CN1610556A

CN1610556A - 保留天然变应原的免疫原性并具减弱的变应原性的重组杂合变应原构建体

Info

Publication number: CN1610556A
Application number: CNA02809204XA
Authority: CN
Inventors: T·P·金; M·D·斯庞福特
Original assignee: ALK Abello AS; Rockefeller University
Current assignee: ALK Abello AS; Rockefeller University
Priority date: 2001-03-02
Filing date: 2002-03-04
Publication date: 2005-04-27
Also published as: CA2441476A1; JP2005508134A; EP1499349B1; ATE448793T1; WO2002070665A8; EP1499349A2; DE60234475D1; WO2002070665A2; DK1499349T3; EP1499349A4; WO2002070665A3; US20030039660A1

Abstract

本发明公开了保持天然构象的重组杂合蛋白质，其具有至少一个抗原肽序列导入支架蛋白质中。本发明也公开了编码杂合蛋白质的重组核酸和载体。杂合蛋白质保留免疫原性而展示减弱的变应原性。因此，此杂合蛋白质在***反应的治疗中特别有用。

Description

保留天然变应原的免疫原性并具减弱的变应原性的重组杂合变应原构建体

本申请依据35U.S.C.§119(e)要求美国临时专利申请系列号60/272,818(2001年3月2日提交)的优先权，所述临时专利申请特此全部引入此处作为参考。

发明领域

本发明涉及重组杂合蛋白质，其具有天然构象并且含有至少一个导入支架蛋白质的抗原肽序列。本发明还涉及编码重组胡蜂杂合蛋白质的重组核酸和载体，以及含有该重组载体的细胞。这些重组杂合蛋白质可用于引起免疫应答而不引起变应原应答，因此特别可用于***反应的治疗。

发明背景

具遗传易感性的个体会对多种环境来源的抗原变得敏感(过敏)，即对个体所暴露的变应原敏感。当以前被致敏的个体再次暴露于相同或同源变应原时，就会发生***反应。***反应包括枯草热、rhinoconductivitis、鼻炎和哮喘至由于例如蜜蜂或大黄蜂蜇刺或昆虫叮咬引起的全身过敏反应和死亡。该反应立即发生并可以由多种变应原引起，所述变应原例如来自草、树、杂草、昆虫、食物、药物、化学物质和香料中的化合物。

变应原的生化方面

由蜜蜂和胡蜂的昆虫叮咬引起的***反应经常发生。胡蜂(vespid)包括大黄蜂(hornet)、小黄蜂(yellowjacket)和黄蜂(wasp)(Golden等人，1989，美洲医学协会会报(Am.Med.Assoc.)262：240)。易感人群暴露于微量的毒液蛋白质就可以被致敏；胡蜂一次叮咬即向皮肤内注入少至2-10μg的蛋白质(Hoffman和Jacobson，1984，***反应年鉴(Ann.Allergy)52：276)。

北美洲有许多种的大黄蜂(长黄胡蜂属，Dolichovespula)、小黄蜂(黄胡蜂属，Vespula)和黄蜂(马蜂属，Polistes)(Akre等人，1980，“北美墨西哥的小黄蜂”，552号农业手册(Agriculture Handbook)，美国农业部)。胡蜂具有相似的毒液组成(King等人，1978，生物化学(Biochemistry)，17：5165；King等人，1983，分子免疫学(Mol.Immunol.)20：297；King等人，1984，(Arch.Biochem.Biophys.)230：1；King等人，1985，***反应与临床免疫学杂志(J.Allergy and Clin.Immunol.)75：621；King，1987，***反应临床免疫学杂志(J.Allergy Clin.Immunol.)79：113；Hoffman，1985，***反应与临床免疫学杂志(J.Allergy andClin.Immunol.)75：611)。它们的毒液均含有三种主要的毒液变应原：磷脂酶(37kD)、透明质酸酶(43kD)和至今不知其生物学功能的抗原5(23kD)。

除上述昆虫毒液变应原外，几种主要变应原的完整氨基酸序列也已报道，它们来自不同的草(Perez等人，1990，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)265：16210；Ansari等人，1989，生物化学(Biochemistry)26：8665；Silvanovich等人，1991，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)266：1204)、树花粉(Breiteneder，1989，EMBO J.8：1935；Valenta等人，1991，科学(Science)，253：557)、野草花粉(Rafnar等人，1991，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)266：1229；Griffith等人，1991，Int.Arch.Allergy Appl.Immunol.96：296)、螨(Chua等人，1988，实验医学杂志(J.Exp.Med.)167：175)、猫的皮屑(Griffith等人，1992，基因(Gene.)113：263)和霉菌(Aruda等人，1990，实验医学杂志(J.Exp.Med.)172：1529；Hah等人，1991，***反应与临床免疫学杂志(J.Allergy andClin.Immunol.)87：327)。这些主要变应原是10-40kD的蛋白质，它们具有相差很大的生物功能。几乎所有已知序列的变应原与我们环境中的其他蛋白质都具有不同程度的序列相似性。几乎所有已知变应原的全面列表都可以在万维网的网站allergen.org上查到，该列表由世界卫生组织(WHO)和国际免疫学标准协会(IUIS)变应原命名分会主办。

变应原的T细胞知B细胞表位

对蛋白质的抗体应答需要T辅助细胞和B淋巴细胞以及抗原呈递细胞(APC)的共同协作。B细胞的抗原受体是膜结合抗体(Ab)分子，其识别并直接结合免疫原。T细胞的抗原受体(TCR)仅仅识别并结合抗原肽-MHC家II类分子的复合体。免疫原首先由APC加工成肽，所述肽与MHC II类分子相连被呈递到APC表面(Unanue，1992，现代免疫学评论(Current Opinion in Immunol)4：63)。因为MHC分子在个体中具有高度多态性，故它们具有不同的抗原肽结合特异性(Rothbard和Gefter，1991，免疫学年评(Ann.Rev.Immunol.)9：527)。这是用于免疫应答的遗传调节的一种机制。

当抗原受体结合APC表面的肽-MHC复合体后，T辅助细胞被活化。活化的T细胞分泌淋巴因子。在小鼠中(Street和Mosmann，1991，FASEBJ.5：171)以及明显地在人中(Wierenga等人，1990，免疫学杂志(J.Immunol)144：4651；Parronchi等人，1991，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.)8：4538)，可以根据T辅助细胞的淋巴因子产生模式将T辅助细胞分成不同的类型。T辅助细胞主要分为两类：Th1细胞(产生IL-2和IFN-γ)和Th2细胞(产生IL-4和IL-5)。这些淋巴因子反过来影响抗原活化的B细胞分化并增殖发育成浆细胞，从而分泌出不同同种型的抗体。IL-4是一种已知可影响IgE合成的淋巴因子。(Finkelman等人，1990，免疫学年评(Ann.Rev.Immunol.)8：303)。

据认为，尽管蛋白质分子的所有可接近表面都可被B细胞抗原受体识别为表位，但并不一定所有的表位都以相同的机率被识别(Benjamin等人，1984，免疫学年评(Ann.Rev.Immunol.)2：67)。蛋白质的B细胞表位有两种类型：拓扑型和线型。拓扑型由空间临近但序列上不一定临近的氨基酸残基组成。线型仅仅由序列上临近的氨基酸残基组成。Ag-Ab复合体的X射线晶体学数据表明它们的互补结合区域的大小有16-17个氨基酸残基(Amit等人，1986，科学(Science)233：747)。与其他的蛋白质抗原相同，磷脂酶可能具有这两种类型的B细胞表位或只具有其中一种类型。胡蜂抗原5s具有这两种类型的B细胞表位。蜜蜂毒液蜂毒素似乎只具有一种线型的B细胞表位(King等人，1984，免疫学杂志(J.Immunol.)133：2668)。

由于蛋白质的T细胞表位是在APC的溶酶体中被蛋白酶加工而成的肽，故这些T细胞表位只含有线性类型(Unanue，1992，Curr.Op.Immunol.4：63)。对与MHC II类分子结合的天然加工的抗原肽的分析表明它们的大小从约13个到17个氨基酸残基，但对刺激T细胞增殖应答的合成肽-MHC II类分子复合体的分析揭示它们最小可为约8个氨基酸残基(参见Rudensky等人，1991，自然(Nature)353：622)。研究表明T细胞表位遍布整个蛋白质分子，并且依赖于所免疫宿主的MHC单元型，它们可以是主要或次要决定簇。(Roy等人，科学(Science)244：572；Gammon等，1987，免疫学评论(Immunol.Rev.)98：53；O’Hehir等人，1991，免疫学年评(Ann.Rev.Immunol.)9：67)。

已经知道，即发型超敏反应是由变应原特异的IgE的存在而引起的。IgE在循环***中出现，并且结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的特异性IgE-Fc受体。通过变应原，与细胞结合的IgE发生交联，从而导致组胺、白细胞三烯和能够引起***反应症状的其它化学介质的释放。IgE是不同同种型免疫球蛋白中的一种。如上所述，T细胞分泌的淋巴因子影响B细胞中的同种型转换事件。

因为Th2细胞在决定B细胞的同种型转换事件中起主要作用，几种变应原的T细胞抗原表位已经被绘制(参见O’Hehir等人，上述)。这些变应原包括豚草AmbIII、黑麦草Lol pI、猫Fel dI、小鼠尿液Mus mI、蠓Chi tI、蜜蜂毒液磷脂酶A2(Dhillon等人，1992，***反应与临床免疫学杂志(J.Allergy and Clin.Immunol.)90：42)和蜂毒素(Fehlner等人，1991，免疫学杂志(J.Immunol.)146：799)。这些数据并没有揭示出任何罕见或常见的结构特征。然而，因为这些数据收集自不同单元型的人和小鼠，所以从这些数据得到的结论值得肯定。

T细胞和B细胞应答的调节

通常宿主可以通过克隆缺失和无变应性对自身蛋白质的显性B细胞表位和T细胞表位产生耐受。但这种耐受在特定环境下会被破坏(Gammon等人，1991，Immunol.Today 12：193；Basten等人，1991，免疫学评论(Immunol.Rev.)122：5)。有人提出，在自身免疫原性疾病中，这种自身耐受在遭遇与宿主蛋白质相似的外来蛋白质时受到破坏。因此变应原与自体蛋白质的序列相似性值得更深入细致的研究。

成熟B细胞响应多价抗原被激活，这些抗原能交联细胞表面的Ig受体(DeFranco，1987，细胞生物学年评(Ann.Rev.Cell Biol.)3：143)，然而这些成熟B细胞在对单价抗原应答时会被赋予无变应性(Basten等人，1991，上述)。T细胞的抗原活化不仅需要TCR与肽-MHC复合体整合，而且需要TCR与APC表面的其它共刺激信号整合。(Schwartz，1990，科学(Science)，248：1349；Jenkins和Miller，1992，FASEB J.6：2428)。在缺乏共刺激信号情况下TCR与肽-MHC复合体的相互作用可导致T细胞无变应性。

小鼠或大鼠实验性自体免疫脑脊髓炎(EAE)是一个已充分研究的多发性硬化模型。许多研究已经鉴定出髓鞘碱性蛋白的免疫显性T细胞决定簇，其可用于诱导此病症。对应于髓鞘碱性蛋白的免疫显性表位的肽可以诱导动物对同一肽抗原或完整髓鞘碱性蛋白产生耐受。诱导耐受的相同肽也可以在正在发生的自体免疫应答中诱导T细胞的无变应性(Gaur等人，1992，科学(Science)259：1491-1494)。

早期研究显示免疫原的物理状态和免疫路径是决定免疫应答结果的重要变量。从现今所了解的方面看，这些变量可以在很大程度上影响抗原呈递，从而使T细胞和B细胞活化或无变应性。

免疫疗法

一种治疗变应性疾病的方法是利用免疫疗法，其涉及向患者重复皮下注射刺激性变应原。对大多数进行免疫疗法的患者而言，最开始变应原特异的IgG水平将升高。在IgG上升后变应原特异的IgE水平逐渐降低(Norman，1993，现代免疫学评论(Current Op.Immunol.)5：968)。接受治疗的患者的T细胞细胞因子谱也表现出变化：IL-4和IL-5水平降低，而IFN-γ水平升高(Secrist等人，1993，实验医学杂志(J.Exp.Med.)178：2123)。

研究显示与利用低剂量变应原相比，利用高剂量变应原时免疫疗法对症状减轻更有效。然而，患者中出现不期望的全身***反应的潜在危险会限制变应原的有效剂量。由于利用天然变应原的免疫疗法会引起不期望的全身反应，因此对用于免疫疗法的具减弱变应原活性的修饰变应原的研发一直被人们所关注(T.P.King，1993，“支气管哮喘”，E.B.Weiss和M.Stein编辑，Little Brown，波士顿，43-49页；R.E.O’Hehir等人，1991，上述引文)。

变应原性依赖于多价变应原和嗜碱性粒细胞或肥大细胞上结合的IgE抗体间的相互作用。因此，蛋白质的变应原性的减弱可以通过降低其B细胞表位密度实现。蛋白质的B细胞表位密度的降低可通过几种途径完成。由于大多数B细胞表位是不连续类型，即依赖于蛋白质的天然构象，因此一种方法是通过利用化学处理或片断化使变应原部分或完全变性(Takatsu等人，1975，免疫学杂志(J.Immunol)115：1469；Pesce等人，1990，Int Arch Allergy Appl Immunol)92：88；Vrtala等人，1997，J Clin Invest99：1673)。例如，对来自豚草花粉的主要变应原的尿素处理导致不可逆变性，引起不连续B细胞表位丧失而保留连续B细胞和T细胞表位(Takatsu等人，1975，免疫学杂志(J Immunol)115：1469)。利用完全变性的豚草变应原对患者进行免疫治疗显示，尽管受治疗患者的外周血单核细胞确实对抗原刺激表现出减弱的增殖应答，但针对天然变应原的特异IgE和IgG水平却没有变化(Norman等人，1980，***反应临床免疫学杂志(J Allergy Clin Immunol)66：336)。也有人提出使用部分变性的变应原。例如重组的螨变应原，其缺少参与维持蛋白质天然构象的半胱氨酸残基(Smith等人，1996，分子免疫(Mol Immunol)33：399；T.Takai等人，1997，自然生物技术(Nature Biothechnology)15：754)。

已有两篇报道涉及利用T细胞表位肽调节变应原特异性的免疫应答。其中一篇提及利用来自猫主要变应原Fel dI的两个肽对小鼠进行皮下注射来降低对Fel dI完整分子的T细胞应答(Briner等人，1993，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)90：7608-12)。另一篇涉及利用来自螨主要变应原Der pI的肽进行鼻内治疗来抑制首次实验小鼠或致敏小鼠的变应原特异应答(Hoyne等人，1993，实验医学杂志(J.Exp.Med.)178：1783-1788)。

这些发现提示了T细胞肽作为免疫治疗试剂的用途，原因在于它们缺少不连续B细胞表位，故T细胞肽类似变性的变应原。几种变应原的显性T细胞肽已在患者中测试；并观察到细胞因子水平变化但抗体水平没有变化(Muller等人，1998，***反应临床免疫学杂志(J Allergy ClinImmunol)101：747；Simons等人，1996，国际免疫学(Int Immunol)8：1937；Creticos等人，1997，***反应临床免疫学杂志(J Allergy ClinImmunol)99：401；Marcotte等人，1997，***反应临床免疫学杂志(JAllergy Clin Immunol)99：405)。重要的是，利用尿素变性的变应原和T细胞肽得到的这些临床结果表明：对修饰的变应原而言，不连续B细胞表位和连续B细胞和T细胞表位的保留是有效调节抗体和细胞免疫应答所必需的。

减少变应原的B细胞表位的可接近性(可及性)的第二种方式涉及利用甲醛或戊二醛处理(Marsh，1971，Int Arch Allergy Appl Immunol 41：199；Patterson等人，1973，免疫学杂志(J Immunol)110：1413)或通过与非免疫原性聚合物结合(King等人，1979，实验医学杂志(J ExpMed)149：424)使变应原多聚化。戊二醛聚合的抗原在小鼠中有不同于天然抗原的加工方式，并且它们由分泌促Th1应答的细胞因子的抗原呈递细胞加工(Gieni等人，1993，免疫学杂志(J Immunol)150：302)。这种用于改善免疫治疗的第二种方法曾利用豚草花粉变应原尝试过，得到与利用天然变应原时相类似的免疫学结果(Norman等人，1982，***反应临床免疫学杂志(J Allergy Clin Immunol)70：248；Norman，1984，***反应临床免疫学杂志(J Allergy Clin Immunol)73：787)。这种方法的一个局限是当变应原被修饰以达到变应原性降低大于100倍时，经常会发生不连续B细胞表位的几乎完全丧失。

第三种方式是通过定点诱变选择性改变变应原的B细胞表位的接触型氨基酸残基。如果B细胞表位的关键性接触残基已知，这将是一种有用的方法。例如，在桦主要变应原中，一个氨基酸残基谷氨酸突变成丝氨酸破坏了其与小鼠抗体的结合，且导致与来自过敏患者血清库的IgE的结合降低40％(Mirza等人，2000，免疫学杂志(J Immunol.)165：331)。不同程度的降低也许反映小鼠抗体和人IgE分别为单克隆和多克***源。

因为任何一种单元型的MHC II类分子均可以在自己的结合沟中结合多种肽，因此通过利用其它肽对与MHC分子结合的变应原来源的T细胞表位进行抑制，可能可以调节T细胞应答。例如，在H-2k小鼠中，本身不具免疫原性的小鼠溶菌酶肽可以抑制对鸡卵清溶菌酶的T细胞应答(Adorini和Nagy，1990，今日免疫学(Immunol.Today)11：21)。另一个例子是利用流感HA肽体外抑制对螨变应原的T细胞应答(O’Hehir等人，1991，***反应临床免疫学杂志(J.Allergy Clin.Immunol.)87：1120)。

因此，对免疫原或变应原的免疫应答部分依赖于宿主基因构成、免疫路径和模式及免疫原/变应原本身。变应原对IgE免疫应答结果的决定程度还未知。每一变应原必须有多少B细胞表位和T细胞表位？是否变应原的免疫显性B细胞表位和T细胞表位被不同个体或所有易感个体识别？是否存在促进B细胞中的IgE类转换事件的T细胞表位？变应原与宿主蛋白质的抗原交叉反应是否会对回答为什么某些蛋白质比其他蛋白质具有更大的变应原性有一定帮助？对多价变应原的免疫耐受是否能通过单独或组合利用B细胞表位或T细胞表位处理而诱导产生？

king的美国专利号5,593,877、5,612,209、5,804,201、6,106,844、6,270,763和6,287,559以及美国专利申请系列号09/166,205公开了编码胡蜂毒液蛋白质的cDNA的分离和由此cDNA编码的蛋白质的推导氨基酸序列。这些cDNA使得大量胡蜂毒液蛋白质的表达和纯化成为可能以供免疫治疗使用。但是，序列不能提供胡蜂毒液蛋白质的天然结构信息。因此，这些cDNA和推导的氨基酸序列不能提供不连续表位的信息。通过此推导的胡蜂毒液氨基酸序列也不能预测存在于重组产生的胡蜂毒液蛋白质表面的表位。因此，这些cDNA和推导的氨基酸序列单独并不能准确预测出胡蜂毒液蛋白质的哪些区域或哪些肽可作为刺激B细胞介导的免疫应答的有效免疫原。这些cDNA和推导的氨基酸序列单独也不能预测出胡蜂毒液蛋白质表面的表位密度，而这是决定胡蜂毒液蛋白质交联细胞表面IgE分子的潜力以及由此其变应原性的重要因素。

因此，本领域需要确定怎样修饰变应原蛋白质天然结构中的B细胞表位才能产生提高治疗效果的设计。

本领域也需要提供这样的变应原蛋白质，其刺激B细胞介导的免疫应答，但不刺激IgE介导的***反应。具体地，本领域需要提供具有降低的表位密度的变应原，其能有效刺激B细胞产生IgG，但不能有效地与结合在例如但并不限于肥大细胞或嗜碱粒细胞表面上的天然变应原特异性IgE抗体交联。

本领域也需要提供在免疫疗法中有效的具有无交叉反应性的B细胞表位的杂合蛋白质。尤其需要提供存在变应原肽表位序列的杂合蛋白质，此变应原肽表位序列的构象使得其可接近免疫细胞表面受体和可溶性蛋白质(特别是抗体)。

因此，本领域需要试剂、药物组合物以及方法用于在不引起***反应(例如过敏性休克)的基础上产生IgG B细胞应答以抵御变应原。

于此引用的参考文献不应理解为承认其是本发明的现有技术。

发明概要

本发明提供了制备修饰的变应原的新方法。修饰的变应原为杂合体，其由目的“客”变应原的小部分和同源但具弱交叉反应的“宿主”蛋白质的大部分组成。这些同源“宿主”蛋白质作为支架来维持目的“客”变应原的天然结构，从而使目的“客”变应原的构象依赖型B细胞表位得以在杂合体中保留，但其密度降低。具有大于30％序列同一性且功能相似的同源蛋白质已知具有非常相似的三维结构(Chothia等人，1990，生物化学年评(Annual Review Biochem)59：1007；Russell，1994，分子生物学杂志(J Mol Biol)244：332)，这样就可产生各种客/宿主蛋白质。

因此，本发明涉及具有减弱的变应原性但保持免疫原性的重组变应原，例如胡蜂毒液变应原。因此，本发明提供变应原蛋白质、与变应原表面可及部位相对应的肽表位序列、含有***到宿主支架的相应结构区域的这些肽表位序列的杂合蛋白质、编码这些条合构建体的核酸，以及可用于刺激具减弱的变应性应答的、针对变应原的治疗性免疫应答的方法，即变应原免疫疗法。具体地，本发明重组杂合蛋白质、核酸和方法使得可以在不触发基于IgE的***反应(如急性过敏反应)的基础上刺激基于B细胞的变应原应答。

本发明杂合蛋白质以天然构象存在。在一个实施方案中，杂合蛋白质在天然构象中含有至少一个变应原肽表位序列。更特别地，支架蛋白质与变应原肽表位序列所来源的天然蛋白具有相同的天然构象。

在某些实施方案中，本发明杂合蛋白质含有融合肽，例如信号肽或用于纯化的柄(handle)。在其它实施方案中，本发明杂合蛋白质可以含有蛋白酶作用位点，以便例如以切下此纯化柄。相应地，本发明杂合蛋白质含有变应原肽表位序列、支架蛋白质序列，以及任选地单独的或联合的融合序列和蛋白酶作用位点。

重组肽表位序列在该序列所来源的天然蛋白质中位于表面。在特定实施方案中，变应原肽在天然蛋白质的环区。

应该意识到，杂合蛋白质可以含有一个以上的导入支架蛋白质序列的肽表位序列。

本发明涉及这样的杂合蛋白质，其中肽抗原来源于变应原蛋白质而支架蛋白质是与天然变应原蛋白质有大于或等于30％序列同一性的异源蛋白质。在特定的方面，肽抗原和支架蛋白质均来自胡蜂毒液蛋白质。更具体地，肽抗原和支架蛋白质均来自胡蜂毒液Ag 5s。

在一个实施方案中，本发明肽表位序列的特征为具有约6到50个氨基酸，且对小鼠B细胞应答具抗原性(B细胞表位)。更具体而言，在本发明实施例中，本发明变应原肽表位序列来自Ag 5肽，其选自：

NNYCKIKC(SEQ ID：1)；

NNYCKIKCLKGGVHTACK(SEQ ID：2)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKP(SEQ ID：3)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVV(SEQ ID：4)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVVSYGLTKQ(SEQ ID：

5)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVVSYGLTKQEKQDILK

(SEQ ID：6)；

QVGQNVALTGSTAAKYDDPVKLVKMWEDEVKDYNPKKKFSGNDFL

KTG(SEQ ID NO：7)；

HYTQMVWANTKEVGCGSIKYIQEKWHKHYLVCNYGPSGNFKNEELY

QTK(SEQ ID NO：8)

LKPNCGNKVVV(SEQ ID NO：9)；

LTGSTAAKYDD(SEQ ID NO：10)；

PKKKFSGND(SEQ ID NO：11)

IQEKWHK(SEQ ID NO：12)；和

FKNEELYQTK(SEQ ID NO：13)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVVSYGLTKQEKQDILK

EHND(SEQ ID NO：93)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVVSYGLTKQEKQDILK

EHNDFRQKIAR(SEQ ID NO：94)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVVSYGLTKQEKQDILK

EHNDFRQKIARGLETRGNPGPQPPAKNMKN(SEQ ID NO：95).

本发明还涉及分离的表达载体，其含有与本发明核酸可操作连接的启动子。本领域技术人员可商业获得的多种启动子均可用于本发明该方面。所述启动子的例子包括但并不限于SV40的早期启动子、hCMV的立即早期启动子、腺病毒早期启动子、痘苗病毒早期启动子、多瘤病毒早期启动子、SV40病毒晚期启动子、腺病毒晚期启动子、痘苗病毒晚期启动子、多瘤病毒晚期启动子、lac-trp***、TAC***、TRC***、λ噬菌体的主要操纵基因和启动子区域、fd外壳蛋白的调节区域、3-磷酸甘油酸激酶启动子、酸性磷酸酶启动子或酵母α交配因子启动子等等。适用于此处并且还易于为技术人员得到的表达载体的多个例子如下所述。

本发明也提供制备编码本发明变应原杂合蛋白质的核酸的方法。该方法包括将编码变应原蛋白质的肽表位序列的核苷酸序列导入编码与该变应原蛋白质结构同源的支架蛋白质的核苷酸序列中。编码肽表位序列的核苷酸序列以符合读框的方式导入编码支架蛋白质的核苷酸序列中，并且其所处位置使得在变应原杂合蛋白质中肽表位序列存在于杂合蛋白的表面可及区域并与该肽表位序列在变应原蛋白质中的位置相对应。在一个这样的实施方案中，将编码支架蛋白质的核苷酸序列突变以导入编码肽表位序列的核苷酸序列。在另一这样的实施方案中，编码肽表位序列的核苷酸序列通过用核酸内切酶处理含有编码肽表位序列的核苷酸序列与编码支架蛋白的核苷酸序列的核酸然后将来自于此的片段相连接而导入。如果有必要，可以利用本领域标准技术将限制性内切酶位点导入含有这些序列的核酸中。

本发明还涉及产生本发明杂合蛋白质的方法，其通过表达本发明的分离的核酸分子实施。这种产生方法为诊断和治疗所需的杂合蛋白质提供了丰富来源。产生杂合蛋白质的本发明该方法的一个例子是培养利用本发明表达载体转化或转染的宿主细胞，以使宿主细胞产生本发明杂合蛋白质。优选地，由此产生的本发明杂合蛋白质从培养物、宿主细胞或两者中回收。

本发明还涉及在治疗变应原特异性变应性疾病中有效的药物组合物。具体地，本发明涉及这样的药物组合物，其含有本发明杂合蛋白质或编码这种杂合蛋白质的核酸(优选表达载体)以及其可药用载体。本发明还包括药物组合物，其含有多种本发明杂合蛋白质或含有编码这多种杂合蛋白质的一个或多个核酸。

自然地，本发明涉及治疗变应原特异性变应性疾病的方法，其包括施用治疗有效量的本发明药物组合物。本发明药物组合物可以通过任何途径并且特别是通过口、肺、鼻、局部或肠胃外途径施用。其它给药途径也是可以的。

本发明另一个特定目的是提供治疗个体中变应原特异性***反应的方法，其中将治疗变应原特异性变应性疾病的药物组合物施用给个体。

而且，本发明还涉及调节哺乳动物对免疫原的免疫应答的药物组合物，其中该药物组合物包含可用于调节哺乳动物对免疫原的免疫应答的上述本发明变应原杂合蛋白质(或编码这种蛋白质的核酸)和它的可药用载体。

因此，施用这种药物组合物可调节免疫***识别和攻击免疫原的能力。在一个具体的实施方案中，施用这种药物组合物后，哺乳动物免疫***识别和攻击免疫原的能力比施用之前该个体的免疫***识别和攻击此免疫原的能力得到提高。

缩写

Dol m Dolichovespula maculata 白斑脸大黄蜂(white faced hornet)

Dol a D.arenaria 黄色大黄蜂(yellow hornet)

Pol a Polistes annularis 黄蜂(wasp)

Pol e P.exclamans 黄蜂(wasp)

Ves m Vespula maculifrons 额斑黄胡蜂(yellowjacket)

Ves v V.vulgaris 常见黄胡蜂(yellowjacket)

PCR 聚合酶链式反应

RACE cDNA末端快速扩增

TCR 抗原的T细胞受体

附图简述

图1：Ves v 5cDNA[SEQ ID NO：14]和氨基酸[SEQ ID NO：16]序列。左边的编号指核苷酸的位置，右边的编号指氨基酸的位置。

图2：Pol a 5cDNA[SEQ ID NO：15]和氨基酸[SEQ ID NO：17]序列。左边的编号指核苷酸的位置，右边的编号指氨基酸的位置。

图3：Ves v 5(V)[SEQ ID NO：16]和Pol a 5(P)[SEQ ID NO：17]的氨基酸比较。

图4：示意性显示Ag 5s以及杂合体的序列。杂合体上给出的残基编号参照Ves v 5的残基编号。

图5A-B：Ves v 5同源蛋白质的比对，所述蛋白来自以下昆虫的毒液：额斑黄胡蜂(Vespula maculifrons)[Ves m 5，SEQ ID NO：63]、常见黄胡蜂(Vespula vulgaris)[Ves v 5，SEQ ID NO：64]、重黄胡蜂(Vespulaflavopilosa)[Ves f 5，SEQ ID NO：65]、树黄胡蜂(Vespula pensylvanica)[Ves p 5，SEQ ID NO：66]、德国黄胡蜂(Vespula germanica)[Ves g 5，SEQID NO：67]、Vespula vidua[Ves vi 5，SEQ ID NO：68]、Vespula squamosa[Ves s 5，SEQ ID NO：69]、Dolichovespula maculata [Dol m Sa，SEQ IDNO：70]、Dolichovespula arenaria[Dol a 5，SEQ ID NO：71]、Dolichovespula maculata[Dol m 5b，SEQ ID NO：72]、金环胡蜂(Vespamandarinia)[Vesp m 5，SEQID NO：73]、黄边胡蜂(Vespa erabro)[Ves c5.01，SEQ ID NO：74]、黄边胡蜂[Ves c 5.02，SEQ ID NO：75]、Polistesfuseatus[Pol f 5，SEQ ID NO：76]、Polistes exclamans[Pol e 5，SEQ IDNO：77]、Polistes annularis[Pol a 5，SEQ ID NO：78]、红外来火蚁(Solenopsis invieta)[Sol i 3，SEQ ID NO：79]和黑外来火蚁(Solenopsisrichteri)[Sol r 3，SEQ ID NO：80]。

图6A-B：Ag 5s以及杂合体的SDS凝胶图谱

图7：Ves v 5以及杂合体的圆二色(CD)谱。

图8A-C：利用天然Ves v 5特异性小鼠抗体的抑制ELISA，利用(A)分离自BALB/c小鼠并耗竭了Pol a-交叉反应性抗体的Ves v 5特异性抗体，(B)来自ASW/n小鼠的抗血清和(C)来自P/J小鼠的抗血清。

图9A-C：利用来自小黄蜂敏感患者的血清进行的抑制ELISA。

图10A-C：固相Ves v 5或杂合体上小鼠Ves v 5特异性单克隆抗体的结合。

图11A-C：Ves v 5、Pol a 5以及杂合体的组胺释放测定试验。

图12A-B：Ves v 5样蛋白的比对。比对的蛋白质为Ves v 5[SEQ IDNO：81]、Sol i 3[SEQ ID NO：82]、番茄(Lycopersicon esculentum)p14a[SEQID NO：83]、裂褶菌(Schizophyllum commune)SC7[SEQ ID NO：84]、人胰蛋白酶抑制剂[SEQ ID NO：85]、人glipr[SEQ ID NO：86]、珠毒蜥(Heloderma horridum)helothermine[SEQ ID NO：87]和人TPX-1[SEQID NO：88]。

发明详述

本发明涉及具有减弱的变应原性但保持免疫原性的重组变应原杂合蛋白质构建体、编码这些变应原的核酸分子，以及在***反应的诊断和治疗中这种变应原的使用方法。本发明杂合蛋白质含有导入支架蛋白质序列中的表面(例如环或转角区域)肽表位序列。本发明杂合蛋白质、核酸和方法使得可以在不触发基于IgE的变应性应答的基础上刺激抵御变应原的基于B细胞的应答。在特定实施方案中，重组杂合蛋白质含有融合至支架蛋白质(尤其是Pol a 5)的胡蜂毒液表面或环状肽抗原(尤其来自Ves v 5)。

本发明还涉及含有如下核酸分子的表达载体，所述核酸分子包括具减弱的变应原性但保持免疫原性的变应原杂合蛋白质，本发明还涉及通过表达和回收此杂合蛋白质而生产本发明杂合蛋白质的方法。

本发明也提供可以有效治疗变应原特异的变应性疾病的药物组合物，其包含本发明杂合蛋白质或编码这种杂合蛋白质的核酸载体；并提供治疗这种变应性病症的方法，包括施用治疗有效量的这种药物组合物。

本发明杂合蛋白质也可用于变应原特异的变应性病症的诊断。

本发明部分基于下述发现，即将来自小黄蜂(Vespula vulgaris)抗原5的表面可及区域的序列***到Polistes annularis抗原5的相应区域产生了杂合构建体，该构建体保持亲本蛋白质的免疫原性但表现出显著减弱的变应原性。而且，导入序列的最优位置是由Ves v 5的晶体结构确定的表面可及位点，尤其是环状和转角区域。

早期工作建立的那些杂合构建体，其中四分之一到三分之一的变应原蛋白质被导入同源支架蛋白质的相应区域。然而，这些杂合构建体缺少本发明的优势和改进。

在患者中的临床研究和利用实验动物的测试显示，针对小黄蜂和纸巢蜂的毒液蛋白质的特异抗体具有有限的交叉反应(Lichtenstein等人，1979，***反应临床免疫学杂志(J Allergy Clin Immunol)64：5；Lu等人，1993，免疫学杂志(J Immuol)150：2823)。这些观察构成了本发明优选实施方案的基础。优选的“客”变应原抗原5为Ves v 5，它是23kd的小黄蜂毒液蛋白质。优选的作为支架蛋白质的同源宿主变应原为Pol a 5，它是与Ves v 5大小相似的纸巢峰(paper wasp)的毒液蛋白质。Ves v 5和Pol a 5有59％的序列同一性(图3)。两者均可在酵母中表达，并且重组蛋白质显示出具有天然蛋白质的天然构象(Monsalve等人，1999，蛋白质表达纯化(Protein Exp.Purif.)16：410)。

Ves v 5和Pol a 5的杂合体的免疫化学结果已有报道。这些杂合体的序列示意性显示在图4中。杂合体PV1-46、PV109-155和PV156-204分别含有Ves v 5分子的第一个1/4段氨基酸序列(即第1-46位氨基酸)、第三个1/4段氨基酸序列(即第109-155位氨基酸)和最后1/4段氨基酸序列(即第156-204位氨基酸)，它们连同Pol a 5分子的一部分共同构成完整的杂合体Ag 5分子。含有Ves v 5分子的第二个1/4段氨基酸序列的杂合体没有制备，因为在该区域Ves v 5和Pol a 5的序列高度相同(参见图3)。与PV156-204相比，杂合体PV1-155具有Ves v 5和Pol a 5的氨基端和羧基端片段的相反排列。

杂合体PV1-8、PV1-18、PV1-24、PV1-32、PV22-32、PV115-125、PV142-150、PV176-182和PV195-204设计成含有Ves v 5的表面环状或转角区域。这些杂合体含有Ves v Ag 5的第7-32位氨基酸，这些氨基酸替代Pol a Ag 5的同源区域。

可预料地，同源蛋白质相应区域，尤其是在表面可及区域(如环状区域和转角区域)中的转换可以使天然结构得以保持。表面可及区域(尤其是环状区域和转角区域)在保持结构的同时倾向于表现出更大的灵活度以及更好的对变化的耐受性。在定向进化中也有相对应的方法，其中同源酶重组产生新的具功能的酶嵌合体。

术语“变应原杂合蛋白质”指重组或合成蛋白质，其具有支架蛋白质的天然结构，但含有一个或多个来自变应原的序列。变应原与支架蛋白质结构同源，因此允许将变应原序列导入支架蛋白质的相应位置。“相应位置”是指在一级序列中的同一位置或在天然结构中的同一拓扑位置。变应原序列选自变应原的表面可及区域并***到支架蛋白质的相应表面可及区域。因为在天然构象中蛋白质的B细胞表位位于可接近的表面，故来自变应原的序列在导入到支架蛋白质中后可以作为B细胞表位，因此它们被称为变应原蛋白质的“肽表位序列”。

与本发明相关的表述“减弱的变应原性”是指在设计测量这种变应原性的体外测定试验中，分子或抗原表现出明显降低的变应原活性。这种“体外测定试验”为本领域熟知，包括例如但并不限于变应原敏感患者或实验动物在受该变应原攻击后其嗜碱性粒细胞的组胺释放测定试验。此外，这里使用的“活性”可以指能指示分子或抗原的变应原性的任何可测量的参数或结果，例如但并不限于在测定中获得的最大应答或在测定中为得到指定结果所需的抗原的量或浓度。

术语“保持免疫原性”(以任何语法形式出现)是指杂合蛋白质可引起免疫应答(尤其是IgG主导的体液免疫)，此免疫应答可与天然变应原或支架蛋白(或两者)引起的免疫应答相比而且大于它们引起的变应性(IgE)免疫应答。杂合体特异的IgG会与存在于变应原和支架蛋白质的表位发生交叉反应。这种IgG应答能封闭IgE结合，因此降低或阻碍***反应。另外，杂合蛋白质可以引起T细胞无变应性和其他***反应抑制性免疫应答。

根据本发明，如果进行比对后，两个蛋白质表现出至少约30％的氨基酸同一性，那么这些蛋白质是“同源的”，所述氨基酸同一性可通过利用本领域已知的程序确定，上述程序的例子包括但并不限于Gap、Bestfit和BLAST程序。更优选同源蛋白质展现至少约50％的氨基酸同一性。然而，在特定实施方案中，变应原蛋白质与支架蛋白质不具有大于70％的序列相同性，以便降低高度交叉反应的可能性，这种高度交叉反应可能将导致杂合蛋白质具有程度不可接受的变应原性。更高的序列相同性是可以接受的，尤其当***支架蛋白质的肽表位序列与其所替代的支架蛋白质的相应序列非常不相同时——例如小于50％的同一性以及优选地小于30％的同一性。

当两个蛋白质由于一级序列的相似性而采用相似的核心二级和三级结构以至于它们的三维结构可以几乎完全地(大于70％)重叠叠合时，它们在结构上同源。然而，它们的表面三级结构可能不相同。

在本发明优选的实施方案中，将来自变应原的肽表位序列***或替换“支架”蛋白质的序列。相应地，本发明“支架蛋白质”为包括变应原表位序列的蛋白质，上述变应原表位序列可以是***序列或作为支架蛋白质的同源(相应)序列的替换序列。支架蛋白质表现出天然构象。变应原和支架可互换位置；这些术语用于表示导入“支架”的序列的来源(来自“变应原”)。虽然是不同的群体，但由于“变应原”与“支架”同源，因此都可充当变应原。因此，如果将“支架蛋白质”的表面可及序列导入另一结构同源蛋白质中，则该“支架蛋白质”也是“变应原”。

术语“天然构象”包括由非重组的，即天然的蛋白质、多肽或抗原在其天然环境中表现出的功能构象或它们在可保持所述天然环境中的功能构象的条件下经纯化后表现出的功能构象。天然构象可以通过例如但并不限于确定蛋白质的圆二色谱测量。天然构象也可通过测定酶活性确定。本领域技术人员应该理解，在天然非重组蛋白质的功能构象未知的情况下，“天然构象”包括可重复地表现出非随机确定构象的重组蛋白质形式，其中所述非随机确定构象包括在正确折叠的功能性蛋白质中常见的二级结构元件，例如但并不限于α螺旋和β折叠元件。而且正如熟知的，利用重组技术可以将附加的氨基酸在不破坏蛋白质的天然构象的情况下连接到蛋白质的氨基或羧基末端。这种附加的氨基酸可以是短的多肽“标签”，其一般长度为1-25个氨基酸并且一般是无序的，附加的氨基酸也可以是更长的多肽，其可以形成单独的结构域并且本身可以为有序或无序的。

术语“表面暴露氨基酸”指定位于三维结构的表面的氨基酸残基，当变应原处于溶液中时，此氨基酸残基的至少一个原子的至少一部分可以接触到周围溶剂。优选地，处于三维结构中的此氨基酸残基有至少20％的溶剂(水)可及性(accessibility)，更优选至少30％，再更优选至少40％并且最优选至少50％的可及性。

术语“溶剂可及性”定义为分子中可接近如下球体的面积，所述球体具有可与溶剂(水，r＝1.4_)分子相比的半径。

“变应原”有它的普通含义，即它指任何可以引起***反应(例如组胺释放至过敏性休克)的蛋白质样分子。变应原为大家所熟知；本说明书表8中列出具代表性的群体。本发明变应原的例子可以适宜地是吸入型变应原，例如来自树、草、药草、真菌、屋尘螨、蟑螂和动物毛发及皮屑。重要的来自树、草、药草的花粉变应原为来自下述分类学目的变应原：壳斗目(Fagales)、木犀目(Oleales)和松目(Pinales)(包括桦树属(Betula)、桤木属(Alnus)、榛属(Corylus)、鹅耳枥属(Carpinus)和木犀榄属(Olea))、禾草目(Poales)(包括例如黑麦草属(Lolium)、梯牧草属(Phleum)、早熟禾属(Poa)、狗牙根属(Cynodon)、鸭茅属(Dactylis)和黑麦属(Secale)的草)、菊目(Asterales)和荨麻目(Urticales)(包括豚草属(Ambrosia)和蒿属(Artemisia)的药草)。重要的来自真菌的吸入型变应原为来自链格孢属(Alternaria)和枝孢属(Cladosporium)的那些。其它重要的吸入型变应原来自尘螨属(Dermatophagoides)的屋尘螨(house dust mite)、来自蟑螂及哺乳动物如猫、狗和马。此外，本发明的重组变应原可以是毒液变应原的突变体，所述毒液变应原包括来源于蛰刺或叮咬类昆虫的那些，例如其可以来自分类目膜翅目(Hymenoptera)的昆虫，包括蜜蜂(蜜蜂总科(Apidae))、黄蜂(胡蜂总科)和蚂蚁(蚁总科(Formicoidae))。具体的变应原成分包括例如壳斗目的Bet v 1(B.verrucosa，桦属)、Aln g 1(欧洲桤木(Alnus glutinosa)，桤木属)、Cor a 1(欧洲榛(Corylus avelana)，榛属)和Car b 1(欧洲鹅耳枥(Carpinus betulus)，鹅耳枥属)。其它还有Cry j 1(松目)、Amb a 1和2、Artv 1(菊目)、Par j 1(荨麻目)、Ole e 1(木犀目)、Ave e 1、Cyn d 1、Dac g 1、Fes p 1、Hol l 1、Lol p 1和5、Pas n 1、Phl p 1和5、Poa p 1、2和5、Secc 1和5以及Sor h 1(各种草本植物花粉)、Alt a 1和Cla h 1(真菌)、Derf 1和2、Der p 1和2(屋尘螨，分别为粉尘螨(D.farinae)和户尘螨(D.pteronyssinus))、Lep d 1和2(害嗜鳞螨(Lepidoglyphus destructor)，储藏物螨类(storage mite))；Bla g 1和2、Per a 1(蟑螂，分别为德国小蠊(Blatellagermanica)和美洲大蠊(Periplaneta americana))、Fel d 1(猫)、Can f 1(狗)、Equ c 1、2和3(马)、Apis m 1和2(蜜蜂)、Ves v 1、2和5、Pol a 1、2和5(所有黄蜂)和Soli 1、2、3和4(火蚁)。该术语也包括在上述“背景”中所描述的所有例子。

例如，术语“胡蜂毒液变应原”是指在胡蜂毒液中发现的蛋白质，在被该昆虫蛰刺后易感人群就会被致敏。虽然大部分抗原具有和特异IgG类抗体反应的特性，但变应原还具有与IgE型抗体反应的特性。IgE型抗体负责介导变应性病症的症状，即即发型超敏反应。

于此使用的术语“胡蜂”按照变应原领域的习惯用法使用，并且是指属于世界范围的胡蜂科(Vespidae)的昆虫，即包括大黄蜂、小黄蜂和纸巢峰的社会性黄蜂。具体地，胡蜂包括胡蜂亚科(Vespinae)和马蜂(Polistinae)亚科。更具体地，胡蜂包括胡蜂属(Vespa Linnaeus)、黄胡蜂属(VespulaThomson)、长黄胡蜂属(Dolichovespula Rohwer)和马蜂属(PolistesLatreille)。黄胡蜂属中的种包括但并不限于德国黄胡蜂(V.germanica(Fab.))、V.squamosa(Drury)、额斑黄胡蜂(Buysson)、重黄胡蜂(Jacobson)、常见黄胡蜂(V.vulgaris(L.))和树黄胡蜂(V.pensylvanica(Saussure))。马蜂属中的种包括但并不限于P.annularis(Linnaeus)、P.exclamans(Viereck)、P.metricus(Say)、P.fuscatus(Fabricius)、P.apachus(Saussure)。长黄胡蜂属中的种包括但并不限于D.maculata(L.)和D.arenaria(Fab.)。胡蜂属中的种包括但并不限于黄边胡蜂(V.crabro(L.))和东方胡蜂(V.orientalis(Linnaeus))。

常见黄胡蜂的分类学地位如下：

目：膜翅目(Hymenoptera)

亚目：细腰亚目(Apocrita)

部：针尾部(Aculeata)

总科：胡蜂总科(Vespoidea)

科：胡蜂科(Vespidae)

亚科：胡蜂亚科(Vespinae)

属：黄胡蜂属(Vespula)

种组：常见黄胡蜂种组

种：常见黄胡蜂

Polistes annularis的分类学地位如下：

目：膜翅目

亚目：细腰亚目

部：针尾部

总科：胡蜂总科

科：胡蜂科

亚科：马蜂亚科(Polistinae)

族：马蜂族(Polistini)

属：马蜂属(Polistes)

亚属：Aphanilopterus

种：annularis

于此使用的术语“免疫调节”是指在B细胞或T细胞水平上增高或降低抗原特异性免疫应答的能力。免疫调节活性可以在例如T细胞增殖测定中通过测定抗体的产生、淋巴因子的产生或T细胞应答检测。特别地，除影响B细胞应答外，本发明免疫调节多肽可以结合T细胞表面的分子并影响T细胞应答。

于此使用的短语“免疫***相关疾病或病症”是指可引起个体免疫应答或影响免疫***对免疫原应答的能力的疾病或病症。因此，免疫***相关疾病或病症的例子包括病原性疾病或病症、病毒性疾病或病症(例如HIV、单纯疱疹病毒或***瘤病毒)、自体免疫疾病(例如关节炎或狼疮)。

变应原结构的确定

蛋白质的三维结构可以通过本领域公知的物理方法确定，包括而并不限于X-射线晶体学、核磁共振光谱学和电子晶体学等。优选地，蛋白质的三维结构通过X射线晶体学来确定。还优选这些技术产生5_或更好的分辨率，在这样的分辨率下能获得蛋白质多肽主链中的α碳原子的踪迹，这就可以确定蛋白质的二级结构特征，如α螺旋和β折叠结构元件。更优选以2_或更好的分辨率确定蛋白质三维结构，在这样的分辨率下能确定出氨基酸侧链的位置。特定变应原的结构已为大家公知，如表9所示。这些或其它变应原的结构可以利用上述标准技术确定。

蛋白质的三维结构还可以通过与结构已通过物理方法经验地得出的同源蛋白质进行比较而推断，例如通过比对和比较两者的氨基酸序列来推断。比较和比对氨基酸序列的方法为本领域所公知，并且包括例如但并不限于Pileup、Gap、BestFit和Compare程序(Genetic Computer Group，Madison，WI)。通过这种比对和比较可以鉴定出氨基酸高度相同或相似的区域，这些区域在同源蛋白质中可能采用相似或相同的构象。由此，一旦确定了一种蛋白质的三维结构，就可以确定许多同源蛋白质的三维结构，这样就可以鉴定出同源蛋白质的表面和环状区域。

与内部氨基酸的变化造成的影响程度相比，位于蛋白质的表面和环状区域中的氨基酸的变化对蛋白质的三维结构和功能的影响程度要轻些。因此，与内部残基相比，同源蛋白质中表面和环状区域的氨基酸残基一般保守性差一些。然而，本领域普通技术人员应当意识到，表面和环状区域在同源蛋白质的天然构象中会占据相同的相对位置。因此，表面区域和环状区域为同源蛋白质内的“保守元件”或“同源元件”。

另外，各种光谱学技术可以用于结构评价，尤其用于证实杂合蛋白质是否保留变应原和支架蛋白质的天然结构。这些技术包括但并不限于圆二色谱、核磁共振波谱分析(尤其比较低分辨率)、中子衍射分析、荧光光谱分析(和其它光吸收和透射光谱技术)等等。特别地，对光谱相似度的评价可以指示杂合蛋白质采取天然构象的程度。在这种类型的分析中优选圆二色谱。

分子生物学技术

根据本发明可以使用本领域常规分子生物学、微生物学和重组DNA技术。这些技术在文献中有充分阐释，参见例如Sambrook，Fritsch和Maniatis，“分子克隆：实验室手册”(“Molecular Cloning：a LaboratoryManual”)，第二版(1989)冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约(这于此称为“Sambrook等人，1989”)；“DNA克隆：实用方法”(“DNACloning：a Practical Approach”)，第一卷和第二卷(D.N.Glover主编，1985)；“寡核苷酸合成”(“Oligonucleotide Synthesis”)(M.J.Gait主编，1984)；“核酸杂交”(“Nucleic Acid Hybridization”)，[B.D.Hames和S.J.Higgins主编(1985)]；“转录和翻译”(“Transcription AndTranslation”)，[B.D.Hames和S.J.Higgins主编(1984)]；“动物细胞培养”(“Animal Cell Culture”)，[R.I.Freshney主编(1986)]；“固定化细胞和酶”(“Immobilized Cells And Enzymes”)，[IRL出版社，(1986)]；B.Perbal，“分子克隆实用指南”(“A Practical Guide To MolecularCloning”)(1984)。本发明相关的其它技术可以在下述文献中找到：King的美国专利号5,593,877、5,612,209、5,804,201、6,106,844和美国专利申请系列号08/484,388、08/474,853和09/166,205以及Monsalve等人1999，蛋白质表达纯化(Protein Expr.Purif.)16：410。

“核酸分子”是指以单链形式或双链螺旋形式存在的核糖核苷(包括腺嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷、尿嘧啶核苷或胞嘧啶核苷；又称为“RNA分子”)或脱氧核糖核苷(腺嘌呤脱氧核苷、鸟嘌呤脱氧核苷、胸腺嘧啶脱氧核苷或胞嘧啶脱氧核苷；又称为“DNA分子”)的磷酸酯多聚体形式。双链DNA-DNA、DNA-RNA和RNA-RNA螺旋都是可能的。术语核酸分子，以及特别是DNA或RNA分子仅仅是指分子的一级和二级结构，并不限定任何特定的三级结构。因此，该术语包括在尤其是线状或环状DNA分子、限制性片段、病毒、质粒和染色体中存在的双链DNA。在讨论特定双链DNA分子的结构时，于此描述的序列按照一般习惯给出，即仅沿DNA的非转录链(即具有与mRNA同源的序列的那条链)以5’到3’方向给出序列。“重组DNA分子”是已接受分子生物学操作的DNA分子。

在适宜的温度和溶液离子强度条件(参见Sambrook等人，上述)下，当核酸分子的单链形式可以退火结合另一核酸分子时，该核酸分子与此另一核酸分子就是“可杂交的”，上述另一核酸分子例如cDNA、基因组DNA或RNA。温度和离子强度条件决定杂交的“严紧性”。为初步筛选同源核酸分子，可以使用相应于55℃的Tm的低严紧性杂交条件，例如5×SSC，0.1％SDS，0.25％脱脂奶粉并且不含甲酰胺；或者30％甲酰胺，5×SSC，0.5％SDS。与较高的Tm相对应的中等严紧杂交条件为例如40％甲酰胺及5×或6×SSC。与最高Tm相对应的高严紧杂交条件为例如50％甲酰胺及5×或6×SSC。杂交需要两个核酸分子含有互补序列，但依赖于杂交的严紧度，碱基之间可以有错配。用于核酸分子杂交的适当严紧度依赖于核酸分子的长度和分子互补的程度以及本领域熟知的变量。两条核苷酸序列之间的相似性或同源性程度越高，具有这些序列的核酸分子的杂合体的Tm就越大。核酸分子杂交的相对稳定性(与较高的Tm相对应)按以下顺序降低：RNA:RNA，DNA:RNA，DNA:DNA。对于长度大于100个核苷酸的杂合体而言，已经推导出计算Tm的公式(参见Sambrook等人，上述，9.50-0.51)。对与较短的核酸分子(即寡核苷酸)杂交而言，错配发生的位置更为重要，并且寡核苷酸的长度决定其特异性(参见Sambrook等人，上述，11.7-11.8)。优选可杂交核酸分子的最小长度为至少约10个核苷酸；更优选长度为至少约20个核苷酸，甚至更优选至少约30个核苷酸；并且最优选至少约40个核苷酸。

