的粘膜，在刚果红不染色或染色极浅。
本例采用的大豆根瘤菌种子液发酵培养基最佳配方的重量组成为：葡萄糖1％、磷酸氢二钾0.05％、硫酸镁0.02％、酵母膏0.1％、氯化钠0.01％、碳酸钙0.2％、0.5％刚果红0.5ml、0.1％硼酸0.2ml、0.1％钼酸钠0.2ml、余量为水、PH7.0；通气量为1∶0.5，培养温度为28℃，时间为48小时。
4)大豆根瘤菌与固氮菌的不同之处在于固氮活性的高低与菌种特性有关，还与大豆的共生关系是否协调有关，即大豆与根瘤菌的亲和力强弱有关，因此大豆根瘤菌共生体系的配对选优工作，对筛选有效的共生结瘤固氮体系，提高大豆产量具有重要意义，其优选结果见表1、表2：
表1.不同大豆-一根瘤菌共生体系的结瘤和固氮性能的测定*
| 菌株 | 铁丰8 | 沈农25104 | 开育8 | 吉林20 | 长农8 | 哈7799 | 合丰25 |
| (快生型QB113) | ++/++ | +++/+++ | ++/+ | ++/++ | +++/+ | +++/++ | +++/+++ |
| (慢生型B16-11C) | +++/++ | +++/+ | +/+ | ++/+++ | +++/+++ | +++/+++ | +++/+++ |
| (慢生型61A76) | ++/+ | +/+ | +++/+++ | ++/+ | ++/+++ | ++/+ | +++/+++ |
*+++：为强结瘤和强固氮：花期测定，每株结瘤数平均达到50个以上，固氮活性达到50C2H4/株.分以上；
*+++：为强结瘤和强固氮：花期测定，每株结瘤数平均达到30个以上，固氮活性达到30C2H4/株.分以上；
*+++：为强结瘤和强固氮：花期测定，每株结瘤数平均达到10个以上，固氮活性达到10C2H4/株.分以上；
*-：为不结瘤或不固氮：花期测定，无结瘤现象或有少数根瘤但是没有同氮活性。
表2.大豆～根瘤菌共生体系对农艺性状、固氮性能及其产量的影响
| 项目 | 株高(cm) | 主茎节数(个/株) | 株荚数(个/株) | 株粒数(个/株) | 生物量(g干重/株) | 根瘤固氮活性(nmolC2H4/g.鲜重.h) | 产量(kg/亩) | 增产率(％) |
| 不接种(ck) | 79.9 | 14.3 | 21.4 | 45.2 | 16.6 | 1138.4 | 123.4 | 100.0 |
| 接种QB113 | 78.4 | 15.2 | 24.5 | 45.5 | 18.4 | 4036.8 | 142.8 | 116.0 |
| 接种B16-11C | 77.3 | 15.4 | 24.4 | 51.2 | 17.1 | 4876.2 | 144.2 | 117.0 |
供试菌种：QB113、B16-11C；供试品种：哈7799
2.固氮菌(固定空气中氮素，供应作物氮素营养，产生激素刺激作物生长)菌群液体种子发酵步骤如下：
1)种母活化：将固氮菌(自生固氮菌Azotobacter vinelandl)种母，分别移接至新配制的装有固氮菌培养基的克氏瓶斜面上，活化培养24～48小时，温度28℃，活化成熟后的克氏瓶中的菌体称为种子；种母活化用斜面培养基组成为：甘露醇10g、硫酸镁0.2g、磷酸二氢钾0.2g、氯化钠0.2g、碳酸钙5.0g、硫酸钙0.1g、琼脂18g、蒸馏水1000mL、PH7.0；一个大气压18分钟灭菌。
2)种子罐接种与培养：将活化好的克氏瓶中的固氮菌的种子1瓶，用200mL无菌水洗入至500mL无菌的三角瓶中，用火焰接种法或压差接种到50立升的种子罐(或100立升的种子罐)中，装液量不能超过70％，通气搅拌培养，通气量为1∶0.3-0.5，温度为28～30℃，培养时间为48小时，显微镜下镜检菌体运动活泼，整齐，无污染，可供种子发酵罐扩大繁殖用。
3)发酵罐接种与发酵培养(确定培养基和发酵条件试验)：将成熟的种子罐中的种液，采用压差法，接种到500立升的发酵罐(或1000立升的发酵罐)中，装液量不超过70％，通气搅拌培养，通气量为1∶0.3-0.5，温度为28-30℃，培养时间为24-48小时，如采用棕色固氮菌，则出现8字形时为放罐标志，镜检菌菌体整齐，健壮，无污染，8字形占50％，含活菌可达到8亿/ml以上，(采用血球计数法计算菌数)培养液呈乳白色无异味，即可供扩大发酵培养用或留作固体发酵用的液体种子液。
