CN1569848A - 治疗缺血性心脏病的川芎内酯及其制备方法 - Google Patents

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CN1569848A CN 03146029 CN03146029A CN1569848A CN 1569848 A CN1569848 A CN 1569848A CN 03146029 CN03146029 CN 03146029 CN 03146029 A CN03146029 A CN 03146029A CN 1569848 A CN1569848 A CN 1569848A
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肖永庆
梁日欣
李文
李丽
张村
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Traditional Chinese Medicine Inst China Academy Of Traditional Chinese Medicin
Institute of Materia Medica of CAMS
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Traditional Chinese Medicine Inst China Academy Of Traditional Chinese Medicin
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Abstract

本发明是一种治疗缺血性心脏病的川芎内酯及其制备方法，由中药川芎饮片中提取出川芎总内酯，该总酯中川芎内酯A、B占70％，并有少量川芎内酯A、B二聚体。实验药理学证明川芎内酯A、B对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤具有非常显著的保护作用，并能显著提高小鼠耐缺氧能力，该二化合物及其相关化合物结构明确，可研制成用于治疗缺血性心脏病的二类或一类新药。

Description

治疗缺血性心脏病的川芎内酯及其制备方法
技术领域
本发明涉及由植物类中药饮片提取的药物，特别是一种治疗缺血性心脏病的川芎内酯及其制备方法。
背景技术
川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.的根茎)味辛性温，既能活血化瘀又可行气止痛，以川芎为主药的“冠心II号”，“速效救心丸”等，都是临床上治疗缺血性心脏病的有效成药。缺血性心脏病的基本病机是“虚气留滞，毒损心络”，而川芎具有辛香透络，活血化瘀之功，可以条达气血，俾气血条畅，毒邪无所依附而消散，则心络舒展自如。可见，川芎是通过祛邪以扶正，同时，又具有止痛之效。因此，为治疗心血瘀阻，毒损心络胸痹之良药。
但是，目前对川芎的临床应用主要依靠饮片煎煮制取，由于饮片质量不易控制，作用不稳定，用量大而作用小。因此，近年来中药界已开始研究川芎对心血管***的药理作用，以提高其药效。川芎对心血管***的药理作用研究，在阴健主编的《中药现代研究与临床应用I》pp108-118的综述中表明，川芎具有扩张冠脉，增加冠脉血流量，降低心肌氧耗，并对心肌缺血性损伤有保护作用，但其有效成分的研究几乎全集中于川芎嗪(四甲基吡嗪)，许多文献甚至以合成四甲基吡嗪的作用来阐明川芎药理活性。我们的研究表明，川芎中四甲基吡嗪含量甚微，有些产地的川芎生药中甚至未能检出四甲基吡嗪，因此，川芎对心血管***的药理作用物质基础是否归于四甲基吡嗪，值得商榷。
发明内容
本发明的目的在于从中药川芎中分离精制内酯类化合物，用于治疗缺血性心脏病。其创新点在于：川芎内酯为结构确定的化合物，比川芎饮片易于质量控制而作用稳定，而且用量小作用强，可开发成二类乃至一类新药而具有较好的应用前景。
本发明治疗缺血性心脏病的川芎内酯，是由川芎饮片提取的川芎总内酯包含的，其中川芎内酯A与川芎内酯B分别占总内酯成分重量的50％±10％和20％±5％，总内酯中还有少量二聚体，该二聚体共有3种，内酯A、B及二聚体的分子结构式如下：
Figure A0314602900041
川芎内酯A                           川芎内酯B
Figure A0314602900051
二聚体1                                     二聚体2                       二聚体3
利用1HNMR，13CNMR及EIMS法鉴定了川芎内酯的结构，其光谱数据如下：
川芎内酯A为化合物4，5-二氢-3-丁叉基苯肽(4，5-dihydro-3-butylidene-phthalide)，系浅黄色油状物。EIMS m/z(％)：190(M+，72)，161(100)，134(28)，133(26)，106(50)，105(60)，78(50)，77(50)，55(90).分子式C12H14O2。分子量：190。1HNMR(CDCl3)δ：0.91(3H，t，J＝7.5，H-11)，1.46(2H，Hexa，J＝7.5，H-10)，2.33(2H，q，J＝7.5，H-9)，2.44(2H，m，H-5)，2.57(2H，t，J＝7.2，H-4)，5.19(1H，t，J＝7.5，H-8)，5.97(1H，dt，J＝10.0，5.0，H-6)，6.23(1H，dt，J＝10.0，2.0，H-7)。13CNMR(CDCl3)δ：13.7(q，C-11)，18.4(t，C-10)，22.3(t，C-9，5)，28.0(t，C-4)，112.8(d，C-8)，116.9(d，C-7)，123.9(s，C-7a)，129.9(d，C-6)，147.0(s，C-3a)，148.5(s，C-3)，167.5(s，C-1)；
川芎内酯B为化合物4，5-二氢-3-丁基苯肽(4，5-dihydro-3-butyl-phthalide)，系浅黄色油状物。EIMS m/z(％)：192(M+，25)，163(5)，135(10)，107(100)，79(40)，77(35)，分子式C12H16O2，分子量：192。1HNMR(CDCl3)δ：0.87(3H，t，J＝7.5，H-11)，1.36(4H，m，H-9，10)，1.50(1H，m，H-8a)，1.85(1H，m，H-8b)，2.43(2H，m，H-4)，2.47(2H，m，H-5)，4.90(1H，dd，J＝8.0，3.5，H-3)，5.88(1H，dt，J＝9.5，4.5，H-6)，6.16(1H，dt，J＝9.5，2.5，H-7)。13CNMR(CDCl3)δ：13.8(q，C-11)，20.7(t，C-10)，22.3(t，C-9)，22.4(t，C-8)，26.7(t，C-5)，31.9(t，C-4)，82.5(d，C-3)，116.8(d，C-7)，124.4(s，C-7a)，128.3(d，C-6)，161.4(s，C-3a)，171.2(s，C-1)。
