CN1604788B - 高浓度蛋白制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种包括沉淀蛋白及液体溶媒的浓缩混合物及其制备方法。浓缩混合物的制备方法为，以生物相容性聚合物沉淀试剂沉淀蛋白，然后除去足量液体并将所得混合物浓缩到所需程度。沉淀蛋白可以浓缩混合物的形式储藏相当长时间，如可用于生产操作时各步骤的中间体。

Description

高浓度蛋白制剂及其制备方法
发明背景 
某些蛋白尤其是免疫球蛋白用于治疗时需要使用大剂量。由于免疫球蛋白能够特异识别并结合专一靶标，其用于治疗诸如癌症及关节炎等疾病很有前景。然而，使用免疫球蛋白治疗有一些缺点，包括这些球蛋白分子量一般都很大导致量效比低、在水中溶解度较低以及有效期短。例如，典型的单克隆IgG抗体分子量约150kDa，在水中的溶解度低于50mg/mL，而且长期储藏必须冻干。 
同样地，由于显著的低效，商品化的治疗抗体的每剂需要100mg～1000mg。其在水中的低溶解度意味着每剂用量需数毫升抗体溶液。即使假定抗体溶解度高达50mg/mL，100mg剂量也需要使用溶液2mL，而1000mg的剂量则需要使用20mL溶液。对诸如皮下(SC)、肌肉(IM)、肿瘤内(IT)及关节内(IA)应用，这些体积太大，而通常这些部位的注射液体积限制在1mL。因而必须以IV输注液的形式使用这些药物。而这些IV输注液费时且不便于医患双方的使用。 
此外，抗体蛋白较低的溶解度将限制其产量。大量发酵后，为了将几批合并以制备大量产品，通常希望保存中间体阶段的物质。为便于在制备设备中储藏，中间体的体积必须足够小。透析滤过稀溶液可引起沉淀及透析膜污染。大规模冷冻干燥需要在厂房、资金设备及操作成本上进行大量投入。 
为了制备高浓度的抗体溶液，在仔细控制pH、离子强度及缓冲液的类型等方面已经作出努力，然而，许多抗体及其它蛋白即使在最佳条件下也不能制得高浓度溶液。同样地，即使能够制备高浓度的抗体溶液，其长期稳定储藏仍然是非常困难的。特别是，随着溶液蛋白浓度的增加，生成非期望的改性聚合物的风险也将增加。此外，一些高浓度抗体溶液的高粘度常常使制备过程中的实际处理变得复杂，有时甚至无法进行。 
由于产物稳定性的原因，当前用于临床的治疗抗体为冻干形式。冻干小瓶冷藏，使用前必须重建。由于冻干块不能很快重建，重建过程费时。 而且，由于形成泡沫及变性，重建可导致治疗蛋白降解。因而重建过程可引起治疗药物的用量及相对活性/免疫原性的改变。 
非常需要改进的高浓度蛋白制剂，特别是适合用于诸如SC、IM、IT及IA注射的抗体制剂。同时，在生产蛋白产品及抗体时非常需要改进加工及储藏中间产物的技术。也需要长期储藏抗体及其它蛋白的技术，从而能够降低并消除冻干产品重建过程中的难题。 
发明概述 
本发明发现无需冻干即可制备稳定的浓缩蛋白制剂。浓缩蛋白制剂是沉淀的蛋白与液体介质的混合物，介质一般为水性介质。已经发现浓缩混合物中的沉淀蛋白是高度稳定的，且有利于长期储藏而无冻干过程的花费及繁琐。同时，该浓缩混合物易于稀释而重建为沉淀蛋白的更稀形式的制剂，这一点有利于进一步地处理或使用。在制备浓缩混合物和/或其随后的稀释时，可加入诸如蛋白稳定剂及表面活性剂之类的添加剂，以获得期望的药物组合物特征。 
本发明特别适用于高分子蛋白，尤其是抗体，其通常难于制备成用于诸如IM、SC、IT或IA的足够浓度的注射剂。本发明制备了蛋白，尤其是抗体的浓缩注射悬浮液，其适于经诸如IM、SC、IT或IA途径给药。 
本发明一方面提供了一种制备包括蛋白的药物组合物的方法。该药物组合物既可为最终使用的组合物，也可为能够延长储藏等待进一步处理或稀释可制备成最终使用的组合物而设计成的中间体组合物。在特别有利的应用中，本方法包括将蛋白溶液与合适的沉淀试剂接触沉淀出感兴趣的蛋白，然后从所得混合物中除去足量液体以制备包含至少8％重量，优选至少10％重量的沉淀蛋白的浓缩混合物。同时，为便于沉淀蛋白的储备及重建，浓缩混合物优选包含至少20％重量的水，更优选包含至少30％重量的水。与冻干块包含一般远小于10％重量的水且使用时很难重建形成了鲜明的对照。 
在本发明的该方面一个特别优选的实施方案中，沉淀试剂为生物相容性聚合物，优选为逆热胶凝聚合物。生物相容性聚合物不仅引起蛋白的沉淀，而且由于其在浓缩混合物中的存在为浓缩混合物的长期储藏提供了稳额外的保护。
在所述方法的一种应用中，浓缩混合物设计为感兴趣蛋白的长期储藏稳定形式。在这种情况下，浓缩混合物一般包含至少40％重量的沉淀蛋白，优选更高浓度的蛋白。 
在一个改进方法中，加入了诸如蔗糖、海藻糖或甘露醇之类的蛋白稳定剂以进一步增加长期储藏的浓缩混合物中沉淀蛋白的稳定性。还可以将多羟基化合物和/或表面活性剂，如甘露醇或聚山梨醇酯加入至浓缩混合物中，以有利于增加最终药物组合物的注射特性。 
本发明一方面提供了一种制备药物组合物的方法，其一般用于供使用的最终制剂。该方法包括，稀释沉淀蛋白的浓缩混合物，以制备较稀的沉淀蛋白混合物。一般地，稀释应以避免蛋白的基本成分溶于稀释混合物的液体介质中。通过将溶解蛋白控制在少量或不显著的数量，形成非需要的改性聚合物的可能性将显著降低，这有利于制剂的长期保持稳定。 
本发明另一方面提供了一种长期储藏蛋白的方法，一般地至少一个月，通常3个月或更长。蛋白以沉淀形式存在于浓缩混合物中。为进一步增加储藏时的稳定性，可将浓缩混合物冷冻。在另一个实施方案中，当浓缩混合物包含足量的生物相容性逆热胶凝聚合物(reverse-thermal gelationpolymer)时，可将浓缩混合物制成凝胶形式。 
本发明的另一方面提供了一种包装蛋白的方法。所述方法包括将一定量的沉淀蛋白的浓缩混合物密封于容器中。在一个优选实施方案中，包装量包括单剂量使用蛋白，更优选地，包装体积不超过1mL。 