本例中采用的固氮菌种子液发酵培养基最佳配方的重量组成为：甘露醇1％、磷酸氢二钾0.02％、硫酸镁0.02％、氯化钠0.02％、碳酸钙0.5％、硫酸钙0.02％、余量为水、PH7.0；通气量为1∶0.5，培养温度为28℃，时间为48小时。
5)混合施用固氮菌、大豆根瘤菌菌液对大豆增产效果明显，比单独施用固氮菌的效果更好。(参见表3所示)
表3.固氮菌、大豆根瘤菌菌液对大豆产量的影响(黑龙江省850农场)
| 处理 | 大豆种子百粒重(g) | 大豆产量 | |
| (g/10株) | (％) | ||
| CK | 19.9 | 97.75 | 100.0 |
| 固氮菌菌液各500ml/亩 | 20.3 | 113.41 | 112.6 |
| 大豆根瘤菌液各500ml/亩 | 20.3 | 110.31 | 112.8 |
| 固氮菌+大豆根瘤菌菌液各500ml/亩 | 20.2 | 116.45 | 119.1 |
*三次重复平均数；
3.放线菌(抗病、减毒、刺激作物生长、促进作物增产、提高作物品质)菌群液体种子发酵步骤同1，其中不同之处在于：
1)种母活化：将实验室保藏的放线菌种母，分别移至新配制的培养基的克氏瓶斜面上进行活化培养。种母活化用马铃薯-蔗糖琼脂培养基(PDA)组成按重量百分比计算：20％马铃薯浸出液1000mL；蔗糖20g、琼脂18g，PH7.0，一个大气压20分钟灭菌；
2)种子罐接种与培养：通气量为1∶0.5，温度为28～30℃，培养时间为48小时，显微镜镜检时菌丝呈团网状，无污染，可供种子的发酵罐进一步扩大繁殖用；
3)发酵罐接种与发酵培养：通气搅拌，通气量为1∶0.3～0.5，温度为28～30℃，培养时间为48小时，出现菌丝着色变浅时为放罐标志，健壮，无污染，每毫升活菌平皿计数≥2千万个，即可作为固体发酵用的种子液。
本实施例采用的放线菌种子液发酵培养基最佳配方的重量组成为：可溶性淀粉2％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.05％、氯化钠0.05％、硝酸钾0.1％、余量为水、PH7.0；通气量为1∶0.3～0.5，培发酵培养，培养温度为28℃，时间为48小时；
4)抑菌试验及其田间增产效果
抑菌试验采用杯碟法。以海洋放线菌MB-97菌株对植物病原菌的抑制作用(拮抗试验)为例，实验操作过程为：将病原菌菌悬液平皿涂匀，放上牛津杯，往小钢圈内滴入放线菌发酵滤液(或者放上4小块平皿培养菌块)，培养3-5天后，小钢圈(菌块)周围出现明显抑菌圈，从而证明该菌株有抑菌作用。应用海洋放线菌MB-97生物制剂对重茬大豆防治效果的田间试验结果见表4。
表4.重茬大豆应用MB-97生物制剂的增产效果(黑龙江省853农场)
| 处理 | 亩株数(株) | 百粒重(g) | 亩产量(kg) | 增产率(％) |
| 重茬四年调控 | 9444.9 | 19.43 | 240.4 | 113.9 |
| 重茬四年对照 | 10000.5 | 18.98 | 211.1 | 100.0 |
| 重茬五年调控 | 9444.9 | 19.28 | 249.5 | 131.6 |
| 重茬五年对照 | 10000.5 | 19.07 | 189.6 | 100.0 |
应用海洋放线菌MB-97生物制剂，对克服大豆连作障碍有显著效果，表现出大豆植株抗逆性强，大豆品质有所改善，土壤肥力提高等综合效果，经过大量田间试验，统计分析确定，可使重茬大豆增产13.9％以上；
4.大豆根瘤菌、固氮菌和放线菌种子液产品固体发酵操作步骤如下：
1)以草炭土、腐植酸土等有机载体为原料，采用已知的经过优选的高固氮活性大豆根瘤菌、固氮菌放线菌等菌种为微生物菌群(经过不同菌种与不同大豆品种的配对选优、确定高固氮活性大豆根瘤菌)，工厂化两级发酵生产根瘤菌、固氮菌和放线菌种子液，对已灭菌草炭土、腐植酸土等有机载体进行大剂量接种，进行固体发酵培养；