在特定实施方案中，术语“标准杂交条件”是指55℃的Tm，并利用如上所述的条件。在优选实施方案中，Tm为60℃；在更优选实施方案中Tm为65℃。

DNA“编码序列”是指置于适当的调节序列的调节下时可以在体内转录并翻译成多肽的双链DNA序列。编码序列的界线由5’(氨基)端的起始密码子和3’(羧基)端的翻译终止密码子确定。编码序列可以包括但不限于原核序列、来自真核mRNA的cDNA、来源于真核生物(如哺乳动物)DNA的基因组DNA序列，并且甚至合成的DNA序列。如果编码序列用于在真核细胞中表达，在该编码序列的3’端一般都具有多腺苷酸化信号和转录终止序列。

转录和翻译调节序列是DNA调节序列，如启动子、增强子、终止子等等，它们在宿主细胞中保证编码序列的表达。在真核细胞中，多腺苷酸化信号是调节序列。

“启动子序列”是能够在细胞中结合RNA聚合酶并起始下游(3’方向)编码序列的转录的DNA调节区域。为定义本发明，启动子序列在3’端以转录起始位点为边界并向上游(5’方向)延伸以包括为了以高于背景的可检测水平起始转录所需的最少数目的碱基或元件。在启动子序列内可以找到转录起始位点(可以例如，方便地通过S1核酸酶作图而确定)，以及用于结合RNA聚合酶的蛋白质结合结构域(共有序列)。真核启动子通常但非总是包含“TATA”盒和“CAT”盒。

当编码序列在细胞中位于转录和翻译调节序列的“控制之下”或与它们“可操作连接”时，RNA聚合酶可以将编码序列转录成mRNA，而所述mRNA随后可翻译成由该编码序列编码的蛋白质。“信号序列”可以包括在编码序列之前，这种序列编码“信号肽”，位于多肽的N-末端，可以指导宿主细胞将多肽转运到细胞表面或将多肽分泌至培养基中。这些信号肽在输出后通常被细胞选择性地降解。可以发现，原核和真核生物的多种天然蛋白质与信号序列相连。

编码杂合蛋白质的核酸分子

本发明涉及编码重组变应原杂合蛋白质的分离的核酸分子。本发明进一步涉及细胞系，所述细胞系稳定地含有编码变应原杂合蛋白质的重组核酸分子并能够表达这种核酸分子以产生该杂合蛋白质。这些核酸可由例如列在表8和于此公开的某些专利和专利申请中的变应原生成。

作为一个具体特定实例，本发明公开提供了胡蜂毒液蛋白质的完整核酸序列。具体地，本发明公开提供了胡蜂Ag5的核酸序列，尤其是Ves vAg5(SEQ ID NO：14；参见图1)和Pol a Ag5(SEQ ID NO：15；参见图2)的序列。本发明也提供了Ves v Ag5(SEQ ID NO：16；参见图1)和Pol aAg5(SEQ ID NO：17，参见图2)的氨基酸序列。

在一个特定实施方案中，为了获得本发明核酸分子，利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增如下DNA片段，该片段编码包含变应原肽表位序列或支架蛋白质的序列。能够代表本发明变应原蛋白质或支架蛋白质的寡核苷酸引物在PCR反应中用作引物。通常，这些引物由合成制备。PCR可以利用例如Perkin-Elmer cetus热循环仪和Taq聚合酶(GeneAmp^TM)进行。

本发明核酸也可以通过限制性片段的克隆而获得，或者，本发明核酸可以通过核酸的体内或体外重组而获得。在一些情况下重组依赖于参与重组事件的核酸间的序列同源性，但在另一些情况下进行重组的核酸不需要包含明显的同源性，例如在“非常规”重组事件中。本领域普通技术人员明了，核酸重组可以是分子内或分子间事件。

除分离变应原蛋白质或支架蛋白质的DNA或cDNA之外，其它备选方案包括但并不限于依据此处提供的序列化学合成出基因序列本身。

上述方法并不旨在限制可获得本发明DNA的方法。

通过重组或者其它技术，用于获得本发明核酸的方法可以引起核酸相连处的核苷酸***或缺失。在一个实施方案中，在编码抗原肽的核酸与编码支架蛋白质的核酸的连接处可以有核苷酸的***或缺失。这些核酸完全在本发明范围之内。因此，本发明也包括这样的杂合蛋白质，其在肽表位序列与支架蛋白质序列的连接处有氨基酸的***或缺失。

克隆的杂合蛋白质或其起始材料的核酸序列可以利用本领域公知的多种策略进行修饰(Maniatis，T.，1990，分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室，冷泉港，纽约)。可以利用限制性内切酶在适当的位点将序列切开、如果需要的话进一步进行酶学修饰、分离并在体外连接。在产生编码杂合蛋白质的核酸时，应注意保证修饰的核酸与支架蛋白质仍在同一翻译阅读框内，且不能被翻译终止信号打断。

另外，编码变应原肽表位序列或支架蛋白质的核酸可以在体外或体内进行突变以产生和/或破坏翻译序列、起始序列和/或终止序列或者在编码区中造成变化和/或形成新的限制性内切酶位点或破坏原有位点，以促进进一步的体外修饰。本领域已知的任何诱变技术都可使用，包括但不限于体外定点诱变(Hutchinson等人，1978，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)253：6551；Zoller和Smith，1984，DNA 3：479-488；Oliphant等人，1986，基因(Gene)44：177；Hutchinson等人，1986，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)83：710)、TAB^_接头的使用(Pharmacia)等等。定点诱变优选使用PCR技术进行(参见Higuchi，1989，《PCR技术：DNA扩增的原理和应用》中的“利用PCR改造DNA”，H.Erlich主编，Stockton出版社，第6章，61-70页)。

本领域已知的大量载体-宿主***可用于表达本发明DNA。可能的载体包括但不限于质粒或修饰的病毒，但是载体***必须与所使用的宿主细胞相容。这些载体包括但不限于噬菌体(例如λ噬菌体衍生物)或质粒(例如各种pBR322衍生物，如pUC、CR、pGEX载体，pmal-c，pFLAG等)。例如，在克隆载体中的***可以通过将DNA片段连接至具有互补粘末端的克隆载体中而实现。在本发明优选的方面，PCR扩增的本发明核酸分子包含3’A核苷酸突出端，可以直接用于克隆到含有互补的T核苷酸突出端的pCR载体(Invitrogen公司，San Diego，CA)上。然而，如果克隆载体上不存在用于片断化DNA的互补性限制性位点，则可对DNA分子的末端作酶学修饰。或者，可以通过在DNA末端连上核苷酸序列(接头)而产生任何期望位点；这些连接上的接头可以包含编码限制性内切酶识别序列的特异的化学合成的寡核苷酸。在另一种可供选择的方法中，可以通过同聚物加尾修饰本发明DNA和切开的载体。重组分子可以通过转化、转染、感染和电穿孔等方法导入宿主细胞，由此产生该基因序列的许多拷贝。

在特定实施方案中，利用插有本发明DNA的重组DNA分子转化宿主细胞以产生多拷贝的该DNA。因此，大量获得DNA可以通过培养转化体、从转化体中将重组DNA分子分离，并且在必要时从分离的重组DNA中回收***序列而实现。

编码SEQ ID NO：1-13和93-95的Ves v 5多肽表位序列的核苷酸序列分别在SEQ ID NO：18-30和96-98中给出。

变应原杂合蛋白质的表达

编码杂合蛋白质或其免疫调节片断、衍生物或类似物的核苷酸序列可以***适当的表达载体，即含有转录和翻译***的蛋白质编码序列所必需的元件的载体。这些元件在此处称为“启动子”。因此，编码杂合蛋白质的核酸分子可操作地与启动子相连。表达载体也优选包括复制起点。必需的转录和翻译信号也可以由编码变应原或支架蛋白质的天然基因和/或其侧翼区域提供。潜在的宿主-载体***包括但并不限于例如利用病毒(例如痘苗病毒、腺病毒等等)感染的哺乳动物细胞***；例如利用病毒(例如杆状病毒)感染的昆虫细胞***；诸如含有酵母载体的酵母等微生物；或者利用噬菌体、DNA、质粒DNA或柯斯质粒DNA转化的细菌。载体的表达元件在强度和特异性上各有不同。依赖于所使用的宿主-载体***，可以使用多种适当的转录和翻译元件中的任意一种。

在另外的实施方案中，本发明重组杂合蛋白质或其免疫调节片断、衍生物或类似物可通过将杂合蛋白质编码序列重组整合在染色体上后表达。在这一方面，可以使用多种扩增***的任意一种来获得高水平的稳定基因表达(参见Sambrook等人，1989，上述，16.28节)。

可以在允许细胞表达杂合蛋白质的条件下，将重组载体转化的细胞在适当的细胞培养基中培养，所述重组载体含有编码杂合蛋白质的核酸分子。随后按照本领域公知的方法从培养物中回收表达的杂合蛋白质。这些方法将在下文中详述。

在另一实施方案中，可以使杂合蛋白质最初与多个氨基酸一起表达并且随后将该多个氨基酸从杂合蛋白质上切除。被去除的序列可以在杂合蛋白质序列的氨基或羧基末端。该序列可以在体内或体外去除。优选地，此序列通过蛋白酶在特异位点切割而去除，所述蛋白酶为例如信号肽酶、Xa因子、Kex2或二肽氨肽酶。编码这种含有将被蛋白酶切除的多肽的杂合蛋白质的重组DNA分子含有下述序列，该序列以符合读框的形式连接变应原杂合体的编码序列并编码待从杂合蛋白质上切除的肽。

在特定实施方案中，杂合蛋白质与含有约6个组氨酸残基的附加序列一起表达，例如这可利用pQE载体(QIAGEN，Chatsworth，CA)进行。组氨酸的存在使得可以利用Ni-螯合柱选择性分离重组蛋白质。这种柄还包括但并不限于FLAG、myc标签、GST等等。

在另一实施方案中，可以产生周质形式的杂合蛋白质(含有信号序列)，其可以使蛋白质输出至酵母周质或培养基。向周质或培养基中的输出可以促进表达蛋白质的正确折叠。

前述任何一种将DNA片断***载体的方法都可以用于构建表达载体，所述表达载体含有由适当的转录/翻译调节信号和蛋白质编码序列组成的基因。这些方法包括体外重组DNA和合成技术以及体内重组(遗传重组)。

编码杂合蛋白质或其免疫调节片断的核酸序列的表达可以被第二个核酸序列调节，这样，杂合蛋白质将在转化有该重组DNA分子的宿主中表达。例如，杂合蛋白质的表达可以由本领域已知的任何启动子/增强子元件调节，但是这些调节元件必须在选择用于表达的宿主中具有功能。可用于调节杂合蛋白质编码序列表达的启动子包括但并不限于CMV启动子、SV40早期启动子区域(Benoist和Chambon，1981，自然(Nature)290：304-310)、包含在Rous肉瘤病毒3’长末端重复中的启动子(Yamamoto等人，1980，细胞(Cell)22：787-797)、疱疹病毒胸苷激酶启动子(Wagner等人，1981，美国国家科学院院报(Proc.Acid.Sci.U.S.A.)78：1441-1445)、金属硫蛋白基因调节序列(Brinster等人，1982，自然(Nature)296：39-42)；用于原核表达载体的启动子例如β-内酰胺酶启动子(Villa-Kamaroff等人，1978，美国国家科学院院报(Proc.Acid.Sci.U.S.A.)75：3727-3731)或者tac启动子(DeBoer等人，1983，美国国家科学院院报(Proc.Acid.Sci.U.S.A.)80：21-25)；也参见《科学美国人》中的“来自重组细菌的有用蛋白质”，1980，242：74-79；来自酵母或其它真菌的启动子元件例如Gal4启动子、ADC(醇脱氢酶)启动子、PGK(磷酸甘油激酶)启动子、碱性磷酸酶启动子；以及展现出组织特异性并已经在转基因动物中使用的动物转录调节区域。

另外，可以选择这样的宿主细胞系，其可以按照特定的期望方式调节***序列的表达或者对基因产物进行修饰和加工。不同的宿主细胞具有其特征性的蛋白质翻译和翻译后加工和修饰机制(例如糖基化、切割[如信号序列])。可以选择适当细胞系或宿主***以保证对所表达的外源蛋白质进行期望的修饰和加工。例如，可以通过在细菌***中表达来产生非糖基化的核心蛋白质产物。然而，在细菌中表达的酶蛋白质可能不会正确折叠。可以通过在酵母中表达来产生糖基化产物。可以通过在昆虫细胞中表达来增加异源变应原杂合蛋白质进行天然糖基化和折叠的可能性。此外，不同载体/宿主表达***也可能不同程度地影响加工反应，如蛋白水解酶裂解。

载体可以通过本领域已知的方法导入期望的宿主细胞，所述方法例如转染、电穿孔、微注射、转导、细胞杂交、DEAE葡聚糖、磷酸钙沉淀、脂质转染(溶酶体融合)、使用基因枪或者DNA载体转移体(参见例如Wu等人，1992，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)267：963-967；Wu和Wu，1988，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)263：14621-14624；Hartmut等人，加拿大专利申请号2,012,311，1990年3月15日提交)。

cDNA和基因组序列都可以被克隆和表达。

此外，本发明杂合蛋白质或其片断、衍生物或类似物可以考虑通过合成制备，例如通过固相肽合成技术制备。

一旦重组杂合蛋白质被鉴定，其可以通过标准方法分离和纯化，所述标准方法包括层析(例如离子交换、亲合、大小排阻和反向层析)、离心、差异溶解或者其它的蛋白质纯化标准技术。

在特别的实施方案中，杂合蛋白质及其片断可以经改造而含有约6个组氨酸残基，这使得可以利用Ni-螯合柱选择性分离重组蛋白质。在一个优选的方面，该蛋白质通过反向层析进一步纯化。

在另一实施方案中，重组杂合蛋白质可以包括允许目的杂合蛋白质进行亲合纯化的附加序列，例如FLAG、MYC或GST(谷胱甘肽-S-转移酶)。例如，可以将杂合蛋白质的附加序列的特异性抗体固定于固相支持物(如溴化氰活化的琼脂糖)上，并用于纯化杂合蛋白质。在另一实施方案中，将附加序列的结合配偶体(例如受体或配体)固定并用于亲合纯化杂合蛋白质。

在一个实施方案中，杂合蛋白质(优选纯化的)不经进一步修饰即使用，即不经过裂解或其它方式去除附加在肽表位序列和支架蛋白质上的任何序列。在优选实施方案中，杂合蛋白质可治疗性地用于例如调节免疫应答。

在另一实施方案中，纯化的杂合蛋白质经处理裂解并去除附加于支架蛋白质上的任何序列。例如，当已经制备的杂合蛋白质含有蛋白酶敏感的裂解位点时，可以利用蛋白酶处理杂合蛋白质以裂解蛋白酶特异位点并释放杂合蛋白质。在特定实施方案中，通过用Xa因子处理以裂解杂合蛋白质。

在特别的实施方案中，本发明重组杂合蛋白质包括但无疑并不仅限于那些含有SEQ ID NO：1-13或93-95的Ves v 5肽作为胡蜂毒液抗原的杂合蛋白质。

在特别的实施方案中，本发明重组胡蜂毒液杂合蛋白质包括但无疑并不仅限于那些含有SEQ ID NO：17的Pol a 5蛋白质作为支架蛋白质的杂合蛋白质。

杂合蛋白质可以含有改变的表位或支架序列或含有改变的表位和支架序列，其中序列内的残基被其功能等价氨基酸残基替代，导致保守氨基酸替代。例如，序列内的一个或多个氨基酸残基可以被另一作为其功能等价物的具有相同极性的氨基酸替代，导致沉默改变。序列内的氨基酸的替代物可以选自该氨基酸所属种类的其它成员。例如，非极性(疏水)氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸。极性中性氨基酸包括甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷胺酰胺。带正电(碱性)氨基酸包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。带负电(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。

重组杂合蛋白质也在蛋白质水平上进行操作，例如糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、还原和羧甲基化、用已知的保护基/封闭基团衍生化、蛋白酶裂解、连接至抗体分子或其它细胞配体等等。可以利用已知技术进行多种化学修饰，这包括但并不限于利用溴化氰、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶、V8蛋白酶、NaBH4进行特异性化学裂解；乙酰化、甲酰化、氧化、还原；在衣霉素存在下进行代谢合成，等等。

在特定实施方案中，杂合蛋白质在昆虫细胞表达***中(例如利用杆状病毒表达载体)表达。在优选实施方案中，利用适当的表达***使杂合蛋白质在酵母(例如，不仅仅限于边斯德毕赤酵母(Picchia pastoris))中表达。正如上文所指出，这些表达***应该产生具有“天然的”糖基化和结构的表达多肽，尤其是二级和三级结构的表达多肽。

本发明杂合蛋白质的活性测定

免疫学中有多种可用于评价抗原的免疫调节活性的已知测定方法。例如可以测试杂合蛋白质结合至变应原或支架蛋白质特异性抗体的能力。优选地，这些在诊断测定中所检测的抗体为IgG或IgE类的。在真核表达***且尤其是酵母细胞表达***中产生的杂合蛋白质可能具有与抗体结合的正确结构。在细菌表达***中表达的杂合蛋白质则可能不具正确结构，因此在用于诊断测定试验中进行抗体结合之前需要经过重折叠。

在另一实施方案中，本发明杂合蛋白质可以通过T细胞应答的增殖试验进行测试。为进行这种T细胞应答试验，用于产生该蛋白质的表达***不应该影响蛋白质的免疫调节活性。通常，获取已致敏宿主的淋巴细胞。宿主可以是利用变应原、支架或杂合蛋白质(例如重组产生的胡蜂毒液Ag5)免疫的小鼠。

在一个实施方案中，从对变应原敏感的人中获取外周血白细胞。利用本领域公知的技术，对蛋白质的T淋巴细胞应答可以在体外测量。在一个特定实施方案中，T细胞应答通过测量³H-胸苷的掺入进行检测，所述掺入随着与增殖相关的DNA合成的增加而增加。

细胞增殖也可以利用MTT试验来检测(Mossman，1983，免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)65：55；Niks和Otto，1990，免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)130：140)。本领域已知的任何检测T细胞增殖的方法都可以用于本发明所生产的胡蜂蛋白质。

同样，根据本发明可以进行淋巴因子产生测定。在一个实施方案中，淋巴因子产生的测定利用免疫学或共刺激试验(参见例如Fehlner等人，1991，免疫学杂志(J.Immunol.)146：799)或利用ELISPOT技术(Czerkinsky等人，1988，免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)110：29)实现。备选地，可以通过例如扩增(参见Brenner等人，1989，生物技术(BioTechniques)7：1096)或原位杂交(参见例如Kasaian和Biron，1989，免疫学杂志(J.Immunol.)142：1287)来检测淋巴因子的mRNA。特别有意义的是那些个体，其T细胞产生与IgE同种型转换事件相关的淋巴因子，例如IL-4和IL-5(Purkeson和Isakson，1992，实验医学杂志(J.Exp.Med.)175：973)。

因此，在一个优选的方面，本发明产生的杂合蛋白质可以与获取自变应原敏感个体的外周血淋巴细胞或者更优选地来自外周血淋巴细胞的细胞系用于体外试验，以检测通常与变应性应答相关的淋巴因子(例如IL-4)的分泌。这种测定可以指示出杂合蛋白质的哪一组分或哪些组分是造成变应性疾病的原因。

杂合蛋白质和核酸载体的治疗用途

本发明提供了杂合蛋白质的丰富来源，例如通过重组技术产生。另外，杂合蛋白质也可以通过肽合成产生。

本发明预期杂合蛋白质在治疗性(药物)组合物中的用途，用于变应原特异性变应性疾病的疗法中，以治疗变应原特异性变应性疾病、免疫***相关病症以及调节哺乳动物对免疫原的免疫应答。在特定实施方案中，根据本发明，Ves v 5和Pol a 5的杂合蛋白质或其衍生物或类似物被考虑用于诊断、治疗、医治和免疫应答的调节。

于此使用的短语“治疗有效量”是指足够治疗进行的量，该量优选使个体的免疫***有效抗击免疫原的能力增加至少约30％，更优选至少约50％，最优选至少约90％。随着研究的进一步进行，可获得有关在不同患者中对调节免疫原的免疫***应答适当的剂量水平的信息，并且，在考虑到接受者的治疗情况、年龄和一般健康状况的情况下，普通技术人员能够确定正确的剂量。

治疗方法

本发明治疗组合物(参见下述)可以用于免疫疗法，也称为脱敏疗法。免疫疗法已经被证明在变应性疾病、尤其是昆虫***反应中有效。可以在长时期内将变应原以逐渐增加的剂量经肠胃外施用。当患者敏感的一种或多种变应原已被特异地鉴定并且该疗法针对这些变应原时，这种疗法尤其有效。然而，这种方法具有潜在参与***反应，尤其是过敏反应的缺陷。因此，杂合蛋白质的大量易得性对***反应的免疫治疗非常重要，因为它们可以在不引起***反应的前提下诱导对变应原的有效IgG应答。

正如发明背景中所讨论，当变应原用于免疫疗法时，变应原上B细胞表位的存在会引起令人不快的全身反应。因此，本发明的一个特别优势是能够提供不引起令人不快的全身反应的变应原多肽。

在一个实施方案中，可以皮下注射一种或多种杂合蛋白质以减少对天然分子的T细胞应答，例如这可参见Brine等人的描述(1993，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)90：7608-12)。

在另一实施方案中，可以经鼻内施用一种或多种杂合蛋白质以抑制首次接触者与已致敏个体的变应原特异性应答(参见例如Hoyne等人，1993，实验医学杂志(J.Exp.Med.)178：1783-88)。

施用本发明杂合蛋白质预期可以诱导强的抗变应原的B细胞(抗体)IgG应答，该应答将封闭IgE抗体，并且因此具有治疗作用。

这些结果也可以通过施用允许表达杂合蛋白质的载体，即通过基因治疗而获得。优选的载体(尤其对于体外和体内细胞试验)为病毒载体和非病毒载体，所述病毒载体例如慢病毒、逆转录病毒、疱疹病毒、腺病毒、腺伴随病毒、痘苗病毒、杆状病毒、甲病毒(尤其是辛德比斯病毒和塞姆利基森林病毒病毒)以及其它具有期望的细胞向性的重组病毒。对体内或离体基因治疗而言，优选使用可药用载体，例如复制缺陷型病毒载体。含有本发明核酸的可药用载体可以进一步修饰以实现瞬时或稳定表达。于此使用的术语“可药用载体”包括但并不限于具有将核酸选择性定位和导入细胞的能力的载体或递送媒介。

因此，编码功能或突变蛋白或其多肽结构域片断的基因可以利用病毒载体或通过DNA的直接导入而实现体内、离体或体外导入。在靶组织中的表达可以通过将转基因载体定位至特定细胞实现，例如利用病毒载体或受体配体或者通过利用组织特异性启动子或者同时利用此两种来实现。定向基因递送在PCT出版号WO95/28494中描述。

通常用于体内或离体定向和治疗方法的病毒载体为基于DNA的载体和逆转录病毒载体。构建和使用病毒载体的方法为本领域公知(参见例如Miller和Rosman，生物技术(BioTechniques)，1992，7：980-990)。优选地，病毒载体为复制缺陷型，即它们不能在靶细胞中自主复制。优选地，复制缺陷型病毒为最小病毒，即它仅仅保留对于包装基因组以产生病毒颗粒所必需的基因组序列。

DNA病毒载体包括减毒型或缺陷型DNA病毒，例如但并不限于单纯疱疹病毒(HSV)、***瘤病毒、Epstein Barr病毒(EBV)、腺病毒、腺伴随病毒(AAV)、甲病毒(尤其辛德比斯病毒)等等。优选那些完全或基本完全缺少病毒基因的缺陷型病毒。在导入细胞后缺陷型病毒并没有感染性。应用缺陷型病毒载体使得可以在特定局部区域中向细胞施用，而不用担心载体会感染其它细胞。因此，可以特异性地定向于特定组织。具体载体的例子包括但并不限于缺陷型疱疹病毒1(HSV1)载体(Kaplitt等人，分子细胞神经科学(Molec.Cell.Neurosci.)1991，2：320-330)、缺少糖蛋白L基因的缺陷型疱疹病毒载体或者其它缺陷型疱疹病毒载体(PCT出版号WO94/21807和WO92/05263)；减毒型腺病毒载体，例如Stratford-Perricaudet等人描述的载体(J.Clin.Invest.1992，90：626-630；也参见La Salle等人，科学(Science)1993，259：988-990)；缺陷型腺伴随病毒载体(Samulski等人，病毒学杂志(J.Virol.)1987，61：3096-3101；Samulski等人，病毒学杂志(J.Virol.)1989，63：3822-3828；Lebkowski等人，分子细胞生物学(Mol.Cell.Biol.)1988，8：3988-3996)；以及甲病毒载体，包括基于辛德比斯病毒和塞姆利基森林病毒病毒的载体(美国专利号5,091,309；PCT出版号WO 98/44132；Schlesinger和Dubensky，Curr.Opin.Biotechnol.1999，5：434-9；Zaks等人，自然医学(Nat.Med.)1999，7：823-7)。

有多个公司商业生产病毒载体，包括但并不限于Avigen，Inc.(Alameda，CA；AAV载体)、Cell Genesys(Foster City，CA；逆转录病毒、腺病毒、AAV和慢病毒载体)、Clontech(逆转录病毒和杆状病毒载体)、Genovo，Inc.(Sharon Hill，PA；腺病毒和AAV载体)、Genvec(法国；腺病毒载体)、IntroGene(Leiden，荷兰；腺病毒载体)、MolecularMedicine(逆转录病毒、腺病毒、AAV和疱疹病毒载体)、Norgen(腺病毒载体)、Oxford BioMedica(牛津、英国；慢病毒载体)和Transgene(Strasbourg，法国；腺病毒、痘苗病毒、逆转录病毒和慢病毒载体)。

在另一实施方案中，载体以裸DNA形式、通过脂质转染或者利用其它转染促进剂(肽、多聚体等等)体内导入。合成的阳离子脂可以用于制备脂质体，以用于体内转染编码标记的基因(Felgner等人，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1987，84：7413-7417；Felgner和Ringold，科学(Science)1989，337：387-388；参见Mackey等人，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1988，85：8027-8031；Ulmer等人，科学(Science)1993，259：1745-1748)。核酸转移使用的有用脂类化合物和组合物在PCT专利出版号WO 95/18863和WO96/17823以及美国专利号5,459,127中描述。为了进行定向，脂类可以化学偶联至其它分子(参见Mackey等人，前述)。导向肽(例如激素或神经递质)和蛋白质(例如抗体)或非肽分子可以被化学偶联至脂质体上。

其它分子也可以用于促进核酸的体内转染，例如阳离子寡肽(例如PCT专利出版号WO95/21931)、来自DNA结合蛋白质的肽(例如PCT专利出版号WO96/25508)或者阳离子多聚体(例如PCT专利出版号WO95/21931)。

以裸DNA质粒形式将载体导入体内也是可能的。用于基因疗法的裸DNA载体可以通过本领域公知的方法导入所期望的宿主细胞，所述方法例如电穿孔、微注射、细胞融合、DEAE葡聚糖、磷酸钙沉淀、基因枪的使用、DNA载体转移体的使用(参见例如Wu等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)1992，267：963-967；Wu和Wu，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)1988，263：14621-14624；加拿大专利申请号2,012,311；Williams等人，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1991，88：2726-2730)。也可以使用受体介导的DNA递送方法(Curiel等人，Hnm.Gene Ther.1992，3：147-154；Wu和Wu，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)1987，262：4429-4432)。美国专利号5,580,859和5,589,466公开了在哺乳动物中不使用转染促进剂而递送外源DNA序列的方法。最近，已经描述一种相对低电压、高效率的DNA体内转移技术，称为电转移(Mir等人，C.P.Acad Sci.1988，321：893；PCT出版号WO 99/01157、WO 99/01158和WO 99/01175)。

免疫***相关疾病的治疗

正如前述，本发明涉及杂合蛋白质，其可以用于治疗免疫***相关疾病或病症，或者用于调节哺乳动物对免疫原的免疫应答。特别地，本申请者已发现，本发明杂合蛋白质可以在不引起***反应的前提下引起免疫应答从而用于调节个体对多种免疫原的免疫应答。在一个特定的实施方案中，本发明杂合蛋白质调节个体免疫***以使其增加抗击病原和病毒的能力，上述病原和病毒包括但并不限于HIV、单纯疱疹病毒或***瘤病毒。该方法包括给个体施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含由含有本发明DNA分子的分离的核酸分子所编码的多肽。

此外，已经发现，本发明杂合蛋白质、核酸和载体也可以应用于治疗免疫***相关疾病或病症，或者与其相关的症状。于此使用的术语“免疫***相关疾病或病症”是指可以唤起个体的免疫应答或者影响免疫***对免疫原反应的能力的疾病或病症。可以利用本发明药剂和药物组合物治疗的免疫***相关疾病或病症的例子包括但并不限于病原性疾病或病症；病毒性疾病或病症例如HIV、单纯疱疹病毒或***瘤病毒；或者自身免疫疾病例如关节炎或狼疮。

而且，本发明涉及治疗免疫***相关疾病或病症或者其相关症状的方法，包括为治疗免疫***相关疾病或病症给个体施用治疗有效量的药物组合物。所以，例如，如果免疫***相关疾病或病症涉及HIV，则显著的临床变化将涉及到例如，在施用了本发明药物组合物的个体中与未施用前相比白细胞数量增加。监测个体的临床显著变化的其它这种例子对本领域普通技术人员而言十分明显。此外，随着研究的进一步进行，可以获得用于治疗不同患者的免疫***相关疾病或病症或者相关症状的适当剂量水平的信息，并且，在考虑到接受者的治疗情况、年龄和一般健康状况的情况下，普通技术人员可以确定正确的剂量。可药用组合物的例子在下文中描述。

可药用组合物

本发明的体内治疗组合物也可以含有适当的可药用载体、赋形剂、稀释剂和佐剂。于此使用的术语“可药用”优选指获得政府管理机构(特别是联邦政府或州政府管理机构)批准或者已在美国药典或其它公认的药典中列出可以用于动物且更尤其是用于人类。合适的药用载体描述在E.W.Martin的“Remington制药科学”(Remington’s Pharmaceutical Sciences)中。

这些可药用载体可以是无菌的液体，例如水和油，所述油包括石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等等。当药物组合物经静脉内施用时，水是优选的载体。盐水溶液和葡萄糖水溶液以及甘油水溶液也可以作为液体载体使用，尤其是用于注射用溶液中。合适的药用赋形剂包括甘露醇、人血清白蛋白(HSA)、淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、水稻、面粉、白垩、硅胶、碳酸镁、硬脂酸镁、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油、滑石、氯化钠、干燥的脱脂乳、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等等。这些组合物可以为溶液、悬液、片剂、药丸、胶囊、粉剂、缓释制剂等等形式。

这些组合物可以含有诊断或治疗有效量的活性化合物连同适量的载体，以形成可以给患者适当施用的形式。尽管静脉注射是非常有效的给药方式，其它方式例如注射、或者口服、经鼻或肠胃外给药也可以使用。

实施例1 Ag5杂合体cDNA的构建

用于实施例的引物1-24在表1中列出。

Ves v 5 EA和KR构建体通过分别利用引物1(SEQ ID NO：31)和3(SEQ ID NO：33)或者2(SEQ ID NO：32)和3(SEQ ID NO：33)进行PCR扩增Ves v 5 cDNA模板(Lu等人，1993，免疫学杂志(J.Immunol.)150：2823)制备。Pol a 5 EA和KR构建体通过分别利用引物4(SEQ IDNO：34)和6(SEQ ID NO：36)或者5(SEQ ID NO：35)和6(SEQ ID NO：36)进行PCR扩增Pol a cDNA模板(Lu等人，1993，免疫学杂志(J.Immunol.)150：2823)制备。每一cDNA构建体都在5’端含有EcoRI或XhoI位点而在3’端含有XbaI位点。cDNA以EcoRI-XbaI或XhoI-XbaI片断的形式克隆至质粒载体pPICZαA(Invitrogen公司，San Diego，CA)。阳性克隆利用PCR鉴定。pPICZαA中的重组Ag 5和杂合体cDNA序列通过***片断的DNA测序确证。其它构建体按照King等人的描述制备(2001，免疫学杂志(J.Immunol.)166：6057-6065)。

(i)PV1-46。PV1-46杂合体通过在肽序列EH处将Ves v 5的氨基端序列和Pol a 5的羧基端序列结合而构建，肽序列EH分别存在于各蛋白质的氨基酸47-48位和49-50位。在Ves v 5中编码EH肽的核苷酸序列为GAG CAC，其对应于Bsi HKAI限制酶切割位点。

为方便PV1-46杂合体的构建，按照下述方法，利用PCR重叠延伸方法(Ho等，1989，Gene 77：51)将49-50位氨基酸处编码Pol a 5EH肽的天然DNA序列(GAG CAT)突变成Bsi HKAI位点。第一步由两个单独的PCR组成。一个PCR中，利用引物4(SEQ ID NO：34)和8(SEQID NO：38)来扩增编码Pol a 5第1-53位残基的DNA，其中EH编码序列被转换为Bsi HKAI位点。在第二个PCR中，利用引物7(SEQ ID NO：37)和6(SEQ ID NO：36)来扩增编码Pol a 5第47-205位残基的DNA，其中EH编码序列被转换为Bsi HKAI位点。两个PCR都利用1-40ng Pol acDNA作为模板和各50pmole的有义和反义引物在含有0.2mM dNTP和5单位Taq聚合酶的100μl PCR缓冲液中进行。循环条件为95℃变性0.5分钟、55℃退火0.5分钟和72℃延伸2分钟，35个循环。这两个PCR的产物含有重叠区域。在重叠延伸方法的第二步中，第三个PCR利用头两个反应的纯化产物的混和物为模板并利用侧翼引物4(SEQ ID NO：34)和6(SEQ ID NO：36)进行，其产生具有将EH编码序列转变为Bsi HKAI位点的全长Pol a 5。

随后杂合体PV1-46编码cDNA通过将来自Ves v 5和修饰的Pol a 5cDNA的适宜Bsi HKAI片断连接至pPICZαA中而制备，方式正如以上针对Ag 5编码cDNA的描述。

(ii)PV109-155。PV109-155杂合体通过在肽序列KY处将Ves v 5的氨基端序列和Pol a 5的羧基端序列结合而构建，肽序列KY分别对应于各蛋白质的氨基酸106-107位和109-110位。两个Ag5s中KY肽由核苷酸序列AAA TAT所编码。为构建PV109-155，将适当的Ag5或杂合体cDNA的KY编码序列突变为编码肽序列KF的ApoI限制酶切割位点(AAA TTT)。这些单碱基突变利用实施例1中描述的PCR重叠延伸方法(Ho等人，1989，基因(Gene)77：51)完成。在一组反应中，PV1-155cDNA的KY编码核苷酸序列通过利用诱变引物9(SEQ ID NO：39)和10(SEQ ID NO：40)实施PCR重叠方法来转变。在第二组反应中，Pola 5cDNA的KY编码核苷酸序列通过利用诱变引物11(SEQ ID NO：41)和12(SEQ ID NO：42)实施PCR重叠方法来转变。随后杂合体PV109-155编码cDNA通过用ApoI消化转变的Pol a 5和转变的PV1-155编码cDNA并将所得到的合适片断连接至pPICZαA中而制备。

(iii)PV1-155和PV156-204。Ves v 5和Pol a 5具有共同的EaeI限制性位点，其编码154-156位氨基酸残基。杂合体PV156-204和PV1-155编码cDNA通过将它们亲本cDNA的适当EaeI片断连接至pPICZαA中而制备。

(iv)PV1-8、PV1-18和PV195-204。这些杂合体利用Pol a 5的cDNA作为模板进行PCR制备。PV1-8利用引物2(SEQ ID NO：32)和6(SEQ ID NO：36)制备。PV1-18利用引物6(SEQ ID NO：36)和13(SEQ ID NO：43)制备。PV195-204利用引物4(SEQ ID NO：34)和14(SEQ ID NO：44)制备。将杂合体克隆至pPICZαA。

(v)PV1-24、PV1-32、PV1-39、PV1-50、PV1-57和PV1-70。这些杂合体利用实施例1中给出的PCR重叠延伸方法(Ho等人，1989，基因(Gene)77：51)构建。对PV1-24而言，第一轮PCR利用引物1(SEQ ID NO：31)和15(SEQ ID NO：45)及Ves v 5cDNA作为模板以及引物6(SEQ ID NO：36)和16(SEQ ID NO：46)及Pol a 5cDNA作为模板进行。随后将这两个重叠的PCR产物纯化并在第三轮PCR中用作模板和侧翼引物1(SEQ ID NO：31)和6(SEQ ID NO：36)一起扩增产生PV1-24。对PV1-32而言，第一轮PCR利用引物1(SEQ ID NO：31)和18(SEQ ID NO：48)及Ves v 5cDNA作为模板以及引物6(SEQ ID NO：36)和17(SEQ ID NO：47)及Pol a 5cDNA作为模板进行。随后将这两个重叠的PCR产物纯化并在第三轮PCR中用作模板并利用侧翼引物1(SEQ IDNO：31)和6(SEQ ID NO：36)产生PV1-24。对PV1-39而言，第一轮PCR利用引物2(SEQ ID NO：32)和19(SEQ ID NO：49)及Ves v 5cDNA作为模板以及引物6(SEQ ID NO：36)和20(SEQ ID NO：50)及Pol a 5cDNA作为模板进行。随后将这两个重叠的PCR产物纯化并在第三轮PCR中用作模板并利用侧翼引物2(SEQ ID NO：32)和6(SEQ ID NO：36)产生PV1-39。对PV1-50而言，第一轮PCR利用引物2(SEQ ID NO：32)和28(SEQ ID NO：58)及Ves v 5cDNA作为模板以及引物6(SEQ IDNO：36)和27(SEQ ID NO：57)及Pol a 5cDNA作为模板进行。随后将这两个重叠的PCR产物纯化并在第三轮PCR中用作模板并利用侧翼引物2(SEQ ID NO：32)和6(SEQ ID NO：36)产生PV1-50。对PV1-57而言，第一轮PCR利用引物2(SEQ ID NO：32)和30(SEQ ID NO：60)及Ves v 5cDNA作为模板以及引物6(SEQ ID NO：36)和29(SEQ IDNO：59)及Pol a 5cDNA作为模板进行。随后将这两个重叠的PCR产物纯化并在第三轮PCR中用作模板并利用侧翼引物2(SEQ ID NO：32)和6(SEQ ID NO：36)产生PV1-57。对PV1-76而言，第一轮PCR利用引物2(SEQ ID NO：32)和32(SEQ ID NO：62)及Ves v 5cDNA作为模板以及引物6(SEQ ID NO：36)和31(SEQ ID NO：61)及Pol a 5cDNA作为模板进行。随后将这两个重叠的PCR产物纯化并在第三轮PCR中用作模板并利用侧翼引物2(SEQ ID NO：32)和6(SEQ ID NO：36)产生PV1-76。将杂合体cDNA克隆至pPICZαA。

(vi)PV22-32、PV115-125、PV142-150和PV176-182。这些构建体为杂合Ag 5s，其中短Ves v 5多肽代替完整全长Pol a 5上的同源序列。

利用实施例1中给出的PCR重叠延伸方法(Ho等人，1989，基因(Gene)77：51)利用Ves v 5序列替代Pol a 5序列。第一组两个PCR中所用的模板DNA为Lu等人所述的Pol a cDNA(1993，免疫学杂志(J.Immunol.)150：2823)。在PCR延伸方案中使用的上游和下游Pol a引物分别为引物4(SEQ ID NO：22)和6(SEQ ID NO：24)。最终产物克隆至pPICZαA。

编码Ves v 5***序列的重叠引物对如下：(a)PV22-32：引物17(SEQ ID NO：47)和18(SEQ ID NO：48)；(b)PV115-125：引物21(SEQ ID NO：51)和22(SEQ ID NO：52)；(c)PV142-150：引物23(SEQ ID NO：53)和24(SEQ ID NO：54)以及(d)PV176-182：引物25(SEQ ID NO：55)和26(SEQ ID NO：56)。PCR反应和循环条件如PV1-46中所描述的。

表1.制备Ves v和Pol a 5s以及它们的杂合体的引物

引物序列(5’→3’)

1 CGTGAATTCAACAATTATTGTAAAATAAAA(SEQ ID NO：31)

2 CGTCTCGAGAAAAGAAACAATTATTGTAAAATAAAA(SEQ ID NO：32)

3 CGTTCTAGATTACTTTGTTTGATAAAGTTC(SEQ ID NO：33)

4 CGTGAATTCGTTGATTATTGTAAAATAAAA(SEQ ID NO：34)

5 CGTCTCGAGAAAAGAGTTGATTATTGTAAAATAAAA(SEQ ID NO：35)

6 CGTTCTAGATTATTTTTTTGTATAAGGTAG(SEQ ID NO：36)

7 GTAAGCGAGCACAATCGGTTT(SEQ ID NO：37)

8 AAACCGATTGTGCTCGCTTAC(SEQ ID NO：38)

9 GTAGCAAAATTTCAGGTTGGA(SEQ ID NO：39)

10 TCCAACCTGAAATTTTGCTAC(SEQ ID NO：40)

11 ACCGCAAAATTTCCAGTTGGA(SEQ ID NO：41)

12 TCCAACTGGAAATTTTGCGGT(SEQ ID NO：42)

13 CGTGAATTCAACAATTATTGTAAAATAAAATGTTTGAAAGGAGGTGTCCATACTGCCT

GCAAATATGGAGAA(SEQ ID NO：43)

14 CGTTCTAGATTACTTTGTTTGATAAAGTTCCTCATTCTTAAAATTTCCAGCTGG(SEQ ID

NO：44)

15 GGCACAATTCTTGCTCGGTTTAAGACTTCCATA(SEQ ID NO：45)

16 TATGGAAGTCTTAAACCGAGCAAGAATTGTGCC(SEQ ID NO：46)

17 CTTAAACCGAATTGCGGTAATAAGGTAGTGGTATCGGTTGGTCCA(SEQ ID NO：47)

18 TGGACCAACCGATACCACTACCTTATTACCGCAATTCGGTTTAAG(SEQ ID NO：48)

19 TATGGTCTAACGAAACAAGAGAAAAAATTAATCGTA(SEQ ID NO：49)

20 TACGATTAATTTTTTCTCTTGTTTCGTTAGACCATA(SEQ ID NO：50)

21 TTAACAGGTAGCACGGCTGCTAAATACGATGATGTAGTCAGTCTA(SEQ ID NO：51)

22 ATCATCGTATTTAGCAGCCGTGCTACCTGTTAACGCTATATTTTG(SEQ ID NO：52)

23 CCTAAGAAAAAGTTTTCGGGAAACGACTTTGCTAAAATTGGC(SEQ ID NO：53)

24 GTCGTTTCCCGAAAACTTTTTCTTAGGATTAAAATCTTTCAC(SEQ ID NO：54)

25 ATTCAAGAGAAATGGCACAAACATTACCTCATA(SEQ ID NO：55)

26 TTTGTGCCATTTCTCTTGAATATATTTTAGAGA(SEQ ID NO：56)

27 GAGCACAATGACTTTAGACAAAAA(SEQ ID NO：57)

28 TTTTTGTCTAAAGTCATTGTGCTC(SEQ ID NO：58)

29 AAAATTGCACGAGGGTTGGAAACA(SEQ ID NO：59)

30 TGTTTCCAACCCTCGTGCAATTTT(SEQ ID NO：60)

31 AATATGAAAAATTTGGTATGGAAC(SEQ ID NO：61)

32 GTTCCATACCAAATTTTTCATATT(SEQ ID NO：62)

将EA-或KR-系列的Ag5或杂合体编码cDNA分别利用限制性酶EcoRI或XhoI和XbaI消化，然后***相同切割的pPICZαA载体(Invitrogen，San Diego，CA)。重组质粒在TOP10F’细胞中扩增。所有重组质粒的Ag 5编码序列经DNA测序确认。除在Ves v 5中观察到两个单核苷酸差异外，Ag 5编码序列与Genbank中的序列数据(Ves v Ag 5登录号M98858以及Pol a Ag 5登录号M98857)相对应。这些改变发生在579位和587位，并分别导致G变为A的沉默突变和T变为A的替代，上述T变为A的替代导致在氨基酸残基196位M至K的密码子改变。这两个核苷酸改变可能为昆虫的多态性而不是随机突变，因为使用的Ag 5cDNA是以与以前相同的方法(Lu等人，1993，免疫学杂志(J.Immunol.)150：2283)制备的。

实施例2 Ag 5s以及杂合体的表达与纯化

利用限制酶Sac I切割将重组质粒(1-2μg)线性化，并且随后用于电穿孔法转化感受态巴斯德毕赤酵母KM71酵母细胞(约8×10⁹细胞存在于40μl 1M山梨醇中)。用1M山梨醇将转化的细胞稀释至2ml并使其在不进行振荡的情况30℃复苏1小时，接着在200rpm振荡的条件下再培养1小时。然后将50μl或100μl小份培养物涂布于100mm YPDS培养基(含1.5mg/ml Zeocin)平板上以筛选多拷贝整合体(Invitrogen手册)。经3-4天孵育后挑取所选择的克隆并通过小量表达筛选来鉴定产生杂合蛋白质的菌落。小量表达使用与下文用于大量分离时相同的方法在50ml塑料管中进行，但其规模为大量分离时的1/30，培养液通过分泌蛋白质的SDS胶电泳来筛选。

所选克隆的酵母细胞在2个500ml瓶中30℃、250rpm定轨振荡生长至A_600nm为10-12，其中每一个瓶中含有150ml pH 6.0磷酸盐缓冲液(其含有酵母氮源、生物素、甘油和组氨酸)。然后将细胞通过离心收集并重悬于100ml含有甲醇而非甘油的相同缓冲的培养基中。继续在30℃下250rpm振荡孵育4-6天并每天加入1ml 50％的甲醇。

利用以前报道的方法(Monsalve等人，1999，蛋白质表达纯化(ProteinExpr.Purif.)16：410)通过在SE-纤维素(Sigma)上离子交换层析将Ag5s或它们的杂合体从培养液浓缩物中纯化出来。合并大约70％的主峰，利用C18硅胶柱反向层析脱盐并冻干。将重组Ag 5s或杂合体在0.01M醋酸铵缓冲液(pH 4.6)中溶解并于4℃贮存。重组蛋白质浓度利用280nm的光吸收确定，其中使用根据酪氨酸和色氨酸含量计算的摩尔消光。Ag 5s或杂合体的产量一般为每100ml 4天培养物中1-7mg。

重组Ag 5s或杂合体通过SDS胶电泳、N-末端测序分析和MALDI质谱鉴定。存在于0.01M pH4.6醋酸缓冲液中的0.2mg/ml重组蛋白质的CD光谱测定利用1mm光程长度的比色池在AVIV 62DS光谱仪上进行。

实施例3 重组胡蜂Ag5s以及杂合体的物理化学特征

在酵母菌株KM71中表达的Ag5s以及杂合体蛋白质含有分泌信号肽。信号肽通过具有KR或KREAEAEF序列的肽连接至表达蛋白质。这两种类型的蛋白质分别命名为KR-和EA-系列。在从酵母细胞中分泌后，信号肽在KR序列(Kex 2蛋白酶位点)或两个EA序列(Ste 13二肽基氨肽酶位点)处被从分泌蛋白质上切除(Invitrogen手册)。

重组蛋白质从培养液中的分离利用SE-纤维素上离子交换层析完成，然后在C18-硅胶柱上反向层析，并且利用SDS胶电泳表征(图6)。几个杂合体表现为紧靠的双联体(doublet)，具有与天然Ves v 5相同的迁移率。正如杂合体PV1-155和PV156-204的N-末端测序和质谱数据所指示的，这些双联体与它们N-末端的不同加工程度相一致(表2)。

重组Ag 5s以及杂合体显示出与天然Ag 5s几乎相同的CD光谱(图7)。天然Ves v 5和EA-Ves v 5以及EA-PV1-46、EA-PV1-155和EA-PV156-204的光谱在约208nm存在最小值，并且在225nm出现肩(图7)。这些特性是有序特性的标志(Yang等人，1986，酶学方法(Methodsin Enzymology)130：208)。在其它列于表II的杂合体中也观察到相似CD光谱(数据未显示)。来源于细菌的重组Ves v 5的CD光谱的最小值出现在约200nm处，这暗示其具有无序结构(Monsalve等人，1999，蛋白质表达纯化(Protein Expr.Purif.)16：410)。

与天然Ag 5s相同，酵母来源的重组Ag 5s以及杂合体在酸或碱性缓冲液中可自由溶解。这与细菌来源的重组胡蜂Ag 5s不同，后者仅在酸性缓冲液中有自由溶解。

Ag 5s以及杂合体的质谱分析结果在表2中给出。EA-系列的Ag 5s在Kex2位点被有效裂解，而在两个Ste 13位点显示可变的裂解。因此，重组EA-系列蛋白质具有EAEAEF和EAEF的氨基末端序列，其中EF序列由用于将cDNA***载体的EcoRI位点编码。这些数据与以前报道的结果(Monsalve等人，1999，蛋白质表达纯化(Protein Expr.Purif.)16：410)相似。

重组ves v 5的EAEAEF序列已知可作为强的半抗原行使功能(Monsalve等人，1999，蛋白质表达纯化(Protein Expr.Purif.)16：410)。因此，Ag 5s也以KR-系列杂合体形式表达。KR-系列蛋白质在Kex 2位点的裂解产生具有天然蛋白质的N-末端序列的重组蛋白质。KR-系列蛋白质Ves v 5、Pol a 5以及杂合体KR-PV1-24和KR-PV1-46的质谱分析显示，它们在Kex2位点和Kex2位点上游的2、7和9个残基处以不同的效率被裂解(表2)。KR-系列重组蛋白质的产量通常比EA-系列蛋白质的要稍微低一些。

表2重组胡蜂Ag 5s以及杂合体的质谱数据

质量单位

蛋白质推测的序列丰度¹ 计算值实测值

EA-Ves v 5 EAEAEF-Vv 80％ 23,954 23,947

EAEF-Vv 20％ 23,754 23,752

FA-Poi a 5 EAEAEF-Pa 100％ 23,611 23,613

EA-PV1-18 EAEF-PV 43％ 23,497 23,506

EAEAEF-PV 36％ 23,697 23,698

REAEAEF-PV 21％ 23,871 23,827

EA-PV1-18 EAEAEF-PV 100％ 23,697 23,701

EA-PV1-32 EF-PV 60％ 22,964 22,930

EAEF-PV 40％ 23,151 23,134

EA-PV1-46 EAEF-PV 53％ 23,300 23,327

EAEAEF-PV 47％ 23,500 23,515

EA-PV1-46 EF-PV 10％ 23,099 23,109

EAEF-PV 50％ 23,300 23,327

EAEAEF-PV 40％ 23,500 23,515

EA-PV1-155 EF-PV 53％ 23,375 23,334

EAEF-PV 47％ 23,575 23,533

EA-PV22-32 EAEF-PV 55％ 23,135 23,203

EAEAEF-PV 45％ 23,336 23,371

EA-PV115-125 EAEAEF-PV 100％ 23,873 23,887

EA-PV142-150 EAEAEF-PV 100％ 23,592 23,585

EA-PV156-204 EAEF-PV 59％ 23,776 23,775

EAEAEF-PV 41％ 23,932 23,939

EA-PV195-204 EAEAEF-PV 70％ 23,700 23,688

REAEAEF-PV 30％ 23,874 23,844

KR-Ves v 5 Vv5 90％ 23,277 23,274

EEGVSLEKR-Vv 10％ 24,305 24,298

KR-Ves v 5 Vv 95％ 23,277 23,284

EEGVSLEKR-Vv 5％ 24,305 24,300

KR-Pol a 5 Pa 20％ 22,934 22,951

EEGVSLEKR-Pa 80％ 23,962 23,992

KR-Pol a 5 Pa 10％ 22,934 22,935

EEGVSLEKR-Pa 90％ 23,962 23,962

KR-PV1-24 PV 85％ 22,903 22,897

EEGVSLEKR-PV 15％ 23,931 23,933

KR-PV146 PV 70％ 22,823 22,834

KR-PV 30％ 23,107 23,157

KR-PV1-46 PV 60％ 22,823 22,834

KR-PV 40％ 23,107 23,157

1蛋白质丰度由质谱中样品的峰高估计。对于EA系列的EA-Ves v 5、EA-Pola 5、EA-PV3PV156-204和EA-VP3PV1-155样品的N-末端序列，它们的推定序列经Edman降解确认。