本发明另一方面提供了一种包括沉淀蛋白的浓缩混合物的药物组合物。在一个优选实施方案中，该组合物包含高浓度的蛋白，以及有效量的水以利于沉淀蛋白的重建为较稀的制剂。在一个实施方案中，组合物设计为供使用的最终组合物，优选易于注射，可采用诸如IM、SC、IT或IA注射技术使用的组合物。在一个实施方案中，将药物组合物进行包装以使包括单剂量沉淀蛋白的药物组合物包含在密封容器中，如小瓶或瓶。当采用诸如IM、SC、IT或IA注射给药时，药物组合物的量优选不超过1mL。在另一个实施方案中，药物组合物包装于诸如注射器之类的注射装置中。 
本发明另一方面提供了一种注射使用药物组合物的方法，优选采用IM、SC、IT或IA注射途径。患者可为人或动物。 
上述概述及随后的详述，包括列举的实施例用于阐释本发明。从随后 的本发明的详细描述中，本领域熟练的技术人员很容易理解本发明的其它方面及新特征。 
附图概述 
图1为一个通用制备方法的方框图，其描述了制备包含高浓度沉淀蛋白的浓缩混合物的本发明方法的一个实施方案。 
图2为一个通用制备方法的方框图，其描述了本发明方法的一个实施方案，将沉淀蛋白的浓缩混合物制成凝胶形式以供长期储藏。 
图3为一个通用制备方法的方框图，其描述了本发明方法的一个实施方案，将沉淀蛋白的浓缩混合物冷冻以稳定储藏。 
图4为一个通用制备方法的方框图，其描述了本发明方法的一个实施方案，将沉淀蛋白的浓缩混合物经稀释后制成更稀的沉淀蛋白混合物。 
图5为一个通用制备方法的方框图，其描述了本发明方法的一个实施方案，将沉淀蛋白的浓缩混合物包装。 
发明详述 
本发明一方面提供了一种制备药物组合物的方法，该组合物为蛋白浓缩制剂。参照图1，其描述了一种通用制备方法的实施方案。如图1所示，第一步是将蛋白溶解于液体溶媒中的溶液配制102。溶液配制102后，在蛋白沉淀104过程沉淀蛋白，其中蛋白溶液与沉淀试剂接触使蛋白自溶液中沉淀出来。蛋白沉淀104产生包括沉淀蛋白与液体溶媒的混合物。蛋白沉淀104后，在液体分离步骤108中将液体自混合物中分离以制备分离液体110及浓缩混合物112。浓缩混合物112包括高浓度的沉淀蛋白。沉淀蛋白指在蛋白沉淀104过程中以颗粒形式沉淀出来的蛋白。沉淀的蛋白是完全可逆的，且蛋白分子的二级结构基本上没有被破坏。这与非需要的不可逆聚合物不同，该聚合物自溶液中析出且包含二级结构基本上已变性的蛋白。 
溶液配制102可以任何方式将蛋白溶于合适液体溶媒制得。液体溶媒一般为具有适合盐分、pH及离子强度的水性液体，可将相关蛋白溶解至期望的浓度。溶液中蛋白的浓度视具体处理的蛋白而异。然而，溶液中蛋白的浓度不一定很高。相反，为便于配制以及处理溶液，通常优选较低浓度的蛋白溶液。这种相对较低浓度蛋白溶液会经常在生产操作中制备。绝大 多数情况下，蛋白溶液的浓度不超过50mg/mL，更一般地不超过25mg/mL，甚至更一般地不超过10mg/mL。非常大的蛋白，如抗体尤其优选极低浓度。 
本发明方法中使用的蛋白可以是任何需要高浓度制剂的蛋白。一般地，蛋白的分子量为15kD或更高。本发明优选使用较高分子量的蛋白，其分子量至少100kD，因而制备其高浓度溶液通常非常困难或不可能。这些较高分子量的蛋白此处称为高分子蛋白。然而，较低分子量的蛋白也可便利地以本发明方法制备。甚至在水中有高溶解度的较低分子量的蛋白也可便利地获得本发明所述的稳定沉淀状态。改进的制剂稳定性特别有利于蛋白的长期储藏，可用于生产中的某些处理操作。本发明使用的具体蛋白实例列于美国专利6,267,958中，其全部内容此处引入一如其在此处全部公开。一些本发明优选使用的蛋白包括生长因子、可溶性受体、细胞因子、血友病因子及抗体。 
具有150kD或更高分子量的抗体特别优选作为本发明使用的蛋白。本发明可使用任何抗体。美国专利6,267,958讨论了一些用于本发明的具体抗体。例如，抗体可以是或包括单克隆抗体，具有多抗原表位特异性的组合物、双特异性抗体、双特异性抗体、单链分子及抗体片段。 
在一个优选实施方案中，蛋白应当基本纯净，应当基本上不含污染的蛋白。在溶液配制102前，优选蛋白纯度为90％重量，更优选至少95％重量纯度，甚至优选至少99％重量纯度。 
此外，在溶液配制102、蛋白沉淀104或液体分离108步骤中，蛋白一般不经纯化。本方法优选基本上仅影响沉淀形式的蛋白浓度，而并非纯化蛋白。在一个优选实施方案中，沉淀蛋白的纯度与蛋白沉淀104过程中的蛋白溶液基本上一样。 
在蛋白沉淀104过程中，与蛋白溶液接触的沉淀试剂可以是能够引起至少部分蛋白沉淀，优选绝大部分或基本上所有蛋白沉淀的物质。一般至少80％重量，优选至少90％重量，甚至更优选至少95％重量，甚至优选至少99％重量的蛋白在蛋白沉淀104过程中被沉淀。相应地，优选地蛋白沉淀104后优选保留少量蛋白溶于液体溶媒中。一般地在蛋白沉淀104后，不超过20％重量，优选不超过10％重量，甚至更优选不超过5％重量，甚至更优选不超过2％重量以及最优选不超过1％重量的蛋白残留于溶媒中。沉淀尽量多的蛋白对于提高浓缩混合物112的稳定性是重要的，有利于长 期储藏。 
为提高效果，沉淀试剂应当为生物相容性的，由于至少部分沉淀试剂将残留于浓缩混合物112中，即使不是全部情况下，在绝大多数情况下应当考虑至少部分沉淀试剂将残留于患者使用的沉淀蛋白中。生物相容性指物质对宿主的生物机能无毒性或损伤作用。 
优选的沉淀试剂为生物相容性聚合物或其混合物，在蛋白沉淀104过程中，当其与蛋白溶液接触时可从溶液中生成理想的蛋白沉淀。生物相容性聚合物可以是任何与蛋白溶液接触产生理想蛋白沉淀的生物相容性聚合物。生物相容性聚合物一般可溶于溶液中，一般地为水性液体溶液，可与蛋白溶液单独地制备。然后，在蛋白沉淀104过程中将聚合物溶液与蛋白溶液混合，或者是将聚合物溶液加入至蛋白溶液中，或者是将蛋白溶液加入至聚合物溶液中，优选后者。 
