CN1413452A - 紫萁的快速繁殖方法 - Google Patents

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一种紫萁的快速繁殖方法，取紫萁穗状孢子囊序在光照距离15cm下得到孢子囊或孢子，孢子在水中吸胀24小时，灭菌，无菌水冲洗消毒剂残留物，接入培养基中，3天左右孢子萌发形成原丝体，约30天初现原叶体，继续培养约20天形成丛生原叶体，原叶体在60天左右以1∶4繁殖速度增殖，单个原叶体30天后出现***器和颈卵器，精卵结合形成胚，约30天左右发育为孢子体，试管孢子体60天左右便可移植，过渡成活后便可定植。

Description

紫萁的快速繁殖方法
技术领域：本发明属于生物技术领域，具体地，涉及生物技术领域里的植物紫萁的快速繁殖方法。
技术背景：紫萁(Osmunda japonica Thunb.)桂皮紫萁(Osmunda cinnanmoneaL.var.asiatica)属紫萁科紫萁属蕨类植物，别名薇菜、老虎台和水骨菜等。其其拳卷状幼叶食用，可制成干薇菜即薇菜干(有红、青两种)，为国际市场高档紧俏无公害产品。据测定，每100克鲜菜中含蛋白质3.1克，碳水化合物4.0克，纤维素3.8克，VB2 0.25毫克，VC 69毫克，胡萝卜素1.97毫克；每100克干重含钾3.12克，钙190毫克，镁293毫克，铁12.5毫克，锰8.1毫克，铜1.8毫克，锌6.2毫克，营养丰富，味苦性凉，因其含有尖叶土杉甾酮A、爱克的松及促蜕皮甾酮等甾类化合物，有清热、解毒、止血、杀虫、杀菌之功效，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均有抑制作用，主治痢疾和妇科病等。由于它有较大经济价值，乱采乱挖现象十分严重，导致野生资源锐减。紫萁自然更新困难，且生长发育的初期阶段速度极慢，这对人工扩大种植和形成干薇菜加工产业非常不利。迄今为止，紫萁的组培快繁技术未见报道。
发明内容：本发明的目的在于针对现有技术存在的上述难题，提供一种紫萁的快速繁殖方法，使紫萁无菌快速繁殖成为可能，可以周年进行种苗生产。为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种紫萁的快速繁殖方法，取紫萁穗状孢子囊序在距离15cm光照下得到孢子囊或孢子，孢子在水中吸胀24小时，灭菌，无菌水冲洗消毒剂残留物，接入培养基中，3天左右孢子萌发形成原丝体，约30天初现原叶体，继续培养约20天形成丛生原叶体，原叶体在60天左右以1∶4繁殖速度增殖，单个原叶体30天后出现***器和颈卵器，精囊结合形成胚囊，30天左右发育为孢子体，试管孢子体60天左右便可移植，过渡移植成活后便可定植。
上述方法中，将孢子接种在1/10MS培养基上，补加KT 1mg/L，无糖，用脱脂棉花代替琼脂，3天左右孢子开始萌发，进行有丝***产生最初的假根和原丝体细胞，1500 lx光照度，照光10小时/天，培养室25℃±2℃，暗培养抑制孢子萌发，原丝体存在时间较短，一般2-10个细胞不等，然后在1/10MS培养基上附加细胞***素和生长素如KT 1+2，4-D0.4、BA 0.5+NAA 0.5等，或加抑制生长剂如CCC等，形成肥厚半圆型宽的舌状原叶体；或者加入NAA或IBA0.5-4时形成带形原叶体；在MS-1/10MS培养基上形成正常的有凹形分生区的背腹分明的心形原叶体，以上3种形式的原叶体均形成孢子体。
本发明最具体地方法是取紫萁穗状孢子囊序在距离15cm光照下得到孢子囊或孢子，孢子在水中吸胀24小时，灭菌，无菌水冲洗消毒剂残留物，接种在1/10MS培养基上，补加KT 1mg/L，无糖，用脱脂棉花代替琼脂，3天左右孢子开始萌发，进行有丝***产生最初的假根和原丝体细胞，原丝体存在时间较短，一般2-10个细胞不等，1500 lx光照度，照光10小时/天，培养室25℃±2℃，暗培养抑制孢子萌发，然后在1/10MS培养基上附加细胞***素和生长素如KT1+2，4-D0.4、BA 0.5+NAA 0.5等，或加抑制生长剂如CCC等，形成肥厚半圆型宽的舌状原叶体；或者加入NAA或IBA0.5-4时形成带形原叶体；在MS-1/10MS培养基上形成正常的有凹形分生区的背腹分明的心形原叶体，约30天初现原叶体，继续培养约20天形成丛生原叶体，原叶体在60天左右以1∶4繁殖速度增殖，单个原叶体30天后出现***器和颈卵器，精卵结合形成胚，约30天左右发育为孢子体，试管孢子体60天左右便可移植，过渡成活后便可定植。
本发明上述方法的提出是基于下面的原理：
