CN1569848A - 治疗缺血性心脏病的川芎内酯及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种治疗缺血性心脏病的川芎内酯及其制备方法,由中药川芎饮片中提取出川芎总内酯,该总酯中川芎内酯A、B占70%,并有少量川芎内酯A、B二聚体。实验药理学证明川芎内酯A、B对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤具有非常显著的保护作用,并能显著提高小鼠耐缺氧能力,该二化合物及其相关化合物结构明确,可研制成用于治疗缺血性心脏病的二类或一类新药。
Description
技术领域
本发明涉及由植物类中药饮片提取的药物,特别是一种治疗缺血性心脏病的川芎内酯及其制备方法。
背景技术
川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.的根茎)味辛性温,既能活血化瘀又可行气止痛,以川芎为主药的“冠心II号”,“速效救心丸”等,都是临床上治疗缺血性心脏病的有效成药。缺血性心脏病的基本病机是“虚气留滞,毒损心络”,而川芎具有辛香透络,活血化瘀之功,可以条达气血,俾气血条畅,毒邪无所依附而消散,则心络舒展自如。可见,川芎是通过祛邪以扶正,同时,又具有止痛之效。因此,为治疗心血瘀阻,毒损心络胸痹之良药。
但是,目前对川芎的临床应用主要依靠饮片煎煮制取,由于饮片质量不易控制,作用不稳定,用量大而作用小。因此,近年来中药界已开始研究川芎对心血管***的药理作用,以提高其药效。川芎对心血管***的药理作用研究,在阴健主编的《中药现代研究与临床应用I》pp108-118的综述中表明,川芎具有扩张冠脉,增加冠脉血流量,降低心肌氧耗,并对心肌缺血性损伤有保护作用,但其有效成分的研究几乎全集中于川芎嗪(四甲基吡嗪),许多文献甚至以合成四甲基吡嗪的作用来阐明川芎药理活性。我们的研究表明,川芎中四甲基吡嗪含量甚微,有些产地的川芎生药中甚至未能检出四甲基吡嗪,因此,川芎对心血管***的药理作用物质基础是否归于四甲基吡嗪,值得商榷。
发明内容
本发明的目的在于从中药川芎中分离精制内酯类化合物,用于治疗缺血性心脏病。其创新点在于:川芎内酯为结构确定的化合物,比川芎饮片易于质量控制而作用稳定,而且用量小作用强,可开发成二类乃至一类新药而具有较好的应用前景。
本发明治疗缺血性心脏病的川芎内酯,是由川芎饮片提取的川芎总内酯包含的,其中川芎内酯A与川芎内酯B分别占总内酯成分重量的50%±10%和20%±5%,总内酯中还有少量二聚体,该二聚体共有3种,内酯A、B及二聚体的分子结构式如下:
川芎内酯A 川芎内酯B
二聚体1 二聚体2 二聚体3
利用1HNMR,13CNMR及EIMS法鉴定了川芎内酯的结构,其光谱数据如下:
川芎内酯A为化合物4,5-二氢-3-丁叉基苯肽(4,5-dihydro-3-butylidene-phthalide),系浅黄色油状物。EIMS m/z(%):190(M+,72),161(100),134(28),133(26),106(50),105(60),78(50),77(50),55(90).分子式C12H14O2。分子量:190。1HNMR(CDCl3)δ:0.91(3H,t,J=7.5,H-11),1.46(2H,Hexa,J=7.5,H-10),2.33(2H,q,J=7.5,H-9),2.44(2H,m,H-5),2.57(2H,t,J=7.2,H-4),5.19(1H,t,J=7.5,H-8),5.97(1H,dt,J=10.0,5.0,H-6),6.23(1H,dt,J=10.0,2.0,H-7)。13CNMR(CDCl3)δ:13.7(q,C-11),18.4(t,C-10),22.3(t,C-9,5),28.0(t,C-4),112.8(d,C-8),116.9(d,C-7),123.9(s,C-7a),129.9(d,C-6),147.0(s,C-3a),148.5(s,C-3),167.5(s,C-1);
