CN1709542A - 一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法。本发明的技术特征在于:将柿叶烘干、粉碎,加入乙醇溶液,固液浸取,过滤除杂后得到柿叶粗提液。取上述柿叶粗提液,加入PEG聚合物和硫酸铵双水相***,混匀、分为上、下两相。取出富含聚乙二醇聚合物的上相,加水、乙酸酯类和无机盐,混匀。取出含有大量黄酮类物质的乙酸酯类的相,对其进行减压蒸馏、浓缩溶液,然后将该浓缩液进行真空干燥,得到固体柿叶黄酮类物质。本发明的有益效果是:提高了提取柿叶黄酮类物质的提取率,而且可以得到高品质的黄酮类物质,同时方法本身既经济又操作简单。
Description
技术领域
本发明涉及一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法。
背景技术:柿叶是柿树的新鲜或干燥叶片。作为药用始载于明《滇南本草》,曰:“经霜叶敷臁疮”。以后诸家本草及医(药)书也多有记载。其味苦、酸、涩,性凉,具有清肺止咳、凉血止血、活血化瘀、降血压之功效。主要用于咳喘、肺气肿、各种内出血、高血压等病症。柿叶中的主要有效成分是黄酮。目前已发现的黄酮类化合物有黄芪、异槲皮素、山萘酚、槲皮素等。国内外研究表明:柿叶黄酮具有降血压功能及促进植物生长作用,是一种具有实用价值的作物、瓜果增产剂和很有前途的天然降血压药。
柿叶中黄酮主要以甙类形式存在,一般提取时多采用水、甲醇、乙醇水溶液作溶剂,用乙酸乙酯作萃取剂。另据报道,有人采用水提树酯吸附的方法提取分离柿叶黄酮类化合物。这些方法均存在以下问题:操作繁琐,提取率较低。
发明内容
要解决的技术问题
为了避免现有技术的不足之处,本发明提供了一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法,利用双水相萃取技术的特点,不但提高了提取柿叶黄酮类物质的提取率,而且可以得到高品质的黄酮类物质,同时方法本身既经济又操作简单。
技术方案
在本发明中采用双水相提取柿叶黄酮类物质的方法,
双水相萃取技术的特点有:
(1)体系的含水量多达75%~99%,两界面张力极低,有助于保持有效成分的生物活性和相际质量传递;
(2)上、下相密度小,一般10-2g·cm-3左右,是水密度的百分之一;
(3)分相时间短;
(4)双水相萃取易于连续操作、工程放大,可直接线性放大4万倍;
(5)双水相萃取处理量大,能耗低;主要成本消耗在聚合物的使用上,而聚合物又可以循环使用,因此,生产成本较低。
本发明的技术特征在于:
a、固液浸取:将柿叶烘干、粉碎,加入乙醇溶液,固液浸取,过滤除杂后得到柿叶粗提液;
b、双水相萃取:取上述柿叶粗提液,加入PEG聚合物和硫酸铵双水相***,混匀、分为上、下两相,分相温度15℃~30℃,时间为2~6小时;
c、乙酸酯类反萃:取出富含聚乙二醇聚合物的上相,加水、乙酸酯类和无机盐,混匀,***在室温下静置分为上、下两相,分相温度为室温,时间为1~3小时。
d、减压蒸馏、真空干燥:取出含有大量黄酮类物质的乙酸酯类的相,对其进行减压蒸馏、浓缩溶液,然后将该浓缩液进行真空干燥,得到固体柿叶黄酮类物质。
在上述的双水相萃取中,加入PEG聚合物和硫酸铵双水相***的同时还可以加入无机盐,无机盐可以为NaCl或Na2SO4。
上述加入的PEG聚合物为5%~25%,硫酸铵为10%~20%,其中PEG聚合物的分子量为300~1500。
上述加入的乙酸酯类可以为乙酸丁酯或乙酸乙酯。
有益效果
本发明的有益效果是:
(1)分相迅速
在实验中观察到,采用双水相萃取法,约20分钟左右即可分相,且没有乳化层,缩短了实验周期。
(2)过程集成
双水相萃取既达到了预处理的目的,又浓缩了料液。表现为大量的杂质(如亲水性物质,细胞碎片等)进入下相,黄酮类物质进入上相,上相较原始处理液大为减少,浓缩倍数达到了4倍以上;
(3)本发明方法简单,易于掌握,不受环境影响,见效快。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。
图1:工艺流程示意图
具体实施方式
现结合附图对本发明作进一步描述:
实施例1:
(1)固液浸取
称取经清洗、去杂、烘干、粉碎的柿叶20g,加入50%乙醇300mL进行回流浸提3h,蒸馏回收溶剂,将所剩提取液过滤除杂,得到滤液153g。
(2)双水相萃取
取上述滤液,加入20g聚乙二醇、35g(NH4)2SO4、100g水,再加入无机盐NaCl 5g混匀,在15℃分相2h~6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃
取出富含聚乙二醇聚合物的上相124mL,加水50mL,80mL乙酸丁酯或乙酸乙酯和3gNaCl,充分混匀,***在室温下静置分相1h~3h至彻底分为上、下两相,含有大量黄酮类物质的乙酸丁酯相待进一步处理。
(4)减压蒸馏、真空干燥
取出乙酸丁酯相102mL进行减压蒸馏浓缩溶液,将浓缩液置于60℃~80℃下真空干燥,得到固体柿叶黄酮类物质。
实施例2
(1)固液浸取
称取经清洗去杂、烘干、粉碎的柿叶20g,加入70%乙醇400mL回流浸提5h,蒸馏回收溶剂,将所剩提取液过滤除杂,得到滤液190g。
(2)双水相萃取
取上述滤液,加入25g聚乙二醇、45g(NH4)2SO4、95g水,再加入2g NaCl,混匀,在25℃分相2h~6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃
取出富含聚乙二醇聚合物的上相186mL,加水75mL,113mL乙酸丁酯,3g NaCl,充分混匀,***在室温下静置分相1h~3h至彻底分为上、下两相,含有大量黄酮类物质的乙酸丁酯相待进一步处理。
(4)减压蒸馏、真空干燥
将上述乙酸丁酯或乙酸乙酯相进行减压蒸馏来浓缩溶液,将浓缩液置于60℃~80℃下真空干燥,得到固体柿叶黄酮类物质。
实施例3
(1)固液浸取
称取经清洗去杂、烘干、粉碎的柿叶20g,加入60%乙醇500mL回流浸提8h,蒸馏回收溶剂,将所剩提取液过滤除杂,得到滤液389g。
(2)双水相萃取
取上述滤液,加入35g聚乙二醇、65g(NH4)2SO4、125g水,再加入无机盐3g NaCl,混匀,在30℃分相2h~6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃
取出富含聚乙二醇聚合物的上相221mL,加水85mL,126mL乙酸丁酯,3g NaCl,充分混匀,***在室温下静置分相1h~3h至彻底分为上、下两相,含有大量黄酮类物质的乙酸丁酯相待进一步处理。
(4)减压蒸馏、真空干燥
取出乙酸丁酯相238mL进行减压蒸馏浓缩溶液,将浓缩液置于60℃~80℃下真空干燥,得到固体柿叶黄酮类物质。
所得产品按中国药典标准检测,产品中所含柿叶黄酮类化合物约为12.1%(分光光度法)。
本发明基于以下发现:柿叶黄酮类物质在PEG/硫酸铵双水相***中分配的极大对称。表1给出了柿叶黄酮类物质在PEG/硫酸铵双水相中的分配数据。双水相体系萃取分离技术的原理是:柿叶黄酮类物质在双水相体系中的选择性分配。柿叶黄酮类物质进入双水相体系后,在上相和下相间进行选择性分配,表现出一定的分配系数。柿叶黄酮类物质对PEG具有某种亲和性,使柿叶黄酮类物质能较容易溶解在富含PEG的上相,而一些杂质分配在下相,柿叶黄酮类物质的分配系数一般大于16,萃取率在78.9%~94.7%之间。
表1柿叶黄酮类物质在PEG/硫酸铵双水相***中的分配行为
序号 | 总组成%wtPEG (NH4)2SO4 | 相比(R) | 分配系数(K) | 萃取率%(Y) |
1 | 10 9 | 0.354 | 16.0 | 78.9 |
2 | 10 11 | 0.332 | 39.8 | 84.2 |
3 | 10 13 | 0.276 | 67.6 | 86.9 |
4 | 10 15 | 0.257 | 84.5 | 92.1 |
5 | 10 17 | 0.249 | 94.7 | 94.7 |
表中:相比R=Vt/Vb
分配系数K=Ct/Cb
萃取率Y=VtCt/(VtCt+VbCb)
式中:Vt、Vb-上、下相的体积;
Ct、Cb-柿叶黄酮类化合物在上、下相中的浓度;
因此,经上述固液浸取、PEG/硫酸铵双水相***萃取、有机溶剂反萃等过程的处理,使柿叶黄酮类物质得以浓缩和提纯,最终得到柿叶黄酮类物质的成品。
Claims (9)
1、一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法,其特征在于:
a、固液浸取:将柿叶烘干、粉碎,加入乙醇溶液,固液浸取,过滤除杂后得到柿叶粗提液;
b、双水相萃取:取上述柿叶粗提液,加入PEG聚合物和硫酸铵双水相***,混匀、分为上、下两相;
c、乙酸酯类反萃:取出富含聚乙二醇聚合物的上相,加水、乙酸酯类和无机盐,混匀,***在室温下静置分为上、下两相;
d、减压蒸馏、真空干燥:取出含有大量黄酮类物质的乙酸酯类的相,对其进行减压蒸馏、浓缩溶液,然后将该浓缩液进行真空干燥,得到固体柿叶黄酮类物质。
2、根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法,其特征在于:在双水相萃取中,加入PEG聚合物和硫酸铵双水相***的同时还可以加入无机盐。
3、根据权利要求1或2所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法,其特征在于:加入的PEG聚合物为5%~25%,硫酸铵为10%~20%。
4、根据权利要求1或2或3所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法,其特征在于:加入的PEG聚合物的分子量为300~1500。
5、根据权利要求1或2所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法,其特征在于:加入的无机盐可以为NaCl或Na2SO4。
6、根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法,其特征在于:加入的乙酸酯类可以为乙酸丁酯或乙酸乙酯。
7、根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法,其特征在于:在双水相萃取中,分相温度15℃~30℃,时间为2~6小时。
8、根据权利要求1或6所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法,其特征在于:在乙酸酯类反萃中,分相温度为室温,时间为1~3小时。
9、根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法,其特征在于:在减压蒸馏、真空干燥中,真空干燥温度为60℃~80℃下。
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