CN1305530A - 用于epothilone生物合成的基因 - Google Patents

用于epothilone生物合成的基因 Download PDF

Info

Publication number
CN1305530A
CN1305530A CN99807421A CN99807421A CN1305530A CN 1305530 A CN1305530 A CN 1305530A CN 99807421 A CN99807421 A CN 99807421A CN 99807421 A CN99807421 A CN 99807421A CN 1305530 A CN1305530 A CN 1305530A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
nucleotide
amino acid
sequence
seqid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN99807421A
Other languages
English (en)
Other versions
CN100374565C (zh
Inventor
T·斯彻普
J·M·利根
I·莫尔纳
R·泽克尔
J·戈拉彻
D·西尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novartis AG
Original Assignee
Novartis AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis AG filed Critical Novartis AG
Publication of CN1305530A publication Critical patent/CN1305530A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100374565C publication Critical patent/CN100374565C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

由纤维堆囊菌分离得到编码epothilone生物合成必需的多肽的核酸分子。还公开了用经本发明的基因转化的重组宿主生产epothilone的方法。用这种方法生产的epothilone,足够用于它们的纯化和在药用制剂(诸如治疗癌症)中的使用。

Description

用于epothilone生物合成的基因
                   发明领域
本发明主要涉及聚酮化合物(polyketide)和用于合成它们的基因。特别的，本发明涉及从纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)中分离和鉴定生物合成epothiloneA和B必需的新的聚酮化合物合酶和非核糖体肽合成酶基因。
                   发明背景
聚酮化合物是由二碳结构单元合成的化合物，其β-碳总是携带酮基，由此命名为聚酮化合物。这些化合物包括许多重要的抗生素、免疫抑制剂、癌症化疗剂、和其它具有广泛生物学特性的化合物。巨大的结构多样性源于聚酮化合物链的不同长度、(作为二碳结构单元的一部分或在聚酮化合物主链形成之后)引入的不同侧链、和这些基团的立体化学。酮基还可以被还原成羟基、烯酰基、或完全除去。每一轮二碳的加入是由叫做聚酮化合物合酶(polyketide synthase,PKS)的酶复合物以与脂肪酸生物合成相似的方式进行的。
已经分离得到并测序的聚酮化合物的生物合成基因与日俱增。例如，见美国专利号5,639,949、5,693,774、和5,716,849描述了用于soraphen生物合成的基因，所有这些此处引用作为参考。还可见Schupp等人，FEMS微生物学通讯(FEMS Microbiology Letters)159:201-207(1998)和WO98/07868(其中描述了用于利福霉素生物合成的基因)，和美国专利号5,876,991(其中描述了用于tylactone生物合成的基因，所有这些此处引用作为参考。编码的蛋白质通常分为两类：第一类和第二类。第一类蛋白质是多功能的，有多个进行不同酶步骤的催化结构域共价连接在一起(如用于红霉素、soraphen、利福霉素、和除虫菌素的PKS(MacNeil等人，工业微生物：基础和应用分子遗传学(Industrial Microorganisms:Basic and AppliedMolecular Genetics)，(编辑：Baltz等人)，美国微生物学协会，华盛顿特区，pp.245-256(1993))；而第二类蛋白质是单功能的(Hutchinson等人，工业微生物：基础和应用分子遗传学，(编辑：Baltz等人)，美国微生物学协会，华盛顿特区，pp.203-216(1993))。
对于较简单的聚酮化合物诸如放线菌紫素(由天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)产生)，几轮二碳的加入在由一组PKS基因编码的PKS酶上重复进行。相反的，更复杂的化合物诸如红霉素和soraphen的合成涉及组织成模块的PKS酶，由此每个模块进行一轮二碳的加入(为了回顾，见Hopwood等人，工业微生物：基础和应用分子遗传学，(编辑：Baltz等人)，美国微生物学协会，华盛顿特区，pp.267-275(1993))。
复杂的聚酮化合物和次级代谢物通常可能包含氨基酸、而非简单的羧酸衍生的亚结构。这些结构单元的掺入由非核糖体多肽合成酶(non-ribosomal polypeptide synthetase,NRPS)完成。NRPS是组织成模块的多酶。每个模块负责一个氨基酸结构单元的加入(和额外的处理，如果需要)。NRPS通过形成氨酰腺苷酸激活氨基酸，并将激活的氨基酸捕获于肽基载体蛋白结构域的磷酸泛酰巯基乙胺辅基的硫醇基上。然后，NRPS通过立体异构化、N-甲基化、或环化(如果需要)来修饰氨基酸，并催化被酶结合的氨基酸之间肽键的形成。NRPS负责肽次级代谢物如环孢菌素的生物合成，可以如在雷帕霉素中提供聚酮化合物链终止单位，或如在耶尔森菌素(yersiniabactin)生物合成中与PKS形成混合***。
EpothiloneA和B是16元大环聚酮化合物，具有由细菌纤维堆囊菌菌株So ce90(Gerth等人，抗生素杂志(J.Antibiotics)49:560-563(1996)，此处引用作为参考)产生的酰基半胱氨酸衍生的起始单位。EpothiloneA和B的结构是(其中R在epothiloneA中表示氢，在epothiloneB中表示甲基)：
epothilone具有窄的抗真菌谱，且在动物细胞培养物中尤其显示高细胞毒性(见Hfle等人，德国专利4138042(1993)，此处引用作为参考)。极其重要的是，epothilone在体内和在培养细胞中都模仿紫杉醇的生物学效应(Bollag等人，癌症研究(Cancer Research)55:2325-2333(1995)，此处引用作为参考)。稳定细胞微管的紫杉醇和泰索帝(taxotere)是对各种人实体瘤具有显著活性的癌症化疗剂(Rowinsky等人，国家癌症学会会刊(J.Natl.Cancer Inst.)83:1778-1781(1991))。竞争研究已经揭示了epothilone作为紫杉醇与微管结合的竞争抑制剂，与它们共有相同的微管结合位点和拥有与紫杉醇相似的微管亲和力的解释一致。然而，epothilone具有比紫杉醇显著的优势，因为对多药抗性细胞系epothilone的效力降低比紫杉醇低许多(Bollag等人(1995))。而且，与紫杉醇相比，较少的epothilone有效通过P-糖蛋白排出细胞(Gerth等人(1996))。此外，多种epothilone类似物已经被合成，如它们增强的诱导微管聚合和稳定的能力所示，具有比epothiloneA或epothiloneB更高的细胞毒性活性(WO98/25929，此处引用作为参考)。
尽管epothilone有希望作为抗癌药，目前这些化合物的产量限制了它们的商业潜力。这些化合物对于工业规模的化学合成过于复杂，所以必须通过发酵生产。用于粘细菌诸如纤维堆囊菌基因操作的技术描述于美国专利号5,686,295，此处引用作为参考。然而，纤维堆囊菌难以发酵而且epothilone的产量因此低。在更适合发酵的异源宿主中的epothilone重组生产可以解决当前的产量问题。然而，编码负责epothilone生物合成的多肽的基因至今还未分离得到。而且，产生epothilone的菌株，即So ce90，还产生至少一种其它的聚酮化合物spirangien，可能使分离专门负责epothilone生物合成的基因更加复杂。
因此，综上所述，本发明的一个目的是分离涉及epothilone生物合成的基因，特别是在堆囊粘菌/-多囊粘菌属的粘细菌，即纤维堆囊菌菌株So ce90中涉及epothiloneA和B合成的基因。本发明的另一个目的是提供应用于抗癌制剂的epothilone的重组生产方法。
                      发明概述
为了促进上述和其它目的，本发明出乎意料的克服了上面提出的困难，首次提供了包含编码至少一种涉及epothilone生物合成的多肽的核苷酸序列的核酸分子。在优选的实施方案中，该核苷酸序列是从属于粘细菌目的物种，最优选纤维堆囊菌中分离的。
在另一个优选的实施方案中，本发明提供了分离的核酸分子，其包含编码至少一种涉及epothilone生物合成的多肽的核苷酸序列，其中多肽包含与选自下组的氨基酸序列基本上相似的氨基酸序列:SEQID NO:2,SEQ ID NO:2的氨基酸11-437,SEQ ID NO:2的氨基酸543-864,SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:3的氨基酸72-81,SEQID NO:3的氨基酸118-125,SEQ ID NO:3的氨基酸199-212,SEQID NO:3的氨基酸353-363,SEQ ID NO:3的氨基酸549-565,SEQID NO:3的氨基酸588-603,SEQ ID NO:3的氨基酸669-684,SEQID NO:3的氨基酸815-821,SEQ ID NO:3的氨基酸868-892,SEQID NO:3的氨基酸903-912,SEQ ID NO:3的氨基酸918-940,SEQID NO:3的氨基酸1268-1274,SEQ ID NO:3的氨基酸1285-1297,SEQ ID NO:3的氨基酸973-1256,SEQ ID NO:3的氨基酸1344-1351,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859,SEQ ID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457,SEQ ID NO:5的氨基酸563-884,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQ ID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQ ID NO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQ ID NO:5的氨基酸3886-4048,SEQ IDNO:5的氨基酸4433-4719,SEQ ID NO:5的氨基酸4729-4974,SEQID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQ ID NO:5的氨基酸5103-5525,SEQ ID NO:5的氨基酸5631-5951,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ ID NO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6,SEQID NO:6的氨基酸35-454,SEQ ID NO:6的氨基酸561-881,SEQ IDNO:6的氨基酸1143-1393,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503,SEQID NO:6的氨基酸1522-1946,SEQ ID NO:6的氨基酸2053-2373,SEQ ID NO:6的氨基酸2383-2551,SEQ ID NO:6的氨基酸2671-3045,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636,SEQ ID NO:6的氨基酸3673-3745,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:7的氨基酸32-450,SEQ IDNO:7的氨基酸556-877,SEQ ID NO:7的氨基酸887-1051,SEQ IDNO:7的氨基酸1478-1790,SEQ ID NO:7的氨基酸1810-2055,SEQID NO:7的氨基酸2093-2164,SEQ ID NO:7的氨基酸2165-2439,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:11，和SEQ ID NO:22。