由川芎总内酯分离出川芎内酯A、B，即该川芎内酯是指川芎内酯A或川芎内酯B。
以川芎内酯A、B为原料，可人工合成川芎内酯A、B二聚体，该二聚体为结晶性化合物，它具有与川芎内酯A、B相同的不饱和五元内酯环及环外丁(烯)基活性基团。
用于上述治疗缺血性心脏病的川芎内酯的制备方法是：取川芎饮片以乙醇渗漉，二者重量比为1∶4，渗漉液减压回收乙醇至无乙醇味，加入与残物等体积的水，充分搅拌后静置分层，取上层油脂层以石油醚溶解，用含水甲醇萃取，甲醇萃取物行硅胶柱层析，以石油醚∶乙酸乙酯(20∶1)除油脂，再用石油醚∶乙酸乙酯(8∶1)洗出川芎总内酯。川芎总内酯再行硅胶及ODS层析分离得到川芎内酯A、B及其二聚体化合物。
药理实验研究结果表明：
1、川芎内酯A，B可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率，持续时间缩短；显著缩小心肌梗塞面积，血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低。表明川芎内酯A，B对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
2、川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间，提示川芎内酯A，B可以提高小白鼠的耐缺氧能力。
3、川芎内酯A、B降低血小板聚集率，全血粘度及血浆粘度，表明川芎内酯A、B具有活血化瘀之功能。
4、川芎内酯A、B对正常开胸大鼠血压、心率、左心室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响，表明川芎内酯A、B对大鼠心脏功能没有负性肌力作用。
以上结果为川芎内酯A，B治疗缺血性心脏病提供了实验依据。
附图说明
图1为川芎内酯A的1HNMR谱
图2为川芎内酯A的13CNMR谱
图3为川芎内酯B的1HNMR谱
图4为川芎内酯B的13CNMR谱
图5为二聚体1的1HNMR谱
图6为二聚体1的13CNMR谱
图7为二聚体2的1HNMR谱
图8为二聚体2的13CNMR谱
图9为二聚体3的1HNMR谱
图10为二聚体3的13CNMR谱
具体实施方式
提取分离工艺及药效学研究实施例：
实施例1  川芎总内酯的提取分离：
取川芎饮片粗粉10kg，以95％乙醇拌匀后，置渗漉筒内室温闷润24h，饮片与乙醇重量比为1∶4，开始用95％乙醇渗漉，渗漉速度1000ml/h，渗漉8h，静置16h后再行渗漉，共收集渗漉液5万ml(5000ml渗漏液/kg饮片)。渗漉液减压回收乙醇至无醇味(残物约1万ml)后，加入1万ml水，充分搅拌后静置2h，分取上层油脂状物，以石油醚：含水甲醇***萃取分离。取甲醇萃取液，减压回收甲醇。甲醇萃取物(油状物)置硅胶柱，以石油醚∶乙酸乙酯(20∶1)洗去油脂后，再以石油醚∶乙酸乙酯(8∶1)洗脱川芎总内酯。
实施例2  川芎内酯A、B的分离：
取总内酯置硅胶柱中，以石油醚∶乙酸乙酯(10∶1)进行层析分离。收集亮兰色荧光部分，用作川芎内酯A的精制。取随后之荧光吸收部分用作川芎内酯B的精制。
实施例3  川芎内酯A、B的精制：
取实施例2中收集的亮兰色荧光部分(油状物)进行ODS层析分离，以含水甲醇为洗脱剂，收集亮兰色荧光部分，减压回收甲醇，残物加入无水乙醇反复脱水，得浅黄色油状物川芎内酯A。
取实施例2中荧光吸收部分(油状物)按上述方法层析分离，收集TLC单一荧光吸收斑点组分，回收甲醇，无水乙醇脱水，得浅黄色油状物川芎内酯B。
实施例4  川芎内酯A、B的纯度检查：
方法：HPLC法；仪器：Waters 996型HPLC仪；固定相：Kromasil 100 C18 5μm；检测波长：240nm；流速0.9ml/min；流动相∶甲醇-水(70∶30)；柱温：18-19℃。川芎内酯A纯度为98.35％，川芎内酯B纯度为99.05％。
实例5  川芎内酯A，B对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
采用麻醉大鼠整体动物实验模型，开胸后结扎冠状动脉前降支，观察了川芎内酯A，B1g.kg-12g.kg-1对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。结果表明：川芎内酯A，B可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率，缩短其持续时间；显著缩小心肌梗塞面积，血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低。表明川芎内酯A，B对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
实例6  川芎内酯A、B对小鼠耐缺氧作用
采用常规小鼠耐缺氧实验方法，观察川芎内酯A、B灌胃给药对耐缺氧能力的影响。结果表明：川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间，提示川芎内酯A，B可以提高小白鼠的耐缺氧能力。
实例7  川芎内酯A.B对大鼠血液流变学的影响
Wistar大鼠，雄性，体重240-270g，戊巴比妥钠麻醉(30mg.kg-1iv)后，腹主动脉采血，枸橼酸钠抗凝，测定血小板聚集率(比浊法)，全血粘度及血浆粘度。结果表明：川芎内酯A、B降低血小板聚集率，全血粘度及血浆粘度，提示川芎内酯A、B具有活血化瘀之功能。
实例8  对麻醉大鼠心脏功能和血流动力学的影响
采用麻醉大鼠整体动物实验模型，观察了川芎内酯A、B对正常大鼠心脏功能和血流动力学的影响。结果表明：川芎内酯A、B对正常开胸大鼠血压、心率、左心室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响，提示川芎内酯A、B对大鼠心脏功能没有负性肌力作用。
从3个二聚体的结构分析，二聚化后其结构中仍然保留着不饱和五元内酯环之结构部分，从构效学的观点出发，预计二聚体应保持与聚合单元化合物相似的生物活性，而且二聚体均为结晶性化合物，其熔点分别为113~115℃，108~110℃，154~156℃，与聚合单元化合物相比要稳定得多，而且由于其可结晶性质而易于分离纯化，而且采用适当的化学方法可从单元化合物聚合反应而成。
