CN1787810B

CN1787810B - 用于改善的经口和透粘膜输送的克拉屈滨制剂

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Publication number: CN1787810B
Application number: CN2004800127149A
Authority: CN
Inventors: N·S·博多
Original assignee: Ares Trading SA
Current assignee: Ares Trading SA
Priority date: 2003-03-28
Filing date: 2004-03-26
Publication date: 2010-04-21
Anticipated expiration: 2024-03-26
Also published as: ZA200507939B; ES2349136T3; CN1787810A; UA81304C2; CN1787809A; CN100408028C; ZA200507935B

Abstract

本发明提供了克拉屈滨和环糊精的组合物，其特别适于经口和***施用克拉屈滨。

Description

用于改善的经口和透粘膜输送的克拉屈滨制剂

技术领域

本发明涉及制成固体口服剂型或透粘膜剂型的包含克拉屈滨-环糊精复合物的组合物，还涉及增强克拉屈滨的口服和透粘膜生物利用度的方法。

背景技术

克拉屈滨是一种酸不稳定的药物，其具有如下所述的化学结构：

它也称作2-氯-2′-去氧腺苷或2-CdA。

克拉屈滨是一种抗代谢药，可以用于治疗淋巴增殖病。其已经用于治疗实验性白血病例如L1210，临床上用于毛细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病以及瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症。其还已经用作免疫抑制剂和治疗多种自身免疫病的药物，所述自身免疫病包括类风湿性关节炎、炎性肠病(例如，克罗恩氏病，溃疡性结肠炎)和多发性硬化(见例如，J.Liliemark，Clin.Pharmacokinet，32(2)：120-131，1997)。还已经在实验中或临床上研究了它，例如在淋巴瘤、郎格罕氏细胞组织细胞增多病、红斑狼疮、慢性斑块状牛皮癣、Sezary综合征、Bing-Neel综合征、复发性神经胶质瘤和实体瘤中。

由于多种原因，首先是患者的依从性，或由于成本或治疗方面的考虑，经口输送药物经常优于肠胃外输送。口服剂型能减少对医护人员的重复就诊、或者注射的不适或与有些活性药物有关的延长灌输次数，由此增强患者的依从性。在健康护理成本逐渐增加的时代，相对于肠胃外施用成本与经口的或透粘膜的施用有关的降低成本变得更重要。肠胃外施用的成本要高得多，因为需要健康护理专业人员在健康护理者的场所施用克拉屈滨，这也包括与该施用有关的所有附加成本。而且，在某些情况下，治疗方面的考虑，例如需要经较长的时间缓释克拉屈滨，实际上只能通过经口的或透粘膜的输送来实现。

但是，迄今为止，经口和透粘膜输送克拉屈滨存在下述缺点：低生物利用度(见，例如，J.Liliemark等，J.Clin.Oncol.，10(10)：1514-1518，1992)，和欠佳的患者间差异(见，例如，J.Liliemark，Clin.Pharmacokinet，32(2)：120-131，1997)。也见，A.Tarasuik等报道的较差吸收和pH依赖性的不稳定性(Arch.Immunol.et Therapie Exper.，42：13-15，1994)。

环糊精是由环状α-(1→4)连接的D-吡喃型葡萄糖单元组成的环状寡糖。已经将具有6-8个单元的环糊精分别命名为α-、β-和γ-环糊精。单元的数目决定了锥形空腔的大小，后者能表征环糊精，且能将药物包入其中，形成稳定的复合物。已知了许多α-、β-和γ-环糊精衍生物，其中一个或多个羟基被替代为醚基或其它基团。因此，已知这些化合物是复合剂，以前已经用于制药领域，以与水不溶性的药物形成包合复合物，由此使它们溶于水性介质中。

最近，Schultz等已经在美国专利号6,194,395B1中描述了用环糊精复合和增溶克拉屈滨。Schultz等的专利主要解决了以前所述的克拉屈滨水性制剂固有的问题，特别是对于皮下和肌肉内注射剂。Schultz等已经发现，克拉屈滨当与环糊精配制时，不但可以明显地更易溶于水性介质，而且当与环糊精结合时，对酸催化的水解更稳定。后一发现对于配制固体口服剂型特别有用，其中化合物在胃内容物的酸性pH中通常会经历水解。Schultz等似乎没有描述与固体口服剂型有关的任何实际工作。实际上，他们仅仅描述了一种制备固体剂型的方法，这是一种熔体挤出方法，其中将克拉屈滨和环糊精与其它任选的添加剂一起混合，然后加热直到熔解。而且，在该专利中列出的1mg至15mg克拉屈滨和100mg至500mg环糊精的宽剂量范围表明，相对于固体口服剂型中给定量的克拉屈滨，应当存在的环糊精的具体量不是至关重要的。实际上，这些剂量范围包括了许多组合，其可能适合作为混合物，但是不适用于复合物形成。例如，1mg克拉屈滨与500mg环糊精的比例，包含了太多的环糊精，所以药物不能容易地离开复合物并实现其治疗功能。另一方面，15mg克拉屈滨和仅仅100mg环糊精不足以复合该量的克拉屈滨。

Schultz等的专利虽然提出了通过与环糊精结合/复合来提高口服剂型中的克拉屈滨的稳定性，但是没有提出通过这样的方式提高药物的口服生物利用度；实际上，该专利没有描述或提出增强或最大化来自克拉屈滨和环糊精的固体口服剂型的克拉屈滨的生物利用度的方法或特别设计的用于实现该目的的组合物。而且，Schultz等没有提出用于透粘膜施用的克拉屈滨/环糊精组合，也就是说，以旨在经过鼻、口、***或直肠腔内衬粘膜而不是经过口胃途径给药的形式，更不用说当以这种剂型施用时增强药物的生物利用度。

许多人员已经研究了特定药物在含有不同浓度的选定环糊精的水中的溶解度，以证实提高环糊精的浓度可以提高该药物在选定温度和pH水平的溶解度，如例如Schultz等的专利中所报道的。不同的人员还已经进行了相溶解度研究，以阐明复合物形成的本性，例如，环糊精和药物是否形成1∶1复合物或1∶2复合物；见，例如，Harada等的美国专利号4,497,803，其涉及兰卡杀菌素类抗生素与环糊精的包合复合物，和Shinoda等的美国专利号4,478,995，其涉及(2′-苄氧基羰基)苯基反式-4-胍基甲基环己烷甲酸酯的酸加成盐与环糊精的复合物。

在制药领域，在使用环糊精提高药物溶解的固体剂型中使用过量的环糊精已经成为常规技术，除非溶解度会使过量的环糊精导致太大的剂型。常识表明，对于固体口服剂型，特别是酸不稳定的药物例如克拉屈滨，预期过量的环糊精在胃的酸性环境中能保护药物，并理想地透过肠壁/胃粘膜输送它，仍作为与环糊精的复合物予以保护。在血流中，远离胃酸的有害影响，则预期药物会从复合物中解离，并实现其治疗功能。

尽管Schultz等教导，克拉屈滨-环糊精复合物会提高克拉屈滨的水溶性和酸稳定性，该现有技术并未提示，当在固体口服剂型或透粘膜剂型中施用该复合物时，如何就生物利用度和患者间差异而言来最大化或增强复合的益处。

发明概述

现在已经发现，过量的环糊精会抑制包含克拉屈滨-环糊精复合物的固体口服剂型或透粘膜剂型中的克拉屈滨的吸收，饱和的克拉屈滨-环糊精复合物的固体口服或透粘膜剂型能提高口服和/或透粘膜的生物利用度和/或实现更低的药物患者间和/或患者内差异。

本发明提供了一种药物组合物，其包含制成固体口服剂型或透粘膜剂型的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物，基本上不含有超过使复合物中的克拉屈滨的量最大化所需的最小量的环糊精。在本发明的一个具体方面，药物组合物包含制成固体口服剂型或透粘膜剂型的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物，基本上不含有超过将基本上所有的克拉屈滨维持在复合物中所需的最小量的环糊精。该组合物提供了当与胃粘膜(对于口服剂型的情况)或直肠、***、口腔或鼻的粘膜(对于透粘膜剂型的情况)接触时具有最高热力活性状态的克拉屈滨。

本发明还提供了提高克拉屈滨的口服或透粘膜生物利用度的方法，包括给需要的对象施用药物组合物，其中包含制成固体口服剂型或透粘膜剂型的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物，基本上不含有超过使复合物中的克拉屈滨的量最大化所需的最小量的环糊精。在本发明的一个具体方面，施用的组合物包含制成固体口服剂型或透粘膜剂型的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物，基本上不含有超过将基本上所有的克拉屈滨维持在复合物中所需的最小量的环糊精。