1、紫萁每株成年株孢子量达数千万个(可育叶大小约为7×19cm，孢子数约为5×10个)，所以孢子是无菌快速繁殖最理想的材料。
2、紫萁的无性系一旦建立，快速繁殖周期6个月，60天增殖速度为1∶4。
3、紫萁的孢子近圆形，富含叶绿素，无周壁、外壁较薄，所以孢子呈现绿色。孢子无休眠期，孢子含水量较高，所以孢子寿命极短，脱离蕨叶的孢子1-2天便失活。室温下瓶内无菌保湿贮藏，孢子寿命可延长至两个月以上。
4、培养条件：孢子接种在1/10MS培养基上，补加KT 1mg/L，无糖，用脱脂棉花代替琼脂，3天左右孢子便进行有丝***产生最初的假根和原丝体细胞，这标志着孢子萌发。1500 lx光照度，照光10小时/天。培养室25℃±2℃。暗培养抑制孢子萌发。原丝体存在时间较短，一般2-10个细胞不等，随培养条件变化而变。在自然界原叶体的结构形式和发育类型是分类标准，但在无菌培养条件下，原叶体形态是可塑的，主要表现形式有三种。在1/10MS培养基上附加细胞***素和生长素(如KT 1+2，4-D0.4、BA 0.5+NAA 0.5等)，或加抑制生长剂(如CCC等)时，形成肥厚半圆型宽的舌状原叶体；在加NAA或IBA0.5-4时形成带形原叶体；在MS-1/10MS培养基上形成正常的有凹形分生区的背腹分明的心形原叶体。以上3种形式的原叶体均可形成孢子体。去掉微量元素的1/10MS培养基+蔗糖5％，有利孢子体形成。
具体实施方式：
下面结合实施例进一步对本发明实质性内容进行说明，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1：
取紫萁穗状孢子囊序(二月采桂皮紫萁、三月中旬采紫萁的孢子囊序)，在光照(距离15cm)下得孢子囊或孢子，孢子在水中吸胀24小时，灭菌，无菌水冲洗消毒剂残留物接种在1/10MS培养基上，补加KT 1mg/L，无糖，用脱脂棉花代替琼脂，3天左右孢子开始萌发，进行有丝***产生最初的假根和原丝体细胞，原丝体存在时间较短，一般2-10个细胞不等，1500 lx光照度，照光10小时/天，培养室25℃±2℃，暗培养抑制孢子萌发，然后在1/10MS培养基上附加细胞***素和生长素如KT 1+2，4-D0.4、BA 0.5+NAA 0.5等，或加抑制生长剂如CCC等，形成肥厚半圆型宽的舌状原叶体；或者加入NAA或IBA0.5-4时形成带形原叶体；在MS-1/10MS培养基上形成正常的有凹形分生区的背腹分明的心形原叶体，约30天初现原叶体，继续培养约20天形成丛生原叶体，原叶体在60天左右以1∶4繁殖速度增殖，单个原叶体30天后出现***器和颈卵器，精卵结合形成胚，约30天左右发育为孢子体，试管孢子体60天左右便可移植，过渡成活后便可定植。
紫萁的特性：株高60-100厘米，根状茎粗短，直立或斜生，顶端叶簇生。营养叶叶柄长，常具锈色绒毛，二回羽状深裂；孢子叶小，单生，密被棕褐色绒毛，背面密生褐色孢子囊。繁殖可用孢子繁殖或分株繁殖。性喜阴湿，怕旱，不耐高温，遮荫可促进萌发生长。耐酸性强，在富含有机质的肥沃土壤中产量和品质大大提高。
栽培方法：
1、栽植时间：春秋两季均可，多在5月上中旬进行，活棵快，成活率高。2、整地作畦，选择潮湿肥沃的低洼地，667平方米施入基肥2000-3000公斤，深翻后开沟，平畦栽培，可与瓜类、豆类或玉米等套作，以利遮荫。也可在水源充足的荒山、山地挖穴栽植。3、栽植方法：挖取多年生野生薇菜地下根状茎(但现在野生资源已很少，应限制采挖)，茎粗以8-10毫米为宜，尽量带土移栽，667平方米可栽植5000-7000株，栽植时使叶基顶部向上，覆土4-6厘米后，立即浇水。4、田间管理：栽植后及时中耕除草，遮荫浇水，每年开始采收前15天左右加强肥水管理。5、适时采收：栽植当年一般不采收，第二年视其生长状况可适当采收，平均气温10℃以上时，幼叶出土后6-10天，适时进行第一茬采收；再过7-10天，当第二荐幼叶出土后，幼苗高20厘米左右即可采收。每年采收两荐，以后幼叶保留，使养分积累在根状茎中，以利翌年幼叶生长。采收时以采收20厘米左右长，且顶端钩状未伸直的幼叶为宜，一般不用刀割，以免根部受伤。采收后的薇菜应及时放荫凉处，尽快加工。
采后加工：
1、分级：切除薇菜下部老化部分及钩卷的端头和绒毛，挑出杂物和变质、虫蛀的薇菜，按粗细分级，并用冷水浸湿防老化。2、水煮：将整理好的鲜菜按粗细分别放入开水锅内烫3-5分钟，水要淹没薇菜，旺火加热，煮透而不烂，直到发出清香味，且从基部往顶端能撕成两半时即可捞出。3、晾搓：将沸烫的菜及时摊放在干净处通风晾晒，经常翻动，使薇菜表面水分晒干转为***时进行第一次揉搓，接着继续晾晒至顶部发干时，进行第二次揉搓，边晒边搓六七次，至其皱晒干为止。同时去除变黑、烂和长度在10厘米以下的薇菜。

