CN1618480A - 一种皮肤美容的方法以及其中使用的美容仪和美容霜 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种结合光物理和生物化学的皮肤美容方法。该方法利用特定波长的低能量光波，按照特定的程序释放时，能穿透面部皮肤表皮层，激活真皮层的纤维细胞产生胶原蛋白，并促进代谢残余物质的清除。同时，被破坏的代谢平衡诱发皮肤内的自然修复机制，使光活化的结果不能保持。为此，本发明还包含一类以脂溶性的胶原酶抑制物为核心的外敷用品，它与上述光学仪器同步使用，可使皮肤内的胶原蛋白维持在高水平，从而达到面部皮肤去皱纹，增强弹性和消除眼袋和黑眼圈的长期效果。

Description

一种皮肤美容的方法以及其中使用的美容仪和美容霜

技术领域：

本发明涉及生物技术领域，更具体地说，涉及一种用于直接照射皮肤的光学仪器，一种具有生物活性的美容霜，以及以上两者共同使用美容皮肤的方法。

背景技术：

人的衰老不可逆转，面部皮肤皱纹特别是眼角鱼尾纹的出现往往是衰老的第一外在标记；许多环境因素比如太阳光紫外线会显著恶化皮肤皱纹的密度和深度。现代美容手段致力于降低衰老的种种表现尺度，特别是减少面部皮肤皱纹，其最终目标是通过调控皮肤真皮层的成纤维细胞产生新的胶原蛋白(参看附图一)。胶原蛋白是皮肤内最主要的结构蛋白，占真皮层于重的75％以上。现代分子皮肤学研究证明皮肤的皱纹，弹性，质地，光泽等在很大程度上决定于胶原蛋白水平的高低；随着年龄的增长或者皮肤的老化，人们皮肤内胶原蛋白的含量逐渐减少(参看附图二)。因此，促进胶原蛋白生成的多寡成为衡量众多美容手段的有效性的最重要的指标。

当前这些美容手段大体可归类为生物激活和物理治疗两种。其中，将含有生物活性的霜剂直接敷于皮肤表面的化学方法占据了主流大众市场，这些生物活性物质主要包括维生素A，C，E以及它们的衍生物，软骨多糖，a-和b-羟酸和其它抗氧化剂；而物理手段则常用于专业美容院或诊所里，主要包括机械磨皮，硅胶去皮以及日益普及的激光手术除皱。另外，直接往皱纹密集的皮肤内注射纯化的胶原蛋白或者肉毒素(Botox)则是两个极端的除皱手段，然而这些注射法经常会伴随头痛，晕眩，眼沉以及可能的心血管后遗症。

激光作为具有独特的相干性和单色性的高能光源，其用于皮肤除皱的原理是：激光发出高能量的光子，造成皮肤深层细胞的热损伤或者直接在表皮层引进创伤，从而激活皮肤内在的伤口修复功能，导致产生包括胶原蛋白在内的许多伤口修复所必需的结构和调控蛋白。虽然产生的胶原蛋白能够改善皮肤的皱纹状况，但是高能激光同时也会破坏许多正常细胞组织，并释放相当的有害皮肤健康的副产物。近来，一种以长波(＞550nm)为主的高强度脉冲光(Intense Pulse Light，IPL)被用来替代激光治疗面部皱纹。尽管高强度脉冲光对皮肤的伤害远不及激光严重，但它的工作能量太低，难以激活成纤维细胞生成修复皱纹的胶原蛋白。所以，高强度脉冲光作为替代激光的光学疗法并不成功，它在皮肤除皱领域仍有很大争议(Dermatological Surgery 20：p835-843，2000；Lasers in Surgery and Medicine 26：p196-200，2000；Lasers inSurgery and Medicine 30：82-85，2002；Lasers in Surgery andMedicine 30：298-325，2002)。

激光用于除皱的局限性是显而易见的：激光装置极其昂贵，运作需要大量能量，而且必须由专业医务人员来操作；激光束一次能照射的皮肤非常有限，给大规模皮肤均匀除皱带来困难；治疗会对皮肤组织造成伤害，病人会感到严重不适或疼痛，并需要很长时间恢复；创伤性的激光手术还可能引发伤口感染，愈后留下疤痕，不仅达不到美容的预期目的，相反还可能在皮肤上遗留下永久破坏。除皱的效果优劣很大程度上取决于接受治疗者的个体差异，所以对于每个人来讲，接受激光治疗皱纹需要承担相当的风险。