本发明还提供了提高来自固体口服剂型或透粘膜剂型的克拉屈滨在需要用克拉屈滨治疗的哺乳动物中的生物利用度的方法，该方法包括：(a)确定与选定量的克拉屈滨复合和将所述选定量的克拉屈滨维持在复合物中所需的环糊精的最小量；(b)使超过所述选定量的克拉屈滨与所述的最小量的环糊精在水性介质中合并；(c)从复合介质中去除未复合的克拉屈滨；(d)从得到的溶液中去除水，得到干燥的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物；(e)将所述的干燥的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物配制成固体口服剂型或透粘膜剂型，其基本上不含有超过使复合物中的克拉屈滨的量最大化所需的最小量的环糊精；和(f)将该剂型经口地或透粘膜地施用给哺乳动物。在该方法的一个具体方面，步骤(e)包含将所述的干燥的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物制成固体口服剂型或透粘膜剂型，基本上不含有超过将基本上所有的克拉屈滨维持在复合物中所需的最小量的环糊精。

本发明还提供了通过施用本发明的组合物来治疗哺乳动物的对施用克拉屈滨有反应的病症的方法。还提供了克拉屈滨在制备用于给药以治疗克拉屈滨反应性病症症状和增强克拉屈滨的口服或透粘膜的生物利用度的本发明的药物组合物中的应用。

在一个具体实施方案中，本发明提供了一种新的特别有利的克拉屈滨∶γ-环糊精的1∶2复合物。在一个相关的实施方案中，提供了1∶1克拉屈滨∶γ-环糊精复合物和1∶2的克拉屈滨∶γ-环糊精复合物的混合物，其中1∶2复合物是占主要的。

附图说明

参考下面的详细描述和附图，可以更容易地理解本发明的更完整的价值和它的许多附加优点，其中：

图1是相溶解度研究的结果的图示，其中用不同的环糊精(CD)摩尔浓度对不同的克拉屈滨摩尔浓度作图，用(◆)代表羟丙基-β-环糊精，(■)代表具有添加的羟丙基甲基纤维素的羟丙基-β-环糊精，且(▲)代表γ-环糊精。

图2显示了给狗施用5mg单剂量克拉屈滨后的克拉屈滨的血浆图谱，数据显示了克拉屈滨在血浆中的平均浓度(pg/ml)±5-6只动物/组的标准偏差，对时间(小时)作图，施用下述的克拉屈滨制剂：(◇)静脉内的(i.v.)推注；(*)饱和的***的克拉屈滨γ-环糊精复合物；(×)饱和的***的克拉屈滨-羟丙基-β-环糊精复合物；(●)饱和的口服的克拉屈滨-γ-环糊精复合物；(○)克拉屈滨与10倍过量的γ-环糊精的物理混合物的口服胶囊；(□)克拉屈滨复合物与10倍过量的γ-环糊精的口服胶囊；(▲)饱和的口服的克拉屈滨-羟丙基-β-环糊精复合物；和(△)克拉屈滨与10倍过量的羟丙基-β-环糊精的物理混合物的口服胶囊。

图3对比了给狗施用5mg单剂量的克拉屈滨后的克拉屈滨的血浆图谱，数据显示了平均浓度(pg/ml)±5-6只动物/组的标准偏差，对时间(小时)作图，施用下述的克拉屈滨制剂：(◆)静脉内的(i.v.)推注，(●)饱和的口服的克拉屈滨-γ-环糊精复合物，和(▲)饱和的口服的克拉屈滨-羟丙基-β-环糊精复合物。

图4对比了给狗经口服施用5mg单剂量的克拉屈滨后的克拉屈滨的血浆图谱，数据显示了平均浓度(pg/ml)±5-6只动物/组的标准偏差，对时间(小时)作图，施用下述的克拉屈滨制剂：(●)饱和的口服的克拉屈滨-γ-环糊精复合物；(○)克拉屈滨与10倍过量的γ-环糊精的物理混合物的口服胶囊；和(□)克拉屈滨复合物与10倍过量的γ-环糊精的口服胶囊。

图5对比了给狗经口服施用5mg单剂量的克拉屈滨后的克拉屈滨的血浆图谱，数据显示了平均浓度(pg/ml)±5-6只动物/组的标准偏差，对时间(小时)作图，施用下述的克拉屈滨制剂：(▲)饱和的口服的克拉屈滨-羟丙基-β-环糊精复合物；和(△)克拉屈滨与10倍过量的羟丙基-β-环糊精的物理混合物的口服胶囊。

图6说明了在施用关于图2所述的各种制剂后，克拉屈滨在5-6只狗的组中对时间(小时)作图得到的平均累积曲线下面积(AUC)(pgx h/mL)，其中各标识如图2所示。

发明详述

在本说明书和权利要求书中，采用下面的定义和一般描述。

在本文中引用的专利、公开的申请和科技文献，建立了本领域的技术人员的知识，它们都在这里整体引作参考，其程度与特别地个别引作参考相同。如果这里引用的任何文献与本说明书的具体教导存在任何冲突，应当以后者为准。类似地，如果本领域理解的对词语或短语的定义与本说明书的具体教导的词语或短语的定义存在任何冲突，应当以后者为准。

如本文所使用的术语″复合物″是指包合复合物，其中克拉屈滨分子的疏水部分(含氮环系)***环糊精分子的疏水空腔中。

如本文所使用的，无论是在过渡短语中还是在权利要求主体中，术语″包含″和″包括″都应当理解为具有开放含义。也就是说，该术语应当理解为与短语“至少具有”或“至少包括”同义。当在方法的上下文中使用时，术语″包括″是指，该方法至少包括所述的步骤，但还可以包括其它步骤。当在组合物的上下文中使用时，术语″包含″是指，该组合物至少包括所述的特征或组分，但是也可以包括其它特征或组分。

术语″基本上由......组成″具有半封闭的含义，也就是说，它们不允许包括会实质上改变方法或组合物的基本特征的步骤或特征或组分；例如，会显著干扰本文所述的组合物的目标性质的步骤或特征或组分，即该方法或组合物限于指定的步骤或材料和不会从本质上影响本发明的基本的新特征的那些。基本的新特征在这里是，提供了在固体口服剂型或透粘膜剂型中的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物，其基本上不含有超过使复合物中的克拉屈滨的量最大化所需的最小量的环糊精，从而在施用后能提供改善的生物利用度和/或更低的患者间差异。在本发明的一个具体实施方案中，基本的新特征在这里是，提供了在固体口服剂型或透粘膜剂型中的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物，其基本上不含有超过将基本上所有的克拉屈滨维持在复合物中所需的最小量的环糊精，在施用后能提供特别增强的生物利用度和/或低的患者间和/或低的患者内差异性。

术语″由......组成″和″组成″是封闭的术语，仅仅允许包括所述的步骤或特征或组分。

如本文所使用的，单数形式″一个″、″一种″和″该″具体地也包括它们所指的术语的复数形式，除非上下文另有清楚的说明。

术语″约″在本文中用于指大约、附近、粗略或左右。当术语″约″与数值范围联合使用时，它通过将边界扩展到所述数值以上和以下来修饰该范围。通常，术语″约″或″大约″在本文中用于将数值修饰到所述值以上和以下20％偏差。

当与环糊精中的克拉屈滨的复合物联合使用时，术语″饱和的″是指该复合物是克拉屈滨饱和的，也就是说，该复合物含有可以在使用的复合条件下与给定量的环糊精复合的最大量克拉屈滨。相溶解度研究可以用于提供该信息，如下文更详细描述的(下面还更详细地描述了复合的条件)。或者，可经验性地得到饱和的复合物，通过简单地向选定的环糊精的水性溶液中加入克拉屈滨，直到形成(未复合的克拉屈滨的)沉淀；最终，去除沉淀，冻干溶液，得到干燥的饱和的复合物。