本发明优选用作沉淀试剂的生物相容性聚合物为逆热胶凝聚合物。在一个实施方案中，选择了生物相容性聚合物并制备了聚合物及蛋白溶液，以致最终混合物及浓缩混合物112中也有一定浓度的生物相容性聚合物，因而，至少是相应混合物的液体部分在至少一定温度范围内显示逆热粘度行为特征，温度范围优选40℃以下，更优选37℃以下以及更优选10℃～37℃。典型地，液体在1～20℃范围内的某个范围内显示逆热粘度行为特征。由于浓缩混合物112中液体的逆热粘度行为特征，浓缩混合物112可在较低的温度下施用于宿主，此时组合物具有较低的粘度。当浓缩混合物112具有逆热胶凝特征时，浓缩混合物112的液体至少在第一温度为流动溶媒的形式，在高于第一温度的第二温度呈凝胶状。优选第一及第二温度均低于40℃，更优选第二温度不高于37℃。优选当第一温度为1℃～20℃时，第二温度在25℃～37℃。 
在一个实施方案中，蛋白沉淀后混合物中的液体及浓缩混合物112中的液体均包含一定浓度的逆热胶凝聚合物，以致液体具有逆热胶凝性质，优选具有逆热液体凝胶转变温度，以致当浓缩混合物112施用于宿主时，生物相容性聚合物在体内由液体转变为凝胶状。在另一个实施方案中，逆热胶凝聚合物的浓度不够大到能在储藏、使用时或使用后成凝胶形式。IM、SC、IT或IA注射途径通常优选后者。 
此处使用的术语“逆热粘度特性”及“逆热粘度行为”均指某一或某 些成分的特性，特别是生物相容性聚合物/水的组合在跨越至少某些温度范围时经历的粘度随温度增加而增加的性质。“逆热胶凝特性”指某一或某些成分的特性，特别是生物相容性聚合物/水的组合在温度自低升高到逆热液体凝胶转变温度以上时，产生的从液体形式向凝胶形式的转变。“逆热液体凝胶转变温度”指在某温度或温度范围，在该温度或温度范围某一或某些成分的特性特别是生物相容性聚合物/水的组合随着温度升高产生的从液体形式向凝胶形式的物理转变。“逆热胶凝聚合物”指能够与液体溶媒，特别是水相互作用的聚合物，以致聚合物/液体溶媒组合至少在某些比例的聚合物和液体介质下显示逆热胶凝性质。 
一些生物相容性逆热胶凝聚合物的非限制性实例包括某些多聚醚(优选聚氧化亚烷基(polyoxyalkylene)嵌段共聚物，更优选聚氧化亚烷基嵌段共聚物包括聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，此处称为POE-POP嵌段聚合物，如PluronicTM F68、PluronicTM L127、PluronicTM L101、TetronicTM T1501)；某些纤维素聚合物，如乙基羟乙基纤维素；某些聚醚-酯嵌段共聚物(如美国专利5,702,717所公开的那些，此处引入一如其在此处全部公开)。PluronicTM及TetronicTM为BASF公司的商标。此外，聚合物溶液可包含不止一个这些和/或其它生物相容性聚合物。此外，聚合物溶液和/或蛋白溶液中可包括其它聚合物和/或其它添加剂，直至不超出本发明的操作方法或浓缩混合物112的性能要求。此外，这些聚合物可以和其它聚合物或添加剂，如糖典型地在水性液体溶液中相混合以改变热逆热胶凝的转变温度。聚氧化亚烷基嵌段聚合物一般被视为可用作沉淀试剂的生物相容性材料。聚氧化亚烷基嵌段共聚物为包括至少第一种聚氧化亚烷基的一个嵌段(即共聚物片段)及第二个聚氧化亚烷基的至少一个嵌段的共聚物，但也可同时包含其它嵌段。POE-POP嵌段共聚物是一类制备生物相容性聚合物，优选用作生物相容性逆热胶凝聚合物。POE-POP嵌段共聚物包括至少一个聚氧乙烯(polyoxy-ethylene)嵌段，一个聚氧丙烯(polyoxypropylene)嵌段，当然也可同时包含其它嵌段。聚氧乙烯嵌段通常以通式(C2H4O)b表示，b为整数。聚氧丙烯嵌段通常以通式(C3H6O)a表示，a为整数。聚氧丙烯嵌段可如(CH2CH2CH2O)a，或可如 
几个POE-POP嵌段共聚物已知可显示逆热胶凝性质，特别优选这些聚合物以赋予浓缩混合物112以逆热粘度和/或逆热胶凝性质。POE-POP嵌段共聚物的实例包括Pluronic F68、Pluronic F127、Pluronic L121、PluronicL101、及TetronicTM T1501。TetronicTM T1501为POE-POP嵌段共聚物的一个实例，除聚氧乙烯及聚氧丙烯外，该聚合物至少还具有一个聚合物片段。TetronicTM T1501为BASF公司报道的一种嵌段共聚物，包括聚合物片段，或氧化乙烯、氧化丙烯及乙二胺嵌段。 
应当明白，任何当前或此后存在的可用作沉淀试剂的生物相容性聚合物，当掺入用来制备生物相容性聚合物时均在本发明的考虑范围之内。 
一些优选POE-POP嵌段共聚物具有通式： 
HO(C2H4O)a(C3H6O)a(C2H4O)bH 
I 
在优选实施方案中，其在环境温度或较低的温度下具有液体性质，在哺乳动物体温下以半固体凝胶存在，其中为a和b分别为15～18及50～150范围内的整数。本发明使用特别优选的POE-POP嵌段共聚物具有如下通式： 
HO(CH2CH2O)b(CH2(CH3)CHO)a(CH2CH2O)bH 
II 
其中为a和b为整数，(CH2(CH3)CHO)a表示的疏水基的分子量为约4,000，疏水性由羟基数目决定。聚氧乙烯链构成了分子中单体单元的70％，其中共聚物的平均分子量约12，600。PluronicTM F127，又称作Poloxamer407即是此类物质。此外，也可施用结构类似物PluronicTM F68。 
相对于使用非聚合的沉淀试剂，使用生物相容性聚合物的一个优点在于生物相容性聚合物有助于保护及稳定浓缩混合物112中的蛋白。当使用逆热胶凝聚合物尤其如此，如优选的聚氧化亚烷基聚合物。在另一方面，当存在一定浓度的逆热胶凝聚合物时，将赋予逆热胶凝性质，随着温度的升高，生成的凝胶又进一步保护蛋白免于降解。 
一些非聚合性的沉淀试剂，本发明并不优选使用，包括某些锌盐、硫酸铵、乙酸盐及乙醇。由于其并非生物相容性良好的聚合物，不优选使用这些沉淀试剂。 