川芎内酯B为化合物4,5-二氢-3-丁基苯肽(4,5-dihydro-3-butyl-phthalide),系浅黄色油状物。EIMS m/z(%):192(M+,25),163(5),135(10),107(100),79(40),77(35),分子式C12H16O2,分子量:192。1HNMR(CDCl3)δ:0.87(3H,t,J=7.5,H-11),1.36(4H,m,H-9,10),1.50(1H,m,H-8a),1.85(1H,m,H-8b),2.43(2H,m,H-4),2.47(2H,m,H-5),4.90(1H,dd,J=8.0,3.5,H-3),5.88(1H,dt,J=9.5,4.5,H-6),6.16(1H,dt,J=9.5,2.5,H-7)。13CNMR(CDCl3)δ:13.8(q,C-11),20.7(t,C-10),22.3(t,C-9),22.4(t,C-8),26.7(t,C-5),31.9(t,C-4),82.5(d,C-3),116.8(d,C-7),124.4(s,C-7a),128.3(d,C-6),161.4(s,C-3a),171.2(s,C-1)。
由川芎总内酯分离出川芎内酯A、B,即该川芎内酯是指川芎内酯A或川芎内酯B。
以川芎内酯A、B为原料,可人工合成川芎内酯A、B二聚体,该二聚体为结晶性化合物,它具有与川芎内酯A、B相同的不饱和五元内酯环及环外丁(烯)基活性基团。
用于上述治疗缺血性心脏病的川芎内酯的制备方法是:取川芎饮片以乙醇渗漉,二者重量比为1∶4,渗漉液减压回收乙醇至无乙醇味,加入与残物等体积的水,充分搅拌后静置分层,取上层油脂层以石油醚溶解,用含水甲醇萃取,甲醇萃取物行硅胶柱层析,以石油醚∶乙酸乙酯(20∶1)除油脂,再用石油醚∶乙酸乙酯(8∶1)洗出川芎总内酯。川芎总内酯再行硅胶及ODS层析分离得到川芎内酯A、B及其二聚体化合物。
药理实验研究结果表明:
1、川芎内酯A,B可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率,持续时间缩短;显著缩小心肌梗塞面积,血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低。表明川芎内酯A,B对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
2、川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间,提示川芎内酯A,B可以提高小白鼠的耐缺氧能力。
3、川芎内酯A、B降低血小板聚集率,全血粘度及血浆粘度,表明川芎内酯A、B具有活血化瘀之功能。
4、川芎内酯A、B对正常开胸大鼠血压、心率、左心室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响,表明川芎内酯A、B对大鼠心脏功能没有负性肌力作用。
以上结果为川芎内酯A,B治疗缺血性心脏病提供了实验依据。
附图说明
图1为川芎内酯A的1HNMR谱
图2为川芎内酯A的13CNMR谱
图3为川芎内酯B的1HNMR谱
图4为川芎内酯B的13CNMR谱
图5为二聚体1的1HNMR谱
图6为二聚体1的13CNMR谱
图7为二聚体2的1HNMR谱
图8为二聚体2的13CNMR谱
图9为二聚体3的1HNMR谱
图10为二聚体3的13CNMR谱
具体实施方式
提取分离工艺及药效学研究实施例:
实施例1 川芎总内酯的提取分离:
取川芎饮片粗粉10kg,以95%乙醇拌匀后,置渗漉筒内室温闷润24h,饮片与乙醇重量比为1∶4,开始用95%乙醇渗漉,渗漉速度1000ml/h,渗漉8h,静置16h后再行渗漉,共收集渗漉液5万ml(5000ml渗漏液/kg饮片)。渗漉液减压回收乙醇至无醇味(残物约1万ml)后,加入1万ml水,充分搅拌后静置2h,分取上层油脂状物,以石油醚:含水甲醇***萃取分离。取甲醇萃取液,减压回收甲醇。甲醇萃取物(油状物)置硅胶柱,以石油醚∶乙酸乙酯(20∶1)洗去油脂后,再以石油醚∶乙酸乙酯(8∶1)洗脱川芎总内酯。
实施例2 川芎内酯A、B的分离:
取总内酯置硅胶柱中,以石油醚∶乙酸乙酯(10∶1)进行层析分离。收集亮兰色荧光部分,用作川芎内酯A的精制。取随后之荧光吸收部分用作川芎内酯B的精制。
实施例3 川芎内酯A、B的精制:
取实施例2中收集的亮兰色荧光部分(油状物)进行ODS层析分离,以含水甲醇为洗脱剂,收集亮兰色荧光部分,减压回收甲醇,残物加入无水乙醇反复脱水,得浅黄色油状物川芎内酯A。
取实施例2中荧光吸收部分(油状物)按上述方法层析分离,收集TLC单一荧光吸收斑点组分,回收甲醇,无水乙醇脱水,得浅黄色油状物川芎内酯B。
实施例4 川芎内酯A、B的纯度检查:
方法:HPLC法;仪器:Waters 996型HPLC仪;固定相:Kromasil 100 C18 5μm;检测波长:240nm;流速0.9ml/min;流动相∶甲醇-水(70∶30);柱温:18-19℃。川芎内酯A纯度为98.35%,川芎内酯B纯度为99.05%。
实例5 川芎内酯A,B对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
采用麻醉大鼠整体动物实验模型,开胸后结扎冠状动脉前降支,观察了川芎内酯A,B1g.kg-12g.kg-1对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。结果表明:川芎内酯A,B可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率,缩短其持续时间;显著缩小心肌梗塞面积,血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低。表明川芎内酯A,B对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
实例6 川芎内酯A、B对小鼠耐缺氧作用
采用常规小鼠耐缺氧实验方法,观察川芎内酯A、B灌胃给药对耐缺氧能力的影响。结果表明:川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间,提示川芎内酯A,B可以提高小白鼠的耐缺氧能力。
实例7 川芎内酯A.B对大鼠血液流变学的影响
Wistar大鼠,雄性,体重240-270g,戊巴比妥钠麻醉(30mg.kg-1iv)后,腹主动脉采血,枸橼酸钠抗凝,测定血小板聚集率(比浊法),全血粘度及血浆粘度。结果表明:川芎内酯A、B降低血小板聚集率,全血粘度及血浆粘度,提示川芎内酯A、B具有活血化瘀之功能。
实例8 对麻醉大鼠心脏功能和血流动力学的影响
采用麻醉大鼠整体动物实验模型,观察了川芎内酯A、B对正常大鼠心脏功能和血流动力学的影响。结果表明:川芎内酯A、B对正常开胸大鼠血压、心率、左心室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响,提示川芎内酯A、B对大鼠心脏功能没有负性肌力作用。
从3个二聚体的结构分析,二聚化后其结构中仍然保留着不饱和五元内酯环之结构部分,从构效学的观点出发,预计二聚体应保持与聚合单元化合物相似的生物活性,而且二聚体均为结晶性化合物,其熔点分别为113~115℃,108~110℃,154~156℃,与聚合单元化合物相比要稳定得多,而且由于其可结晶性质而易于分离纯化,而且采用适当的化学方法可从单元化合物聚合反应而成。
另外,具有如下结构类型的化合物同样具有不饱和五元环内酯结构,也应具有与川芎内酯A、B相似的生理活性。
R1~R8可为氢,亦可为羟基及其它简单取代基团
由于川芎内酯A占总内酯成分的50%±,B占20%±,因此可以认定川芎总内酯也同样对心血管***有类似的生理活性。
同理,任何以川芎总内酯为主,配伍其它中药的复方制剂,并以川芎内酯A,B或相关化合物为质控标准的药物亦应有类似的药效作用。
附 药理研究实验报告书
一、川芎内酯A,B对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
1.材料
1.1 药物及试剂 川芎。硝基蓝四唑(N-BT),军事医学科学院药材供应站批号,971120。乳酸脱氢酶测定试剂盒(比色法),北京化工厂,批号,020205。磷酸肌酸激酶(CPK)测定试剂盒,北京化工厂,批号,020104。川芎内酯A,B:
1.2 动物 雄性Wistar大鼠,体重300-400克,由中国医学科学研究院实验动物中心提供,合格证号:医动字第01-3008。
1.3 仪器DH-140B型动物人工呼吸机(浙江医科大学实验仪器厂),BIOPAC多导生理记录仪(美国),ZS-3型半自动生化分析(北京中生生物工高科技公司)。
2.方法
2.1 实验模型:实验动物用戊巴比妥钠麻醉(30mg·kg-1ip)。气管切开,行人工呼吸。呼吸频率45-50次/分。暴露左颈总动脉,插动脉套管以监测血压。于胸骨左源3-4肋间,打开胸腔及心包膜,暴露心脏;在肺动脉圆锥与左心耳下缘之间,经左冠状动脉下浅层心肌穿一丝线,线的两端穿过一条直径2mm的聚乙烯塑料管,其末端用一小动脉夹固定。通过打开和夹紧动脉夹造成冠状动脉的阻断与再通。连续记录冠状动脉结扎前后及再通后Π导心电图。观察VT、VF的起始时间和持续时间。动脉血压和心电图均同步记录于多导生理记录仪。实验结束后,腹主动脉取血,分离血浆测LDH、CPK活性。然后,迅速摘取心脏,左心室称重后,将其切成1-2mm的心肌薄片,浸于N-BT溶液中染色30分钟。非缺血区的心肌组织为深蓝,缺血区心肌不染色。按称重法计算心肌梗死面积。
2.2 实验分组 大鼠48只。随机随机分为6组,每组8只。1)对照组等量生理盐水;2)川芎内酯A2g.kg-1组;3)川芎内酯A1g.kg-1组;4) 川芎内酯B2g.kg-1组;5)川芎内酯B:1g.kg-1组;上述各组于给药40分钟后,结扎左主冠状动脉10分钟,再灌注20分钟。6),假手术组:左主冠状动脉下穿线,不结扎。
2.3统计分析:实验数据均用均数±标准差表示;心律失常的发生率,用X2检验;其他数据分析用单因素方差分析方法。
3.实验结果
3.1对缺血再灌注所致心律失常的影响 川芎内酯A,B2g.kg-1可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率,并缩短其持续时间。与单纯缺血再灌注组比较,有显著性差异。结果见表1。
3.2对心肌梗塞面积和血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶的影响 川芎内酯A,B2g.kg-1均能显著缩小心肌梗塞面积,血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低,与单纯缺血再灌注组相比,均有显著性差异。结果见表2。
表1 对大鼠心肌缺血再灌注所致心律失常的影响 (x±s) n=8
剂量 VT和VF发生率(%) 持续时间(VT+VF)(s)
组别
(g·kg-1) 缺血期 再灌期 缺血期 再灌期
假手术组 - - - - -
单纯I/R组 - 75 312.3±34.8 288.3±55.3
87.5
川芎内酯A组 1 50 50 416.6±12.5 212.8±61.2
2 37.5* 37.5* 48.3±14.6**
25.8±1.26**
川芎内酯B组 1 75 75 360.4±12.8 229.43±85.9
2 37.5* 37.5* 43.7±21.5**
47.3±19.4**
*P<0.05; **P<0.01,与单纯I/R组相比。
表2 对大鼠心肌缺血再灌注所致梗塞面积和LDH、CPK活性的影响
X±SD n=8
剂量 LDH CPK 梗塞面积
组 别
(g.kg-1) (U.mL-1)) (10-3IU.L-1) (%)
假手术组 - 112±34 234±87 -
单纯I/R组 - 211±16** 613±114** 29.18±4.09
川芎内酯A组 1 216±22 568±136 35.18±3.17
2 176±32* 286±64* 15.38±4.16*
川芎内酯B组 1 286±55 611±61 35.38±14.76
2 164±20* 268±46* 17.25±6.83*
*P<0.05;与单纯I/R组相比;**P<0.01;与假手术组相比。
二、川芎内酯A、B对小鼠耐常压缺氧作用
1.原理
