CN1584599A - 猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种猪圆环病毒2型(PCV2)抗原或抗体检测试纸条。试纸条具有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层(2)，金标纤维层(3)，纤维素膜层(4)，手柄端为吸水材料层，在纤维素膜层上印制有对照印迹“|”和检测印迹“|”，其排列组合为“| |”。以抗PCV2 dCap单克隆抗体mAb1溶液在纤维素膜上印制对照印迹“|”，山羊抗猪IgG多克隆抗体溶液印制检测印迹“|”，其组合排列为“| |”。本发明有益的积极效果是：检测试剂条操作简单，易于大范围推广应用，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。

Description

猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条

技术领域

本发明涉及一种家畜疫病快速诊断器具，特别是涉及一种猪圆环病毒2型(PCV2)抗原或抗体检测试纸条。

背景技术

猪圆环病毒(porcine circovirus，PCV)是目前发现的最小的动物病毒，病毒粒子直径约17nm，为共价闭合，环状，单股DNA病毒，PCV具有两种基因型：PCV1和PCV2。PCV1无致病性，但广泛存在于猪体内和猪源传代细胞系，PCV2对猪有致病性，主要引起仔猪断

奶后多***衰竭综合征(post-weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)。PMWS为一种新的传染病，1991年首次在加拿大发现，主要发生于5-12周龄断奶仔猪，表现为进行性消瘦、呼吸困难、皮肤苍白、腹泻、黄疸。随后，美国，英国，德国，法国，爱尔兰，捷克，西班牙，中国台湾，荷兰，瑞士，阿根廷，墨西哥，日本，丹麦，意大利，韩国，匈牙利，泰国等国相继报道了该病，流行病学调查表明，该病在中国也广泛流行，并造成相当严重的经济损失。PCV2除了引起PMWS外，还可引起育肥猪皮炎与肾病综合征(porcinedermatitis and nephropathy syndrome，PDNS)，并与怀孕母猪的繁殖障碍，新生仔猪的先天性阵颤，新生仔猪腹泻和增生性坏死性肺炎关系密切。根据PMWS的流行病学，临床症状和剖检病理变化可对PCV2感染作出初步诊断，但确诊仍需要以实验室诊断技术检测PCV2抗原及其抗体。对猪群PCV2抗体水平，特别是母源抗体水平，进行监测，可确实了解猪体免疫水平，把握疫病最适免疫时机，确保获得良好免疫效果，有效预防和控制PCV2的侵袭和传播，避免因此而引起的重大损害。

目前，国内外采用的PCV2检测技术主要有：病毒分离培养，间接免疫荧光(IFA)，免疫酶单层试验(IMPA)，原位杂交(ISH)，聚合酶链式反应(PCR)等等。上述技术和方法虽然可以检测PCV2及其抗体水平，在实践中也取得一定的效果，但均存在试验操作复杂，耗时长，需要特定的专业技能和仪器设备等，常限于实验室内进行，很难在基层普及和推广。因此，研制开发适用于养殖基层的快捷、简便的PCV2及其抗体水平检测器具，对猪群PCV2免疫水平进行实时监测，建立科学的、灵活的猪群疫病免疫程序，对疫病的预防和控制有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪圆环病毒2型(PCV2)抗原或抗体检测试纸条。

它具有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层，金标纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，在纤维素膜层上印制有对照印迹“|”和检测印迹“|”，其排列组合为“||”。不吸水的支撑层薄片层用硬质塑胶片条，或不吸水的硬纸条，纤维层用玻璃棉，吸水材料层用吸水纸，纤维素膜层用硝酸纤维素膜，金标纤维层用吸附金标蛋白的玻璃棉，在玻璃棉与金标玻璃棉及吸水纸层上覆盖有保护膜，在玻璃棉与金标玻璃棉交界处对应的保护膜偏向玻璃棉一侧0.5cm处印制样品标记线。

本发明有益的积极效果是：PCV2抗原或抗体检测试纸条操作简单，人人都可操作，能较好满足不同层次人员的需要，如疫病监测、海关检疫、卫生防疫、集约化养殖到个体养殖等，易于大范围推广应用，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。PCV2抗原或抗体检测试纸条具有下列各项优点：