在蛋白沉淀104过程中，沉淀试剂可以任何引起需要的蛋白沉淀方式与蛋白溶液接触。一般地，沉淀试剂可以溶于加入蛋白溶液中的另一种溶 液中，或者，一般在搅拌条件下或在其它有效的混合形式下将蛋白溶液加入该溶液中。 
在蛋白沉淀104过程中，沉淀试剂的用量足以产生需要的沉淀。例如，生物相容性聚合物沉淀试剂一般可分开制成包含生物相容性聚合物溶液，溶液中生物相容性聚合物浓度的一般至少5％重量，一般不超过40％重量。在蛋白沉淀104过程之前，优选生物相容性聚合物完全溶于聚合物溶液中。在蛋白沉淀过程中将聚合物溶液与蛋白溶液混合后，所得混合物中聚合物的浓度一般至少为5％重量，一般不超过30％重量。蛋白沉淀后有些生物相容性聚合物将残留于液相中，有些随同沉淀的蛋白残留于固相中。在绝大多数情况下，随同蛋白沉淀的固体物质一般仅为总体混合物的一小部分，该固体物质一般为所得的混合物的1％重量～10％重量。 
在本发明的一个改进方法中，处理过程除蛋白及沉淀试剂外可加入一或多种添加剂。一种特别有用的添加剂为蛋白稳定剂，其有助于进一步稳定浓缩混合物112中的蛋白。当用于浓缩组合物112时，蛋白稳定剂为任何可以显著阻止或降低蛋白化学的或物理不稳定性的分子。一些本发明使用的蛋白稳定剂的实例包括通常用于稳定冻干蛋白的物质。一些所谓的冻干保护剂如美国专利6,267,958所述。本发明优选使用的蛋白稳定剂是糖。具体优选使用的糖为蔗糖及海藻糖。另一个优选的蛋白稳定剂为甘露醇。 
蛋白稳定剂在使用时可用作蛋白溶液的一部分、聚合物溶液的一部分或与蛋白及聚合物溶液分开。优选蛋白稳定剂在液体分离108过程之前加入，更优选蛋白稳定剂共溶于至少一种蛋白溶液及聚合物溶液中。 
加入蛋白稳定剂有助于提高浓缩混合物112的蛋白的稳定性。由于无冻干的繁琐及花费，浓缩混合物112的稳定特征特别有利。 
另一种在生产中或生产后加入的有利添加剂为一种可改善浓缩混合物112流动性质如可注射能力的添加剂。表面活性剂及多羟基化合物为此类可增加流动能力的添加剂实例。加入表面活性剂及多羟基化合物特别有利于改善浓缩混合物112的可注射能力，特别是当浓缩混合物112具有极高的蛋白浓度时。优选非离子生物相容性表面活性剂及多羟基化合物。所述的多羟基化合物和/或表面活性剂的非限制性实施例见美国专利6,267,958。优选用作本发明的表面活性剂为聚山梨醇酯。一些优选多羟基化合物包括甘露醇及甘油。一个优选聚山梨醇酯类表面活性剂为商标为TweenTM的Uniqema (ICI Group)产品。其它优选的表面活性剂包括山梨醇酯，如商标为SpanTM的Uniqema(ICI Group)产品。有时由表面活性剂和/或多羟基化合物增加的注射能力是特别显著且有利的，特别是使用极高浓度的IM、SC、IT或IA注射剂时。 
在液体分离108过程中，应从蛋白沉淀除去中至少一部分，一般是大部分的液体。分离过程可以使用任何液固分离技术。可能的分离技术包括经蛋白沉淀静止后倾析上层液、离心、过滤及旋流。优选蛋白沉淀静止后倾析上层液的方法，由于相对易于保持操作时的无菌环境。液体分离110一般放弃。浓缩混合物112将便利地包含沉淀蛋白及残留液体的浓缩制品。在液体分离108中，除去足量的液体以在浓缩混合物112中提供理想浓度的沉淀蛋白。沉淀蛋白的理想浓度将视具体处理的蛋白及具体情况而定。本发明的一个显著优点为可制备成不同浓度蛋白沉淀的浓缩混合物112，在可视具体应用情况具体地制备理想沉淀蛋白浓度的浓缩混合物112具有很大的灵活性。然而，浓缩混合物112中的沉淀蛋白的浓度一般在8％重量～80％重量，更一般地，优选7％重量～70％重量。在列举的沉淀蛋白浓度范围的下限，沉淀蛋白的浓度应当足以满足IM、SC、IT及IA注射技术给药。在列举的沉淀蛋白浓度范围的上限，保持至少足量的水是重要的，以使浓缩混合物112此后易于以水稀释而重建成较低浓度的沉淀蛋白用于给药。优选的浓缩混合物112包含水的下限为10％重量，更一般为20％重量，甚至更典型为30％重量，上限典型地为92％重量并更典型地为90％重量。若在液体分离108中除去太多的水，重建时会遇到冻干蛋白重建时出现的问题。通过在浓缩混合物112保持显著浓度的水，将使浓缩混合物112易于稀释而重建为适合使用或进一步处理需要的更稀的沉淀蛋白混合物。除水及沉淀蛋白外，浓缩混合物112也至少包括一些沉淀试剂，也可包括其它一些添加剂，如表面活性剂，多羟基化合物和/或蛋白稳定剂。浓缩混合物112中的沉淀试剂的浓度将视使用的具体沉淀试剂及沉淀条件而定。当使用生物相容性聚合物沉淀试剂时，浓缩混合物112一般包括至少5％重量的生物相容性聚合物，一般不超过50％重量，生物相容性聚合物的浓度更普遍在10％重量～30％重量。当使用表面活性剂时，在加工过程中加入，加入量一般至少为蛋白的0.001％重量，更一般地不超过蛋白的的1％重量，此外，其在浓缩混合物112中的浓度也大致相当。当使用的时候，蛋白稳定剂一 般在加工过程中加入，加入量一般至少为蛋白的10％重量，更一般地不超过蛋白的的1000％重量，此外，其在浓缩混合物112中的浓度也大致相当。 
若浓缩混合物112将用作给药的最终的药学制剂，则沉淀蛋白的浓度优选地应当足够高以使1mL注射剂即可施用全部的蛋白，当使用IM、SC、IT及IA注射技术的时候。在这种情况下，特别是抗体，浓缩混合物112含有的沉淀蛋白的浓度下限一般为8％重量，更一般为10％重量，通常为20％重量，上限一般为50％重量，更一般为40％重量，甚至更一般为35％重量，通常为30％重量。相应地，浓缩混合物112中包含的水量的下限为50％重量，更一般为60％重量，甚至更一般为65％重量，通常为的70％重量，上限一般为92％重量，更一般为90％重量的浓缩混合物112。用于经IM、SC、IT及IA注射的特别优选沉淀蛋白的浓度范围为10％重量～30％重量，这为许多抗体的使用提供了较大的灵活性。许多抗体需要的浓度范围为20％重量～30％重量的浓缩混合物112。然而，以IM、SC、IT或IA注射时，浓缩混合物具有足够的注射能力是重要的，在本发明中通常可以实现。 