表述″基本上″，如在″基本上不含有″或″基本上所有的″中，是指在精确计算量的20％内。在表述“基本上不含有超过将基本上所有的克拉屈滨维持在复合物中所需的最小量的环糊精”的情况中，从如下面更详细地解释的相溶解度研究中，可以得到将克拉屈滨维持在复合物中所需的环糊精的最小量。环糊精的实际量应当在该最小值±20％内，优选在该最小值±10％内，甚至更优选在该最小值±5％内，且应当将至少90％或更多、优选至少95％或更多的药物维持在复合物中。另一方面，当使用表述“基本上不含有超过使复合物中的克拉屈滨的量最大化所需的最小量的环糊精”时，可以使用低于前述量的环糊精，结果在剂型中可能存在更大量的未复合形式的克拉屈滨。通过使用更低浓度的环糊精溶液进行复合反应和/或通过在下述的温度范围的上限进行复合，会发生该现象。但是，认为使用足够的环糊精来将基本上所有的克拉屈滨维持在复合物中、从而使剂型中未复合的克拉屈滨的量最小化是特别有益的。

术语″患者间差异性″是指向其施用药物的患者间的差异。术语″患者内差异性″是指当在不同的时间给药时同一患者所经历的差异。

如本文所使用的，所述的变量的数值范围意在表明，使用与该范围内的任何值相等的变量，可以实现本发明。因而，对于本质上离散的变量，该变量可以等于该范围内的任何整数值，包括该范围的端值。类似地，对于本质上连续的变量，该变量可以等于该数值范围内的任何实数值，包括该范围的端值。作为一个实例，被描述成具有0-2之间的值的变量，对于本质上离散的变量，可以是0、1或2，对于本质上连续的变量，则可以是0.0、0.1、0.01、0.001或任何其它实数值。

在说明书和权利要求中，单数形式包括复数形式，除非上下文另有清楚的说明。如本文所使用的，除非另有特别说明，使用的词语″或″具有″和/或″的“包含”含义，而不是“不是/就是”的“排除”含义。

本文使用的技术和科技术语具有本发明所属领域的技术人员通常理解的含义，除非另有定义。这里参考本领域的技术人员已知的各种方法学和材料。描述药理学的基本原理的标准文献包括Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics，第10版，McGraw Hill Companies Inc.，New York(2001)。

下文更详细地参考本发明的具体实施方案。尽管将结合这些具体实施方案来描述本发明，应当明白，无意将本发明限制于这些具体的实施方案。相反地，意在覆盖可以包含在所附权利要求书所定义的本发明的精神和范围内的替代、改进和等同方案。在下面的说明中，描述了众多具体细节，以彻底理解本发明。没有这些具体细节中的部分或全部，也可以实现本发明。在其它的情况中，为了不使本发明无必要的晦涩，没有详细描述众所周知的工艺操作。

本发明提供了组合物以及制备和使用用于实现理想的药物动力学性质的药物组合物的方法。这样的组合物源自下述发现：当呈递到要经其吸收的(胃的、鼻的、直肠的、口腔的、舌下的或***的)粘膜时，其中克拉屈滨处于其最高热力学状态的环糊精和克拉屈滨的溶液伴有改善的克拉屈滨吸收，如更高的生物利用度和/或更低的患者间差异所反映的。

不希望如此限定本发明，假设通过溶解(例如，通过与流体例如体液接触)，不含有过量环糊精的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物的干燥组合物会形成局部饱和的克拉屈滨溶液，其中克拉屈滨处于最高热力活性(HTA)状态，从而有利于吸收。克拉屈滨具有相当低的(尽管不是可忽略的)固有水溶性。在饱和水性溶液中从复合物解离形成的游离的克拉屈滨表现出更稳定的活性水平，如果存在过量的环糊精，克拉屈滨会通过与环糊精重新复合而寻求更大的稳定性。通过控制环糊精的量，使得该剂型基本上不含有超过将克拉屈滨维持在复合物中所需的量的环糊精，局部饱和的溶液中的克拉屈滨不能容易地与环糊精重新结合。因此，该克拉屈滨会通过经胃粘膜(对于固体口服剂型的情况)或经鼻的、口腔的、***的或直肠的粘膜(对于透粘膜剂型的情况)的吸收，寻求更低的热力活性/更大的稳定性状态。除其他内容之外，下文特别证实了该方案能提高生物利用度，可能是通过避免或最小化由于存在过量的环糊精造成的对克拉屈滨吸收的抑制。在有大量的过量的环糊精存在下，预期溶液中的克拉屈滨会与环糊精重新结合。这不会实现最佳的生物利用度，因为如果克拉屈滨要实现其治疗功能，该药物必须从包封它的复合物中移动出来。

鉴于上述内容，显然要生产固体口服或透粘膜剂型的最佳药物组合物，这些剂型应当制成当固体剂型与粘膜处的体液接触后能释放局部饱和的克拉屈滨溶液，其中克拉屈滨处于其HTA状态。为了在体内提供这样的局部饱和的溶液，重要的是首先鉴定出要用于固体剂型中的克拉屈滨与环糊精的最佳比例，该比例在本文中称作HTA比。在***剂型的情况中，通过将饱和的复合物溶解到最小量的水中，制成了高度浓缩的溶液，将该溶液置于口腔中可以实现相同的作用。

经验性地确定HTA比，并将其鉴定为克拉屈滨与特定环糊精的比例，其对应着可以与给定量的环糊精复合的最大量的克拉屈滨。使用经验方法(例如相溶解度研究)来检测可以与不同浓度的环糊精溶液溶解的克拉屈滨的饱和浓度，可以确定HTA比。由此，该方法可以鉴别出形成饱和的克拉屈滨-环糊精复合物时的浓度。应当注意，相溶解度图上的点代表的摩尔比表明了多少摩尔的环糊精是在给定条件下将该药物维持在复合物中所需的最小量；然后可以将其转化成重量比。例如，如果相溶解度图表明，将基本上所有的克拉屈滨维持在饱和的复合物中需要9摩尔给定的环糊精，那么通过用克拉屈滨的摩尔数X其分子量和用环糊精的摩尔数X其分子量，可以得到作为适当的最优化的重量比的产物的比例。相溶解度研究还提供了关于形成的克拉屈滨-环糊精复合物的性质的信息，例如，该复合物是1∶1复合物(1分子药物与1分子环糊精复合)还是1∶2复合物(1分子药物与2分子环糊精复合)。

根据本发明，可以使用环糊精或克拉屈滨作为固定变量开始，向其中加入过量的另一种，以鉴别不同的HTA数据点(指示饱和的克拉屈滨-环糊精复合物)，并绘出得到的HTA线。典型地，在凭经验发现能促进复合物形成的条件下，向含有已知浓度的环糊精的水性溶液中加入克拉屈滨。浓溶液，例如，大约27％γ-环糊精的溶液和大约40％羟丙基-β-环糊精的溶液，在一个实施方案中特别有益。通常，在室温或在轻微加热下(至多约50℃或甚至高达60℃)进行复合。然后去除可能存在的过量的克拉屈滨，随后检测复合物中的克拉屈滨浓度。测得的浓度代表着对于给定的环糊精浓度的克拉屈滨饱和浓度。对于不同的已知浓度的环糊精，重复该方法，直到得到几个数据点。每个数据点代表着溶解在已知浓度的环糊精中的克拉屈滨的饱和浓度。然后用数据点绘图，显示出针对使用的不同的环糊精浓度的克拉屈滨的饱和浓度。该图是相溶解度图，其可以用于确定在给定的复合条件下，对于用于形成饱和的克拉屈滨-环糊精复合物的环糊精的任意具体浓度的克拉屈滨的饱和量。

本领域的技术人员能够明白，通过多种替代方法，可以鉴别出形成饱和的克拉屈滨-环糊精复合物的浓度(以及HTA比)。因此，本领域已知的适用于鉴别这些浓度的任何方法都在本发明的范围内。