(1)特异性强，敏感性高。PCV2抗原或抗体检测试纸条以单克隆抗体或重组表达的dCap蛋白为基础制备而成；单克隆抗体为高亲和力的抗PCV2 dCap特异性均质抗体，特异识别PCV2 Cap衣壳蛋白，与PCV1无交叉反应；重组dCap蛋白为非全病毒抗原、安全性好，不含无关杂蛋白，具有良好抗原性，因此具有很高的特异性和敏感性。

(2)操作简便快速。使用PCV2抗原或抗体检测试纸条检测PCV2抗原或抗体时，无需另配其它试剂，在2-10分钟内即可判定检测结果。

(3)显示检测结果形象、直观准确。PCV2抗原或抗体检测试纸条以红棕色“|”和“||”作为检测的阴性和阳性标记，即在纤维素膜上显示一条棕红色“|”印迹表示在被检测样品液中PCV2病毒或抗体为阴性，两条棕红色“||”印迹表示在被检样品中PCV2病毒或抗体为阳性，结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。

(4)成本低，投资少。PCV2抗原或抗体检测试纸条可在检测现场完成操作，检测一步到位，成本低廉，投资少，见效快。

附图说明

图1是PCV2抗原及抗体检测试纸条侧视结构示意图；

图2是PCV2抗原及抗体检测试纸条俯视结构示意图，图中：支撑层1，样品端纤维层2，.金标玻璃棉3，.纤维素膜层4，手柄端吸水材料层5，对照印迹6，检测印迹7，样品端保护膜8，标记线9，手柄端保护膜10。

图3是重组PCV2 dCap蛋白的抗原活性鉴定结果，图中：

A为重组蛋白的SDS-PAGE分析，B为重组蛋白的Western Blot鉴定，1为大肠杆菌BL21，2为含空载体pGEX-4T-1的诱导菌体，3为含重组质粒未诱导菌体，4.为含重组质粒诱导4h菌体，5.为纯化的重组GST-dCap融合蛋白，6为经凝血酶切割后的重组dCap蛋白，M.为蛋白质Marker。

图4是抗PCV2 dCap单克隆抗体特异性鉴定结果，图中：

1为抗PCV2 dCap单克隆抗体mAb1特异性识别GST-dCap融合蛋白，2为抗PCV2 dCap单克隆抗体mAb2特异性识别GST-dCap融合蛋白，3为mAb1特异性识别PCV2病毒天然Cap蛋白，4为mAb2特异性识别PCV2病毒天然Cap蛋白，5为mAb1不识别PCV1重组Cap蛋白，6为mAb2不识别PCV1重组Cap蛋白。

具体实施方式

PCV2抗原或抗体检测试纸条具有支撑层1，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层2，金标纤维层3，纤维素膜层4，手柄端为吸水材料层5，在纤维素膜层4上印制有对照印迹“|”7和检测印迹“|”6，其排列组合为“||”。不吸水的支撑层薄片层用硬质塑胶片条，或不吸水的硬纸条，纤维层用玻璃棉，吸水材料层用吸水纸，纤维素膜层用硝酸纤维素膜，金标纤维层用吸附金标蛋白的玻璃棉，在玻璃棉与金标玻璃棉及吸水纸层上覆盖有保护膜，在玻璃棉与金标玻璃棉交界处对应的保护膜偏向玻璃棉一侧0.5cm处印制样品标记线。

PCV2抗原检测试纸条的金标蛋白为胶体金标记抗PCV2去核定位信号肽衣壳蛋白(dCap)单克隆抗体mAb1，在纤维素膜层上的对照印迹(7)为山羊抗小鼠IgG多克隆抗体，检测印迹(6)为抗PCV2 dCap蛋白单克隆抗体mAb2；抗体检测试纸条的金标蛋白为胶体金标记重组PCV2 dCap蛋白，在纤维素膜层上的对照印迹(7)为抗PCV2 dCap蛋白单克隆抗体mAb1，检测印迹(6)为山羊抗猪IgG多克隆抗体。重组PCV2 dCap蛋白为利用原核高效表达***表达和纯化的基因工程重组蛋白，可与PCV2阳性血清特异结合。抗PCV2 dCap蛋白单克隆抗体特异识别PCV2 Cap蛋白，与猪圆环病毒1型(PCV1)Cap蛋白无交叉反应，可有效区分PCV1和PCV2病毒。