对于EA-PV1-18，EA-PV1-46，KR-Ves v 5，KR-Pol a和KR-PV1-46各显示了两个制品的结果。

氨基末端肽以SEQ lD NO：命名如下：EAEAEF[SEQ ID NO：89]；EAEF[SEQ IDNO：90]；REAEAEF[SEQ ID NO：91]和EEGVSLEKR[SEQ ID NO：92]。

实施例4 ELISA研究

ELISA在96孔板中进行，所述96孔板板孔用存在于0.05M pH 8的Tris-HCl缓冲液中的4μg/ml Ag 5包被。结合的Ig G1利用2μg/ml生物素化的山羊抗小鼠IgG(γ1特异性)其后再利用2μg/ml亲合素-过氧化物酶缀合物检测(King等人，1995，免疫学杂志(J.Immunol)154：577)。血清样品的抗体浓度通过它们的ELISA数据与Ves v 5特异性抗体的免疫亲合纯化样品的ELISA数据相比较而确定。

实施例5 杂合体的Ves v 5特异性B细胞表位

天然Ves v 5特异性小鼠多克隆抗体利用在Ves v 5特异性免疫吸附剂上亲合层析从BALB/c血清中分离，并且通过过Pol a 5特异性免疫吸附剂将Pol a 5交叉反应抗体去除。免疫吸附剂利用CNBr活化的Sepharose 2B(Pharmacia)制备。小鼠Ves v 5特异性单克隆抗体按照King等人，1987，分子免疫学(Mol.Immunol)24：857中所述方法获取。

Ves v 5特异性B细胞表位通过杂合体对小鼠Ves v 5特异性抗体与固相Ves v 5的结合的抑制来检测。将EA-和KR-Ves v 5作为固相抗原进行测试，得到类似结果。共测试5个小鼠抗血清样品：3个来自BALB/c株系以及1个来自ASW/sn株系、1个来自于P/J株系。利用一个BALB/c血清样品得到的结果显示在图8A中。当用50或500μg/ml抑制剂的最高浓度测试时，两个N-端杂合体EA-PV1-46和EA-1-155显示最大抑制作用，达100％，与EA-或KR-Ves v 5的抑制作用一样。另外两个N-端杂合体KR-PV1-24和EA-PV1-32具有约60％的最大抑制作用，而最短的N-端杂合体EA-PV1-18的最大抑制作用为约20％。C-端杂合体EA-PV156-204的最大抑制作用为约15％。利用来自ASW/sn(图8B)和P/J(图8C)小鼠的抗血清进行抑制ELISA试验得到相似结果。

Ves v 5特异性B细胞表位还利用来自六个小黄蜂敏感患者的血清通过抑制分析进行了检测。从三个患者得出的数据显示在图9A-C。该结果与利用小鼠IgG获得的结果相似。

利用小鼠和人抗血清的ELISA抑制研究的结果显示Ves v 5的N-端区域具有免疫优势。

由于用于BALB/c小鼠抑制研究的Ves v 5特异性抗体样品已除去Pola 5交叉反应抗体并且没有检测到Pol a 5的抑制作用(图8A)，所以，所观察到的杂合体抑制作用并非由于分子的Pol a 5部分的交叉反应表位引起。与Ves v 5相比达到半最大抑制作用所需要的杂合体高浓度并不反映出杂合体的表位缺少Ves v 5的天然结构，因为缺少天然结构的来自细菌的重组Ves v5并不显示任何抑制作用(数据未显示)。

Ves v 5和杂合体在抑制活性上的差异可能与它们的表位密度有关。已知表位密度强烈地影响多价抗原和二价抗体的亲合常数(Hornick和Karush，1972，免疫化学(Immunochemistry)9：325；Crothers和Metzger，1972，免疫化学(Immunochemistry)9：341)。

图8和图9中的数据揭示Ves v 5的氨基端部分含有Ves v 5的免疫显性B细胞表位。这一发现通过利用一组17个Ves v 5特异性单克隆抗体进行测试而确认(King等人，1987，分子免疫学(Mol.Immunol)24：857)。这些单克隆抗体是天然Ves v 5和来自酵母的重组蛋白质的特异性抗体，但是它们并不结合来自细菌的重组Ves v 5的变性形式(数据未显示)。ELISA结果显示一种单克隆抗体以相似的亲合性和最大的结合与EA-Ves v5和EA-PV1-46结合，并且其不与其它的任何N-或C-端杂合体结合(图10A)。另外4种单克隆抗体与EA-PV1-46有大大减少的最大结合，但它们不与任何更短的N-端杂合体结合；其中一个抗体的数据显示在图10B中。最后，一种单克隆抗体显示出与EA-PV1-32和EA-PV1-46具有大大减弱的结合以及与EA-PV1-18和EA-PV1-24具有中等程度的结合(图10C)。这些数据显示测试的17种单克隆抗体中有6种对Vesv 5的N-端区域有特异性。

实施例6 对杂合体的免疫应答

2周一次向每组3或4只雌性BALB/c小鼠腹膜内注射存在于0.2ml磷酸缓冲盐水中的2μg免疫原和1μg明矾。Ag 5或杂合体特异性血清在第5周或之后收集。第5、7和9周收集的血清显示相似的抗体水平。

用杂合体免疫的小鼠产生杂合体(Pol a 5和Ves v 5)特异的抗体。血清样品的抗体水平在用Pol a 5吸附之前和之后测量以确定它们对Ves v 5的特异性。这些数据总结在表3A。利用天然、EA-或KR-Ves v 5免疫的小鼠具有几乎相同的抗体应答，并且仅KR-Ves v 5的抗体应答在表3A中给出。EA-PV1-46在A组小鼠中产生的抗体应答比KR-PV1-46在B组小鼠中产生的抗体应答要高一些。此差异可能是由于所用小鼠组的不同造成的。EA-PV1-18用于两组实验，而其在A组小鼠中产生的抗体应答高于其在B组小鼠中产生的抗体应答。

比较Pol a 5吸附前后表3中N-端杂合体特异性血清样品的抗体水平，结果显示，当在固相Ves v 5上测试时，抗体的30-80％对Ves v 5特异，并且当在固相杂合体上测试时这些值较小。在固相Ves v 5上检测到的Ves v 5特异性抗体的含量高于在固相杂合体上检测到的含量，这揭示大部分杂合体特异性抗体识别杂合体中Ves v 5和Pol a 5的重叠区域。表3A中A组的数据显示在3个N-端杂合体中，PV1-155具有与Ves v 5相同的免疫原性，PV1-46的免疫原性是Ves v 5的一半，而PV1-18的免疫原性是Ves v 5的1/9。B组中的数据显示PV1-46和1-32比PV1-24和1-18有更强的免疫原性。两组数据揭示，与2个较短的N端杂合体PV1-24和1-18相比，较长的N-端杂合体PV1-46和1-32刺激产生更高含量的Ves v 5特异性抗体和更低含量的Pol a 5特异性抗体。

表3A

对胡蜂抗原5s以及杂合体的小鼠抗体应答

固相上通过ELISA测得的血清中

特异IgG量(mg/ml)^2，3

免疫原

EA-Pol a 5

组 EAVesv5 杂合体

A KR-Ves v 5 8.9(8.5) 0.6 -

KR-Pol a 5 2.8(1.0) 7.0 -

EA-PV1-155 12.0 0.7 -

EA-PV1-46 4.2(3.5) 1.9 7.6(5.6)

EA-PV1-18 1.0(0.8) 6.9 6.9(0.7)

EA-PV156-204 1.6(0.6) 10.0 2.6(0.3)

EA-PV195-204 1.3(0.4) 14.0 10.0(0.3)

B KR-Vesv5 15.0(14.0) 0.2 -

KR-PV1-46 0.6(0.5) 1.0 2.7(3.0)

EA-PV1-32 0.9(0.7) 4.3 8.0(3.2)

KR-PV1-24 0.4(0.3) 4.2 6.5(0.9)

EA-PV1-18 0.4(0.3) 4.5 5.3(0.7)

1.经3次两周一次的腹膜内免疫原注射后在第7周收集血清。A组和B组分别研究。

2.抗体浓度由使30分钟内吸光度变化为1.0所需的血清浓度倒数来估计。在所用条件下，这一变化相应于纯化的Ves v 5特异性抗体的0.1μg/ml溶液。所估计的抗体浓度在重复测量时变化约40％。

3.括号中的值为利用0.2mg/ml EA-Pol a 5对1/500稀释的血清进行吸附后获得的值。

表3A中的结果显示Ves v 5的B细胞表位在其N-端区域。制备另外的Ves v 5和Pol a 5的杂合体并按上述方法检验小鼠中的免疫原性，以勾绘显性B细胞表位区域的N和C-端界线。结果在表3B中给出，其列出了对Ves v、Pol a或杂合体特异的IgG1含量，以及在利用Pa吸附后残余的特异性IgG1的百分比。

具有最低Ves v含量的杂合体PV1-8并不引起Ves v特异性抗体应答。除PV22-32外，所有其它杂合体均诱导0.4-4.5mg/ml的Ves v特异性Ab。Ves v含量＜PV1-32的杂合体对Ves v应答具中等特异性，因为它们的Ves v特异性抗体的34-81％和它们的杂合体特异性抗体的15-27％没有被Pol a 5吸附。Ves v含量＞PV1-39的杂合体较为特异，因为它们的Ves v 5特异性抗体的66-96％和它们的杂合体特异性抗体的91-100％没有被Pol a 5吸附。这些结果一起说明，此显性表位区域的C-端界线在32-39位残基之间。

Ves v含量＜PV1-32的杂合体显示2-4mg/ml的Pol a特异性抗体，而Ves v含量＞PV1-39的杂合体显示0.04-1.34mg/ml的Pol a特异性抗体。随着杂合体的Ves v含量从PV1-32向1-76升高，Pol a特异性应答出现进行性下降。这些结果一起说明显性表位的C-端界线延伸超过第39位残基，正如对杂合体的Ves v特异性应答所揭示的。

与PV1-32的应答相比，PV1-8和22-32缺少Ves v特异性抗体应答，这揭示显性表位区域的N-端界线在9-21位残基之间。

表3B对胡蜂抗原5s以及杂合体的小鼠抗体应答

Ves v 5特异性杂合体特异性IgG1；

构建体小鼠组别 IgG1：％Ves v Pol a 5特异性IgG1 ％Ves v

Pol a 5 1 1.80mg/ml；64％ 4.50mg/ml

Ves v 5 4 10.7±3.2mg/ml 0.2±0.1mg/ml

104±15％

PV1-8 1 0 8.2mg/ml

PV1-18 4 0.6±0.44mg/ml； 4.1±2.0mg/ml 7.5±4.5mg/ml；

68±14％ 27±26％

PV1-24 2 0.35±0.06mg/ml； 2.26±0.50mg/ml 5.86±1.30mg/ml；

81±17％ 20±12％

PV1-32 3 0.52±0.39mg/ml； 3.77±1.89mg/ml 6.82±3.46mg/ml；

34±25％ 15±6％

PV1-39 2 4.45±0.70mg/ml； 1.72±0.06mg/ml 8.25±1/87mg/ml；

89±27％ 76±23％

PV1-46 3 2.29±3.41mg/ml； 1.18±0.96mg/ml 7.57±7.33mg/ml；

86±14％ 91±9％

PV1-50 1 1.01mg/ml；94％ 0.44mg/ml 11.22mg/ml；90％

PV1-57 1 0.67mg/ml；96％ 0.22mg/ml 11.88mg/ml；85％

PV1-76 1 1.32mg/ml；92％ 0.04mg/ml 11.88mg/ml；92％

PV22-32 1 0.04mg/ml；0％ 4.88mg/ml 6.31mg/ml；6％

数据来自1-4组每组4只小鼠的第7周血样的平均值

％Ves v表示在利用Pol a5吸附以后抗体的含量

实施例7 T细胞应答

增殖试验利用来自用胡蜂抗原5或杂合体免疫的小鼠的脾细胞进行。在5次两周一次的免疫后10天，将来自2-3只小鼠的脾细胞汇合并一式三份用于试验。脾细胞(4×10⁵个)与测试抗原在0.2ml培养基中37℃和5％CO₂条件下培养。在第三天加入氚示踪的胸苷(1μCi)，并在第四天确定胸苷的摄入量。结果以刺激指数值表示。

结果显示，杂合体EA-PV1-46、EA-PV1-155和EA-PV156-204诱导杂合体特异性以及胡蜂抗原5特异性T细胞应答(表4)。数据显示当刺激抗原为免疫原时获得最好的增殖应答。这可以通过比较在所测试的最高抗原浓度100μg/ml时的最大刺激指数值以及通过比较刺激指数值为4时所需的最低抗原浓度而明显看出。

表4

胡蜂抗原5或杂合体刺激小鼠脾细胞增殖

刺激Ag

脾细胞特异于 EA-Ves v5 EA-Pol a 5 杂合体

在100μg/ml Ag下的刺激指数

KR-Ves v5 8.2 1.5 -

KR-Pol a 5 2.2 6.3 -

EA-PV1-155 6.1 2.2 5.0

EA-PV1-46 6.0 8.0 13.5

EA-PV1-18 2.3 5.0 6.1

EA-PV156-204 4.1 4.2 6.8

EA-PV195-204 1.7 8.6 4.1

刺激指数为4时的Ag量(μg/ml)

KR-Ves v 5 2.6 ＞100 -

KR-Pol a 5 ＞100 16 -

EA-PV1-155 11 ＞100 0.54

EA-PV1-46 20 2.2 0.26

EA-PV1-18 ＞100 47 19

EA-PV156-204 60 70 2.3

EA-PV195-204 ＞100 8 82

脾细胞的背景增殖为400-900cpm的³H-胸苷摄入量。

实施例8 重组胡蜂Ag 5s以及杂合体在患者中的变应原性

变应原性测定利用组胺释放试验来进行，所述测定在利用Ag5或杂合体对来自10个小黄蜂敏感患者的嗜碱性粒细胞进行攻击后进行(Colombo等人，1995，***反应临床免疫学杂志(J.Allergy Clin.Imm.)95：565)。在表5中显示的患者/结果被分成两组。A组患者(n＝7)对Ves v 5比对Pol a 5敏感约1000倍；而B组患者(n＝3)对两种抗原5s具有大约相同的敏感度。

表5

杂合体的组胺释放数据总结

相对于Ves v 5的倒数活性

组A 组B

变应原患者数平均值范围患者数平均值范围

Ves v 5 7 1 1 3 1 1

Pol a 5 7 1154 330-5500 3 0.7 0.2-2

PV1-155 3 1 1-2 2 1 1

PV1-46 5 126 13-3300 2 0.7 0.1-5

PV1-18 3 583 12-5000 2 24 3.0-200

PV22-32 3 3207 2000-5000 2 6 6-20

PV115-125 3 3207 2000-5000 2 5 2-15

PV142-150 3 3000 2700-5000 2 5 2-15

PV156-204 6 1139 1000-3000 3 3 0.4-70

PV195-204 3 3207 50-5000 2 32 20.0-50

每一组中一位患者的完整数据在图11中给出。

在所测试的3个N-端杂合体中，EA-PV1-155并没有显示出变应原性的减少。EA-PV1-46和1-18在A组患者中分别显示126和583倍的几何平均减少，以及在B组患者中分别显示0.7和24倍的减少。两个C-端杂合体EA-PV156-204和195-204的减少在A组患者中分别为1139和3207倍，而在B组患者中分别为3和32倍。

N和C-端杂合体在变应原性上的不同减少程度反映了它们的IgE抗体浓度和它们的表位密度。图6中的抑制ELISA数据揭示对Ves v 5的N-端区域比对其C-端区域有更高的人IgG抗体浓度，并且对于IgE抗体可能也是如此。与N-端杂合体EA-PV1-46相比C-端杂合体EA-PV156-204在变应原性上减少更大，造成此现象的另一因子可能是EA-PV156-204具有减少的表位密度，因为此C-端杂合体比N-端杂合体具有更少的Ves v 5表面可及残基。类似地，较短的N或C-末端杂合体PV1-18或PV195-204与它们各自较长的杂合体相比具有更少的变应原性，这也反映了表位密度的影响。

将来自细菌的重组Ves v 5的变应原性与天然Ves v 5和来自酵母的重组Ves v 5的变应原性做一下比较。在测试的3个患者中，来自细菌的重组蛋白质比天然蛋白质和来自酵母的重组蛋白质的效力减少约103倍(数据未显示)。这些数据确认了以前的观察：针对变应原的大部分B细胞表位依赖于天然变应原的构象(King等人，2000，Int Arch Allergy 123：99)。

来自细菌的重组Ves v 5的变应原性下降是由于构象依赖性B细胞表位的丧失而致，因为来自细菌的重组蛋白质的CD光谱显示其具有无序结构。然而，杂合蛋白质PV1-46或PV156-204的变应原性下降却是由于Ves v 5特异性表位的数目和密度的减少所致，因为其CD光谱显示它具有与Ves v 5相似的有序结构。杂合体PV1-46和PV156-204的表位数目和密度的减少与实施例5-7中给出的B细胞表位和免疫原性数据一致。

实施例9 重组Ves v 5的结晶

Ves v 5晶体利用蒸气扩散技术在25℃下生长。为形成晶体，5μl 5mg/ml的Ves v 5与5μl 18％PEG6000、0.1M柠檬酸钠(pH6.0)混和，并相对于1ml 18％PEG6000、0.1M柠檬酸钠(pH6.0)进行平衡。X射线衍射数据在100K从天然Ves v 5晶体和引入重金属衍生物后的晶体收集，并且利用所述数据解析Ves v 5三维结构。Ves v 5的原子座标和结构因子已经放入蛋白质数据库(PDB)，其登录号为Q05110。Ves v 5的原子座标在表6中给出。

表6Ves v 5晶体座标

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REMARK DATE：28-Oct-98 15:45:46 created by user：anette