在更优选的实施方案中，本发明提供了一种分离的核酸分子，其包含编码至少一种涉及epothilone生物合成的多肽的核苷酸序列，其中该多肽包含选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:2的氨基酸11-437,SEQ ID NO:2的氨基酸543-864,SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:3的氨基酸72-81,SEQ ID NO:3的氨基酸118-125,SEQ ID NO:3的氨基酸199-212,SEQ ID NO:3的氨基酸353-363,SEQ ID NO:3的氨基酸549-565,SEQ ID NO:3的氨基酸588-603,SEQ ID NO:3的氨基酸669-684,SEQ ID NO:3的氨基酸815-821,SEQ ID NO:3的氨基酸868-892,SEQ ID NO:3的氨基酸903-912,SEQ ID NO:3的氨基酸918-940,SEQ ID NO:3的氨基酸1268-1274,SEQ ID NO:3的氨基酸1285-1297,SEQ ID NO:3的氨基酸973-1256,SEQ ID NO:3的氨基酸1344-1351,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859,SEQ ID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457,SEQ ID NO:5的氨基酸563-884,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQ ID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQ ID NO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQ IDNO:5的氨基酸3886-4048,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719,SEQID NO:5的氨基酸4729-4974,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQ ID NO:5的氨基酸5103-5525,SEQ ID NO:5的氨基酸5631-5951,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ ID NO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:6的氨基酸35-454,SEQ ID NO:6的氨基酸561-881,SEQ ID NO:6的氨基酸1143-1393,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503,SEQ ID NO:6的氨基酸1522-1946,SEQ ID NO:6的氨基酸2053-2373,SEQ ID NO:6的氨基酸2383-2551,SEQ ID NO:6的氨基酸2671-3045,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636,SEQ ID NO:6的氨基酸3673-3745,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:7的氨基酸32-450,SEQ ID NO:7的氨基酸556-877,SEQ ID NO:7的氨基酸887-1051,SEQ ID NO:7的氨基酸1478-1790,SEQ ID NO:7的氨基酸1810-2055,SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164,SEQ ID NO:7的氨基酸2165-2439,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:11，和SEQ ID NO:22。
在另一个优选的实施方案中，本发明提供了一种分离的核酸分子，其包含编码至少一种涉及epothilone生物合成的多肽的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本上相似:SEQ ID NO:1的核苷酸1900-3171的互补序列，SEQ ID NO:1的核苷酸3415-5556,SEQ ID NO:1的核苷酸7610-11875,SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ ID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQ IDNO:1的核苷酸11872-16104,SEQ ID NO:1的核苷酸12085-12114,SEQ ID NO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQ ID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQ ID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQ ID NO:1的核苷酸14313-14334,SEQID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQ ID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQ ID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQ ID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQ ID NO:1的核苷酸14788-15639,SEQ ID NO:1的核苷酸15901-15924,SEQ ID NO:1的核苷酸16251-21749,SEQ ID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ ID NO:1的核苷酸21746-43519,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQ ID NO:1的核苷酸26045-26263,SEQID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQ ID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸35042-35902,SEQ ID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQ ID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸43524-54920,SEQ ID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQ ID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸48087-49361,SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176,SEQ ID NO:1的核苷酸51534-52657,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431,SEQ ID NO:1的核苷酸54540-54758,SEQID NO:1的核苷酸54935-62254,SEQ ID NO:1的核苷酸55028-56284,SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565,SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087,SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304,SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099,SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426,SEQ ID NO:1的核苷酸61427-62254,SEQ ID NO:1的核苷酸62369-63628,SEQID NO:1的核苷酸67334-68251，和SEQ ID NO:1的核苷酸1-68750。
在特别优选的实施方案中，本发明提供了包含编码至少一种涉及epothilone生物合成的多肽的核苷酸序列的核酸分子，其中所述核苷酸序列选自下组:SEQ ID NO:1的核苷酸1900-3171的互补序列，SEQ ID NO:1的核苷酸3415-5556,SEQ ID NO:1的核苷酸7610-11875,SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ ID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQ ID NO:1的核苷酸11872-16104,SEQID NO:1的核苷酸12085-12114,SEQ ID NO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQ ID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQ ID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQ ID NO:1的核苷酸14313-14334,SEQ ID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQ ID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQ ID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQ ID NO:1的核苷酸14788-15639,SEQ ID NO:1的核苷酸15901-15924,SEQ ID NO:1的核苷酸16251-21749,SEQ ID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQ ID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ ID NO:1的核苷酸21746-43519,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQ ID NO:1的核苷酸26045-26263,SEQ ID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸35042-35902,SEQ ID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQ ID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸43524-54920,SEQ ID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQ ID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸48087-49361,SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176,SEQ ID NO:1的核苷酸51534-52657,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431,SEQ ID NO:1的核苷酸54540-54758,SEQ ID NO:1的核苷酸54935-62254,SEQID NO:1的核苷酸55028-56284,SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565,SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087,SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304,SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099,SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426,SEQ ID NO:1的核苷酸61427-62254,SEQ ID NO:1的核苷酸62369-63628,SEQ ID NO:1的核苷酸67334-68251，和SEQ ID NO:1的核苷酸1-68750。