(1)重组PCV2 dCap蛋白的制备

用基因工程技术高效表达PCV2去核定位信号肽衣壳蛋白(dCap)，制备重组PCV2dCap蛋白。根据PCV2基因序列设计Cap特异性引物(上游引物：5’-GC GGATCCAATGGCATCT  TCAACAC-3’；下游引物：5’-CCG CTCGAGTTAAGGGTTAAGTGGG-3’)，以PCR从猪PCV2基因组中扩增不含核定位信号的Cap基因，将其亚克隆于原核高效表达载体pGEX-4T-1，在N端与GST融合，构建pGEX-dORF2重组表达载体。经0.1mM IPTG诱导表达后，用超声波裂解细菌，利用GST亲和层析柱纯化表达的融合蛋白(GST-dCap)，再以凝血酶酶解去除GST标签，获得重组PCV2 dCap蛋白(图3)，分别测定GST-dCap融合蛋白和重组dCap蛋白抗原活性和蛋白浓度(10-20mg/ml)，用于制备抗PCV2 dCap单克隆抗体或PCV2抗体检测试纸条的金标玻璃棉。

(2)抗PCV2 dCap单克隆抗体的制备

将重组PCV2 dCap蛋白与免疫佐剂等量混合，充分乳化，以50-100μg/只免疫BALB/c系小鼠3次，每次间隔15-30天；第3次加强免疫后3-4天，将免疫小鼠眼球放血，麻醉致死，于75％酒精浸泡5-10min，无菌取其脾细胞，剪碎并经100目尼龙网过滤，1000r/min离心10min，收集脾细胞；将1×10⁸的脾细胞与2-5×10⁷的SP2/0骨髓瘤细胞混合，1000r/min离心10min，弃上清，在37℃的水浴中将0.7-1ml的40％-50％PEG4000(pH8.5-9.0)缓缓加入细胞，温育1min后，缓慢加入无血清1640培养基15ml，以终止PEG的作用，37℃水浴5-10min，1000r/min离心10min，弃上清，将细胞重悬于HAT选择培养基中，并加入96孔培养板(100μl-200μl/孔)，置37℃5％CO₂培养箱中培养。培养7-10天后，以5-10μg/ml的PCV2 dCap重组蛋白包被96孔酶标板，以ELISA检测杂交瘤的培养上清，挑取强阳性细胞克隆(OD₄₉₂＝0.8以上)，经连续3次的有限稀释法克隆化，制备抗PCV2 dCap单克隆抗体，所建立杂交瘤细胞株的染色体数为92-98，其分泌的单克隆抗体特异识别重组PCV2 dCap蛋白和纯化的PCV2病毒的天然衣壳蛋白(Cap)，与其它蛋白，特别是PCV1 Cap蛋白不发生交叉反应(图4)，亲和力常数达10^-9，轻链亚型为κ，重链亚型为IgG1，所制备的抗PCV2 dCap单克隆抗体，用于制备PCV2抗原检测试纸条的金标玻璃棉或抗体检测试纸条对照印迹的印制。

(3)山羊抗小鼠或猪IgG多克隆抗体的制备

采取小鼠或猪血液，分离血清，以饱和硫酸铵制备小鼠或猪血清IgG蛋白，取1份小鼠或猪血清加2份生理盐水混匀，加等体积饱和硫酸铵混匀，置4℃冰箱3h，4℃4000r/min离心15min，弃上清；以适量生理盐水溶解沉淀，加饱和硫酸铵至终浓度33％，置4℃冰箱3h，4℃4000r/min离心15min，弃上清；以少量生理盐水溶解沉淀，置4℃冰箱内用生理盐水过液透析，换液2～3次，4℃4000r/min离心15min，收集上清，测定蛋白浓度(10-20mg/ml)。以50～100μg/kg体重的小鼠或猪IgG蛋白加免疫佐剂经皮下和肌肉注射免疫健康山羊3～4次，末次免疫10天后，静脉采血，以ELISA测定其血清抗体效价在1∶2000以上时，心脏采血或颈动脉放血，收集高免血清；以饱和硫酸铵法纯化山羊抗小鼠或猪IgG抗体，不重述，再经DEAE纤维素离子交换层析纯化。所制备的山羊抗小鼠IgG多克隆抗体用于PCV2抗原检测试纸条对照印迹的印制，山羊抗猪IgG多克隆抗体用于PCV2抗体检测试纸条检测印迹的印制。