Figure A0314602900071
另外，具有如下结构类型的化合物同样具有不饱和五元环内酯结构，也应具有与川芎内酯A、B相似的生理活性。
R1~R8可为氢，亦可为羟基及其它简单取代基团
由于川芎内酯A占总内酯成分的50％±，B占20％±，因此可以认定川芎总内酯也同样对心血管***有类似的生理活性。
同理，任何以川芎总内酯为主，配伍其它中药的复方制剂，并以川芎内酯A，B或相关化合物为质控标准的药物亦应有类似的药效作用。
附  药理研究实验报告书
一、川芎内酯A，B对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
1.材料
1.1 药物及试剂  川芎。硝基蓝四唑(N-BT)，军事医学科学院药材供应站批号，971120。乳酸脱氢酶测定试剂盒(比色法)，北京化工厂，批号，020205。磷酸肌酸激酶(CPK)测定试剂盒，北京化工厂，批号，020104。川芎内酯A，B：
1.2 动物  雄性Wistar大鼠，体重300-400克，由中国医学科学研究院实验动物中心提供，合格证号：医动字第01-3008。
1.3 仪器DH-140B型动物人工呼吸机(浙江医科大学实验仪器厂)，BIOPAC多导生理记录仪(美国)，ZS-3型半自动生化分析(北京中生生物工高科技公司)。
2.方法
2.1 实验模型：实验动物用戊巴比妥钠麻醉(30mg·kg-1ip)。气管切开，行人工呼吸。呼吸频率45-50次/分。暴露左颈总动脉，插动脉套管以监测血压。于胸骨左源3-4肋间，打开胸腔及心包膜，暴露心脏；在肺动脉圆锥与左心耳下缘之间，经左冠状动脉下浅层心肌穿一丝线，线的两端穿过一条直径2mm的聚乙烯塑料管，其末端用一小动脉夹固定。通过打开和夹紧动脉夹造成冠状动脉的阻断与再通。连续记录冠状动脉结扎前后及再通后Π导心电图。观察VT、VF的起始时间和持续时间。动脉血压和心电图均同步记录于多导生理记录仪。实验结束后，腹主动脉取血，分离血浆测LDH、CPK活性。然后，迅速摘取心脏，左心室称重后，将其切成1-2mm的心肌薄片，浸于N-BT溶液中染色30分钟。非缺血区的心肌组织为深蓝，缺血区心肌不染色。按称重法计算心肌梗死面积。
2.2 实验分组  大鼠48只。随机随机分为6组，每组8只。1)对照组等量生理盐水；2)川芎内酯A2g.kg-1组；3)川芎内酯A1g.kg-1组；4)  川芎内酯B2g.kg-1组；5)川芎内酯B：1g.kg-1组；上述各组于给药40分钟后，结扎左主冠状动脉10分钟，再灌注20分钟。6)，假手术组：左主冠状动脉下穿线，不结扎。
2.3统计分析：实验数据均用均数±标准差表示；心律失常的发生率，用X2检验；其他数据分析用单因素方差分析方法。
3.实验结果
3.1对缺血再灌注所致心律失常的影响  川芎内酯A，B2g.kg-1可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率，并缩短其持续时间。与单纯缺血再灌注组比较，有显著性差异。结果见表1。
3.2对心肌梗塞面积和血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶的影响  川芎内酯A，B2g.kg-1均能显著缩小心肌梗塞面积，血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低，与单纯缺血再灌注组相比，均有显著性差异。结果见表2。
       表1   对大鼠心肌缺血再灌注所致心律失常的影响    (x±s)  n＝8
            剂量             VT和VF发生率(％)            持续时间(VT+VF)(s)
组别
            (g·kg-1)    缺血期         再灌期          缺血期          再灌期
假手术组    -             -              -               -               -
单纯I/R组   -             75                             312.3±34.8     288.3±55.3
                                         87.5
川芎内酯A组 1             50             50              416.6±12.5     212.8±61.2
            2             37.5*          37.5*                           48.3±14.6**
                                                         25.8±1.26**
川芎内酯B组 1             75             75              360.4±12.8     229.43±85.9
            2             37.5*          37.5*                           43.7±21.5**
                                                         47.3±19.4**
*P＜0.05；  **P＜0.01，与单纯I/R组相比。
            表2  对大鼠心肌缺血再灌注所致梗塞面积和LDH、CPK活性的影响 X±SD  n＝8
                    剂量               LDH              CPK              梗塞面积
组  别
                    (g.kg-1)          (U.mL-1))       (10-3IU.L-1)   (％)
假手术组            -                  112±34           234±87         -
单纯I/R组           -                  211±16**        613±114**     29.18±4.09
川芎内酯A组         1                  216±22           568±136        35.18±3.17