在另一个优选的实施方案中，本发明提供了分离的核酸分子，其包含编码至少一种涉及epothilone生物合成的多肽的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中相应的连续20、25、30、35、40、45或50(优选20)个碱基对的部分序列相同的连续20、25、30、35、40、45或50(优选20)个碱基对的核苷酸部分：SEQ IDNO:1的核苷酸1900-3171的互补序列，SEQ ID NO:1的核苷酸3415-5556,SEQ ID NO:1的核苷酸7610-11875,SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ ID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQID NO:1的核苷酸11872-16104,SEQ ID NO:1的核苷酸12085-12114,SEQ ID NO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQ ID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQ ID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQ ID NO:1的核苷酸14313-14334,SEQID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQ ID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQ ID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQ ID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQ ID NO:1的核苷酸14788-15639,SEQ ID NO:1的核苷酸15901-15924,SEQ ID NO:1的核苷酸16251-21749,SEQ ID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ ID NO:1的核苷酸21746-43519,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQ ID NO:1的核苷酸26045-26263,SEQID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQ ID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸35042-35902,SEQ ID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQ ID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸43524-54920,SEQ ID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQ ID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸48087-49361,SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176,SEQ ID NO:1的核苷酸51534-52657,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431,SEQ ID NO:1的核苷酸54540-54758,SEQID NO:1的核苷酸54935-62254,SEQ ID NO:1的核苷酸55028-56284,SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565, SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087,SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304,SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099,SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426,SEQ ID NO:1的核苷酸61427-62254,SEQ ID NO:1的核苷酸62369-63628,SEQID NO:1的核苷酸67334-68251，和SEQ ID NO:1的核苷酸1-68750。
本发明还提供包含与本发明的核酸分子可操作连接的异源启动子序列的嵌合基因。其次，本发明提供了包含这种嵌合基因的重组载体，其中所述载体能够被稳定的转化到宿主细胞中。再次，本发明提供了包含这种嵌合基因的重组宿主细胞，其中宿主细胞能够表达编码至少一种epothilone生物合成必需的多肽的核苷酸序列。在优选的实施方案中，重组宿主细胞是属于放线菌目的细菌，而且在更优选的实施方案中重组宿主细胞是链霉菌菌株。在其它实施方案中，重组宿主细胞是任何其它适合发酵的细菌，诸如假单胞菌或大肠杆菌。再其次，本发明提供了包含本发明的核酸分子的Bac克隆，优选Bac克隆pEPO15。
在另一方面，本发明提供了分离的核酸分子，其包含编码epothilone合酶结构域的核苷酸序列。
根据一个实施方案，epothilone合酶结构域是β-酮脂酰合酶(KS)结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQID NO:2的氨基酸11-437,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432,SEQ IDNO:5的氨基酸39-457,SEQ ID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ IDNO:5的氨基酸3024-3449,SEQ ID NO:5的氨基酸5103-5525,SEQID NO:6的氨基酸35-454,SEQ ID NO:6的氨基酸1522-1946，和SEQ ID NO:7的氨基酸32-450。根据这个实施方案，优选所述KS结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸11-437,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457,SEQID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449,SEQ ID NO:5的氨基酸5103-5525,SEQ ID NO:6的氨基酸35-454,SEQ ID NO:6的氨基酸1522-1946，和SEQ ID NO:7的氨基酸32-450。而且，根据这个实施方案，优选所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQ ID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQ ID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQ ID NO:l的核苷酸48087-49361，和SEQ ID NO:1的核苷酸55028-56284。根据这个实施方案，更优选该核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中相应的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对部分序列相同的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对的核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQ ID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQ ID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQ ID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQ ID NO:1的核苷酸48087-49361，和SEQ ID NO:1的核苷酸55028-56284。此外，根据这个实施方案，最优选该核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQ ID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQ ID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQ ID NO:1的核苷酸48087-49361，和SEQ ID NO:1的核苷酸55028-56284。
根据另一个实施方案，epothilone合酶结构域是酰基转移酶(AT)结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQID NO:2的氨基酸543-864,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859,SEQID NO:5的氨基酸563-884,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQ ID NO:5的氨基酸5631-5951,SEQ ID NO:6的氨基酸561-881,SEQ ID NO:6的氨基酸2053-2373，和SEQ ID NO:7的氨基酸556-877。根据这个实施方案，优选所述AT结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸543-864,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859,SEQ ID NO:5的氨基酸563-884,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQ ID NO:5的氨基酸5631-5951,SEQ IDNO:6的氨基酸561-881,SEQ ID NO:6的氨基酸2053-2373，和SEQ ID NO:7的氨基酸556-877。而且，根据这个实施方案，优选所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQ ID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642，和SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565。根据这个实施方案，更优选所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中相应的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对的部分序列相同的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对的核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQ IDNO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642，和SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565。此外，根据这个实施方案，最优选该核苷酸序列选自下组:SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642，和SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565。