如同激光，发光二极管发出的也是狭窄波长范围内的单色光。尽管发光二极管早已被广泛应用于各种电子元件的发光装置以及日用和商用灯具上，它们在医疗领域的用途直到最近几年才开始逐渐被人们认识。这些用途主要包括促进伤口愈合，减轻疼痛，以及和光激活化学药物同步使用来治疗癌症。美国NASA的航天项目研究小组发现用发光二极管发出的近红外的单色光(主要波长包括680nm，730nm，880nm)直接照射局部缺血性伤口，能够大大缩短伤口愈合所需的时间(Journal ofClinical Laser Medicine&Surgery 19：p305-314，2001)。他们将几十个单色的发光二极管排成平面序列，持续照射伤口，使得每平方厘米皮肤在0。5-1小时内接受4-8焦耳的能量。这些发光二极管与高压氧气同步使用效果尤佳。几家美国公司正在积极开发红光和红外光二极管在止痛上的应用，它们已经获得美国食品和药品管理局的首肯，很快将有用来治疗手，腕，和其它肌肉疼痛的发光二极管装置推向市场。在所谓的光动力疗法中(Photodynamic Therapy)，发光二极管甚至可以成为定点消除肿瘤细胞的工具。比如由罗氏(Roche)公司开发的Porphyrin可以被发光二极管发出的680nm红光激活，然后将获得的能量传递给血液里的氧气分子，从而生成有害的单氧基团和游离基。这些单氧基团和游离基会破坏周围细胞内的蛋白质，脂类，核酸等重要组分。用发光二极管激活聚集在肿瘤部位的Porphyrin，就可以非常特异性的杀死肿瘤细胞，达到治疗的目的。这种Porphyrin光动力疗法在许多国家已被用来治疗膀胱癌，食道癌和肺癌，在美国正在临床III期试验中。

发光二极管之所以能够成功地用于人体治疗，主要因为科学研究发现二极管发出的非相干性的单色光可以有效地穿透皮肤表皮到达真皮层和更深层的体内组织。一项报道宣称630-800nm范围内的光子可以进入人体皮肤内部达23厘米(p.552 Space Technology andApplications International Forum 200，edited by M.S.El-Genk，2001)。进入体内的二极管的光能够刺激细胞内部的能量工厂线粒体，产生大量能量，从而加速各种修复机制，提高细胞活性和代谢，加快血液循环，其结果是体内的有害物质和代谢副产物从受伤或衰老的组织内被清除掉，同时促进生成的活性物质使组织得到更新。细胞内接受光能的具体分子并不清楚，但科学家发现一些发色基团(Chromophores)和细胞色素***(Cytochrome Systems)对红光和红外光有反应。

在二极管的单色光穿透皮肤的过程中，光能逐渐被各种细胞组织吸收和损耗。大部份的被有效吸收的光子作用于真皮层的成纤维细胞(参看附图一)。成纤维细胞是皮肤的动力机器，生产各种皮肤调节成份和主要结构蛋白比如胶原蛋白。从原理角度讲，发光二极管的单色光不仅仅可以促进成纤维细胞产生大量能量物质ATP，而且更重要的是能够起动胶原蛋白的生物合成。因此，用发光二极管的单色光替代激光来促进皮肤生成胶原蛋白而修补皱纹是一个创新又极富挑战性的工作。和激光手术除皱相比，发光二极管除皱的优越性很多：它工作能量低，通过激发成纤维细胞的潜能达到美容目的，对皮肤内外均无伤害；它使用方便安全，光源寿命远长于激光，并且价钱合理，易于家庭普及；更重要的是，通过选择恰当波长，具有生物调节功效的输出强度和频率，发光二极管能够达到传统激光美容除皱的效果。