本发明的一个具体优点是浓缩混合物112用作中间产品时，在蛋白生产操作的处理步骤之间易于延长储藏时间。此时，通常希望在液体分离104过程中除去绝大多数的液体以致浓缩混合物112具有高浓度的沉淀蛋白以大幅降低体积，在等待进一步处理的时候必须进行处理和储藏。在这种情况下，特别是抗体，浓缩混合物112具有的沉淀蛋白的浓度下限一般为20％重量，更一般为30％重量，甚至更一般为40％重量及最典型地为50％重量，上限一般为90％重量，更一般为80％重量，甚至更一般为70％重量。相应地，浓缩混合物112中包含的水量的下限为10％重量，更一般为20％重量，甚至更一般为30％重量，上限一般为80％重量，更一般为70％重量，甚至更一般为60％重量，最典型地为50％重量。中间体储藏应用的沉淀蛋白的浓度的具体优选范围为浓缩混合物112的50％重量～70％重量。 
从所述讨论中应当明白，在绝大多数情况下，液体分离108过程中将大多数液体从沉淀蛋白中分离而制备浓缩混合物112。即使在当浓缩混合物112被作为最终使用的制剂时的情况下，在液体分离108过程中，一般至少除去50％重量的液体，更典型至少75％重量及甚至更典型至少90％重量的液体。在一些情况下，在液体分离108过程中，除去至少95％重量或甚至98％重量或更多的液体。当希望极大浓度的蛋白沉淀时，离心是一种优选 的液固分离技术。 
从上述讨论中还应当明白，浓缩混合物112包含的沉淀蛋白的浓度要远高于溶液配制102中蛋白溶液中蛋白的浓度。一般地，浓缩混合物112包含的沉淀蛋白的浓度(基于重量)至少是原蛋白溶液中溶解的蛋白浓度的2倍，更一般至少为5倍，甚至更一般至少10倍。在某些情况下，可达20倍，甚至40倍或更高。当浓缩混合物112作为使用的最终制剂时，在绝大多数情况下，一般至少为5倍，更一般在5～40倍范围内。当浓缩混合物112作为进一步处理的中间体时，一般至少为25倍，甚至更一般至少50倍，尽管在某些情况下，可达75倍，甚至100倍或更高。 
本发明一个重要方面为浓缩混合物112是稳定的，可储藏较长时间而基本上没有降解。当使用的沉淀试剂为生物相容性材料时尤其如此，当生物相容性材料为逆热胶凝聚合物时就更是如此。稳定性好一方面是因为浓缩混合物112的残留液体的溶液里包含极少的蛋白，因为大多数或基本上所有的蛋白通常在蛋白沉淀过程中沉淀出来。由于沉淀的蛋白较之于溶解的蛋白更不易降解及变性，这一点非常重要且有利。溶解于水性液体中的蛋白极易形成不希望的改性聚合物。由于浓缩混合物112保留至少有效量的液体溶媒，因而在蛋白沉淀104过程沉淀尽量多的蛋白非常重要，以使很少蛋白残留于溶液中而易于形成改性聚合物。浓缩混合物112溶液中残留的溶解蛋白一般占浓缩混合物112的总蛋白不超过5％重量，优选不超过2％重量，更优选不超过1％重量，甚至更优选不超过0.5％重量，最优选不超过0.2％重量。相应地，浓缩混合物112中沉淀蛋白一般占总蛋白至少95％重量，优选至少98％重量，更优选至少99％重量，甚至更优选至少99.5％重量，最优选至少99.8％重量。浓缩混合物112残留的生物相容性聚合物可进一步提供储藏的稳定性。生物相容性聚合物似乎保护了沉淀蛋白，并且其存在防止沉淀蛋白重新溶解于残留溶液中。此外，在生产中加入蛋白稳定剂可进一步增加浓缩混合物112的稳定性。 
本发明的一个重要方面为浓缩混合物可长期储藏而无冻干过程的花费及繁琐。浓缩混合物112的储藏一般都需要标准的冷冻。然而，在一个实施方案中，浓缩混合物112包括足量的生物相容逆热胶凝聚合物以致当温度高于蛋白沉淀104过程中操作温度时，聚合物将以凝胶形式存在，如上所述逆热液体凝胶转变温度一般不超过37℃。现参照图2，其为描述了本 发明从浓缩混合物112进行胶凝116的通用方法的方框图。在胶凝116过程中，浓缩混合物112的温度从逆热液体凝胶转变温度以下升高至转变温度以上，聚合物将从液体变成凝胶形式。从浓缩混合物112得到的凝胶形式118后即可储藏。储藏后，浓缩混合物112得到的凝胶形式118的温度降低至逆热液体凝胶转变温度以下，又将聚合物转变为液体形式以进行进一步的处理或应用。以凝胶形式储藏的浓缩混合物112降低了冷冻成本及设备要求，易于操作、运输。 
在另一个实施方案中，浓缩混合物112可便利地长期冻藏。这尤其适用于生产的中间产物的长期储藏，如处理操作步骤间的一批需延期放置的蛋白。与冷冻稀溶液或更稀的悬液相比，由于浓缩混合物112包含基本上减少的需冷冻的水体积，因而冷冻是有利的。现参照图3，其为描述了本发明从浓缩混合物112到冷冻120的通用方法的方框图。在冷冻120过程中，浓缩混合物112的温度降低至浓缩混合物112中液体溶媒凝固点以下。一般地，浓缩混合物112的温度降低至-20～-80℃。所得的浓缩混合物112的冷冻形式122可长期储藏。储藏后，可将浓缩混合物112溶媒融解为流动性更好的形式以进行进一步的处理或应用。冷冻浓缩混合物112不需冻干，本发明这一点很重要，由于冻干将显著增加处理成本并且沉淀蛋白更难以重建为更稀的制剂。 
本发明的一个显著优点是改变浓缩混合物112的沉淀蛋白的浓度很灵活，在生产浓缩混合物112的过程中可加入一些添加剂以及其它一些可用的储藏及处理手段。另一个优点是浓缩混合物112可经进一步处理而赋予最终产品一些所需的其它特征。例如，若在溶液配制102或蛋白沉淀104过程中没有加入蛋白稳定剂及表面活性剂，可在液体分离108过程后加入以改变浓缩混合物112的性质。浓缩混合物进一步处理地的一个特别重要的实施方案是再加入液体溶媒以制备更稀的蛋白制剂。这是有利的，例如，这对于浓缩混合物112长期储藏后再制备为更稀的具有改进特征的产品。 