ATOM 1 CB GLU 1 17.077 51.793 23.662 1.00 41.80 APEP

ATOM 2 CG GLU 1 16.595 52.047 25.081 1.00 43.97 APEP

ATOM 3 CD GLU 1 15.167 51.580 25.310 1.00 44.74 APEP

ATOM 4 OE1 GLU 1 14.367 51.640 24.352 1.00 46.38 APEP

ATOM 5 OE2 GLU 1 14.845 51.156 26.444 1.00 43.48 APEP

ATOM 6 C GLU 1 19.169 50.429 23.664 1.00 39.72 APEP

ATOM 7 O GLU 1 19.733 49.575 24.358 1.00 40.19 APEP

ATOM 8 N GLU 1 17.005 49.431 24.404 1.00 41.50 APEP

ATOM 9 CA GLU 1 17.655 50.391 23.458 1.00 40.85 APEP

ATOM 10 N ALA 2 19.820 51.423 23.064 1.00 37.33 APEP

ATOM 11 CA ALA 2 21.267 51.571 23.179 1.00 34.17 APEP

ATOM 12 CB ALA 2 21.668 51.735 24.657 1.00 34.25 APEP

ATOM 13 C ALA 2 21.935 50.341 22.585 1.00 32.32 APEP

ATOM 14 O ALA 2 21.299 49.580 21.847 1.00 33.01 APEP

ATOM 15 N GLU 3 23.215 50.148 22.899 1.00 29.81 APEP

ATOM 16 CA GLU 3 23.956 48.991 22.402 1.00 26.33 APEP

ATOM 17 CB GLU 3 24.948 49.413 21.325 1.00 30.89 APEP

ATOM 18 CG GLU 3 25.246 48.320 20.303 1.00 35.96 APEP

ATOM 19 CD GLU 3 24.029 47.468 19.973 1.00 38.25 APEP

ATOM 20 OE1 GLU 3 23.428 47.678 18.891 1.00 39.27 APEP

ATOM 21 OE2 GLU 3 23.681 46.586 20.793 1.00 37.45 APEP

ATOM 22 C GLU 3 24.693 48.269 23.530 1.00 21.89 APEP

ATOM 23 O GLU 3 25.780 48.679 23.959 1.00 20.16 APEP

ATOM 24 N ALA 4 24.093 47.180 23.995 1.00 17.32 APEP

ATOM 25 CA ALA 4 24.652 46.382 25.080 1.00 15.71 APEP

ATOM 26 CB ALA 4 23.796 45.141 25.302 1.00 12.64 APEP

ATOM 27 C ALA 4 26.103 45.970 24.862 1.00 14.17 APEP

ATOM 28 O ALA 4 26.816 45.710 25.827 1.00 11.99 APEP

ATOM 29 N GLU 5 26.542 45.908 23.603 1.00 12.66 APEP

ATOM 30 CA GLU 5 27.917 45.503 23.319 1.00 13.51 APEP

ATOM 31 CB GLU 5 28.222 45.583 21.817 1.00 15.08 APEP

ATOM 32 CG GLU 5 29.647 45.127 21.479 1.00 20.49 APEP

ATOM 33 CD GLU 5 30.068 45.447 20.049 1.00 22.60 APEP

ATOM 34 OE1 GLU 5 29.224 45.948 19.278 1.00 24.69 APEP

ATOM 35 OE2 GLU 5 31.245 45.199 19.699 1.00 23.87 APEP

ATOM 36 C GLU 5 28.949 46.339 24.065 1.00 12.46 APEP

ATOM 37 O GLU 5 30.025 45.847 24.394 1.00 12.28 APEP

ATOM 38 N PHE 6 28.616 47.596 24.343 1.00 11.87 APEP

ATOM 39 CA PHE 6 29.546 48.491 25.022 1.00 11.93 APEP

ATOM 40 CB PHE 6 29.459 49.879 24.377 1.00 12.32 APEP

ATOM 41 CG PHE 6 29.706 49.857 22.887 1.00 14.45 APEP

ATOM 42 CD1 PHE 6 28.646 49.803 21.997 1.00 14.86 APEP

ATOM 43 CD2 PHE 6 31.001 49.811 22.381 1.00 14.25 APEP

ATOM 44 CE1 PHE 6 28.870 49.698 20.623 1.00 15.78 APEP

ATOM 45 CE2 PHE 6 31.236 49.705 21.008 1.00 13.92 APEP

ATOM 46 CZ PHE 6 30.166 49.648 20.131 1.00 13.36 APEP

ATOM 47 C PHE 6 29.378 48.556 26.537 1.00 10.13 APEP

ATOM 48 O PHE 6 29.892 49.463 27.201 1.00 9.26 APEP

ATOM 49 N ASN 7 28.658 47.568 27.066 1.00 10.89 APEP

ATOM 50 CA ASN 7 28.411 47.422 28.498 1.00 7.63 APEP

ATOM 51 CB ASN 7 27.040 46.786 28.750 1.00 6.94 APEP

ATOM 52 CG ASN 7 25.897 47.774 28.658 1.00 5.91 APEP

ATOM 53 OD1 ASN 7 26.049 48.953 28.962 1.00 6.68 APEP

ATOM 54 ND2 ASN 7 24.735 47.286 28.240 1.00 2.00 APEP

ATOM 55 C ASN 7 29.477 46.428 28.929 1.00 8.03 APEP

ATOM 56 O ASN 7 29.712 45.448 28.223 1.00 7.49 APEP

ATOM 57 N ASN 8 30.126 46.663 30.066 1.00 7.97 APEP

ATOM 58 CA ASN 8 31.155 45.735 30.536 1.00 9.65 APEP

ATOM 59 CB ASN 8 32.193 46.469 31.384 1.00 11.85 APEP

ATOM 60 CG ASN 8 33.241 45.531 31.961 1.00 13.69 APEP

ATOM 61 OD1 ASN 8 33.493 44.459 31.415 1.00 12.11 APEP

ATOM 62 ND2 ASN 8 33.858 45.935 33.071 1.00 12.79 APEP

ATOM 63 C ASN 8 30.553 44.586 31.350 1.00 10.91 APEP

ATOM 64 O ASN 8 30.397 44.690 32.564 1.00 11.39 APEP

ATOM 65 N TYR 9 30.225 43.490 30.674 1.00 10.20 APEP

ATOM 66 CA TYR 9 29.631 42.331 31.328 1.00 9.11 APEP

ATOM 67 CB TYR 9 28.956 41.431 30.287 1.00 8.55 APEP

ATOM 68 CG TYR 9 27.727 42.054 29.689 1.00 6.89 APEP

ATOM 69 CD1 TYR 9 27.798 42.805 28.517 1.00 8.12 APEP

ATOM 70 CE1 TYR 9 26.668 43.423 27.991 1.00 9.63 APEP

ATOM 71 CD2 TYR 9 26.498 41.932 30.318 1.00 7.93 APEP

ATOM 72 CE2 TYR 9 25.362 42.543 29.806 1.00 9.55 APEP

ATOM 73 CZ TYR 9 25.452 43.286 28.646 1.00 10.64 APEP

ATOM 74 OH TYR 9 24.325 43.893 28.149 1.00 11.41 APEP

ATOM 75 C TYR 9 30.628 41.509 32.131 1.00 10.32 APEP

ATOM 76 O TYR 9 30.237 40.584 32.840 1.00 8.46 APEP

ATOM 77 N CYS 10 31.912 41.834 32.017 1.00 11.72 APEP

ATOM 78 CA CYS 10 32.934 41.098 32.750 1.00 13.13 APEP

ATOM 79 C CYS 10 32.832 41.404 34.240 1.00 14.57 APEP

ATOM 80 O CYS 10 33.565 40.835 35.051 1.00 14.20 APEP

ATOM 81 CB CYS 10 34.329 41.471 32.242 1.00 14.59 APEP

ATOM 82 SG CYS 10 34.747 40.862 30.569 1.00 13.90 APEP

ATOM 83 N LYS 11 31.913 42.300 34.593 1.00 15.58 APEP

ATOM 84 CA LYS 11 31.706 42.695 35.982 1.00 17.16 APEP

ATOM 85 CB LYS 11 31.514 44.213 36.073 1.00 17.37 APEP

ATOM 86 CG LYS 11 32.805 45.020 35.908 1.00 19.88 APEP

ATOM 87 CD LYS 11 33.879 44.549 36.872 1.00 19.32 APEP

ATOM 88 CE LYS 11 35.252 44.994 36.442 1.00 22.07 APEP

ATOM 89 NZ LYS 11 36.148 43.824 36.212 1.00 26.09 APEP

ATOM 90 C LYS 11 30.503 41.987 36.600 1.00 18.39 APEP

ATOM 91 O LYS 11 30.330 41.990 37.822 1.00 18.93 APEP

ATOM 92 N ILE 12 29.676 41.382 35.748 1.00 17.37 APEP

ATOM 93 CA ILE 12 28.488 40.662 36.197 1.00 17.54 APEP

ATOM 94 CB ILE 12 27.522 40.348 35.011 1.00 15.92 APEP

ATOM 95 CG2 ILE 12 26.347 39.507 35.497 1.00 14.62 APEP

ATOM 96 CG1 ILE 12 27.033 41.645 34.353 1.00 14.71 APEP

ATOM 97 CD1 ILE 12 26.197 42.543 35.246 1.00 14.44 APEP

ATOM 98 C ILE 12 28.902 39.331 36.817 1.00 18.50 APEP

ATOM 99 O ILE 12 29.884 38.728 36.401 1.00 19.73 APEP

ATOM 100 N LYS 13 28.144 38.884 37.813 1.00 19.79 APEP

ATOM 101 CA LYS 13 28.391 37.605 38.468 1.00 21.47 APEP

ATOM 102 CB LYS 13 28.978 37.811 39.871 1.00 24.55 APEP

ATOM 103 CG LYS 13 28.349 38.959 40.664 1.00 29.46 APEP

ATOM 104 CD LYS 13 29.139 39.272 41.934 1.00 32.01 APEP

ATOM 105 CE LYS 13 29.966 40.546 41.786 1.00 34.07 APEP

ATOM 106 NZ LYS 13 30.867 40.516 40.591 1.00 34.69 APEP

ATOM 107 C LYS 13 27.051 36.867 38.555 1.00 20.70 APEP

ATOM 108 O LYS 13 26.050 37.433 38.976 1.00 19.96 APEP

ATOM 109 N CYS 14 27.029 35.611 38.132 1.00 20.06 APEP

ATOM 110 CA CYS 14 25.808 34.831 38.176 1.00 20.78 APEP

ATOM 111 C CYS 14 25.741 34.062 39.482 1.00 22.64 APEP

ATOM 112 O CYS 14 26.724 33.994 40.218 1.00 22.31 APEP

ATOM 113 CB CYS 14 25.752 33.875 36.987 1.00 19.10 APEP

ATOM 114 SG CYS 14 25.352 34.724 35.422 1.00 16.84 APEP

ATOM 115 N LEU 15 24.577 33.492 39.775 1.00 24.99 APEP

ATOM 116 CA LEU 15 24.400 32.746 41.015 1.00 27.03 APEP

ATOM 117 CB LEU 15 22.953 32.251 41.138 1.00 27.78 APEP

ATOM 118 CG LEU 15 22.054 32.963 42.152 1.00 28.08 APEP

ATOM 119 CD1 LEU 15 20.699 32.269 42.194 1.00 28.30 APEP

ATOM 120 CD2 LEU 15 22.699 32.953 43.535 1.00 27.17 APEP

ATOM 121 C LEU 15 25.365 31.574 41.090 1.00 27.24 APEP

ATOM 122 O LEU 15 26.065 31.402 42.088 1.00 28.76 APEP

ATOM 123 N LYS 16 25.410 30.774 40.033 1.00 28.73 APEP

ATOM 124 CA LYS 16 26.300 29.621 40.005 1.00 30.04 APEP

ATOM 125 CB LYS 16 25.679 28.478 39.201 1.00 31.71 APEP

ATOM 126 CG LYS 16 24.162 28.401 39.271 1.00 32.24 APEP

ATOM 127 CD LYS 16 23.562 27.757 38.009 1.00 33.96 APEP

ATOM 128 CE LYS 16 24.536 27.738 36.820 1.00 33.82 APEP

ATOM 129 NZ LYS 16 23.828 27.604 35.515 1.00 33.08 APEP

ATOM 130 C LYS 16 27.659 29.966 39.417 1.00 30.04 APEP

ATOM 131 O LYS 16 28.442 29.071 39.092 1.00 31.31 APEP

ATOM 132 N GLY 17 27.933 31.261 39.273 1.00 29.07 APEP

ATOM 133 CA GLY 17 29.214 31.698 38.744 1.00 27.07 APEP

ATOM 134 C GLY 17 29.410 31.553 37.243 1.00 26.38 APEP

ATOM 135 O GLY 17 28.448 31.552 36.472 1.00 25.25 APEP

ATOM 136 N GLY 18 30.670 31.428 36.831 1.00 25.19 APEP

ATOM 137 CA GLY 18 30.983 31.294 35.420 1.00 22.24 APEP

ATOM 138 C GLY 18 31.139 32.655 34.771 1.00 20.24 APEP

ATOM 139 O GLY 18 30.510 33.622 35.195 1.00 21.83 APEP

ATOM 140 N VAL 19 31.974 32.735 33.743 1.00 16.65 APEP

ATOM 141 CA VAL 19 32.212 33.989 33.040 1.00 15.58 APEP

ATOM 142 CB VAL 19 33.516 33.896 32.222 1.00 15.68 APEP

ATOM 143 CG1 VAL 19 33.884 35.254 31.649 1.00 13.84 APEP

ATOM 144 CG2 VAL 19 34.633 33.364 33.108 1.00 15.09 APEP

ATOM 145 C VAL 19 31.045 34.361 32.115 1.00 14.11 APEP

ATOM 146 O VAL 19 30.622 33.562 31.278 1.00 14.03 APEP

ATOM 147 N HIS 20 30.528 35.577 32.265 1.00 11.37 APEP

ATOM 148 CA HIS 20 29.410 36.020 31.444 1.00 11.65 APEP

ATOM 149 CB HIS 20 29.094 37.493 31.704 1.00 12.93 APEP

ATOM 150 CG HIS 20 27.721 37.900 31.264 1.00 13.85 APEP

ATOM 151 CD2 HIS 20 26.597 38.156 31.974 1.00 15.96 APEP

ATOM 152 ND1 HIS 20 27.392 38.102 29.941 1.00 15.59 APEP

ATOM 153 CE1 HIS 20 26.126 38.466 29.853 1.00 15.25 APEP

ATOM 154 NE2 HIS 20 25.620 38.506 31.072 1.00 17.34 APEP

ATOM 155 C HIS 20 29.679 35.811 29.961 1.00 11.56 APEP

ATOM 156 O HIS 20 30.783 36.054 29.467 1.00 9.12 APEP

ATOM 157 N THR 21 28.650 35.355 29.260 1.00 12.15 APEP

ATOM 158 CA THR 21 28.739 35.090 27.828 1.00 12.76 APEP

ATOM 159 CB THR 21 27.349 34.686 27.287 1.00 13.90 APEP

ATOM 160 OG1 THR 21 27.016 33.387 27.792 1.00 14.96 APEP

ATOM 161 CG2 THR 21 27.336 34.658 25.756 1.00 13.84 APEP

ATOM 162 C THR 21 29.294 36.278 27.025 1.00 12.07 APEP

ATOM 163 O THR 21 30.102 36.090 26.111 1.00 8.89 APEP

ATOM 164 N ALA 22 28.873 37.490 27.380 1.00 10.72 APEP

ATOM 165 CA ALA 22 29.312 38.698 26.693 1.00 11.63 APEP

ATOM 166 CB ALA 22 28.311 39.816 26.925 1.00 12.20 APEP

ATOM 167 C ALA 22 30.706 39.156 27.102 1.00 13.47 APEP

ATOM 168 O ALA 22 31.200 40.178 26.621 1.00 13.74 APEP

ATOM 169 N CYS 23 31.332 38.410 28.006 1.00 14.12 APEP

ATOM 170 CA CYS 23 32.683 38.715 28.460 1.00 14.19 APEP

ATOM 171 C CYS 23 33.564 37.670 27.793 1.00 12.16 APEP

ATOM 172 O CYS 23 34.725 37.909 27.497 1.00 13.84 APEP

ATOM 173 CB CYS 23 32.782 38.599 29.995 1.00 12.96 APEP

ATOM 174 SG CYS 23 34.454 38.855 30.695 1.00 14.19 APEP

ATOM 175 N LYS 24 32.987 36.501 27.561 1.00 13.18 APEP

ATOM 176 CA LYS 24 33.697 35.405 26.917 1.00 14.00 APEP

ATOM 177 CB LYS 24 32.894 34.109 27.048 1.00 13.62 APEP

ATOM 178 CG LYS 24 33.111 33.347 28.334 1.00 13.30 APEP

ATOM 179 CD LYS 24 32.593 31.929 28.193 1.00 14.90 APEP

ATOM 180 CE LYS 24 31.656 31.540 29.311 1.00 15.48 APEP

ATOM 181 NZ LYS 24 32.009 30.188 29.830 1.00 21.39 APEP

ATOM 182 C LYS 24 33.853 35.742 25.446 1.00 13.93 APEP

ATOM 183 O LYS 24 34.917 35.578 24.861 1.00 14.28 APEP

ATOM 184 N TYR 25 32.767 36.219 24.857 1.00 16.64 APEP

ATOM 185 CA TYR 25 32.737 36.585 23.448 1.00 17.22 APEP

ATOM 186 CB TYR 25 31.736 35.684 22.719 1.00 18.12 APEP

ATOM 187 CG TYR 25 31.716 34.245 23.217 1.00 16.13 APEP

ATOM 188 CD1 TYR 25 30.600 33.727 23.879 1.00 18.60 APEP

ATOM 189 CE1 TYR 25 30.574 32.404 24.332 1.00 15.87 APEP

ATOM 190 CD2 TYR 25 32.810 33.403 23.021 1.00 16.98 APEP

ATOM 191 CE2 TYR 25 32.794 32.081 23.469 1.00 14.73 APEP

ATOM 192 CZ TYR 25 31.677 31.590 24.120 1.00 16.64 APEP

ATOM 193 OH TYR 25 31.661 30.283 24.566 1.00 19.74 APEP

ATOM 194 C TYR 25 32.339 38.060 23.336 1.00 18.24 APEP

ATOM 195 O TYR 25 31.155 38.404 23.332 1.00 17.58 APEP

ATOM 196 N GLY 26 33.340 38.929 23.250 1.00 19.90 APEP

ATOM 197 CA GLY 26 33.086 40.358 23.182 1.00 22.78 APEP

ATOM 198 C GLY 26 32.536 40.927 21.886 1.00 25.12 APEP

ATOM 199 O GLY 26 32.260 42.125 21.815 1.00 26.30 APEP

ATOM 200 N SER 27 32.362 40.092 20.867 1.00 26.19 APEP

ATOM 201 CA SER 27 31.855 40.570 19.583 1.00 26.72 APEP

ATOM 202 CB SER 27 32.960 40.435 18.522 1.00 25.95 APEP

ATOM 203 OG SER 27 32.457 40.041 17.259 1.00 24.78 APEP

ATOM 204 C SER 27 30.586 39.839 19.139 1.00 26.86 APEP

ATOM 205 O SER 27 30.159 38.878 19.774 1.00 25.87 APEP

ATOM 206 N LEU 28 29.979 40.312 18.053 1.00 29.54 APEP

ATOM 207 CA LEU 28 28.766 39.695 17.518 1.00 30.96 APEP

ATOM 208 CB LEU 28 27.793 40.769 17.021 1.00 33.13 APEP

ATOM 209 CG LEU 28 28.127 42.217 17.391 1.00 34.56 APEP

ATOM 210 CD1 LEU 28 29.022 42.812 16.319 1.00 34.22 APEP

ATOM 211 CD2 LEU 28 26.843 43.030 17.551 1.00 34.12 APEP

ATOM 212 C LEU 28 29.142 38.769 16.365 1.00 30.72 APEP

ATOM 213 O LEU 28 28.277 38.224 15.673 1.00 31.18 APEP

ATOM 214 N LYS 29 30.448 38.602 16.176 1.00 30.29 APEP

ATOM 215 CA LYS 29 31.008 37.759 15.124 1.00 29.17 APEP

ATOM 216 CB LYS 29 32.490 38.102 14.937 1.00 31.20 APEP

ATOM 217 CG LYS 29 33.016 37.866 13.534 1.00 32.99 APEP

ATOM 218 CD LYS 29 34.528 37.785 13.521 1.00 34.25 APEP

ATOM 219 CE LYS 29 35.150 39.121 13.885 1.00 35.23 APEP

ATOM 220 NZ LYS 29 35.686 39.098 15.273 1.00 37.84 APEP

ATOM 221 C LYS 29 30.867 36.269 15.444 1.00 27.53 APEP

ATOM 222 O LYS 29 31.446 35.772 16.413 1.00 25.87 APEP

ATOM 223 N PRO 30 30.104 35.530 14.621 1.00 27.59 APEP

ATOM 224 CD PRO 30 29.362 36.011 13.442 1.00 26.03 APEP

ATOM 225 CA PRO 30 29.905 34.091 14.840 1.00 25.87 APEP

ATOM 226 CB PRO 30 28.982 33.675 13.694 1.00 25.48 APEP

ATOM 227 CG PRO 30 28.330 34.949 13.245 1.00 24.87 APEP

ATOM 228 C PRO 30 31.182 33.253 14.871 1.00 25.41 APEP

ATOM 229 O PRO 30 32.061 33.404 14.018 1.00 26.47 APEP

ATOM 230 N ASN 31 31.273 32.376 15.866 1.00 22.04 APEP

ATOM 231 CA ASN 31 32.407 31.469 16.030 1.00 21.43 APEP

ATOM 232 CB ASN 31 33.061 31.623 17.413 1.00 21.58 APEP

ATOM 233 CG ASN 31 33.840 32.911 17.564 1.00 23.13 APEP

ATOM 234 OD1 ASN 31 34.581 33.319 16.672 1.00 23.71 APEP

ATOM 235 ND2 ASN 31 33.680 33.558 18.713 1.00 25.47 APEP

ATOM 236 C ASN 31 31.817 30.071 15.944 1.00 19.60 APEP

ATOM 237 O ASN 31 31.743 29.365 16.948 1.00 18.51 APEP

ATOM 238 N CYS 32 31.384 29.667 14.756 1.00 18.76 APEP

ATOM 239 CA CYS 32 30.779 28.348 14.605 1.00 18.03 APEP

ATOM 240 C CYS 32 31.690 27.310 13.975 1.00 17.09 APEP

ATOM 241 O CYS 32 31.234 26.464 13.207 1.00 13.04 APEP

ATOM 242 CB CYS 32 29.493 28.456 13.792 1.00 17.35 APEP

ATOM 243 SG CYS 32 28.253 29.528 14.570 1.00 16.28 APEP

ATOM 244 N GLY 33 32.974 27.379 14.311 1.00 19.59 APEP

ATOM 245 CA GLY 33 33.942 26.433 13.786 1.00 21.31 APEP

ATOM 246 C GLY 33 33.914 26.269 12.278 1.00 22.56 APEP

ATOM 247 O GLY 33 33.985 27.250 11.532 1.00 22.89 APEP

ATOM 248 N ASN 34 33.812 25.021 11.830 1.00 22.35 APEP

ATOM 249 CA ASN 34 33.787 24.724 10.409 1.00 23.03 APEP

ATOM 250 CB ASN 34 34.531 23.410 10.136 1.00 26.79 APEP

ATOM 251 CG ASN 34 33.754 22.187 10.581 1.00 31.53 APEP

ATOM 252 OD1 ASN 34 33.028 22.221 11.579 1.00 35.39 APEP

ATOM 253 ND2 ASN 34 33.908 21.088 9.840 1.00 32.88 APEP

ATOM 254 C ASN 34 32.377 24.682 9.821 1.00 22.38 APEP

ATOM 255 O ASN 34 32.193 24.351 8.647 1.00 21.38 APEP

ATOM 256 N LYS 35 31.377 25.029 10.629 1.00 19.97 APEP

ATOM 257 CA LYS 35 30.007 25.053 10.133 1.00 17.88 APEP

ATOM 258 CB LYS 35 29.011 25.166 11.289 1.00 17.85 APEP

ATOM 259 CG LYS 35 29.323 24.277 12.482 1.00 19.14 APEP

ATOM 260 CD LYS 35 28.050 23.847 13.179 1.00 18.82 APEP

ATOM 261 CE LYS 35 28.196 23.884 14.689 1.00 18.39 APEP

ATOM 262 NZ LYS 35 29.499 23.329 15.115 1.00 18.61 APEP

ATOM 263 C LYS 35 29.879 26.281 9.235 1.00 16.90 APEP

ATOM 264 O LYS 35 30.557 27.284 9.453 1.00 16.79 APEP

ATOM 265 N VAL 36 29.029 26.202 8.218 1.00 16.21 APEP

ATOM 266 CA VAL 36 28.831 27.342 7.330 1.00 15.62 APEP

ATOM 267 CB VAL 36 28.560 26.916 5.872 1.00 15.89 APEP

ATOM 268 CG1 VAL 36 28.474 28.150 4.990 1.00 14.85 APEP

ATOM 269 CG2 VAL 36 29.663 26.000 5.374 1.00 17.84 APEP

ATOM 270 C VAL 36 27.636 28.149 7.820 1.00 13.37 APEP

ATOM 271 O VAL 36 26.530 27.631 7.949 1.00 11.50 APEP

ATOM 272 N VAL 37 27.882 29.422 8.095 1.00 13.37 APEP

ATOM 273 CA VAL 37 26.857 30.337 8.573 1.00 15.79 APEP

ATOM 274 CB VAL 37 27.506 31.450 9.424 1.00 16.40 APEP

ATOM 275 CG1 VAL 37 26.487 32.521 9.765 1.00 16.09 APEP

ATOM 276 CG2 VAL 37 28.096 30.847 10.681 1.00 13.21 APEP

ATOM 277 C VAL 37 26.067 30.971 7.422 1.00 16.67 APEP

ATOM 278 O VAL 37 26.557 31.873 6.738 1.00 18.09 APEP

ATOM 279 N VAL 38 24.843 30.492 7.211 1.00 16.92 APEP

ATOM 280 CA VAL 38 23.991 31.020 6.149 1.00 17.73 APEP

ATOM 281 CB VAL 38 22.662 30.229 6.051 1.00 15.03 APEP

ATOM 282 CG1 VAL 38 21.770 30.820 4.976 1.00 15.83 APEP

ATOM 283 CG2 VAL 38 22.953 28.778 5.740 1.00 17.06 APEP

ATOM 284 C VAL 38 23.704 32.480 6.486 1.00 17.90 APEP

ATOM 285 O VAL 38 23.852 33.372 5.645 1.00 18.01 APEP

ATOM 286 N SER 39 23.305 32.713 7.731 1.00 15.41 APEP

ATOM 287 CA SER 39 23.019 34.052 8.214 1.00 14.21 APEP

ATOM 288 CB SER 39 21.857 34.674 7.438 1.00 14.70 APEP

ATOM 289 OG SER 39 20.721 33.837 7.467 1.00 14.28 APEP

ATOM 290 C SER 39 22.679 34.006 9.700 1.00 14.75 APEP

ATOM 291 O SER 39 22.636 32.936 10.308 1.00 12.05 APEP

ATOM 292 N TYR 40 22.444 35.179 10.278 1.00 14.22 APEP

ATOM 293 CA TYR 40 22.111 35.272 11.686 1.00 14.10 APEP

ATOM 294 CB TYR 40 23.397 35.179 12.530 1.00 15.42 APEP

ATOM 295 CG TYR 40 24.239 36.438 12.583 1.00 14.41 APEP

ATOM 296 CD1 TYR 40 23.921 37.472 13.464 1.00 15.34 APEP

ATOM 297 CE1 TYR 40 24.711 38.605 13.563 1.00 16.41 APEP

ATOM 298 CD2 TYR 40 25.375 36.575 11.790 1.00 14.36 APEP

ATOM 299 CE2 TYR 40 26.179 37.712 11.879 1.00 17.60 APEP

ATOM 300 CZ TYR 40 25.842 38.723 12.771 1.00 18.38 APEP

ATOM 301 OH TYR 40 26.639 39.841 12.896 1.00 19.23 APEP

ATOM 302 C TYR 40 21.360 36.569 11.969 1.00 13.71 APEP

ATOM 303 O TYR 40 21.456 37.526 11.201 1.00 13.53 APEP

ATOM 304 N GLY 41 20.602 36.590 13.061 1.00 12.13 APEP

ATOM 305 CA GLY 41 19.857 37.783 13.418 1.00 13.27 APEP

ATOM 306 C GLY 41 18.381 37.656 13.102 1.00 13.46 APEP

ATOM 307 O GLY 41 17.968 36.726 12.419 1.00 14.55 APEP

ATOM 308 N LEU 42 17.586 38.601 13.590 1.00 12.94 APEP

ATOM 309 CA LEU 42 16.150 38.581 13.365 1.00 12.38 APEP

ATOM 310 CB LEU 42 15.421 38.302 14.676 1.00 11.85 APEP

ATOM 311 CG LEU 42 15.462 36.858 15.170 1.00 9.57 APEP

ATOM 312 CD1 LEU 42 15.279 36.828 16.682 1.00 10.07 APEP

ATOM 313 CD2 LEU 42 14.374 36.063 14.475 1.00 9.98 APEP

ATOM 314 C LEU 42 15.651 39.895 12.791 1.00 12.90 APEP

ATOM 315 O LEU 42 16.066 40.968 13.223 1.00 13.81 APEP

ATOM 316 N THR 43 14.758 39.808 11.816 1.00 12.41 APEP

ATOM 317 CA THR 43 14.200 41.006 11.210 1.00 13.32 APEP

ATOM 318 CB THR 43 13.412 40.693 9.919 1.00 11.63 APEP

ATOM 319 OG1 THR 43 12.195 40.028 10.254 1.00 12.20 APEP

ATOM 320 CG2 THR 43 14.222 39.804 8.994 1.00 11.85 APEP

ATOM 321 C THR 43 13.249 41.637 12.208 1.00 13.30 APEP

ATOM 322 O THR 43 12.801 40.990 13.161 1.00 12.67 APEP

ATOM 323 N LYS 44 12.939 42.904 11.977 1.00 14.11 APEP

ATOM 324 CA LYS 44 12.050 43.640 12.851 1.00 14.99 APEP

ATOM 325 CB LYS 44 11.975 45.100 12.379 1.00 16.22 APEP

ATOM 326 CG LYS 44 10.594 45.667 12.152 1.00 18.80 APEP

ATOM 327 CD LYS 44 10.567 47.157 12.489 1.00 19.36 APEP

ATOM 328 CE LYS 44 9.655 47.915 11.552 1.00 21.90 APEP

ATOM 329 NZ LYS 44 10.430 48.714 10.570 1.00 20.87 APEP

ATOM 330 C LYS 44 10.672 42.985 12.923 1.00 13.76 APEP

ATOM 331 O LYS 44 10.083 42.910 13.999 1.00 14.04 APEP

ATOM 332 N GLN 45 10.162 42.487 11.798 1.00 12.41 APEP

ATOM 333 CA GLN 45 8.84 9 41.839 11.806 1.00 11.51 APEP

ATOM 334 CB GLN 45 8.334 41.646 10.370 1.00 10.79 APEP

ATOM 335 CG GLN 45 7.063 40.816 10.246 1.00 10.70 APEP

ATOM 336 CD GLN 45 5.812 41.538 10.743 1.00 12.43 APEP

ATOM 337 OE1 GLN 45 5.696 42.763 10.650 1.00 12.72 APEP

ATOM 338 NE2 GLN 45 4.869 40.772 11.274 1.00 11.44 APEP

ATOM 339 C GLN 45 8.917 40.496 12.548 1.00 10.87 APEP

AT0M 340 O GLN 45 7.987 40.123 13.267 1.00 9.48 APEP

ATOM 341 N GLU 46 10.024 39.779 12.382 1.00 9.10 APEP

ATOM 342 CA GLU 46 10.207 38.496 13.059 1.00 9.69 APEP

ATOM 343 CB GLU 46 11.511 37.845 12.610 1.00 8.84 APEP

ATOM 344 CG GLU 46 11.366 36.916 11.407 1.00 9.10 APEP

ATOM 345 CD GLU 46 12.710 36.534 10.806 1.00 9.37 APEP

ATOM 346 OE1 GLU 46 13.723 37.158 11.173 1.00 7.41 APEP

ATOM 347 OE2 GLU 46 12.755 35.607 9.966 1.00 10.21 APEP

ATOM 348 C GLU 46 10.217 38.666 14.582 1.00 10.14 APEP

ATOM 349 O GLU 46 9.708 37.817 15.310 1.00 10.51 APEP

ATOM 350 N LYS 47 10.807 39.761 15.057 1.00 10.08 APEP

ATOM 351 CA LYS 47 10.865 40.042 16.486 1.00 9.91 APEP

ATOM 352 CB LYS 47 11.675 41.318 16.749 1.00 9.24 APEP

ATOM 353 CG LYS 47 13.167 41.191 16.459 1.00 7.94 APEP

ATOM 354 CD LYS 47 13.906 42.509 16.710 1.00 9.13 APEP

ATOM 355 CE LYS 47 15.411 42.361 16.498 1.00 11.45 APEP

ATOM 356 NZ LYS 47 16.127 43.675 16.431 1.00 11.96 APEP

ATOM 357 C LYS 47 9.43 8 40.229 16.984 1.00 10.20 APEP

ATOM 358 O LYS 47 9.027 39.626 17.969 1.00 10.41 APEP

ATOM 359 N GLN 48 8.689 41.065 16.275 1.00 11.41 APEP

ATOM 360 CA GLN 48 7.299 41.366 16.602 1.00 11.75 APEP

ATOM 361 CB GLN 48 6.759 42.409 15.624 1.00 11.16 APEP

ATOM 362 CG GLN 48 5.254 42.607 15.669 1.00 12.11 APEP

ATOM 363 CD GLN 48 4.767 43.515 14.556 1.00 12.60 APEP

ATOM 364 OE1 GLN 48 5.301 44.606 14.359 1.00 10.04 APEP

ATOM 365 NE2 GLN 48 3.758 43.065 13.816 1.00 11.92 APEP

ATOM 366 C GLN 48 6.420 40.123 16.563 1.00 12.69 APEP

ATOM 367 O GLN 48 5.488 39.993 17.353 1.00 13.53 APEP

ATOM 368 N ASP 49 6.716 39.219 15.633 1.00 12.63 APEP

ATOM 369 CA ASP 49 5.964 37.977 15.487 1.00 11.04 APEP

ATOM 370 CB ASP 49 6.290 37.322 14.144 1.00 14.99 APEP

ATOM 371 CG ASP 49 5.578 37.990 12.981 1.00 17.72 APEP

ATOM 372 OD1 ASP 49 4.518 38.620 13.200 1.00 18.74 APEP

ATOM 373 OD2 ASP 49 6.082 37.878 11.844 1.00 19.80 APEP

ATOM 374 C ASP 49 6.285 36.998 16.615 1.00 9.65 APEP

ATOM 375 O ASP 49 5.433 36.211 17.020 1.00 9.33 APEP

ATOM 376 N ILE 50 7.519 37.034 17.107 1.00 8.25 APEP

ATOM 377 CA ILE 50 7.916 36.152 18.203 1.00 8.01 APEP

ATOM 378 CB ILE 50 9.454 36.132 18.387 1.00 7.72 APEP

ATOM 379 CG2 ILE 50 9.823 35.416 19.693 1.00 7.19 APEP

ATOM 380 CG1 ILE 50 10.103 35.410 17.203 1.00 6.44 APEP

ATOM 381 CD1 ILE 50 11.582 35.687 17.041 1.00 4.97 APEP

ATOM 382 C ILE 50 7.256 36.621 19.499 1.00 8.14 APEP

ATOM 383 O ILE 50 6.805 35.808 20.303 1.00 7.29 APEP

ATOM 384 N LEU 51 7.191 37.938 19.679 1.00 8.57 APEP

ATOM 385 CA LEU 51 6.571 38.529 20.854 1.00 9.76 APEP

ATOM 386 CB LEU 51 6.733 40.055 20.836 1.00 9.57 APEP

ATOM 387 CG LEU 51 6.509 40.844 22.139 1.00 12.08 APEP

ATOM 388 CD1 LEU 51 7.509 40.401 23.216 1.00 9.69 APEP

ATOM 389 CD2 LEU 51 6.659 42.333 21.861 1.00 10.85 APEP

ATOM 390 C LEU 51 5.091 38.172 20.863 1.00 10.95 APEP

ATOM 391 O LEU 51 4.571 37.664 21.861 1.00 12.16 APEP

ATOM 392 N LYS 52 4.423 38.427 19.739 1.00 10.41 APEP

ATOM 393 CA LYS 52 2.994 38.156 19.601 1.00 10.29 APEP

ATOM 394 CB LYS 52 2.520 38.535 18.196 1.00 10.94 APEP

ATOM 395 CG LYS 52 1.066 38.956 18.132 1.00 14.35 APEP

ATOM 396 CD LYS 52 0.258 38.029 17.236 1.00 16.34 APEP

ATOM 397 CE LYS 52 -0.870 38.780 16.543 1.00 17.57 APEP

ATOM 398 NZ LYS 52 -2.107 38.817 17.374 1.00 17.77 APEP

ATOM 399 C LYS 52 2.627 36.709 19.893 1.00 9.70 APEP

ATOM 400 O LYS 52 1.553 36.432 20.419 1.00 9.63 APEP

ATOM 401 N GLU 53 3.508 35.780 19.540 1.00 10.85 APEP

ATOM 402 CA GLU 53 3.249 34.366 19.799 1.00 11.95 APEP

ATOM 403 CB GLU 53 4.261 33.491 19.057 1.00 13.57 APEP

ATOM 404 CG GLU 53 3.957 31.996 19.089 1.00 15.51 APEP

ATOM 405 CD GLU 53 2.525 31.651 18.695 1.00 20.29 APEP

ATOM 406 OE1 GLU 53 1.876 32.439 17.971 1.00 21.72 APEP

ATOM 407 OE2 GLU 53 2.044 30.577 19.111 1.00 21.86 APEP

ATOM 408 C GLU 53 3.362 34.120 21.294 1.00 12.09 APEP

ATOM 409 O GLU 53 2.568 33.382 21.878 1.00 11.99 APEP

ATOM 410 N HIS 54 4.357 34.750 21.910 1.00 12.11 APEP

ATOM 411 CA HIS 54 4.580 34.610 23.340 1.00 11.34 APEP

ATOM 412 CB HIS 54 5.829 35.399 23.769 1.00 9.29 APEP

ATOM 413 CG HIS 54 7.089 34.584 23.817 1.00 7.76 APEP

ATOM 414 CD2 HIS 54 7.695 33.933 24.840 1.00 9.61 APEP

ATOM 415 ND1 HIS 54 7.895 34.394 22.716 1.00 6.60 APEP

ATOM 416 CE1 HIS 54 8.941 33.663 23.056 1.00 5.37 APEP

ATOM 417 NE2 HIS 54 8.844 33.370 24.340 1.00 7.30 APEP

ATOM 418 C HIS 54 3.365 35.143 24.092 1.00 10.89 APEP

ATOM 419 O HIS 54 2.844 34.492 24.983 1.00 10.22 APEP

ATOM 420 N ASN 55 2.913 36.331 23.703 1.00 12.43 APEP

ATOM 421 CA ASN 55 1.784 36.982 24.356 1.00 13.65 APEP

ATOM 422 CB ASN 55 1.791 38.473 23.991 1.00 12.77 APEP

ATOM 423 CG ASN 55 2.950 39.232 24.655 1.00 12.31 APEP

ATOM 424 OD1 ASN 55 3.3 96 38.871 25.747 1.00 7.53 APEP

ATOM 425 ND2 ASN 55 3.436 40.280 23.993 1.00 9.40 APEP

ATOM 426 C ASN 55 0.413 36.347 24.097 1.00 13.82 APEP

ATOM 427 O ASN 55 -0.457 36.355 24.973 1.00 13.31 APEP

ATOM 428 N ASP 56 0.221 35.795 22.907 1.00 12.69 APEP

ATOM 429 CA ASP 56 -1.036 35.134 22.572 1.00 12.59 APEP

ATOM 430 CB ASP 56 -1.049 34.675 21.111 1.00 12.80 APEP

ATOM 431 CG ASP 56 -1.359 35.787 20.143 1.00 13.37 APEP

ATOM 432 OD1 ASP 56 -1.902 36.825 20.565 1.00 13.48 APEP

ATOM 433 OD2 ASP 56 -1.059 35.615 18.945 1.00 15.39 APEP

ATOM 434 C ASP 56 -1.153 33.899 23.450 1.00 10.48 APEP

ATOM 435 O ASP 56 -2.224 33.577 23.953 1.00 10.14 APEP

ATOM 436 N PHE 57 -0.046 33.191 23.604 1.00 9.15 APEP

ATOM 437 CA PHE 57 -0.047 31.989 24.418 1.00 11.09 APEP

ATOM 438 CB PHE 57 1.272 31.227 24.252 1.00 12.68 APEP

ATOM 439 CG PHE 57 1.261 29.863 24.884 1.00 11.85 APEP

ATOM 440 CD1 PHE 57 0.346 28.899 24.471 1.00 12.69 APEP

ATOM 441 CD2 PHE 57 2.150 29.549 25.903 1.00 12.28 APEP

ATOM 442 CE1 PHE 57 0.316 27.642 25.067 1.00 11.80 APEP

ATOM 443 CE2 PHE 57 2.132 28.296 26.508 1.00 12.07 APEP

ATOM 444 CZ PHE 57 1.216 27.342 26.092 1.00 12.36 APEP

ATOM 445 C PHE 57 -0.267 32.346 25.890 1.00 10.66 APEP

ATOM 446 O PHE 57 -1.012 31.664 26.597 1.00 11.28 APEP

ATOM 447 N ARG 58 0.360 33.423 26.349 1.00 8.83 APEP

ATOM 448 CA ARG 58 0.204 33.830 27.738 1.00 10.25 APEP

ATOM 449 CB ARG 58 1.107 35.024 28.057 1.00 7.50 APEP

ATOM 450 CG ARG 58 2.483 34.615 28.530 1.00 7.56 APEP

ATOM 451 CD ARG 58 3.478 35.755 28.446 1.00 7.29 APEP

ATOM 452 NE ARG 58 3.391 36.649 29.601 1.00 8.58 APEP

ATOM 453 CZ ARG 58 4.025 36.450 30.750 1.00 7.65 APEP

ATOM 454 NH1 ARG 58 4.797 35.388 30.908 1.00 8.61 APEP

ATOM 455 NH2 ARG 58 3.892 37.318 31.738 1.00 9.84 APEP

ATOM 456 C ARG 58 -1.246 34.170 28.032 1.00 9.76 APEP

ATOM 457 O ARG 58 -1.793 33.733 29.042 1.00 11.57 APEP

ATOM 458 N GLN 59 -1.874 34.932 27.141 1.00 10.78 APEP

ATOM 459 CA GLN 59 -3.270 35.321 27.314 1.00 9.25 APEP

ATOM 460 CB GLN 59 -3.621 36.464 26.368 1.00 11.30 APEP

ATOM 461 CG GLN 59 -3.388 37.870 26.937 1.00 14.86 APEP

ATOM 462 CD GLN 59 -3.254 37.924 28.457 1.00 15.40 APEP

ATOM 463 OE1 GLN 59 -2.306 38.508 28.976 1.00 20.39 APEP

ATOM 464 NE2 GLN 59 -4.203 37.328 29.171 1.00 16.19 APEP

ATOM 465 C GLN 59 -4.233 34.156 27.107 1.00 8.85 APEP

ATOM 466 O GLN 59 -5.275 34.084 27.753 1.00 8.65 APEP

ATOM 467 N LYS 60 -3.900 33.240 26.209 1.00 9.28 APEP

ATOM 468 CA LYS 60 -4.765 32.084 25.999 1.00 9.29 APEP

ATOM 469 CB LYS 60 -4.190 31.170 24.919 1.00 11.77 APEP

ATOM 470 CG LYS 60 -5.097 29.999 24.555 1.00 12.61 APEP

ATOM 471 CD LYS 60 -4.357 28.678 24.660 1.00 12.86 APEP

ATOM 472 CE LYS 60 -3.849 28.205 23.310 1.00 10.33 APEP

ATOM 473 NZ LYS 60 -4.535 26.970 22.830 1.00 12.74 APEP

ATOM 474 C LYS 60 -4.840 31.329 27.320 1.00 9.51 APEP

ATOM 475 O LYS 60 -5.922 31.017 27.816 1.00 7.72 APEP

ATOM 476 N ILE 61 -3.671 31.049 27.887 1.00 9.04 APEP

ATOM 477 CA ILE 61 -3.570 30.348 29.161 1.00 9.87 APEP

ATOM 478 CB ILE 61 -2.075 30.101 29.536 1.00 10.78 APEP

ATOM 479 CG2 ILE 61 -1.970 29.598 30.973 1.00 10.13 APEP

ATOM 480 CG1 ILE 61 -1.428 29.152 28.507 1.00 9.94 APEP

ATOM 481 CD1 ILE 61 -1.212 27.720 28.980 1.00 10.64 APEP

ATOM 482 C ILE 61 -4.254 31.141 30.283 1.00 9.04 APEP

ATOM 483 O ILE 61 -4.980 30.571 31.092 1.00 9.20 APEP

ATOM 484 N ALA 62 -4.041 32.454 30.314 1.00 8.91 APEP

ATOM 485 CA ALA 62 -4.628 33.308 31.350 1.00 9.06 APEP

ATOM 486 CB ALA 62 -4.090 34.729 31.209 1.00 5.84 APEP

ATOM 487 C ALA 62 -6.165 33.327 31.363 1.00 11.19 APEP

ATOM 488 O ALA 62 -6.794 33.581 32.397 1.00 12.79 APEP

ATOM 489 N ARG 63 -6.769 33.053 30.214 1.00 12.40 APEP

ATOM 490 CA ARG 63 -8.219 33.050 30.096 1.00 10.93 APEP

ATOM 491 CB ARG 63 -8.618 33.627 28.736 1.00 10.77 APEP

ATOM 492 CG ARG 63 -8.043 35.012 28.505 1.00 12.79 APEP

ATOM 493 CD ARG 63 -8.608 35.684 27.278 1.00 15.66 APEP

ATOM 494 NE ARG 63 -7.868 36.904 26.968 1.00 17.96 APEP

ATOM 495 CZ ARG 63 -7.346 37.179 25.777 1.00 20.00 APEP

ATOM 496 NH1 ARG 63 -7.483 36.321 24.772 1.00 19.36 APEP

ATOM 497 NH2 ARG 63 -6.679 38.313 25.590 1.00 22.72 APEP

ATOM 498 C ARG 63 -8.827 31.661 30.285 1.00 10.92 APEP

ATOM 499 O ARG 63 -10.036 31.489 30.179 1.00 12.37 APEP

ATOM 500 N GLY 64 -7.986 30.677 30.575 1.00 12.22 APEP

ATOM 501 CA GLY 64 -8.475 29.325 30.780 1.00 11.71 APEP

ATOM 502 C GLY 64 -8.985 28.685 29.509 1.00 13.26 APEP

ATOM 503 O GLY 64 -9.950 27.911 29.540 1.00 14.03 APEP

ATOM 504 N LEU 65 -8.331 28.998 28.391 1.00 11.24 APEP

ATOM 505 CA LEU 65 -8.711 28.463 27.095 1.00 10.84 APEP

ATOM 506 CB LEU 65 -8.747 29.581 26.044 1.00 10.48 APEP

ATOM 507 CG LEU 65 -9.602 30.803 26.396 1.00 8.01 APEP

ATOM 508 CD1 LEU 65 -9.278 31.946 25.470 1.00 13.03 APEP

ATOM 509 CD2 LEU 65 -11.074 30.450 26.291 1.00 10.77 APEP

ATOM 510 C LEU 65 -7.764 27.361 26.644 1.00 12.39 APEP

ATOM 511 O LEU 65 -7.998 26.719 25.625 1.00 12.90 APEP

ATOM 512 N GLU 66 -6.686 27.147 27.387 1.00 11.27 APEP

ATOM 513 CA GLU 66 -5.754 26.094 27.023 1.00 12.09 APEP

ATOM 514 CB GLU 66 -4.365 26.361 27.610 1.00 11.39 APEP

ATOM 515 CG GLU 66 -3.327 25.308 27.245 1.00 12.91 APEP

ATOM 516 CD GLU 66 -3.362 24.941 25.774 1.00 13.85 APEP

ATOM 517 OE1 GLU 66 -2.689 25.629 24.988 1.00 18.33 APEP

ATOM 518 OE2 GLU 66 -4.054 23.971 25.401 1.00 12.27 APEP

ATOM 519 C GLU 66 -6.323 24.799 27.575 1.00 12.38 APEP

ATOM 520 O GLU 66 -6.214 24.512 28.764 1.00 12.85 APEP

ATOM 521 N THR 67 -6.943 24.022 26.696 1.00 13.75 APEP

ATOM 522 CA THR 67 -7.553 22.769 27.091 1.00 13.16 APEP

ATOM 523 CB THR 67 -8.562 22.295 26.018 1.00 13.92 APEP

ATOM 524 OG1 THR 67 -7.858 21.894 24.830 1.00 14.81 APEP

ATOM 525 CG2 THR 67 -9.524 23.413 25.671 1.00 11.42 APEP

ATOM 526 C THR 67 -6.548 21.652 27.368 1.00 13.63 APEP

ATOM 527 O THR 67 -6.875 20.682 28.049 1.0O 14.84 APEP

ATOM 528 N ARG 68 -5.326 21.793 26.861 1.00 13.12 APEP

ATOM 529 CA ARG 68 -4.301 20.770 27.042 1.00 11.47 APEP

ATOM 530 CB ARG 68 -3.222 20.914 25.967 1.00 13.83 APEP

ATOM 531 CG ARG 68 -3.715 20.741 24.538 1.00 13.10 APEP

ATOM 532 CD ARG 68 -2.626 21.128 23.542 1.00 13.89 APEP

ATOM 533 NE ARG 68 -2.317 22.556 23.590 1.00 12.94 APEP

ATOM 534 CZ ARG 68 -1.244 23.111 23.033 1.00 11.20 APEP

ATOM 535 NH1 ARG 68 -0.372 22.351 22.383 1.00 10.56 APEP

ATOM 536 NH2 ARG 68 -1.042 24.420 23.135 1.00 5.87 APEP

ATOM 537 C ARG 68 -3.631 20.746 28.415 1.00 11.74 APEP

ATOM 538 O ARG 68 -3.420 21.789 29.032 1.00 10.94 APEP

ATOM 539 N GLY 69 -3.295 19.536 28.867 1.00 11.61 APEP

ATOM 540 CA GLY 69 -2.641 19.334 30.147 1.00 14.23 APEP

ATOM 541 C GLY 69 -2.565 17.857 30.518 1.00 16.11 APEP

ATOM 542 O GLY 69 -2.998 17.001 29.747 1.00 16.74 APEP

ATOM 543 N ASN 70 -2.006 17.551 31.687 1.00 16.09 APEP

ATOM 544 CA ASN 70 -1.896 16.172 32.156 1.00 17.23 APEP

ATOM 545 CB ASN 70 -0.439 15.704 32.132 1.00 18.05 APEP

ATOM 546 CG ASN 70 -0.310 14.203 32.291 1.00 20.68 APEP

ATOM 547 OD1 ASN 70 -1.204 13.452 31.894 1.00 20.26 APEP

ATOM 548 ND2 ASN 70 0.806 13.752 32.874 1.00 20.67 APEP

ATOM 549 C ASN 70 -2.452 16.025 33.578 1.00 16.86 APEP

ATOM 550 O ASN 70 -1.717 15.739 34.523 1.00 15.70 APEP

ATOM 551 N PRO 71 -3.770 16.204 33.738 1.00 16.37 APEP

ATOM 552 CD PRO 71 -4.467 16.046 35.026 1.00 16.71 APEP

ATOM 553 CA PRO 71 -4.713 16.522 32.663 1.00 16.24 APEP

ATOM 554 CB PRO 71 -5.962 15.777 33.086 1.00 16.30 APEP

ATOM 555 CG PRO 71 -5.928 15.906 34.614 1.00 16.81 APEP

ATOM 556 C PRO 71 -4.999 18.012 32.491 1.00 16.23 APEP

ATOM 557 O PRO 71 -4.638 18.837 33.338 1.00 16.06 APEP

ATOM 558 N GLY 72 -5.666 18.342 31.392 1.00 13.86 APEP

ATOM 559 CA GLY 72 -6.042 19.720 31.143 1.00 14.67 APEP

ATOM 560 C GLY 72 -7.437 19.902 31.716 1.00 14.79 APEP

ATOM 561 O GLY 72 -8.030 18.935 32.192 1.00 16.06 APEP

ATOM 562 N PRO 73 -8.000 21.115 31.695 1.00 13.41 APEP

ATOM 563 CD PRO 73 -9.343 21.354 32.253 1.00 13.38 APEP

ATOM 564 CA PRO 73 -7.412 22.347 31.164 1.00 14.44 APEP

ATOM 565 CB PRO 73 -8.621 23.250 30.976 1.00 13.74 APEP

ATOM 566 CG PRO 73 -9.519 22.850 32.113 1.00 12.91 APEP

ATOM 567 C PRO 73 -6.412 22.977 32.129 1.00 13.52 APEP

ATOM 568 O PRO 73 -6.271 22.537 33.268 1.00 13.30 APEP

ATOM 569 N GLN 74 -5.713 24.004 31.658 1.00 12.54 APEP

ATOM 570 CA GLN 74 -4.782 24.723 32.506 1.00 11.28 APEP

ATOM 571 CB GLN 74 -3.708 25.433 31.672 1.00 10.31 APEP

ATOM 572 CG GLN 74 -2.658 24.505 31.043 1.00 9.27 APEP

ATOM 573 CD GLN 74 -2.070 23.484 32.024 1.00 12.07 APEP

ATOM 574 OE1 GLN 74 -1.558 23.838 33.087 1.00 10.98 APEP

ATOM 575 NE2 GLN 74 -2.137 22.210 31.654 1.00 12.44 APEP

ATOM 576 C GLN 74 -5.707 25.736 33.170 1.00 11.59 APEP

ATOM 577 O GLN 74 -6.710 26.139 32.579 1.00 12.75 APEP

ATOM 578 N PRO 75 -5.393 26.158 34.401 1.00 10.76 APEP

ATOM 579 CD PRO 75 -4.230 25.770 35.221 1.00 10.45 APEP

ATOM 580 CA PRO 75 -6.254 27.128 35.092 1.00 10.89 APEP

ATOM 581 CB PRO 75 -5.876 26.948 36.561 1.00 10.78 APEP

ATOM 582 CG PRO 75 -4.430 26.540 36.515 1.00 9.92 APEP

ATOM 583 C PRO 75 -6.077 28.571 34.642 1.00 10.22 APEP

ATOM 584 O PRO 75 -5.017 28.955 34.170 1.00 11.44 APEP

ATOM 585 N PRO 76 -7.123 29.394 34.782 1.00 11.88 APEP

ATOM 586 CD PRO 76 -8.461 29.107 35.327 1.00 13.85 APEP

ATOM 587 CA PRO 76 -6.968 30.791 34.365 1.00 13.97 APEP

ATOM 588 CB PRO 76 -8.383 31.373 34.440 1.00 12.73 APEP

ATOM 589 CG PRO 76 -9.284 30.245 34.830 1.00 14.35 APEP

ATOM 590 C PRO 76 -6.000 31.507 35.315 1.00 14.80 APEP

ATOM 591 O PRO 76 -5.672 30.987 36.382 1.00 14.45 APEP

ATOM 592 N ALA 77 -5.553 32.697 34.930 1.00 15.36 APEP

ATOM 593 CA ALA 77 -4.617 33.458 35.745 1.00 16.81 APEP

ATOM 594 CB ALA 77 -3.264 33.531 35.050 1.00 15.29 APEP

ATOM 595 C ALA 77 -5.111 34.864 36.034 1.00 18.21 APEP

ATOM 596 O ALA 77 -5.946 35.414 35.315 1.00 18.77 APEP

ATOM 597 N LYS 78 -4.578 35.447 37.095 1.00 19.69 APEP

ATOM 598 CA LYS 78 -4.944 36.799 37.487 1.00 21.45 APEP

ATOM 599 CB LYS 78 -5.453 36.779 38.934 1.00 19.28 APEP

ATOM 600 CG LYS 78 -5.408 38.109 39.658 1.00 21.07 APEP

ATOM 601 CD LYS 78 -5.939 37.969 41.078 1.00 22.93 APEP

ATOM 602 CE LYS 78 -7.039 38.993 41.380 1.00 22.07 APEP

ATOM 603 NZ LYS 78 -8.416 38.442 41.192 1.00 18.83 APEP

ATOM 604 C LYS 78 -3.681 37.655 37.351 1.00 20.82 APEP

ATOM 605 O LYS 78 -3.735 38.825 36.973 1.00 22.49 APEP

ATOM 606 N ASN 79 -2.546 37.024 37.632 1.00 20.62 APEP

ATOM 607 CA ASN 79 -1.225 37.650 37.596 1.00 20.96 APEP

ATOM 608 CB ASN 79 -0.322 36.893 38.591 1.00 21.73 APEP

ATOM 609 CG ASN 79 0.895 37.696 39.041 1.00 26.41 APEP

ATOM 610 OD1 ASN 79 1.739 37.194 39.794 1.00 27.31 APEP

ATOM 611 ND2 ASN 79 0.995 38.941 38.586 1.00 30.92 APEP

ATOM 612 C ASN 79 -0.570 37.649 36.199 1.00 20.23 APEP

ATOM 613 O ASN 79 0.658 37.679 36.109 1.00 20.51 APEP

ATOM 614 N MET 80 -1.354 37.648 35.117 1.00 17.31 APEP

ATOM 615 CA MET 80 -0.745 37.581 33.783 1.00 16.95 APEP

ATOM 616 CB MET 80 -1.334 36.398 33.014 1.00 14.01 APEP

ATOM 617 CG MET 80 -0.475 35.941 31.848 1.00 10.95 APEP

ATOM 618 SD MET 80 1.001 35.032 32.360 1.00 10.66 APEP

ATOM 619 CE MET 80 0.309 33.392 32.631 1.00 9.65 APEP

ATOM 620 C MET 80 -0.743 38.809 32.863 1.00 17.13 APEP

ATOM 621 O MET 80 -1.785 39.236 32.377 1.00 17.76 APEP

ATOM 622 N LYS 81 0.450 39.343 32.602 1.00 16.19 APEP

ATOM 623 CA LYS 81 0.621 40.509 31.734 1.00 15.79 APEP

ATOM 624 CB LYS 81 1.360 41.626 32.480 1.00 19.28 APEP

ATOM 625 CG LYS 81 0.485 42.479 33.376 1.00 23.64 APEP

ATOM 626 CD LYS 81 1.283 42.976 34.581 1.00 29.37 APEP

ATOM 627 CE LYS 81 0.652 42.551 35.914 1.00 30.79 APEP

ATOM 628 NZ LYS 81 1.639 41.850 36.794 1.00 31.43 APEP

ATOM 629 C LYS 81 1.428 40.135 30.489 1.00 15.20 APEP

ATOM 630 O LYS 81 2.144 39.133 30.478 1.00 13.27 APEP

ATOM 631 N ASN 82 1.317 40.947 29.445 1.00 14.40 APEP

ATOM 632 CA ASN 82 2.047 40.695 28.214 1.00 14.06 APEP

ATOM 633 CB ASN 82 1.442 41.492 27.059 1.00 15.84 APEP

ATOM 634 CG ASN 82 0.081 40.970 26.636 1.00 19.06 APEP

ATOM 635 OD1 ASN 82 -0.837 41.746 26.366 1.00 20.37 APEP

ATOM 636 ND2 ASN 82 -0.058 39.649 26.579 1.00 20.55 APEP

ATOM 637 C ASN 82 3.496 41.107 28.400 1.00 11.87 APEP

ATOM 638 O ASN 82 3.800 41.968 29.226 1.00 11.67 APEP

ATOM 639 N LEU 83 4.384 40.483 27.633 1.00 10.14 APEP

ATOM 640 CA LEU 83 5.809 40.789 27.684 1.00 9.10 APEP

ATOM 641 CB LEU 83 6.648 39.577 27.272 1.00 9.30 APEP

ATOM 642 CG LEU 83 6.373 38.230 27.935 1.00 9.01 APEP

ATOM 643 CD1 LEU 83 7.077 37.119 27.178 1.00 10.20 APEP

ATOM 644 CD2 LEU 83 6.843 38.283 29.378 1.00 10.62 APEP

ATOM 645 C LEU 83 6.104 41.919 26.718 1.00 7.69 APEP

ATOM 646 O LEU 83 5.285 42.254 25.866 1.00 7.01 APEP

ATOM 647 N VAL 84 7.277 42.516 26.878 1.00 7.90 APEP

ATOM 648 CA VAL 84 7.736 43.585 26.004 1.00 9.09 APEP

ATOM 649 CB VAL 84 7.888 44.947 26.765 1.00 9.60 APEP

ATOM 650 CG1 VAL 84 6.511 45.476 27.152 1.00 11.40 APEP

ATOM 651 CG2 VAL 84 8.753 44.788 28.003 1.00 8.85 APEP

ATOM 652 C VAL 84 9.088 43.110 25.479 1.00 8.16 APEP

ATOM 653 O VAL 84 9.720 42.245 26.086 1.00 7.18 APEP

ATOM 654 N TRP 85 9.524 43.637 24.343 1.00 9.08 APEP

ATOM 655 CA TRP 85 10.807 43.222 23.801 1.00 8.24 APEP

ATOM 656 CB TRP 85 10.844 43.412 22.283 1.00 7.78 APEP

ATOM 657 CG TRP 85 12.054 42.789 21.623 1.00 7.96 APEP

ATOM 658 CD2 TRP 85 12.162 41.460 21.092 1.00 6.06 APEP

ATOM 659 CE2 TRP 85 13.459 41.330 20.544 1.00 5.27 APEP

ATOM 660 CE3 TRP 85 11.290 40.366 21.023 1.00 5.63 APEP

ATOM 661 CD1 TRP 85 13.260 43.392 21.384 1.00 6.75 APEP

ATOM 662 NE1 TRP 85 14.104 42.522 20.737 1.00 5.69 APEP

ATOM 663 CZ2 TRP 85 13.905 40.153 19.935 1.00 5.15 APEP

ATOM 664 CZ3 TRP 85 11.736 39.192 20.414 1.00 3.85 APEP

ATOM 665 CH2 TRP 85 13.035 39.099 19.879 1.00 3.87 APEP

ATOM 666 C TRP 85 11.928 44.018 24.451 1.00 9.70 APEP

ATOM 667 O TRP 85 11.790 45.214 24.713 1.00 12.63 APEP

ATOM 668 N ASN 86 13.036 43.340 24.722 1.00 9.17 APEP

ATOM 669 CA ASN 86 14.191 43.980 25.340 1.00 8.03 APEP

ATOM 670 CB ASN 86 14.399 43.407 26.748 1.00 4.83 APEP

ATOM 671 CG ASN 86 15.484 44.121 27.505 1.00 5.77 APEP

ATOM 672 OD1 ASN 86 16.657 43.826 27.332 1.00 5.23 APEP

ATOM 673 ND2 ASN 86 15.100 45.070 28.349 1.00 6.46 APEP

ATOM 674 C ASN 86 15.450 43.789 24.474 1.00 7.66 APEP

ATOM 675 O ASN 86 15.885 42.667 24.215 1.00 6.17 APEP

ATOM 676 N ASP 87 16.028 44.899 24.030 1.00 8.98 APEP

ATOM 677 CA ASP 87 17.213 44.866 23.179 1.00 9.94 APEP

ATOM 678 CB ASP 87 17.548 46.278 22.695 1.00 10.21 APEP

ATOM 679 CG ASP 87 16.602 46.757 21.622 1.00 9.93 APEP

ATOM 680 OD1 ASP 87 16.065 45.902 20.901 1.00 10.59 APEP

ATOM 681 OD2 ASP 87 16.392 47.980 21.498 1.00 11.15 APEP

ATOM 682 C ASP 87 18.445 44.249 23.827 1.00 11.13 APEP

ATOM 683 O ASP 87 19.271 43.651 23.141 1.00 11.97 APEP

ATOM 684 N GLU 88 18.576 44.395 25.142 1.00 9.78 APEP

ATOM 685 CA GLU 88 19.728 43.836 25.838 1.00 10.33 APEP

ATOM 686 CB GLU 88 19.841 44.422 27.255 1.00 12.21 APEP