缺氧对机体是一种劣性刺激,影响机体各种代谢,特别是影响机体的氧化功能,最终会导致机体的心脑等重要器官缺氧供能不足而死亡。
2.材料
2.1动物 小鼠,雄性,体重25-30g,由中国医学科学研究院实验动物中心提供,合格证号:医动字第01-3008。
2.2药品 川芎内酯A,B:钠石灰
3.方法
3.1实验分组及过程取32只小鼠,随机分成4组;给药组分别灌胃给予川芎内酯A,B1.1g.kg-1,2.2g.kg-1;对照组小鼠给等量生理盐水;给药后30分钟,将小鼠放入盛有5g钠石灰的广口瓶内,用凡士林涂抹瓶口盖严,防止漏气,并立即计时;以呼吸停止为指标,观察小鼠因缺氧死亡的时间。与对照组比较,测其显著性。
3.2统计分析实验数据均用均数±标准差表示;其他数据分析用单因素方差分析方法。
4.实验结果川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间,与对照组相比,差别有显著性意义。结果见表3。
表3 对小鼠耐常压缺氧作用的影响
X±SD n=8
组 别 动物数(n) 剂量(g.kg-1) 存活时间(min)
对照组 8 - 12.39±1.07
川芎内酯A组 8 1.1 12.76±4.57
川芎内酯A组 8 2.2 13.91±5.66*
川芎内酯B组 8 1.1 20.38±6.89
川芎内酯B组 8 2.2 26.11±7.56*
*与对照组比较,P<0.05
三、川芎内酯A.B对大鼠血液流变学的影响
1.材料
1.1 动物:Wistar大鼠,雄性,体重240-270g,由中国医学科学研究院实验动物中心提供,合格证号:医动字第01-3008。
1.2 器材:DIC-PA 3210型血小板聚集仪(日本)
LBY-NW1自动清洗毛细管式血浆粘度计(北京普利生)
LBY-NA6自动清洗旋转式粘度计(北京普利生)
1.3药品及试剂:川芎内酯A、B
二磷酸腺苷ADP(5.3mg/ml)
枸橼酸钠抗凝液(3.8%)
2方法
2.1 实验分组及过程大鼠按体重随机分成5组,每组8只;给药组:分别灌胃给予川芎内酯A,B1.0g.kg-1,2.0g.kg-1,对照组:给等量生理盐水;1小时后,用戊巴比妥钠麻醉(30mg.kg-1);固定后由腹主动脉采血,枸橼酸钠抗凝(1∶9);部分血液1000rpm离心10分钟,制备富血小板血浆(PRP);3000rpm再次离心15分钟,制备贫血小板血浆(PPP)。将PRP与PPP按一定比例调至所需浓度,用光密度法测定由ADP诱导的血小板聚集的百分率;部分血液3000rpm离心15分钟,测定血浆粘度;部分血液测定全血粘度。
2.2 统计分析 实验数据均用均数±标准差表示;其他数据分析用单因素方差分析方法。
3.实验结果
川芎内酯A、B降低血小板聚集率,与对照组相比,差别有显著性意义。结果见表4。
表4 川芎内酯A对血小板聚集功能的影响
X±SD (n=8)
全血粘度 血浆粘度
剂量 血小板聚集
组别 (mPa.s) (mPa.s)
(g.kg-1) (%)
100S-1 200-1
对照组 - 48.0±4.95 4.77±0.92 4.22±0.70 1.44±0.03
川芎内酯A组 1.0 41.0±12.98 3.80±0.25* 3.37±0.16* 1.24±0.05*
川芎内酯A组 2.0 28.9±5.67* 3.39±0.37* 3.15±0.31* 1.22±0.08*
川芎内酯B组 1.0 40.39±8.45 3.95±0.49* 3.51±0.30* 1.35±0.07*
川芎内酯B组 2.0 33.98±11.37* 3.92±0.40* 3.57±0.23* 1.33±0.12*
*P<0.05与对照组比较
四、对麻醉大鼠心脏功能和血流动力学的影响
1.材料
1.1 药物:川芎
1.2 动物:雄性SD大鼠,体重300-400g,由中国医学科学研究院实验动物中心提供,合格证号:医动字第01-3008。
1.3 仪器:DH-140B型动物人工呼吸机,MP-100多导生理记录***(美国),CBI血流仪(美国)。
2.方法