波长，强度和频率的选择和正确组合是决定发光二极管除皱装置有效性的关键。首先，只有特定波长的发光二极管光波能够穿透表皮层而最大限度地被成纤维细胞吸收，并转化成能量，刺激细胞生成胶原蛋白，而其它波长的光波即使能到达这些细胞也不会有效激活细胞内的光敏蛋白。其次，只有狭窄范围内的输出强度具有生物调节的功效：强度低于生物激活阈值的光波不能提供足够的能量启动成纤维细胞的修复机制；而过高强度的光波则会在皮肤内主要转化成热能，并激发成纤维细胞的保护机制，最终导致胶原蛋白合成的抑制。最后，发光二极管的电磁光波在皮肤内的频率只有与成纤维细胞的内在生物频率发生共振时，才能特异性地将光能传送到成纤维细胞，并且最大限度地降低其它细胞组织的激活所生成的无用甚至有害的副产品。

基于上述原理，这种发光二极管的程序光应该能够有效活化各类衰老皮肤。目前已知，皮肤衰老分为交叉并行的两类：光衰老(Photoaging)和生物衰老(Chronical Aging)。光衰老主要来源于太阳光的幅射，太阳紫外线刺激皮肤产生反应氧基团(ROS)，ROS然后破坏皮肤内的抗氧化防御***，并激活胶原蛋白酶基因的表达；所以光衰老是紫外线累积照射的结果，西方人(主要是白色人种)肤色浅，喜爱户外活动，崇尚日光浴和人工照黑(tanning)，他们的皮肤衰老主要显现为光衰老。生物衰老则主要由个体遗传因素决定：遗传物质的变异和不稳定，线粒体功能的衰退，以及染色体端粒(telomere)的磨损，都会促进皮肤的内在老化和外部皱纹的形成；东方人(特别是黄色人种的城市女性)极少将面部皮肤直接暴露在太阳光或任何紫外线之下，他们面部皮肤的皱纹和其它老化特征绝大程度上来源于生物自然衰老。

东西方人皮肤衰老机制的差异提醒我们选用除皱美容的手段也要考虑个体不同。甚至同是亚洲人种，光衰老和生物衰老的皮肤也要区别对待。大量临床研究显示，虽然光衰老和生物衰老都会降低胶原蛋白的合成并提高胶原酶的活性，但是对于相仿年龄的人，光衰老的皮肤胶原蛋白的含量和合成远低于生物衰老的皮肤，而胶原酶的活性却远比生物衰老的皮肤要高。对于正常生物衰老的皮肤，无论是用化学霜剂还是用物理调节包括发光二极管的光学手段，这些由皮肤外界刺激产生的大量胶原蛋白并不能长久存留在皮肤内；相反，大量产生的胶原蛋白会破坏皮肤内的胶原蛋白/胶原酶自然平衡，从而反馈诱导胶原酶的活性，结果使这些新生成的胶原蛋白被清除掉，恢复到原有基础水平。但是，对于光衰老的皮肤，新合成的胶原蛋白并不能激活太多的胶原酶，因为该类皮肤的基础胶原酶活性已经达到足够高的水平。因此，发光二极管的光疗可以有效地促进光衰老的皮肤合成并保留新的胶原蛋白；同样的光疗虽能同样促进生物衰老的皮肤合成新的胶原蛋白，维持这些新的胶原蛋白却需要抑制与之同步提高的胶原酶的活性。

我们成功地开发出一套新颖的美容除皱产品，用特别程序的光波直接照射皮肤激活成纤维细胞产生大量胶原蛋白，同时将一种以胶原酶抑制剂为基础的光敏霜敷于照射部位以长期维持高水平的胶原蛋白，从而达到美容除皱的效果。

发明内容：

I：光学部分

本发明揭示了只有特定波长的单色光以特定的频率和强度释放时才能达到嫩化皮肤的效果。皮肤内的成纤维细胞是接受能量并利用能量生成蛋白的动力工厂。成纤维细胞对不同波长的光波的吸收有很大差异。通过一系列的体外细胞培养研究，本发明显示成纤维细胞对于黄色到红色范围内的单色可见光，特别是590nm，630nm和660nm的单色光，有峰值吸收。附图3显示其中一个试验结果。这里，我们将从35岁的黑人妇女皮肤中分离出来的成纤维细胞进行细致的光波扫描，图中显示出细胞对590nm，595nm和630nm波长的光的吸收远高于背景的吸收。