ATOM 687 CG GLU 88 21.210 44.213 27.888 1.00 9.98 APEP

ATOM 688 CD GLU 88 21.204 44.400 29.390 1.00 9.88 APEP

ATOM 689 OE1 GLU 88 20.125 44.660 29.957 1.00 13.29 APEP

ATOM 690 OE2 GLU 88 22.282 44.289 30.010 1.00 9.90 APEP

ATOM 691 C GLU 88 19.660 42.314 25.912 1.00 9.04 APEP

ATOM 692 O GLU 88 20.651 41.629 25.658 1.00 8.42 APEP

ATOM 693 N LEU 89 18.491 41.789 26.269 1.00 8.21 APEP

ATOM 694 CA LEU 89 18.305 40.343 26.367 1.00 7.65 APEP

ATOM 695 CB LEU 89 16.881 40.016 26.824 1.00 7.64 APEP

ATOM 696 CG LEU 89 16.499 40.394 28.254 1.00 6.63 APEP

ATOM 697 CD1 LEU 89 15.111 39.904 28.549 1.00 5.53 APEP

ATOM 698 CD2 LEU 89 17.487 39.785 29.237 1.00 7.49 APEP

ATOM 699 C LEU 89 18.554 39.719 24.997 1.00 8.92 APEP

ATOM 700 O LEU 89 19.214 38.689 24.885 1.00 7.56 APEP

ATOM 701 N ALA 90 18.010 40.357 23.964 1.00 8.77 APEP

ATOM 702 CA ALA 90 18.162 39.902 22.588 1.00 9.89 APEP

ATOM 703 CB ALA 90 17.406 40.830 21.654 1.00 6.21 APEP

ATOM 704 C ALA 90 19.640 39.849 22.197 1.00 9.83 APEP

ATOM 705 O ALA 90 20.064 38.940 21.491 1.00 10.34 APEP

ATOM 706 N TYR 91 20.415 40.821 22.672 1.00 10.22 APEP

ATOM 707 CA TYR 91 21.846 40.894 22.380 1.00 10.21 APEP

ATOM 708 CB TYR 91 22.426 42.203 22.921 1.00 11.27 APEP

ATOM 709 CG TYR 91 23.921 42.329 22.730 1.00 13.72 APEP

ATOM 710 CD1 TYR 91 24.458 42.653 21.487 1.00 14.77 APEP

ATOM 711 CE1 TYR 91 25.837 42.747 21.301 1.00 16.40 APEP

ATOM 712 CD2 TYR 91 24.802 42.104 23.788 1.00 14.30 APEP

ATOM 713 CE2 TYR 91 26.178 42.195 23.614 1.00 14.06 APEP

ATOM 714 CZ TYR 91 26.688 42.516 22.370 1.00 18.00 APEP

ATOM 715 OH TYR 91 28.052 42.608 22.191 1.00 18.78 APEP

ATOM 716 C TYR 91 22.620 39.714 22.967 1.00 11.02 APEP

ATOM 717 O TYR 91 23.411 39.077 22.279 1.00 11.79 APEP

ATOM 718 N VAL 92 22.397 39.432 24.244 1.00 10.38 APEP

ATOM 719 CA VAL 92 23.075 38.325 24.903 1.00 8.66 APEP

ATOM 720 CB VAL 92 22.785 38.319 26.427 1.00 8.13 APEP

ATOM 721 CG1 VAL 92 23.488 37.142 27.095 1.00 5.04 APEP

ATOM 722 CG2 VAL 92 23.267 39.622 27.046 1.00 6.97 APEP

ATOM 723 C VAL 92 22.634 37.002 24.286 1.00 9.57 APEP

ATOM 724 O VAL 92 23.418 36.063 24.194 1.00 10.64 APEP

ATOM 725 N ALA 93 21.376 36.933 23.858 1.00 9.31 APEP

ATOM 726 CA ALA 93 20.854 35.722 23.238 1.00 9.67 APEP

ATOM 727 CB ALA 93 19.349 35.848 23.030 1.00 8.26 APEP

ATOM 728 C ALA 93 21.561 35.489 21.898 1.00 9.72 APEP

ATOM 729 O ALA 93 21.954 34.366 21.581 1.00 10.89 APEP

ATOM 730 N GLN 94 21.730 36.565 21.130 1.00 8.57 APEP

ATOM 731 CA GLN 94 22.386 36.515 19.828 1.00 6.19 APEP

ATOM 732 CB GLN 94 22.316 37.892 19.162 1.00 7.13 APEP

ATOM 733 CG GLN 94 22.606 37.891 17.668 1.00 6.55 APEP

ATOM 734 CD GLN 94 21.778 36.875 16.911 1.00 6.86 APEP

ATOM 735 OE1 GLN 94 20.551 37.018 16.775 1.00 7.69 APEP

ATOM 736 NE2 GLN 94 22.441 35.836 16.412 1.00 4.45 APEP

ATOM 737 C GLN 94 23.843 36.082 19.946 1.00 7.41 APEP

ATOM 738 O GLN 94 24.302 35.217 19.203 1.00 8.55 APEP

ATOM 739 N VAL 95 24.574 36.699 20.868 1.00 7.81 APEP

ATOM 740 CA VAL 95 25.971 36.357 21.089 1.00 6.18 APEP

ATOM 741 CB VAL 95 26.551 37.112 22.327 1.00 8.06 APEP

ATOM 742 CG1 VAL 95 27.899 36.523 22.728 1.00 8.13 APEP

ATOM 743 CG2 VAL 95 26.716 38.583 22.011 1.00 7.34 APEP

ATOM 744 C VAL 95 26.091 34.855 21.324 1.00 7.07 APEP

ATOM 745 O VAL 95 26.949 34.199 20.737 1.00 3.91 APEP

ATOM 746 N TRP 96 25.224 34.312 22.180 1.00 8.26 APEP

ATOM 747 CA TRP 96 25.244 32.879 22.494 1.00 8.88 APEP

ATOM 748 CB TRP 96 24.284 32.555 23.650 1.00 6.54 APEP

ATOM 749 CG TRP 96 24.258 31.089 24.030 1.00 7.96 APEP

ATOM 750 CD2 TRP 96 25.390 30.232 24.240 1.00 7.64 APEP

ATOM 751 CE2 TRP 96 24.892 28.946 24.549 1.00 7.17 APEP

ATOM 752 CE3 TRP 96 26.778 30.426 24.197 1.00 8.39 APEP

ATOM 753 CD1 TRP 96 23.150 30.305 24.217 1.00 8.48 APEP

ATOM 754 NE1 TRP 96 23.524 29.016 24.527 1.00 5.50 APEP

ATOM 755 CZ2 TRP 96 25.734 27.859 24.812 1.00 6.91 APEP

ATOM 756 CZ3 TRP 96 27.614 29.341 24.459 1.00 8.97 APEP

ATOM 757 CH2 TRP 96 27.087 28.076 24.761 1.00 8.90 APEP

ATOM 758 C TRP 96 24.867 32.033 21.281 1.00 8.85 APEP

ATOM 759 O TRP 96 25.500 31.011 21.007 1.00 8.27 APEP

ATOM 760 N ALA 97 23.827 32.453 20.566 1.00 7.57 APEP

ATOM 761 CA ALA 97 23.390 31.721 19.381 1.00 9.88 APEP

ATOM 762 CB ALA 97 22.182 32.415 18.742 1.00 4.36 APEP

ATOM 763 C ALA 97 24.547 31.665 18.387 1.00 8.40 APEP

ATOM 764 O ALA 97 24.777 30.647 17.734 1.00 8.69 APEP

ATOM 765 N ASN 98 25.282 32.767 18.300 1.00 9.32 APEP

ATOM 766 CA ASN 98 26.402 32.883 17.375 1.00 9.40 APEP

ATOM 767 CB ASN 98 26.898 34.336 17.347 1.00 8.07 APEP

ATOM 768 CG ASN 98 26.084 35.217 16.402 1.00 8.00 APEP

ATOM 769 OD1 ASN 98 25.093 34.776 15.821 1.00 11.11 APEP

ATOM 770 ND2 ASN 98 26.500 36.464 16.250 1.00 9.71 APEP

ATOM 771 C ASN 98 27.568 31.926 17.647 1.00 9.78 APEP

ATOM 772 O ASN 98 28.524 31.874 16.869 1.00 8.97 APEP

ATOM 773 N GLN 99 27.492 31.160 18.733 1.00 8.27 APEP

ATOM 774 CA GLN 99 28.556 30.212 19.051 1.00 9.27 APEP

ATOM 775 CB GLN 99 28.774 30.120 20.572 1.00 10.68 APEP

ATOM 776 CG GLN 99 29.117 31.452 21.241 1.00 9.08 APEP

ATOM 777 CD GLN 99 30.119 32.266 20.444 1.00 10.60 APEP

ATOM 778 OE1 GLN 99 31.195 31.780 20.107 1.00 11.69 APEP

ATOM 779 NE2 GLN 99 29.772 33.511 20.146 1.00 12.17 APEP

ATOM 780 C GLN 99 28.205 28.839 18.484 1.00 10.52 APEP

ATOM 781 O GLN 99 29.049 27.942 18.426 1.00 11.67 APEP

ATOM 782 N CYS 100 26.959 28.690 18.047 1.00 11.03 APEP

ATOM 783 CA CYS 100 26.474 27.439 17.470 1.00 12.62 APEP

ATOM 784 C CYS 100 26.711 26.234 18.373 1.00 14.10 APEP

ATOM 785 O CYS 100 27.113 25.166 17.906 1.00 13.71 APEP

ATOM 786 CB CYS 100 27.126 27.182 16.108 1.00 12.51 APEP

ATOM 787 SG CYS 100 26.639 28.321 14.766 1.00 13.92 APEP

ATOM 788 N GLN 101 26.457 26.411 19.667 1.00 13.78 APEP

ATOM 789 CA GLN 101 26.615 25.337 20.640 1.00 14.58 APEP

ATOM 790 CB GLN 101 27.656 25.723 21.696 1.00 16.78 APEP

ATOM 791 CG GLN 101 29.106 25.506 21.269 1.00 19.68 APEP

ATOM 792 CD GLN 101 30.097 26.125 22.239 1.00 20.61 APEP

ATOM 793 OE1 GLN 101 31.113 26.690 21.833 1.00 23.08 APEP

ATOM 794 NE2 GLN 101 29.802 26.023 23.530 1.00 24.57 APEP

ATOM 795 C GLN 101 25.272 25.098 21.323 1.00 14.56 APEP

ATOM 796 O GLN 101 24.987 25.716 22.347 1.00 14.71 APEP

ATOM 797 N TYR 102 24.457 24.201 20.767 1.00 12.66 APEP

ATOM 798 CA TYR 102 23.131 23.911 21.326 1.00 14.54 APEP

ATOM 799 CB TYR 102 22.469 22.721 20.610 1.00 13.93 APEP

ATOM 800 CG TYR 102 21.015 22.531 21.012 1.00 13.05 APEP

ATOM 801 CD1 TYR 102 20.033 23.418 20.574 1.00 11.54 APEP

ATOM 802 CE1 TYR 102 18.710 23.295 20.990 1.00 10.81 APEP

ATOM 803 CD2 TYR 102 20.632 21.505 21.881 1.00 13.43 APEP

ATOM 804 CE2 TYR 102 19.298 21.373 22.307 1.00 13.52 APEP

ATOM 805 CZ TYR 102 18.348 22.276 21.853 1.00 11.37 APEP

ATOM 806 OH TYR 102 17.031 22.154 22.242 1.00 12.72 APEP

ATOM 807 C TYR 102 23.123 23.636 22.824 1.00 14.75 APEP

ATOM 808 O TYR 102 23.825 22.747 23.305 1.00 14.15 APEP

ATOM 809 N GLY 103 22.303 24.399 23.548 1.00 15.34 APEP

ATOM 810 CA GLY 103 22.194 24.241 24.988 1.00 13.83 APEP

ATOM 811 C GLY 103 22.174 25.586 25.698 1.00 14.82 APEP

ATOM 812 O GLY 103 22.051 26.627 25.050 1.00 13.51 APEP

ATOM 813 N HIS 104 22.309 25.576 27.022 1.00 13.28 APEP

ATOM 814 CA HIS 104 22.293 26.821 27.792 1.00 13.00 APEP

ATOM 815 CB HIS 104 21.535 26.627 29.111 1.00 14.84 APEP

ATOM 816 CG HIS 104 20.085 26.309 28.938 1.00 17.77 APEP

ATOM 817 CD2 HIS 104 19.345 25.263 29.370 1.00 18.90 APEP

ATOM 818 ND1 HIS 104 19.224 27.125 28.236 1.00 19.74 APEP

ATOM 819 CE1 HIS 104 18.014 26.594 28.245 1.00 19.42 APEP

ATOM 820 NE2 HIS 104 18.060 25.465 28.925 1.00 19.61 APEP

ATOM 821 C HIS 104 23.689 27.322 28.116 1.00 10.17 APEP

ATOM 822 O HIS 104 24.573 26.532 28.403 1.00 8.70 APEP

ATOM 823 N ASP 105 23.890 28.635 28.058 1.00 10.86 APEP

ATOM 824 CA ASP 105 25.188 29.197 28.417 1.00 12.42 APEP

ATOM 825 CB ASP 105 25.400 30.590 27.794 1.00 10.99 APEP

ATOM 826 CG ASP 105 24.172 31.463 27.875 1.00 11.97 APEP

ATOM 827 OD1 ASP 105 23.054 30.914 27.966 1.00 14.08 APEP

ATOM 828 OD2 ASP 105 24.324 32.705 27.844 1.00 11.83 APEP

ATOM 829 C ASP 105 25.200 29.274 29.949 1.00 13.37 APEP

ATOM 830 O ASP 105 24.145 29.250 30.592 1.00 13.12 APEP

ATOM 831 N THR 106 26.395 29.361 30.522 1.00 14.55 APEP

ATOM 832 CA THR 106 26.573 29.385 31.971 1.00 15.70 APEP

ATOM 833 CB THR 106 28.032 29.051 32.322 1.00 17.02 APEP

ATOM 834 OG1 THR 106 28.349 27.739 31.837 1.00 19.67 APEP

ATOM 835 CG2 THR 106 28.244 29.101 33.815 1.00 19.92 APEP

ATOM 836 C THR 106 26.181 30.661 32.712 1.00 14.86 APEP

ATOM 837 O THR 106 25.648 30.598 33.826 1.00 14.67 APEP

ATOM 838 N CYS 107 26.444 31.813 32.107 1.00 12.86 APEP

ATOM 839 CA CYS 107 26.131 33.086 32.748 1.00 11.94 APEP

ATOM 840 C CYS 107 25.608 34.112 31.741 1.00 11.28 APEP

ATOM 841 O CYS 107 26.354 34.594 30.886 1.00 8.75 APEP

ATOM 842 CB CYS 107 27.389 33.618 33.451 1.00 11.80 APEP

ATOM 843 SG CYS 107 27.155 35.045 34.567 1.00 14.81 APEP

ATOM 844 N ARG 108 24.324 34.448 31.857 1.00 10.42 APEP

ATOM 845 CA ARG 108 23.694 35.408 30.956 1.00 10.25 APEP

ATOM 846 CB ARG 108 22.656 34.703 30.080 1.00 7.60 APEP

ATOM 847 CG ARG 108 21.299 34.525 30.746 1.00 6.23 APEP

ATOM 848 CD ARG 108 20.458 33.460 30.047 1.00 4.46 APEP

ATOM 849 NE ARG 108 21.066 32.136 30.118 1.00 8.96 APEP

ATOM 850 CZ ARG 108 20.688 31.192 30.971 1.00 9.87 APEP

ATOM 851 NH1 ARG 108 19.703 31.427 31.825 1.00 9.20 APEP

ATOM 852 NH2 ARG 108 21.284 30.013 30.968 1.00 9.69 APEP

ATOM 853 C ARG 108 23.015 36.575 31.667 1.00 10.62 APEP

ATOM 854 O ARG 108 22.465 37.454 31.011 1.00 11.81 APEP

ATOM 855 N ASP 109 23.051 36.583 32.998 1.00 10.19 APEP

ATOM 856 CA ASP 109 22.421 37.644 33.784 1.00 9.53 APEP

ATOM 857 CB ASP 109 22.737 37.457 35.267 1.00 11.00 APEP

ATOM 858 CG ASP 109 22.049 36.248 35.864 1.00 10.30 APEP

ATOM 859 OD1 ASP 109 21.137 35.704 35.213 1.00 8.82 APEP

ATOM 860 OD2 ASP 109 22.420 35.839 36.984 1.00 12.03 APEP

ATOM 861 C ASP 109 22.827 39.051 33.368 1.00 10.45 APEP

ATOM 862 O ASP 109 23.931 39.274 32.878 1.00 11.18 APEP

ATOM 863 N VAL 110 21.919 40.001 33.565 1.00 10.47 APEP

ATOM 864 CA VAL 110 22.192 41.400 33.240 1.00 11.15 APEP

ATOM 865 CB VAL 110 21.083 42.025 32.346 1.00 8.57 APEP

ATOM 866 CG1 VAL 110 21.282 41.607 30.884 1.00 8.96 APEP

ATOM 867 CG2 VAL 110 19.711 41.600 32.840 1.00 8.45 APEP

ATOM 868 C VAL 110 22.263 42.168 34.564 1.00 12.34 APEP

ATOM 869 O VAL 110 22.044 41.591 35.631 1.00 11.18 APEP

ATOM 870 N ALA 111 22.567 43.460 34.493 1.00 12.60 APEP

ATOM 871 CA ALA 111 22.670 44.283 35.691 1.00 14.41 APEP

ATOM 872 CB ALA 111 23.192 45.665 35.329 1.00 14.98 APEP

ATOM 873 C ALA 111 21.351 44.412 36.445 1.00 15.05 APEP

ATOM 874 O ALA 111 21.348 44.491 37.665 1.00 17.05 APEP

ATOM 875 N LYS 112 20.233 44.425 35.723 1.00 15.22 APEP

ATOM 876 CA LYS 112 18.919 44.565 36.346 1.00 14.82 APEP

ATOM 877 CB LYS 112 17.889 44.979 35.295 1.00 17.33 APEP

ATOM 878 CG LYS 112 16.518 45.301 35.854 1.00 18.63 APEP

ATOM 879 CD LYS 112 15.722 46.156 34.885 1.00 20.78 APEP

ATOM 880 CE LYS 112 14.275 46.298 35.331 1.00 22.40 APEP

ATOM 881 NZ LYS 112 13.378 46.775 34.230 1.00 24.78 APEP

ATOM 882 C LYS 112 18.395 43.334 37.092 1.00 14.63 APEP

ATOM 883 O LYS 112 17.763 43.462 38.138 1.00 15.19 APEP

ATOM 884 N TYR 113 18.652 42.145 36.565 1.00 14.03 APEP

ATOM 885 CA TYR 113 18.155 40.941 37.211 1.00 12.90 APEP

ATOM 886 CB TYR 113 16.627 40.866 37.062 1.00 14.34 APEP

ATOM 887 CG TYR 113 16.094 41.275 35.701 1.00 13.96 APEP

ATOM 888 CD1 TYR 113 16.725 40.867 34.529 1.00 14.86 APEP

ATOM 889 CE1 TYR 113 16.236 41.234 33.279 1.00 15.41 APEP

ATOM 890 CD2 TYR 113 14.950 42.064 35.590 1.00 15.52 APEP

ATOM 891 CE2 TYR 113 14.447 42.439 34.345 1.00 17.15 APEP

ATOM 892 CZ TYR 113 15.098 42.021 33.192 1.00 18.32 APEP

ATOM 893 OH TYR 113 14.619 42.406 31.958 1.00 20.11 APEP

ATOM 894 C TYR 113 18.761 39.659 36.658 1.00 12.75 APEP

ATOM 895 O TYR 113 19.592 39.685 35.742 1.00 9.39 APEP

ATOM 896 N GLN 114 18.334 38.542 37.241 1.00 11.10 APEP

ATOM 897 CA GLN 114 18.762 37.223 36.820 1.00 11.13 APEP

ATOM 898 CB GLN 114 18.397 36.182 37.872 1.00 13.13 APEP

ATOM 899 CG GLN 114 19.492 35.921 38.881 1.00 17.82 APEP

ATOM 900 CD GLN 114 19.049 34.969 39.971 1.00 21.01 APEP

ATOM 901 OE1 GLN 114 18.984 33.754 39.767 1.00 24.17 APEP

ATOM 902 NE2 GLN 114 18.735 35.517 41.140 1.00 21.13 APEP

ATOM 903 C GLN 114 17.969 36.977 35.549 1.00 10.94 APEP

ATOM 904 O GLN 114 16.851 37.489 35.418 1.00 10.27 APEP

ATOM 905 N VAL 115 18.529 36.195 34.626 1.00 8.78 APEP

ATOM 906 CA VAL 115 17.879 35.936 33.339 1.00 6.98 APEP

ATOM 907 CB VAL 115 18.679 36.628 32.204 1.00 8.14 APEP

ATOM 908 CG1 VAL 115 18.037 36.358 30.868 1.00 9.82 APEP

ATOM 909 CG2 VAL 115 18.750 38.125 32.461 1.00 6.98 APEP

ATOM 910 C VAL 115 17.669 34.457 32.975 1.00 6.17 APEP

ATOM 911 O VAL 115 18.581 33.634 33.093 1.00 4.78 APEP

ATOM 912 N GLY 116 16.449 34.142 32.540 1.00 5.97 APEP

ATOM 913 CA GLY 116 16.105 32.788 32.139 1.00 7.14 APEP

ATOM 914 C GLY 116 16.364 32.568 30.654 1.00 7.72 APEP

ATOM 915 O GLY 116 16.706 33.504 29.930 1.00 6.29 APEP

ATOM 916 N GLN 117 16.195 31.337 30.186 1.00 8.62 APEP

ATOM 917 CA GLN 117 16.456 31.058 28.780 1.00 9.69 APEP

ATOM 918 CB GLN 117 17.980 31.001 28.550 1.00 8.96 APEP

ATOM 919 CG GLN 117 18.419 30.465 27.179 1.00 8.07 APEP

ATOM 920 CD GLN 117 19.935 30.331 27.046 1.00 7.90 APEP

ATOM 921 OE1 GLN 117 20.507 29.288 27.360 1.00 10.49 APEP

ATOM 922 NE2 GLN 117 20.586 31.386 26.575 1.00 7.02 APEP

ATOM 923 C GLN 117 15.813 29.790 28.230 1.00 9.46 APEP

ATOM 924 O GLN 117 15.713 28.775 28.920 1.00 8.69 APEP

ATOM 925 N ASN 118 15.372 29.876 26.978 1.00 10.04 APEP

ATOM 926 CA ASN 118 14.762 28.759 26.253 1.00 9.76 APEP

ATOM 927 CB ASN 118 13.280 29.037 25.950 1.00 9.04 APEP

ATOM 928 CG ASN 118 12.357 28.735 27.127 1.00 9.64 APEP

ATOM 929 OD1 ASN 118 12.696 27.976 28.035 1.00 9.37 APEP

ATOM 930 ND2 ASN 118 11.178 29.337 27.108 1.00 8.63 APEP

ATOM 931 C ASN 118 15.526 28.674 24.926 1.00 9.88 APEP

ATOM 932 O ASN 118 15.847 29.707 24.342 1.00 9.07 APEP

ATOM 933 N VAL 119 15.836 27.464 24.465 1.00 10.24 APEP

ATOM 934 CA VAL 119 16.533 27.288 23.188 1.00 9.82 APEP

ATOM 935 CB VAL 119 18.021 26.811 23.340 1.00 9.70 APEP

ATOM 936 CG1 VAL 119 18.764 27.684 24.349 1.00 11.24 APEP

ATOM 937 CG2 VAL 119 18.072 25.344 23.749 1.00 11.10 APEP

ATOM 938 C VAL 119 15.784 26.247 22.379 1.00 10.42 APEP

ATOM 939 O VAL 119 15.116 25.380 22.939 1.00 7.84 APEP

ATOM 940 N ALA 120 15.894 26.345 21.057 1.00 11.69 APEP

ATOM 941 CA ALA 120 15.224 25.416 20.164 1.00 10.58 APEP

ATOM 942 CB ALA 120 13.853 25.960 19.783 1.00 9.38 APEP

ATOM 943 C ALA 120 16.065 25.203 18.913 1.00 11.91 APEP

ATOM 944 O ALA 120 16.749 26.114 18.447 1.00 11.05 APEP

ATOM 945 N LEU 121 16.005 23.999 18.363 1.00 11.80 APEP

ATOM 946 CA LEU 121 16.762 23.707 17.164 1.00 10.62 APEP

ATOM 947 CB LEU 121 18.219 23.423 17.534 1.00 12.00 APEP

ATOM 948 CG LEU 121 19.162 23.065 16.383 1.00 14.58 APEP

ATOM 949 CD1 LEU 121 19.914 24.310 15.937 1.00 14.77 APEP

ATOM 950 CD2 LEU 121 20.124 21.975 16.830 1.00 16.44 APEP

ATOM 951 C LEU 121 16.190 22.521 16.395 1.00 11.28 APEP

ATOM 952 O LEU 121 15.744 21.540 16.989 1.00 8.33 APEP

ATOM 953 N THR 122 16.183 22.633 15.069 1.00 9.47 APEP

ATOM 954 CA THR 122 15.723 21.551 14.203 1.00 9.80 APEP

ATOM 955 CB THR 122 14.282 21.766 13.691 1.00 8.73 APEP

ATOM 956 OG1 THR 122 14.272 22.801 12.704 1.00 8.66 APEP

ATOM 957 CG2 THR 122 13.357 22.133 14.838 1.00 11.47 APEP

ATOM 958 C THR 122 16.666 21.502 13.009 1.00 9.64 APEP

ATOM 959 O THR 122 17.232 22.524 12.616 1.00 9.15 APEP

ATOM 960 N GLY 123 16.847 20.308 12.451 1.00 9.74 APEP

ATOM 961 CA GLY 123 17.728 20.137 11.313 1.00 8.54 APEP

ATOM 962 C GLY 123 17.048 19.326 10.228 1.00 8.95 APEP

ATOM 963 O GLY 123 16.199 18.482 10.514 1.00 9.03 APEP

ATOM 964 N SER 124 17.420 19.580 8.979 1.00 7.43 APEP

ATOM 965 CA SER 124 16.824 18.874 7.857 1.00 9.14 APEP

ATOM 966 CB SER 124 15.584 19.642 7.393 1.00 10.09 APEP

ATOM 967 OG SER 124 15.333 19.459 6.016 1.00 11.96 APEP

ATOM 968 C SER 124 17.827 18.718 6.709 1.00 9.54 APEP

ATOM 969 O SER 124 18.716 19.551 6.537 1.00 10.56 APEP

ATOM 970 N THR 125 17.693 17.641 5.936 1.00 10.06 APEP

ATOM 971 CA THR 125 18.591 17.415 4.812 1.00 10.19 APEP

ATOM 972 CB THR 125 18.513 15.974 4.257 1.00 11.20 APEP

ATOM 973 OG1 THR 125 17.142 15.593 4.086 1.00 12.88 APEP

ATOM 974 CG2 THR 125 19.218 15.001 5.191 1.00 8.70 APEP

ATOM 975 C THR 125 18.274 18.369 3.676 1.00 9.96 APEP

ATOM 976 O THR 125 19.081 18.532 2.772 1.00 10.12 APEP

ATOM 977 N ALA 126 17.103 18.999 3.731 1.00 10.40 APEP

ATOM 978 CA ALA 126 16.678 19.955 2.705 1.00 11.31 APEP

ATOM 979 CB ALA 126 15.169 19.863 2.492 1.00 11.00 APEP

ATOM 980 C ALA 126 17.060 21.383 3.086 1.00 13.19 APEP

ATOM 981 O ALA 126 17.116 21.735 4.271 1.00 12.55 APEP

ATOM 982 N ALA 127 17.314 22.207 2.078 1.00 12.78 APEP

ATOM 983 CA ALA 127 17.700 23.590 2.315 1.00 15.72 APEP

ATOM 984 CB ALA 127 18.471 24.135 1.106 1.00 15.36 APEP

ATOM 985 C ALA 127 16.496 24.474 2.610 1.00 17.23 APEP

ATOM 986 O ALA 127 16.080 25.271 1.773 1.00 17.44 APEP

ATOM 987 N LYS 128 15.941 24.324 3.810 1.00 19.74 APEP

ATOM 988 CA LYS 128 14.790 25.110 4.251 1.00 19.25 APEP

ATOM 989 CB LYS 128 13.481 24.387 3.917 1.00 21.28 APEP

ATOM 990 CG LYS 128 12.930 24.721 2.527 1.00 26.82 APEP

ATOM 991 CD LYS 128 12.083 25.993 2.549 1.00 27.74 APEP

ATOM 992 CE LYS 128 11.582 26.365 1.152 1.00 27.56 APEP

ATOM 993 NZ LYS 128 10.376 27.258 1.191 1.00 24.53 APEP

ATOM 994 C LYS 128 14.918 25.311 5.760 1.00 20.56 APEP

ATOM 995 O LYS 128 15.299 24.384 6.488 1.00 18.95 APEP

ATOM 996 N TYR 129 14.599 26.517 6.224 1.00 19.02 APEP

ATOM 997 CA TYR 129 14.712 26.853 7.644 1.00 18.90 APEP

ATOM 998 CB TYR 129 15.728 27.985 7.812 1.00 17.17 APEP

ATOM 999 CG TYR 129 17.060 27.645 7.188 1.00 15.78 APEP

ATOM 1000 CD1 TYR 129 17.319 27.934 5.847 1.00 15.45 APEP

ATOM 1001 CE1 TYR 129 18.519 27.564 5.250 1.00 13.12 APEP

ATOM 1002 CD2 TYR 129 18.043 26.984 7.918 1.00 16.01 APEP

ATOM 1003 CE2 TYR 129 19.250 26.610 7.330 1.00 16.66 APEP

ATOM 1004 CZ TYR 129 19.479 26.900 5.994 1.00 15.93 APEP

ATOM 1005 OH TYR 129 20.652 26.495 5.404 1.00 11.93 APEP

ATOM 1006 C TYR 129 13.384 27.213 8.312 1.00 18.94 APEP

ATOM 1007 O TYR 129 12.574 27.980 7.775 1.00 19.85 APEP

ATOM 1008 N ASP 130 13.178 26.645 9.496 1.00 17.23 APEP

ATOM 1009 CA ASP 130 11.953 26.844 10.259 1.00 16.64 APEP

ATOM 1010 CB ASP 130 12.012 26.050 11.568 1.00 18.70 APEP

ATOM 1011 CG ASP 130 11.399 24.677 11.446 1.00 18.76 APEP

ATOM 1012 OD1 ASP 130 11.067 24.267 10.319 1.00 17.38 APEP

ATOM 1013 OD2 ASP 130 11.253 24.005 12.489 1.00 20.96 APEP

ATOM 1014 C ASP 130 11.615 28.285 10.588 1.00 14.91 APEP

ATOM 1015 O ASP 130 12.489 29.111 10.831 1.00 14.08 APEP

ATOM 1016 N ASP 131 10.317 28.557 10.584 1.00 16.25 APEP

ATOM 1017 CA ASP 131 9.759 29.858 10.911 1.00 16.60 APEP

ATOM 1018 CB ASP 131 8.255 29.834 10.571 1.00 19.29 APEP

ATOM 1019 CG ASP 131 7.558 31.166 10.807 1.00 24.36 APEP

ATOM 1020 OD1 ASP 131 8.036 31.978 11.630 1.00 27.58 APEP

ATOM 1021 OD2 ASP 131 6.506 31.396 10.168 1.00 28.19 APEP

ATOM 1022 C ASP 131 9.993 29.961 12.428 1.00 15.04 APEP

ATOM 1023 O ASP 131 9.708 29.012 13.159 1.00 14.34 APEP

ATOM 1024 N PRO 132 10.534 31.092 12.910 1.00 12.77 APEP

ATOM 1025 CD PRO 132 10.950 32.276 12.139 1.00 12.42 APEP

ATOM 1026 CA PRO 132 10.788 31.253 14.354 1.00 13.80 APEP

ATOM 1027 CB PRO 132 11.197 32.722 14.492 1.00 13.81 APEP

ATOM 1028 CG PRO 132 11.711 33.104 13.149 1.00 14.43 APEP

ATOM 1029 C PRO 132 9.592 30.895 15.251 1.00 13.34 APEP

ATOM 1030 O PRO 132 9.758 30.239 16.278 1.00 12.55 APEP

ATOM 1031 N VAL 133 8.396 31.325 14.850 1.00 12.80 APEP

ATOM 1032 CA VAL 133 7.170 31.054 15.591 1.00 12.13 APEP

ATOM 1033 CB VAL 133 5.944 31.661 14.862 1.00 11.80 APEP

ATOM 1034 CG1 VAL 133 4.653 31.032 15.364 1.00 10.96 APEP

ATOM 1035 CG2 VAL 133 5.923 33.159 15.064 1.00 13.44 APEP

ATOM 1036 C VAL 133 6.964 29.549 15.744 1.00 13.10 APEP

ATOM 1037 O VAL 133 6.452 29.083 16.763 1.00 11.95 APEP

ATOM 1038 N LYS 134 7.361 28.796 14.721 1.00 13.08 APEP

ATOM 1039 CA LYS 134 7.227 27.341 14.738 1.00 14.09 APEP

ATOM 1040 CB LYS 134 7.594 26.756 13.374 1.00 14.78 APEP

ATOM 1041 CG LYS 134 7.716 25.238 13.367 1.00 17.92 APEP

ATOM 1042 CD LYS 134 7.273 24.661 12.024 1.00 20.75 APEP

ATOM 1043 CE LYS 134 7.454 23.147 11.974 1.00 21.88 APEP

ATOM 1044 NZ LYS 134 7.979 22.704 10.646 1.00 22.20 APEP

ATOM 1045 C LYS 134 8.125 26.734 15.805 1.00 13.26 APEP

ATOM 1046 O LYS 134 7.775 25.732 16.437 1.00 12.31 APEP

ATOM 1047 N LEU 135 9.289 27.343 15.990 1.00 12.25 APEP

ATOM 1048 CA LEU 135 10.245 26.883 16.987 1.00 12.29 APEP

ATOM 1049 CB LEU 135 11.604 27.551 16.755 1.00 11.92 APEP

ATOM 1050 CG LEU 135 12.371 26.968 15.563 1.00 12.40 APEP

ATOM 1051 CD1 LEU 135 13.673 27.703 15.354 1.00 10.11 APEP

ATOM 1052 CD2 LEU 135 12.633 25.492 15.816 1.00 13.69 APEP

ATOM 1053 C LEU 135 9.711 27.222 18.371 1.00 11.79 APEP

ATOM 1054 O LEU 135 9.862 26.443 19.311 1.00 12.52 APEP

ATOM 1055 N VAL 136 9.070 28.378 18.492 1.00 11.76 APEP

ATOM 1056 CA VAL 136 8.507 28.805 19.773 1.00 11.55 APEP

ATOM 1057 CB VAL 136 7.926 30.236 19.674 1.00 9.15 APEP

ATOM 1058 CG1 VAL 136 7.043 30.531 20.874 1.00 9.61 APEP

ATOM 1059 CG2 VAL 136 9.053 31.247 19.587 1.00 5.53 APEP

ATOM 1060 C VAL 136 7.405 27.836 20.227 1.00 12.73 APEP

ATOM 1061 O VAL 136 7.370 27.421 21.385 1.00 11.68 APEP

ATOM 1062 N LYS 137 6.521 27.477 19.298 1.00 13.14 APEP

ATOM 1063 CA LYS 137 5.422 26.554 19.563 1.00 12.46 APEP

ATOM 1064 CB LYS 137 4.562 26.376 18.307 1.00 12.12 APEP

ATOM 1065 CG LYS 137 3.866 27.659 17.847 1.00 16.24 APEP

ATOM 1066 CD LYS 137 2.763 27.391 16.836 1.00 13.34 APEP

ATOM 1067 CE LYS 137 1.560 28.297 17.064 1.00 16.29 APEP

ATOM 1068 NZ LYS 137 0.433 27.565 17.706 1.00 12.20 APEP

ATOM 1069 C LYS 137 5.939 25.198 20.031 1.00 12.60 APEP

ATOM 1070 O LYS 137 5.183 24.406 20.589 1.00 13.30 APEP

ATOM 1071 N MET 138 7.220 24.924 19.797 1.00 12.70 APEP

ATOM 1072 CA MET 138 7.807 23.662 20.240 1.00 15.80 APEP

ATOM 1073 CB MET 138 9.266 23.545 19.779 1.00 17.09 APEP

ATOM 1074 CG MET 138 9.478 22.767 18.482 1.00 21.36 APEP

ATOM 1075 SD MET 138 11.111 23.089 17.711 1.00 26.01 APEP

ATOM 1076 CE MET 138 12.066 21.673 18.272 1.00 23.00 APEP

ATOM 1077 C MET 138 7.755 23.665 21.768 1.00 15.35 APEP

ATOM 1078 O MET 138 7.447 22.650 22.395 1.00 15.78 APEP

ATOM 1079 N TRP 139 8.069 24.824 22.346 1.00 13.56 APEP

ATOM 1080 CA TRP 139 8.069 25.035 23.791 1.00 10.21 APEP

ATOM 1081 CB TRP 139 8.700 26.395 24.122 1.00 6.88 APEP

ATOM 1082 CG TRP 139 10.112 26.582 23.589 1.00 7.62 APEP

ATOM 1083 CD2 TRP 139 10.746 27.821 23.220 1.00 4.45 APEP

ATOM 1084 CE2 TRP 139 12.051 27.507 22.784 1.00 4.04 APEP

ATOM 1085 CE3 TRP 139 10.335 29.160 23.214 1.00 4.82 APEP

ATOM 1086 CD1 TRP 139 11.037 25.606 23.367 1.00 6.61 APEP

ATOM 1087 NE1 TRP 139 12.203 26.151 22.886 1.00 5.06 APEP

ATOM 1088 CZ2 TRP 139 12.955 28.490 22.347 1.00 2.98 APEP

ATOM 1089 CZ3 TRP 139 11.229 30.137 22.778 1.00 2.00 APEP

ATOM 1090 CH2 TRP 139 12.525 29.795 22.351 1.00 4.18 APEP

ATOM 1091 C TRP 139 6.628 24.997 24.312 1.00 11.53 APEP

ATOM 1092 O TRP 139 6.350 24.419 25.365 1.00 11.91 APEP

ATOM 1093 N GLU 140 5.723 25.622 23.557 1.00 11.23 APEP

ATOM 1094 CA GLU 140 4.306 25.690 23.890 1.00 10.95 APEP

ATOM 1095 CB GLU 140 3.538 26.427 22.798 1.00 9.60 APEP

ATOM 1096 CG GLU 140 3.622 27.919 22.834 1.00 7.49 APEP

ATOM 1097 CD GLU 140 2.893 28.544 21.666 1.00 8.80 APEP

ATOM 1098 OE1 GLU 140 1.937 27.921 21.150 1.00 11.85 APEP

ATOM 1099 OE2 GLU 140 3.277 29.654 21.259 1.00 12.42 APEP

ATOM 1100 C GLU 140 3.672 24.321 24.038 1.00 11.65 APEP

ATOM 1101 O GLU 140 2.891 24.089 24.960 1.00 13.93 APEP

ATOM 1102 N ASP 141 3.993 23.423 23.112 1.00 12.05 APEP

ATOM 1103 CA ASP 141 3.433 22.078 23.106 1.00 13.22 APEP

ATOM 1104 CB ASP 141 3.850 21.346 21.833 1.00 12.72 APEP

ATOM 1105 CG ASP 141 3.200 21.923 20.601 1.00 13.07 APEP

ATOM 1106 OD1 ASP 141 2.240 22.706 20.747 1.00 12.10 APEP

ATOM 1107 OD2 ASP 141 3.646 21.599 19.484 1.00 16.74 APEP

ATOM 1108 C ASP 141 3.782 21.235 24.320 1.00 13.83 APEP

ATOM 1109 O ASP 141 3.199 20.172 24.530 1.00 13.83 APEP

ATOM 1110 N GLU 142 4.726 21.705 25.124 1.00 14.37 APEP

ATOM 1111 CA GLU 142 5.110 20.974 26.323 1.00 13.86 APEP

ATOM 1112 CB GLU 142 6.335 21.626 26.974 1.00 13.22 APEP

ATOM 1113 CG GLU 142 7.619 21.449 26.158 1.00 13.31 APEP

ATOM 1114 CD GLU 142 8.866 21.896 26.889 1.00 11.68 APEP

ATOM 1115 OE1 GLU 142 8.749 22.706 27.829 1.00 14.70 APEP

ATOM 1116 OE2 GLU 142 9.968 21.439 26.523 1.00 10.37 APEP

ATOM 1117 C GLU 142 3.937 20.957 27.301 1.00 14.65 APEP

ATOM 1118 O GLU 142 3.819 20.049 28.120 1.00 16.37 APEP

ATOM 1119 N VAL 143 3.063 21.954 27.197 1.00 14.52 APEP

ATOM 1120 CA VAL 143 1.904 22.071 28.084 1.00 14.56 APEP

ATOM 1121 CB VAL 143 0.970 23.221 27.644 1.00 14.44 APEP

ATOM 1122 CG1 VAL 143 0.210 22.834 26.376 1.00 12.33 APEP

ATOM 1123 CG2 VAL 143 -0.005 23.548 28.769 1.00 10.75 APEP

ATOM 1124 C VAL 143 1.057 20.809 28.237 1.00 16.78 APEP

ATOM 1125 O VAL 143 0.399 20.631 29.258 1.00 16.28 APEP

ATOM 1126 N LYS 144 1.059 19.942 27.228 1.00 17.87 APEP

ATOM 1127 CA LYS 144 0.281 18.706 27.293 1.00 19.21 APEP

ATOM 1128 CB LYS 144 0.257 18.025 25.913 1.00 21.23 APEP

ATOM 1129 CG LYS 144 1.602 17.471 25.452 1.00 23.20 APEP

ATOM 1130 CD LYS 144 1.578 15.949 25.346 1.00 25.43 APEP

ATOM 1131 CE LYS 144 2.739 15.423 24.506 1.00 25.49 APEP

ATOM 1132 NZ LYS 144 2.960 16.244 23.282 1.00 24.96 APEP

ATOM 1133 C LYS 144 0.852 17.746 28.350 1.00 18.76 APEP

ATOM 1134 O LYS 144 0.188 16.794 28.776 1.00 18.94 APEP

ATOM 1135 N ASP 145 2.080 18.008 28.774 1.00 17.39 APEP

ATOM 1136 CA ASP 145 2.743 17.180 29.778 1.00 18.35 APEP

ATOM 1137 CB ASP 145 4.199 16.916 29.364 1.00 20.30 APEP

ATOM 1138 CG ASP 145 4.316 15.942 28.195 1.00 20.35 APEP

ATOM 1139 OD1 ASP 145 3.374 15.153 27.959 1.00 22.15 APEP

ATOM 1140 OD2 ASP 145 5.359 15.966 27.510 1.00 21.64 APEP

ATOM 1141 C ASP 145 2.714 17.829 31.173 1.00 17.37 APEP

ATOM 1142 O ASP 145 3.069 17.192 32.164 1.00 15.03 APEP

ATOM 1143 N TYR 146 2.284 19.090 31.240 1.00 17.14 APEP

ATOM 1144 CA TYR 146 2.200 19.821 32.506 1.00 15.39 APEP

ATOM 1145 CB TYR 146 2.368 21.320 32.264 1.00 14.76 APEP

ATOM 1146 CG TYR 146 2.696 22.071 33.533 1.00 15.28 APEP

ATOM 1147 CD1 TYR 146 3.992 22.053 34.065 1.00 14.62 APEP

ATOM 1148 CE1 TYR 146 4.286 22.682 35.277 1.00 13.76 APEP

ATOM 1149 CD2 TYR 146 1.705 22.743 34.242 1.00 14.99 APEP

ATOM 1150 CE2 TYR 146 1.991 23.377 35.457 1.00 13.01 APEP

ATOM 1151 CZ TYR 146 3.281 23.340 35.964 1.00 12.87 APEP

ATOM 1152 OH TYR 146 3.563 23.958 37.162 1.00 12.82 APEP

ATOM 1153 C TYR 146 0.906 19.580 33.294 1.00 16.31 APEP

ATOM 1154 O TYR 146 -0.202 19.837 32.804 1.00 15.92 APEP

ATOM 1155 N ASN 147 1.062 19.097 34.525 1.00 15.90 APEP

ATOM 1156 CA ASN 147 -0.066 18.792 35.415 1.00 17.53 APEP

ATOM 1157 CB ASN 147 0.265 17.551 36.248 1.00 17.07 APEP

ATOM 1158 CG ASN 147 -0.851 17.172 37.193 1.00 18.14 APEP

ATOM 1159 OD1 ASN 147 -1.885 17.835 37.242 1.00 19.58 APEP

ATOM 1160 ND2 ASN 147 -0.651 16.096 37.949 1.00 15.35 APEP

ATOM 1161 C ASN 147 -0.405 19.957 36.355 1.00 17.15 APEP

ATOM 1162 O ASN 147 0.289 20.196 37.334 1.00 16.44 APEP

ATOM 1163 N PRO 148 -1.499 20.677 36.082 1.00 17.84 APEP

ATOM 1164 CD PRO 148 -2.462 20.508 34.981 1.00 16.74 APEP

ATOM 1165 CA PRO 148 -1.854 21.805 36.951 1.00 19.69 APEP

ATOM 1166 CB PRO 148 -2.982 22.504 36.189 1.00 17.29 APEP

ATOM 1167 CG PRO 148 -3.588 21.436 35.367 1.00 17.85 APEP

ATOM 1168 C PRO 148 -2.246 21.467 38.395 1.00 21.26 APEP

ATOM 1169 O PRO 148 -2.040 22.285 39.289 1.00 22.85 APEP

ATOM 1170 N LYS 149 -2.802 20.275 38.624 1.00 23.35 APEP

ATOM 1171 CA LYS 149 -3.219 19.862 39.970 1.00 25.52 APEP

ATOM 1172 CB LYS 149 -4.006 18.546 39.917 1.00 25.99 APEP

ATOM 1173 CG LYS 149 -5.036 18.477 38.800 1.00 29.64 APEP

ATOM 1174 CD LYS 149 -6.438 18.800 39.307 1.00 30.49 APEP

ATOM 1175 CE LYS 149 -7.162 19.775 38.382 1.00 30.51 APEP

ATOM 1176 NZ LYS 149 -8.401 20.351 39.004 1.00 30.17 APEP

ATOM 1177 C LYS 149 -2.041 19.704 40.929 1.00 26.61 APEP

ATOM 1178 O LYS 149 -2.153 19.082 41.993 1.00 27.31 APEP

ATOM 1179 N LYS 150 -0.905 20.271 40.559 1.00 26.69 APEP

ATOM 1180 CA LYS 150 0.262 20.186 41.408 1.00 27.83 APEP

ATOM 1181 CB LYS 150 0.904 18.795 41.260 1.00 26.22 APEP

ATOM 1182 CG LYS 150 2.205 18.718 40.495 1.00 25.69 APEP

ATOM 1183 CD LYS 150 2.416 17.320 39.908 1.00 25.52 APEP

ATOM 1184 CE LYS 150 2.140 16.214 40.922 1.00 24.65 APEP

ATOM 1185 NZ LYS 150 0.695 15.847 40.971 1.00 23.30 APEP

ATOM 1186 C LYS 150 1.218 21.320 41.062 1.00 29.22 APEP

ATOM 1187 O LYS 150 1.504 21.577 39.895 1.00 31.30 APEP

ATOM 1188 N LYS 151 1.681 22.023 42.088 1.00 30.63 APEP

ATOM 1189 CA LYS 151 2.581 23.148 41.896 1.00 29.98 APEP

ATOM 1190 CB LYS 151 3.134 23.622 43.244 1.00 30.75 APEP

ATOM 1191 CG LYS 151 2.308 24.738 43.888 1.00 32.85 APEP

ATOM 1192 CD LYS 151 2.605 26.093 43.246 1.00 32.11 APEP

ATOM 1193 CE LYS 151 1.512 27.104 43.562 1.00 30.61 APEP

ATOM 1194 NZ LYS 151 2.061 28.331 44.196 1.00 27.07 APEP

ATOM 1195 C LYS 151 3.720 22.801 40.956 1.00 28.42 APEP

ATOM 1196 O LYS 151 3.984 21.633 40.685 1.00 28.09 APEP

ATOM 1197 N PHE 152 4.377 23.842 40.460 1.00 28.09 APEP

ATOM 1198 CA PHE 152 5.494 23.719 39.539 1.00 27.23 APEP

ATOM 1199 CB PHE 152 6.138 25.098 39.349 1.00 23.04 APEP

ATOM 1200 CG PHE 152 7.486 25.064 38.687 1.00 21.73 APEP

ATOM 1201 CD1 PHE 152 7.595 24.951 37.307 1.00 19.77 APEP

ATOM 1202 CD2 PHE 152 8.646 25.171 39.442 1.00 21.08 APEP

ATOM 1203 CE1 PHE 152 8.833 24.948 36.688 1.00 18.18 APEP

ATOM 1204 CE2 PHE 152 9.894 25.169 38.832 1.00 20.33 APEP

ATOM 1205 CZ PHE 152 9.986 25.057 37.447 1.00 20.45 APEP

ATOM 1206 C PHE 152 6.543 22.708 39.996 1.00 28.98 APEP

ATOM 1207 O PHE 152 6.821 21.736 39.293 1.00 29.79 APEP

ATOM 1208 N SER 153 7.112 22.940 41.176 1.00 30.67 APEP

ATOM 1209 CA SER 153 8.162 22.084 41.735 1.00 32.34 APEP

ATOM 1210 CB SER 153 8.313 22.357 43.234 1.00 33.66 APEP

ATOM 1211 OG SER 153 9.539 21.834 43.713 1.00 35.63 APEP

ATOM 1212 C SER 153 7.990 20.581 41.522 1.00 31.88 APEP

ATOM 1213 O SER 153 8.977 19.859 41.342 1.00 29.52 APEP

ATOM 1214 N GLY 154 6.744 20.113 41.547 1.00 32.09 APEP

ATOM 1215 CA GLY 154 6.488 18.694 41.373 1.00 31.42 APEP

ATOM 1216 C GLY 154 6.124 18.282 39.962 1.00 31.52 APEP

ATOM 1217 O GLY 154 5.317 17.371 39.771 1.00 31.82 APEP

ATOM 1218 N ASN 155 6.719 18.941 38.973 1.00 30.65 APEP

ATOM 1219 CA ASN 155 6.448 18.635 37.573 1.00 28.76 APEP

ATOM 1220 CB ASN 155 5.796 19.842 36.893 1.00 27.64 APEP

ATOM 1221 CG ASN 155 4.332 19.614 36.579 1.00 26.54 APEP

ATOM 1222 OD1 ASN 155 3.991 18.873 35.652 1.00 25.37 APEP

ATOM 1223 ND2 ASN 155 3.455 20.248 37.354 1.00 23.70 APEP

ATOM 1224 C ASN 155 7.729 18.257 36.833 1.00 29.00 APEP

ATOM 1225 O ASN 155 8.828 18.636 37.242 1.00 28.36 APEP

ATOM 1226 N ASP 156 7.580 17.507 35.744 1.00 28.55 APEP

ATOM 1227 CA ASP 156 8.714 17.071 34.933 1.00 28.23 APEP

ATOM 1228 CB ASP 156 8.219 16.108 33.848 1.00 29.34 APEP

ATOM 1229 CG ASP 156 9.251 15.058 33.474 1.00 30.85 APEP

ATOM 1230 OD1 ASP 156 8.915 13.855 33.515 1.00 30.64 APEP

ATOM 1231 OD2 ASP 156 10.396 15.434 33.133 1.00 32.06 APEP

ATOM 1232 C ASP 156 9.399 18.281 34.284 1.00 27.76 APEP

ATOM 1233 O ASP 156 8.971 18.746 33.230 1.00 27.49 APEP

ATOM 1234 N PHE 157 10.464 18.789 34.897 1.00 28.19 APEP

ATOM 1235 CA PHE 157 11.129 19.951 34.326 1.00 29.10 APEP

ATOM 1236 CB PHE 157 11.963 20.705 35.387 1.00 32.07 APEP

ATOM 1237 CG PHE 157 13.062 19.893 36.038 1.00 35.87 APEP

ATOM 1238 CD1 PHE 157 14.226 19.555 35.330 1.00 36.99 APEP

ATOM 1239 CD2 PHE 157 12.982 19.555 37.397 1.00 35.92 APEP

ATOM 1240 CE1 PHE 157 15.297 18.901 35.966 1.00 36.12 APEP

ATOM 1241 CE2 PHE 157 14.047 18.902 38.044 1.00 36.27 APEP

ATOM 1242 CZ PHE 157 15.208 18.577 37.323 1.00 36.25 APEP

ATOM 1243 C PHE 157 11.967 19.639 33.100 1.00 28.86 APEP

ATOM 1244 O PHE 157 12.423 20.543 32.400 1.00 28.11 APEP

ATOM 1245 N LEU 158 12.158 18.357 32.824 1.00 28.54 APEP

ATOM 1246 CA LEU 158 12.928 17.962 31.653 1.00 28.65 APEP

ATOM 1247 CB LEU 158 13.685 16.657 31.922 1.00 29.80 APEP

ATOM 1248 CG LEU 158 15.217 16.660 31.842 1.00 28.78 APEP

ATOM 1249 CD1 LEU 158 15.688 15.223 31.692 1.00 29.48 APEP

ATOM 1250 CD2 LEU 158 15.706 17.507 30.669 1.00 26.31 APEP

ATOM 1251 C LEU 158 11.962 17.773 30.488 1.00 27.95 APEP

ATOM 1252 O LEU 158 12.375 17.501 29.366 1.00 30.04 APEP

ATOM 1253 N LYS 159 10.671 17.932 30.763 1.00 26.29 APEP

ATOM 1254 CA LYS 159 9.654 17.774 29.734 1.00 24.09 APEP

ATOM 1255 CB LYS 159 8.801 16.542 30.039 1.00 23.00 APEP

ATOM 1256 CG LYS 159 9.619 15.265 30.203 1.00 24.44 APEP

ATOM 1257 CD LYS 159 8.749 14.035 30.403 1.00 23.01 APEP

ATOM 1258 CE LYS 159 7.414 14.154 29.691 1.00 22.17 APEP

ATOM 1259 NZ LYS 159 6.363 13.362 30.384 1.00 21.65 APEP

ATOM 1260 C LYS 159 8.756 19.000 29.595 1.00 22.82 APEP

ATOM 1261 O LYS 159 8.099 19.182 28.566 1.00 20.81 APEP

ATOM 1262 N THR 160 8.731 19.845 30.623 1.00 21.93 APEP

ATOM 1263 CA THR 160 7.889 21.041 30.590 1.00 19.90 APEP

ATOM 1264 CB THR 160 6.684 20.884 31.554 1.00 17.71 APEP

ATOM 1265 OG1 THR 160 7.163 20.721 32.894 1.00 17.45 APEP

ATOM 1266 CG2 THR 160 5.856 19.670 31.182 1.00 14.19 APEP

ATOM 1267 C THR 160 8.619 22.352 30.921 1.00 19.16 APEP

ATOM 1268 O THR 160 8.005 23.419 30.937 1.00 20.80 APEP

ATOM 1269 N GLY 161 9.925 22.270 31.160 1.00 17.07 APEP

ATOM 1270 CA GLY 161 10.707 23.446 31.506 1.00 15.84 APEP

ATOM 1271 C GLY 161 10.629 24.679 30.616 1.00 15.32 APEP

ATOM 1272 O GLY 161 10.825 25.796 31.093 1.00 15.24 APEP

ATOM 1273 N HIS 162 10.356 24.498 29.329 1.00 15.82 APEP

ATOM 1274 CA HIS 162 10.274 25.637 28.421 1.00 14.73 APEP

ATOM 1275 CB HIS 162 10.587 25.193 26.995 1.00 17.02 APEP

ATOM 1276 CG HIS 162 11.979 24.675 26.823 1.00 20.85 APEP

ATOM 1277 CD2 HIS 162 13.162 25.120 27.308 1.00 21.78 APEP

ATOM 1278 ND1 HIS 162 12.268 23.554 26.076 1.00 23.37 APEP

ATOM 1279 CE1 HIS 162 13.572 23.333 26.107 1.00 24.65 APEP

ATOM 1280 NE2 HIS 162 14.136 24.269 26.848 1.00 24.25 APEP

ATOM 1281 C HIS 162 8.893 26.277 28.486 1.00 13.27 APEP

ATOM 1282 O HIS 162 8.753 27.497 28.413 1.00 11.88 APEP

ATOM 1283 N TYR 163 7.875 25.442 28.628 1.00 11.72 APEP

ATOM 1284 CA TYR 163 6.509 25.926 28.733 1.00 11.23 APEP

ATOM 1285 CB TYR 163 5.550 24.750 28.924 1.00 10.40 APEP

ATOM 1286 CG TYR 163 4.271 25.122 29.653 1.00 10.24 APEP

ATOM 1287 CD1 TYR 163 3.369 26.028 29.095 1.00 10.55 APEP

ATOM 1288 CE1 TYR 163 2.196 26.378 29.759 1.00 9.30 APEP

ATOM 1289 CD2 TYR 163 3.970 24.576 30.898 1.00 6.58 APEP

ATOM 1290 CE2 TYR 163 2.802 24.920 31.571 1.00 8.87 APEP

ATOM 1291 CZ TYR 163 1.918 25.818 30.995 1.00 10.63 APEP

ATOM 1292 OH TYR 163 0.745 26.143 31.635 1.00 10.74 APEP

ATOM 1293 C TYR 163 6.387 26.863 29.937 1.00 10.06 APEP

ATOM 1294 O TYR 163 5.919 27.994 29.820 1.00 10.02 APEP

ATOM 1295 N THR 164 6.830 26.382 31.093 1.00 9.35 APEP

ATOM 1296 CA THR 164 6.740 27.143 32.335 1.00 8.02 APEP

ATOM 1297 CB THR 164 7.259 26.301 33.511 1.00 6.41 APEP

ATOM 1298 OG1 THR 164 8.571 25.811 33.209 1.00 5.81 APEP

ATOM 1299 CG2 THR 164 6.312 25.111 33.750 1.00 2.00 APEP

ATOM 1300 C THR 164 7.422 28.513 32.327 1.00 8.62 APEP

ATOM 1301 O THR 164 6.962 29.433 33.010 1.00 8.07 APEP

ATOM 1302 N GLN 165 8.508 28.663 31.570 1.00 8.53 APEP

ATOM 13 03 CA GLN 165 9.183 29.964 31.499 1.00 7.81 APEP

ATOM 1304 CB GLN 165 10.598 29.837 30.930 1.00 7.00 APEP

ATOM 1305 CG GLN 165 11.241 31.179 30.604 1.00 7.27 APEP

ATOM 1306 CD GLN 165 11.537 32.023 31.840 1.00 7.94 APEP

ATOM 1307 OE1 GLN 165 12.631 31.963 32.407 1.00 7.98 APEP

ATOM 1308 NE2 GLN 165 10.566 32.815 32.257 1.00 5.43 APEP

ATOM 1309 C GLN 165 8.370 30.902 30.609 1.00 7.95 APEP

ATOM 1310 O GLN 165 8.363 32.113 30.811 1.00 8.38 APEP

ATOM 1311 N MET 166 7.683 30.330 29.625 1.00 7.26 APEP

ATOM 1312 CA MET 166 6.859 31.118 28.715 1.00 8.35 APEP

ATOM 1313 CB MET 166 6.377 30.253 27.553 1.00 7.91 APEP

ATOM 1314 CG MET 166 7.245 30.356 26.309 1.00 7.80 APEP

ATOM 1315 SD MET 166 6.486 29.500 24.931 1.00 12.38 APEP

ATOM 1316 CE MET 166 5.508 30.823 24.207 1.00 11.75 APEP

ATOM 1317 C MET 166 5.654 31.746 29.409 1.00 6.47 APEP

ATOM 1318 O MET 166 5.313 32.890 29.128 1.00 7.34 APEP

ATOM 1319 N VAL 167 5.011 31.009 30.314 1.00 7.21 APEP

ATOM 1320 CA VAL 167 3.847 31.550 31.018 1.00 7.06 APEP

ATOM 1321 CB VAL 167 2.676 30.526 31.065 1.00 7.32 APEP

ATOM 1322 CG1 VAL 167 2.295 30.107 29.654 1.00 3.76 APEP

ATOM 1323 CG2 VAL 167 3.048 29.321 31.901 1.00 5.77 APEP

ATOM 1324 C VAL 167 4.125 32.046 32.444 1.00 8.39 APEP

ATOM 1325 O VAL 167 3.200 32.211 33.231 1.00 8.06 APEP

ATOM 1326 N TRP 168 5.396 32.290 32.767 1.00 9.11 APEP

ATOM 1327 CA TRP 168 5.793 32.784 34.089 1.00 8.50 APEP

ATOM 1328 CB TRP 168 7.320 32.745 34.232 1.00 7.79 APEP

ATOM 1329 CG TRP 168 7.806 32.690 35.657 1.00 9.67 APEP

ATOM 1330 CD2 TRP 168 7.960 31.519 36.474 1.00 8.72 APEP

ATOM 1331 CE2 TRP 168 8.452 31.946 37.725 1.00 10.18 APEP

ATOM 1332 CE3 TRP 168 7.730 30.153 36.268 1.00 10.13 APEP

ATOM 1333 CD1 TRP 168 8.200 33.747 36.430 1.00 8.39 APEP

ATOM 1334 NE1 TRP 168 8.589 33.309 37.670 1.00 8.61 APEP

ATOM 1335 CZ2 TRP 168 8.722 31.054 38.769 1.00 8.53 APEP

ATOM 1336 CZ3 TRP 168 7.998 29.265 37.305 1.00 6.40 APEP

ATOM 1337 CH2 TRP 168 8.488 29.721 38.539 1.00 9.27 APEP

ATOM 1338 C TRP 168 5.294 34.213 34.275 1.00 8.27 APEP

ATOM 1339 O TRP 168 5.782 35.136 33.627 1.00 8.24 APEP

ATOM 1340 N ALA 169 4.324 34.392 35.167 1.00 7.85 APEP

ATOM 1341 CA ALA 169 3.734 35.704 35.415 1.00 7.42 APEP

ATOM 1342 CB ALA 169 2.668 35.585 36.476 1.00 6.86 APEP

ATOM 1343 C ALA 169 4.715 36.805 35.797 1.00 9.10 APEP

ATOM 1344 O ALA 169 4.525 37.968 35.433 1.00 10.62 APEP

ATOM 1345 N ASN 170 5.758 36.436 36.531 1.00 9.55 APEP

ATOM 1346 CA ASN 170 6.760 37.392 36.990 1.00 10.81 APEP

ATOM 1347 CB ASN 170 7.557 36.792 38.158 1.00 10.24 APEP

ATOM 1348 CG ASN 170 6.907 37.057 39.513 1.00 11.09 APEP

ATOM 1349 OD1 ASN 170 5.758 37.497 39.598 1.00 11.64 APEP

ATOM 1350 ND2 ASN 170 7.643 36.783 40.578 1.00 14.04 APEP

ATOM 1351 C ASN 170 7.716 37.859 35.887 1.00 10.96 APEP

ATOM 1352 O ASN 170 8.317 38.918 35.999 1.00 10.88 APEP

ATOM 1353 N THR 171 7.866 37.071 34.830 1.00 10.69 APEP

ATOM 1354 CA THR 171 8.741 37.472 33.733 1.00 9.90 APEP

ATOM 1355 CB THR 171 9.002 36.308 32.757 1.00 8.82 APEP

ATOM 1356 OG1 THR 171 9.738 35.278 33.430 1.00 10.00 APEP