(4)金标玻璃棉的制备

以柠檬酸钠还原法制备金溶胶，即在沸腾的50-100ml 0.01-0.05％氯金酸水溶液中加入2-4ml的0.5-2％柠檬酸三钠溶液，获得直径15nm左右的胶体金。以0.1mol/L K₂CO₃调胶体金pH至8.5-9.5，以1∶1000-1∶1300的标记比将待标记的抗PCV2 dCap单克隆抗体或PCV2 dCap重组蛋白加入pH8.5-9.5金溶胶中，标记10min后，加20％PEG10000至终浓度0.05％，4℃1500-3000r/min离心20min，除去未结合的金颗粒，4℃12000r/min离心1h，弃上清，获初步纯化金标蛋白混合物后，用丙烯葡聚糖S-400柱层析，分离纯化金标蛋白，获得胶体金标记的抗PCV2 dCap单克隆抗体或重组PCV2 dCap蛋白。将1∶100-1∶1500稀释的胶体金标记蛋白吸附于精制玻璃棉中，4℃低温真空干燥，制备金标玻璃棉。

(5)PCV2抗原或抗体检测试纸条的实施结构

PCV2抗原或抗体检测试纸条实施结构参见图1，图2，图中，1为支撑层用不吸水薄片条，实施中可采用塑胶薄片条或采用不吸水的硬质纸片材，反应试剂载体吸附层由2，3，4，5，组合而成，从样品端2开始，到手柄端5依次粘贴在支撑层1上面；其中2为样品端纤维层，实施中可使用玻璃纤维棉简称玻璃棉，3为吸附金标蛋白的纤维层，可采用精制玻璃纤维棉，简称为金标玻璃棉，4为纤维素膜层，实施中可采用硝酸纤维素膜，5为手柄端吸水材料层，采用吸水纸，如滤纸或其它吸水纸均可，试纸条总长8cm，宽度0.4cm，6为用山羊抗小鼠IgG多克隆抗体或抗PCV2 dCap单克隆抗体mAb1在硝酸纤维素膜上印制的对照印迹“|”，7为用抗PCV2 dCap单克隆抗体mAb2或山羊抗猪IgG多克隆抗体在硝酸纤维素膜上印制的检测印迹“|”，在纤维素膜层上的对照印迹和检测印迹组合排列为“||”。8为保护膜，覆盖在玻璃棉及金标玻璃棉的保护膜为8，在玻璃棉和金标玻璃棉交界处对应位置的白色保护膜上偏向玻璃棉一方0.5cm处的保护膜上印有一条标记线9，在标记线9右边印有箭头和Max字样，覆盖在吸水层滤纸上的保护膜为10，保护膜可用黄色或其它颜色，2，3，4，5各层彼此之间交界处纤维互相交叉渗透。

(6)PCV2抗原或抗体检测试纸条实施检测反应原理

PCV2抗原检测试纸条检测反应原理为：PCV2抗原检测试纸条样品端***待检测样品溶液后，待检溶液通过虹吸带动待检抗原与金标蛋白一起向硝酸纤维素膜扩散，并最终渗透到滤纸层中，在扩散过程中待检抗原与金标蛋白相结合，形成金标蛋白-抗原复合物，该复合物可与检测印迹中的抗PCV2 dCap单克隆抗体mAb2相结合，生成红棕色“|”标记，部分未与抗体结合的金标蛋白不能与检测印迹结合而继续扩散，在纤维膜上与对照印迹中的山羊抗小鼠IgG多克隆抗体结合，生成红棕色标记“|”，两种标记组合叠加，形成两条红棕色阳性标记“||”，反之只有金标蛋白与对照印迹相结合，没有金标蛋白-抗原复合物形成，不能与检测印迹结合，则生成阴性标记“|”。如果纤维素膜上没有红棕色标记显示，则表明试纸条已失效。