根据另一个实施方案，该epothilone合酶结构域是烯酰基还原酶(ER)结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837，和SEQ ID NO:7的氨基酸1478-1790。根据这个实施方案，优选所述ER结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837，和SEQID NO:7的氨基酸1478-1790。而且，根据这个实施方案，优选所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ ID NO:1的核苷酸35042-35902,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256，和SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304。根据这个实施方案，更优选该核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中相应的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对的部分序列相同的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对的核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ IDNO:1的核苷酸35042-35902,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256,和SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304。此外，根据这个实施方案，最优选该核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ ID NO:1的核苷酸35042-35902,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256，和SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304。
根据另一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是酰基载体蛋白(ACP)结构域，其中所述多肽包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQ ID NO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQ IDNO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503,SEQID NO:6的氨基酸3673-3745，和SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164。根据这个实施方案，优选所述ACP结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQ ID NO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQ ID NO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503,SEQ ID NO:6的氨基酸3673-3745，和SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164。而且，根据这个实施方案，优选所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ ID NO:1的核苷酸26045-26263,SEQID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸54540-54758，和SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426。根据这个实施方案，更优选所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中相应的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对的部分序列相同的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对的核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ IDNO:1的核苷酸26045-26263,SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸54540-54758，和SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426。此外，根据这个实施方案，最优选该核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ IDNO:1的核苷酸26045-26263,SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸54540-54758，和SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426。
根据另一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是脱水酶(DH)结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:5的氨基酸3886-4048,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ ID NO:6的氨基酸2383-2551，和SEQ ID NO:7的氨基酸887-1051。根据这个实施方案，优选所述DH结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:5的氨基酸3886-4048,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ ID NO:6的氨基酸2383-2551，和SEQ IDNO:7的氨基酸887-1051。而且，根据这个实施方案，优选所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176，和SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087。根据这个实施方案，更优选所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中相应的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对的部分序列相同的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对的核苷酸部分：SEQ IDNO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176，和SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087。此外，根据这个实施方案，最优选该核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176，和SEQ IDNO:1的核苷酸57593-58087。
根据另一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是β-酮还原酶(KR)结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQ ID NO:5的氨基酸4729-4974,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ ID NO:6的氨基酸1143-1393,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636，和SEQID NO:7的氨基酸1810-2055。根据这个实施方案，优选所述KR结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQ ID NO:5的氨基酸4729-4974,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ ID NO:6的氨基酸1143-1393,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636,和SEQ ID NO:7的氨基酸1810-2055。而且，根据这个实施方案，优选所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431,和SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099。根据这个实施方案，更优选该核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中相应的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对的部分序列相同的连续20、25、30、35、40、45、或50(优选20)个碱基对的核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQ ID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431，和SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099。此外，根据这个实施方案，最优选该核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQ ID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431，和SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099。
根据另一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是甲基转移酶(MT)结构域，其包含与SEQ ID NO:6的氨基酸2671-3045基本相似的氨基酸序列。根据这个实施方案，优选所述MT结构域包含SEQ IDNO:6的氨基酸2671-3045。而且，根据这个实施方案，优选所述核苷酸序列与SEQ ID NO:1的核苷酸51534-52657基本相似。根据这个实施方案，更优选该核苷酸序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸51534-52657中相应的连续20、25、30、35、40、45或50(优选20)个碱基对的部分序列相同的连续20、25、30、35、40、45或50(优选20)个碱基对的核苷酸部分。此外，根据这个实施方案，最优选该核苷酸序列是SEQ ID NO:1的核苷酸51534-52657。