ATOM 1357 CG2 THR 171 9.793 36.790 31.541 1.00 6.32 APEP

ATOM 1358 C THR 171 8.026 38.592 32.992 1.00 10.43 APEP

ATOM 1359 O THR 171 6.842 38.468 32.669 1.00 11.58 APEP

ATOM 1360 N LYS 172 8.736 39.680 32.715 1.00 11.90 APEP

ATOM 1361 CA LYS 172 8.131 40.818 32.027 1.00 12.07 APEP

ATOM 1362 CB LYS 172 8.176 42.054 32.934 1.00 13.23 APEP

ATOM 1363 CG LYS 172 7.424 41.893 34.261 1.00 16.65 APEP

ATOM 1364 CD LYS 172 5.905 41.830 34.074 1.00 18.48 APEP

ATOM 1365 CE LYS 172 5.354 43.044 33.312 1.00 21.38 APEP

ATOM 1366 NZ LYS 172 4.386 43.852 34.117 1.00 19.33 APEP

ATOM 1367 C LYS 172 8.751 41.166 30.677 1.00 9.74 APEP

ATOM 1368 O LYS 172 8.122 41.834 29.856 1.00 9.87 APEP

ATOM 1369 N GLU 173 9.982 40.719 30.450 1.00 11.94 APEP

ATOM 1370 CA GLU 173 10.684 41.005 29.198 1.00 13.45 APEP

ATOM 1371 CB GLU 173 11.812 42.014 29.438 1.00 16.52 APEP

ATOM 1372 CG GLU 173 11.752 42.721 30.778 1.00 21.67 APEP

ATOM 1373 CD GLU 173 11.695 44.220 30.618 1.00 23.96 APEP

ATOM 1374 OE1 GLU 173 11.727 44.679 29.455 1.00 24.88 APEP

ATOM 1375 OE2 GLU 173 11.621 44.935 31.643 1.00 28.83 APEP

ATOM 1376 C GLU 173 11.280 39.765 28.531 1.00 10.86 APEP

ATOM 1377 O GLU 173 11.622 38.790 29.199 1.00 10.81 APEP

ATOM 1378 N VAL 174 11.404 39.830 27.209 1.00 10.16 APEP

ATOM 1379 CA VAL 174 11.968 38.741 26.416 1.00 9.96 APEP

ATOM 1380 CB VAL 174 10.856 37.811 25.846 1.00 9.93 APEP

ATOM 1381 CG1 VAL 174 10.099 38.519 24.740 1.00 7.96 APEP

ATOM 1382 CG2 VAL 174 11.460 36.508 25.323 1.00 7.52 APEP

ATOM 1383 C VAL 174 12.790 39.316 25.258 1.00 11.17 APEP

ATOM 1384 O VAL 174 12.485 40.383 24.728 1.00 11.23 APEP

ATOM 1385 N GLY 175 13.845 38.605 24.886 1.00 10.40 APEP

ATOM 1386 CA GLY 175 14.692 39.045 23.797 1.00 8.75 APEP

ATOM 1387 C GLY 175 15.337 37.813 23.211 1.00 9.59 APEP

ATOM 1388 O GLY 175 15.882 36.991 23.949 1.00 6.65 APEP

ATOM 1389 N CYS 176 15.291 37.685 21.885 1.00 8.02 APEP

ATOM 1390 CA CYS 176 15.853 36.511 21.226 1.00 7.90 APEP

ATOM 1391 C CYS 176 16.940 36.771 20.186 1.00 7.85 APEP

ATOM 1392 O CYS 176 17.114 37.893 19.693 1.00 6.33 APEP

ATOM 1393 CB CYS 176 14.721 35.701 20.582 1.00 6.21 APEP

ATOM 1394 SG CYS 176 13.249 35.553 21.641 1.00 9.41 APEP

ATOM 1395 N GLY 177 17.672 35.703 19.880 1.00 8.22 APEP

ATOM 1396 CA GLY 177 18.737 35.744 18.895 1.00 10.14 APEP

ATOM 1397 C GLY 177 18.618 34.466 18.085 1.00 10.70 APEP

ATOM 1398 O GLY 177 18.182 33.446 18.623 1.00 8.40 APEP

ATOM 1399 N SER 178 18.983 34.509 16.806 1.00 9.75 APEP

ATOM 1400 CA SER 178 18.881 33.325 15.959 1.00 9.62 APEP

ATOM 1401 CB SER 178 17.523 33.305 15.247 1.00 12.13 APEP

ATOM 1402 OG SER 178 17.614 33.902 13.964 1.00 15.65 APEP

ATOM 1403 C SER 178 19.999 33.227 14.921 1.00 8.56 APEP

ATOM 1404 O SER 178 20.597 34.231 14.532 1.00 5.09 APEP

ATOM 1405 N ILE 179 20.270 32.001 14.482 1.00 9.37 APEP

ATOM 1406 CA ILE 179 21.310 31.744 13.498 1.00 9.01 APEP

ATOM 1407 CB ILE 179 22.673 31.531 14.181 1.00 8.43 APEP

ATOM 1408 CG2 ILE 179 22.625 30.296 15.054 1.00 6.63 APEP

ATOM 1409 CG1 ILE 179 23.774 31.415 13.122 1.00 7.53 APEP

ATOM 1410 CD1 ILE 179 25.093 32.035 13.535 1.00 8.62 APEP

ATOM 1411 C ILE 179 20.980 30.517 12.650 1.00 10.87 APEP

ATOM 1412 O ILE 179 20.506 29.497 13.158 1.00 10.47 APEP

ATOM 1413 N LYS 180 21.216 30.632 11.347 1.00 10.60 APEP

ATOM 1414 CA LYS 180 20.952 29.536 10.430 1.00 11.05 APEP

ATOM 1415 CB LYS 180 20.077 30.018 9.269 1.00 11.05 APEP

ATOM 1416 CG LYS 180 18.745 30.596 9.724 1.00 13.07 APEP

ATOM 1417 CD LYS 180 17.902 31.048 8.543 1.00 15.79 APEP

ATOM 1418 CE LYS 180 16.580 31.655 8.996 1.00 14.81 APEP

ATOM 1419 NZ LYS 180 15.620 31.802 7.862 1.00 16.66 APEP

ATOM 1420 C LYS 180 22.291 29.029 9.920 1.00 10.53 APEP

ATOM 1421 O LYS 180 23.137 29.817 9.505 1.00 12.20 APEP

ATOM 1422 N TYR 181 22.490 27.716 9.955 1.00 9.11 APEP

ATOM 1423 CA TYR 181 23.756 27.166 9.510 1.00 8.14 APEP

ATOM 1424 CB TYR 181 24.786 27.300 10.633 1.00 6.13 APEP

ATOM 1425 CG TYR 181 24.460 26.483 11.863 1.00 8.18 APEP

ATOM 1426 CD1 TYR 181 24.984 25.201 12.027 1.00 9.63 APEP

ATOM 1427 CE1 TYR 181 24.706 24.450 13.172 1.00 8.66 APEP

ATOM 1428 CD2 TYR 181 23.643 26.999 12.876 1.00 8.34 APEP

ATOM 1429 CE2 TYR 181 23.360 26.257 14.020 1.00 7.46 APEP

ATOM 1430 CZ TYR 181 23.896 24.986 14.161 1.00 8.38 APEP

ATOM 1431 OH TYR 181 23.634 24.244 15.293 1.00 8.05 APEP

ATOM 1432 C TYR 181 23.695 25.719 9.022 1.00 7.08 APEP

ATOM 1433 O TYR 181 22.728 25.001 9.262 1.00 7.97 APEP

ATOM 1434 N ILE 182 24.743 25.303 8.323 1.00 8.25 APEP

ATOM 1435 CA ILE 182 24.814 23.948 7.804 1.00 7.94 APEP

ATOM 1436 CB ILE 182 25.011 23.959 6.293 1.00 9.43 APEP

ATOM 1437 CG2 ILE 182 24.641 22.599 5.713 1.00 9.49 APEP

ATOM 1438 CG1 ILE 182 24.147 25.065 5.680 1.00 9.61 APEP

ATOM 1439 CD1 ILE 182 24.502 25.429 4.278 1.00 7.05 APEP

ATOM 1440 C ILE 182 25.961 23.184 8.445 1.00 8.67 APEP

ATOM 1441 O ILE 182 27.112 23.588 8.333 1.00 8.62 APEP

ATOM 1442 N GLN 183 25.642 22.084 9.122 1.00 6.39 APEP

ATOM 1443 CA GLN 183 26.657 21.271 9.776 1.00 7.60 APEP

ATOM 1444 CB GLN 183 26.485 21.313 11.304 1.00 8.26 APEP

ATOM 1445 CG GLN 183 27.184 20.160 12.059 1.00 11.17 APEP

ATOM 1446 CD GLN 183 26.842 20.105 13.560 1.00 10.23 APEP

ATOM 1447 OE1 GLN 183 25.927 20.779 14.029 1.00 13.96 APEP

ATOM 1448 NE2 GLN 183 27.578 19.293 14.304 1.00 9.47 APEP

ATOM 1449 C GLN 183 26.603 19.824 9.308 1.00 6.95 APEP

ATOM 1450 O GLN 183 25.653 19.096 9.602 1.00 4.41 APEP

ATOM 1451 N GLU 184 27.624 19.404 8.576 1.00 6.92 APEP

ATOM 1452 CA GLU 184 27.685 18.025 8.123 1.00 7.66 APEP

ATOM 1453 CB GLU 184 27.885 17.120 9.349 1.00 9.14 APEP

ATOM 1454 CG GLU 184 29.110 17.551 10.172 1.00 8.94 APEP

ATOM 1455 CD GLU 184 29.207 16.912 11.558 1.00 12.48 APEP

ATOM 1456 OE1 GLU 184 28.235 16.963 12.340 1.00 13.16 APEP

ATOM 1457 OE2 GLU 184 30.278 16.361 11.869 1.00 15.28 APEP

ATOM 1458 C GLU 184 26.447 17.645 7.316 1.00 6.36 APEP

ATOM 1459 O GLU 184 25.858 16.581 7.493 1.00 4.35 APEP

ATOM 1460 N LYS 185 26.089 18.560 6.417 1.00 8.43 APEP

ATOM 1461 CA LYS 185 24.956 18.451 5.504 1.00 10.57 APEP

ATOM 1462 CB LYS 185 25.054 17.165 4.685 1.00 12.55 APEP

ATOM 1463 CG LYS 185 25.705 17.371 3.331 1.00 16.19 APEP

ATOM 1464 CD LYS 185 26.930 16.498 3.173 1.00 20.18 APEP

ATOM 1465 CE LYS 185 26.783 15.553 1.990 1.00 22.27 APEP

ATOM 1466 NZ LYS 185 25.360 15.182 1.744 1.00 25.09 APEP

ATOM 1467 C LYS 185 23.571 18.567 6.131 1.00 10.92 APEP

ATOM 1468 O LYS 185 22.566 18.219 5.509 1.00 10.67 APEP

ATOM 1469 N TRP 186 23.519 19.062 7.362 1.00 10.21 APEP

ATOM 1470 CA TRP 186 22.250 19.252 8.039 1.00 9.13 APEP

ATOM 1471 CB TRP 186 22.297 18.677 9.461 1.00 8.92 APEP

ATOM 1472 CG TRP 186 22.105 17.173 9.563 1.00 7.23 APEP

ATOM 1473 CD2 TRP 186 20.883 16.433 9.380 1.00 7.44 APEP

ATOM 1474 CE2 TRP 186 21.179 15.070 9.624 1.00 7.10 APEP

ATOM 1475 CE3 TRP 186 19.569 16.787 9.036 1.00 7.24 APEP

ATOM 1476 CD1 TRP 186 23.057 16.253 9.895 1.00 7.55 APEP

ATOM 1477 NE1 TRP 186 22.510 14.991 9.934 1.00 7.21 APEP

ATOM 1478 CZ2 TRP 186 20.209 14.061 9.536 1.00 4.65 APEP

ATOM 1479 CZ3 TRP 186 18.602 15.776 8.950 1.00 5.07 APEP

ATOM 1480 CH2 TRP 186 18.934 14.430 9.198 1.00 4.34 APEP

ATOM 1481 C TRP 186 22.029 20.757 8.097 1.00 9.22 APEP

ATOM 1482 O TRP 186 22.895 21.495 8.547 1.00 10.78 APEP

ATOM 1483 N HIS 187 20.876 21.214 7.622 1.00 11.53 APEP

ATOM 1484 CA HIS 187 20.555 22.637 7.642 1.00 10.59 APEP

ATOM 1485 CB HIS 187 19.773 23.005 6.375 1.00 11.28 APEP

ATOM 1486 CG HIS 187 20.381 22.455 5.119 1.00 12.80 APEP

ATOM 1487 CD2 HIS 187 20.511 21.183 4.674 1.00 13.63 APEP

ATOM 1488 ND1 HIS 187 20.984 23.254 4.170 1.00 14.63 APEP

ATOM 1489 CE1 HIS 187 21.463 22.497 3.198 1.00 14.97 APEP

ATOM 1490 NE2 HIS 187 21.189 21.236 3.480 1.00 14.98 APEP

ATOM 1491 C HIS 187 19.738 22.910 8.904 1.00 8.99 APEP

ATOM 1492 O HIS 187 18.636 22.408 9.058 1.00 10.40 APEP

ATOM 1493 N LYS 188 20.287 23.700 9.817 1.00 10.12 APEP

ATOM 1494 CA LYS 188 19.593 23.970 11.068 1.00 9.30 APEP

ATOM 1495 CB LYS 188 20.403 23.413 12.251 1.00 10.66 APEP

ATOM 1496 CG LYS 188 21.395 22.314 11.909 1.00 7.22 APEP

ATOM 1497 CD LYS 188 21.627 21.422 13.118 1.00 8.34 APEP

ATOM 1498 CE LYS 188 22.696 20.369 12.871 1.00 9.03 APEP

ATOM 1499 NZ LYS 188 23.268 19.865 14.162 1.00 13.31 APEP

ATOM 1500 C LYS 188 19.289 25.428 11.349 1.00 7.81 APEP

ATOM 1501 O LYS 188 19.988 26.328 10.890 1.00 9.61 APEP

ATOM 1502 N HIS 189 18.216 25.646 12.097 1.00 9.34 APEP

ATOM 1503 CA HIS 189 17.823 26.977 12.532 1.00 9.56 APEP

ATOM 1504 CB HIS 189 16.391 27.315 12.119 1.00 9.45 APEP

ATOM 1505 CG HIS 189 16.033 28.756 12.331 1.00 11.25 APEP

ATOM 1506 CD2 HIS 189 16.739 29.777 12.870 1.00 11.06 APEP

ATOM 1507 ND1 HIS 189 14.822 29.291 11.946 1.00 13.10 APEP

ATOM 1508 CE1 HIS 189 14.800 30.579 12.237 1.00 11.47 APEP

ATOM 1509 NE2 HIS 189 15.950 30.900 12.799 1.00 12.33 APEP

ATOM 1510 C HIS 189 17.911 26.904 14.049 1.00 9.30 APEP

ATOM 1511 O HIS 189 17.265 26.060 14.671 1.00 9.01 APEP

ATOM 1512 N TYR 190 18.717 27.781 14.635 1.00 10.00 APEP

ATOM 1513 CA TYR 190 18.928 27.816 16.080 1.00 9.41 APEP

ATOM 1514 CB TYR 190 20.433 27.745 16.343 1.00 11.08 APEP

ATOM 1515 CG TYR 190 20.872 27.618 17.788 1.00 11.54 APEP

ATOM 1516 CD1 TYR 190 20.017 27.124 18.777 1.00 11.05 APEP

ATOM 1517 CE1 TYR 190 20.458 26.983 20.108 1.00 10.64 APEP

ATOM 1518 CD2 TYR 190 22.173 27.971 18.157 1.00 11.80 APEP

ATOM 1519 CE2 TYR 190 22.618 27.835 19.467 1.00 12.63 APEP

ATOM 1520 CZ TYR 190 21.767 27.342 20.435 1.00 11.58 APEP

ATOM 1521 OH TYR 190 22.257 27.190 21.713 1.00 12.58 APEP

ATOM 1522 C TYR 190 18.337 29.076 16.716 1.00 8.19 APEP

ATOM 1523 O TYR 190 18.803 30.184 16.456 1.00 6.34 APEP

ATOM 1524 N LEU 191 17.313 28.895 17.549 1.00 7.47 APEP

ATOM 1525 CA LEU 191 16.656 30.011 18.226 1.00 8.92 APEP

ATOM 1526 CB LEU 191 15.151 30.001 17.926 1.00 8.75 APEP

ATOM 1527 CG LEU 191 14.308 31.101 18.599 1.00 11.51 APEP

ATOM 1528 CD1 LEU 191 14.540 32.444 17.916 1.00 9.71 APEP

ATOM 1529 CD2 LEU 191 12.831 30.724 18.541 1.00 9.30 APEP

ATOM 1530 C LEU 191 16.890 29.996 19.743 1.00 9.50 APEP

ATOM 1531 O LEU 191 16.667 28.988 20.416 1.00 11.01 APEP

ATOM 1532 N VAL 192 17.347 31.128 20.266 1.00 9.30 APEP

ATOM 1533 CA VAL 192 17.629 31.291 21.690 1.00 10.13 APEP

ATOM 1534 CB VAL 192 19.145 31.536 21.923 1.00 10.96 APEP

ATOM 1535 CG1 VAL 192 19.387 32.044 23.344 1.00 11.81 APEP

ATOM 1536 CG2 VAL 192 19.934 30.267 21.659 1.00 11.43 APEP

ATOM 1537 C VAL 192 16.875 32.510 22.231 1.00 10.34 APEP

ATOM 1538 O VAL 192 17.078 33.621 21.745 1.00 10.10 APEP

ATOM 1539 N CYS 193 16.009 32.315 23.226 1.00 8.18 APEP

ATOM 1540 CA CYS 193 15.276 33.442 23.810 1.00 8.37 APEP

ATOM 1541 C CYS 193 15.600 33.609 25.296 1.00 8.44 APEP

ATOM 1542 O CYS 193 15.514 32.650 26.061 1.00 6.27 APEP

ATOM 1543 CB CYS 193 13.762 33.258 23.649 1.00 9.08 APEP

ATOM 1544 SG CYS 193 13.062 33.556 21.985 1.00 8.61 APEP

ATOM 1545 N ASN 194 15.978 34.826 25.694 1.00 8.32 APEP

ATOM 1546 CA ASN 194 16.310 35.133 27.086 1.00 7.48 APEP

ATOM 1547 CB ASN 194 17.582 35.991 27.149 1.00 8.69 APEP

ATOM 1548 CG ASN 194 18.840 35.190 26.868 1.00 6.67 APEP

ATOM 1549 OD1 ASN 194 18.772 33.995 26.596 1.00 9.58 APEP

ATOM 1550 ND2 ASN 194 19.989 35.843 26.932 1.00 4.71 APEP

ATOM 1551 C ASN 194 15.140 35.859 27.766 1.00 7.75 APEP

ATOM 1552 O ASN 194 14.540 36.760 27.175 1.00 5.25 APEP

ATOM 1553 N TYR 195 14.834 35.475 29.009 1.00 7.83 APEP

ATOM 1554 CA TYR 195 13.699 36.047 29.749 1.00 7.00 APEP

ATOM 1555 CB TYR 195 12.736 34.924 30.138 1.00 6.30 APEP

ATOM 1556 CG TYR 195 12.180 34.180 28.949 1.00 8.42 APEP

ATOM 1557 CD1 TYR 195 12.918 33.175 28.329 1.00 7.89 APEP

ATOM 1558 CE1 TYR 195 12.436 32.510 27.219 1.00 8.54 APEP

ATOM 1559 CD2 TYR 195 10.934 34.501 28.422 1.00 6.50 APEP

ATOM 1560 CE2 TYR 195 10.438 33.835 27.300 1.00 8.99 APEP

ATOM 1561 CZ TYR 195 11.199 32.837 26.707 1.00 8.08 APEP

ATOM 1562 OH TYR 195 10.724 32.142 25.617 1.00 8.91 APEP

ATOM 1563 C TYR 195 14.047 36.860 30.999 1.00 6.48 APEP

ATOM 1564 O TYR 195 14.840 36.422 31.822 1.00 7.26 APEP

ATOM 1565 N GLY 196 13.418 38.025 31.154 1.00 6.42 APEP

ATOM 1566 CA GLY 196 13.709 38.867 32.303 1.00 6.88 APEP

ATOM 1567 C GLY 196 12.558 39.431 33.131 1.00 8.03 APEP

ATOM 1568 O GLY 196 11.649 40.075 32.596 1.00 8.29 APEP

ATOM 1569 N PRO 197 12.541 39.157 34.445 1.00 6.50 APEP

ATOM 1570 CD PRO 197 11.525 39.698 35.363 1.00 7.41 APEP

ATOM 1571 CA PRO 197 13.536 38.343 35.153 1.00 6.68 APEP

ATOM 1572 CB PRO 197 13.300 38.688 36.610 1.00 6.91 APEP

ATOM 1573 CG PRO 197 11.856 39.041 36.672 1.00 6.39 APEP

ATOM 1574 C PRO 197 13.266 36.868 34.854 1.00 6.69 APEP

ATOM 1575 O PRO 197 12.255 36.537 34.238 1.00 6.02 APEP

ATOM 1576 N SER 198 14.153 35.975 35.286 1.00 7.01 APEP

ATOM 1577 CA SER 198 13.953 34.557 35.001 1.00 7.41 APEP

ATOM 1578 CB SER 198 15.233 33.755 35.303 1.00 4.71 APEP

ATOM 1579 OG SER 198 15.558 33.752 36.682 1.00 11.52 APEP

ATOM 1580 C SER 198 12.765 33.927 35.717 1.00 7.39 APEP

ATOM 1581 O SER 198 12.161 34.528 36.605 1.00 6.19 APEP

ATOM 1582 N GLY 199 12.423 32.716 35.289 1.00 7.86 APEP

ATOM 1583 CA GLY 199 11.332 31.977 35.893 1.00 8.49 APEP

ATOM 1584 C GLY 199 11.894 30.622 36.274 1.00 8.12 APEP

ATOM 1585 O GLY 199 13.110 30.450 36.306 1.00 8.44 APEP

ATOM 1586 N ASN 200 11.022 29.670 36.570 1.00 9.40 APEP

ATOM 1587 CA ASN 200 11.433 28.317 36.929 1.00 11.14 APEP

ATOM 1588 CB ASN 200 12.344 27.742 35.844 1.00 11.38 APEP

ATOM 1589 CG ASN 200 11.581 27.365 34.591 1.00 12.36 APEP

ATOM 1590 OD1 ASN 200 10.360 27.478 34.550 1.00 13.35 APEP

ATOM 1591 ND2 ASN 200 12.293 26.919 33.566 1.00 10.02 APEP

ATOM 1592 C ASN 200 12.102 28.177 38.296 1.00 12.89 APEP

ATOM 1593 O ASN 200 13.019 27.373 38.477 1.00 12.94 APEP

ATOM 1594 N PHE 201 11.632 28.957 39.262 1.00 14.46 APEP

ATOM 1595 CA PHE 201 12.157 28.890 40.622 1.00 16.00 APEP

ATOM 1596 CB PHE 201 11.947 30.224 41.339 1.00 14.75 APEP

ATOM 1597 CG PHE 201 12.805 31.338 40.811 1.00 13.67 APEP

ATOM 1598 CD1 PHE 201 12.267 32.311 39.982 1.00 13.83 APEP

ATOM 1599 CD2 PHE 201 14.151 31.421 41.157 1.00 17.70 APEP

ATOM 1600 CE1 PHE 201 13.047 33.350 39.505 1.00 14.74 APEP

ATOM 1601 CE2 PHE 201 14.948 32.460 40.685 1.00 17.45 APEP

ATOM 1602 CZ PHE 201 14.394 33.427 39.857 1.00 17.09 APEP

ATOM 1603 C PHE 201 11.347 27.786 41.304 1.00 16.58 APEP

ATOM 1604 O PHE 201 10.124 27.876 41.385 1.00 16.44 APEP

ATOM 1605 N LYS 202 12.026 26.755 41.797 1.00 18.81 APEP

ATOM 1606 CA LYS 202 11.351 25.617 42.421 1.00 21.27 APEP

ATOM 1607 CB LYS 202 12.386 24.588 42.883 1.00 25.00 APEP

ATOM 1608 CG LYS 202 12.314 23.274 42.101 1.00 29.78 APEP

ATOM 1609 CD LYS 202 13.215 22.197 42.698 1.00 31.92 APEP

ATOM 1610 CE LYS 202 12.574 20.816 42.609 1.00 32.51 APEP

ATOM 1611 NZ LYS 202 12.138 20.304 43.944 1.00 30.68 APEP

ATOM 1612 C LYS 202 10.365 25.899 43.555 1.00 21.29 APEP

ATOM 1613 O LYS 202 9.347 25.218 43.676 1.00 22.50 APEP

ATOM 1614 N ASN 203 10.642 26.894 44.385 1.00 20.90 APEP

ATOM 1615 CA ASN 203 9.726 27.190 45.485 1.00 22.00 APEP

ATOM 1616 CB ASN 203 10.520 27.657 46.711 1.00 23.02 APEP

ATOM 1617 CG ASN 203 11.274 28.953 46.466 1.00 23.60 APEP

ATOM 1618 OD1 ASN 203 11.559 29.698 47.401 1.00 24.95 APEP

ATOM 1619 ND2 ASN 203 11.605 29.223 45.209 1.00 25.38 APEP

ATOM 1620 C ASN 203 8.656 28.232 45.134 1.00 20.82 APEP

ATOM 1621 O ASN 203 8.096 28.877 46.025 1.00 20.77 APEP

ATOM 1622 N GLU 204 8.363 28.384 43.845 1.00 16.60 APEP

ATOM 1623 CA GLU 204 7.382 29.372 43.414 1.00 17.29 APEP

ATOM 1624 CB GLU 204 8.093 30.550 42.737 1.00 17.84 APEP

ATOM 1625 CG GLU 204 9.303 31.084 43.489 1.00 17.21 APEP

ATOM 1626 CD GLU 204 9.801 32.408 42.937 1.00 17.35 APEP

ATOM 1627 OE1 GLU 204 9.157 32.963 42.023 1.00 15.88 APEP

ATOM 1628 OE2 GLU 204 10.842 32.895 43.422 1.00 17.79 APEP

ATOM 1629 C GLU 204 6.298 28.842 42.475 1.00 17.89 APEP

ATOM 1630 O GLU 204 6.383 27.727 41.963 1.00 16.49 APEP

ATOM 1631 N GLU 205 5.283 29.672 42.251 1.00 19.78 APEP

ATOM 1632 CA GLU 205 4.159 29.335 41.383 1.00 20.21 APEP

ATOM 1633 CB GLU 205 2.851 29.854 41.992 1.00 23.42 APEP

ATOM 1634 CG GLU 205 2.609 31.347 41.772 1.00 28.77 APEP

ATOM 1635 CD GLU 205 2.874 32.176 43.022 1.00 32.85 APEP

ATOM 1636 OE1 GLU 205 3.942 31.984 43.660 1.00 31.69 APEP

ATOM 1637 OE2 GLU 205 2.008 33.019 43.364 1.00 32.48 APEP

ATOM 1638 C GLU 205 4.348 29.956 40.009 1.00 18.17 APEP

ATOM 1639 O GLU 205 4.918 31.039 39.891 1.00 15.97 APEP

ATOM 1640 N LEU 206 3.863 29.275 38.974 1.00 16.44 APEP

ATOM 1641 CA LEU 206 3.983 29.785 37.617 1.00 15.66 APEP

ATOM 1642 CB LEU 206 3.275 28.860 36.626 1.00 15.15 APEP

ATOM 1643 CG LEU 206 3.869 27.478 36.368 1.00 12.15 APEP

ATOM 1644 CD1 LEU 206 3.189 26.871 35.173 1.00 9.94 APEP

ATOM 1645 CD2 LEU 206 5.370 27.579 36.148 1.00 10.37 APEP

ATOM 1646 C LEU 206 3.333 31.155 37.561 1.00 15.68 APEP

ATOM 1647 O LEU 206 3.928 32.125 37.076 1.00 16.18 APEP

ATOM 1648 N TYR 207 2.105 31.217 38.065 1.00 14.52 APEP

ATOM 1649 CA TYR 207 1.332 32.451 38.090 1.00 15.05 APEP

ATOM 1650 CB TYR 207 0.742 32.746 36.705 1.00 12.49 APEP

ATOM 1651 CG TYR 207 -0.046 31.604 36.083 1.00 12.80 APEP

ATOM 1652 CD1 TYR 207 -1.379 31.365 36.441 1.00 13.16 APEP

ATOM 1653 CE1 TYR 207 -2.113 30.327 35.856 1.00 12.28 APEP

ATOM 1654 CD2 TYR 207 0.533 30.774 35.120 1.00 14.06 APEP

ATOM 1655 CE2 TYR 207 -0.195 29.731 34.528 1.00 14.10 APEP

ATOM 1656 CZ TYR 207 -1.513 29.515 34.903 1.00 12.49 APEP

ATOM 1657 OH TYR 207 -2.220 28.487 34.332 1.00 12.47 APEP

ATOM 1658 C TYR 207 0.206 32.331 39.113 1.00 14.67 APEP

ATOM 1659 O TYR 207 -0.088 31.244 39.595 1.00 15.57 APEP

ATOM 1660 N GLN 208 -0.425 33.453 39.432 1.00 15.61 APEP

ATOM 1661 CA GLN 208 -1.523 33.466 40.393 1.00 15.81 APEP

ATOM 1662 CB GLN 208 -1.733 34.892 40.896 1.00 14.83 APEP

ATOM 1663 CG GLN 208 -2.440 34.994 42.231 1.00 16.28 APEP

ATOM 1664 CD GLN 208 -2.843 36.418 42.564 1.00 16.96 APEP

ATOM 1665 OE1 GLN 208 -2.074 37.364 42.352 1.00 16.63 APEP

ATOM 1666 NE2 GLN 208 -4.051 36.581 43.086 1.00 16.21 APEP

ATOM 1667 C GLN 208 -2.809 32.947 39.739 1.00 17.01 APEP

ATOM 1668 O GLN 208 -3.243 33.469 38.717 1.00 14.76 APEP

ATOM 1669 N THR 209 -3.422 31.921 40.316 1.00 19.39 APEP

ATOM 1670 CA THR 209 -4.649 31.392 39.736 1.00 23.16 APEP

ATOM 1671 CB THR 209 -4.792 29.877 39.953 1.00 23.21 APEP

ATOM 1672 OG1 THR 209 -5.010 29.617 41.343 1.00 27.25 APEP

ATOM 1673 CG2 THR 209 -3.559 29.151 39.496 1.00 23.39 APEP

ATOM 1674 C THR 209 -5.873 32.063 40.340 1.00 25.33 APEP

ATOM 1675 O THR 209 -5.868 32.455 41.505 1.00 25.28 APEP

ATOM 1676 N LYS 210 -6.922 32.188 39.536 1.00 27.53 APEP

ATOM 1677 CA LYS 210 -8.160 32.801 39.986 1.00 29.31 APEP

ATOM 1678 CB LYS 210 -8.491 34.019 39.122 1.00 30.03 APEP

ATOM 1679 CG LYS 210 -8.643 33.696 37.647 1.00 28.82 APEP

ATOM 1680 CD LYS 210 -9.575 34.675 36.963 1.00 29.76 APEP

ATOM 1681 CE LYS 210 -8.897 35.345 35.771 1.00 28.88 APEP

ATOM 1682 NZ LYS 210 -9.500 36.669 35.437 1.00 28.04 APEP

ATOM 1683 C LYS 210 -9.272 31.775 39.873 1.00 31.66 APEP

ATOM 1684 OT1 LYS 210 -10.171 31.775 40.744 1.00 33.57 APEP

ATOM 1685 OT2 LYS 210 -9.224 30.981 38.906 1.00 33.91 APEP

ATOM 1686 OH2 WAT 1001 28.321 31.884 30.023 1.00 4.99 AWAT

ATOM 1687 OH2 WAT 1002 0.070 28.637 38.280 1.00 5.19 AWAT

ATOM 1688 OH2 WAT 1003 9.574 34.984 40.199 1.00 6.03 AWAT

ATOM 1689 OH2 WAT 1004 13.423 28.241 4.674 1.00 6.60 AWAT

ATOM 1690 OH2 WAT 1005 25.593 14.211 8.905 1.00 9.08 AWAT

ATOM 1691 OH2 WAT 1006 -5.948 28.133 30.378 1.00 7.55 AWAT

ATOM 1692 OH2 WAT 1007 13.729 27.746 30.599 1.00 8.15 AWAT

ATOM 1693 OH2 WAT 1008 22.453 33.974 26.365 1.00 6.87 AWAT

ATOM 1694 OH2 WAT 1009 11.644 46.107 27.594 1.00 4.61 AWAT

ATOM 1695 OH2 WAT 1010 -0.650 26.162 33.901 1.00 8.02 AWAT

ATOM 1696 OH2 WAT 1011 8.755 23.060 34.455 1.00 10.12 AWAT

ATOM 1697 OH2 WAT 1012 10.789 39.348 8.288 1.00 3.59 AWAT

ATOM 1698 OH2 WAT 1013 28.091 15.737 14.912 1.00 8.00 AWAT

ATOM 1699 OH2 WAT 1015 16.397 43.678 19.387 1.00 2.04 AWAT

ATOM 1700 OH2 WAT 1016 14.311 29.731 32.127 1.00 5.53 AWAT

ATOM 1701 OH2 WAT 1017 2.570 41.167 21.545 1.00 5.42 AWAT

ATOM 1702 OH2 WAT 1018 25.364 28.506 21.332 1.00 9.41 AWAT

ATOM 1703 OH2 WAT 1019 26.107 50.461 26.214 1.00 5.64 AWAT

ATOM 1704 OH2 WAT 1020 30.469 46.598 34.207 1.00 7.23 AWAT

ATOM 1705 OH2 WAT 1021 30.251 20.969 8.904 1.00 13.93 AWAT

ATOM 1706 OH2 WAT 1022 -4.476 37.486 34.043 1.00 7.76 AWAT

ATOM 1707 OH2 WAT 1023 31.770 27.794 19.020 1.00 13.29 AWAT

ATOM 1708 OH2 WAT 1024 17.644 44.091 30.228 1.00 8.53 AWAT

ATOM 1709 OH2 WAT 1025 -6.207 19.852 35.253 1.00 17.83 AWAT

ATOM 1710 OH2 WAT 1026 14.737 24.657 10.954 1.00 12.71 AWAT

ATOM 1711 OH2 WAT 1027 3.824 43.790 24.674 1.00 11.15 AWAT

ATOM 1712 OH2 WAT 1028 7.499 17.209 26.860 1.00 18.25 AWAT

ATOM 1713 OH2 WAT 1029 0.968 25.199 21.221 1.00 13.34 AWAT

ATOM 1714 OH2 WAT 1030 11.738 36.462 38.807 1.00 14.39 AWAT

ATOM 1715 OH2 WAT 1031 5.648 34.014 38.427 1.00 9.11 AWAT

ATOM 1716 OH2 WAT 1032 1.664 14.320 37.328 1.00 15.77 AWAT

ATOM 1717 OH2 WAT 1033 31.940 28.802 10.755 1.00 8.72 AWAT

ATOM 1718 OH2 WAT 1034 5.832 22.098 18.171 1.00 6.17 AWAT

ATOM 1719 OH2 WAT 1035 33.701 30.509 31.974 1.00 18.85 AWAT

ATOM 1720 OH2 WAT 1036 29.165 34.668 37.418 1.00 10.68 AWAT

ATOM 1721 OH2 WAT 1037 -0.407 43.489 29.418 1.00 8.15 AWAT

ATOM 1722 OH2 WAT 1038 30.861 44.589 26.320 1.00 13.36 AWAT

ATOM 1723 OH2 WAT 1039 8.345 41.081 37.778 1.00 13.31 AWAT

ATOM 1724 OH2 WAT 1040 10.895 22.815 23.399 1.00 20.54 AWAT

ATOM 1725 OH2 WAT 1041 31.503 42.501 27.942 1.00 12.75 AWAT

ATOM 1726 OH2 WAT 1042 -4.123 17.556 26.927 1.00 6.26 AWAT

ATOM 1727 OH2 WAT 1043 23.631 25.350 17.618 1.00 16.68 AWAT

ATOM 1728 OH2 WAT 1044 -9.263 19.789 28.769 1.00 17.07 AWAT

ATOM 1729 OH2 WAT 1045 2.681 26.188 40.094 1.00 10.27 AWAT

ATOM 1730 OH2 WAT 1046 6.157 33.281 40.876 1.00 10.99 AWAT

ATOM 1731 OH2 WAT 1047 1.411 42.305 11.357 1.00 12.65 AWAT

ATOM 1732 OH2 WAT 1048 11.027 43.128 8.836 1.00 13.35 AWAT

ATOM 1733 OH2 WAT 1049 8.163 26.637 9.371 1.00 9.12 AWAT

ATOM 1734 OH2 WAT 1050 30.812 52.897 21.367 1.00 5.26 AWAT

ATOM 1735 OH2 WAT 1051 -1.056 38.906 21.594 1.00 21.26 AWAT

ATOM 1736 OH2 WAT 1052 23.484 37.806 38.523 1.00 5.01 AWAT

ATOM 1737 OH2 WAT 1053 16.091 23.219 9.132 1.00 9.59 AWAT

ATOM 1738 OH2 WAT 1054 10.515 44.724 16.202 1.00 21.22 AWAT

ATOM 1739 OH2 WAT 1055 3.858 42.457 19.188 1.00 18.71 AWAT

ATOM 1740 OH2 WAT 1056 20.767 38.301 29.092 1.00 7.32 AWAT

ATOM 1741 OH2 WAT 1057 31.450 37.717 33.751 1.00 12.78 AWAT

ATOM 1742 OH2 WAT 1058 -6.469 15.556 29.885 1.00 18.83 AWAT

ATOM 1743 OH2 WAT 1059 19.569 32.500 35.567 1.00 13.66 AWAT

ATOM 1744 OH2 WAT 1060 12.883 32.203 45.018 1.00 19.55 AWAT

ATOM 1745 OH2 WAT 1061 16.666 38.811 39.230 1.00 12.36 AWAT

ATOM 1746 OH2 WAT 1062 1.627 24.661 38.597 1.00 11.62 AWAT

ATOM 1747 OH2 WAT 1063 -3.797 23.480 20.462 1.00 13.70 AWAT

ATOM 1748 OH2 WAT 1064 19.662 43.909 20.583 1.00 17.87 AWAT

ATOM 1749 OH2 WAT 1065 28.959 36.788 18.981 1.00 20.15 AWAT

ATOM 1750 OH2 WAT 1066 15.034 47.186 24.909 1.00 7.01 AWAT

ATOM 1751 OH2 WAT 1067 1.479 45.140 16.462 1.00 15.19 AWAT

ATOM 1752 OH2 WAT 1068 -9.159 26.374 32.728 1.00 10.66 AWAT

ATOM 1753 OH2 WAT 1069 18.343 40.026 15.719 1.00 11.74 AWAT

ATOM 1754 OH2 WAT 1070 -4.926 34.883 22.765 1.00 5.57 AWAT

ATOM 1755 OH2 WAT 1071 11.439 44.250 34.445 1.00 17.87 AWAT

ATOM 1756 OH2 WAT 1072 22.346 33.157 38.515 1.00 15.02 AWAT

ATOM 1757 OH2 WAT 1073 16.431 21.026 -0.735 1.00 17.18 AWAT

ATOM 1758 OH2 WAT 1074 17.273 13.097 2.769 1.00 16.44 AWAT

ATOM 1759 OH2 WAT 1075 20.717 41.158 18.875 1.00 11.16 AWAT

ATOM 1760 OH2 WAT 1076 13.429 19.165 10.121 1.00 9.99 AWAT

ATOM 1761 OH2 WAT 1077 22.253 23.110 28.097 1.00 14.11 AWAT

ATOM 1762 OH2 WAT 1078 -1.729 14.634 27.851 1.00 9.23 AWAT

ATOM 1763 OH2 WAT 1079 16.196 36.453 9.936 1.00 18.57 AWAT

ATOM 1764 OH2 WAT 1080 26.774 40.940 39.176 1.00 15.71 AWAT

ATOM 1765 OH2 WAT 1081 27.996 20.266 5.357 1.00 3.12 AWAT

ATOM 1766 OH2 WAT 1082 14.345 44.903 9.828 1.00 16.53 AWAT

ATOM 1767 OH2 WAT 1083 -6.956 19.549 24.667 1.00 13.41 AWAT

ATOM 1768 OH2 WAT 1084 6.677 22.676 16.370 1.00 9.78 AWAT

ATOM 1769 OH2 WAT 1085 24.055 17.307 14.279 1.00 9.70 AWAT

ATOM 1770 OH2 WAT 1086 32.348 29.000 20.500 1.00 15.00 AWAT

ATOM 1771 OH2 WAT 1087 -6.421 34.306 42.856 1.00 13.87 AWAT

ATOM 1772 OH2 WAT 1088 28.806 26.184 27.568 1.00 16.70 AWAT

ATOM 1773 OH2 WAT 1089 9.354 17.475 43.914 1.00 16.99 AWAT

ATOM 1774 OH2 WAT 1090 30.672 20.876 12.987 1.00 21.44 AWAT

ATOM 1775 OH2 WAT 1091 -7.795 23.654 35.198 1.00 12.77 AWAT

ATOM 1776 OH2 WAT 1092 6.675 42.663 7.635 1.00 17.23 AWAT

ATOM 1777 OH2 WAT 1093 14.348 49.247 34.229 1.00 10.41 AWAT

ATOM 1778 OH2 WAT 1094 -2.481 40.065 24.802 1.00 16.54 AWAT

ATOM 1779 OH2 WAT 1095 -5.184 39.229 18.838 1.00 28.58 AWAT

ATOM 1780 OH2 WAT 1096 -6.282 29.165 17.208 1.00 27.91 AWAT

ATOM 1781 OH2 WAT 1097 3.526 19.041 19.713 1.00 16.33 AWAT

ATOM 1782 OH2 WAT 1098 -5.490 40.336 27.666 1.00 20.30 AWAT

ATOM 1783 OH2 WAT 1099 5.791 43.554 30.434 1.00 14.00 AWAT

ATOM 1784 OH2 WAT 1100 10.085 34.242 9.352 1.00 19.88 AWAT

ATOM 1785 OH2 WAT 1101 22.752 37.487 8.325 1.00 16.96 AWAT

ATOM 1786 OH2 WAT 1102 22.364 40.020 38.129 1.00 15.64 AWAT

ATOM 1787 OH2 WAT 1103 33.666 37.537 19.756 1.00 23.15 AWAT

ATOM 1788 OH2 WAT 1104 36.579 34.638 23.256 1.00 16.03 AWAT

ATOM 1789 OH2 WAT 1105 31.645 31.136 11.971 1.00 18.60 AWAT

ATOM 1790 OH2 WAT 1106 14.823 26.519 41.694 1.00 15.23 AWAT

ATOM 1791 OH2 WAT 1107 13.638 21.317 9.375 1.00 12.16 AWAT

ATOM 1792 OH2 WAT 1108 33.913 48.939 32.690 1.00 11.76 AWAT

ATOM 1793 OH2 WAT 1109 3 3.415 48.326 34.490 1.00 20.71 AWAT

ATOM 1794 OH2 WAT 1110 -8.560 41.287 43.725 1.00 12.63 AWAT

ATOM 1795 OH2 WAT 1111 22.656 24.209 0.884 1.00 17.46 AWAT

ATOM 1796 OH2 WAT 1112 2.716 41.252 15.063 1.00 19.18 AWAT

ATOM 1797 OH2 WAT 1113 30.635 31.007 7.714 1.00 10.21 AWAT

ATOM 1798 OH2 WAT 1114 14.815 22.010 39.023 1.00 27.49 AWAT

ATOM 1799 OH2 WAT 1115 33.286 47.303 24.007 1.00 12.66 AWAT

ATOM 1800 OH2 WAT 1116 14.042 33.412 10.622 1.00 10.91 AWAT

ATOM 1801 OH2 WAT 1117 20.195 27.499 32.658 1.00 18.38 AWAT

ATOM 1802 OH2 WAT 1118 31.215 17.825 13.678 1.00 17.20 AWAT

ATOM 1803 OH2 WAT 1119 30.831 21.030 11.086 1.00 17.97 AWAT

ATOM 1804 OH2 WAT 1120 30.910 27.311 25.284 1.00 17.48 AWAT

ATOM 1805 OH2 WAT 1121 6.259 13.355 26.082 1.00 21.34 AWAT

ATOM 1806 OH2 WAT 1122 34.780 29.659 15.089 1.00 23.24 AWAT

ATOM 1807 OH2 WAT 1123 33.170 28.242 23.488 1.00 16.58 AWAT

ATOM 1808 OH2 WAT 1124 0.913 40.672 41.455 1.00 17.75 AWAT

ATOM 1809 OH2 WAT 1125 25.393 36.689 42.266 1.00 22.18 AWAT

ATOM 1810 OH2 WAT 1126 21.923 40.748 15.035 1.00 20.08 AWAT

ATOM 1811 OH2 WAT 1127 -1.339 28.433 21.094 1.00 17.33 AWAT

ATOM 1812 OH2 WAT 1128 22.058 28.769 33.380 1.00 22.93 AWAT

ATOM 1813 OH2 WAT 1129 2.232 23.035 17.663 1.00 13.73 AWAT

ATOM 1814 OH2 WAT 1130 4.834 40.228 40.117 1.00 39.84 AWAT

ATOM 1815 OH2 WAT 1131 16.182 27.937 1.692 1.00 9.10 AWAT

ATOM 1816 OH2 WAT 1132 36.696 43.322 33.662 1.00 14.41 AWAT

ATOM 1817 NA NAT 500 -4.312 15.332 28.374 1.00 11.67 ANAT

END

Ves v 5氨基酸残基的溶剂可及性在表7中给出。

表7

Ves v 5氨基酸的表面暴露

编号 AA 溶剂暴露

3 E 0.802

4 A 0.060

5 E 0.390

6 F 0.868

7 N 0.484

8 N 0.555

9 Y 0.033

10 C 0.412

11 K 0.978

12 I 0.225

13 K 0.951

14 C 0.038

15 L 0.714

16 K 1.000

17 G 0.143

18 G 0.275

19 V 0.445

20 H 0.016

21 T 0.000

22 A 0.049

23 C 0.209

24 K 0.489

25 Y 0.280

26 G 0.352

27 S 0.159

28 L 0.423

29 K 0.797

30 P 0.231

31 N 0.396

32 C 0.055

33 G 0.429

34 N 0.775

35 K 0.297

36 V 0.489

37 V 0.280

38 V 0.379

39 S 0.291

40 Y 0.593

41 G 0.165

42 L 0.121

43 T 0.423

44 K 0.978

45 Q 0.538

46 E 0.264

47 K 0.396

48 Q 0.593

49 D 0.302

50 I 0.000

51 L 0.198

52 K 0.615

53 E 0.170

54 H 0.000

55 N 0.115

56 D 0.445

57 F 0.027

58 R 0.000

59 Q 0.198

60 K 0.407

61 I 0.000

62 A 0.033

63 R 0.956

64 G 0.148

65 L 0.593

66 E 0.005

67 T 0.610

68 R 0.335

69 G 0.110

70 N 0.549

71 P 0.363

72 G 0.170

73 P 0.440

74 Q 0.005

75 P 0.209

76 P 0.236

77 A 0.022

78 K 0.775

79 N 0.236

80 M 0.066

81 K 0.588

82 N 0.500

83 L 0.016

84 V 0.462

85 W 0.275

86 N 0.165

87 D 0.621

88 E 0.247

89 L 0.005

90 A 0.055

91 Y 0.115

92 V 0.005

93 A 0.000

94 Q 0.159

95 V 0.011

96 W 0.077

97 A 0.000

98 N 0.005

99 Q 0.027

100 C 0.027

101 Q 0.577

102 Y 0.687

103 G 0.110

104 H 0.549

105 D 0.022

106 T 0.429

107 C 0.000

108 R 0.203

109 D 0.093

110 V 0.044

111 A 0.500

112 K 0.824

113 Y 0.209

114 Q 0.423

115 V 0.011

116 G 0.011

117 Q 0.066

118 N 0.005

119 V 0.022

120 A 0.016

121 L 0.198

122 T 0.198

123 G 0.231

124 S 0.236

125 T 0.610

126 A 0.253

127 A 0.379

128 K 0.857

129 Y 0.352

130 D 0.220

131 D 0.495

132 P 0.033

133 V 0.137

134 K 0.654

135 L 0.000

136 V 0.000

137 K 0.538

138 M 0.473

139 W 0.016

140 E 0.071

141 D 0.341

142 E 0.154

143 V 0.000

144 K 0.560

145 D 0.390

146 Y 0.044

147 N 0.165

148 P 0.214

149 K 0.868

150 K 0.604

151 K 0.753

152 F 0.071

153 S 0.302

154 G 0.192

155 N 0.121

156 D 0.379

157 F 0.819

158 L 0.714

159 K 0.533

160 T 0.000

161 G 0.077

162 H 0.231

163 Y 0.000

164 T 0.000

165 Q 0.011

166 M 0.000

167 V 0.000

168 W 0.005

169 A 0.011

170 N 0.429

171 T 0.000

172 K 0.451

173 E 0.165

174 V 0.000

175 G 0.000

176 C 0.016

177 G 0.000

178 S 0.016

179 I 0.000

180 K 0.214

181 Y 0.016

182 I 0.275

183 Q 0.231

184 E 0.841

185 K 0.989

186 W 0.665

187 H 0.159

188 K 0.203

189 H 0.011

190 Y 0.000

191 L 0.000

192 V 0.000

193 C 0.000

194 N 0.000

195 Y 0.000

196 G 0.000

197 P 0.225

198 S 0.110

199 G 0.027

200 N 0.308

201 F 0.341

202 K 0.824

203 N 0.797

204 E 0.374

205 E 0.511

206 L 0.055

207 Y 0.082

208 Q 0.566

209 T 0.473

210 K 0.962

实施例10 Ag 5s的比对

来自黄胡蜂属、长黄胡蜂属、胡蜂属、马蜂属和Solenopsis(火蚁)的选定抗原5序列的比对在图12中显示。黄胡蜂属、长黄胡蜂属、胡蜂属和马蜂属都属于胡蜂科。该图也包括Ves v 5的二级结构元件。当仅仅考虑黄胡蜂属抗原5s时，观察到非常高度的表面保守性(图5)，残基的保守性几乎呈均匀的分布，仅有几个不保守残基分散于分子中。

相反，当比较来自黄胡蜂属和马蜂属的序列时，保守的表面局限在5个区域，它们分别具有392_²、589_²、589_²、673_²和1053_²的溶剂可及面积。溶剂可及性利用NACCESS程序计算(S.J.Hubbard和J.M.Thornton，1992，NACCESS(2.1.1版)生物化学和分子生物学系，UniversityCollege London)，使用的探针半径为1.4_。类似地，在黄胡蜂属和胡蜂属/长黄胡蜂属之间对应于在黄胡蜂属和马蜂属之间保守的这5个表面区域的5个表面区域也是保守的。对于后者，所述区域分别为280_²、496_²、730_²、803_²和1043_²。对第一表面区域起作用的残基主要来自B链的开端和螺旋IV，对第二表面区域起作用的残基主要来自A链以及螺旋II和B链之间的环。对第三表面区域起作用的残基主要来自螺旋I及其周围环境和螺旋II的末尾，对第四表面区域起作用的残基主要是N-端来源的，而第五表面区域的残基主要来自螺旋I的末尾和螺旋I与A链之间的环。

讨论

蛋白质抗原-抗体复合体的晶体学研究表明表位的接触型残基可能包含抗原表面的多至17个残基，并且这些残基可以在肽链上彼此连续或不连续(Davies等人，1996，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)93：7)。用单克隆抗体对溶菌酶的表位作图显示该蛋白质的整个表面都具有潜在的抗原性(Newmann等人，1992，免疫学杂志(J.Immunol.)149：3260)。因此，具有1/10至3/4小黄蜂抗原5的杂合体会比亲本分子具有较少的表位。

图7中的CD光谱数据揭示杂合体与胡蜂抗原5s具有非常相似(即使不是相同)的二级结构。图8和图9中使用Ves v 5特异性人和小鼠抗体得到的抑制数据和表3中使用杂合体特异性抗体得到的抗体结合数据揭示，杂合体具有与Ves v 5非常相似或相同的三级结构，因为这些抗体不与变性的Ves v 5结合。另外的证据来自利用17个天然Ves v 5特异性单克隆小鼠IgG1抗体得到的筛选结果，其中6个结合N-端杂合体PV1-46。因此，这些数据说明杂合体含有Ves v 5的不连续B细胞表位。

利用多克隆抗体得到的抑制数据和利用单克隆抗体得到的结合数据显示，Ves v 5的显性B细胞表位在其N-端区域。对Ves v 5的结构检测显示，位于N-端杂合体PV1-46中的几乎所有残基都是表面可及的(参见表7)。这与C-端杂合体PV156-204相反，在PV156-204中，仅一些Ves v 5的片断是表面可及的(参见表7)。这种在表面可及性上的差异可以解释抗原5的N-端区域的免疫优势。其他人已证实蛋白质的全部表面都具有潜在的抗原性，但具有高表面可及性和表面突出的区域是显性的(Newmann等人，1992，免疫学杂志(J.Immunol)149：3260和Novotny等人，1996，Adv Prot Chem 49：149)。

目前，绘制不连续表位的唯一已知方法是Ag-Ab复合体的X射线晶体学(Davies等人，1996，美国国家科学院院报(Proc.Natl Acad.Sci USA)93：7)，并且这需要拥有特异性单克隆抗体。已利用一系列小鼠-人杂合体绘制了CD39的不连续表位，小鼠和人CD39分子具有75％的序列同一性并且它们共同拥有有限的抗原交叉反应(Maliszewski等人，1994，免疫学杂志(J.Immunol)153：3574)。这些利用CD39和抗原5得到的发现显示两个同源蛋白质的杂合体是一种绘制它们的不连续B细胞表位的有用方法。

我们利用杂合体Ag 5s得到的结果证实，杂合变应原的变应原性可以有一百至一千倍的减少，而其又保留天然变应原的免疫原性。杂合体在变应原性上的这种减少据认为主要是由于B细胞表位密度的下降所致。实施例中的每一杂合体都仅具有Ves v 5的B细胞和T细胞表位的一部分。然而，原则上，杂合体的混合物可以重建Ves v 5的完整表位文库。因此，可以重建所有表位以制备用作疫苗的修饰的变应原。我们的结果提示具有Ves v 5的20-30个残基的PV杂合体在变应原性上会有最大的减少但又保留Ves v 5的免疫原性。

许多变应原与不同来源的蛋白质具有序列同源性(Larsen等人，1996，***反应临床免疫学杂志(J.Allergy Clin Immunol)97：577)。例如，胡蜂Ag 5s与不同生物体(从真菌到人类)来源的多种细胞外蛋白质具有不同程度的序列同源性(参见图12)。已经知道，具有30％序列同一性的同源蛋白质可能具有相同或非常相似的结构(Chothia等人，1990，生物化学年评(Annual Review Biochem)59：1007和Russell等人，1994，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)244：332)。因此，可以利用多种同源宿主蛋白质作为目的客变应原片断的支架来制备杂合体。

本发明并不限于此处描述的特定实施方案的范围。实际上，对本领域技术人员而言，根据上面的描述和附图，除了于此描述的之外，本发明的各种修饰是是显而易见的。这些修饰也应该在所附权利要求的范围之内。

于此引用的所有专利、申请、出版物、测试方法、文献和其它材料均特此全部引入作为参考。

表8：变应原

生物体	变应原	蛋白质	大小(kD)	C/P^a	参考/登录号
生物体	变应原	蛋白质	大小(kD)	C/P^a	参考/登录号
野草花粉
野草花粉						菊目(Asterales)
豚草(Ambrosia artemisiifolia)(short ragweed)	Amb a1Amb a2Amb a3Amb a5Amb a6Amb a7Amb a？	抗原E抗原KRa3Ra5Ra6Ra7	3838115101211	CCCCPCC	8，208，212211，2324，252627	菊目(Asterales)
豚草(Ambrosia artemisiifolia)(short ragweed)	Amb a1Amb a2Amb a3Amb a5Amb a6Amb a7Amb a？	抗原E抗原KRa3Ra5Ra6Ra7	3838115101211	CCCCPCC	8，208，212211，2324，252627	三裂豚草(Ambrosia trifida)(giant ragweed)	Amb t5	Ra5G	4.4	C	9，10，28
艾蒿(Artemisiavulgaris)(mugwort)	Art v1Art v2Art v3Art v4		27-29351214	CPPC	28A2953	三裂豚草(Ambrosia trifida)(giant ragweed)	Amb t5	Ra5G	4.4	C	9，10，28
艾蒿(Artemisiavulgaris)(mugwort)	Art v1Art v2Art v3Art v4		27-29351214	CPPC	28A2953	向日葵(Helianthus annuus)(sunflower)	Hel a1Hel a2	抑制蛋白	3415.7	C	29AY15210
Mercurialis annua	Mer a1	抑制蛋白	14-15	C	Y13271	向日葵(Helianthus annuus)(sunflower)	Hel a1Hel a2	抑制蛋白	3415.7	C	29AY15210
Mercurialis annua	Mer a1	抑制蛋白	14-15	C	Y13271
石竹目(Caryophyllales)
石竹目(Caryophyllales)						猪毛菜(Salsola kali)(Russian thistle)	Sal k1	43	43	P	29B
草花粉						猪毛菜(Salsola kali)(Russian thistle)	Sal k1	43	43	P	29B
草花粉						禾草目(Poales)
狗牙根(Cynodon dactylon)(Bermuda grass)	Cyn d1Cyn d7Cyn d12	抑制蛋白	3214	CCC	30，S8334331，X9125631a，Y08390	禾草目(Poales)

鸭茅(Dactylis glomerata)(orchard grass)	Dac g1Dac g2Dac g3Dac g5	AgDg1	321131	PCCP	3233，S4535433A，U2534334
鸭茅(Dactylis glomerata)(orchard grass)	Dac g1Dac g2Dac g3Dac g5	AgDg1	321131	PCCP	3233，S4535433A，U2534334	绒毛草(Holcus lanatus)(velvet grass)	Hol 11			C	Z27084
黑麦草(Lolium perenne)黑麦草(rye grass)	Lol p1Lol p2Lol p3Lol p5Lol p11	组I组II组IIILol p IX，Lol p Ibhom：胰蛋白酶抑制剂	27111131/3516	CPPC	35，3637，37A，X733633834，3939A	绒毛草(Holcus lanatus)(velvet grass)	Hol 11			C	Z27084
黑麦草(Lolium perenne)黑麦草(rye grass)	Lol p1Lol p2Lol p3Lol p5Lol p11	组I组II组IIILol p IX，Lol p Ibhom：胰蛋白酶抑制剂	27111131/3516	CPPC	35，3637，37A，X733633834，3939A	虉草(Phalaris aquatica)(canary grass)	Pha a1			C	40，S80654
梯牧草(Phleum pratense)(timothy)	Phl p1Phl p2Phl p4Phl p5Phl p6Phl p12Phl p13	Ag25抑制蛋白多聚半乳糖醛酸酶	273255-60	CCPCCCC	X7881341，X7592541A4243，Z2708244，X77583AJ238848	虉草(Phalaris aquatica)(canary grass)	Pha a1			C	40，S80654
梯牧草(Phleum pratense)(timothy)	Phl p1Phl p2Phl p4Phl p5Phl p6Phl p12Phl p13	Ag25抑制蛋白多聚半乳糖醛酸酶	273255-60	CCPCCCC	X7881341，X7592541A4243，Z2708244，X77583AJ238848	草地早熟禾(Poa pratensis)(Kentucky blue grass)	Poa p1Poa p5	组I	3331/34	PC	4634，47
石茅高梁(Johnson grass)(Sorghum halepense)	Sor h1			C	48	草地早熟禾(Poa pratensis)(Kentucky blue grass)	Poa p1Poa p5	组I	3331/34	PC	4634，47
石茅高梁(Johnson grass)(Sorghum halepense)	Sor h1			C	48	树花粉
壳斗目(Fagales)						树花粉
壳斗目(Fagales)						欧洲桤木(Alnus glutinosa)(alder)	Aln g1		17	C	S50892
桦(Betula verrucosa)(birch)	Bet v1Bet v2Bet v3Bet v4Bet v6Bet v7	抑制蛋白h：异黄酮还原酶亲环蛋白	1715833.518	CCCCCP	49，50，Z80098M65179X79267X87153，S54819AF135127P81531	欧洲桤木(Alnus glutinosa)(alder)	Aln g1		17	C	S50892
桦(Betula verrucosa)(birch)	Bet v1Bet v2Bet v3Bet v4Bet v6Bet v7	抑制蛋白h：异黄酮还原酶亲环蛋白	1715833.518	CCCCCP	49，50，Z80098M65179X79267X87153，S54819AF135127P81531	欧洲鹅毛枥(hornbeam)(Carpinus betulus)	Car b1		17	C	51，X66932，X66918

西班牙栗(Castanea sativa)(chestnut)	Cas s1Cas s5Cas s8	几丁质酶脂转移蛋白	229.7	Pp	5253
西班牙栗(Castanea sativa)(chestnut)	Cas s1Cas s5Cas s8	几丁质酶脂转移蛋白	229.7	Pp	5253	欧洲榛(Corylus avellana)(hazel)	Cor a1Cor a2	抑制蛋白	1714	CC	54A，X70999AF327622
白栎(Quercus alba)(White oak)	Que a1		17	P	54	欧洲榛(Corylus avellana)(hazel)	Cor a1Cor a2	抑制蛋白	1714	CC	54A，X70999AF327622
白栎(Quercus alba)(White oak)	Que a1		17	P	54	唇形目(Lamiales)
木犀科(Oleaceae)						唇形目(Lamiales)
木犀科(Oleaceae)						欧洲白蜡树(ash)(Fraxinus excelsior)	Fra e1		20	P	58A
欧洲女贞(Ligustrum vulgare)(Privet)	Lig v1		20	P	58A	欧洲白蜡树(ash)(Fraxinus excelsior)	Fra e1		20	P	58A
欧洲女贞(Ligustrum vulgare)(Privet)	Lig v1		20	P	58A	油橄榄(Olea europea)(olive)	Ole e1Ole e2Ole e3Ole e4Ole e5Ole e6Ole e7	抑制蛋白超氧化物歧化酶	1615-189.2321610	CCPPCp	59，6060A60BP80741P8074060C，U8634260D，P81430
欧洲丁香(Syringa vulgaris)(lilac)	Syr v1		20	P	58A	油橄榄(Olea europea)(olive)	Ole e1Ole e2Ole e3Ole e4Ole e5Ole e6Ole e7	抑制蛋白超氧化物歧化酶	1615-189.2321610	CCPPCp	59，6060A60BP80741P8074060C，U8634260D，P81430
欧洲丁香(Syringa vulgaris)(lilac)	Syr v1		20	P	58A	车前草科(Plantaginaceae)
长叶车前(English plantain)(Plantago lanceolata)	Pla 11		18	P	P842242	车前草科(Plantaginaceae)
长叶车前(English plantain)(Plantago lanceolata)	Pla 11		18	P	P842242	松目(Pinales)
日本柳杉(sugi)(Cryptomeria japonica)	Cry j1Cry j2		41-45	CC	55，5657，D29772	松目(Pinales)
日本柳杉(sugi)(Cryptomeria japonica)	Cry j1Cry j2		41-45	CC	55，5657，D29772	绿干柏(Cupressus arizonica)(cypress)	Cup a1		43	C	A1243570
阿希刺柏(Juniperus ashei)(mountain cedar)	Jun a1Jun a2Jun a3		4330	PCP	P8129457A，AJ40465357B，P81295	绿干柏(Cupressus arizonica)(cypress)	Cup a1		43	C	A1243570
阿希刺柏(Juniperus ashei)(mountain cedar)	Jun a1Jun a2Jun a3		4330	PCP	P8129457A，AJ40465357B，P81295	刺柏(Juniperus oxycedrus)(prickly juniper)	Jun o4	hom：钙调蛋白	29	C	57C，AF031471

山雪松(Juniperus sabinoides)(mountain cedar)	Jun s		50	P	58
山雪松(Juniperus sabinoides)(mountain cedar)	Jun s		50	P	58	铅笔柏(Juniperus virginiana)(eastern red cedar)	Jun v1		43	P	P81825
螨						铅笔柏(Juniperus virginiana)(eastern red cedar)	Jun v1		43	P	P81825
螨						菇螨(Acarus siro)(mite)	Aca s13	脂肪酸结合蛋白	14^*	C	AJ006774
热带无爪螨(Blomia tropicalis)(mite)	Blo t5Blo t12Blo t13	Bt1 1aBt6，脂肪酸结合蛋白.		CCC	U59102U27479U58106	菇螨(Acarus siro)(mite)	Aca s13	脂肪酸结合蛋白	14^*	C	AJ006774
热带无爪螨(Blomia tropicalis)(mite)	Blo t5Blo t12Blo t13	Bt1 1aBt6，脂肪酸结合蛋白.		CCC	U59102U27479U58106	户尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus)(mite)	Der p1Der p2Der p3Der p4Der p5Der p6Der p7Der p8Der p9Der p10Der p14	抗原P1胰蛋白酶淀粉酶胰凝乳蛋白酶谷胱甘肽转移酶胶原溶解丝氨酸蛋白质原肌球蛋白apolipophorin样蛋白	251428/3060142522/2836	CCCpCPCCPCC	6162636465666767A67BY14906
微角尘螨(Dermatophagoidesmicroeeras)(mite)	Der m1		25	P	68	户尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus)(mite)		抗原P1胰蛋白酶淀粉酶胰凝乳蛋白酶谷胱甘肽转移酶胶原溶解丝氨酸蛋白质原肌球蛋白apolipophorin样蛋白	251428/3060142522/2836	CCCpCPCCPCC	6162636465666767A67BY14906
微角尘螨(Dermatophagoidesmicroeeras)(mite)	Der m1		25	P	68	粉尘螨(Dermatophagoides farinae)(mite)	Der f1Der f2Der f3Der f10Der f11Der f14Der f15Der f16Der f17	原肌球蛋白副肌球蛋白mag3，apolipophorin98k几丁质酶凝溶胶蛋白/绒毛蛋白Ca结合EF蛋白质	25143098985353	CCCCCCCCC	6970，71637272AD17686AF17877271A71A
埋内欧螨(Euroglyphus maynei)(mite)	Eur m14	apolipophorin	177	C	AF149827	粉尘螨(Dermatophagoides farinae)(mite)		原肌球蛋白副肌球蛋白mag3，apolipophorin98k几丁质酶凝溶胶蛋白/绒毛蛋白Ca结合EF蛋白质	25143098985353	CCCCCCCCC	6970，71637272AD17686AF17877271A71A