本发明还揭示上述单色光只有以1Hz-50Hz之间，或者是每次20毫秒到1秒之间，特别是5Hz，10Hz，和20Hz，或者是每次50毫秒，100毫秒和200毫秒，的频率释放时才有效。附图4显示本发明所特别制造的LED(发光二极管)细胞圆盘装置，其直径和10cm细胞培养皿一样大小，不同波长的LED单色灯泡以点阵平面排列，其控制电路可以调节输出光强度，输出频率以及输出光波的宽度。我们将生长在培养皿里的成纤维细胞置于LED细胞圆盘下直接照射，然后收集处理后的细胞进行生化分析，包括检查细胞的各种胶原蛋白量的变化，胶原蛋白酶的量和活性的变化，等等。通过调节不同波长的LED输出频率，我们发现只有本发明所揭示的上述输出频率和特定波长的光结合，才能刺激成纤维细胞合成新的胶原蛋白原(Procollagens)，胶原蛋白原被细胞加工后成为胶原蛋白，并分泌到皮肤真皮层从而维持皮肤的弹性和质量。

本发明进一步揭示上述指定频率的单色光只有以每平方厘米皮肤50微瓦到50毫瓦之间的输出强度才能最大限度地活化皮肤。利用上述LED细胞圆盘直接照射在培养皿里的成纤维细胞，通过调节不同波长的LED输出强度，我们发现只有本发明所揭示的上述输出强度，结合上述频率和波长，才能最大限度的刺激成纤维细胞合成新的胶原蛋白原。附图5显示特定组合的LED单色光能够有效地刺激成纤维细胞产生皮肤真皮层内的主要弹性蛋白-I型胶原蛋白原。在正常状态下，细胞只生成基础水平的I型胶原蛋白原，维持现有皮肤的健康，如图中Western分析C行蛋白量所示。我们改变光波波长，输出频率，和使用强度，发现很多组合都不能有效地提高细胞内的I型胶原蛋白原含量。只有非常精确的组合，如图5中所示的590nmLED光用10Hz，550Lux照射1分钟(YH1)或者660nm LED光用5Hz，4000Lux照射5分钟(RF5)能提高I型胶原蛋白原含量10倍以上。

根据本发明所揭示的单色光波长，频率和强度参数，我们把近800-3000个同种类的LED灯泡连接并组装成可调节的平面，所有的LED都用共同的电路控制，邻近的任何两个LED之间的距离都是相等的。这样的LED平板可以根据所要活化皮肤部位而进行调整，最终保证每个LED光源距离照射的皮肤表面都相对接近。这里我们主要显示这样的LED光板能够非常有效地改变眼睛周围皮肤的皱纹和质地，但我们并不限制我们的LED光用于其它部位皮肤。

本发明的一个主要应用实例是轻便家用型LED除皱美肤眼罩。附图5显示两种样品的结构示意图，主要包括密集的高级LED灯泡的点阵板块(板块可以有1块到20块)和电路控制调节中心。每个LED发出本发明所揭示的特定程序的单色光。裸露的LED点阵板块背面的焊接电路和连接电线整合进如附图6所显示弧形眼罩内，由此组合的LED眼罩可以用弹力绳带或者眼镜架或者头箍固定在眼镜上方，如附图6中的示范者所示。

本发明也可以用于其它部位的皮肤的除皱和改善，比如脖子，手部，脚背，胸部，腹部等。附图7显示我们所设计并制造的LED手背除皱嫩肤装置，作为其中一个实例。在这个装置中，近2000个同样规格的LED排列成手背弧形，当手背朝上放入装置内后，每个发光点与皮肤表面的距离保持均等，从而保证皮肤内的细胞受到一致刺激。

II：化学部分

无论通过什么美容手段，促进生成的大量胶原蛋白会打乱真皮层内生化平衡，导致降解胶原蛋白的酶(胶原酶)的激活，从而使胶原蛋白含量回到治疗之前的基准水平。本发明以上所揭示的LED光学刺激也不例外。本发明的LED光不仅仅提高胶原蛋白的生成，也会提高胶原酶的增加，导致新产生的胶原蛋白不能长久保持在皮肤内。如附图8所示，用660nm，5Hz，4000Lux LED光(RF1)或者660nm，5Hz，1800Lux LED光(RH1)照射成纤维细胞1分钟，I型胶原酶(MMP-1)也被诱导产生(和没有光处理的细胞相比)。