                    2                  176±32*          286±64*        15.38±4.16*
川芎内酯B组         1                  286±55           611±61         35.38±14.76
                    2                  164±20*          268±46*        17.25±6.83*
*P＜0.05；与单纯I/R组相比；**P＜0.01；与假手术组相比。
二、川芎内酯A、B对小鼠耐常压缺氧作用
1.原理
缺氧对机体是一种劣性刺激，影响机体各种代谢，特别是影响机体的氧化功能，最终会导致机体的心脑等重要器官缺氧供能不足而死亡。
2.材料
2.1动物  小鼠，雄性，体重25-30g，由中国医学科学研究院实验动物中心提供，合格证号：医动字第01-3008。
2.2药品  川芎内酯A，B：钠石灰
3.方法
3.1实验分组及过程取32只小鼠，随机分成4组；给药组分别灌胃给予川芎内酯A，B1.1g.kg-1，2.2g.kg-1；对照组小鼠给等量生理盐水；给药后30分钟，将小鼠放入盛有5g钠石灰的广口瓶内，用凡士林涂抹瓶口盖严，防止漏气，并立即计时；以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧死亡的时间。与对照组比较，测其显著性。
3.2统计分析实验数据均用均数±标准差表示；其他数据分析用单因素方差分析方法。
4.实验结果川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间，与对照组相比，差别有显著性意义。结果见表3。
              表3  对小鼠耐常压缺氧作用的影响 X±SD    n＝8
组  别        动物数(n)    剂量(g.kg-1) 存活时间(min)
对照组        8            -             12.39±1.07
川芎内酯A组   8            1.1           12.76±4.57
川芎内酯A组   8            2.2           13.91±5.66*
川芎内酯B组   8            1.1           20.38±6.89
川芎内酯B组   8            2.2           26.11±7.56*
*与对照组比较，P＜0.05
三、川芎内酯A.B对大鼠血液流变学的影响
1.材料
1.1 动物：Wistar大鼠，雄性，体重240-270g，由中国医学科学研究院实验动物中心提供，合格证号：医动字第01-3008。
1.2 器材：DIC-PA 3210型血小板聚集仪(日本)
LBY-NW1自动清洗毛细管式血浆粘度计(北京普利生)
LBY-NA6自动清洗旋转式粘度计(北京普利生)
1.3药品及试剂：川芎内酯A、B
二磷酸腺苷ADP(5.3mg/ml)
枸橼酸钠抗凝液(3.8％)
2方法
2.1 实验分组及过程大鼠按体重随机分成5组，每组8只；给药组：分别灌胃给予川芎内酯A，B1.0g.kg-1，2.0g.kg-1，对照组：给等量生理盐水；1小时后，用戊巴比妥钠麻醉(30mg.kg-1)；固定后由腹主动脉采血，枸橼酸钠抗凝(1∶9)；部分血液1000rpm离心10分钟，制备富血小板血浆(PRP)；3000rpm再次离心15分钟，制备贫血小板血浆(PPP)。将PRP与PPP按一定比例调至所需浓度，用光密度法测定由ADP诱导的血小板聚集的百分率；部分血液3000rpm离心15分钟，测定血浆粘度；部分血液测定全血粘度。
2.2 统计分析  实验数据均用均数±标准差表示；其他数据分析用单因素方差分析方法。
3.实验结果
川芎内酯A、B降低血小板聚集率，与对照组相比，差别有显著性意义。结果见表4。
     表4  川芎内酯A对血小板聚集功能的影响     X±SD    (n＝8)
                                                        全血粘度             血浆粘度
                      剂量           血小板聚集
组别                                                    (mPa.s)               (mPa.s)
                      (g.kg-1)      (％)
                                                   100S-1        200-1
对照组                -              48.0±4.95    4.77±0.92     4.22±0.70  1.44±0.03
川芎内酯A组           1.0            41.0±12.98   3.80±0.25*    3.37±0.16* 1.24±0.05*
川芎内酯A组           2.0            28.9±5.67*   3.39±0.37*    3.15±0.31* 1.22±0.08*
川芎内酯B组           1.0            40.39±8.45   3.95±0.49*    3.51±0.30* 1.35±0.07*
川芎内酯B组           2.0            33.98±11.37* 3.92±0.40*    3.57±0.23* 1.33±0.12*
*P＜0.05与对照组比较
四、对麻醉大鼠心脏功能和血流动力学的影响
1.材料
1.1 药物：川芎
1.2 动物：雄性SD大鼠，体重300-400g，由中国医学科学研究院实验动物中心提供，合格证号：医动字第01-3008。
1.3 仪器：DH-140B型动物人工呼吸机，MP-100多导生理记录***(美国)，CBI血流仪(美国)。
2.方法
2.1 心功能的测定：实验动物用戊巴比妥钠麻醉(30mg.kg-1iv)。气管切开，行人工呼吸。呼吸频率45-50次/分。暴露左颈总动脉，插动脉套管以监测血压(BP)。于胸骨左缘3-4肋间，打开胸腔及心包膜，暴露心脏；用内充肝素生理盐水的聚乙烯塑料管从心尖部***左室腔内，接压力换能器，观察左室内压(LSVP)。分离升主动脉，嵌入直径适当的探头，通过CBI血流仪测主动脉流量。左室压最大上升及下降速率(±dp/dtmax)，用MP-100的专用程序通过对LVP的微分求得。BP、HR、LVP、主动脉流量和±dp/dtmax均同步记录于MP-100多导生理记录***。术后稳定30分钟后，首先记录上述指标的正常值；然后经十二指肠给药，观察给药后5份、10分、15分、30分、60分上述指标的变化。