PCV2抗体检测试纸条检测反应原理为：PCV2抗体检测试纸条样品端***待检测样品溶液后，待检溶液通过虹吸带动待检抗体与金标蛋白一起向硝酸纤维素膜扩散，并最终渗透到滤纸层中，在扩散过程中待检抗体与金标蛋白相结合，形成金标蛋白-抗体复合物，该复合物可与检测印迹中的山羊抗猪IgG多克隆抗体相结合，生成红棕色“|”标记，部分未与抗体结合的金标蛋白不能与检测印迹结合而继续扩散，在纤维膜上与对照印迹中的抗PCV2 Cap单克隆抗体mAb1结合，生成红棕色标记“|”，两种标记组合叠加，形成两条红棕色阳性标记“||”，反之只有金标蛋白与对照印迹相结合，没有金标蛋白抗体复合物形成，不能与检测印迹结合，则生成阴性标记“|”。如果纤维素膜上没有红棕色标记显示，则表明试纸条已失效。

(7)PCV2抗原或抗体检测试纸条检测实例操作方法

检测样品溶液的制备：采集待检猪***，脾，肺或血清，以样品稀释液或生理盐水1∶5，1∶10，1∶20倍比稀释，制备梯度稀释样品溶液。

PCV2抗原或抗体检测试纸条检测实例操作方法：将PCV2抗原或抗体检测试纸条样品端分别***梯度稀释待检测样品液中，***深度不超过标记线9，约10秒后取出检测试纸条，水平放置约2分钟，观察结果，在纤维素膜上显现两条红棕色标记“||”表示检测结果呈阳性，显现一条标记“|”为阴性，检测试纸条呈阳性的样品最大稀释度为待检样品的抗原或抗体滴度，如果检测试纸条在待检样品各个稀释度均呈阴性，则表明待检样品中不含PCV2病毒或抗体，如果检测试纸条没有标记显示，则表明试纸条失效。

实施例1 PCV2抗原检测试纸条

参见图1，图2，按实施例中(1)方法步骤制备重组PCV2 dCap蛋白，按实施例中(2)方法步骤制备抗PCV2 dCap单克隆抗体mAb1和mAb2，按实施例中(3)方法步骤制备山羊抗小鼠IgG多克隆抗体，按实施例中(4)方法步骤制备金标玻璃棉，最后，将各种组成成份装配成PCV2抗原检测试纸条，图中，1为支撑层，用塑胶薄片条制成，2为样品端的纤维层，用玻璃棉制成，3为吸附金标抗PCV2 dCap单克隆抗体的纤维层，即吸附有金标蛋白的玻璃棉，简称金标抗体棉，4为纤维素膜层，本实施例采用硝酸纤维素膜，5为吸水材料层即手柄端用滤纸制成，将编号2，3，4，5各层从左至右粘贴在塑胶薄片条1上，在硝酸纤维素膜层4上，6为山羊抗小鼠IgG多克隆抗体在硝酸纤维素膜上印制的对照印迹“|”，7为用抗PCV2dCap单克隆抗体mAb2在硝酸纤维素膜上印制的检测印迹“|”，两个印迹并排形成组合印迹“||”。8为白色保护膜，覆盖在玻璃棉2和吸附有BT金标玻璃棉上，在2和3交界处对应保护膜8-1位置上偏向于玻璃棉2一方0.5cm处印有标记线9，9的右端印有箭头及max字样，滤纸层5即吸水层(手柄端)上覆盖有黄色保护膜10。