根据另一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是硫酯酶(TE)结构域，其包含与SEQ ID NO:7的氨基酸2165-2439基本相似的氨基酸序列。根据这个实施方案，优选所述TE结构域包含SEQ ID NO:7的氨基酸2165-2439。而且，根据这个实施方案，优选所述核苷酸序列与SEQ ID NO:1的核苷酸61427-62254基本相似。根据这个实施方案，更优选该核苷酸序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸61427-62254中相应的连续20、25、30、35、40、45或50(优选20)个碱基对部分序列相同的连续20、25、30、35、40、45或50(优选20)个碱基对的核苷酸部分。此外，根据这个实施方案，最优选该核苷酸序列是SEQ ID NO:1的核苷酸61427-62254。
在另一方面，本发明提供了分离的核酸分子，其包含编码非核糖体肽合成酶的核苷酸序列，其中所述非核糖体肽合成酶包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:3的氨基酸72-81,SEQ ID NO:3的氨基酸118-125,SEQ ID NO:3的氨基酸199-212,SEQ ID NO:3的氨基酸353-363,SEQ ID NO:3的氨基酸549-565,SEQ ID NO:3的氨基酸588-603,SEQ ID NO:3的氨基酸669-684,SEQ ID NO:3的氨基酸815-821,SEQ ID NO:3的氨基酸868-892,SEQ ID NO:3的氨基酸903-912,SEQ ID NO:3的氨基酸918-940,SEQ ID NO:3的氨基酸1268-1274,SEQ ID NO:3的氨基酸1285-1297,SEQ ID NO:3的氨基酸973-1256，和SEQ IDNO:3的氨基酸1344-1351。根据这个实施方案，优选所述非核糖体肽合成酶包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:3的氨基酸72-81,SEQ ID NO:3的氨基酸118-125,SEQ ID NO:3的氨基酸199-212,SEQ ID NO:3的氨基酸353-363,SEQ ID NO:3的氨基酸549-565,SEQ ID NO:3的氨基酸588-603,SEQ ID NO:3的氨基酸669-684,SEQ ID NO:3的氨基酸815-821,SEQ ID NO:3的氨基酸868-892,SEQ ID NO:3的氨基酸903-912,SEQ ID NO:3的氨基酸918-940,SEQ ID NO:3的氨基酸1268-1274,SEQ ID NO:3的氨基酸1285-1297,SEQ ID NO:3的氨基酸973-1256，和SEQ IDNO:3的氨基酸1344-1351。而且，根据这个实施方案，优选所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸11872-16104,SEQ ID NO:1的核苷酸12085-12114,SEQ ID NO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQ ID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQ ID NO:l的核苷酸14313-14334,SEQ ID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQ ID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQ ID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQ ID NO:1的核苷酸14788-15639,和SEQ ID NO:1的核苷酸15901-15924。根据这个实施方案，更优选该核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中相应的连续20、25、30、35、40、45或50(优选20)个碱基对的部分序列相同的连续20、25、30、35、40、45或50(优选20)个碱基对的核苷酸部分：SEQ IDNO:1的核苷酸11872-16104,SEQ ID NO:1的核苷酸12085-12114,SEQ ID NO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQ ID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQ ID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQ ID NO:1的核苷酸14313-14334,SEQID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQ ID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQ ID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQ ID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQ ID NO:1的核苷酸14788-15639，和SEQ ID NO:1的核苷酸15901-15924。此外，根据这个实施方案，最优选该核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸11872-16104,SEQ ID NO:1的核苷酸12085-12114,SEQ IDNO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQ ID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQ ID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQ ID NO:1的核苷酸14313-14334,SEQ ID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQ ID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQ ID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQ ID NO:1的核苷酸14788-15639，和SEQ ID NO:1的核苷酸15901-15924。
本发明还提供了一种分离的核酸分子，其包含编码包括选自SEQID NO:2-23的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列。
根据另一方面，本发明还提供了用于重组生产聚酮化合物诸如epothilone的方法，其生产产量足够用于它们的纯化和药用制剂诸如用于治疗癌症。这些生产方法的特殊优势是产生的分子有手性；在转基因有机体中进行生产，避免了产生大量的外消旋混合物，其中一些对映体可能具有降低的活性。特别的，本发明提供了在重组宿主中异源表达epothilone的方法，包括(a)将包含与本发明的核酸分子(其包括编码至少一种涉及epothilone生物合成的多肽的核苷酸序列)可操作连接的异源启动子序列的嵌合基因导入宿主；和(b)在适合宿主中生物合成epothilone的条件下培养宿主。本发明还提供了生产epothilone的方法，包括(a)用上述方法在重组宿主中表达epothilone；和(b)从重组宿主中提取epothilone。
根据另一方面，本发明提供了一种分离的多肽，其包括由epothilone合酶结构域组成的氨基酸序列。
根据一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是β-酮脂酰合酶(KS)结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸11-437,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457,SEQ ID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449,SEQ ID NO:5的氨基酸5103-5525,SEQ ID NO:6的氨基酸35-454,SEQ ID NO:6的氨基酸1522-1946，和SEQ ID NO:7的氨基酸32-450。根据这个实施方案，优选所述KS结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸11-437,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457,SEQ ID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449,SEQ ID NO:5的氨基酸5103-5525,SEQ IDNO:6的氨基酸35-454,SEQ ID NO:6的氨基酸1522-1946，和SEQID NO:7的氨基酸32-450。
根据另一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是酰基转移酶(AT)结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸543-864,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859,SEQ ID NO:5的氨基酸563-884,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQ ID NO:5的氨基酸5631-5951,SEQ ID NO:6的氨基酸561-881,SEQ ID NO:6的氨基酸2053-2373，和SEQ ID NO:7的氨基酸556-877。根据这个实施方案，优选所述AT结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸543-864,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859,SEQ ID NO:5的氨基酸563-884,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQ ID NO:5的氨基酸5631-5951,SEQ IDNO:6的氨基酸561-881,SEQ ID NO:6的氨基酸2053-2373，和SEQ ID NO:7的氨基酸556-877。
根据另一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是烯酰基还原酶(ER)结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837，和SEQ ID NO:7的氨基酸1478-1790。根据这个实施方案，优选该ER结构域包含选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837，和SEQ IDNO:7的氨基酸1478-1790。
根据另一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是酰基载体蛋白(ACP)结构域，其中所述多肽包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQ ID NO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQ IDNO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503,SEQID NO:6的氨基酸3673-3745，和SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164。根据这个实施方案，优选所述ACP结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQ ID NO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQ ID NO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503,SEQ ID NO:6的氨基酸3673-3745，和SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164。