Claims (3)

1、一种紫萁的快速繁殖方法，其特征在于取紫萁穗状孢子囊序在距离15cm光照下得到孢子囊或孢子，孢子在水中吸胀24小时，灭菌，无菌水冲洗消毒剂残留物，接入培养基中，3天左右孢子萌发形成原丝体，约30天初现原叶体，继续培养约20天形成丛生原叶体，原叶体在60天左右以1∶4繁殖速度增殖，单个原叶体30天后出现***器和颈卵器，精卵结合形成胚，约30天左右发育为孢子体，试管孢子体60天左右便可移植，过渡成活后便可定植。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于孢子接种在1/10MS培养基上，补加KT 1mg/L，无糖，用脱脂棉花代替琼脂，3天左右孢子开始萌发，进行有丝***产生最初的假根和原丝体细胞，1500 lx光照度，照光10小时/天，培养室25℃±2℃，暗培养抑制孢子萌发，原丝体存在时间较短，一般2-10个细胞不等，然后在1/10MS培养基上附加细胞***素和生长素如KT 1+2，4-D0.4、BA 0.5+NAA 0.5等，或加抑制生长剂如CCC等，形成肥厚半圆型宽的舌状原叶体；或者加入NAA或IBA0.5-4时形成带形原叶体；在MS-1/10MS培养基上形成正常的有凹形分生区的背腹分明的心形原叶体，以上3种形式的原叶体均形成孢子体。
3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于取紫萁穗状孢子囊序在距离15cm光照下得到孢子囊或孢子，孢子在水中吸胀24小时，灭菌，无菌水冲洗消毒剂残留物，接种在1/10MS培养基上，补加KT 1mg/L，无糖，用脱脂棉花代替琼脂，3天左右孢子开始萌发，进行有丝***产生最初的假根和原丝体细胞，原丝体存在时间较短，一般2-10个细胞不等，1500 lx光照度，照光10小时/天，培养室25℃±2℃，暗培养抑制孢子萌发，然后在1/10MS培养基上附加细胞***素和生长素如KT 1+2，4-D0.4、BA 0.5+NAA 0.5等，或加抑制生长剂如CCC等，形成肥厚半圆型宽的舌状原叶体；或者加入NAA或IBA0.5-4时形成带形原叶体；在MS-1/10MS培养基上形成正常的有凹形分生区的背腹分明的心形原叶体，约30天初现原叶体，继续培养约20天形成丛生原叶体，原叶体在60天左右以1∶4繁殖速度增殖，单个原叶体30天后出现***器和颈卵器，精卵结合形成胚，约30天左右发育为孢子体，试管孢子体60天左右便可移植，过渡成活后便可定植。
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