2)将上述1、2、3步骤所得高质量的高固氮活性大豆根瘤菌、自生固氮菌和放线菌等微生物菌群，经过工厂化两级发酵生产种子液，以草炭土、腐植酸土等有机载体为原料，高温灭菌后原料中的含水量必须在20-30％范围内。A组和B组接种量均控制在25-35％之间，接种后发酵前的含水量大约在60-70％范围内(“手握成团，落地就散”无游离水渗出为适度)，C∶N＝20∶1-25∶1，PH7.0-7.2，翻拌均匀，在清洁环境中自然固体发酵，每天测定固体发酵温度2次，起始温度为20℃以上，随着固体发酵温度上升至50-60℃时，需要翻动1-2次，固体发酵过程中，A组需要发酵48小时，B组需要发酵96～120小时，PH保持6.8-7.2范围内，发酵到终点。
3)固体发酵结束后，将A组大豆根瘤菌和自生固氮菌固体发酵产品和B组放线菌发酵产品，按1∶1混合后风干或烘干(烘干温度小于50℃)，水份不能超过15％，经过粉碎、过筛、质检、包装，制造成高浓度的具有高固氮活性的并具有防病作用的大豆用生物制剂产品，大豆用生物制剂中所含大豆根瘤菌与自生固氮菌活菌数每克产品中至少分别为8亿个。放线菌活菌数每克产品中至少为1亿个。剂型主要为粉状，也可以进行低温圆盘滚动造粒。
本实施例培养物料组成为：原料200公斤，大豆根瘤菌20公斤，自生固氮菌10公斤，放线菌30公斤。并且根据原料的不同填加不同的碳源和氮源等，(培养物料组成为，原料：大豆根瘤菌∶固氮菌∶放线菌＝200∶20∶10∶30；原料的含水量应为20-30％)。
4)大豆用生物制剂的田间应用效果
大豆根瘤菌田间应用效果试验，结果请见表5、表6、表7：
表5接种快生型大豆根瘤菌QB113的田间小区试验结果
| 项目 | 株高(cm) | 株荚(个/株) | 百粒重(g) | 株粒数(个/株) | 生物量(g干重/株) | 固氮活性(nmolC2H4/g.鲜重.h) | 种子产量(kg/亩) | 增产率(％) |
| 不接种(ck) | 47.2 | 23.8 | 10.3 | 51.0 | 26.5 | 0.63 | 9.2 | 100.0 |
| 接种QB113) | 53.0 | 67.2 | 18.3 | 107.8 | 61.3 | 0.902 | 20.4 | 221.7 |
| 接种(B16-11C) | 56.0 | 74.6 | 13.7 | 113.8 | 53.0 | 1.102 | 18.7 | 203.3 |
*对照为常规施肥，试验增施2.5公斤大豆根瘤菌有机肥
表6.白浆土地区(八五零农场)接种快生型大豆根瘤菌QB113的田间增产效果
| 项目 | 株高(cm) | 主茎节数(个/株) | 株荚数(个/株) | 株粒重(个/株) | 百粒重(g) | 无效荚数(个/株) | 产量(kg/亩) | 增产率(％) |
| 不接种(ck) | 80.6 | 11.7 | 15.3 | 4.5 | 16.6 | 0.8 | 123.4 | 100.0 |
| 接种QB13) | 84.4 | 13.6 | 17.9 | 4.9 | 16.3 | 1.0 | 358.1 | 108.6 |
| 接种(B16-11C) | 86.3 | 13.8 | 18.8 | 6.2 | 17.7 | 0.9 | 394.7 | 119.7 |
*对照为常规施肥，试验增施2.5公斤大豆根瘤菌有机肥
表7.大豆用生物制剂对大豆农艺性状及产量影响*(黑龙江省850农场)
| 处理 | 株高(cm) | 节数(个株) | 荚数(个/株) | 粒数(个/株) | 百粒重(g) | 产量(kg/亩) | 增产率(％) |
| 试验 | 85.7 | 17.0 | 22.0 | 60.1 | 23.15 | 192.9 | 113.3 |
| 对照 | 76.7 | 14.4 | 17.5 | 46.1 | 23.00 | 170.3 | 100.0 |
*对照为常规施肥，试验增施2.5公斤大豆用生物制剂；试验面积为20亩，对照面积为20亩.