根据另一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是脱水酶(DH)结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:5的氨基酸3886-4048,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ ID NO:6的氨基酸2383-2551，和SEQ ID NO:7的氨基酸887-1051。根据这个实施方案，优选所述DH结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:5的氨基酸3886-4048,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ ID NO:6的氨基酸2383-2551，和SEQ IDNO:7的氨基酸887-1051。
根据另一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是β-酮还原酶(KR)结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQ ID NO:5的氨基酸4729-4974,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ ID NO:6的氨基酸1143-1393,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636，和SEQID NO:7的氨基酸1810-2055。根据这个实施方案，优选所述KR结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQ ID NO:5的氨基酸4729-4974,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ ID NO:6的氨基酸1143-1393,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636，和SEQ ID NO:7的氨基酸1810-2055。
根据另一个实施方案，所述epothilone合酶结构域是甲基转移酶(MT)结构域，其包含与SEQ ID NO:6的氨基酸2671-3045基本相似的氨基酸序列。根据这个实施方案，优选所述MT结构域包含SEQ IDNO:6的氨基酸2671-3045。
根据另一个实施方案，所述epothilone合成酶结构域是硫酯酶(TE)结构域，其包含与SEQ ID NO:7的氨基酸2165-2439基本相似的氨基酸序列。根据这个实施方案，优选所述TE结构域包含SEQ IDNO:7的氨基酸2165-2439。
本发明的其它方面和优点对于那些本领域的技术人员，在研究了本发明的下列描述和非限制性实施例后将是显而易见的。
                   定义
在本发明的描述中，将使用下列术语，并做如下定义。
相关联/可操作连接：指物理或功能相关的两种DNA序列。例如，如果将启动子或调控DNA序列与编码RNA或蛋白质的DNA可操作连接或放置，以至于调控DNA序列将影响编码或结构DNA序列的表达水平，则该启动子或调控序列被认为是与该DNA序列“相关联”。
嵌合基因：重组DNA序列，其中启动子或调控DNA序列与编码mRNA或表达为蛋白质的DNA序列可操作连接，或与之相关联，以至于调控DNA序列能够调控该相关联的DNA序列的转录或表达。正如在自然界中发现的，嵌合基因的调控DNA序列通常不与该相关联的DNA序列可操作连接的。
编码DNA序列：在有机体中翻译成蛋白质的DNA序列。
结构域：聚酮化合物合酶中对于特定的独特活性必需的那部分。例子包括酰基载体蛋白(acyl carrier protein,ACP)、β-酮合酶(β-ketosynthase,KS)、酰基转移酶(acyltransferae,AT)、β-酮还原酶(β-ketoreductase,KR)、脱水酶(dehydratase,DH)、烯酰基还原酶(enoylreductase,ER)、和硫酯酶(thioesterase,TE)结构域。
Epothilone：由细菌纤维堆囊菌菌株So ce90天然产生的16元大环聚酮化合物，模仿紫杉醇的生物学效应。在本申请中，“epothilone”指聚酮化合物类，包括epothiloneA和epothiloneB，以及它们的类似物诸如WO98/25929中描述的那些。
Epothilone合酶：负责epothilone生物合成的聚酮化合物合酶。
基因：位于基因组内，除了上述编码DNA序列，还包括主要是调控DNA序列(负责调控编码DNA序列的表达即转录和翻译的DNA序列)的确定区域。
异源DNA序列：与导入的宿主细胞天然不相关联的DNA序列，包括天然DNA序列的非自然产生的多拷贝。
同源DNA序列：与导入的宿主细胞天然相关联的DNA序列。
同源重组：同源DNA分子之间互相交换DNA片段。
分离的：在本发明的内容中，分离的核酸分子或分离的酶是由人工实现，脱离其自然环境存在并因而不是天然产物的核酸分子或酶。分离的核酸分子或酶可以以纯化形式存在，或者可以在非天然环境诸如重组宿主细胞中存在。
模块：编码单轮聚酮化合物生物合成(即一个缩合步骤和所有与此有关的β-羰基处理步骤)需要的所有独特活性的基因元件。每个模块编码ACP、KS、和AT活性以实现生物合成的缩合部分，编码选定的缩合后活性以进行β-羰基处理。
NRPS：非核糖体多肽合成酶，是负责将氨基酸加入到次级代谢物中的酶活性，包括，例如，氨基酸腺苷酸化、异构化、N-甲基化、环化、肽酰基载体蛋白、和缩合结构域的复合物。有功能的NRPS催化将氨基酸加入到次级代谢物中。
NRPS基因：编码在一个或多个相容的控制元件的指导下产生有功能的次级代谢物(例如epothiloneA和B)的NRPS的一个或多个基因。
核酸分子：可以从任何来源分离的单链或双链DNA或RNA的线性片段。在本发明的内容中，核酸分子优选是DNA片段。
ORF：开放阅读框架。
PKS：聚酮化合物合酶，是负责聚酮化合物生物合成的酶活性(结构域)，包括，例如酮还原酶、脱水酶、酰基载体蛋白、烯酰基还原酶、酮脂酰ACP合酶、和酰基转移酶的复合物。有功能的PKS催化聚酮化合物的合成。
PKS基因：当在一个或多个相容的控制元件的指导下，编码产生有功能的聚酮化合物(如epothiloneA和B)需要的各种多肽的一个或多个基因。
基本相似：对于核酸，是指具有与参考核酸分子至少60％序列相同的核酸分子。在优选的实施方案中，基本相似的DNA序列与参考DNA序列至少80％相同；在更优选的实施方案中，基本相似的DNA序列与参考DNA序列至少90％相同；而在最优选的实施方案中，基本相似的DNA序列与参考DNA序列至少95％相同。基本相似的DNA序列优选编码具有与参考DNA序列编码的蛋白质或肽基本相同活性的蛋白质或肽。基本相似的核苷酸序列通常可与参考核酸分子或它们的片段在下列条件下杂交：在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M NaPO4pH7.0、1mM EDTA中于50℃杂交；用2×SSC、1％SDS于50℃漂洗。对于蛋白质或肽，基本相似的氨基酸序列是与参考蛋白质或肽的氨基酸序列至少90％相同而且具有与参考蛋白质或肽基本相同活性的氨基酸序列。
转化：将异源核酸导入宿主细胞或有机体的过程。
经转化的/转基因的/重组的：指已经导入了异源核酸分子的宿主有机体诸如细菌。核酸分子可以稳定的整合到宿主的基因组中，或者核酸分子也可以作为染色体外分子存在。这样的染色体外分子可以自主复制。经转化的细胞、组织、或植株应理解为不仅包含转化过程的终产物，而且还有它的转基因后代。“非转化的”、“非转基因的”、或“非重组的”宿主指野生型有机体，即细菌，其中不含有异源核酸分子。
核苷酸由它们的碱基依照下列标准缩写表示：腺嘌呤(adenine,A)，胞嘧啶(cytosine,C)，胸腺嘧啶(thymine,T)，和鸟嘌呤(guanine,G)。氨基酸类似的依照下列标准缩写表示：丙氨酸(alanine；Ala；A)，精氨酸(arginine；Arg；R)，天冬酰胺(asparagine；Asn；N)，天冬氨酸(aspartic acid；Asp；D)，半胱氨酸(cysteine；Cys；C)，谷氨酰胺(glutamine；Gln；Q)，谷氨酸(glutamicacid；Glu；E)，甘氨酸(glycine；Gly；G)，组氨酸(histidine；His；H)，异亮氨酸(isoleucine；Ile；I)，亮氨酸(leucine；Leu；L)，赖氨酸(lysine；Lys；K)，甲硫氨酸(methionine；Met；M)，苯丙氨酸(phenylalanine；Phe；F)，脯氨酸(proline；Pro；P)，丝氨酸(serine；Ser；S)，苏氨酸(threonine；Thr；T)，色氨酸(trytophan；Trp；W)，酪氨酸(tyrosine；Tyr；Y)，和缬氨酸(valine；Val；V)。此外，(Xaa；X)代表任何氨基酸。
                  序列表中序列的描述
SEQ ID NO:1是含有22个开放阅读框架(ORF)的68750bp毗连序列群的核苷酸序列，包括epothilone生物合成基因。
SEQ ID NO:2是由epoA(SEQ ID NO:1的核苷酸7610-11875)编码的第一类聚酮化合物合酶(EPOS A)的蛋白质序列。
SEQ ID NO:3是由epoP(SEQ ID NO:1的核苷酸11872-16104)编码的非核糖体肽合成酶(EPOS P)的蛋白质序列。
SEQ ID NO:4是由epoB(SEQ ID NO:1的核苷酸16251-21749)编码的第一类聚酮化合物合酶(EPOS B)的蛋白质序列。
SEQ ID NO:5是由epoC(SEQ ID NO:1的核苷酸21746-43519)编码的第一类聚酮化合物合酶(EPOS C)的蛋白质序列。
SEQ ID NO:6是由epoD(SEQ ID NO:1的核苷酸43524-54920)编码的第一类聚酮化合物合酶(EPOS D)的蛋白质序列。
SEQ ID NO:7是由epoE(SEQ ID NO:1的核苷酸54935-62254)编码的第一类聚酮化合物合酶(EPOS E)的蛋白质序列。
SEQ ID NO:8是由epoF(SEQ ID NO:1的核苷酸62369-63628)编码的细胞色素P450加氧酶同源物(EPOS F)的蛋白质序列。
SEQ ID NO:9是由orf1(SEQ ID NO:1的核苷酸1-1826)编码的部分蛋白质序列(部分Orf1)。
SEQ ID NO:10是由orf2(SEQ ID NO:1反向互补链的核苷酸3171-1900)编码的蛋白质序列(Orf2)。
SEQ ID NO:11是由orf3(SEQ ID NO:1的核苷酸3415-5556)编码的蛋白质序列(Orf3)。
SEQ ID NO:12是由orf4(SEQ ID NO:1反向互补链的核苷酸5992-5612)编码的蛋白质序列(Orf4)。
SEQ ID NO:13是由orf5(SEQ ID NO:1的核苷酸6226-6675)编码的蛋白质序列(Orf5)。
SEQ ID NO:14是由orf6(SEQ ID NO:1的核苷酸63779-64333)编码的蛋白质序列(Orf6)。
SEQ ID NO:15是由orf7(SEQ ID NO:1反向互补链的核苷酸64290-63853)编码的蛋白质序列(Orf7)。
SEQ ID NO:16是由orf8(SEQ ID NO:1的核苷酸64363-64920)编码的蛋白质序列(Orf8)。
SEQ ID NO:17是由orf9(SEQ ID NO:1反向互补链的核苷酸64727-64287)编码的蛋白质序列(Orf9)。
SEQ ID NO:18是由orf10(SEQ ID NO:1的核苷酸65063-65767)编码的蛋白质序列(Orf10)。
SEQ ID NO:19是由orf11(SEQ ID NO:1反向互补链的核苷酸65874-65008)编码的蛋白质序列(Orf11)。
SEQ ID NO:20是由orf12(SEQ ID NO:1反向互补链的核苷酸66338-65871)编码的蛋白质序列(Orf12)。