2.1 心功能的测定:实验动物用戊巴比妥钠麻醉(30mg.kg-1iv)。气管切开,行人工呼吸。呼吸频率45-50次/分。暴露左颈总动脉,插动脉套管以监测血压(BP)。于胸骨左缘3-4肋间,打开胸腔及心包膜,暴露心脏;用内充肝素生理盐水的聚乙烯塑料管从心尖部***左室腔内,接压力换能器,观察左室内压(LSVP)。分离升主动脉,嵌入直径适当的探头,通过CBI血流仪测主动脉流量。左室压最大上升及下降速率(±dp/dtmax),用MP-100的专用程序通过对LVP的微分求得。BP、HR、LVP、主动脉流量和±dp/dtmax均同步记录于MP-100多导生理记录***。术后稳定30分钟后,首先记录上述指标的正常值;然后经十二指肠给药,观察给药后5份、10分、15分、30分、60分上述指标的变化。
2.2 实验分组:大鼠40只,随机分为5组,每组8只。1.正常对照组:等量生理盐水组;2.川芎内脂A2g.kg-1组;3.川芎内脂A1g.kg-1组;4.川芎内脂B2g.kg-1组;5.川芎内脂B 1g.kg-1组。
2.3统计分析:用统计软件SPSS10.0中重复测量方差分析方法进行数据处理,实验数据以均数±SD表示。
3.实验结果
3.1 对血压、心率和心电图的影响
十二指肠给予川芎内脂A、B1g.kg-1、2g.kg-1,在观察时间内对动脉收缩压和舒张压、心率没有影响。结果见表5、6。
3.2 对左室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量的影响
十二指肠给予川芎内脂A、B1g.kg-1、2g.kg-1,在观察时间内对左室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响。结果见表7。
表5 川芎内脂A、B对麻醉大鼠血压的影响
X±SD n=8
测定 川芎内酯A 川芎内酯B
测定时间 空白组
指标 2.0g/kg 2.0g/kg
102.20± 113.14±
给药前 100.97±20.25
19.01 9.79
100.40± 103.67±
5分 96.70±15.73
18.25 10.00
收 102.41± 116.63±
10分 96.75±15.43
缩 10.30 20.71
给
压 96.50± 115.70±
药 15分 96.37±13.40
(mmHg) 14.90 19.79
后
95.56± 118.20±
30分 91.35±16.35
16.24 17.08
97.48± 106.57±
60分 93.62±13.95
12.47 20.68
66.23±
给药前 61.65±16.73 68.23±14.59
18.16
65.46±
5分 65.67±18.37 69.76±16.96
10.52
舒 60.38±
10分 60.55±16.44 64.93±17.70
张 14.91
给
压 66.50±
药 15分 58.55±17.87 70.80±16.00
(mmHg) 19.43
后
64.28±
30分 57.65±18.52 65.12±17.25
13.09
59.49±
60分 59.10±17.34 60.62±16.73
19.97
表6 川芎内脂A、B对麻醉大鼠心率(bpm)的影响(
X±SD n=8)
川芎内酯A 川芎内酯B
测定时间 空白组
2.0g/kg 2.0g/kg
203.19± 239.06±
给药前 236.85±7.84
33.67 27.31
190.27± 241.97± 240.00±
5分
24.15 12.41 23.76
192.48± 219.81± 241.83±
10分 24.74 23.73 24.55
给
15分 209.23± 222.50± 215.97±
药
15.68 16.97 23.23
后
216.19± 220.15± 261.25±
30分 20.04 20.29 18.63
60分 207.14± 221.55± 221.04±
25.93 15.72 20.08
表7 川芎内脂A、B对麻醉大鼠LVSP、LVP±dp/dtmax及CO的影响
X±SD n=8