已经发现，理想的药理学性质(改善的生物利用度和/或更低的患者间和/或患者内差异)与本发明的包合复合物有关。

本发明范围内的环糊精包括天然的环糊精α-、β-和γ-环糊精及其衍生物，更具体地，在衍生物中，一个或多个羟基被取代，例如被烷基、羟烷基、羧烷基、烷基羰基、羧基烷氧基烷基、烷基羰基氧烷基、烷氧基羰基烷基或羟基-(单或多烷氧基)烷基取代；且其中每个烷基或亚烷基优选地含有最多6个碳。被取代的环糊精一般可以以不同的取代度得到，例如，从1至14，优选从4至7；取代度是环糊精分子上的取代基的大致平均数，例如，在羟丙基-β-环糊精分子的情况下，是羟丙基的大致数目，所有这样的变化都在本发明的范围内。在本发明中可以使用的被取代的环糊精包括聚醚，例如，如美国专利号3,459,731所述的。被取代的环糊精的其它实例包括醚，其中一个或多个环糊精羟基的氢被替代为C_1-6烷基、羟基-C_1-6烷基、羧基-C_1-6烷基或C_1-6烷氧基羰基-C_1-6烷基，或其混合醚。更具体地，这样的被取代的环糊精是醚，其中一个或多个环糊精羟基的氢被替代为C_1-3烷基、羟基-C_2-4烷基或羧基-C_1-2烷基，或更具体地被甲基、乙基、羟乙基、羟丙基、羟丁基、羧甲基或羧乙基替代。术语″C_1-6烷基″意在包括具有1-6个碳原子的直链的和有支链的饱和的烃基，例如甲基、乙基、1-甲基乙基、1，1-二甲基乙基、丙基、2-甲基丙基、丁基、戊基、己基等。用于本文用途的其它环糊精包括葡萄糖基-β-环糊精和麦芽糖基-β-环糊精。在本发明中特别有用的是β-环糊精醚，例如M.Nogradi(1984)在Cyclodextrins of the Future，Vol.9，No.8，p.577-578中所述的二甲基-β-环糊精，随机甲基化的β-环糊精，和聚醚，例如羟丙基-β-环糊精，羟乙基-β-环糊精，羟丙基-γ-环糊精，和羟乙基-γ-环糊精，以及硫丁基醚，特别是β-环糊精硫丁基醚。除了简单的环糊精外，还可以使用有支链的环糊精和环糊精聚合物。其它的环糊精记载在，例如，Chemical and PharmaceuticalBulletin 28：1552-1558(1980)；Yakugyo Jiho No.6452(28 March1983)；Angew.Chem.Int.Ed.Engl.19：344-362(1980)；美国专利号3,459,731和4,535,152；欧洲专利号EP 0 149 197A和EP 0197 571A；PCT国际专利公开号WO90/12035；和英国专利公开GB2,189,245。描述了用于根据本发明的组合物的环糊精、且提供了环糊精的制备、纯化和分析指南的其它文献包括下述：Jozsef Szejtli，Kluwer Academic Publishers(1988)在Cyclodextrin inPharmaceuticals一章中的Cyclodextrin Technology；M.L.Bender等，Springer-Verlag，Berlin(1978)的Cyclodextrin Chemistry；Advances in Carbohydrate Chemistry，第12卷，M.L.Wolfrom编，Academic Press，New York，Dexter French的″The SchardingerDextrins″一章，第189-260页；J.Szejtli，Akademiai Kiado，Budapest，Hungary(1982)的Cyclodextrin and their Inclusioncomplexes；I.Tabushi，Acc.Chem.Research，1982，15，第66-72页；W.Sanger，Angewandte Chemie，92，第343-361页(1981)；A.P.Croft等，Tetrahedron，39，第1417-1474页(1983)；Irie等，Pharmaceutical Research，5，第713-716页(1988)；Pitha等，Iht.J.Pharm.29，73(1986)；美国专利号4,659,696和4,383,992；德国专利号DE 3,118,218和DE-3,317,064；和欧洲专利号EP 0 094157A。描述β-和γ-环糊精的羟烷基化衍生物的专利包括Pitha的美国专利号4,596,795和4,727,064，Müller的美国专利号4,764,604、4,870,060和Müller等的美国专利号6,407,079。

特别令人感兴趣的用于与克拉屈滨复合的环糊精包括：γ-环糊精β-和γ-环糊精的羟烷基(例如羟乙基或羟丙基)衍生物；β-或γ-环糊精的羧烷基(例如羧甲基或羧乙基)衍生物；β-环糊精硫丁基醚；二甲基-β-环糊精；和随机甲基化的β-环糊精。2-羟丙基-β-环糊精(HPβCD)，2-羟丙基-γ-环糊精(HPγCD)，随机甲基化的β-环糊精，二甲基-β-环糊精，β-环糊精硫丁基醚，羧甲基-β-环糊精(CMβCD)，羧甲基-γ-环糊精(CMγCD)和γ-环糊精(γCD)本身是特别有利的，特别是γ-环糊精和羟丙基-β-环糊精，最特别是γ-环糊精。

如本文所解释和示例的，可以在有利于复合物形成的条件下，在液体环境中制备出用于本发明的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物的组合物。随后可以将得到的液体制品转化成适用于作为固体口服或透粘膜剂型施用的干燥形式。

技术人员能够明白，本领域可以得到多种制备本文所述的组合物的方法。本文所示例的一种可得到的方法包括下述步骤：将克拉屈滨混合到环糊***性溶液中，将复合介质维持在室温，搅拌约6至约24小时，即足以实现平衡的时间，分离可能存在的未复合的克拉屈滨(例如，通过过滤或离心)，冻干或冷冻干燥饱和溶液，形成固体饱和的克拉屈滨-环糊精复合物混合物。

冷冻干燥也称作冻干，由3个基础阶段组成：首先是冷冻阶段，然后是首次干燥阶段，最后是二次干燥阶段。下面的实施例2提供了所述的进行批式冻干的细节。通过遵循在本文整体引作参考的和依赖的Xiaolin(Charlie)Tang和Michael J.Pikal in PharmaceuticalResearch，第21卷，第2期，2004年2月，191-200所述的原理，可以进一步优化该方法。

根据本发明的药物组合物可以任选地包含一种或多种赋形剂或其它的药学上惰性的组分。但是，本发明的优点之一是，使用进行成形和生产特定形式(例如片剂或贴剂)所必需的最小量的赋形剂，就可以制备出如本文所述的克拉屈滨药物形式。可以从不会影响克拉屈滨、环糊精或复合物形成的那些赋形剂中选择。

任选地在药学上可接受的介质中和任意的众所周知的药学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、净化剂、矫味剂、着色剂和赋形剂一起配制剂型(见Handbook of PharmaceuticalExcipients，Marcel Dekker Inc.，New York and Basel(1998)；Lachman等编，The Theory and Practice of Industrial Pharmacy，第3版，(1986)；Lieberman等，Eds.Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Dekker Inc.，New York and Basel(1989)；和The Handbookof Pharmaceutical Excipients，第3版，American PharmaceuticalAssociation and Pharmaceutical Press，2000)；还见Rermington′sPharmaceutical Sciences，第18版，Gennaro，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1990)和Remington：The Science and Practice ofPharmacy，Lippincott，Williams & Wilkins，(1995))。简单的固体口服或透粘膜剂型由与小量(例如约1％重量)合适的粘合剂或润滑剂(例如硬脂酸镁)一起压制的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物组成。

在具体的实施方案中，饱和的克拉屈滨-环糊精复合物用于透粘膜地或经口地施用克拉屈滨。

如本文所使用的，″粘膜″指鼻、口腔、***和直肠腔内衬的上皮膜，以及胃内衬的上皮膜(胃粘膜)。如本文所使用的，粘膜的和透粘膜的可互换地使用。透粘膜的输送方法和形式是本领域众所周知的。它们包括***的和舌下的片剂、锭剂、粘性贴剂、凝胶、溶液或喷雾剂(粉末、液体或气雾剂)和栓剂或泡沫(用于直肠的或***的施用)。透粘膜的输送方法和形式不包括用于经口服使用的方法和形式，后者旨在被吞咽，在本文中简单地称作口服剂型，尽管它们最终会通过胃粘膜输送药物。当透粘膜的形式是液体时，可以通过将饱和的复合物溶于最小量的水中来得到，例如将500mg与HPβCD的饱和复合物溶于0.5ml水中(50％重量/重量溶液)，或将500mg饱和的γCD复合物溶于1.0ml水中。可以将几滴这样的溶液滴入口腔中，并在那里保留约2分钟，以进行经口腔粘膜的吸收。然而，固体透粘膜剂型一般优于液体形式。

在某些情况下，通过加入不同的赋形剂和添加剂来提高溶解度或增强渗透，例如通过修饰微环境，或通过加入粘附粘膜的赋形剂来提高输送***和粘膜组织之间的接触，可以进一步促进经口服的或粘膜的吸收。

通过将***剂量单位置于接受药物治疗的个体的下牙龈和与其相对的口粘膜之间，可以实现口腔的药物输送。可以使用适用于***施用药物的赋形剂或介质，包括本领域已知的任意的这样的材料，例如，无毒的且不与组合物的其它组分发生有害相互作用的任意的液体、凝胶、溶剂、液体稀释剂、增溶剂等。将固体剂量单位制成能经过预定的时间阶段逐渐溶解，以在口腔唾液中生成基本上饱和的药物溶液，使克拉屈滨经粘膜吸收，其中基本上在整个该时间段内提供药物输送。***剂量单位还可以包含能促进生产的润滑剂，例如，硬脂酸镁等。可以包含在***剂量单位中的其它组分包括但不限于矫味剂、渗透增强剂、稀释剂、粘合剂等。***剂量单位的其余部分可包括生物蚀解的聚合载体和可能需要的任何赋形剂，例如粘合剂、崩解剂、润滑剂、稀释剂、矫味剂、着色剂等，和/或其它的活性药物。