SEQ ID NO:21是由orf13(SEQ ID NO:1的核苷酸66667-67137)编码的蛋白质序列(Orf13)。
SEQ ID NO:22是由orf14(SEQ ID NO:1的核苷酸67334-68251)编码的蛋白质序列(Orf14)。
SEQ ID NO:23是由orf15(SEQ ID NO:1的核苷酸68346-68750)编码的部分蛋白质序列(部分Orf15)。
SEQ ID NO:24是通用的反向PCR引物序列。
SEQ ID NO:25是通用的正向PCR引物序列。
SEQ ID NO:26是NH24末端“B”PCR引物序列。
SEQ ID NO:27是NH2末端“A”PCR引物序列。
SEQ ID NO:28是NH2末端“B”PCR引物序列。
SEQ ID NO:29是pEPO15-NH6“B”PCR引物序列。
SEQ ID NO:30是pEPO15-H2.7“A”PCR引物序列。
                        保藏信息
下列物质已依照国际承认用于专利程序的微生物保藏布达佩斯条约，已经储存于农业研究服务中心(Agricultural Research Service)，专利培养物收藏中心(Patent Culture Collection(NRRL)),1815北方大学街，Peoria，伊利诺斯州61604。所有对获取保藏物的限制在取得专利的授权后将消除。
保藏物    保藏号            储存日期
pEPO15    NRRL B-30033    1998年6月11日
pEPO32    NRRL B-30119    1999年4月16日
                 发明的详细描述
可以使用本发明的技术分离得到涉及epothilone生物合成的基因。分离epothilone生物合成基因的优选步骤，需要从经鉴定产生epothiloneA和B的有机体中分离基因组DNA，并将分离的合适质粒或载体上的DNA转移到通常不产生聚酮化合物的宿主有机体中，随后鉴定具有epothilone生产能力的经转化的宿主菌落。使用诸如λ::Tn5转座子诱变(de Bruijn和Lupski，基因(Gene)27:131-149(1984))技术，转化的赋予epothilone的DNA的精确区域可以更准确确定。可替代地或额外地，可以将转化的赋予epothilone的DNA切割成较小的片段，而且可以进一步鉴定维持授予epothilone能力的最小片段。然而，缺乏epothilone生产能力的宿主有机体可能是与产生聚酮化合物的物种不同的物种，这种技术的变更涉及将宿主DNA转化到epothilone生产能力已经被诱变破坏的相同宿主中。在这种方法中，产生epothilone的有机体被突变了，并分离得到不产生epothilone的突变体。然后将这些突变体用从产生epothilone的亲本菌株中分离的基因组DNA弥补。
可以用来分离epothilone生物合成需要的基因的进一步的实例，是使用转座子诱变来产生产生epothilone的有机体的突变体，其被诱变后不能产生聚酮化合物。这样，宿主基因组负责产生epothilone的区域被转座子标以标签，而且可以回收并作为探针使用来从亲代菌株中分离天然基因。由于它们与序列已知的生物合成基因诸如利福霉素或soraphen生物合成的PKS基因的序列同源性，可以分离得到合成聚酮化合物需要的、且与已知的PKS基因相似的PKS基因。利用同源性的合适分离技术，包括由DNA杂交进行常规文库筛选。
可以从在已知聚酮化合物合成中起作用的基因或其它DNA序列中得到的DNA片段，作为优选的探针分子使用。一种优选的探针分子包括编码soraphen PKS第四个模块的酮合酶结构域的1.2kb SmaⅠDNA片段(美国专利号5,716,849)，更优选的探针分子包括利福霉素PKS第一和第二模块的β-酮脂酰合酶结构域(Schupp等人，FEMS微生物通讯159:201-207(1998))。这些探针可以用来探测产生epothilone的微生物的基因库，以分离负责epothilone生物合成的PKS基因。
尽管众所周知分离PKS基因通常很困难，尽管预期分离epothilone生物合成基因将特别困难，通过使用此说明书中描述的方法，可以令人惊讶的从产生epothiloneA和B的微生物中克隆得到该聚酮化合物的生物合成基因。使用此说明书中描述的基因操作的方法和重组产物，可以修饰和在转基因宿主有机体中表达被克隆的PKS基因。
可以在异源宿主中表达分离的epothilone生物合成基因，以比天然宿主更高效的生产聚酮化合物。用于这些基因操作的技术，对于不同的可获得的宿主是特异的，而且本领域的技术人员是知道的。例如，使用诸如那些描述于McDaniel等人，科学(Science)262:1546-1550(1993)和Kao等人，科学265:509-512(1994)(此处引用作为参考)的技术，可以在链霉菌和其它放线菌中表达异源基因。还可见，Rowe等人，基因(Gene)216:215-226(1998)；Holmes等人，欧洲分子生物学杂志(EMBO Journal)12(8):3183-3191(1993)和Bibb等人，基因38:215-226(1985)，此处引用作为参考。
或者，还可以在其它宿主有机体诸如假单胞菌和大肠杆菌中表达负责聚酮化合物生物合成的基因，即epothilone生物合成基因。用于这些基因操作的技术对于不同的可获得的宿主是特异的，而且本领域的技术人员是知道的。例如，使用pT7-7载体(使用T7启动子)，已经在大肠杆菌中成功的表达了PKS基因。见，Tabor等人，美国国家科学院进展(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)82:1074-1078(1985)，此处引用作为参考。此外，可以用表达载体pKK223-3和pKK223-2在大肠杆菌中表达异源基因，或以转录或以翻译融合方式，在tac或trc启动子之后。对于编码多ORF的操纵子的表达，最简单的步骤是以转录融合方式将操纵子***到载体诸如pKK223-3中，使得能够使用异源基因的同类核糖体结合位点。用于在革兰氏阳性物种诸如芽孢杆菌中过量表达的技术，本领域的技术人员也是知道的，而且可以用于本发明中(Quax等人，工业微生物学：基础和应用分子遗传学，编辑Baltz等人，美国微生物学学会，华盛顿(1993))。
其它可以与本发明的epothilone生物合成基因使用的表达***，包括酵母和杆状病毒表达***。见，例如，“重组蛋白质在酵母中的表达”，P.E.Sudbery，生物技术的流行观点(Curr.Opin.Biotechnol.)7(5):517-524(1996)；“在酵母中表达重组蛋白质的方法”，Mackay等人，编辑：Paul R.Carey，蛋白质工程评论(Protein Eng.Des.)105-153，出版商：Academic，圣地亚哥，加利福尼亚(1996)；“异源基因产物在酵母中的表达”，Pichuantes等人，编辑：J.L.Cleland,C.S.Craik，蛋白质工程(Protein Eng.)129-161，出版商：Wiley-Liss，纽约，纽约(1996)；WO98/27203；Kealey等人，美国国家科学院进展95:505-509(1998)；“昆虫细胞培养：蛋白质生产的最新进展，生物工程挑战和意义”，Palomares等人，编辑：EnriqueGalindo；Octavio T.Ramirez，高级生物工程(Adv.Bioprocess Eng.)第2卷，Invited Pap.Int.Symp.，第二版(1998)25-52，出版商：Kluwer,Dordrecht,Neth；“杆状病毒表达载体”，Donald L.Jarvis,编辑：Lois K.Miller，杆状病毒(Baculoviruses)389-431，出版商：Plenum，纽约，纽约(1997)；“使用杆状病毒/昆虫表达***生产异源蛋白质”，Grittiths等人，分子生物学方法(Methods Mol.Biol.)(N.J.Totowa)75(基础细胞培养方案(第二版))427-440(1997)；和“昆虫细胞表达技术”，Verne A.Luckow，蛋白质工程183-218，出版商：Wiley-Liss，纽约，纽约(1996)；所有文献均此处引用作为参考。
在异源宿主中表达PKS基因的另一个要考虑的问题，是PKS酶的翻译后修饰(在它们能够合成聚酮化合物之前要磷酸泛酰巯基乙胺基化)需要酶。然而，负责第一类PKS酶的这种修饰的酶，磷酸泛酰巯基乙胺基(P-pant)转移酶在许多宿主诸如大肠杆菌中通常不存在。这个问题可以通过P-pant转移酶与PKS基因在异源宿主中的共表达解决，如Kealey等人，美国国家科学院进展95:505-509(1998)描述的，此处引用作为参考。
因此，为了生产聚酮化合物，选择宿主有机体的重要标准是它的操作容易，生长(即发酵)迅速，拥有适当的加工诸如翻译后修饰的分子机制，和对过量表达聚酮化合物不敏感。最优选的宿主有机体是放线菌诸如链霉菌菌株。其它优选的宿主有机体是假单胞菌和大肠杆菌。生产聚酮化合物的上述方法比制备该类化合物使用的现行技术具有明显优势。这些优势包括生产成本更低，生产更大量的化合物的能力，和生产优选生物学对映体的化合物的能力，这与有机合成生产不可避免的外消旋混合物相反。由异源宿主产生的化合物可以用于医疗(例如用epothilone治疗癌症)以及农业应用。
                      实验
本发明将由下列详细实施例作为参考进一步描述。提供这些实施例只是为了例证，而并不是为了限制(除非特殊说明)。此处使用的常规重组DNA和分子克隆技术是本领域的技术人员熟知的，而且由Ausubel(编辑)，分子生物学现行方案(Current Protocols inMolecular Biology),John Wiley and Sons Inc.(1994)；T.Maniatis,E.F.Fritsch和J.Sambrook，分子克隆：实验室手册(MolecularCloning:A Laboratory Manual)，冷泉港实验室，冷泉港，纽约(1989)；和T.J.Silhavy,M.L.Berman，和L.W.Enquist，基因融合实验(Experiments with Gene Fusion)，冷泉港实验室，冷泉港，纽约(1994)描述。
实施例1：生产epothilone的纤维堆囊菌菌株的培养
将纤维堆囊菌菌株90(DSM 6773,Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen,Braunschweig)在SolE培养基(0.35％葡萄糖，0.05％胰蛋白胨，0.15％MgSO4·7H2O,0.05％硫酸铵，0.1％CaCl2,0.006％K2HPO4,0.01％连二亚硫酸钠，0.0008％Fe-EDTA,1.2％HEPES,3.5％[vol/vo/]经灭菌的稳定期纤维堆囊菌培养物的上清液)pH调到7.4的琼脂平板上划线，并于30℃培养。挑取来自1cm2的细胞，接种到5ml G51t液体培养基(0.2％葡萄糖，0.5％淀粉，0.2％胰蛋白胨，0.1％probionS,0.05％CaCl2·2H2O,0.05％MgSO4·7H2O,1.2％HEPES,pH调到7.4)中，并于30℃振摇225rpm培养。4天后，将培养物转移到50ml G51t中，并如上所述培养5天。用此培养物接种500ml G51t，并如上所述培养6天。将此培养物以4000rpm离心10分钟，并将细胞沉淀重悬于50ml G51t中。
实施例2：细菌人工染色体文库的构建
为了构建Bac文库，将如实施例1所述培养的纤维堆囊菌细胞包埋于琼脂糖块中，裂解，并将释放出来的基因组DNA用限制酶HindⅢ部分消化。在琼脂糖凝胶上用脉冲电泳分离经消化的DNA。从琼脂糖凝胶中分离大片段DNA(大约90-150kb)，并连接到载体pBelobacⅡ中。pBelobacⅡ包含编码氯霉素抗性的基因、位于lacZ基因中在适当培养基上提供蓝白斑选择的多克隆位点、以及复制和在每个细胞中维持一个或两个质粒拷贝需要的基因。使用常规电穿孔技术，将连接混合物转化大肠杆菌DH10B电感受态细胞。将氯霉素抗性重组体(白斑、lacZ突变)菌落转移到带正电的384 3×3栅格的尼龙滤膜上。裂解克隆并将DNA交联到滤膜上。将同一克隆以液体培养物的形式保存于-80℃。
实施例3：在纤维堆囊菌90的Bac文库中筛选第一类聚酮化合物合酶的相关序列