2.2 实验分组：大鼠40只，随机分为5组，每组8只。1.正常对照组：等量生理盐水组；2.川芎内脂A2g.kg-1组；3.川芎内脂A1g.kg-1组；4.川芎内脂B2g.kg-1组；5.川芎内脂B 1g.kg-1组。
2.3统计分析：用统计软件SPSS10.0中重复测量方差分析方法进行数据处理，实验数据以均数±SD表示。
3.实验结果
3.1 对血压、心率和心电图的影响
十二指肠给予川芎内脂A、B1g.kg-1、2g.kg-1，在观察时间内对动脉收缩压和舒张压、心率没有影响。结果见表5、6。
3.2 对左室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量的影响
十二指肠给予川芎内脂A、B1g.kg-1、2g.kg-1，在观察时间内对左室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响。结果见表7。
表5  川芎内脂A、B对麻醉大鼠血压的影响               X±SD         n＝8
测定                                     川芎内酯A             川芎内酯B
        测定时间            空白组
指标                                    2.0g/kg                2.0g/kg
                            102.20±                                                       113.14±
        给药前                          100.97±20.25
                            19.01                              9.79
                            100.40±                                                       103.67±
          5分                           96.70±15.73
                            18.25                              10.00
收                          102.41±                                                       116.63±
          10分                          96.75±15.43
缩                          10.30                              20.71
      给
压                          96.50±                                                        115.70±
      药  15分                          96.37±13.40
(mmHg)                      14.90                              19.79
      后
                            95.56±                                                        118.20±
          30分                          91.35±16.35
                            16.24                              17.08
                            97.48±                                                        106.57±
          60分                          93.62±13.95
                            12.47                              20.68
                            66.23±
        给药前                          61.65±16.73           68.23±14.59
                            18.16
                            65.46±
          5分                           65.67±18.37           69.76±16.96
                            10.52
舒                          60.38±
          10分                          60.55±16.44           64.93±17.70
张                          14.91
      给
压                          66.50±
      药  15分                          58.55±17.87           70.80±16.00
(mmHg)                      19.43
      后
                            64.28±
          30分                          57.65±18.52           65.12±17.25
                            13.09
                            59.49±