***载体可以包括具有足够粘性的聚合物，以确保该剂量单位能粘附到口腔粘膜持续必需的时间段，即在此期间将克拉屈滨输送到口腔粘膜的时间段。另外，聚合载体是可逐渐“生物蚀解”的，即该聚合物在接触水分后以预定的速率水解。可以使用药学上可接受的、能提供合适的粘附度和理想的药物释放特征的任意聚合载体，且与要施用的克拉屈滨和***剂量单位中可能存在的任意其它成分相容。通常，聚合载体包括能粘附到口腔粘膜的湿表面上的亲水的(水溶性的和水溶胀性的)聚合物。这里使用的聚合载体的实例包括丙烯酸聚合物和共聚物，例如，称作″卡波姆″的那些，例如，

其它合适的聚合物包括但不限于水解的聚乙烯醇、聚氧化乙烯(例如，Sentry

聚丙烯酸酯(例如，

乙烯基聚合物和共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、葡聚糖、瓜尔胶、果胶、淀粉和纤维素聚合物，例如羟丙基甲基纤维素(例如，羟丙基纤维素(例如，羟丙基纤维素醚、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、乙酸-邻苯二甲酸纤维素、乙酸-丁酸纤维素等。剂量单位仅仅需要含有饱和的克拉屈滨-环糊精复合物。但是，在有些情况下，它可理想地包含一种或多种前述的载体和/或一种或多种其它组分。例如，可以包含润滑剂来方便生产该剂量单位的工艺过程；润滑剂还可以优化蚀解速率和药物流出。如果存在润滑剂，其量级为剂量单位的0.01重量％至约2重量％、优选约0.01重量％至1.0重量％。合适的润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、硬脂酰延胡索酸钠、滑石、氢化植物油和聚乙二醇。

根据本发明，还可以以用于***或直肠施用的栓剂或泡沫形式施用饱和的克拉屈滨-环糊精复合物。通过众所周知的方法，可以制备出这些组合物，例如，在栓剂的情况中，通过将饱和的复合物与合适的无刺激性的赋形剂或粘合剂混合，后者在常温下是固体，但是在***或直肠温度下是液体，因此会在***或直肠中熔解，释放出药物。这样的材料包括可可脂和聚乙二醇。传统的粘合剂和载体包括，例如，聚亚烷基二醇或甘油三酸酯[例如PEG 1000(96％)和PEG 4000(4％)]。从含有约0.5重量/重量％至约10重量/重量％、优选约1重量/重量％至约2重量/重量％范围的活性成分的混合物，可以形成这样的栓剂。

对于鼻内使用，可以使用饱和的复合物的粉末喷雾剂或软膏剂，优选粉末形式。

而且，对于人用，***剂型，特别是***片剂或糯米纸囊剂或盘，有利地具有约15-30分钟的崩解时间，或口腔贴剂(其中药物仅仅从粘附到口腔粘膜上的那一侧释放，而另一侧是不可透过的)，是令人感兴趣的。口腔的施用可以利用在本文整体引作参考的和依赖的美国专利号4,226,848和4,250,163中记载的Nagai等的发明。因而，为了本文的用途，可以制备出能粘附口腔粘膜的片剂，其包括：(a)水溶胀性的和能粘附粘膜的聚合基质，其包括约50％至约95％重量的纤维素醚和约50％至约95％重量的丙烯酸均聚物或共聚物或其药学上可接受的盐，和(b)分散在其中的适宜量的克拉屈滨，作为与2-羟丙基-β-环糊精或γ-环糊精的饱和复合物。理想的是，为了储存稳定性，该片剂是无水的。

本文所述的方法和药物组合物能为需要用克拉屈滨治疗的患者的治疗提供新的治疗形式。如本文所表明的，本发明解决了传统上伴随着口服克拉屈滨的较差的生物利用度问题。或者，通过施用透粘膜的输送形式，可以完全避免口胃途径。

本发明的组合物特别适用于作为治疗任何克拉屈滨反应性疾病的疗法。文献中充分记载了对克拉屈滨有反应的几种疾病状态(见下文)。对于任意的目标疾病状态，使用有效量的优化的克拉屈滨-环糊精复合物(例如，对于治疗多发性硬化、类风湿性关节炎或白血病有效的量)。

术语″治疗有效量″或″有效量″用于表示在能有效地实现追求的治疗结果的剂量的治疗。在文献中所述的治疗上有效的剂量包括对下述疾病的治疗有效量：毛细胞白血病(0.09mg/kg/天，进行7天)，多发性硬化(约0.04至约1.0mg/kg/天(见美国专利号5,506,214))；其它疾病，也见美国专利号5,106,837(自身溶血性贫血)；5,310,732(炎性肠病)；5,401,724(类风湿性关节炎)；5,424,296(恶性星形细胞瘤)；5,510,336(组织细胞增多病)；5,401,724(慢性髓性白血病)；和6,239,118(动脉粥样硬化)。

另外，不同的剂量和给药方案已经记载在文献中，用于治疗多发性硬化；见，例如：Romine等，Proceedings of the Association ofAmerican Physicians，第111卷，第1期，35-44(1999)；Selby等，The Canadian Journal of Neurological Sciences，25，295-299(1998)；Tortorella等，Current Opinion in InvestigationalDrugs，2(12)，1751-1756(2001)；Rice等，Neurology，54，1145-1155(2000)；和Karlsson等，British Journal ofHaematology，116，538-548(2002)；它们都在这里整体引作参考和依赖。

而且，应当考虑文献中教导了治疗有效剂量的给药途径。尽管本发明的组合物在经口或透粘膜施用后能优化克拉屈滨的生物利用度，应当明白，即使是来自口服或透粘膜剂型的最佳生物利用度，也不能期望会接近在静脉内施用后获得的生物利用度，特别是在较早的时间点；见，例如，下文中的图3。因而，经常需要增加为静脉内施用推荐的剂量，以达到整合进固体口服剂型或透粘膜剂型的合适剂量。目前认为，对于多发性硬化的治疗，每天施用一次在本固体剂型中的作为饱和的克拉屈滨-环糊精复合物的10mg克拉屈滨，在第一个月持续5-7天，在第二个月重复另外的5-7天，然后10个月不治疗。或者，给患者每天施用一次10mg剂量，每月5-7天，持续6个月，然后18个月不治疗。对于其它的给药信息，也见美国临时专利申请号[IVAX0021-P-USA/代理人案号033935-011]，和美国临时专利申请号[IVAX0022-P-USA/代理人案号033935-012]，二者的标题都是″Cladribine Regimen for Treating Multiple Sclerosis″，于2004年3月25日提交，它们在这里整体引作参考。

而且，技术人员能够明白，通过微调和/或通过与其它活性成分一起施用根据本发明的克拉屈滨，可以降低或提高在本文中施用的克拉屈滨的治疗有效量。因此，本发明提供了使给药/治疗与针对给定的哺乳动物的具体情况相适应的方法。可以容易地确定治疗有效量，例如，经验性地从相对小量开始，并逐步增加，同时评价有益效果。

如前面段落中所述的，施用根据本发明的克拉屈滨，可以伴随着施用一种或多种用于治疗克拉屈滨反应性病症的其它活性成分。以与每种其它的活性成分和治疗的病症相适应的给药途径、剂量和频率，施用其它的活性成分。例如，在多发性硬化的治疗中，其它有用的药物包括干扰素β其与在人体内发现的天然存在的蛋白相同；格拉默醋酸酯即氨基酸谷氨酸、赖氨酸、丙氨酸和酪氨酸的随机链(聚合物)；那他珠单抗