为了维持通过外来因素刺激形成的胶原蛋白的高水平，达到美容除皱的目的，必须抑制外来因素对胶原酶的激活作用。通过使用胶原蛋白酶的特异性抑制剂，可以特异性抑制皮肤中的胶原酶的活性，维持外来因素刺激生成的胶原蛋白的高水平，从而实现美容除皱。

我们发现一个特别的脂溶性的胶原酶抑制物OL-1，其为一种简单多肽，通过多肽合成器按照常规程序合成，具有以下结构：Benzoyl-Pro-D-Leu-D-Ala-NHOH。OL-1能够有效地穿透皮肤表皮层，到达真皮层的胞外基质(Extracellular Matrix)，识别并抑制胶原酶的活性，从而使得光激活生成的胶原蛋白能够较长期地稳定存在，最终整合成为真皮层内的有效活性组分。OL-1本身在一定的浓度范围(1-25uM)内能够有效地抑制胶原酶的活性，从而稳定已有的胶原蛋白，并促进合成新的胶原蛋白。比较附图9中的无处理细胞对照行(C)和与OL-1共培养的细胞行(OL-1)的I型胶原蛋白原的含量，可以看出OL-1单独使用可以提高新蛋白的合成。我们将此胶原酶抑制物OL-1与维生素A，E，及C和各种抗氧化成份混和在一起，制作成含有OL-1的美容霜。该OL-1美容霜能够抑制皮肤内的胶原酶的活性，从而增加胶原蛋白的含量，实现美容除皱的目的。虽然OL-1美容霜主要和LED光学眼罩协同使用，我们的实验结果也清楚地显示该美容霜独立使用也能达到一定的美肤疗效。

III：光化学联合部分

尽管本发明所揭示的胶原酶抑制物(OL-1)单独能够刺激成纤维细胞生成新的胶原蛋白，但是OL-1和本发明所揭示的特定波长，频率和强度的LED单色光协同使用才能达到最优的效果，而且最重要的是，协同使用的效果远远超过任何一种单一的方法，无论是以上所述的光学疗法还是化学疗法。

当成纤维细胞接受660nm，5Hz，1800Lux的LED光照射5分钟后，新的胶原蛋白的生成只有少许的增加。这很可能反映了LED单色光刺激不仅产生胶原蛋白，也同时产生将其降解的胶原酶，两者达到平衡后表现出无变化的净结果，如附图9中的RH5和C所示。然而，当本发明所揭示的胶原酶抑制物OL-1加入以上所述的LED光所照射的成纤维细胞后，这些细胞产生大量的胶原蛋白原(RH5+OL-1，附图9)，其含量达到单单OL-1处理的10倍(OL-1)，并超过单单LED光处理的40倍(RH5)。所以，在体外细胞水平上，LED单色光和OL-1结合作用，能将胶原蛋白合成提高到极高的水平。

我们用本发明所揭示的上述波长的LED制作成眼罩，以上述输出频率和强度对20岁到55岁之间的妇女眼睛周围的皮肤进行疗效测试。使用某些特定组合的家用型LED除皱美肤眼罩，协同使用含有本发明所揭示的胶原酶抑制物OL-1的美容霜，50％的测试妇女在使用4到10次后观察到明显的眼角皱纹减少，80％的测试妇女在使用3到11次后照射皮肤的弹性和光泽有明显的改进，70％的测试妇女在使用1到10次后黑眼圈和眼袋有明显的减轻或减少。测试采用了国际通用的双盲(double-blinded)方法。我们要求在每次治疗之后，测试者和专业美容师单独，无交流地评估并记录测试者的眼角皱纹，皮肤的弹性和光泽，以及黑眼圈和眼袋的变化情况。对于任何一个测试者，只有测试者本人评估和专业美容师的评估一致，我们才认为所记录的变化是有效的。测试方法，步骤和参数，参看下面的具体实施方式。