现参照图4，其为描述了本发明从浓缩混合物112到稀释128以制备稀释混合物130的通用方法的方框图。在稀释128过程中，将起稀释作用的液体溶媒加入至浓缩混合物112中以降低稀释混合物130中蛋白的浓度。稀释溶媒一般为水性液体，其与浓缩混合物112中已经存在的水性液体相容。尽管在一些情况下加入起稀释作用的液体溶媒将导致一些沉淀蛋白的溶解，但是稀释128后，当溶解于稀释混合物130中的蛋白浓度达到平衡时溶解的量很小，以致稀释混合物130中溶解的蛋白浓度不超过其中总蛋白的20％重量，更常见不超过10％重量。相应地，稀释混合物130总蛋白一般至少80％重量，更常见至少90％重量仍然保留为沉淀蛋白的形式。 
在绝大多数情况下，希望在稀释128过程中，起稀释作用的液体溶媒具有不溶解任何显著量的浓缩混合物112中的沉淀蛋白的性质。因而，稀释128过程后，溶解于稀释混合物130中的蛋白浓度达到平衡时，更典型地不超过5％重量，优选不超过2％重量，更优选不超过1％重量，甚至更优选不超过0.5％重量，最优选不超过0.2的浓缩混合物112中的总蛋白溶解于稀释混合物130的液体溶媒中。相应地，更典型地，稀释混合物130总蛋白的至少95％重量，优选至少98％重量，更优选至少99％重量，甚至更优选99.5％重量，以及最优选99.8％重量仍然保留为沉淀蛋白的形式。 
为抑制稀释128过程中的蛋白的溶解，起稀释作用的液体溶媒里面应当已经溶解了一些沉淀试剂或其它具有抑制或甚至完全防止蛋白再溶解的试剂。然而，当使用时，起稀释作用的液体溶媒里沉淀试剂的浓度通常小于浓缩混合物112中液体溶媒中沉淀试剂的浓度，因而，与浓缩混合物112相比，降低了稀释混合物130中沉淀试剂的浓度。这对于降低制剂的粘度以改善注射能力是有益的。当以生物相容性聚合物为沉淀试剂时，粘度的降低源于稀释混合物130中存在较大比例的液体及生物相容性聚合物浓度的降低。在一个实施方案中，起稀释作用的液体溶媒基本上不含有生物相容性聚合物，显著稀释了稀释混合物130的生物相容性聚合物浓度。然而，此时沉淀蛋白的再溶解可能依赖于具体使用的起稀释作用的溶媒。为防止沉淀蛋白的显著溶解，应当加入足量的生物相容性聚合物或其它一些有效预防再溶解的化学试剂。即使起稀释作用的液体溶媒不含有生物相容性聚合物，稀释混合物130也将仍然包含至少少量的生物相容性聚合物，一般至少包含0.1％重量的生物相容性聚合物。 
浓缩混合物112的一个显著优点是沉淀蛋白易于重建以制备稀释混合物130。为易于重建，浓缩混合物112优选包括至少20％重量的水，更优选至少30％重量的水。制备浓缩混合物时特别优选应用生物相容性聚合物作为沉淀试剂，以使蛋白易于重建而制备稀释混合物(或希望再溶解蛋白时)。稀释混合物130中水的浓度典型地至少比浓缩混合物112中水的浓度高10％重量(例如，从浓缩混合物112中含有30％重量的水增加至稀释混合物130中含有至少40％重量的水)。相应地，稀释混合物130中沉淀蛋白的浓度典型地至少比浓缩混合物112低至少10％重量(例如，从浓缩混合物中含有60％重量的沉淀蛋白降低至稀释混合物130中不超过50％重量的沉淀蛋白)。在稀释128过程中，通常向浓缩混合物112加入起稀释作用的液体溶媒的量至少与浓缩混合物112的液体溶媒一样大或大数倍。例如，当浓缩混合物112中沉淀蛋白的浓度很高需要临时储藏时尤其如此(例如，在浓缩混合物112中也许含有40％重量～70％重量的沉淀蛋白)，稀释128步骤意在将制剂中的沉淀蛋白浓度稀释至较低的浓度(例如，将稀释混合物130的沉淀蛋白稀释至10％重量～30％重量)，以增加注射能力或最终药物组合物中期望的其它性质，如适于IM、SC、IT或IA注射使用。 
在制备蛋白组合物的生产操作步骤之间，通常需要长期储藏，能够制备浓缩混合物112以长期稳定储藏蛋白是特别有利的。例如，许多治疗用途的蛋白以发酵方法大量制备。然后将蛋白纯化。纯化过程一般在低蛋白浓度下操作。在这些操作中，有时希望将不同纯化阶段的处理后物质储藏。利用本发明，蛋白可浓缩成浓缩混合物112进行储藏，此后通过稀释128重建为具有较低浓度沉淀蛋白的稀释混合物130。而且，不仅仅是稀释，若需进一步处理沉淀蛋白可将其再溶解，但一般无需此种操作。为重新溶解沉淀的蛋白，应当加入足量的基本上不含有沉淀试剂或诸如此类的试剂的水溶媒以完全溶解沉淀的蛋白。在有些情况下，为完全再溶解沉淀蛋白，必要时，可多次加入或分出水性液体以使残留的沉淀试剂降低至极低水平。 
在本发明的另一方面，本发明的沉淀蛋白混合物(如，浓缩混合物112或稀释混合物130)可以被包装成诸如包含单位剂量沉淀蛋白的小瓶或大瓶。现参照图5，其为一方框图，描述了本发明从浓缩混合物112通过包装134步骤制得经包装的药物136的通用方法。在包装134中，将既定量的浓缩混合物112置于容器内，容器被密封以防运输及储藏过程中被污染。在一个优选实施方案中，密封于每个容器内的浓缩混合物112的量为使用的沉淀蛋白的单位剂量。在一个甚至更加优选的实施方案中，包含单位剂量浓缩混合物112的体积不超过1mL，同时优选具有足够的注射能力，可采用IM、SC、IT或IA注射技术。 
本发明的另一方面提供了包括沉淀蛋白及液体溶媒的药物组合物。该 药物组合物为浓缩的沉淀蛋白，但也包括有效量的液体溶媒，溶媒典型地为上述讨论的水性液体。药物组合物一般也至少包括一些沉淀试剂及其它添加剂，如蛋白稳定剂和/或表面活性剂。所有上述关于不同组分的类型及相对量的讨论此处同样适用，尤其是图1-5所述的浓缩混合物112及稀释混合物的相关性质。药物组合物可以是例如，图1-5所述的浓缩混合物112或稀释混合物130，或可以是包括任何相对数量的具有上述任何相关性质的任何组分的其它产物。药物组合物成分的相对数量将视具体情况而定，例如，视组合物中包含的具体蛋白、组合物是否是为了中间储藏或为最终制剂而定。 