即一种单克隆抗体；阿仑单抗人源化的抗-CD52单克隆抗体；4-氨基吡啶(也称作4-AP和氨吡啶)，即一种能阻断神经元中的钾通道的药物；和金刚烷胺，即一种可以改善肌肉控制和减少肌肉僵硬且用于减轻多发性硬化中的疲劳症状的抗病毒药物，为此目的，还可以使用匹莫林和L-肉毒碱(一种草药制品)。在毛细胞白血病的治疗中，其它的活性成分可包括干扰素α，喷司他丁，氟达拉滨，美罗华(一种抗-CD 20单克隆抗体)和抗-CD22重组免疫毒素BL 22；其它附加的活性成分在其它类型的白血病中可能是适当的。在类风湿性关节炎的治疗中，可以选择许多其它的活性成分。它们包括NSAIDS(非甾体抗炎药)，其有3种类型：水杨酸盐例如阿司匹林，传统的NSAIDS例如布洛芬和吲哚美辛，和COX-2抑制剂例如塞来昔布罗非考昔美洛昔康

伐地考昔

lumiracoxib

和艾托考昔

可以与本发明联合使用的用于治疗类风湿性关节炎的其它药物包括DMARDS，糖皮质激素，生物反应调节剂和非-NSAID的止痛剂。DMARDS是疾病调节性抗风湿药，其包括氨甲蝶呤，氯喹，来氟米特柳氮磺吡啶，金，青霉胺，环孢霉素，甲基环磷酰胺和硫唑嘌呤。糖皮质激素包括***，***龙，曲安西龙和许多其它药物。生物反应调节剂(其能恢复免疫***的与疾病斗争的能力)包括依那西普一种肿瘤坏死因子抑制剂，英夫利昔单抗其也是一种抗-TNF药，阿那白滞素

即一种选择性的IL-1阻断剂，和

即一种人单克隆抗体，其是另一种抗-TNF药。非-NSAID的止痛剂包括对乙酰氨基酚以及麻醉性的止痛剂例如氢可酮，羟考酮和右丙氧芬。一般而言，其作用机理与克拉屈滨不同的那些药物对于和本文所述的克拉屈滨组合物一起治疗是特别有益的。可以将单一剂型的经口或透粘膜施用途径有效的、且与本发明克拉屈滨复合物相容的那些药物整合进本剂型中；另外，它们当然可以以适合它们的量、频率和施用途径分开地施用。

如本文所使用的，″治疗″指，与未根据本发明治疗的个体的症状相比，减轻、预防、阻止已经给其施用了本发明化合物的个体中的症状的发展，控制、减轻和/或逆转其症状。从业人员能够明白，根据熟练的操作人员(医生或兽医)的连续临床评价来确定后续的治疗，使用本文所述的复合物、组合物、剂型和方法。这样的评价会辅助和告知验证是否增加、减少或继续特定的治疗剂量和/或改变给药方式。

本发明的方法意在用于可以从本发明的方法获益的任何对象/患者。因而，根据本发明，术语″对象″以及″患者″包括人和非人的对象，特别是家畜。

技术人员已知的任何合适的材料和/或方法都可以用于实施本发明。但是，描述了优选的材料和方法。除非另有说明，在下面的说明和实施例中提及的材料和试剂等都可以从商业来源得到。

下面的实施例意在进一步说明本发明的某些优选实施方案，而不是限制性的。仅仅使用常规实验，本领域的技术人员能够认识到或能够确定本文所述的具体物质和方法的许多等同方案。

实施例

实施例1相溶解度研究

如下进行相溶解度研究。将过量的克拉屈滨加入不同浓度的γ-环糊精(γCD)或羟丙基-β-环糊精(HPβCD)的环糊精溶液中，如下面的实施例2所述进行复合。另外，在一组实验中，研究了羟丙基甲基纤维素(HPMC)对复合的影响。通过过滤去除多余的未溶解的克拉屈滨。检测复合溶液中的克拉屈滨的量，得到数据点。使用不同的已知浓度的环糊精重复该方法，直到得到几个数据点。然后用这些数据点绘图，每个数据点代表可以与特定浓度的环糊精复合的克拉屈滨的最大量，即每个点代表一种饱和的克拉屈滨-环糊精复合物。由数据点生成的线上的点代表HTA比。该线上的任意点代表一种特定的、唯一的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物。本领域的技术人员能够认识到，如果将过量的环糊精加入到已知浓度的克拉屈滨溶液中，可以得到相同的结果。

作为一个实例，制备了不同浓度的环糊精溶液，并通过提供过量的克拉屈滨，用克拉屈滨饱和。下面的表I列出了对于给定的环糊精浓度的给定环糊精的饱和环糊精溶液。

表I

用表I中的克拉屈滨对环糊精的摩尔浓度绘图，表示为图1。为克拉屈滨-HPβCD、克拉屈滨-HPβCD和0.1％ HPMC以及克拉屈滨-γCD绘出的线代表实验条件下的最大克拉屈滨溶解，即克拉屈滨浓度与环糊精浓度的HTA比。每条图线上面的面积代表存在着过量的不溶的克拉屈滨的情况。每条图线下面的面积代表环糊精超过了将复合物维持在溶液中所需的量的情况。显然，表I和图1中的数据表明，HPMC(一种已知的复合促进剂)在较低的浓度时没有作用，且在较高的浓度时具有负面作用。

在图1中显示的克拉屈滨-HPβCD的HTA图是近似线性的；这指示着1∶1复合物，其中1分子的药物与1分子的环糊精复合。图1还表明，需要额外的环糊精来将克拉屈滨维持在复合物中。例如，在γ-环糊精的情况中，需要约0.10摩尔γCD来将约0.01摩尔克拉屈滨维持在其饱和复合物中；在HPβGD的情况中，需要约0.10摩尔环糊精来将约0.017摩尔克拉屈滨维持在其饱和的复合物。但是，在γCD的情况中，在更高浓度的环糊精时，药物溶解度显著提高；对于约0.15摩尔浓度的γCD，线的斜率改变，表明形成了克拉屈滨与环糊精的1∶2复合物，也就是说，1分子的克拉屈滨与2分子的γ-CD复合，后者实质上包围和保护克拉屈滨分子。

认为在高环糊精浓度下，2分子的γ-CD彼此通过氢键结合，并将克拉屈滨分子包入它们之间的空腔。认为这是一个逐步的过程，其中首先形成1∶1复合物，然后第二个γ-CD分子与1∶1复合物中的γ-CD通过氢键结合，形成1∶2复合物。当然，经常得到1∶1和1∶2复合物的混合物，但是1∶2复合物占优势是有利的。因而，在γ-CD的情况下，约0.20摩尔浓度的环糊精能将约0.017摩尔克拉屈滨维持在其饱和的复合物中。然后，在更高的环糊精和药物浓度时，对于给定量的克拉屈滨所需的环糊精的量，在γCD和HPβCD之间差异较小，且与HPβCD相比，γ-CD能成比例地溶解更多的克拉屈滨。由于在更高浓度的γCD下形成的1∶2复合物是比1∶1复合物更强的复合物，当这样的1∶2复合物在粘膜处的体液中释放药物时形成的饱和溶液中的克拉屈滨是更不稳定的，即具有比从1∶1复合物中释放出的克拉屈滨更高的热力活性，有利于药物通过粘膜的更强移动。与γCD的复合物也是有利的，因为γCD是天然的环糊精，因而存在较少的组织相对毒性。而且，在固体口服剂型的情况下，认为与γ-CD的1∶2复合物能更好地保护克拉屈滨免受胃酸的攻击，因为它能以环糊精基本上包围药物分子，因而能独特地较好地适用于本发明的目的。

实施例2 克拉屈滨-环糊精复合物的制备

A部分：通过下面的一般方法，使克拉屈滨与HPβCD或γCD复合。

将过量的克拉屈滨的水性悬浮液和环糊精的浓溶液(对于γ-环糊精，大约27％；对于HPβCD，大约40％)在室温搅拌混合约9小时。这会达到平衡。过滤去除可能存在的过量的未复合的克拉屈滨。为了形成固体饱和的克拉屈滨-环糊精复合物，在整合进固体***或口服片剂之前，冻干干燥水性克拉屈滨-环糊精溶液。冻干方法包括：使复合溶液迅速降到约-40℃至约-80℃的温度维持约2至4小时、优选约3至4小时的冷冻阶段，例如约-45℃的温度维持约200分钟，随后进行在约-25℃维持约80-90小时的首次干燥阶段，典型地在低压下，然后进行在约30℃维持约15-20小时的二次干燥阶段。

通过HPLC(使用Hypersil ODS 3微米柱和基于乙腈的流动相，在264nm进行紫外线检测)，可以分析通过前述一般方法制备的产物，以确定终产物中的克拉屈滨与环糊精的重量比。通过本领域已知的方法，包括例如通过检查外观，通过HPLC确定总杂质含量，使用KarlFischer滴定仪确定水含量，通过标准方法检测溶解性，例如使用USP<711>Apparatus II装置和在264nm进行紫外线检测，检查含量均匀性和通过HPLC分析活性成分进行定量测定，可以进一步表征终产物制品。