总之，本发明的方法结合了光学原理及生物化学原理，可以获得良好的美肤除皱效果。本发明的家用LED除皱美肤眼罩体积小，轻便，使用简单，易于家庭使用。

附图说明

图1：皮肤解剖图。最外层的表皮层主要由角质细胞构成，起保护作用。中间的真皮层富含成纤维细胞，该类细胞产生并分泌多种胶原蛋白。I类和III类胶原蛋白是决定皮肤老化的主要成份。本发明的特定光波可以穿透表皮层达到成纤维细胞并刺激胶原蛋白的生成。

图2：皮肤衰老所伴随的蛋白变化示意图。随着年龄的增加或者外界环境(如紫外线)的伤害性的影响，真皮层内的胶原蛋白含量逐渐降低，而胶原酶的活性和含量却会上升。

图3：成纤维细胞的光吸收图谱。体外培养的人皮肤成纤维细胞以不同的浓度均匀悬浮在磷酸缓冲液里，进行从300nm到1100nm之间的连续光波吸收扫描(仪器：BioSpec-1601，SHIMADZU)。上图显示成纤维细胞对590nm和595nm的光波的峰值吸收；下图显示成纤维细胞对625-630nm的光波的峰值吸收。

图4：显示特定波长，频率和强度的LED单色光能够有效地刺激成纤维细胞合成新的胶原蛋白。上图显示实验所用的特制LED细胞圆盘装置和成纤维细胞实验示意图。该装置可调频率及强度。下图显示培养的皮肤成纤维细胞接受一定的LED光刺激后产生I型胶原蛋白原(Procollagen Type I)。肌动蛋白(Actin)的量用来作加样控制。C：无光照射；YH1：590nm LED光用550Lux照射1分钟；RF5：660nm LED光用4000Lux照射5分钟。

图5：本发明的光学装置样本示意图。该装置包括LED板块，中心控制仪，和电源接口。中心控制可调节发光频率，波宽，和强度。LED板块可以进行多种组合。

图6：本发明中的LED电路板块的保护和应用外壳模型之一。由此组装的装置可用于眼部周围的皮肤，也可以用于脖子等身体其它部分的皮肤。

图7：本发明中的LED电路板块的保护和应用外壳模型之二。由此组装的装置可用于手背的皮肤的除皱和保护。

图8：LED单色光刺激成纤维细胞产生降解胶原蛋白的I型胶原酶。肌动蛋白的含量作为总蛋白的加样对照。C：无光处理的细胞；RF1：660nmLED光用5Hz，4000Lux照射1分钟；RF1：660nm LED光用5Hz，1800Lux照射1分钟。抗人MMP-1的抗体AB19140来自Chemicon international，具体见

http：//www.chemicon.com/Product/ProductDataSheet.asp？TXT SEARCH＝mmp％2D1&ProductItem＝AB19140

图9：本发明的程序光和OL-1协同作用刺激成纤维细胞合成I型胶原蛋白原。肌动蛋白的含量作为总蛋白的加样对照。c：无光无抑制物细胞对照；RH5：660nm，5Hz，1800Lux LED光照射5分钟；OL-1：OL-1加入培养的细胞；RH5+OL-1：660nm，5Hz，1800Lux LED光照射5分钟后加入含有OL-1肽。抗I型胶原蛋白原的抗体SP1.D8来自

Developmetal Studies Hybridoma Bank，具体参见

http：//www.uiowa.edu/~dshbwww/spld8.html

具体实施方式

下面通过一些实施例来具体地说明本发明。

实施例1：体外细胞实验方法和步骤

皮肤成纤维细胞(ATCC No CRL-1762)生长在标准Dulbecco’s改良Eagle培养液(DMEM)(额外添加200mM L-谷氨酰胺，50ug/ml庆大霉素和10％小牛血清)，生长条件是37℃，5％CO₂。细胞的任何操作都是在无菌环境里进行。当细胞在10cm平板上长满(confluent)后，吸除所有的培养液，并用5ml磷酸缓冲液(PBS)清洗掉残留的培养液。然后加入10ml PBS覆盖贴壁生长的细胞。将LED细胞专用圆盘调到如图4的控制板上的输出强度，功率和波宽。把LED发光面朝下放在10cm平板上(如附图4右上图所示)，接通电源，打开开关，同时开始计时。