测定 川芎内酯A 川芎内酯B
测定时间 空白组
指标 2.0g/kg 2.0g/kg
149.21± 160.10±
给药前 170.02±11.11
19.83 11.73
148.06± 162.03±
5分 164.17±5.96
8.68 18.91
10 146.40± 147.78±
171.81±7.02
LVSP 分 16.03 16.79
给
(mmHg) 15 143.78± 145.17±
药 172.31±5.85
分 14.37 19.31
后
30 137.48±
136.20±5.47 171.09±15.63
分 13.87
60 138.31±
136.20±8.14 159.53±23.16
分 11.49
2551.9± 4138.8±
给药前 3903.3±194.2
248.6 425.1
2604.3± 3952.8±
5分 3940.7±281.7
264.2 365.8
10 2621.3± 4100.9±
LVP+dp/dtmax 3784.9±271.5
分 236.8 386.2
给
15 2572.4± 4018.2±
(mmHg/s)药 3715.3±309.9
分 257.9 361.7
后
30 2365.2± 4135.6±
3489.8±330.8
分 213.8 349.8
60 2502.7± 3846.8±
3303.7±243.0
分 202.8 261.5
LVP-dp/dtmax 1477.9± 2469.5±
给药前 2847.4±429.8
136.8 175.1
(mmHg/s) 1673.2± 2330.6±
5分 2522.4±330.6
183.9 292.8
10 1603.3± 2683.4±
2605.2±385.9
分 159.2 238.9
给
15 1673.2± 2346.7±
药 2415.3±155.9
分 156.8 377.8
后
30 1604.4± 2536.5±
2424.5±258.9
分 200.4 250.8
60 1464.0± 2381.9±
2349.7±327.7
分 187.8 255.9
135.50±
给药前 136.6±14.9 142.58±17.39
14.63
129.35±
5分 141.9±15.4 159.81±19.01
22.48
10 134.23±
147.8±14.6 153.57±26.32
CO 分 19.14
给
(ml/min) 15 131.67±
药 156.0±19.4 159.42±26.81
分 17.47
后
30 141.90±
200.4±13.8 172.75±35.96
分 18.76
60 131.06±
187.3±14.2 137.47±31.93
分 16.85
结论
药理实验研究结果表明:
1.川芎内酯A,B可明显降低缺血及再灌注时室性心律失常的发生率,持续时间缩短;
显著缩小心肌梗塞面积,血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性增高程度明显降低。表明川芎内酯A,B对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
2.川芎内酯A、B明显延长小白鼠在缺氧状态下的存活时间,提示川芎内酯A,B可以提高小白鼠的耐缺氧能力。
3.川芎内酯A、B降低血小板聚集率,全血粘度及血浆粘度,表明川芎内酯A、B具有活血化瘀之功能。
4.川芎内酯A、B对正常开胸大鼠血压、心率、左心室内压、左室压最大上升及下降速率和主动脉流量没有影响,表明川芎内酯A、B对大鼠心脏功能没有负性肌力作用。
以上结果为川芎内酯A,B治疗缺血性心脏病提供了实验依据。
Claims (7)
1、一种治疗缺血性心脏病的川芎内酯,其特征在于:该川芎内酯是由川芎饮片提取的川芎总内酯所包含的,其中川芎内酯A与川芎内酯B分别占总内酯成分重量的50%±10%和20%±5%,总内酯中还有少量二聚体,该二聚体共有3种,上述成分的分子结构式如下:
川芎内酯A 川芎内酯B
二聚体1 二聚体2 二聚体3