          60分                          59.10±17.34           60.62±16.73
                            19.97
表6  川芎内脂A、B对麻醉大鼠心率(bpm)的影响( X±SD  n＝8)
                                   川芎内酯A                川芎内酯B
    测定时间             空白组
                                   2.0g/kg                  2.0g/kg
                    203.19±                                                                              239.06±
给药前                                 236.85±7.84
                    33.67                                         27.31
                    190.27±                        241.97±                                       240.00±
       5分
                    24.15              12.41                      23.76
                    192.48±                        219.81±                                       241.83±
       10分         24.74              23.73                      24.55
 给
       15分         209.23±                        222.50±                                       215.97±
 药
                    15.68              16.97                      23.23
 后
                    216.19±                        220.15±                                       261.25±
       30分         20.04              20.29                      18.63
       60分         207.14±                        221.55±                                       221.04±
                    25.93              15.72                      20.08
表7  川芎内脂A、B对麻醉大鼠LVSP、LVP±dp/dtmax及CO的影响 X±SD  n＝8
测定                                    川芎内酯A                 川芎内酯B
           测定时间       空白组
指标                                    2.0g/kg                   2.0g/kg
                          149.21±              160.10±
           给药前                                                 170.02±11.11
                          19.83         11.73
                          148.06±              162.03±
           5分                                                    164.17±5.96
                          8.68          18.91
           10             146.40±              147.78±
                                                                  171.81±7.02
LVSP       分             16.03         16.79
      给
(mmHg)     15             143.78±              145.17±
      药                                                          172.31±5.85
           分             14.37         19.31
      后
           30             137.48±
                                        136.20±5.47              171.09±15.63
           分             13.87
           60             138.31±
                                        136.20±8.14              159.53±23.16
           分             11.49
                          2551.9±              4138.8±
      给药前                                                       3903.3±194.2
                          248.6         425.1