照射预定时间(如图4，8，9)后，关掉开关，立即吸除PBS，代之以10ml以上DMEM培养液。继续培养细胞12小时后，收集细胞，把细胞从圆盘上分离出来，利用细胞破碎液(50mM Hepes，100mM NaCl，1％NP40)粉碎细胞，离心，取上清，抽提出所有的细胞内蛋白。将50ug的总蛋白(利用Bradford Assay测定蛋白质总量)用5-20％预制的SDS-聚丙烯酰胺凝胶分离开。皮肤的一些重要蛋白，包括I型胶原蛋白原，III型胶原蛋白原，I型胶原酶等，用Western分析检测，看家蛋白肌动蛋白用来作用样量对照。抗I型胶原蛋白原抗体SP1.D8来自theDeVelopmetal Studies Hybridoma Bank，见

http：//www.uiowa.edu/~dshbwww/spld8.html，抗人MMP-1抗体AB19140来自Chemicon international，参见http：//www.chemicon.com/Product/ProductDataSheet.asp？TXTSEARC H＝mmp％2D1&ProductItem＝AB19140

实施例2：家用型LED眼罩与OL-1美容霜美肤除皱试验

一.试验步骤

1.招募20-55岁眼角有皱纹或眼部皮肤状况需要改进(包括眼袋，黑眼圈等)的女士，按年龄分成多组；

2.每组测试一种波长的眼罩，对于每个波长组再分小组，每小组接受不同频率和不同时间和强度的组合的LED光照射治疗；

3.每个治疗者每周治疗1次，一个疗程为12周(疗效通常在4周后才明显)；

4.专业美容师和治疗者独立地分别每周一次记录疗效；

5.美容师用我们提供的相机拍摄记录每个治疗者的眼角皱纹变化(与表格记录同步)；

6.测试结束后，统计各类指标的测试有效性；对于任何一个测试者，只有测试者本人评估和专业美容师的评估一致，我们才认为该项指标的变化是有效的。

二.家用型LED眼罩与OL-1美容霜的使用方法

1.用温水仔细清洗眼睛周围，特别是眼角的皮肤；

2.用手指在眼睛周围，特别是眼角的皮肤上均匀地敷上一薄层本发明的OL-1美容霜；

3.将眼罩的插头接入控制器，将控制器的电源插头接入电源插座；

4.将面板上的功率输出调节旋钮(Luminance)和输出频率选择按钮(Frequency)都顺时针方向转到最大(5)，亮度宽度调节旋钮(Width)逆时针方向转到最小(1)；

5.闭上眼睛，在眼睑上贴上一次性眼球遮光片(可选择)，戴上家用型LED眼罩；

6.打开电源开关，并且同时开始计时；

7.时间到，关调电源开关；

8.建议治疗者不要清洗所敷的OL-1美容霜。

三.结果和典型案例。

以下受试者按照以下程序进行试验。先涂OL-1美容霜在眼睛周围，然后利用LED红光照射(LED波长660nm，强度1800Lux，频率5Hz)，每次5分钟，每周一次，一个疗程12次。

按照说明书中所附记录表格记录疗程中治疗者皮肤状况的任何变化，包括眼角皱纹，眼周皮肤弹性/质地/毛孔，眼袋/黑眼圈等的变化，无论好坏，用1-5数字注明其程度。1：差，2：较差，3：中等，4：较好，5：好

案例1：杜女士，24岁

个人评估：眼角皱纹4次治疗后从中等(3)变为较好(4)；眼周皮肤弹性/质地6次治疗后从中等(3)变为较好(4)，更多次治疗后在较好(4)和好(5)之间摆动；黑眼圈/眼袋6次治疗后从中等(3)变为较好(4)，8次治疗后从较好(4)变为好(5)。

专业评估：眼角皱纹2次治疗后从中等(3)变为较好(4)；眼周皮肤弹性/质地4次治疗后从中等(3)变为较好(4)，更多次治疗后在较好(4)和好(5)之间摆动；黑眼圈/眼袋4次治疗后从中等(3)变为较好(4)，更多次治疗后在中等(3)和好(5)之间摆动。

案例2：钟女士，27岁

个人评估：眼角皱纹4次治疗后从中等(3)变为较好(4)；眼周皮肤弹性/质地8次治疗后从中等(3)变为较好(4)；黑眼圈/眼袋8次治疗后从中等(3)变为较好(4)。