害嗜鳞螨(Lepidoglyphus destructor)(storage mite)	Lep d2Lep d5Lep d7Lep d10Lep d13	原肌球蛋白	15	CCCCC	73，74，7575A，AJ25027875A，AJ271058AJ2509675A，AJ250279
害嗜鳞螨(Lepidoglyphus destructor)(storage mite)	Lep d2Lep d5Lep d7Lep d10Lep d13	原肌球蛋白	15	CCCCC	73，74，7575A，AJ25027875A，AJ271058AJ2509675A，AJ250279	Animals(动物)
畜牛(Bos domesticus)(domestic cattle)(也见食物)	Bos d2Bos d3Bos d4Bos d5Bos d6Bos d7Bos d8	Ag3，lipocalinCa-结合S100 homα乳清蛋白β乳球蛋白质血清白蛋白免疫球蛋白酪蛋白	201114，218，36716020-30	CCCCC	76，L42867L39834M18780X14712M739937777	Animals(动物)
畜牛(Bos domesticus)(domestic cattle)(也见食物)	Bos d2Bos d3Bos d4Bos d5Bos d6Bos d7Bos d8	Ag3，lipocalinCa-结合S100 homα乳清蛋白β乳球蛋白质血清白蛋白免疫球蛋白酪蛋白	201114，218，36716020-30	CCCCC	76，L42867L39834M18780X14712M739937777	犬(Canis familiaris)(Canis domesticus)(Dog)	Can f1Can f2Can f3	白蛋白	2527	CCC	78，7978，79S72946
家马(Equus caballus)(domestic horse)	Equ c1Equ c2Equ c3Equ c4Equ c5	lipocalinlipocalinAg3-XAgX	2518671717	CPCPP	U7082379A，79B79C，X7404579D	犬(Canis familiaris)(Canis domesticus)(Dog)	Can f1Can f2Can f3	白蛋白	2527	CCC	78，7978，79S72946
家马(Equus caballus)(domestic horse)	Equ c1Equ c2Equ c3Equ c4Equ c5	lipocalinlipocalinAg3-XAgX	2518671717	CPCPP	U7082379A，79B79C，X7404579D	猫(Felis domesticus)(cat)(唾液)	Fel d1Fel d2Fel d3	cat-1白蛋白抑半胱氨酸蛋白酶蛋白	3811	CCC	1579E，X8484279F，AF238996
小鼠(Mus musculus)(尿)	Mus m1	MUP	19	C	80，81	猫(Felis domesticus)(cat)(唾液)	Fel d1Fel d2Fel d3	cat-1白蛋白抑半胱氨酸蛋白酶蛋白	3811	CCC	1579E，X8484279F，AF238996
小鼠(Mus musculus)(尿)	Mus m1	MUP	19	C	80，81	大鼠(Rattus norvegius)(尿)	Rat n1		17	C	82，83
真菌(霉)						大鼠(Rattus norvegius)(尿)	Rat n1		17	C	82，83
真菌(霉)						子囊菌门(Ascomycota)
座囊菌目(Dothidiales)						子囊菌门(Ascomycota)

链格孢(Alternaria alternata)	Alt a1Alt a2Alt a3Alt a4Alt a6Alt a7Alt a10Alt a11Alt a12	热休克蛋白70蛋白质二硫化物异构酶酸性核糖体蛋白P2YCP4蛋白质醛脱氢酶烯醇化酶酸性核糖体蛋白P1	2825571122534511	CCCCCCCCC	U8263383A，U62442U87807，U87808X84217X78222，U87806X78225X78227，P42041U82437X84216
链格孢(Alternaria alternata)	Alt a1Alt a2Alt a3Alt a4Alt a6Alt a7Alt a10Alt a11Alt a12	热休克蛋白70蛋白质二硫化物异构酶酸性核糖体蛋白P2YCP4蛋白质醛脱氢酶烯醇化酶酸性核糖体蛋白P1	2825571122534511	CCCCCCCCC		多主枝孢(Cladosporium herbarum)	Cla h1Cla h2Cla h3Cla h4Cla h5Cla b6Cla h12	醛脱氢酶酸性核糖体蛋白P2YCP4蛋白质烯醇化酶酸性核糖体蛋白P1	13235311224611	CCCCC	83B，83C83B，83CX78228X78223X78224X78226X85180
散囊菌目(Eurotiales)						多主枝孢(Cladosporium herbarum)	Cla h1Cla h2Cla h3Cla h4Cla h5Cla b6Cla h12	醛脱氢酶酸性核糖体蛋白P2YCP4蛋白质烯醇化酶酸性核糖体蛋白P1	13235311224611	CCCCC	83B，83C83B，83CX78228X78223X78224X78226X85180
散囊菌目(Eurotiales)						黄曲霉(Aspergillus flavus)	Asp f113	碱性丝氨酸蛋白酶	34		84
烟曲霉(Aspergillus fumigatus)	Asp f1Asp f2Asp f3Asp f4Asp f5Asp f6Asp f7Asp f8Asp f9Asp f10Asp f11Asp f12Asp f13Asp f15Asp f16Asp f17Asp f18	过氧化物酶体蛋白金属蛋白酶锰超氧化物歧化酶核糖体蛋白P2天冬氨酸蛋白酶肽基脯氨酸异构酶热休克蛋白P90碱性丝氨酸蛋白酶液泡丝氨酸蛋白酶	183719304026.512113434249034164334	CCCCCCCCCCCCCC	M83781，S39330U56938U20722AJ001732Z30424U53561AJ223315AJ224333AJ223327X8509284A8584BAJ002026g3643813AJ22486584C	黄曲霉(Aspergillus flavus)	Asp f113	碱性丝氨酸蛋白酶	34		84
烟曲霉(Aspergillus fumigatus)			183719304026.512113434249034164334	CCCCCCCCCCCCCC		黑曲霉(Aspergillus niger)	Asp n14Asp n18Asp n？	β-木糖苷酶液泡丝氨酸蛋白酶	1053485	CCC	AF10894484BZ84377
米曲霉(Aspergillus oryzae)	Asp o13Asp o21	碱性丝氨酸蛋白酶TAKA-淀粉酶A	3453	CC	X17561D00434，M33218	黑曲霉(Aspergillus niger)	Asp n14Asp n18Asp n？	β-木糖苷酶液泡丝氨酸蛋白酶	1053485	CCC	AF10894484BZ84377
米曲霉(Aspergillus oryzae)	Asp o13Asp o21	碱性丝氨酸蛋白酶TAKA-淀粉酶A	3453	CC	X17561D00434，M33218	短密青霉(PenicilliumBrevicompactum)	Pen b13	碱性丝氨酸蛋白酶	33		86A

桔青霉(Penicillium citrinum)	Pen c3Pen c13Pen c19Pen c22w	过氧化物酶体膜蛋白碱性丝氨酸蛋白酶热休克蛋白P70烯醇化酶	18337046	CC	86B86AU64207AF254643
桔青霉(Penicillium citrinum)	Pen c3Pen c13Pen c19Pen c22w	过氧化物酶体膜蛋白碱性丝氨酸蛋白酶热休克蛋白P70烯醇化酶	18337046	CC	86B86AU64207AF254643	特异青霉(Penicillium notatum)	Pen n13Pen n18Pen n20	碱性丝氨酸蛋白酶液泡丝氨酸蛋白酶N-乙酰基氨基葡糖苷酶	343268		898987
草酸青霉(Penicillium oxalicum)	Pen o18	液泡丝氨酸蛋白酶	34		89	特异青霉(Penicillium notatum)	Pen n13Pen n18Pen n20	碱性丝氨酸蛋白酶液泡丝氨酸蛋白酶N-乙酰基氨基葡糖苷酶	343268		898987
草酸青霉(Penicillium oxalicum)	Pen o18	液泡丝氨酸蛋白酶	34		89	爪甲团囊菌目(Onygenales)
红色发癣菌(Trichophytonrubrum)	Tri r2Tri r4	丝氨酸蛋白酶		CC	9090	爪甲团囊菌目(Onygenales)
红色发癣菌(Trichophytonrubrum)	Tri r2Tri r4	丝氨酸蛋白酶		CC	9090	断发癣菌(Trichophyton tonsurans)	Tri t1Tri t4	丝氨酸蛋白酶	3083	PC	9190
酵母目(Saccharomycetales)						断发癣菌(Trichophyton tonsurans)	Tri t1Tri t4	丝氨酸蛋白酶	3083	PC	9190
酵母目(Saccharomycetales)						白假丝酵母(Candida albicans)	Cand a1		40	C	88
博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)	Cand b2		20	C	J04984，J04985	白假丝酵母(Candida albicans)	Cand a1		40	C	88
博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)	Cand b2		20	C	J04984，J04985	担子菌门(Basidiomycota)
Basidiolelastomycetes						担子菌门(Basidiomycota)
Basidiolelastomycetes						糠状鳞斑霉(Malassezia furfur)	Mala f1Mala f2Mala f3Mala f4Mala f5Mala f6	MF1，过氧化物酶体膜蛋白MF2，过氧化物酶体膜蛋白	21203518^17^	CCCCC	91AAB011804AB011805AJ011955AJ011956
担子菌纲(Basidiomycetes)						糠状鳞斑霉(Malassezia furfur)	Mala f1Mala f2Mala f3Mala f4Mala f5Mala f6	MF1，过氧化物酶体膜蛋白MF2，过氧化物酶体膜蛋白	21203518^17^	CCCCC	91AAB011804AB011805AJ011955AJ011956
担子菌纲(Basidiomycetes)						Psilocybe cubensis	Psi c1Psi c2	亲环蛋白	16		91B
毛头鬼伞(Coprinus comatus)(shaggy cap)	Cop c1Cop c2Cop c3Cop c5Cop c7	亮氨酸拉链蛋白	11	C	AJ132235AJ242791AJ242792AJ242793AJ242794	Psilocybe cubensis	Psi c1Psi c2	亲环蛋白	16		91B
毛头鬼伞(Coprinus comatus)(shaggy cap)	Cop c1Cop c2Cop c3Cop c5Cop c7	亮氨酸拉链蛋白	11	C	AJ132235AJ242791AJ242792AJ242793AJ242794	昆虫
埃及伊蚊(Aedes aegyptii)(mosquito)	Aed a1Aed a2	腺苷三磷酸双磷酸酶	6837	CC	L12389M33157	昆虫

意大利蜂(Apis mellifera)(Honeybee)	Api m1Api m2Api m4Api m6	磷脂酶A2透明质酸酶蜂毒肽	164437-8	CCCP	929394
意大利蜂(Apis mellifera)(Honeybee)	Api m1Api m2Api m4Api m6	磷脂酶A2透明质酸酶蜂毒肽	164437-8	CCCP	929394	大黄蜂(Bombus pennsylvanicus)(bumble bee)	Bom p1Bom p4	磷脂酶蛋白酶	16	PP	9595
德国小蠊(Blattellagermanica)(German cockroach)	Bla g1Bla g2Bla g4Bla g5Bla g6	Bd90k天冬氨酸蛋白酶calycin谷胱甘肽转移酶肌钙蛋白C	36212227	CCCCC	96979898	大黄蜂(Bombus pennsylvanicus)(bumble bee)	Bom p1Bom p4	磷脂酶蛋白酶	16	PP	9595
德国小蠊(Blattellagermanica)(German cockroach)	Bla g1Bla g2Bla g4Bla g5Bla g6	Bd90k天冬氨酸蛋白酶calycin谷胱甘肽转移酶肌钙蛋白C	36212227	CCCCC	96979898	美洲大蠊(Periplaneta americana)(American cockroach)	Per a1Per a3Per a7	Cr-PIICr-PI原肌球蛋白	72-7837	CCC	98AY14854

欧洲蠓(Chironomusthummì thummì)(midges)	Chi t1-9Chi t1.01Chi t1.02Chi t2.0101Chi t2.0102Chi t3Chi t4Chi t5Chi t6.01Chi t6.02Chi t7Chi t8Chi t9	血红蛋白组分III组分IV组分I组分IA组分II-β组分IIIA组分VI组分VIIA组分IX组分VIIB组分VIII组分X	16161616161616161616161616	CCCCCCCCCCCCC	99P02229P02230P02221P02221P02222P02231P02224P02226P02223P02225P02227P02228
欧洲蠓(Chironomusthummì thummì)(midges)			16161616161616161616161616	CCCCCCCCCCCCC		白斑脸大黄蜂(Dolichovespula maculata)(white face homet)	Dol m1Dol m2Dol m5	磷脂酶A1透明质酸酶抗原5	354423	CCC	100101102，103
黄色大黄蜂(Dolichovespula arenaria)(yellow hornet)	Dol a5	抗原5	23	C	104	白斑脸大黄蜂(Dolichovespula maculata)(white face homet)	Dol m1Dol m2Dol m5	磷脂酶A1透明质酸酶抗原5	354423	CCC	100101102，103
黄色大黄蜂(Dolichovespula arenaria)(yellow hornet)	Dol a5	抗原5	23	C	104	黄蜂(Polistesannularies)(wasp)	Pol a1Pol a2Pol a5	磷脂酶A1透明质酸酶抗原5	354423	PPC	105105104
地中海胡蜂(Polistes dominulus)(Mediterranean paper wasp)	Pol d1Pol d4Pol d5	丝氨酸蛋白酶	32-34	C	P81656	黄蜂(Polistesannularies)(wasp)	Pol a1Pol a2Pol a5	磷脂酶A1透明质酸酶抗原5	354423	PPC	105105104
地中海胡蜂(Polistes dominulus)(Mediterranean paper wasp)	Pol d1Pol d4Pol d5	丝氨酸蛋白酶	32-34	C	P81656	黄蜂(Polistes exclamans)
(wasp)	Pol e1	磷脂酶A1	34	P	107	黄蜂(Polistes exclamans)
(wasp)	Pol e1	磷脂酶A1	34	P	107		Pol e5	抗原5	23	C	104
黄蜂(Polistes fuscatus)							Pol e5	抗原5	23	C	104
黄蜂(Polistes fuscatus)						(wasp)	Pol f5	抗原5	23	C	106
黄蜂(Polistes metricus)						(wasp)	Pol f5	抗原5	23	C	106
黄蜂(Polistes metricus)						(wasp)	Pol m5	抗原5	23	C	106
黄边胡蜂(Vespa crabo)(European hornet)	Vesp c1Vesp c5	磷脂酶抗原5	3423	PC	107106	(wasp)	Pol m5	抗原5	23	C	106
黄边胡蜂(Vespa crabo)(European hornet)	Vesp c1Vesp c5	磷脂酶抗原5	3423	PC	107106	金环胡蜂(Vespa mandarina)giant asian hornet	Vesp m1Vesp m5				P81657
重黄胡蜂(Vespula flavopilosa)(yellowjacket)	Ves f5	抗原5	23	C	106	金环胡蜂(Vespa mandarina)giant asian hornet	Vesp m1Vesp m5				P81657

德国黄胡蜂(Vespula germanica)(yellowjacket)	Ves g5	抗原5	23	C	106
德国黄胡蜂(Vespula germanica)(yellowjacket)	Ves g5	抗原5	23	C	106	额斑黄胡蜂(Vespula maculifrons)(yellowjacket)	Ves m1Ves m2Ves m5	磷脂酶A1透明质酸酶抗原5	33.54423	CPC	108109104
树黄胡蜂(Vespula pennsylvanica)(yellowjacket)	Ves p5	抗原5	23	C	106	额斑黄胡蜂(Vespula maculifrons)(yellowjacket)	Ves m1Ves m2Ves m5	磷脂酶A1透明质酸酶抗原5	33.54423	CPC	108109104
树黄胡蜂(Vespula pennsylvanica)(yellowjacket)	Ves p5	抗原5	23	C	106	小黄蜂(Vespula squamosa)(yellow jacket)	Ves s5	抗原5	23	C	106
黄蜂(Vespula vidua)(wasp)	Ves vi5	抗原5	23	C	106	小黄蜂(Vespula squamosa)(yellow jacket)	Ves s5	抗原5	23	C	106
黄蜂(Vespula vidua)(wasp)	Ves vi5	抗原5	23	C	106	常见黄胡蜂(Vespula vulgaris)(yellowjacket)	Ves v1Ves v2Ves v5	磷脂酶A1透明质酸酶抗原5	354423	CPC	105A105A104
Myrmecia pilosula(Australian jumper ant)	Myr p1Myr p2			CC	X70256S81785	常见黄胡蜂(Vespula vulgaris)(yellowjacket)	Ves v1Ves v2Ves v5	磷脂酶A1透明质酸酶抗原5	354423	CPC	105A105A104
Myrmecia pilosula(Australian jumper ant)	Myr p1Myr p2			CC	X70256S81785	赤道火蚁(Solenopsis)geminata)(tropical fire ant)	Sol g2Sol g4
红外来火蚁(Solenopsis invicta)(Fire ant)	Sol i2Sol i3Sol i4		132413	CCC	110，111110110	赤道火蚁(Solenopsis)geminata)(tropical fire ant)	Sol g2Sol g4
红外来火蚁(Solenopsis invicta)(Fire ant)	Sol i2Sol i3Sol i4		132413	CCC	110，111110110	巴西火蚁(Solenopsis saevissima)(Brazilian fire ant)	Sol s2
食物						巴西火蚁(Solenopsis saevissima)(Brazilian fire ant)	Sol s2
食物						鳕(Gadus callarias)(Cod)	Gad e1	变应原M	12	C	112，113
大西洋鲑(Salmo salar)(Atlantic salmon)	Sal s1	小白蛋白	12	C	X97824	鳕(Gadus callarias)(Cod)	Gad e1	变应原M	12	C	112，113
大西洋鲑(Salmo salar)(Atlantic salmon)	Sal s1	小白蛋白	12	C	X97824	畜牛(Bos domesticus)(domestic cattle)(奶)	Bos d4Bos d5Bos d6Bos d7Bos d8	α-乳白蛋白β-乳球蛋白血清白蛋白免疫球蛋白酪蛋白	14.218.36716020-30	CCC	M18780X14712M739937777

鸡(Gallus domesticus)(Chicken)	Gal d1Gal d2Gal d3Gal d4Gal d5	卵类粘蛋白卵清蛋白Ag22，伴清蛋白溶菌酶血清白蛋白	2844781469	CCCCC	114，115114，115114，115114，115X60688
鸡(Gallus domesticus)(Chicken)	Gal d1Gal d2Gal d3Gal d4Gal d5	卵类粘蛋白卵清蛋白Ag22，伴清蛋白溶菌酶血清白蛋白	2844781469	CCCCC	114，115114，115114，115114，115X60688	刀额新对虾(Metapenaeus ensis)(Shrimp)	Met e1	原肌球蛋白	C		U08008
褐对虾(Penaeus aztecus)(shrimp)	Pen a1	原肌球蛋白	36	P	116	刀额新对虾(Metapenaeus ensis)(Shrimp)	Met e1	原肌球蛋白	C		U08008
褐对虾(Penaeus aztecus)(shrimp)	Pen a1	原肌球蛋白	36	P	116	印度对虾(Penaeus indicus)(Shrimp)	Pen i1	原肌球蛋白	34	C	117
日本鱿(Todarodes pacificus)(Squid)	Tod p1	原肌球蛋白	38	P	117A	印度对虾(Penaeus indicus)(Shrimp)	Pen i1	原肌球蛋白	34	C	117
日本鱿(Todarodes pacificus)(Squid)	Tod p1	原肌球蛋白	38	P	117A	鲍鱼(Haliotis midae)(abalone)	Hal m1		49		117B
旱芹(Apium graveolens)(Celery)	Api g1Api g4Api g5	hom：Bet v1抑制蛋白	16^*55/58	CP	Z48967AF129423P81943	鲍鱼(Haliotis midae)(abalone)	Hal m1		49		117B
旱芹(Apium graveolens)(Celery)	Api g1Api g4Api g5	hom：Bet v1抑制蛋白	16^*55/58	CP	Z48967AF129423P81943	芥菜(Brassica juncea)(oriental mustard)	Bra j1	2S白蛋白	14	C	118
芜青(Brassica rapa)(turnip)	Bra r2	hom：prohevein	25		P81729	芥菜(Brassica juncea)(oriental mustard)	Bra j1	2S白蛋白	14	C	118
芜青(Brassica rapa)(turnip)	Bra r2	hom：prohevein	25		P81729	大麦(Hordeum vulgare)(barley)	Hor v15	BMAI-1	15	C	119
玉蜀黍(zea mays)(maize，corn)	Zea m14	脂转移蛋白	9	P	P19656	大麦(Hordeum vulgare)(barley)	Hor v15	BMAI-1	15	C	119
玉蜀黍(zea mays)(maize，corn)	Zea m14	脂转移蛋白	9	P	P19656	稻(Oryza sativa)(rice)	Ory s1			C	U31771
欧洲榛(Corylus avellana)(hazelnut)	Cor a1.0401	hom：Bet v1	17	C	AF136945	稻(Oryza sativa)(rice)	Ory s1			C	U31771
欧洲榛(Corylus avellana)(hazelnut)	Cor a1.0401	hom：Bet v1	17	C	AF136945	苹果(Malus domestica)(apple)	Mal d1Mal d2Mal d3	hom：Bet v1hom：奇异果甜蛋白脂转移蛋白	9	CCC	X83672AJ243427
西洋梨(Pyrus communis)(pear)	Pyr c1Pyr c4Pyr c5	hom：Bet v1抑制蛋白hom：异黄酮还原酶	181433.5	CCC	AF05730AF129424AF071477	苹果(Malus domestica)(apple)	Mal d1Mal d2Mal d3	hom：Bet v1hom：奇异果甜蛋白脂转移蛋白	9	CCC	X83672AJ243427

鳄梨(Persea americana)(avocado)	Pers a1	内切几丁质酶	32	C	Z78202
鳄梨(Persea americana)(avocado)	Pers a1	内切几丁质酶	32	C	Z78202	杏(Prunus armeniaca)(apricot)	Pru ar1Pru ar3	hom：Bet v1脂转移蛋白	9	CP	U93165
樱桃(Prunus avium)(sweet cherry)	Pru av1Pru av2Pru av3Pru av4	hom：Bet v1hom：奇异果甜蛋白脂转移蛋白抑制蛋白	1015	CCCC	U66076U32440AF221501AF129425	杏(Prunus armeniaca)(apricot)	Pru ar1Pru ar3	hom：Bet v1脂转移蛋白	9	CP	U93165
樱桃(Prunus avium)(sweet cherry)	Pru av1Pru av2Pru av3Pru av4	hom：Bet v1hom：奇异果甜蛋白脂转移蛋白抑制蛋白	1015	CCCC	U66076U32440AF221501AF129425	欧洲李(Prunus domestica)(European plum)	Pru d3	脂转移蛋白	9	P	119A
桃(Prunus persica)(peach)	Pru p3	脂转移蛋白	10	P	P81402	欧洲李(Prunus domestica)(European plum)	Pru d3	脂转移蛋白	9	P	119A
桃(Prunus persica)(peach)	Pru p3	脂转移蛋白	10	P	P81402	葡萄(Vitis vinifera)(grape)	Vit v1	脂转移蛋白	9	P	P80274
大蕉(Musa paradisiaca)(banana)	Mus xp1	抑制蛋白	15	C	AF377948	葡萄(Vitis vinifera)(grape)	Vit v1	脂转移蛋白	9	P	P80274
大蕉(Musa paradisiaca)(banana)	Mus xp1	抑制蛋白	15	C	AF377948	凤梨(Ananas comosus)(pineapple)	Ana c1	抑制蛋白	15	C	AF377949
荔枝(Lichti chinensis)(litchi)	Lit c1	抑制蛋白	15	C	AY049013	凤梨(Ananas comosus)(pineapple)	Ana c1	抑制蛋白	15	C	AF377949
荔枝(Lichti chinensis)(litchi)	Lit c1	抑制蛋白	15	C	AY049013	白芥(Sinapis alba)(yellow mustard)	Sin a1	2S白蛋白	14	C	120
大豆(Glycine max)(soybean)	Gly m1Gly m2Gly m3	HPS抑制蛋白	7814	PPC	121A57106AJ223982	白芥(Sinapis alba)(yellow mustard)	Sin a1	2S白蛋白	14	C	120
大豆(Glycine max)(soybean)	Gly m1Gly m2Gly m3	HPS抑制蛋白	7814	PPC	121A57106AJ223982	落花生(Arachis hypogaea)(peanut)	Ara h1Ara h2Ara h3Ara h4Ara h5Ara h6Ara h7	豌豆球蛋白羽扇豆球蛋白大豆球蛋白大豆球蛋白抑制蛋白hom：羽扇豆球蛋白hom：羽扇豆球蛋白	63.5176037151515	CCCCCCC	L34402L77197AF093541AF086821AF059616AF092846AF091737
中华猕猴桃(Actinidia chinensis)(kiwi)	Act c1	半胱氨酸蛋白酶	30	P	P00785	落花生(Arachis hypogaea)(peanut)	Ara h1Ara h2Ara h3Ara h4Ara h5Ara h6Ara h7	豌豆球蛋白羽扇豆球蛋白大豆球蛋白大豆球蛋白抑制蛋白hom：羽扇豆球蛋白hom：羽扇豆球蛋白	63.5176037151515	CCCCCCC	L34402L77197AF093541AF086821AF059616AF092846AF091737
中华猕猴桃(Actinidia chinensis)(kiwi)	Act c1	半胱氨酸蛋白酶	30	P	P00785	辣椒(Capsicum annum)(bell pepper)	Cap a1w	渗透蛋白样蛋白	23	c	AJ297410

马铃著(Solanum tuberosum)(potato)	Sola t1Sola t2Sola t3Sola t4	patatin组织蛋白酶D抑制剂半胱氨酸蛋白酶抑制剂天冬氨酸蛋白酶抑制剂	43212116+4	PPPP	P15476P16348P20347P30941
马铃著(Solanum tuberosum)(potato)	Sola t1Sola t2Sola t3Sola t4	patatin组织蛋白酶D抑制剂半胱氨酸蛋白酶抑制剂天冬氨酸蛋白酶抑制剂	43212116+4	PPPP	P15476P16348P20347P30941	巴西坚果(Bertholletia excelsa)(Brazil nut)	Ber e1	2S白蛋白	9	C	P04403，M17146
核桃(Juglans regia)(English walnut)	Jug r1Jug r2	2S白蛋白豌豆球蛋白	44	CC	U66866AF066055	巴西坚果(Bertholletia excelsa)(Brazil nut)	Ber e1	2S白蛋白	9	C	P04403，M17146
核桃(Juglans regia)(English walnut)	Jug r1Jug r2	2S白蛋白豌豆球蛋白	44	CC	U66866AF066055	蓖麻(Ricinus communis)(Castor bean)	Ric c1	2S白蛋白		C	P01089
胡麻(Sesamum indicum)(sesame)	Ses i1Ses i2Ses i3	2S白蛋白2S白蛋白7S豌豆球蛋白样球蛋白	9745	CCC	121A，AF240005AF091841AF240006	蓖麻(Ricinus communis)(Castor bean)	Ric c1	2S白蛋白		C	P01089
胡麻(Sesamum indicum)(sesame)	Ses i1Ses i2Ses i3	2S白蛋白2S白蛋白7S豌豆球蛋白样球蛋白	9745	CCC	121A，AF240005AF091841AF240006	甜瓜(Cucumis melo)
(muskmelon)	Cuc m1	丝氨酸蛋白酶	66	C	D32206	甜瓜(Cucumis melo)
(muskmelon)	Cuc m1	丝氨酸蛋白酶	66	C	D32206	其他
简单异尖线虫(Anisakis simplex)(nematode)	Ani s1Ani s2Ani s3	副肌球蛋白原肌球蛋白	249741	PCC	121B，A59069AF173004121C，Y19221	其他
简单异尖线虫(Anisakis simplex)(nematode)	Ani s1Ani s2Ani s3	副肌球蛋白原肌球蛋白	249741	PCC	121B，A59069AF173004121C，Y19221	猪蛔虫(Ascaris suum)(worm)	As c s1		10	P	122
Dendronephthyanipponica(soft coral)	Den n1		53	P	122A	猪蛔虫(Ascaris suum)(worm)	As c s1		10	P	122

巴西橡胶(Heveabrasiliensis)(rubber，latex)	Hev b1Hev b2Hev b3Hev b4Hev b5Hev b6.01Hev b6.02Hev b6.03Hev b7.01Hev b7.02Hev b8Hev b9Hev b10Hev b11wHev b12	延伸因子1，3-葡聚糖酶微螺旋复合物组分橡胶蛋白前体橡胶蛋白(hevein)C-末端片段hom：来自B-血清的patatinhom：来自C-血清的patatin抑制蛋白烯醇化酶锰超氧化物歧化酶1类几丁质酶脂转移蛋白	5834/3624100-115162051442441451269.3	PCPPCCCCCCCCCCC	123，124125126，127128U42640M36986，p02877M36986，p02877M36986，p02877U80598AJ223038Y15042，AJ132397，AF119365，AF119366AJ132580AJ249148AJ238579
巴西橡胶(Heveabrasiliensis)(rubber，latex)			5834/3624100-115162051442441451269.3	PCPPCCCCCCCCCCC		猫蚤(Ctenocephalides felisfelis)(cat flea)	Cte f1Cte f2	M1b	27	C	AF231352
人(Homo sapiens)人自身变应原	Hom s1Hom s2Hom s3Hom s4Hom s5		73^10.3^20.1^36^42.6^*	CCCCC	Y14314X80909X89985Y17711P02538	猫蚤(Ctenocephalides felisfelis)(cat flea)	Cte f1Cte f2	M1b	27	C	AF231352

^a克隆(C)或者蛋白(P)数据

附录I参考文献

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117A.M.Miyazawa，H.Fukamachi，Y.Inagaki，G.Reese，C.B.Daul，S.B.Lehrer，S.Inouye，M.Sakaguchi.1996.一种乌贼(T0darodes pacificus)第一个主要变应原的鉴定.J.Allergy Clin.Immunol.98：948-953。

117B.Lopata AL，Zinn C，Potter PC.在鲍鱼(Haliotis midae)中一种特异49kd IgE-结合蛋白(Hal-m-1)的鉴定和超敏反应特征.J.Allergy Clin.Immunol.100：642-648，1997。

117C.K.Hoffmann-Sommergruber，G.O′Riordain，H.Ahorn，C.Ebher，M.Laimer Da Camara Machado，H.Phringer，O.Scheiner，H.Breiteneder.1999.来自胡萝卜的Dau c 1——Bet v 1同源的蛋白的分子鉴定及其与Bet v 1和Api g 1的交叉反应.Clin Exp Allergy 29：840-847。

118.Monsalve，R.I.，M.A.Gonzalez de la Pena，L.Menendez-Arias，C.Lopez-Otin，M.Villalba，和R.Rodriguez.1993.一种新的芥菜变应原的鉴定，Bra j IE.Detection of an allergenic epitope.Biochem.J.293：625-632。

118A.MonsalVe RI，Gonzalez de la Pena MA，Lopez-Otin C，Fiandor A，Fernandez C，Villalba M，Rodriguez R.1997.油菜籽粉末中一种气源式致敏原蛋白的检测、分离和完全氨基酸序列.Clin Exp Allergy 27：833-841.119.Mena，M.，R.Sanchez？Monge，L.Gomez，G.Salcedo，和P.Carbonero.1992.和面包师哮喘病相关的一种主要大麦变应原是一种昆虫α-淀粉酶的糖基化单体抑制物：其cDNA克隆和基因的染色体定位.PlantMolec.Biol.20：451-458.

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119B.Pastorello EA，Ortolani C，Farioli L，Pravettoni V，Ispano M，BorgaA，Bengtsson A，Incorvaia C，Berti C，Zanussi C.1994.***反应综合症病人的桃子、杏子、李子和樱桃的变应原交叉反应：体内和体外研究.J.Allergy Clin.Immunol.94：699-707。

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126.Alenius H，Palosuo T，Kelly K，Kurup V，Reunala T，Makinen-Kiljunen S，Turjanmaa K Fink J.1993.IgE对脊柱裂和其他先天性异常的橡胶过敏儿童中14-kD和27-kD的天然橡胶蛋白的反应.Int ArchAllergy Immunol 102：61-66。

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128.Sunderasan E，Hamzah S，Hamid S，Ward MA，Yeang HY，CardosaMJ.1995.Latex B-血清J-1，3-葡聚糖酶(Hev b 2)和微螺旋的一个组分(Hev b 4)是主要橡浆变应原.J nat Rubb Res 10：82-99.

表9.蛋白质数据库(PDB)中可得到其结构的变应原

ID NO：1A0K

登记：02-12-1997实验方法：X-射线衍射分辨率：2.20_

标题拟南芥抑制蛋白I

分类细胞骨架

化合物 Mol_Id：1；分子：抑制蛋白；链：无；工程化：重组植物蛋白；生

物单元：单体

ID NO：1A9V

登记：10-4-1998实验方法：核磁共振，10个结构

标题主要屋尘螨变应原Der P 2的三级结构，核磁共振，10个结构

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：螨变应原Der P 2；链：无；工程化：是；突变：

D1S；其他细节：以增强N末端Met去除而制备的D1S突变株

ID NO：1AHK

登记：07-4-1997实验方法：核磁共振，最小化平均结构

标题 Der F 2，粉尘螨的主要螨变应原，核磁共振，最小化平均结构

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：Der F 2；链：无；同物异名：Der F II；工程化：

是

ID NO：1AHM

登记：07-4-1997实验方法：核磁共振，10个结构

标题 Der F 2，粉尘螨的主要螨变应原，核磁共振，10个结构

分类变应原

是

ID NO：1B6F

登记：13-1-1999实验方法：核磁共振，23个结构

标题桦属花粉变应原Bet V 1

分类植物蛋白

化合物 Mol_Id：1；分子：主要花粉变应原Bet V 1-A；链：A；工程化：是；

突变：是

ID NO：1BBG

登记：24-4-1998实验方法：核磁共振，最小化平均结构

标题来自三裂豚草V的豚草花粉变应原，核磁共振，最小化平均结构

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：花粉变应原5；链：无

ID NO：1BJ7

登记：02-7-1998实验方法：X-射线衍射分辨率：1.80_

标题牛Lipocalin变应原Bos D 2

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：D 2；链：无；同物异名：皮屑主要变应原

Bda20，皮肤变应原Bda20；工程化：是；生物单元：单体

ID NO：1BMW

登记：27-7-1998实验方法：核磁共振，38个结构

标题植物变应原中的一种III型纤连蛋白折叠：来自梯牧草花粉的Phl Pii

的溶液结构，核磁共振，38个结构

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：花粉变应原Phl P2；链：无；同物异名：Phl P

II；工程化：是；生物单元：单体

ID NO：1BTV

登记：30-1-1997实验方法：核磁共振，20个结构

标题 Bet V 1的结构，核磁共振，20个结构

分类主要桦树花粉变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：Bet V 1；链：无；工程化：是

ID NO：1BV1

登记：08-7-1997实验方法：X-射线衍射分辨率：2.00_

标题桦属花粉变应原Bet V 1

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：Bet V 1；链：无；同物异名：主要花粉变应原

Bet V 1-A；工程化：是

ID NO：1BWH

登记：24-9-1998实验方法：X-射线衍射分辨率：1.80_

标题利用Ground Control生长的鸡蛋卵清溶菌酶的四方晶系的1.8A结

构

分类水解酶

化合物 Mod_Id：1；分子：溶菌酶；链：A；同物异名：Gal D IV，变应原

Gal D 4；Ec：3.2.1.17

ID NO：1BWI

登记：24-9-1998实验方法：X-射线衍射分辨率：1.80_

标题利用Microbatch Oil Drop生长的鸡蛋卵清溶菌酶四方晶系的1.8A

结构

分类水解酶

化合物 Mol_Id：1；分子：溶菌酶；链：A；同物异名：Gal D IV，变应原

Gal D4；Ec：3.2.1.17

ID NO：1BWJ

登记：18-9-1998实验方法：X-射线衍射分辨率：1.80_

标题微重力生长的鸡蛋卵清溶菌酶四方晶系的1.8A结构

分类水解酶

化合物 Mol Id：1；分子：溶菌酶；链：A；同物异名：Gal D IV，变应原

Gal D4；Ec：3.2.1.17

ID NO：1CQA

登记：26-7-1996实验方法：X-射线衍射分辨率：2.40_

标题桦属花粉抑制蛋白

分类收缩蛋白质

化合物 Mol_Id：1；分子：抑制蛋白；链：无；工程化：是

ID NO：1E09

登记：15-3-2000实验方法：核磁共振，22个结构

标题主要樱桃变应原Pru Av 1的溶液结构

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：Pru Av 1；链：A；工程化：是

ID NO：1EW3

登记：21-4-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：2.30_

标题主要马变应原Equ C 1的晶体结构

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：变应原Equ C 1；链：A；工程化：是

ID NO：1F2K

登记：26-5-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：2.30_

标题卡氏棘阿米巴(Acanthamoeba Castellanii)抑制蛋白II的晶体结

构，立方晶型

分类结构蛋白

化合物 Mol_Id：1；分子：抑制蛋白II；链：A，B；工程化：是

ID NO：1FCQ

登记：19-7-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：1.60_

标题蜜蜂毒液透明质酸酶的晶体结构(单斜晶系)

分类水解酶

化合物 Mol_Id：1；分子：透明质酸葡糖胺酶；链：A；同物异名：透明质酸

酶，Api M II；Ec：3.2.1.35；工程化：是

ID NO：1FCU

登记：19-7-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：2.10_

标题蜜蜂毒液透明质酸酶晶体结构(三角系)

分类水解酶

酶，Api M II；Ec：3.2.1.35；工程化：是

ID NO：1FCV

登记：19-7-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：2.65_

标题蜜蜂毒液透明质酸酶在与透明质酸四聚体的复合体中的晶体结构

分类水解酶

酶，Api M II；Ec：3.2.1.35；工程化：是

ID NO：1FLQ

登记：15-8-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：1.80_

标题用丙氨酸代替甘氨酸的鸡蛋卵清溶菌酶突变体

分类水解酶

化合物 Mol_Id：1；分子：溶菌酶；链：A；同物异名：1，4--N-乙酰胞壁质

酶C，变应原Gal D 4，Gal D IV；Ec：3.2.1.17；工程化：是；突变：

是

ID NO：1FLU

登记：15-8-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：1.78_

标题用丙氨酸代替甘氨酸的鸡蛋卵清溶菌酶突变体

分类水解酶

是

ID NO：1FLW

登记：15-8-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：1.81_

标题用丙氨酸代替甘氨酸的鸡蛋卵清溶菌酶突变体

分类水解酶

是

ID NO：1FLY

登记：15-8-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：1.83_

标题用丙氨酸代替甘氨酸的鸡蛋卵清溶菌酶突变体

分类水解酶

是

ID NO：1FN5

登记：21-8-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：1.78_

标题用丙氨酸代替甘氨酸的鸡蛋卵清溶菌酶突变体

分类水解酶

是

ID NO：1FSK

登记：11-9-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：2.90_

标题一种单克隆IgG抗体Fab片段和桦属花粉主要变应原Bet V 1之间

形成复合物

分类免疫***

化合物 Mol_Id：1；分子：主要花粉变应原Bet V 1-A；链：A，D，G，J；同物

异名：Bet V I-A，Betvi变应原；工程化：是

Mol_Id：2；分子：免疫球蛋白轻链；链：B，E，H，K；同物异名：

Bvl6 Fab-片段，Mopc21编码序列；工程化：是

Mol_Id：3；分子：抗体重链Fab；链：C，F，I，L；同物异名：单克

隆抗体Mst2的重链；工程化：是

ID NO：1G5U

登记：02-11-2000实验方法：X-射线衍射分辨率：3.10_

标题橡胶抑制蛋白Hevb8

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：抑制蛋白；链：A，B；工程化：是

ID NO：1H6M

登记：19-6-2001实验方法：X-射线衍射分辨率：1.64_

标题鸡蛋卵清溶菌酶的共价糖基-酶中间体

分类水解酶(O-糖基)

化合物 Mol_Id：1；分子：溶菌酶C；同物异名：1，4--N-胞壁质酶C，变应

原Gal D 4，Gal D IV；链：A；Ec：3.2.1.17；工程化：是；突变：是；

其他细节：共价2-氟壳二糖基酶中间体

ID NO：1JTI

登记：21-8-2001实验方法：X-射线衍射分辨率：2.30_

标题 Pl-Pl′切割的卵清蛋白突变体R339T的环***的结构

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：卵清蛋白；链：A，B；工程化：是；突变：是

ID NO：1JTT

登记：22-8-2001实验方法：X-射线衍射分辨率：2.10_

标题抗原-抗体复合物中的简并界面

分类免疫***，溶菌酶

化合物 Mol_Id：1；分子：Vh单结构域抗体；链：A；片段：Vh区片段；

工程化：是

Mol_Id：2；分子：溶菌酶；链：L；片段：酶；同物异名：1，4--N-

乙酰胞壁质酶C，变应原Gal D IV；Ec：3.2.1.17

ID NO：1KOK

登记：19-9-2001实验方法：X-射线衍射分辨率：2.35_

标题酵母抑制蛋白，立方晶型

分类收缩蛋白质

化合物 Mol_Id：1；分子：抑制蛋白；链：A；工程化：是

ID NO：1KKC

登记：07-12-2001实验方法：X-射线衍射分辨率：2.00_

标题烟曲霉Mnsod的晶体结构

分类氧化还原酶

化合物 Mol_Id：1；分子：二氧化锰歧化酶；链：A，B，X，Y；

同物异名：Mnsod；Ec：1.15.1.1；工程化：是

ID NO：1KUR

登记：22-1-2002实验方法：理论模型

标题山雪松花粉变应原Jun A 3的理论模型

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：变应原Jun A 3；链：A；同物异名：致病相关

蛋白

ID NO：1PLM

登记：09-1-1998实验方法：理论模型

标题和聚-L-脯氨酸复合的拟南芥属抑制蛋白1，理论模型

分类复合物(蛋白/肽)

化合物 Mol_Id：1；分子：抑制蛋白1；链：A；工程化：是Mol Id：2；

分子：聚-L-脯氨酸；链：B；工程化：是

ID NO：1PRQ

登记：18-8-1997实验方法：X-射线衍射分辨率：2.50_

标题卡氏棘阿米巴(Acanthamoeba Castellanii)抑制蛋白la

分类收缩蛋白质

化合物 Mol_Id：1；分子：抑制蛋白la；链：无；工程化：是

ID NO：1QMR

登记：06-10-1999实验方法：X-射线衍射分辨率：2.15_

标题桦属花粉变应原Bet V 1突变体N28T，K32Q，E45S，P108G

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：主要花粉变应原Bet V 1-A；链：A；同物异名：

BetV 1；工程化：是；突变：是

ID NO：1QNX

登记：25-10-1999实验方法：X-射线衍射分辨率：1.90_

标题Ves V 5，一种常见黄胡蜂毒液变应原

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：Ves V 5；链：A；同物异名：抗原5；工程化：

是

ID NO：1WHO

登记：04-4-1997实验方法：X-射线衍射分辨率：1.90_

标题变应原Phl P 2

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：变应原Phl P 2；链：无；同物异名：Phl P II；

工程化：是

ID NO：1WHP

登记：04-4-1997实验方法：X-射线衍射分辨率：3.00_

标题变应原Phl P 2

分类变应原

工程化：是

ID NO：2BBG

登记：24-4-1998实验方法：核磁共振，30个结构

标题三裂豚草的豚草花粉变应原V，核磁共振，30个结构

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：花粉变应原5；链：无

ID NO：3BBG

登记：24-4-1998实验方法：核磁共振，2个结构

标题三裂豚草的豚草花粉变应原V的Multi-Conformer结构，核磁共振，2

个结构

分类变应原

化合物 Mol_Id：1；分子：花粉变应原5；链：无

ID NO：3NUL

登记：27-11-1996实验方法：X-射线衍射分辨率：1.60_

标题拟南芥抑制蛋白I

分类肌动蛋白-结合蛋白

化合物 Mol_Id：1；分子：抑制蛋白I；链：无；工程化：硒代甲硫氨酰

基蛋白.

序列表

<110>洛克菲勒大学和ALK阿贝罗股份有限公司(The Rockefeller University ALK

Abello)

<120>保留天然变应原的免疫原性并具减弱的变应原性的重组杂合变应原构建体

<130>2313/2H587WO0

<150>US 60/272,818

<151>2001-03-02

<160>98

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>8

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂(Vespula vulgaris)

<400>1

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys

1 5

<210>2

<211>18

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>2

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys

<210>3

<211>24

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>3

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro

20

<210>4

<211>32

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>4

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Val Val Val

20 25 30

<210>5

<211>39

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>5

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Val Val Val

20 25 30

Ser Tyr Gly Leu Thr Lys Gln

35

<210>6

<211>46

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>6

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly ser Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Val Val Val

20 25 30

Ser Tyr Gly Leu Thr Lys Gln Glu Lys Gln Asp Ile Leu Lys

35 40 45

<210>7

<211>48

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>7

Gln Val Gly Gln Asn Val Ala Leu Thr Gly Ser Thr Ala Ala Lys Tyr

1 5 10 15

Asp Asp Pro Val Lys Leu Val Lys Met Trp Glu Asp Glu Val Lys Asp

20 25 30

Tyr Asn Pro Lys Lys Lys Phe Ser Gly Asn Asp Phe Leu Lys Thr Gly

35 40 45

<210>8

<211>49

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>8

His Tyr Thr Gln Met Val Trp Ala Asn Thr Lys Glu Val Gly Cys Gly

1 5 10 15

Ser Ile Lys Tyr Ile Gln Glu Lys Trp His Lys His Tyr Leu Val Cys

20 25 30

Asn Tyr Gly Pro Ser Gly Asn Phe Lys Asn Glu Glu Leu Tyr Gln Thr

35 40 45

Lys

<210>9

<211>11

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>9

Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Val Val Val

1 5 10

<210>10

<211>11

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>10

Leu Thr Gly Ser Thr Ala Ala Lys Tyr Asp Asp

1 5 10

<210>11

<211>9

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>11

Pro Lys Lys Lys Phe Ser Gly Asn Asp

1 5

<210>12

<211>7

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>12

Ile Gln Ile Lys Trp His Lys

1 5

<210>13

<211>10

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>13

Phe Lys Asn Glu Glu Leu Tyr Gln Thr Lys

1 5 10

<210>14

<211>615

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>14

aacaattatt gtaaaataaa atgtttgaaa ggaggtgtcc atactgcctg caaatatgga 60

agtcttaaac cgaattgcgg taataaggta gtggtatcct atggtctaac gaaacaagag 120

aaacaagaca tcttaaagga gcacaatgac tttagacaaa aaattgcacg aggattggag 180

actagaggta atcctggacc acagcctcca gcgaagaata tgaaaaattt ggtatggaac 240

gacgagttag cttatgtcgc ccaagtgtgg gctaatcaat gtcaatatgg tcacgatact 300

tgcagggatg tagcaaaata tcaggttgga caaaacgtag ccttaacagg tagcacggct 360

gctaaatacg atgatccagt taaactagtt aaaatgtggg aagatgaagt gaaagattat 420

aatcctaaga aaaagttttc gggaaacgac tttctgaaaa ccggccatta cactcaaatg 480

gtttgggcta acaccaagga agttggttgt ggaagtataa aatacattca agagaaatgg 540

cacaaacatt accttgtatg taattatgga cccagcggaa actttaagaa tgaggaactt 600

tatcaaacaa agtaa 615

<210>15

<211>618

<212>DNA

<213>Polistes annularis

<400>15

gttgattatt gtaaaataaa gtgtccaagt ggtatccata cagtctgcca atatggagaa 60

tcgacaaaac caagcaagaa ttgtgccggt aaagtaatca aatcggttgg tccaacggaa 120

gaggagaaaa aattaatcgt aagcgagcat aatcggttta gacaaaaagt tgcacagggg 180

ttggaaacaa gaggtaatcc tggaccacaa cctgctgcct cggacatgaa tgatttggta 240

tggaacgatg aattagcaca tatcgcgcaa gtatgggcca gccaatgcca atttctcgta 300

cacgacaaat gcaggaatac cgcaaaatat ccagttggac aaaatatagc gtatgcaggt 360

ggttctaact taccagatgt agtcagtcta atcaaacttt gggaaaacga agtgaaagat 420

tttaattaca atacaggaat aacaaaacaa aactttgcta aaattggcca ttacactcaa 480

atggtttggg gtaaaactaa agaaattggt tgtggatctc taaaatatat ggaaaataat 540

atgcaaaatc attacctcat atgtaattat ggaccagctg gaaattactt gggtcaacta 600

ccttatacaa aaaaataa 618

<210>16

<211>204

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>16

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro Asn Cys G1y Asn Lys Val Val Val

20 25 30

Ser Tyr Gly Leu Thr Lys Gln Glu Lys Gln Asp Ile Leu Lys Glu His

35 40 45

Asn Asp Phe Arg Gln Lys Ile Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Lys Asn Leu Val Trp Asn

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Tyr Val Ala Gln Val Trp Ala Asn Gln Cys Gln Tyr

85 90 95

Gly His Asp Thr Cys Arg Asp Val Ala Lys Tyr Gln Val Gly Gln Asn

100 105 110

Val Ala Leu Thr Gly Ser Thr Ala Ala Lys Tyr Asp Asp Pro Val Lys

115 120 125

Leu Val Lys Met Trp Glu Asp Glu Val Lys Asp Tyr Asn Pro Lys Lys

130 135 140

Lys Phe Ser Gly Asn Asp Phe Leu Lys Thr Gly His Tyr Thr Gln Met

145 150 155 160

Val Trp Ala Asn Thr Lys Glu Val Gly Cys Gly Ser Ile Lys Tyr Ile

165 170 175

Gln Glu Lys Trp His Lys His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ser

180 185 190

Gly Asn Phe Lys Asn Glu Glu Leu Tyr Gln Thr Lys

195 200

<210>17

<211>205

<212>PRT

<213>Polistes annularis

<400>17

Val Asp Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Pro Ser Gly Ile His Thr Val Cys

1 5 10 15

Gln Tyr Gly Glu Ser Thr Lys Pro Ser Lys Asn Cys Ala Gly Lys Val

20 25 30

Ile Lys Ser Val Gly Pro Thr Glu Glu Glu Lys Lys Leu Ile Val Ser

35 40 45

Glu His Asn Arg Phe Arg Gln Lys Val Ala Gln Gly Leu Glu Thr Arg

50 55 60

Gly Asn Pro Gly Pro Gln Pro Ala Ala Ser Asp Met Asn Asp Leu Val

65 70 75 80

Trp Asn Asp Glu Leu Ala His Ile Ala Gln Val Trp Ala Ser Gln Cys

85 90 95

Gln Phe Leu Val His Asp Lys Cys Arg Asn Thr Ala Lys Tyr Pro Val

100 105 110

Gly Gln Asn Ile Ala Tyr Ala Gly Gly Ser Asn Leu Pro Asp Val Val

115 120 125

Ser Leu Ile Lys Leu Trp Glu Asn Glu Val Lys Asp Phe Asn Tyr Asn

130 135 140

Thr Gly Ile Thr Lys Gln Asn Phe Ala Lys Ile Gly His Tyr Thr Gln

145 150 155 160

Met Val Trp Gly Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Leu Lys Tyr

165 170 175

Met Glu Asn Asn Met Gln Asn His Tyr Leu Ile Cys Asn Tyr Gly Pro

180 185 190

Ala Gly Asn Tyr Leu Gly Gln Leu Pro Tyr Thr Lys Lys

195 200 205

<210>18

<211>24

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>18

aacaattatt gtaaaataaa atgt 24

<210>19

<211>54

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>19

aacaattatt gtaaaataaa atgtttgaaa ggaggtgtcc atactgcctg caaa 54

<210>20

<211>72

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>20

aacaattatt gtaaaataaa atgtttgaaa ggaggtgtcc atactgcctg caaatatgga 60

agtcttaaac cg 72

<210>21

<211>96

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>21

aacaattatt gtaaaataaa atgtttgaaa ggaggtgtcc atactgcctg caaatatgga 60

agtcttaaac cgaattgcgg taataaggta gtggta 96

<210>22

<211>117

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>22

aacaattatt gtaaaataaa atgtttgaaa ggaggtgtcc atactgcctg caaatatgga 60

agtcttaaac cgaattgcgg taataaggta gtggtatcct atggtctaac gaaacaa 117

<210>23

<211>138

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>23

aacaattatt gtaaaataaa atgtttgaaa ggaggtgtcc atactgcctg caaatatgga 60

agtcttaaac cgaattgcgg taataaggta gtggtatcct atggtctaac gaaacaagag 120

aaacaagaca tcttaaag 138

<210>24

<211>144

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>24

caggttggac aaaacgtagc cttaacaggt agcacggctg ctaaatacga tgatccagtt 60

aaactagtta aaatgtggga agatgaagtg aaagattata atcctaagaa aaagttttcg 120

ggaaacgact ttctgaaaac cggc 144

<210>25

<211>147

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>25

cattacactc aaatggtttg ggctaacacc aaggaagttg gttgtggaag tataaaatac 60

attcaagaga aatggcacaa acattacctt gtatgtaatt atggacccag cggaaacttt 120

aagaatgagg aactttatca aacaaag 147

<210>26

<211>33

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>26

cttaaaccga attgcggtaa taaggtagtg gta 33

<210>27

<211>33

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>27

ttaacaggta gcacggctgc taaatacgat gat 33

<210>28

<211>27

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>28

cctaagaaaa agttttcggg aaacgac 27

<210>29

<211>21

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>29

attcaagaga aatggcacaa a 21

<210>30

<211>30

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>30

tttaagaatg aggaacttta tcaaacaaag 30

<210>31

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于Ves v 5′EA的有义PCR primer 1

<400>31

cgtgaattca acaattattg taaaataaaa 30

<210>32

<211>36

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于Ves v 5′KR的有义PCR引物2

<400>32

cgtctcgaga aaagaaacaa ttattgtaaa ataaaa 36

<210>33

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>Ves v 3′下游反义PCR引物3

<400>33

cgttctagat tactttgttt gataaagttc 30

<210>34

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于Pol a 5′EA的有义PCR引物4

<400>34

cgtgaattcg ttgattattg taaaataaaa 30

<210>35

<211>36

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于Pol a 5′KR的有义PCR引物5

<400>35

cgtctcgaga aaagagttga ttattgtaaa ataaaa 36

<210>36<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>Pol a 3′下游反义引物6

<400>36

cgttctagat tatttttttg tataaggtag 30

<210>37

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于Pol a第49-50位氨基酸EH的诱变有义PCR引物7