使用PCV2抗原检测试纸条检测猪PCV2感染时，采集待检猪肉样，充分研磨后，以生理盐水1∶10或1∶20稀释，制备待检样品溶液，将PCV2抗原检测试纸条样品端***待检测样品液中，***深度不超过标记线9，约10秒后取出检测试纸条，水平放置约2分钟，观察结果，在纤维素膜上显现两条红棕色标记“||”的样品为PCV2阳性，表明待检样品感染PCV2，显现一条标记“|”为PCV2阴性，则表明待检样品没有PCV2感染，如果检测试纸条没有标记显示，则表明试纸条失效。

实施例2 PCV2抗体检测试纸条

参见图1，图2，制备重组PCV2 dCap蛋白，抗PCV2 dCap单克隆抗体mAb1，与实施例一类同，不重述。按实施例中(3)方法步骤制备山羊抗猪IgG多克隆抗体，按实施例中(4)方法步骤制备金标玻璃棉，最后，将各种组成成份装配成PCV2抗体检测试纸条，图中，1，2，4，5，8，9，10标号同实施例三，不重述。3，6，7与实施例三有所不同。在本实施例中，3为吸附金标PCV2 dCap重组蛋白的玻璃棉，6为抗PCV2 dCap单克隆抗体mAb1对照印迹，7为山羊抗猪IgG多克隆抗体检测印迹。

使用PCV2抗体检测试纸条检测猪血清PCV2抗体水平时，采集待检猪血液，分离血清，以生理盐水1∶10，1∶20，1∶40倍比稀释，制备梯度稀释样品溶液，将PCV2抗体检测试纸条样品端分别***梯度稀释待检测样品液中，***深度不超过标记线9，约10秒后取出检测试纸条，水平放置约2分钟，观察结果，在纤维素膜上显现两条红棕色标记“||”的样品为PCV2抗体阳性，显现一条标记“|”为PCV2抗体阴性，PCV2阳性的样品最大稀释度即为待检血清样品的PCV2抗体滴度，如果检测试纸条在待检血清各个稀释度均呈阴性，则表明待检血清不含PCV2抗体，如果检测试纸条没有标记显示，则表明试纸条失效。

Claims (6)

1.一种猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：它具有支撑层(1)，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层(2)，金标纤维层(3)，纤维素膜层(4)，手柄端为吸水材料层(5)，在纤维素膜层(4)上印制有对照印迹“|”(7)和检测印迹“|”(6)，其排列组合为“| |”。

2.根据权利要求1所述一种猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：所说的不吸水的支撑层薄片层用硬质塑胶片条，或不吸水的硬纸条，纤维层用玻璃棉，吸水材料层用吸水纸，纤维素膜层用硝酸纤维素膜，金标纤维层用吸附金标蛋白的玻璃棉，在玻璃棉与金标玻璃棉及吸水纸层上覆盖有保护膜，在玻璃棉与金标玻璃棉交界处对应的保护膜偏向玻璃棉一侧0.5cm处印制样品标记线。

3.根据权利要求1或2所述的一种猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：所说的抗原检测试纸条的金标蛋白为胶体金标记抗猪圆环病毒2型去核定位信号肽衣壳蛋白单克隆抗体mAb1，在纤维素膜层上的对照印迹(7)为山羊抗小鼠IgG多克隆抗体，检测印迹(6)为抗猪圆环病毒2型去核定位信号肽衣壳蛋白单克隆抗体mAb2。

4.根据权利要求1或2所述的一种猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：所说的抗体检测试纸条的金标蛋白为胶体金标记重组猪圆环病毒2型去核定位信号肽衣壳蛋白，在纤维素膜层上的对照印迹(7)为抗猪圆环病毒2型去核定位信号肽衣壳蛋白单克隆抗体mAb1，检测印迹(6)为山羊抗猪IgG多克隆抗体。

5.根据权利要求3或4所述的一种猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：所说的重组猪圆环病毒2型去核定位信号肽衣壳蛋白为利用原核高效表达***表达和纯化的基因工程重组蛋白，与猪圆环病毒2型阳性血清特异结合。

6.根据权利要求3或4所述的一种猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：所说的抗猪圆环病毒2型去核定位信号肽衣壳蛋白单克隆抗体特异识别猪圆环病毒2型衣壳蛋白，与猪圆环病毒1型衣壳蛋白无交叉反应。

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