B部分：

通过前述的一般方法，如下制备了2批克拉屈滨/环糊精产物：使用了γ-CD的FD02和使用了HPβCD的FD03：

对于每批，将纯化水(对于FD02，585ml；对于FD03，575ml)分配到1升玻璃瓶中。称量γ-环糊精(116g)和2-羟丙基-β-环糊精(115g)，经30分钟缓慢地加入搅拌的水中。称量克拉屈滨(对于FD02，2.53g；对于FD03，2.76g)，加入各自的搅拌的环糊精溶液中。超声处理溶液20分钟。在室温搅拌得到的澄清溶液9小时。将溶液装入100ml冻干瓶中(20ml溶液/瓶)，部分地塞住填充的瓶子。冻干包括：在-45℃冷冻约3.3小时，在-25℃、100毫托的压力下进行首次干燥阶段约85.8小时，在30℃进行二次干燥阶段约约17.5小时，如下所述：

冻干周期

通过HPLC(使用Hypersil ODS 3微米柱和基于乙腈的流动相，在264nm进行紫外线检测)，分析了通过前述方法制备的FD02和FD03批次的克拉屈滨/环糊精，经验性地发现其具有下述特征：

复合物	重量∶重量	重量比
复合物	重量∶重量	重量比	克拉屈滨∶γ-CD	2.53g∶116.0g	1∶46
克拉屈滨∶HPβCD	2.76g∶115.0g	1∶42	克拉屈滨∶γ-CD	2.53g∶116.0g	1∶46

通过DSR和X-射线衍射方法，分析了产物，以确定冻干产品中的任何游离的克拉屈滨。重要的是，样品在210℃至230℃的区域没有表现出跃迁，后者与晶体克拉屈滨的熔解有关。在两种情况下，在210℃至230℃的范围内，都没有记录到显著的热活性，表明在冻干结束时得到的复合物不具有任何显著量的游离晶体克拉屈滨，考虑到分析方法的灵敏度(至多3％重量/重量)。2批复合物FD02和FD03的X-射线衍射痕迹中没有晶体克拉屈滨的峰，也支持该结论。

如上所述，这些克拉屈滨∶环糊精复合物具有下述的克拉屈滨∶环糊精重量比：对于克拉屈滨∶γ-环糊精，为约1∶46；对于克拉屈滨∶羟丙基-β-环糊精，为约1∶42。接近这些值的克拉屈滨∶环糊精重量比，例如约1∶35至约1∶50，是最理想的。这些比例可以根据使用的具体环糊精和在复合溶液中环糊精的量以及复合温度而变化。

实施例3

药物动力学研究

在毕尔格猎犬模型中，评价了克拉屈滨在与γCD或HPβCD复合时的生物利用度。预期从该模型得到的数据对于人体应用能有代表性。

将如实施例2的B部分制备的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物FD02和FD03用于制备口服和***片剂。复合物材料与硬脂酸镁穿过18目(0.9mm)筛，混合5分钟，使用10mm冲压机压制。该10mm片剂具有上面略凸的形状和下面平斜边的形状。生产配方如下：

表II，A部分

*该量的复合物含有约5mg克拉屈滨/片。

表II，B部分

成品片剂的性质	克拉屈滨：γ-CD片剂RDT-0418/C	克拉屈滨：HP-β-环糊精片剂RDT-0418/D
成品片剂的性质	克拉屈滨：γ-CD片剂RDT-0418/C	克拉屈滨：HP-β-环糊精片剂RDT-0418/D	平均重量	237.0mg	217mg
硬度	4.0Kp	6.72Kp	平均重量	237.0mg	217mg
硬度	4.0Kp	6.72Kp	脆性	0.5％	0.4％
厚度	3.8mm	3.3mm	脆性	0.5％	0.4％
厚度	3.8mm	3.3mm	崩解时间	8分钟	8分钟

如下在毕尔格猎犬模型中进行了生物利用度和药物动力学研究。

使从IDRI(Dunakeszi，Hungary)得到的远系繁殖的雄性毕尔格猎犬(称作PM01-PM06)随意获取实验室饮食和水。在整个研究中使用相同的狗，以使对象间的和对象内的差异性最小。如下进行生物利用度和药物动力学研究。

在第一次实验阶段，给实验对象静脉内施用5mg克拉屈滨(0.25mg/ml，在等渗盐水中)。在48小时内，以不同的时间间隔收集血样。在第二次实验阶段，一半对象口腔接受如上所述的含有饱和的克拉屈滨-γCD或-HPβCD复合物的片剂。在48小时内，收集系列血样。第三次实验阶段重复第二次实验阶段，只是以前接受γ-环糊精***片剂的对象现在接受羟丙基-β-环糊精***片剂，第二阶段的羟丙基-β-环糊精片剂接受者现在接受γ-环糊精***片剂。第四和第五实验阶段重复实验阶段2和3，只是经口服给予片剂。

通过HPLC和LC/MS/MS方法，检测血液中的克拉屈滨水平。使用TopFit 2.0药物动力学和药效学数据分析***来进行数据的药物动力学分析。将对照(静脉内的)和克拉屈滨-环糊精复合物的生物利用度研究的结果显示在表III至VII中，并总结在表VIII中。

表III中的各列的标头定义如下：

C_initial是推注结束时的外推值；

C_first是在施用剂量后5分钟首次测定的浓度；

t1/2 terminal是终末消除半衰期；

AUD是测得的数据下的面积，以线性梯形规则积分；

AUD_ext是从最后测量的时间点至无穷的外推面积；

AUC是外推至无穷的AUD；

CI_tot是总体清除率(剂量/AUC)；和

MRT_tot是平均停留时间。

表IV至VII中的各列的标头定义如下：

C_max是测得的峰浓度；

T_max是至C_max的时间；

t1/2 terminal是终末消除半衰期；

AUD是测得的数据下的面积，以线性梯形规则积分；

AUD_ext是从最后测量的时间点至无穷的外推面积；

AUC是外推至无穷的AUD；

MRT_tot是平均停留时间；和

F是以％表达的生物利用度。

使用Analyst Software 1.1(PE SCIEX，Foster City，US)，确定峰面积、校准曲线、准确度、精密度值和浓度。为了计算平均值和标准偏差，使用了Excel 5.0软件。使用分析物和内部标准品的浓度比相对于它们的峰面积比，拟合校准曲线。通过加权的最小平方线性回归分析，在实验点上拟合直线。使用的加权方案是1/浓度平方(pg/ml血浆)。

在静脉内施用后早期的时间点，血浆浓度超过了校准曲线的上限。因而重新注射更小量的样品，以证实线性检测器反应。由于标准品/内部标准品比在适当的检测器反应保持相同，可以接受超过100ng/ml的浓度。为了计算平均值、标准偏差和CV％，使用了Excel 5.0软件。不接受低于定量限的水平。仅仅对静脉内施用后测得的浓度计算平均值和标准偏差值。

表VIII

*：从均值排除(因为获得的值与其它对象相比高度反常)

**：从均值排除(因为受试对象吞下了药物剂型)

a：过量的环糊精，约是用于饱和复合物的10倍。

这些研究中的环糊精的总量是对5mg克拉屈滨约2.5gm。

基于各血浆浓度对时间的曲线，进行药物动力学分析。计算从各数据得到的参数的平均值和标准偏差。使用线性-梯形规则计算从0至最后测量浓度的血浆浓度-时间曲线下面积(AUD)。使用终点回归线，以下述方式计算外推至无穷的面积(AUC_t→∞)：AUC_t→∞＝C_calc/λ_z

其中，C_calc代表通过在测得的浓度大于定量限的最后取样时间点的回归线估计的血浆浓度，λ_z代表从回归线计算出的速度常数。

通过半对数曲线的线性部分的视觉确定，选择决定回归线(即最终阶段)的各点。通过将部分面积加在一起，计算出总曲线下面积(AUC)：AUC＝AUD+AUC_t→∞。用在特定阶段施用的实际剂量使AUC值标准化。为了计算生物利用度，将***/口服AUC/剂量值除以静脉内AUC/剂量值。