                          2604.3±              3952.8±
           5分                                                     3940.7±281.7
                          264.2         365.8
           10             2621.3±              4100.9±
LVP+dp/dtmax                                                      3784.9±271.5
           分             236.8         386.2
          给
           15             2572.4±              4018.2±
(mmHg/s)药                                                         3715.3±309.9
           分             257.9         361.7
        后
           30             2365.2±              4135.6±
                                                                  3489.8±330.8
           分             213.8         349.8
           60             2502.7±              3846.8±
                                                                  3303.7±243.0
           分             202.8         261.5
LVP-dp/dtmax             1477.9±              2469.5±
      给药前                                                      2847.4±429.8
                          136.8         175.1
(mmHg/s)                 1673.2±                            2330.6±
           5分                                                 2522.4±330.6
                         183.9                292.8
           10            1603.3±                            2683.4±
                                                               2605.2±385.9
           分            159.2                238.9
       给
           15            1673.2±                            2346.7±
       药                                                      2415.3±155.9
           分            156.8                377.8
       后
           30            1604.4±                            2536.5±
                                                               2424.5±258.9
           分            200.4                250.8
           60            1464.0±                            2381.9±
                                                               2349.7±327.7
           分            187.8                255.9
                                              135.50±
      给药前             136.6±14.9                           142.58±17.39
                                              14.63
                                              129.35±
           5分           141.9±15.4                           159.81±19.01
                                              22.48
           10                                 134.23±
                         147.8±14.6                           153.57±26.32
 CO        分                                 19.14
       给
(ml/min)   15                                 131.67±
       药                156.0±19.4                           159.42±26.81
           分                                 17.47
       后
           30                                 141.90±