从上述试验结果可以看出，大豆用生物制剂对大豆的农艺性状和产量均具有影响，结果表明：可使大豆增产13.3％-19.1％，通过方差分析，差异显著。并且使用方法简便，改良土壤效果明显，并能改善作物品质。
为提高产品质量，缩短生产周期，申请人还试用了中国科学院沈阳应用生态研究所分离、纯化并鉴定的高活性微生物菌株(如：慢生型大豆根瘤菌Rhiobium japonicumB16-11c、快生型大豆根瘤菌Rhizobium japonicumQB1130、棕色固氮菌Azotobacter vinelandii 230、海洋放线菌Streptomycessoseoflvus MB-97)，其效果更好，已在黑龙江、吉林和辽宁等地试验应用。
Claims (9)
1.一种大豆用生物制剂，其特征在于：由有机载体，大豆根瘤菌、自生固氮菌、放线菌组成，分A、B两组发酵后，按1∶1均匀混合制成；A组有机载体与微生物菌群种子液的重量/体积比为，有机载体∶大豆根瘤菌∶自生固氮菌＝100∶15-25∶5-15，大豆根瘤菌种子液与自生固氮菌种子液中每毫升的活菌数≥8亿个；B组有机载体与微生物菌群种子液的重量/体积比为，有机载体∶放线菌＝100∶25-35，放线菌种子液中每毫升活菌平皿计数≥2千万个。
2.按照权利要求1所述大豆用生物制剂，其特征在于：所述有机载体为草炭土和/或腐植酸土。
3.一种权利要求1所述大豆用生物制剂的生产方法，其特征在于：以有机载体为原料，采用大豆根瘤菌、自生固氮菌、放线菌种子液为微生物菌群对已灭菌的有机载体进行大剂量接种，经过固体发酵培养，得高浓度的生物制剂；固体发酵过程中，A组原料与微生物菌群种子液的重量/体积比为，有机载体∶大豆根瘤菌∶自生固氮菌＝100∶15-25∶5-15，B组原料与微生物菌群种子液的重量/体积比为，有机载体∶放线菌＝100∶25-35；灭菌消毒后原料的含水量应为20-30％，C∶N＝20～25∶1。
4.按照权利要求3所述大豆用生物制剂的生产方法，其特征在于：所述大豆根瘤菌种子液，其发酵培养基的重量组成为：葡萄糖1-3％、硫酸镁0.01-0.05％、氯化钠0.01-0.05％、碳酸钙0.1-0.3％、余量为水、PH7.0-7.2；通气量为1∶0.3-0.6，培养温度为28℃，时间为48小时。
5.按照权利要求3所述的大豆用生物制剂的生产方法，其特征在于：所述大豆根瘤菌种子液发酵培养基的重量组成为：葡萄糖1％、磷酸氢二钾0.05％、硫酸镁0.02％、酵母膏0.1％、氯化钠0.01％、碳酸钙0.2％、0.1％硼酸0.2ml、0.1％钼酸钠0.2ml、余量为水、PH7.0；通气量为1∶0.5。
6.按照权利要求3所述的大豆用生物制剂的生产方法，其特征在于：所述固氮菌种子液，其发酵培养基的重量组成为：甘露醇1-2％、磷酸氢二钾0.01-0.05％、硫酸镁0.01-0.05％、氯化钠0.01-0.05％、碳酸钙0.2-0.8％、硫酸钙0.01-0.03％、余量为水、PH7.0-7.2；通气量为1∶0.3-0.5，培养温度为28℃，时间为48小时。
7.按照权利要求6所述的大豆用生物制剂的生产方法，其特征在于：所述固氮菌种子液发酵培养基的重量组成为：甘露醇1％、磷酸氢二钾0.02％、硫酸镁0.02％、氯化钠0.02％、碳酸钙0.5％、硫酸钙0.02％、余量为水、PH7.0；通气量为1∶0.5。
8.按照权利要求3所述的大豆用生物制剂的生产方法，其特征在于：所述放线菌种子液，其发酵培养基的重量组成为：可溶性淀粉1～3％、硫酸镁0.02～0.08％、磷酸二氢钾0.03～0.08％、氯化钠0.03～0.08％、硝酸钾0.1～0.5％、余量为水；PH7.0～7.2；通气量为1∶0.3～0.5，发酵培养温度为28℃，时间为48小时。
9.按照权利要求8所述的大豆用生物制剂的生产方法，其特征在于：其所述放线菌种子液发酵培养基的重量组成为：可溶性淀粉2％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.05％、氯化钠0.05％、硝酸钾0.1％、余量为水、PH7.0；通气量为1∶0.3。
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| CN105859357A (zh) * | 2016-05-04 | 2016-08-17 | 北京科技大学 | 利用粉丝生产过程中产生的副产物制备微生物肥料的方法 |
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2004
- 2004-12-17 CN CN 200410100403 patent/CN1789214A/zh active Pending
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