得到了个体的血浆水平-时间曲线。在静脉内施用后发现较小的个体间差异性。非常快的初始降低后，克拉屈滨的经未消除半衰期是约10小时。证实了平均总体清除率是17ml/min/kg。在***施用2种制剂的过程中，克拉屈滨∶γ-环糊精复合物的溶解期比克拉屈滨：HP-β-环糊精复合物长。尽管在***和口服施用后峰浓度和吸收特征均表现出了较高的个体间差异性，总暴露值(AUC)表现出低得多的差异性。证实了口服生物利用度是好的：γ-环糊精和羟丙基-β-环糊精复合物分别是50±3％和45±5％。***生物利用度值较低：γ-环糊精复合物的为37±10％，羟丙基-β-环糊精复合物的为30±4.5％。

在下面的表IX中显示了进一步对比γ-环糊精复合物和混合物的狗药物动力学研究的结果。″口服复合物″列描述了在2.5gγ-环糊精中的5mg克拉屈滨的绝对生物利用度结果；这约是5mg克拉屈滨饱和复合物中的环糊精量的10倍。该制剂与″口服混合物″列相同，只是制备了复合物，而不是仅仅混合各组分。″口服混合物″和″口服复合物″的结果是可比较的，表明使用这样大的过量的环糊精，在溶解过程中会形成复合物，干扰溶解，并对生物利用度产生负作用。如前使用相同的狗和相同的实验方法。这些结果表明，使用过量的环糊精是达不到预期目标的，即基本上不含有超过将基本上所有的克拉屈滨维持在复合物中所需的最小量的环糊精的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物提供了增强的生物利用度和降低的患者间差异性。

表 IX

*从平均值排除

a：过量的环糊精，约是用于饱和复合物的10倍。这些研究中的环糊精的总量是对于5mg克拉屈滨约2.5gm。

将前述药物动力学研究的结果表示在图2-6中。

图2显示了以上述的不同制剂施用5mg单次剂量后，克拉屈滨在狗中的血浆曲线，其中数据是平均值±标准偏差，每组5-6只动物。用血浆的平均药物浓度(pg/ml)对时间(小时)绘图。尽管每个实验进行48小时，仅仅将前6小时表示在图中；6小时后，大多数浓度已回归至或接近基线，因此没有显示在图中。认为静脉内的值(◇)能产生100％生物利用度，并与其对比了口服和***形式的血浆水平。标识的含义见上文的“附图说明”。在这些实验中发现，与γ-环糊精(*)和羟丙基-β-环糊精(x)的饱和复合物的***制剂不如口服制剂有效，这可以从图2中容易地看出。关于5种不同的口服制剂的结果，可以参考图3-5更容易地看出。

图3对比了静脉内的制剂(◆)、口服饱和的克拉屈滨-γ-环糊精复合物制剂(●)和口服饱和的克拉屈滨-羟丙基-β-环糊精复合物制剂(▲)(图2所示)的血浆曲线。这两种口服制剂均提供了理想的特征。

图4对比了口服饱和的克拉屈滨-γ-环糊精复合物制剂(●)、克拉屈滨与10倍过量的γ-环糊精的物理混合物的口服胶囊(○)克拉屈滨-γCD复合物与10倍过量的γ-环糊精的口服胶囊(□)图2所示的血浆曲线。从中可以看出，过量的环糊精会减少血浆中的克拉屈滨的量，特别是在施用后的前1小时。

图5对比了口服饱和的羟丙基-β-环糊精复合物制剂(▲)和克拉屈滨与10倍过量的羟丙基-β-环糊精的物理混合物的口服胶囊(△)(图2所示)的血浆曲线。从中再次可以容易地看出，过量的环糊精会减少复合物中的克拉屈滨的量。在该情况下，在施用后的前2小时看到了减少。

图6说明了对于图2所示的8种制剂的累积曲线下面积(AUC)(pgxh/ml)。同样，数据是每组5-6只动物的平均值。

因而各图图示说明了表III至IX中的数据所显示的内容，即制成固体口服或透粘膜剂型的基本上不含有超过将基本上所有的克拉屈滨维持在复合物中所需的最小量的环糊精的饱和的克拉屈滨-环糊精复合物能够增强生物利用度，同时具有可接受的患者间差异性。

认为前面的内容仅仅用于解释本发明的原理。而且，由于本领域的技术人员能容易地想到进行许多改进和变化，不应当将本发明限于所示的和描述的精确构成和操作，因此，可以实现的其所有合适的改进和等同方案都在要求保护的本发明的范围内。

Claims

1.制成固体口服剂型的含有饱和的克拉屈滨-环糊精复合物的药物组合物，所述的组合物基本上不含有超过将基本上所有的克拉屈滨维持在复合物中所需的最小量的环糊精，其中环糊精是γ-环糊精，羟丙基-β-环糊精，羟丙基-γ-环糊精，二甲基-β-环糊精，随机甲基化的β-环糊精，羧甲基-β-环糊精或硫丁基-β-环糊精。

2.根据权利要求1的组合物，其中环糊精是γ-环糊精。

3.根据权利要求1的组合物，其中环糊精是羟丙基-β-环糊精。

4.根据权利要求2的组合物，其中复合物包含1∶2克拉屈滨∶γ-环糊精复合物。

5.根据权利要求2或3的组合物，其中克拉屈滨与环糊精的重量比是1∶35至1∶50。

6.根据权利要求2的组合物，其中克拉屈滨与γ-环糊精的重量比是1∶46。

7.根据权利要求3的组合物，其中克拉屈滨与羟丙基-β-环糊精的重量比是1∶42。

8.根据权利要求1、2和3中的任一项的组合物，其中克拉屈滨与环糊精的摩尔比对应着位于克拉屈滨在不同浓度的环糊精中的饱和复合物的相溶解度图上的点。

9.根据权利要求8的组合物，其中环糊精是γ-环糊精，且该点取自指示着形成克拉屈滨∶γ-环糊精的1∶2复合物的相溶解度图部分。

10.饱和的克拉屈滨-环糊精复合物在制备用于给药以治疗克拉屈滨反应性病症症状的固体口服剂型中的应用，所述的剂型基本上不含有超过将基本上所有的克拉屈滨维持在复合物中所需的最小量的环糊精，其中克拉屈滨反应性病症选自多发性硬化、类风湿性关节炎、炎性肠病和白血病，其中环糊精是γ-环糊精，羟丙基-β-环糊精，羟丙基-γ-环糊精，二甲基-β-环糊精，随机甲基化的β-环糊精，羧甲基-β-环糊精或硫丁基-β-环糊精。

11.根据权利要求10的应用，其中克拉屈滨反应性病症选自多发性硬化、类风湿性关节炎和白血病，

12.根据权利要求11的应用，其中克拉屈滨反应性病症是多发性硬化。

13.根据权利要求10、11和12中的任一项的应用，其中环糊精是γ-环糊精。

14.根据权利要求10、11和12中的任一项的应用，其中环糊精是羟丙基-β-环糊精。

15.根据权利要求10的应用，其中克拉屈滨与环糊精的重量比是1∶35至1∶50。

16.根据权利要求13的应用，其中克拉屈滨与γ-环糊精的重量比是1∶46。

17.根据权利要求14的应用，其中克拉屈滨与羟丙基-β-环糊精的重量比是1∶42。

18.根据权利要求13的应用，其中复合物包含1∶2克拉屈滨∶γ-环糊精复合物。

19.饱和的克拉屈滨-环糊精复合物在制备用于提高克拉屈滨的口服生物利用度的固体口服剂型中的应用，所述的剂型基本上不含有超过将基本上所有的克拉屈滨维持在复合物中所需的最小量的环糊精，其中环糊精是γ-环糊精，羟丙基-β-环糊精，羟丙基-γ-环糊精，二甲基-β-环糊精，随机甲基化的β-环糊精，羧甲基-β-环糊精或硫丁基-β-环糊精。

20.根据权利要求19的应用，其中环糊精是γ-环糊精。

21.根据权利要求19的应用，其中环糊精是羟丙基-β-环糊精。

22.根据权利要求19、20或21任一项的应用，其中克拉屈滨与环糊精的重量比是1∶35至1∶50。

23.根据权利要求20的应用，其中克拉屈滨与γ-环糊精的重量比是1∶46。

24.根据权利要求21的应用，其中克拉屈滨与羟丙基-β-环糊精的重量比是1∶42。

25.根据权利要求20的应用，其中复合物包含1∶2克拉屈滨∶γ-环糊精复合物。

26.1∶2克拉屈滨∶γ-环糊精复合物。

27.1∶1克拉屈滨∶γ-环糊精复合物和1∶2克拉屈滨∶γ-环糊精复合物的混合物，其中1∶2复合物是主要的。