专业评估：眼角皱纹3次治疗后从中等(3)变为较好(4)；眼周皮肤弹性/质地8次治疗后从中等(3)变为较好(4)；黑眼圈/眼袋8次治疗后从中等(3)变为较好(4)，9次治疗后从较好(4)变为好(5)。

案例3：许女士，38岁

个人评估：眼角皱纹6次治疗后从中等(3)变为较好(4)；眼周皮肤弹性/质地8次治疗后从中等(3)变为较好(4)；黑眼圈/眼袋10次治疗后从中等(3)变为较好(4)。

专业评估：眼角皱纹1次治疗后从较差(2)变为中等(3)，7次治疗后从中等(3)变为较好(4)；眼周皮肤弹性/质地10次治疗后从中等(3)变为较好(4)；黑眼圈/眼袋12次治疗后无改进。

案例4：穆女士，26岁

个人评估：眼角皱纹12次治疗后无改进；眼周皮肤弹性/质地5次治疗后从中等(3)变为较好(4)，9次治疗后从较好(4)变为好(5)；黑眼圈/眼袋5次治疗后从较差(2)变为中等(3)，9次治疗后从中等(3)变为较好(4)，10次治疗后从较好(4)变为好(5)。

专业评估：眼角皱纹12次治疗后无改进；眼周皮肤弹性/质地5次治疗后从中等(3)变为较好(4)，9次治疗后从较好(4)变为好(5)；黑眼圈/眼袋5次治疗后从较差(2)变为中等(3)，9次治疗后从中等(3)变为较好(4)，10次治疗后从较好(4)变为好(5)。

                               评估记录(专业美容师使用)

仪器编号(红)或(橙)或(黄)

治疗时间(五分钟)或(十五分钟)

治疗者姓名或代号 _________________________________年龄__________________________________________

治疗日期(每周2-3次)	眼角皱纹	眼周皮肤弹性/质地/毛孔	眼袋/黑眼圈	其它(请注明)
					起始___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
周一___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
					周二___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
周三___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
					周四___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
周五___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
					周六___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
周七___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
					周八___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
周九___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
					周十___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
周十一___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
					周十二___________	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)	(1)(2)(3)(4)(5)
总评诂

注1：请根据经验圈出治疗者皮肤的相应状况：1：差，2：较差，3：等，4：较好，5：好

注2：若治疗者在疗程中皮肤有其它任何变化，无论好坏，请注明，并用数字1~5标记其程度

注3：请于治疗后每周作一次记录，并请治疗者填写自我评诂表

注4：请不要将此记录给治疗者过目，以免影响她的自我评诂

美容师签名____________

Claims (10)

1.一种皮肤美容仪，包括一系列发光二极管，其能够产生特定频率、波长和强度的单色光，所述单色光能够激活皮肤真皮层的成纤维细胞的修复机制，所述修复机制使得胶原的合成增加。

2.权利要求1的美容仪，其中所述发光二极管产生波长为590nm，630nm和660nm，频率为1Hz-50Hz，强度为每平方厘米50微瓦到50毫瓦之间的单色光。

3.权利要求1或2的美容仪，其中包括由共同电路控制的800到3000个发光二极管，所述发光二极管组成可调节的平面，每个发光点与皮肤表面的距离基本相同。

4.权利要求3的美容仪，其中所述控制电路可以控制发光二极管产生的光的波长、频率和强度。

5.一种美容霜，其中含有胶原酶抑制剂和可用于化妆品的添加剂。

6.权利要求5的美容霜，其中所述胶原酶抑制剂是具有以下结构的OL-1肽：Benzoyl-Pro-D-Leu-D-Ala-NHOH。

7.一种皮肤美容方法，包括用权利要求1到4任一项的皮肤美容仪照射待处理的皮肤。

8.权利要求7的方法，其中在照射之前，在待处理的皮肤部位涂擦权利要求5或6的生物活性霜。

9.权利要求8的方法，其中照射参数设定为660nm，5Hz，1800Lux，5分钟。

10.权利要求8的方法，其中照射参数设定为590nm，10Hz，550Lux，1分钟。

Images