利用1HNMR,13CNMR及EIMS法鉴定了川芎内酯的结构,其光谱数据如下:
川芎内酯A为化合物4,5-二氢-3-丁叉基苯肽(4,5-dihydro-3-butylidene-phthalide),系浅黄色油状物。EIMS m/z(%):190(M+,72),161(100),134(28),133(26),106(50),105(60),78(50),77(50),55(90).分子式C12H14O2。分子量:190。1HNMR(CDCl3)δ:0.91(3H,t,J=7.5,H-11),1.46(2H,Hexa,J=7.5,H-10),2.33(2H,q,J=7.5,H-9),2.44(2H,m,H-5),2.57(2H,t,J=7.2,H-4),5.19(1H,t,J=7.5,H-8),5.97(1H,dt,J=10.0,5.0,H-6),6.23(1H,dt,J=10.0,2.0,H-7)。13CNMR(CDCl3)δ:13.7(q,C-11),18.4(t,C-10),22.3(t,C-9,5),28.0(t,C-4),112.8(d,C-8),116.9(d,C-7),123.9(s,C-7a),129.9(d,C-6),147.0(s,C-3a),148.5(s,C-3),167.5(s,C-1);
川芎内酯B为化合物4,5-二氢-3-丁基苯肽(4,5-dihydro-3-butyl-phthalide),系浅黄色油状物。EIMS m/z(%):192(M+,25),163(5),135(10),107(100),79(40),77(35),分子式C12H16O2,分子量:192。1HNMR(CDCl3)δ:0.87(3H,t,J=7.5,H-11),1.36(4H,m,H-9,10),1.50(1H,m,H-8a),1.85(1H,m,H-8b),2.43(2H,m,H-4),2.47(2H,m,H-5),4.90(1H,dd,J=8.0,3.5,H-3),5.88(1H,dt,J=9.5,4.5,H-6),6.16(1H,dt,J=9.5,2.5,H-7)。13CNMR(CDCl3)δ:13.8(q,C-11),20.7(t,C-10),22.3(t,C-9),22.4(t,C-8),26.7(t,C-5),31.9(t,C-4),82.5(d,C-3),116.8(d,C-7),124.4(s,C-7a),128.3(d,C-6),161.4(s,C-3a),171.2(s,C-1)。
2、根据权利要求1所述的治疗缺血性心脏病的川芎内酯,其特征在于:该川芎内酯是指川芎内酯A。
3、根据权利要求1所述的治疗缺血性心脏病的川芎内酯,其特征在于:该川芎内酯是指川芎内酯B。
4、根据权利要求1或2所述的治疗缺血性心脏病的川芎内酯,其特征在于:该川芎内酯是由川芎内酯A、B合成的川芎内酯A、B二聚体,该二聚体为结晶性化合物,它具有与川芎内酯A、B相同的不饱和五元内酯环及环外丁(烯)基活性基团。
5、用于权利要求1所述的川芎内酯的制备方法,其特征在于:取川芎饮片以乙醇渗漉,二者重量比为1∶4,渗漉液减压回收乙醇至无乙醇味,加入与残物等体积的水,充分搅拌后静置分层,取上层油脂层以石油醚溶解,用含水甲醇萃取,甲醇萃取物行硅胶柱层析,以石油醚∶乙酸乙酯(20∶1)除油脂,再用石油醚∶乙酸乙酯(8∶1)洗出川芎总内酯。
6、用于权利要求5所述的川芎内酯的制备方法,其特征在于:取总内酯置硅胶柱中,以石油醚∶乙酸乙酯(10∶1)进行层析分离。收集亮兰色荧光部分,用作川芎内酯A的精制;取随后之荧光吸收部分用作川芎内酯B的精制。
7、用于权利要求6所述的川芎内酯的制备方法,其特征在于:取收集的亮兰色荧光部分(油状物)进行ODS层析分离,以含水甲醇为洗脱剂,收集亮兰色荧光部分,减压回收甲醇,残物加入无水乙醇反复脱水,得浅黄色油状物川芎内酯A;取荧光吸收部分(油状物)按上述方法层析分离,收集TLC单一荧光吸收斑点组分,回收甲醇,无水乙醇脱水,得浅黄色油状物川芎内酯B。
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