<400>37

gtaagcgagc acaatcggtt t 21

<210>38

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于Pol a第49-50位氨基酸EH的诱变反义PCR引物8

<400>38

aaaccgattg tgctcgctta c 21

<210>39

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于Ves v ApoI转换的PCR引物9

<400>39

gtagcaaaat ttcaggttgg a 21

<210>40

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于Ves v ApoI转换的PCR引物10

<400>40

tccaacctga aattttgcta c 21

<210>41

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于Pol a ApoI转换的PCR引物11

<400>41

accgcaaaat ttccagttgg a 21

<210>42

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于Pol a ApoI转换的PCR引物12

<400>42

tccaactgga aattttgcgg t 21

<210>43

<211>72

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV1-18的有义PCR引物13

<400>43

cgtgaattca acaattattg taaaataaaa tgtttgaaag gaggtgtcca tactgcctgc 60

aaatatggag aa 72

<210>44

<211>54

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV195-204的反义PCR引物14

<400>44

cgttctagat tactttgttt gataaagttc ctcattctta aaatttccag ctgg 54

<210>45

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV18-24和PV1-24的反义PCR引物15

<400>45

ggcacaattc ttgctcggtt taagacttcc ata 33

<210>46

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV18-24和PV1-24的有义PCR引物16

<400>46

tatggaagtc ttaaaccgag caagaattgt gcc 33

<210>47

<211>45

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV22-32和PV1-32的有义PCR引物17

<400>47

cttaaaccga attgcggtaa taaggtagtg gtatcggttg gtcca 45

<210>48

<211>45

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV22-32和PV1-32的反义PCR引物18

<400>48

tggaccaacc gataccacta ccttattacc gcaattcggt ttaag 45

<210>49

<211>36

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV1-39的PCR引物19

<400>49

tatggtctaa cgaaacaaga gaaaaaatta atcgta 36

<210>50

<211>36

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV1-39的PCR引物20

<400>50

tacgattaat tttttctctt gtttcgttag accata 36

<210>51

<211>45

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV115-125的有义PCR引物21

<400>51

ttaacaggta gcacggctgc taaatacgat gatgtagtca gtcta 45

<210>52

<211>45

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV115-125的反义PCR引物22

<400>52

atcatcgtat ttagcagccg tgctacctgt taacgctata ttttg 45

<210>53

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV142-150的有义PCR引物23

<400>53

cctaagaaaa agttttcggg aaacgacttt gctaaaattg gc 42

<210>54

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV142-150的反义PCR引物24

<400>54

gtcgtttccc gaaaactttt tcttaggatt aaaatctttc ac 42

<210>55

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV176-182的有义PCR引物25

<400>55

attcaagaga aatggcacaa acattacctc ata 33

<210>56

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV176-182的反义PCR引物26

<400>56

tttgtgccat ttctcttgaa tatattttag aga 33

<210>57

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV1-50的反义PCR引物27

<400>57

gagcacaatg actttagaca aaaa 24

<210>58

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV1-57的反义PCR引物28

<400>58

tttttgtcta aagtcattgt gctc 24

<210>59

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PV1-76的反义PCR引物29

<400>59

aaaattgcac gagggttgga aaca 24

<210>60

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PCR引物

<400>60

tgtttccaac cctcgtgcaa tttt 24

<210>61

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PCR引物

<400>61

aatatgaaaa atttggtatg gaac 24

<210>62

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>PCR引物

<400>62

gttccatacc aaatttttca tatt 24

<210>63

<211>204

<212>PRT

<213>Vespula maculifrons

<400>63

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Lys Val Val

20 25 30

Ser Tyr Gly Leu Thr Lys Gln Glu Lys Gln Asp Ile Leu Lys Glu His

35 40 45

Asn Asp Phe Arg Gln Lys Ile Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Lys Asn Leu Val Trp Ser

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Tyr Ile Ala Gln Val Trp Ala Asn Gln Cys Gln Tyr

85 90 95

Gly His Asp Thr Cys Arg Asp Val Ala Lys Tyr Gln Val Gly Gln Asn

100 105 110

Val Ala Leu Thr Gly Ser Thr Ala Ala Val Tyr Asn Asp Pro Val Lys

115 120 125

Leu Val Lys Met Trp Glu Asp Glu Val Lys Asp Tyr Asn Pro Lys Lys

130 135 140

Lys Phe Ser Glu Asn Asn Phe Leu Lys Ile Gly His Tyr Thr Gln Met

145 150 155 160

Val Trp Ala Asn Thr Lys Glu Val Gly Cys Gly Ser Ile Lys Tyr Ile

165 170 175

Gln Glu Asn Trp His Lys His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ser

180 185 190

Gly Asn Phe Gln Asn Glu Glu Leu Tyr Gln Thr Lys

195 200

<210>64

<211>204

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>64

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Val Val Val

20 25 30

Ser Tyr Gly Leu Thr Lys Gln Glu Lys Gln Asp Ile Leu Lys Glu His

35 40 45

Asn Asp Phe Arg Gln Lys Ile Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Lys Asn Leu Val Trp Asn

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Tyr Val Ala Gln Val Trp Ala Asn Gln Cys Gln Tyr

85 90 95

Gly His Asp Thr Cys Arg Asp Val Ala Lys Tyr Gln Val Gly Gln Asn

100 105 110

Val Ala Leu Thr Gly Ser Thr Ala Ala Lys Tyr Asp Asp pro Val Lys

115 120 125

Leu Val Lys Met Trp Glu Asp Glu Val Lys Asp Tyr Asn Pro Lys Lys

130 135 140

Lys Phe Ser Gly Asn Asp Phe Leu Lys Thr Gly His Tyr Thr Gln Met

145 150 155 160

Val Trp Ala Asn Thr Lys Glu Val Gly Cys Gly Ser Ile Lys Tyr Ile

165 170 175

Gln Glu Lys Trp His Lys His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ser

180 185 190

Gly Asn Phe Met Asn Glu Glu Leu Tyr Gln Thr Lys

195 200

<210>65

<211>204

<212>PRT

<213>Vespula flavopilosa

<400>65

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Val Val Val

20 25 30

Ser Tyr Gly Leu Thr Lys Gln Glu Lys Gln Asp Ile Leu Lys Glu His

35 40 45

Asn Asp Phe Arg Gln Lys Ile Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Lys Asn Leu Val Trp Asn

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Tyr Val Ala Gln Val Trp Ala Asn Gln Cys Gln Tyr

85 90 95

Gly His Asp Thr Cys Arg Asp Ile Ala Lys Tyr Gln Val Gly Gln Asn

100 105 110

Val Ala Leu Thr Gly Ser Thr Ala Ala Lys Tyr Asp Asp Pro Val Lys

115 120 125

Leu Val Lys Met Trp Glu Asp Glu Val Lys Asp Tyr Asn Pro Lys Lys

130 135 140

Lys Phe Ser Gly Asn Asn Phe Leu Lys Thr Gly His Tyr Thr Gln Met

145 150 155 160

Val Trp Ala Asn Thr Lys Glu Val Gly Cys Gly Ser Ile Lys Phe Ile

165 170 175

Gln Glu Lys Trp His Lys His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ser

180 185 190

Gly Asn Phe Gln Asn Glu Glu Leu Tyr Gln Thr Lys

195 200

<210>66

<211>204

<212>PRT

<213>树黄胡蜂(Vespula pensylvanica)

<400>66

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Ile Val Val

20 25 30

Ser Tyr Gly Leu Thr Lys Glu Glu Lys Gln Asp Ile Leu Lys Glu His

35 40 45

Asn Asp Phe Arg Gln Lys Ile Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Lys Asn Leu Val Trp Asn

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Tyr Val Ala Gln Val Trp Ala Asn Gln Cys Gln Tyr

85 90 95

Gly His Asp Thr Cys Arg Asp Val Ala Lys Tyr Pro Val Gly Gln Asn

100 105 110

Val Ala Leu Thr Gly Ser Thr Ala Asp Lys Tyr Asp Asn Pro Val Lys

115 120 125

Leu Val Lys Met Trp Glu Asp Glu Val Lys Asp Tyr Asn Pro Lys Lys

130 135 140

Lys Phe Ser Glu Asn Asn Phe Asn Lys Ile Gly His Tyr Thr Gln Met

145 150 155 160

Val Trp Ala Asn Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Ile Lys Tyr Ile

165 170 175

Gln Asn Glu Trp His Lys His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ser

180 185 190

Gly Asn Phe Gly Asn Glu Glu Leu Tyr Gln Thr Lys

195 200

<210>67

<211>204

<212>PRT

<213>德国黄胡蜂(Vespula germanica)

<400>67

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Glu Ser Leu Lys Pro Asn Cys Ala Asn Lys Lys Val Val

20 25 30

Ala Tyr Gly Leu Thr Lys Gln Glu Lys Gln Asp Ile Leu Lys Glu His

35 40 45

Asn Asp Phe Arg Gln Lys Ile Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Lys Asn Leu Val Trp Ser

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Tyr Ile Ala Gln Val Trp Ala Asn Gln Cys Gln Tyr

85 90 95

Gly His Asp Thr Cys Arg Asp Val Ala Lys Tyr Pro Val Gly Gln Asn

100 105 110

Val Ala Leu Thr Gly Ser Thr Ala Ala Lys Tyr Asp Asn Pro Val Lys

115 120 125

Leu Val Lys Met Trp Glu Asp Glu Val Lys Asp Tyr Asn Pro Lys Lys

130 135 140

Lys Phe Ser Glu Asn Asn Phe Leu Lys Ile Gly His Tyr Thr Gln Met

145 150 155 160

Val Trp Ala Asn Thr Lys Glu Val Gly Cys Gly Ser Ile Lys Tyr Ile

165 170 175

Gln Asp Lys Trp His Lys His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ser

180 185 190

Gly Asn Phe Gly Asn Glu Glu Leu Tyr Gln Thr Lys

195 200

<210>68

<211>206

<212>PRT

<213>Vespula vidua

<400>68

Lys Val Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr

1 5 10 15

Ala Cys Lys Tyr Gly Thr Ser Thr Lys Pro Asn Cys Gly Lys Met Val

20 25 30

Val Lys Ala Tyr Gly Leu Thr Glu Ala Glu Lys Gln Glu Ile Leu Lys

35 40 45

Val His Asn Asp Phe Arg Gln Lys Val Ala Lys Gly Leu Glu Thr Arg

50 55 60

Gly Asn Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Asn Asn Leu Val

65 70 75 80

Trp Asn Asp Glu Leu Ala Asn Ile Ala Gln Val Trp Ala Ser Gln Cys

85 90 95

Asn Tyr Gly His Asp Thr Cys Lys Asp Thr Glu Lys Tyr Pro Val Gly

100 105 110

Gln Asn Ile Ala Lys Arg Ser Thr Thr Ala Ala Leu Phe Asp Ser Pro

115 120 125

Gly Lys Leu Val Lys Met Trp Glu Asn Glu Val Lys Asp Phe Asn Pro

130 135 140

Asn Ile Glu Trp Ser Lys Asn Asn Leu Lys Lys Thr Gly His Tyr Thr

145 150 155 160

Gln Met Val Trp Ala Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Val Lys

165 170 175

Tyr Val Lys Asp Glu Trp Tyr Thr His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly

180 185 190

Pro Ser Gly Asn Phe Arg Asn Glu Lys Leu Tyr Glu Lys Lys

195 200 205

<210>69

<211>205

<212>PRT

<213>Vespula squamosa

<400>69

Val Asp Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Thr Ser Thr Lys Pro Asn Cys Gly Asn Met Val Val

20 25 30

Lys Ser Tyr Gly Val Thr Gln Ala Glu Lys Gln Glu Ile Leu Lys Ile

35 40 45

His Asn Asp Phe Arg Asn Lys Val Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly

50 55 60

Asn Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Asn Asn Leu Val Trp

65 70 75 80

Asn Asn Glu Leu Ala Asn Ile Ala Gln Ile Trp Ala Ser Gln Cys Lys

85 90 95

Tyr Gly His Asp Thr Cys Lys Asp Thr Thr Lys Tyr Asn Val Gly Gln

100 105 110

Asn Ile Ala Val Ser Ser Ser Thr Ala Ala Val Tyr Glu Asn Val Gly

115 120 125

Asn Leu Val Lys Ala Trp Glu Asn Glu Val Lys Asp Phe Asn Pro Thr

130 135 140

Ile Ser Trp Glu Gln Asn Glu Phe Lys Lys Ile Gly His Tyr Thr Gln

145 150 155 160

Met Val Trp Ala Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Ile Lys Tyr

165 170 175

Val Asp Asn Asn Trp Tyr Thr His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro

180 185 190

Ala Gly Asn Phe Gly Asn Gln Glu Val Tyr Glu Arg Lys

195 200 205

<210>70

<211>204

<212>PRT

<213>Dolichovespula maculata

<400>70

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Arg Lys Gly Ile His Thr Leu Cys

1 5 10 15

Lys Phe Gly Thr Ser Met Lys Pro Asn Cys Gly Arg Asn Val Val Lys

20 25 30

Ala Tyr Gly Leu Thr Asn Asp Glu Lys Asn Glu Ile Leu Lys Arg His

35 40 45

Asn Asp Phe Arg Gln Asn Val Ala Lys Gly Leu Glu Thr Arg Gly Lys

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Asn Val Leu Val Trp Asn

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Lys Ile Ala Gln Thr Trp Ala Asn Gln Cys Asp Phe

85 90 95

Asn His Asp Asp Cys Arg Asn Thr Ala Lys Tyr Gln Val Gly Gln Asn

100 105 110

Ile Ala Ile Ser Ser Thr Thr Ala Thr Gln Phe Asp Arg Pro Ser Lys

115 120 125

Leu Ile Lys Gln Trp Glu Asp Glu Val Thr Glu Phe Asn Tyr Lys Val

130 135 140

Gly Leu Gln Asn Ser Asn Phe Arg Lys Val Gly His Tyr Thr Gln Met

145 150 l55 160

Val Trp Gly Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Ile Lys Tyr Ile

165 170 175

Glu Asp Asn Trp Tyr Thr His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Gly

180 185 190

Gly Asn Asp Phe Asn Gln Pro Ile Tyr Glu Arg Lys

195 200

<210>71

<211>203

<212>PRT

<213>Dolichovespula arenaria

<400>71

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Cys Pro Lys Gly Thr His Thr Leu Cys Lys

1 5 10 15

Tyr Gly Thr Ser Met Lys Pro Asn Cys Gly Gly Lys Ile Val Lys Ser

20 25 30

Tyr Gly Val Thr Asn Asp Glu Lys Asn Glu Ile Val Lys Arg His Asn

35 40 45

Glu Phe Arg Gln Lys Val Ala Gln Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn Pro

50 55 60

Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Asn Leu Leu Val Trp Asn Asp

65 70 75 80

Glu Leu Ala Lys Ile Ala Gln Thr Trp Ala Asn Gln Cys Asn Phe Gly

85 90 95

His Asp Gln Cys Arg Asn Thr Ala Lys Tyr Pro Val Gly Gln Asn Val

100 105 110

Ala Ile Ala Ser Thr Thr Gly Asn Ser Tyr Gln Thr Met Ser Tyr Leu

115 120 125

Ile Lys Met Trp Glu Asp Glu Val Lys Asp Tyr Asn Pro His Lys Asp

130 135 140

Leu Met His Asn Asn Phe Ser Lys Val Gly His Tyr Thr Gln Met Val

145 150 155 160

Trp Gly Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Val Lys Tyr Ile Glu

165 170 175

Asn Lys Trp His Thr His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ala Gly

180 185 190

Asn Tyr Met Asn Gln Pro Val Tyr Glu Arg Lys

195 200

<210>72

<211>205

<212>PRT

<213>Dolichovespula maculata

<400>72

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Ser Arg Gly Ile His Thr Leu Cys

1 5 10 15

Lys Phe Gly Thr Ser Met Lys Pro Asn Cys Gly Ser Lys Leu Val Lys

20 25 30

Val His Gly Val Ser Asn Asp Glu Lys Asn Glu Ile Val Asn Arg His

35 40 45

Asn Gln Phe Arg Gln Lys Val Ala Lys Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Asn Val Leu Val Trp Asn

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Lys Ile Ala Gln Thr Trp Ala Asn Gln Cys Ser Phe

85 90 95

Gly His Asp Gln Cys Arg Asn Thr Glu Lys Tyr Gln Val Gly Gln Asn

100 105 110

Val Ala Ile Ala Ser Thr Thr Gly Asn Ser Tyr Ala Thr Met Ser Lys

115 120 125

Leu Ile Glu Met Trp Glu Asn Glu Val Lys Asp Phe Asn Pro Lys Lys

130 135 140

Gly Thr Met Gly Asp Asn Asn Phe Ser Lys Val Gly His Tyr Thr Gln

145 150 155 160

Met Val Trp Gly Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Val Lys Tyr

165 170 175

Ile Glu Asn Asn Trp His Thr His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro

180 185 190

Ala Gly Asn Tyr Met Asp Gln Pro Ile Tyr Glu Arg Lys

195 200 205

<210>73

<211>202

<212>PRT

<213>金环胡蜂(Vespa mandarinia)

<400>73

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Arg Ser Gly Ile His Thr Leu Cys

1 5 10 15

Lys Phe Gly Ile Ser Thr Lys Pro Asn Cys Gly Lys Asn Val Val Lys

20 25 30

Ala Ser Gly Leu Thr Lys Ala Glu Lys Leu Glu Ile Leu Lys Gln His

35 40 45

Asn Glu Phe Arg Gln Lys Val Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly Lys

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Ser Met Asn Thr Leu Val Trp Asn

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Gln Ile Ala Gln Val Trp Ala Gly Gln Cys Asp Tyr

85 90 95

Gly His Asp Val Cys Arg Asn Thr Ala Lys Tyr Ser Val Gly Gln Asn

100 105 110

Ile Ala Glu Asn Gly Ser Thr Ala Ala Ser Phe Ala Ser Val Ser Asn

115 120 125

Met Val Gln Met Trp Ala Asp Glu Val Lys Asn Tyr Gln Tyr Gly Ser

130 135 140

Thr Lys Asn Lys Leu Ile Glu Val Gly His Tyr Thr Gln Met Val Trp

145 150 155 160

Ala Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Ile Lys Tyr Ile Glu Asn

165 170 175

Gly Trp His Arg His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ala Gly Asn

180 185 190

Ile Gly Asn Glu Pro Ile Tyr Glu Arg Lys

195 200

<210>74

<211>202

<212>PRT

<213>黄边胡蜂(Vespa crabro)

<400>74

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Arg Ser Gly Ile His Thr Leu Cys

1 5 10 15

Lys Tyr Gly Thr Ser Thr Lys Pro Asn Cys Gly Lys Asn Val Val Lys

20 25 30

Ala Ser Gly Leu Thr Lys Gln Glu Asn Leu Glu Ile Leu Lys Gln His

35 40 45

Asn Glu Phe Arg Gln Lys Val Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Ser Met Asn Thr Leu Val Trp Asn

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Gln Ile Ala Gln Val Trp Ala Asn Gln Cys Asn Tyr

85 90 95

Gly His Asp Asn Cys Arg Asn Ser Ala Lys Tyr Ser Val Gly Gln Asn

100 105 110

Ile Ala Glu Gly Ser Thr Thr Ala Asp Asn Phe Gly Ser Val Ser Asn

115 120 125

Met Val Lys Met Trp Glu Asp Glu Val Lys Asp Tyr Gln Tyr Gly Ser

130 135 140

Pro Lys Asn Lys Leu Asn Lys Val Gly His Tyr Thr Gln Met Val Trp

145 150 155 160

Ala Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Ile Lys Tyr Ile Glu Asn

165 170 175

Gly Trp His Arg His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ala Gly Asn

180 185 190

Val Gly Asn Glu Pro Ile Tyr Glu Arg Lys

195 200

<210>75

<211>202

<212>PRT

<213>黄边胡蜂(Vespa crabro)

<400>75

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Arg Ser Gly Ile His Thr Leu Cys

1 5 10 15

Lys Tyr Gly Thr Ser Thr Lys Pro Asn Cys Gly Lys Asn Val Val Lys

20 25 30

Ala Ser Gly Leu Thr Lys Gln Glu Asn Leu GluIle Leu Lys Gln His

35 40 45

Asn Glu Phe Arg Gln Lys Val Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Ser Met Asn Thr Leu Val Trp Asn

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Gln Ile Ala Gln Val Trp Ala Asn Gln Cys Asn Tyr

85 90 95

Gly His Asp Asn Cys Arg Asn Ser Ala Lys Tyr Ser Val Gly Gln Asn

100 105 110

Ile Ala Glu Gly Ser Thr Ser Ala Asp Asn Phe Val Asn Val Ser Asn

115 120 125

Met Val Lys Met Trp Glu Asp Glu Val Lys Asp Tyr Gln Tyr Gly Ser

130 135 140

Pro Lys Asn Lys Leu Asn Lys Val Gly His Tyr Thr Gln Met Val Trp

145 150 155 160

Ala Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Glu Asp Tyr Ile Glu Asp

165 170 175

Gly Trp His Arg His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ala Gly Asn

180 185 190

Val Gly Asn Glu Pro Ile Tyr Glu Arg Lys

195 200

<210>76

<211>205

<212>PRT

<213>Polistes fuscatus

<400>76

Val Asp Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Ser Ser Gly Ile His Thr Val Cys

1 5 10 15

Gln Tyr Gly Glu Ser Thr Lys Pro Ser Lys Asn Cys Ala Asp Lys Val

20 25 30

Ile Lys Ser Val Gly Pro Thr Glu Glu Glu Lys Lys Leu Ile Val Asn

35 40 45

Glu His Asn Arg Phe Arg Gln Lys Val Ala Gln Gly Leu Glu Thr Arg

50 55 60

Gly Asn Pro Gly Pro Gln Pro Ala Ala Ser Asp Met Asn Asn Leu Val

65 70 75 80

Trp Asn Asp Glu Leu Ala His Ile Ala Gln Val Trp Ala Ser Gln Cys

85 90 95

Gln Ile Leu Val His Asp Lys Cys Arg Asn Thr Ala Lys Tyr Gln Val

100 105 110

Gly Gln Asn Ile Ala Tyr Ala Gly Gly Ser Lys Leu Pro Asp Val Val

115 120 125

Ser Leu Ile Lys Leu Trp Glu Asn Glu Val Lys Asp Phe Asn Tyr Asn

130 135 140

Lys Gly Ile Thr Lys Gln Asn Phe Gly Lys Val Gly His Tyr Thr Gln

145 150 155 160

Met Ile Trp Ala Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Leu Lys Tyr

165 170 175

Met Lys Asn Asn Met Gln His His Tyr Leu Ile Cys Asn Tyr Gly Pro

180 185 190

Ala Gly Asn Tyr Leu Gly Gln Leu Pro Tyr Thr Lys Lys

195 200 205

<210>77

<211>205

<212>PRT

<213>Polistes exclamans

<400>77

Val Asp Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Pro Ser Gly Ile His Thr Val Cys

1 5 10 15

Gln Tyr Gly Glu Ser Thr Lys Pro Ser Lys Asn Cys Ala Gly Lys Val

20 25 30

Ile Lys Ser Val Gly Pro Thr Glu Glu Glu Lys Lys Leu Ile Val Ser

35 40 45

Glu His Asn Arg Phe Arg Gln Lys Val Ala Gln Gly Leu Glu Thr Arg

50 55 60

Gly Asn Pro Gly Pro Gln Pro Ala Ala Ser Asp Met Asn Asp Leu Val

65 70 75 80

Trp Asn Asp Glu Leu Ala His Ile Ala Gln Val Trp Ala Ser Gln Cys

85 90 95

Gln Phe Leu Val His Asp Lys Cys Arg Asn Thr Ala Lys Tyr Pro Val

100 105 110

Gly Gln Asn Ile Ala Tyr Ala Gly Gly Ser Lys Leu Pro Asp Val Val

115 120 125

Ser Leu Ile Lys Leu Trp Glu Asn Glu Val Lys Asp Phe Asn Tyr Asn

130 135 140

Thr Gly Ile Thr Lys Gln Asn Phe Ala Lys Ile Gly His Tyr Thr Gln

145 150 155 160

Met Val Trp Gly Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Leu Lys Tyr

165 170 175

Ile Glu Asn Lys Met Gln Asn His Tyr Leu Ile Cys Asn Tyr Gly Pro

180 185 190

Ala Gly Asn Tyr Leu Gly Gln Leu Pro Tyr Thr Lys Lys

195 200 205

<210>78

<211>205

<212>PRT

<213>Polistes annularis

<400>78

Val Asp Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Pro Ser Gly Ile His Thr Val Cys

1 5 10 15

Gln Tyr Gly Glu Ser Thr Lys Pro Ser Lys Asn Cys Ala Gly Lys Val

20 25 30

Ile Lys Ser Val Gly Pro Thr Glu Glu Glu Lys Lys Leu Ile Val Ser

35 40 45

Glu His Asn Arg Phe Arg Gln Lys Val Ala Gln Gly Leu Glu Thr Arg

50 55 60

Gly Asn Pro Gly Pro Gln Pro Ala Ala Ser Asp Met Asn Asp Leu Val

65 70 75 80

Trp Asn Asp Glu Leu Ala His Ile Ala Gln Val Trp Ala Ser Gln Cys

85 90 95

Gln Phe Leu Val His Asp Lys Cys Arg Asn Thr Ala Lys Tyr Pro Val

100 105 110

Gly Gln Asn Ile Ala Tyr Ala Gly Gly Ser Asn Leu Pro Asp Val Val

115 120 125

Ser Leu Ile Lys Leu Trp Glu Asn Glu Val Lys Asp Phe Asn Tyr Asn

130 135 140

Thr Gly Ile Thr Lys Gln Asn Phe Ala Lys Ile Gly His Tyr Thr Gln

145 150 155 160

Met Val Trp Gly Lys Thr Lys Glu Ile Gly Cys Gly Ser Leu Lys Tyr

165 170 175

Met Glu Asn Asn Met Gln Asn His Tyr Leu Ile Cys Asn Tyr Gly Pro

180 185 190

Ala Gly Asn Tyr Leu Gly Gln Leu Pro Tyr Thr Lys Lys

195 200 205

<210>79

<211>212

<212>PRT

<213>红外来火蚁(Solenopsis invicta)

<400>79

Thr Asn Tyr Cys Asn Leu Gln Ser Cys Lys Arg Asn Asn Ala Ile His

1 5 10 15

Thr Met Cys Gln Tyr Thr Ser Pro Thr Pro Gly Pro Met Cys Leu Glu

20 25 30

Tyr Ser Asn Val Gly Phe Thr Asp Ala Glu Lys Asp Ala Ile Val Asn

35 40 45

Lys His Asn Glu Leu Arg Gln Arg Val Ala Ser Gly Lys Glu Met Arg

50 55 60

Gly Thr Asn Gly Pro Gln Pro Pro Ala Val Lys Met Pro Asn Leu Thr

65 70 75 80

Trp Asp Pro Glu Leu Ala Thr Ile Ala Gln Arg Trp Ala Asn Gln Cys

85 90 95

Thr Phe Glu His Asp Ala Cys Arg Asn Val Glu Arg Phe Ala Val Gly

100 105 110

Gln Asn Ile Ala Ala Thr Ser Ser Ser Gly Lys Asn Lys Ser Thr Pro

115 120 125

Asn Glu Met Ile Leu Leu Trp Tyr Asn Glu Val Lys Asp Phe Asp Asn

130 135 140

Arg Trp Ile Ser Ser Phe Pro Ser Asp Asp Asn Ile Leu Met Lys Val

145 150 155 160

Glu His Tyr Thr Gln Ile Val Trp Ala Lys Thr Ser Lys Ile Gly Cys

165 170 175

Ala Arg Ile Met Phe Lys Glu Pro Asp Asn Trp Thr Lys His Tyr Leu

180 185 190

Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ala Gly Asn Val Leu Gly Ala Pro Ile Tyr

195 200 205

Glu Ile Lys Lys

210

<210>80

<211>211

<212>PRT

<213>黑外来火蚁(Solenopsis richteri)

<400>80

Thr Asn Tyr Cys Asn Leu Gln Ser Cys Lys Arg Asn Asn Ala Ile His

l 5 10 15

Thr Met Cys Gln Tyr Thr Ser Pro Thr Pro Gly Pro Met Cys Leu Glu

20 25 30

Tyr Ser Asn Val Gly Phe Thr Asp Ala Glu Lys Asp Ala Ile Val Asn

35 40 45

Lys His Asn Glu Leu Arg Gln Arg Val Ala Ser Gly Lys Glu Met Arg

50 55 60

Gly Thr Asn Gly Pro Gln Pro Pro Ala Val Lys Met pro Asn Leu Thr

65 70 75 80

Trp Asp pro Glu Leu Ala Thr Ile Ala Gln Arg Trp Ala Asn Gln Cys

85 90 95

Thr Phe Glu His Asp Ala Cys Arg Asn Val Glu Arg Phe Ala Val Gly

100 105 110

Gln Asn Ile Ala Ala Thr Ser Ser Ser Gly Lys Asn Lys Ser Thr Leu

115 120 125

Ser Asp Met Ile Leu Leu Trp Tyr Asn Glu Val Lys Asp Phe Asp Asn

130 135 140

Arg Trp Ile Ser Ser Phe Pro Ser Asp Gly Asn Ile Leu Met His Val

145 150 155 160

Gly His Tyr Thr Gln Ile Val Trp Ala Lys Thr Lys Lys Ile Gly Cys

165 170 175

Gly Arg Ile Met Phe Lys Glu Asp Asn Trp Asn Lys His Tyr Leu Val

180 185 190

Cys Asn Tyr G1y Pro Ala Gly Asn Val Leu Gly Ala Gln Ile Tyr Glu

195 200 205

Ile Lys Lys

210

<210>81

<211>204

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>81

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Val Val Val

20 25 30

Ser Tyr Gly Leu Thr Lys Gln Glu Lys Gln Asp Ile Leu Lys Glu His

35 40 45

Asn Asp Phe Arg Gln Lys Ile Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Lys Asn Leu Val Trp Asn

65 70 75 80

Asp Glu Leu Ala Tyr Val Ala Gln Val Trp Ala Asn Gln Cys Gln Tyr

85 90 95

Gly His Asp Thr Cys Arg Asp Val Ala Lys Tyr Gln Val Gly Gln Asn

100 105 110

Val Ala Leu Thr Gly Ser Thr Ala Ala Lys Tyr Asp Asp Pro Val Lys

115 120 125

Leu Val Lys Met Trp Glu Asp Glu Val Lys Asp Tyr Asn Pro Lys Lys

130 135 140

Lys Phe Ser Gly Asn Asp Phe Leu Lys Thr Gly His Tyr Thr Gln Met

l45 150 155 160

Val Trp Ala Asn Thr Lys Glu Val Gly Cys Gly Ser Ile Lys Tyr Ile

165 170 175

Gln Glu Lys Trp His Lys His Tyr Leu Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ser

180 185 190

Gly Asn Phe Met Asn Glu Glu Leu Tyr Gln Thr Lys

195 200

<210>82

<211>212

<212>PRT

<213>红外来火蚁

<400>82

Thr Asn Tyr Cys Asn Leu Gln Ser Cys Lys Arg Asn Asn Ala Ile His

1 5 10 15

Thr Met Cys Gln Tyr Thr Ser Pro Thr Pro Gly Pro Met Cys Leu Glu

20 25 30

Tyr Ser Asn Val Gly Phe Thr Asp Ala Glu Lys Asp Ala Ile Val Asn

35 40 45

Lys His Asn Glu Leu Arg Gln Arg Val Ala Ser Gly Lys Glu Met Arg

50 55 60

Gly Thr Asn Gly Pro Gln Pro Pro Ala Val Lys Met Pro Asn Leu Thr

65 70 75 80

Trp Asp Pro Glu Leu Ala Thr Ile Ala Gln Arg Trp Ala Asn Gln Cys

85 90 95

Thr Phe Glu His Asp Ala Cys Arg Asn Val Glu Arg Phe Ala Val Gly

100 105 110

Gln Asn Ile Ala Ala Thr Ser Ser Ser Gly Lys Asn Lys Ser Thr Pro

115 120 125

Asn Glu Met Ile Leu Leu Trp Tyr Asn Glu Val Lys Asp Phe Asp Asn

130 135 140

Arg Trp Ile Ser Ser Phe Pro Ser Asp Asp Asn Ile Leu Met Lys Val

145 150 155 160

Glu His Tyr Thr Gln Ile Val Trp Ala Lys Thr Ser Lys Ile Gly Cys

165 170 175

Ala Arg Ile Met Phe Lys Glu Pro Asp Asn Trp Thr Lys His Tyr Leu

180 185 190

Val Cys Asn Tyr Gly Pro Ala Gly Asn Val Leu Gly Ala Pro Ile Tyr

195 200 205

Glu Ile Lys Lys

210

<210>83

<211>136

<212>PRT

<213>番茄(Lycopersicon esculentum)

<400>83

Gln Asn Ser Pro Gln Asp Tyr Leu Ala Val His Asn Asp Ala Arg Ala

1 5 10 15

Gln Val Gly Val Gly Pro Met Ser Trp Asp Ala Asn Leu Ala Ser Arg

20 25 30

Ala Gln Asn Tyr Ala Asn Ser Arg Ala Gly Asp Cys Asn Leu Ile His

35 40 45

Ser Gly Ala Gly Glu Asn Leu Ala Lys Gly Gly Gly Asp Phe Thr Gly

50 55 60

Arg Ala Ala Val Gln Leu Trp Val Ser Glu Arg Pro Ser Tyr Asn Tyr

65 70 75 80

Ala Thr Asn Gln Cys Val Gly Gly Lys Lys Cys Arg His Tyr Thr Gln

85 90 95

Val Val Trp Arg Asn Ser Val Arg Leu Gly Cys Gly Arg Ala Arg Cys

100 105 110

Asn Asn Asn Gly Trp Trp Phe Ile Ser Cys Asn Tyr Asp Pro Val Gly

115 120 125

Asn Trp Ile Gly Gln Arg Pro Tyr

130 135

<210>84

<211>187

<212>PRT

<213>裂褶菌(Schizophyllum commune)

<400>84

Ser Pro Ala Pro Val Asp Val Asp Ala Arg Ala Pro Val Ala Leu Asp

1 5 10 15

Ser Arg Ser Ile Asp Ile Asp Ser Arg Ser Ala Asp Ala Leu Ala Asn

20 25 30

Arg Ala Ala Pro Pro Gln Ser Glu Ile Asp Gln Trp Leu Lys Ala His

35 40 45

Asn Asn Glu Arg Ala Gln His Gly Ala Val Ala Leu Val Trp Asn Gln

50 55 60

Thr Leu Ser Asp Lys Ala Ala Asp Trp Ala Ser Gln Cys Ile Trp Glu

65 70 75 80

His Ser Asn Ser Gly Gln Asn Leu Ala Ala Trp phe Ser Pro Gln Ala

85 90 95

Asn Lys Pro Met Asn Ile Ser Gln Gly Val Gly Gly Trp Asn Ala Glu

100 105 110

Glu Pro Asp Tyr Asn Thr Thr Thr Tyr Ser Gly Ala Gly His Trp Thr

115 120 125

Gln Val Val Trp Lys Ser Thr Thr Ser Val Gly Cys Ala Ala Tyr Ser

130 135 140

Cys Pro Pro Gly Thr Leu Gly Arg Lys Pro Thr Asp Pro Trp Lys Thr

145 150 155 160

Leu Trp Tyr Tyr Val Cys Asn Tyr Tyr Arg Pro Gly Asn Val Ser Pro

165 170 175

Arg Asp Lys Tyr Tyr Pro Ile Asn Val Gln Pro

180 185

<210>85

<211>239

<212>PRT

<213>人(Homo sapiens)

<400>85

Ser Thr Val Val Leu Leu Asn Ser Thr Asp Ser Ser Pro Pro Thr Asn

1 5 10 15

Asn Phe Thr Asp Ile Glu Ala Ala Leu Lys Ala Gln Leu Asp Ser Ala

20 25 30

Asp Ile Pro Lys Ala Arg Arg Lys Arg Tyr Ile Ser Gln Asn Asp Met

35 40 45

Ile Ala Ile Leu Asp Tyr His Asn Gln Val Arg Gly Lys Val Phe Pro

50 55 60

Pro Ala Ala Asn Met Glu Tyr Met Val Trp Asp Glu Asn Leu Ala Lys

65 70 75 80

Ser Ala Glu Ala Trp Ala Ala Thr Cys Ile Trp Asp His Gly Pro Ser

85 90 95

Tyr Leu Leu Arg Phe Leu Gly Gln Asn Leu Ser Val Arg Thr Gly Arg

100 105 110

Tyr Arg Ser Ile Leu Gln Leu Val Lys Pro Trp Tyr Asp Glu Val Lys

115 120 125

Asp Tyr Ala Phe Pro Tyr Pro Gln Asp Cys Asn Pro Arg Cys Pro Met

130 135 140

Arg Cys Phe Gly Pro Met Cys Thr His Tyr Thr Gln Met Val Trp Ala

145 150 155 160

Thr Ser Asn Arg Ile Gly Cys Ala Ile His Thr Cys Gln Asn Met Asn

165 170 175

Val Trp Gly Ser Val Trp Arg Arg Ala Val Tyr Leu Val Cys Asn Tyr

180 185 190

Ala Pro Lys Gly Asn Trp Ile Gly Glu Ala Pro Tyr Lys Val Gly Val

195 200 205

Pro Cys Ser Ser Cys Pro Pro Ser Tyr Gly Gly Ser Cys Thr Asp Asn

210 215 220

Leu Cys Phe Pro Gly Val Thr Ser Asn Tyr Leu Tyr Trp Phe Lys

225 230 235

<210>86

<211>245

<212>PRT

<213>人

<400>86

Ala Asn Ile Leu Pro Asp Ile Glu Asn Glu Asp Phe Ile Lys Asp Cys

1 5 10 15

Val Arg Ile His Asn Lys Phe Arg Ser Glu Val Lys Pro Thr Ala Ser

20 25 30

Asp Met Leu Tyr Met Thr Trp Asp Pro Ala Leu Ala Gln Ile Ala Lys

35 40 45

Ala Trp Ala Ser Asn Cys Gln Phe Ser His Asn Thr Arg Leu Lys Pro

50 55 60

Pro His Lys Leu His Pro Asn Phe Thr Ser Leu Gly Glu Asn Ile Trp

65 70 75 80

Thr Gly Ser Val Pro Ile Phe Ser Val Ser Ser Ala Ile Thr Asn Trp

85 90 95

Tyr Asp Glu Ile Gln Asp Tyr Asp Phe Lys Thr Arg Ile Cys Lys Lys

100 105 1l0

Val Cys Gly His Tyr Thr Gln Val Val Trp Ala Asp Ser Tyr Lys Val

115 120 125

Gly Cys Ala Val Gln Phe Cys Pro Lys Val Ser Gly Phe Asp A1a Leu

130 135 140

Ser Asn Gly Ala His Phe Ile Cys Asn Tyr Gly Pro Gly Gly Asn Tyr

145 150 155 160

Pro Thr Trp Pro Tyr Lys Arg Gly Ala Thr Cys Ser Ala Cys Pro Asn

165 170 175

Asn Asp Lys Cys Leu Asp Asn Leu Cys Val Asn Arg Gln Arg Asp Gln

180 185 190

Val Lys Arg Tyr Tyr Ser Val Val Tyr Pro Gly Trp Pro Ile Tyr Pro

195 200 205

Arg Asn Arg Tyr Thr Ser Leu Phe Leu Ile Val Asn Ser Val Ile Leu

210 215 220

Ile Leu Ser Val Ile Ile Thr Ile Leu Val Gln Leu Lys Tyr Pro Asn

225 230 235 240

Leu Val Leu Leu Asp

245

<210>87

<211>223

<212>PRT

<213>珠毒蜥(Heloderma horridum)

<400>87

Glu Ala Ser Pro Lys Leu Pro Gly Leu Met Thr Ser Asn Pro Asp Gln

1 5 10 15

Gln Thr Glu Ile Thr Asp Lys His Asn Asn Leu Arg Arg Ile Val Glu

20 25 30

Pro Thr Ala Ser Asn Met Leu Lys Met Thr Trp Ser Asn Lys Ile Ala

35 40 45

Gln Asn Ala Gln Arg Ser Ala Asn Gln Cys Thr Leu Glu His Thr Ser

50 55 60

Lys Glu Glu Arg Thr Ile Asp Gly Val Glu Cys Gly Glu Asn Leu Phe

65 70 75 80

Phe Ser Ser Ala Pro Tyr Thr Trp Ser Tyr Ala Ile Gln Asn Trp Phe

85 90 95

Asp Glu Arg Lys Tyr Phe Arg Phe Asn Tyr Gly Pro Thr Ala Gln Asn

100 105 110

Val Met Ile Gly His Tyr Thr Gln Val Val Trp Tyr Arg Ser Tyr Glu

115 120 125

Leu Gly Cys Ala Ile Ala Tyr Cys Pro Asp Gln Pro Thr Tyr Lys Tyr

130 135 140

Tyr Gln Val Cys Gln Tyr Cys Pro Gly Gly Asn Ile Arg Ser Arg Lys

145 150 155 160

Tyr Thr Pro Tyr Ser Ile Gly Pro Pro Cys Gly Asp Cys Pro Asp Ala

165 170 175

Cys Asp Asn Gly Leu Cys Thr Asn Pro Cys Lys Gln Asn Asp Val Tyr

180 185 190

Asn Asn Cys Pro Asp Leu Lys Lys Gln Val Gly Cys Gly His Pro Ile

195 200 205

Met Lys Asp Cys Met Ala Thr Cys Lys Cys Leu Thr Glu Ile Lys

210 215 220

<210>88

<211>222

<212>PRT

<213>人

<400>88

Lys Asp Pro Ala Phe Thr Ala Leu Leu Thr Thr Gln Leu Gln Val Gln

1 5 10 15

Arg Glu Ile Val Asn Lys His Asn Glu Leu Arg Lys Ala Val Ser Pro

20 25 30

Pro Ala Ser Asn Met Leu Lys Met Glu Trp Ser Arg Glu Val Thr Thr

35 40 45

Asn Ala Gln Arg Trp Ala Asn Lys Cys Thr Leu Gln His Ser Asp Pro

50 55 60

Glu Asp Arg Lys Thr Ser Thr Arg Cys Gly Glu Asn Leu Tyr Met Ser

65 70 75 80

Ser Asp Pro Thr Ser Trp Ser Ser Ala Ile Gln Ser Trp Tyr Asp Glu

85 90 95

Ile Leu Asp Phe Val Tyr Gly Val Gly Pro Lys Ser Pro Asn Ala Val

100 105 110

Val Gly His Tyr Thr Gln Leu Val Trp Tyr Ser Thr Tyr Gln Val Gly

115 120 125

Cys Gly Ile Ala Tyr Cys Pro Asn Gln Asp Ser Leu Lys Tyr Tyr Tyr

130 135 140

Val Cys Gln Tyr Cys Pro Ala Gly Asn Asn Met Asn Arg Lys Asn Thr

145 150 155 160

Pro Tyr Gln Gln Gly Thr Pro Cys Ala Gly Cys Pro Asp Asp Cys Asp

165 170 175

Lys Gly Leu Cys Thr Asn Ser Cys Gln Tyr Gln Asp Leu Leu Ser Asn

180 185 190

Cys Asp Ser Leu Lys Asn Thr Ala Gly Cys Glu His Glu Leu Leu Lys

195 200 205

Glu Lys Cys Lys Ala Thr Cys Leu Cys Glu Asn Lys Ile Tyr

210 215 220

<210>89

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽

<400>89

Glu Ala Glu Ala Glu Phe

1 5

<210>90

<211>4

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽

<400>90

Glu Ala Glu Phe

1

<210>91

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽

<400>91

Arg Glu Ala Glu Ala Glu Phe

1 5

<210>92

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽

<400>92

Glu Glu Gly Val Ser Leu Glu Lys Arg

1 5

<210>93

<211>50

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>93

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Val Val Val

20 25 30

Ser Tyr Gly Leu Thr Lys Gln Glu Lys Gln Asp Ile Leu Lys Glu His

35 40 45

Asn Asp

50

<210>94

<211>57

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>94

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Val Val Val

20 25 30

Ser Tyr Gly Leu Thr Lys Gln Glu Lys Gln Asp Ile Leu Lys Glu His

35 40 45

Asn Asp Phe Arg Gln Lys Ile Ala Arg

50 55

<210>95

<211>76

<212>PRT

<213>常见黄胡蜂

<400>95

Asn Asn Tyr Cys Lys Ile Lys Cys Leu Lys Gly Gly Val His Thr Ala

1 5 10 15

Cys Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Pro Asn Cys Gly Asn Lys Val Val Val

20 25 30

Ser Tyr Gly Leu Thr Lys Gln Glu Lys Gln Asp Ile Leu Lys Glu His

35 40 45

Asn Asp Phe Arg Gln Lys Ile Ala Arg Gly Leu Glu Thr Arg Gly Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Gln Pro Pro Ala Lys Asn Met Lys Asn

65 70 75

<210>96

<211>150

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>96

aacaattatt gtaaaataaa atgtttgaaa ggaggtgtcc atactgcctg caaatatgga 60

agtcttaaac cgaattgcgg taataaggta gtggtatcct atggtctaac gaaacaagag 120

aaacaagaca tcttaaagga gcacaatgac 150

<210>97

<211>171

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>97

aacaattatt gtaaaataaa atgtttgaaa ggaggtgtcc atactgcctg caaatatgga 60

agtcttaaac cgaattgcgg taataaggta gtggtatcct atggtctaac gaaacaagag 120

aaacaagaca tcttaaagga gcacaatgac tttagacaaa aaattgcacg a 171

<210>98

<211>228

<212>DNA

<213>常见黄胡蜂

<400>98

aacaattatt gtaaaataaa atgtttgaaa ggaggtgtcc atactgcctg caaatatgga 60

agtcttaaac cgaattgcgg taataaggta gtggtatcct atggtctaac gaaacaagag 120

aaacaagaca tcttaaagga gcacaatgac tttagacaaa aaattgcacg aggattggag 180

actagaggta atcctggacc acagcctcca gcgaagaata tgaaaaat 228

Claims

1.具有减弱的变应原性但保留免疫原性的变应原杂合蛋白质，其含有变应原蛋白质的肽表位序列和与变应原蛋白质结构同源的支架蛋白质，其中杂合蛋白质具有天然构象，并且肽表位序列的存在位置为杂合蛋白质的表面可及区域并对应于其在变应原蛋白质中的位置。

2.权利要求1所述的杂合蛋白质，其中肽表位序列在杂合蛋白质的环或转角区域。

3.权利要求1所述的杂合蛋白质，其中支架蛋白质与肽表位序列所来源的变应原具有至少50％的序列同一性。

4.权利要求1所述的杂合蛋白质，其中支架蛋白质与肽表位序列所来源的变应原蛋白质具有不超过70％的序列同一性。

5.权利要求1所述的杂合蛋白质，其中肽表位序列长约6到约55个氨基酸。

6.权利要求5所述的杂合蛋白质，其中肽表位序列长约6到约45个氨基酸。

7.权利要求6所述的杂合蛋白质，其中肽表位序列长约6到约35个氨基酸。

8.权利要求7所述的杂合蛋白质，其中肽表位序列长约6到约25个氨基酸。

9.权利要求8所述的杂合蛋白质，其中肽表位序列长约6到约15个氨基酸。

10.权利要求1所述的杂合蛋白质，其还含有信号肽。

11.权利要求1所述的杂合蛋白质，其还含有蛋白酶作用位点。

12.权利要求1所述的杂合蛋白质，其为杂合胡蜂毒液变应原蛋白质。

13.权利要求12所述的杂合蛋白质，其为杂合胡蜂毒液抗原5蛋白质。

14.权利要求13所述的杂合蛋白质，其中肽表位序列来自黄胡蜂属并且支架蛋白质来自马蜂属。

15.权利要求14所述的杂合蛋白质，其中肽表位序列来自常见黄胡蜂种。

16.权利要求14所述的杂合蛋白质，其中支架蛋白质来自Polistesannularis种。

17.权利要求13所述的杂合蛋白质，其中肽抗原含有选自下述的序列：

NNYCKIKC(SEQ ID：1)；

NNYCKIKCLKGGVHTACK(SEQ ID：2)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKP(SEQ ID：3)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVV(SEQ ID：4)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVVSYGLTKQ(SEQ ID：5)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVVSYGLTKQEKQDILK(SEQ ID：6)；

QVGQNVALTGSTAAKYDDPVKLVKMWEDEVKDYNPKKKFSGNDFLKTG(SEQ ID NO：7)；

HYTQMVWANTKEVGCGSIKYIQEKWHKHYLVCNYGPSGNFKNEELYQTK(SEQ ID NO：8)

LKPNCGNKVVV(SEQ ID NO：9)；

LTGSTAAKYDD(SEQ ID NO：10)；

PKKKFSGND(SEQ ID NO：11)

IQIKWHK(SEQ ID NO：12)；和

FKNEELYQTK(SEQ ID NO：13)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVVSYGLTKQEKQDILKEHND(SEQ ID NO：93)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVVSYGLTKQEKQDILKEHNDFRQKIAR(SEQ ID NO：94)；

NNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKVVVSYGLTKQEKQDILKEHNDFRQKIARGLETRGNPGPQPPAKNMKN(SEQ ID NO：95)。

18.权利要求1所述的杂合蛋白质，其中肽表位序列含有保守的氨基酸改变。

19.权利要求18所述的杂合蛋白质，其中变体肽的特征为在体外测定试验中抗体对肽表位序列的结合减少至少50％，其中测定试验中变体存在的浓度不超过肽表位序列的浓度的10倍，并且测定试验测量肽表位序列对抗体的结合，所述抗体直接抗含有该肽表位序列的多肽。

20.编码权利要求1-19任意一项所述的变应原杂合蛋白质的核酸。

21.制备编码变应原杂合蛋白质的核酸的方法，所述方法包括将编码变应原蛋白质的肽表位序列的核苷酸序列导入编码与变应原蛋白质结构同源的支架蛋白质的核苷酸序列中，其中编码肽表位序列的核苷酸序列与编码支架蛋白质的核苷酸序列符合读框，并且其所在位置使得在变应原杂合蛋白质中肽表位序列的存在位置为杂合蛋白质的表面可及区域并对应于该肽表位序列在变应原蛋白质中的位置。

22.根据权利要求21所述的方法，其中将编码支架蛋白质的核苷酸序列突变以导入编码肽表位序列的核苷酸序列。

23.根据权利要求21所述的方法，其中编码肽表位序列的核苷酸的导入通过用核酸内切酶处理含有编码肽表位序列的核苷酸序列和编码支架蛋白质的核苷酸序列的核酸、将所得的片断连接来实现。

24.根据权利要求21所述的方法制备的核酸。

25.表达载体，其含有与启动子可操作连接的权利要求20的分离的核酸。

26.生产具有减弱的变应原性但保留免疫原性的变应原杂合蛋白质的方法，所述方法包括培养已经转化有权利要求25的表达载体的细胞，由此由该细胞产生杂合变应原。

27.权利要求26所述的方法，所述方法还包括从培养基、细胞，或者两者中回收杂合变应原。

28.治疗变应性疾病的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的权利要求1所述的杂合蛋白质或权利要求25所述的表达载体，其中所述患者对变应原蛋白质或支架蛋白质或两者具有变应性。

29.权利要求28所述的方法，其中杂合蛋白质或表达载体通过口服、肺、鼻、局部或肠胃外途径施用。

30.药物组合物，其含有权利要求1所述的杂合蛋白质或权利要求25所述的表达载体和可药用稀释剂或载体。

31.设计具减弱的变应原性但保留免疫原性的杂合变应原的方法，所述方法包括

(a)鉴定变应原的暴露于溶剂的表面；

(b)鉴定与变应原结构同源的蛋白质；和

(c)修饰与变应原结构同源的蛋白质的序列，以并入来自变应原的溶剂暴露表面的肽序列。

32.权利要求31所述的方法，其中所述溶剂暴露表面通过物理方法鉴定。

33.权利要求32所述的方法，其中所述物理方法为X射线晶体学。

34.权利要求31所述的方法，其中所述溶剂暴露表面通过将变应原的氨基酸序列与已知三维结构的结构同源蛋白质的氨基酸序列比较而鉴定。

35.权利要求31所述的方法，其中溶剂暴露表面含有环或转角区域。