如上所述，药物组合物包括至少显著数量的液体溶媒以有利于沉淀蛋白的重建，这对制备必要的更稀制剂是有益的。因而，优选组合物中的沉淀蛋白沉淀后应保持制剂包含至少10％重量，优选至少20％重量，更优选30％重量的水，尽管更高的含水浓度也是常见的，如上述关于图1-5的讨论。与上述关于图1-5讨论相一致，药物组合物通常至少包括8％重量，优选至少10％重量及通常更高浓度的沉淀蛋白，以及至少0.1％重量，优选至少5％重量及甚至更高浓度的生物相容性聚合物。当使用的时候，蛋白稳定剂的浓度通常为沉淀蛋白的10％重量～1000％重量。当使用表面活性剂时，其浓度通常是沉淀蛋白的0.1％重量～1％重量。当添加剂的用量此处定为沉淀蛋白的重量百分比时，其指添加剂用量为沉淀蛋白的相对重量百分比。 
在一个实施方案中，如上所述，药物组合物密封于容器内，优选包含于密封容器内的药物组合物的总体积不超过1mL。包含于密封容器内的药物组合物的量也优选包括供施用的单位剂量沉淀蛋白。 
在一个实施方案中，药物组合物为足够可注射形式以供注射施用。在一个优选实施方案中，药物组合物以IM、SC、IT或IA技术注射施用，优选通过不大于18号皮下注射针施用。当注射施用时，药物组合物包装于注射装置中，例如注射器，优选使用带有不大于18号皮下注射针的注射器。 
在另一个实施方案中，本发明提供了一种使用药物组合物将沉淀蛋白施用于患者的方法。优选上述的注射使用方式。优选单位剂量的沉淀蛋白，其药物组合物的体积不超过1mL。在一个优选实施方案中，药物组合物包括表面活性剂，该表面活性剂能提高药物组合物的可注射性能。 
本发明另一方面提供了一种使用药物组合物的方法，该组合物利于沉 淀蛋白的长期储藏。在一个优选实施方案中，药物组合物将包括至少一种利于长期储藏应用的蛋白稳定剂。 
实施例 
本领域熟练的技术人员审视了下述实施例后，易于明白本发明的其它目的、优点及新特征，实施例意在进一步描述及帮助了解本发明，而不能从任何方面限制本发明的范围。 
实施例1 
将在生理盐水中制得的20mL均匀的10mg/mL牛免疫球蛋白(B-IgG)(CalBiochem，cat#345876)冷却至2-8℃，其制备方法为将干燥的B-IgG溶解于150mM NaCl，0.1％NaN3溶液中。30％(重量∶体积)PluronicTMF127(BASF)去离子水储备液的制法如下：将聚合物溶于冷却至2-8℃的水中，辅以周期搅拌直至形成均匀溶液。将20mL PluronicTM储备液置于带有磁力搅拌器的玻璃容器内，保持于2-8℃搅拌。搅拌下，将B-IgG溶液缓慢加入PluronicTM溶液中。所得混合物立即生成沉淀。于2-8℃搅拌混合物30分钟。所得悬液以1300rmp的转速离心15分钟。倾析出大约39mL上清液，分析其中蛋白含量。得到致密柔软的沉淀物质(浓缩混合物)。 
实施例2 
B-IgG溶液及PluronicTM F127的制备如实施例1所述。将500μLB-IgG溶液加入至500μL的F127溶液中。所得混合物于2-8℃首尾交互倒置(end-to-end inversion)振摇30分钟。离心分离沉淀，倾析出上清流体。将离心沉淀物(浓缩混合物)再溶于1mL生理盐水中。生理盐水/沉淀物的混合物于2-8℃温育约16小时后，简单涡得到无水透明溶液。 
实施例3 
除了B-IgG溶液包括10％(重量∶体积)的甘露醇溶液外，牛免疫球蛋白及PluronicTM F127溶液的制备如实施例1所述。然后，将B-IgG溶液加入至PluronicTM溶液进行混合。所得混合物于2-8℃首尾交互倒置振摇30分钟。离心分离沉淀，分离的沉淀(浓缩混合物)为粘稠流体。分离的沉淀物(浓缩 混合物)具有足够的注射能力，将其置于lcc塑料注射器中，极易分散通过22号皮下注射针。 
实施例4 
除加入0.005％TweenTM而非10％甘露醇外，其它完全同实施例3。所得沉淀(浓缩混合物)也很柔软，推动下可通过27号皮下注射针。 
实施例5 
除加入10％海藻糖、10％葡萄糖、10％果糖或10％PEG600(聚乙二醇)而非甘露醇外，其它完全同实施例3。所得沉淀(浓缩混合物)坚硬，推动不能通过18号皮下注射针。 
实施例6 
以5mL生理盐水重建冻干块(Cappel，Cat#55304)制备15mg/mL的多克隆兔抗卵白蛋白溶液，将所得溶液冷却至2-8℃。如实施例1所述制备30％(重量∶体积)PluronicTM F127溶液。将250μL的抗体溶液加入至250μL的聚合物溶液中。所得混合物于2-8℃首尾交互倒置振摇30分钟。离心分离沉淀，倾析出上清流体。将沉淀物(浓缩混合物)如实施例2所述再溶于生理盐水中。分析非特异低聚反应的程度及再溶解的抗体的反应亲和力，分析分别以大小(size)排阻色谱法及ELISA进行。分析发现，初始的及再溶解的蛋白物质分析没有变化。 
实施例7 
除了将沉淀物(浓缩混合物)于2-8℃保持2个月其它完全同实施例6，无显著的非特异低聚反应和/或反应亲和力变化，表明浓缩混合物的蛋白长期储藏是稳定的。 
实施例8 
除了将0.005％TweenTM加入至兔抗卵白蛋白溶液中，所得浓缩混合物于2-8℃保持2个月，其它完全同实施例7，无显著的非特异低聚反应和/或反应亲和力变化，表明浓缩混合物的蛋白长期储藏是稳定的。 
实施例9 
将10％(重量∶体积)甘露醇加入至兔抗卵白蛋白溶液中，所得浓缩混合 物于2-8℃保持2个月，其它完全同实施例7，无显著的非特异低聚反应和/或反应亲和力变化，表明浓缩混合物的蛋白长期储藏是稳定。 
实施例10 
将0.005％TweenTM加入至兔抗卵白蛋白溶液中，所得的浓缩混合物于-20℃或-80℃的冷冻状态保持2周，并进行一个冷冻/融解循环，其它完全同实施例6。无显著的非特异低聚反应和/或反应亲和力变化，表明浓缩混合物的蛋白经过冷冻/融解循环后是稳定的。 
实施例11 
除将所得浓缩混合物以包含30％、22.5％或15％(重量∶体积)PluronicTMF127的250μL水性液体溶液覆盖外，其它完全同实施例6。每份标本升温至40℃并保持3周。每份标本的低聚反应有所增加，但蛋白的反应亲和力无差异，表明一些蛋白已经发生降解。 