                        200.4±13.8                             172.75±35.96
           分                                 18.76
           60                                 131.06±
                       187.3±14.2                              137.47±31.93
           分                                 16.85
结论
药理实验研究结果表明：
1.川芎内酯A，B可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率，持续时间缩短；
显著缩小心肌梗塞面积，血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低。表明川芎内酯A，B对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
2.川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间，提示川芎内酯A，B可以提高小白鼠的耐缺氧能力。
3.川芎内酯A、B降低血小板聚集率，全血粘度及血浆粘度，表明川芎内酯A、B具有活血化瘀之功能。
4.川芎内酯A、B对正常开胸大鼠血压、心率、左心室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响，表明川芎内酯A、B对大鼠心脏功能没有负性肌力作用。
以上结果为川芎内酯A，B治疗缺血性心脏病提供了实验依据。

Claims (7)

1、一种治疗缺血性心脏病的川芎内酯，其特征在于：该川芎内酯是由川芎饮片提取的川芎总内酯所包含的，其中川芎内酯A与川芎内酯B分别占总内酯成分重量的50％±10％和20％±5％，总内酯中还有少量二聚体，该二聚体共有3种，上述成分的分子结构式如下：
Figure A031460290002C1
川芎内酯A                             川芎内酯B
二聚体1                                   二聚体2                     二聚体3
利用1HNMR，13CNMR及EIMS法鉴定了川芎内酯的结构，其光谱数据如下：
川芎内酯A为化合物4，5-二氢-3-丁叉基苯肽(4，5-dihydro-3-butylidene-phthalide)，系浅黄色油状物。EIMS m/z(％)：190(M+，72)，161(100)，134(28)，133(26)，106(50)，105(60)，78(50)，77(50)，55(90).分子式C12H14O2。分子量：190。1HNMR(CDCl3)δ：0.91(3H，t，J＝7.5，H-11)，1.46(2H，Hexa，J＝7.5，H-10)，2.33(2H，q，J＝7.5，H-9)，2.44(2H，m，H-5)，2.57(2H，t，J＝7.2，H-4)，5.19(1H，t，J＝7.5，H-8)，5.97(1H，dt，J＝10.0，5.0，H-6)，6.23(1H，dt，J＝10.0，2.0，H-7)。13CNMR(CDCl3)δ：13.7(q，C-11)，18.4(t，C-10)，22.3(t，C-9，5)，28.0(t，C-4)，112.8(d，C-8)，116.9(d，C-7)，123.9(s，C-7a)，129.9(d，C-6)，147.0(s，C-3a)，148.5(s，C-3)，167.5(s，C-1)；
川芎内酯B为化合物4，5-二氢-3-丁基苯肽(4，5-dihydro-3-butyl-phthalide)，系浅黄色油状物。EIMS m/z(％)：192(M+，25)，163(5)，135(10)，107(100)，79(40)，77(35)，分子式C12H16O2，分子量：192。1HNMR(CDCl3)δ：0.87(3H，t，J＝7.5，H-11)，1.36(4H，m，H-9，10)，1.50(1H，m，H-8a)，1.85(1H，m，H-8b)，2.43(2H，m，H-4)，2.47(2H，m，H-5)，4.90(1H，dd，J＝8.0，3.5，H-3)，5.88(1H，dt，J＝9.5，4.5，H-6)，6.16(1H，dt，J＝9.5，2.5，H-7)。13CNMR(CDCl3)δ：13.8(q，C-11)，20.7(t，C-10)，22.3(t，C-9)，22.4(t，C-8)，26.7(t，C-5)，31.9(t，C-4)，82.5(d，C-3)，116.8(d，C-7)，124.4(s，C-7a)，128.3(d，C-6)，161.4(s，C-3a)，171.2(s，C-1)。
2、根据权利要求1所述的治疗缺血性心脏病的川芎内酯，其特征在于：该川芎内酯是指川芎内酯A。
3、根据权利要求1所述的治疗缺血性心脏病的川芎内酯，其特征在于：该川芎内酯是指川芎内酯B。
4、根据权利要求1或2所述的治疗缺血性心脏病的川芎内酯，其特征在于：该川芎内酯是由川芎内酯A、B合成的川芎内酯A、B二聚体，该二聚体为结晶性化合物，它具有与川芎内酯A、B相同的不饱和五元内酯环及环外丁(烯)基活性基团。
5、用于权利要求1所述的川芎内酯的制备方法，其特征在于：取川芎饮片以乙醇渗漉，二者重量比为1∶4，渗漉液减压回收乙醇至无乙醇味，加入与残物等体积的水，充分搅拌后静置分层，取上层油脂层以石油醚溶解，用含水甲醇萃取，甲醇萃取物行硅胶柱层析，以石油醚∶乙酸乙酯(20∶1)除油脂，再用石油醚∶乙酸乙酯(8∶1)洗出川芎总内酯。
6、用于权利要求5所述的川芎内酯的制备方法，其特征在于：取总内酯置硅胶柱中，以石油醚∶乙酸乙酯(10∶1)进行层析分离。收集亮兰色荧光部分，用作川芎内酯A的精制；取随后之荧光吸收部分用作川芎内酯B的精制。
7、用于权利要求6所述的川芎内酯的制备方法，其特征在于：取收集的亮兰色荧光部分(油状物)进行ODS层析分离，以含水甲醇为洗脱剂，收集亮兰色荧光部分，减压回收甲醇，残物加入无水乙醇反复脱水，得浅黄色油状物川芎内酯A；取荧光吸收部分(油状物)按上述方法层析分离，收集TLC单一荧光吸收斑点组分，回收甲醇，无水乙醇脱水，得浅黄色油状物川芎内酯B。
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