实施例12 
除将10mM或100mM氯化锌加入至兔抗卵白蛋白溶液中，其它完全同实施例6。浓缩混合物中的沉淀蛋白不易再溶解于生理盐水中。 
为阐释及描述本发明进行了上述讨论。上述内容不能理解为将本发明仅限于此处具体公开的形式。尽管本发明的说明书包括一个或多个实施方案以及一些变动及更改，其它一些在本发明范围内的变动及更改，例如，理解了本发明公开后属于本领域的技术及知识范围的变动及更改。意指包括允许程度的替代性实施方案，包括要求保护的那些内容的替代、互变的和/或等价的结构、功能、范围或步骤，无论这些替代的、互变的和/或等价的结构、功能、范围或步骤此处是否公开，目的不在于详尽公开任何可专利的主题。此外，任何一个公开的实施方案中所述的任一特征可与其它任何一个或多个实施方案的特征以任何组合方式相组合。例如，在图1-5的处理实施方案中任何一个公开的处理过程中或以后的任何一处，可增加处理步骤，只要这些处理步骤不与公开的步骤相冲突。此外，图1-5任何一个公开的处理步骤可与图1-5中公开的其它处理步骤相组合。

Claims (34)

1.一种药物组合物，该组合物包括：
至少10％重量的沉淀蛋白，该沉淀蛋白在含有生物相容性聚合物沉淀试剂的沉淀中；
至少10％重量的水，以及
至少5％重量的生物相容性聚合物；
其中沉淀蛋白为抗体并且生物相容性聚合物为Poloxamer 407。
2.权利要求1的药物组合物，该组合物包括至少20％重量的水。
3.权利要求1的药物组合物，其中水经冷冻。
4.权利要求1的药物组合物，该组合物包括10％～50％重量的沉淀蛋白以及至少50％重量的水。
5.权利要求1的药物组合物，该组合物包括至少10％重量的Poloxamer407。
6.权利要求1的药物组合物，该组合物包括10％～30％重量的Poloxamer 407。
7.权利要求1的药物组合物，其中沉淀蛋白包括至少95％重量的组合物总蛋白。
8.权利要求1的药物组合物，其中沉淀蛋白包括至少99％重量的组合物总蛋白。
9.权利要求1的药物组合物，该组合物包括蛋白稳定剂。
10.权利要求1的药物组合物，该组合物包括不同于Poloxamer 407的表面活性剂。
11.权利要求1的药物组合物，其中该组合物为包装于注射装置中的可注射形式。
12.权利要求11所述的药物组合物，其中注射装置包括注射器。
13.权利要求12所述的药物组合物，其中注射器带有针口不大于18号的皮下注射针。
14.权利要求1的药物组合物，其中药物组合物包装于密封的容器内。
15.权利要求14所述的药物组合物，其中药物组合物的总体积不超过1mL。
16.权利要求1的药物组合物，包括至少20％重量的沉淀蛋白以及至少10％重量的Poloxamer 407。
17.权利要求16的药物组合物，包括至多40％重量的沉淀蛋白以及至多50％重量的Poloxamer 407。
18.权利要求1～15中任一项的药物组合物，包括至少20％重量的沉淀蛋白。
19.权利要求1～15中任一项的药物组合物，包括至少30％重量的沉淀蛋白。
20.权利要求1～15中任一项的药物组合物，包括至少40％重量的沉淀蛋白。
21.一种储藏蛋白的方法，该方法包括：
冷冻包括沉淀蛋白、水及生物相容性聚合物的混合物；
其中混合物包括至少10％重量的沉淀蛋白、至少10％重量的水以及至少5％重量的生物相容性聚合物，以及
其中沉淀蛋白为抗体并且生物相容性聚合物为Poloxamer 407。
22.权利要求21的方法，其中混合物包括至少30％重量的沉淀蛋白。
23.权利要求22的方法，其中混合物包括至少10％重量的聚合物以及至少40％重量的沉淀蛋白。
24.权利要求23的方法，其中所述的混合物包含至少20％重量的沉淀蛋白以及至少10％重量的Poloxamer 407。
25.权利要求23的方法，其中所述的混合物包含至多40％重量的沉淀蛋白以及至多50％重量的Poloxamer 407。
26.一种制备包含浓缩蛋白的组合物的方法，该方法包括：
稀释包括蛋白及水性液体的浓缩混合物，以形成蛋白浓度比浓缩混合物蛋白浓度低的稀释混合物，稀释过程包括将浓缩混合物与起稀释作用的水性液体相混合；
浓缩混合物包括至少20％重量的蛋白、至少5％重量的生物相容性聚合物沉淀试剂以及10％重量的水，浓缩混合物中至少95％重量的总蛋白以沉淀形式存在，浓缩混合物中不超过5％重量的总蛋白溶于水中；以及
当溶于稀释混合物水性液体的蛋白浓度达到平衡时，稀释混合物中至少80％重量的总蛋白以沉淀形式存在，稀释混合物中不超过20％重量的总蛋白溶于稀释混合物的水性液体中；
其中蛋白为抗体并且生物相容性聚合物为Poloxamer 407，并且浓缩混合物以及稀释混合物中各自包含抑制蛋白从沉淀形式溶解的Poloxamer407。
27.权利要求26的方法，其中浓缩混合物中至少99％重量的总蛋白以沉淀形式存在；以及
当溶于稀释混合物水性液体的蛋白浓度达到平衡时，稀释混合物中至少95％重量的总蛋白以沉淀形式存在。
28.权利要求26的方法，其中稀释混合物中的蛋白浓度比浓缩混合物中蛋白浓度至少低10个重量百分点。
29.权利要求28的方法，其中浓缩混合物至少包括40％重量的蛋白。
30.权利要求28的方法，其中稀释混合物包括10％～30％重量的蛋白。
31.权利要求26的方法，其中所述的混合物包含至少20％重量的沉淀蛋白以及至少10％重量的Poloxamer 407。
32.权利要求26的方法，其中所述的混合物包含至多40％重量的沉淀蛋白以及至多50％重量的Poloxamer 407。
33.权利要求1～17中任一项的药物组合物在蛋白储藏中的应用。
34.权利要求1～17中任一项的药物组合物用于制备用蛋白治疗的制剂中的应用。
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