使用常规Southern杂交步骤探测Bac文库滤膜。使用的探针编码利福霉素聚酮化合物合酶第一和第二模块的β-酮脂酰合酶结构域(Schupp等人，FEMS微生物学通讯159:210-207(1998))。以质粒pNE95(pNE95即Schupp等人(1998)中描述的粘粒2)作为模板，使用每个酮合酶结构域两侧的引物通过PCR产生探针DNA。从0.5％琼脂糖凝胶分离得到25ng PCR扩增的DNA，并使用随机引物标记试剂盒(Gibco-BRL,Methesda,MD，美国)按照供应商的指示用32P-dCTP标记。杂交于65℃进行36小时，并在高度严谨条件下洗膜(0.1×SSC和0.5％SDS于65℃20分钟3次)。将经标记的斑点暴露于磷光屏上，并在Phospholmager445SI上检测信号(屏和445SI购自MolecularDynamics)。结果某些Bac克隆与探针强杂交。选择这些克隆，并在5ml Luria肉汤(LB)培养基中于37℃培养过夜。使用典型的微量制备步骤，从感兴趣的Bac克隆中分离Bac DNA。将细胞重悬于200μl溶菌酶溶液(50mM葡萄糖，10mM EDTA,25mM Tris-HCl,5mg/ml溶菌酶)，在400μl裂解液(0.2N NaOH和2％SDS)中裂解，沉淀蛋白质(3.0M醋酸钾，用乙酸调到pH5.2)，并用异丙醇沉淀Bac DNA。将DNA重悬于20μl无核酸酶的蒸馏水中，用BamHⅠ(New England Biolabs,Inc.)限制酶消化，并在0.7％琼脂糖凝胶上分离。如上所述通过Southern杂交将凝胶转膜，并在如上所述的条件下用编码soraphen聚酮化合物合酶第四模块的酮合酶结构域的1.2kb SmaⅠDNA片段作为探针(见，美国专利号5,716,849)探测。观察到五个不同的杂交样式。每种选择一个克隆作为代表，并分别命名为pEPO15、pEPO20、pEPO30、pEPO31、和pEPO33。
实施例4：pEPO15、pEPO20、pEPO30、pEPO31、和pEPO33的BamHⅠ片段的亚克隆
用BamHⅠ消化五个选择的Bac克隆的DNA，并将随机片段亚克隆到pBluescriptⅡSK+(Stragagene)的BamHⅠ位点。选择***片段大小在2-10kb之间的亚克隆，以测定***片段两侧末端的序列，并且还用如上所述的1.2SmaⅠ探针探测。将与已知聚酮化合物合酶具有高度序列同源性和/或与soraphen酮合酶结构域强杂交的亚克隆用于基因破坏实验。
实施例5：制备纤维堆囊菌菌株So ce90的链霉素抗性自发突变体
取0.1ml纤维堆囊菌菌株So ce90在液体培养基G52-H(0.2％酵母提取物，0.2％脱脂大豆粉，0.8％土豆淀粉，0.2％葡萄糖，0.1％MgSO4·7H2O,0.1％CaCl2·2H2O,0.008％Fe-EDTA，用KOH调到pH7.4)中培养3天的培养物，铺在添加100μg/ml链霉素的SolE培养基琼脂平板上。平板于30℃培养2星期。生长在这种培养基上的菌落是链霉素抗性的突变体，将其在含链霉素的相同琼脂培养基上划线并再一次培养以纯化。选择这些链霉素抗性突变体中的一个，并命名为BCE28/2。
实施例6：纤维堆囊菌BCE28/2中的基因破坏(使用亚克隆的BamHⅠ片段)
分离如上所述由五个选择的Bac克隆产生的亚克隆的BamHⅠ***片段，并连接到质粒pCIB132(见美国专利号5,716,849)的单一BamHⅠ位点。将携带***片段的pCIB132衍生物转化含辅助质粒pUZ8的大肠杆菌ED8767(Hedges和Matthew，质粒(Plasmid)2:269-278(1979))。使用转化体作为接合实验中的供体，而纤维堆囊菌BCE28/2作为受体。为了接合，将5-10×109个在液体培养基G51b(G51b相当于G51t，其中用蛋白胨替代胰蛋白胨)中于30℃培养的纤维堆囊菌BCE28/2稳定期早期培养物(达到大约5×108细胞/ml)，以1∶1的细胞比率，与含pCIB132衍生物(携带亚克隆的BamHⅠ片段)和辅助质粒pUZ8的大肠杆菌ED8767的指数晚期培养物(在LB液体培养基中)混合。然后将混合的细胞以4000rpm离心10分钟，并重悬于0.5ml G51b培养基中。然后将此细胞悬浮液滴一滴在含50mg/l卡那霉素的So1E琼脂平板的中央铺板。于30℃培养24小时后收获细胞，并重悬于0.8mlG51b培养基，并将0.1-0.3ml此悬浮液在含腐草霉素(30mg/l)、链霉素(300mg/l)、和卡那霉素(50mg/l)的选择性So1E固体培养基上铺板。使用链霉素进行供体大肠杆菌菌株的负选择。于30℃培养8-12天后，用塑料环分离生长在这种选择培养基上的菌落，并在相同琼脂培养基上划线和培养以进行第二轮选择和纯化。于30℃培养7天后生长在此选择琼脂培养基上的菌落衍生的培养物，是通过携带亚克隆BamHⅠ片段的pCIB132衍生物的接合转移获得了腐草霉素抗性的纤维堆囊菌BCE28/2的转接合体。
通过Southern杂交检验证实pCIB132衍生的质粒通过同源重组整合到了纤维堆囊菌BCE28/2的染色体中。为了这个实验，应用Pospiech和Neumann,Trends Genet.11:217(1995)描述的方法，每种转移BamHⅠ片段的转接合体取5-10个分离完整DNA(于培养基G52-H中生长了3天的10ml培养物)。为了Southern杂交转膜，将如上所述分离的DNA用限制酶BglⅡ、ClaⅠ、或NotⅠ切割，并使用相应的BamHⅠ***片段或pCIB132作为32P标记的探针。
实施例7：分析整合的BamHⅠ片段对纤维堆囊菌在基因破坏后对epothilone生产的影响
用无菌塑料环将生长在第二轮选择的选择性So1E平板表面上大约1cm-的转接合细胞(见实施例6)转移到10ml G52-H培养基中(装在50ml Erlenmeyer烧瓶中)。于30℃和180rpm培养3天后，将培养物转移到50ml G52-H培养基中(装在200ml Erlenmeyer烧瓶中)。于30℃和180rpm培养4-5天后，将10ml此培养物转移到50ml 23B3培养基(0.2％葡萄糖，2％土豆淀粉，1.6％脱脂大豆粉，0.0008％Fe-EDTA钠盐，0.5％HEPES(4-(2-羟乙基)-哌嗪-1-乙烷磺酸)，2％vol/vol聚苯乙烯树脂XAD16(Rohm和Haas)，用NaOH调pH到7.8)中(装在200ml Erlenmeyer烧瓶中)。
培养物于30℃和180rpm培养7天后，进行产生的epothilone的定量实验。将全部培养液通过150μm尼龙滤膜抽滤过滤。然后将留在滤膜上的树脂重悬于10ml异丙醇，并通过将悬浮液以180rpm振摇1小时进行抽提。从此悬浮液中取出1ml，并在Eppendorff微量离心机中以12,000rpm离心。通过HPLC和用UV_DAD检测仪(用Waters-Symetry C18层析柱进行HPLC并用0.02％磷酸60％-0％和乙腈40％-100％的梯度)于250nm检测的方法测定其中的epothiloneA和B的量。
以上述方法测试含有从pEPO15亚克隆的三种不同的BamHⅠ整合片段的转接合体，即含有质粒pEPO15-21的BamHⅠ片段的转接合体、含有质粒pEPO15-4-5的BamHⅠ片段的转接合体、和含有质粒pEPO15-4-1的BamHⅠ片段的转接合体。HPLC分析揭示所有转接合体不再产生epothiloneA和B。相反的，在整合有pEPO20、pEPO30、pEPO31、pEPO33的BamHⅠ片段的转接合体和亲本菌株BCE28/2中检测到epothiloneA和B浓度为2-4mg/l。
实施例8：测定克隆的片段的核苷酸序列并构建毗连序列群
A．质粒pEPO15-21的BamHⅠ***片段
从大肠杆菌DH10B[pEPO15-21]菌株中分离质粒DNA，并测定***pEPO15-21的2.3kb BamHⅠ片段的核苷酸序列。自动DNA测序是在双链DNA模板上通过双脱氧核苷酸链终止方法进行的，使用应用Applied Biosystems377型测序仪。使用的引物是通用反向引物(5’GGA AAC AGC TAT GAC CAT G3’(SEQ ID NO:24))和通用正向引物(5’GTA AAA CGA CGG CCA GT3’(SEQ ID NO:25))。在随后几轮测序反应中，使用为先前测定的序列的3’末端设计而定制合成的寡核苷酸来延伸并连接毗连序列群。两条链都完全测序，而且每个核苷酸至少测序两次。使用3.0版Sequencher程序(Gene Codes Corporation)编辑核苷酸序列，并使用威斯康星遗传学计算机组程序(WisconsinGenetics Computer Group programs)分析。2213-bp***片段的核苷酸序列相应于SEQ ID NO:1的核苷酸20779-22991。
B．质粒pEPO15-4-1的BamHⅠ***片段
从大肠杆菌DH10B[pEPO15-4-1]菌株中分离质粒DNA，并如上(A)所述测定***pEPO15-4-1的3.9kb BamHⅠ片段的核苷酸序列。3909-bp***片段的核苷酸序列相应于SEQ ID NO:1的核苷酸16876-20784。
C．质粒pEPO15-4-5的BamHⅠ***片段
从大肠杆菌DH10B[pEPO15-4-5]菌株中分离质粒DNA，并如上(A)所述测定***pEPO15-4-5的2.3kb BamHⅠ片段的核苷酸序列。2233-bp***片段的核苷酸序列相应于SEQ ID NO:1的核苷酸42528-44760。
实施例9：含有epothilone生物合成基因的pEPO15中的DNA片段的亚克隆和排序
将pEPO15用限制酶HindⅢ完全消化，并将产生的片段亚克隆到已经用HindⅢ切割且用小牛肠碱性磷酸酶去磷酸化的pBluescriptⅡSK-或pNEB193(New England Biolabs)中。产生了六个不同的克隆，并命名为pEPO15-NH1、pEPO15-NH2、pEPO15-NH6、pEPO15-NH24(都由pNEB193衍生)、和pEPO15-H2.7和pEPO15-H3.0(都由pBluescriptⅡSK-衍生)。
分离并DIG标记(非放射性DNA标记和检测***，BoehringerMannheim)pEPO15-21的BamHⅠ***片段，并在DNA杂交实验中在高度严谨条件下作为针对pEPO15-NH1、pEPO15-NH2、pEPO15-NH6、pEPO15-NH24、pEPO15-H2.7和pEPO15-H3.0的探针使用。对pEPO15-NH24检测到强杂交信号，说明pEPO15-NH24包含pEPO15-21。
如上所述分离并DIG标记pEPO15-4-1的BamHⅠ***片段，并在DNA杂交实验中在高度严谨条件下作为针对pEPO15-NH1、pEPO15-NH2、pEPO15-NH6、pEPO15-NH24、pEPO15-H2.7和pEPO15-H3.0的探针使用。对pEPO15-NH24和pEPO15-H2.7检测到强杂交信号。由pEPO15-NH24和pEPO15-H2.7的一个末端得到的核苷酸序列信息还与先前测定的pEPO15-4-1的BamHⅠ***片段的序列完全一致。这些实验证明pEPO15-4-1(含有一个内部的HindⅢ位点)与pEPO15-H2.7和pEPO15-NH24重叠，而且pEPO15-H2.7和pEPO15-NH24是以这个顺序相邻的。
如上所述分离并DIG标记pEPO15-4-5的BamHⅠ***片段，并在DNA杂交实验中在高度严谨条件下作为针对pEPO15-NH1、pEPO15-NH2、pEPO15-NH6、pEPO15-NH24、pEPO15-H2.7和pEPO15-H3.0的探针使用。对pEPO15-NH2检测到强杂交信号，说明pEPO15-NH2包含pEPO15-4-5。
由pEPO15-NH2的两个末端和pEPO15-H24不与pEPO15-4-1重叠的那个末端得到核苷酸序列信息。朝向HindⅢ位点的PCR引物NH24末端“B”:GTGACTGGCGCCTGGAATCTGCATGAGC(SEQ ID NO:26)、NH2末端“A”:AGCGGGAGCTTGCTAGACATTCTGTTTC(SEQ ID NO:27)、和NH2末端“B”:GACGCGCCTCGGGCAGCGCCCCAA(SEQ ID NO:28)是根据这些序列设计的，并用于以pEPO15和在个别实验中以纤维堆囊菌So ce90基因组DNA作为模板的扩增反应。以NH24末端“B”和NH2末端“A”作为引物对，在两种模板中都发现特异扩增。将扩增物克隆到pBluescriptⅡSK-中并完全测序。扩增物的序列相同，而且还与pEPO15-NH24和pEPO15-NH2的末端序列完全一致，并在HindⅢ位点融合，确定了pEPO15-NH2和pEPO15-NH24的HindⅢ片段是以此顺序相邻的。
如上所述分离并DIG标记pEPO2.7的HindⅢ***片段，并在DNA杂交实验中在高度严谨条件下作为针对经NotⅠ消化的pEPO15的探针使用。大小大约为9kb的一个NotⅠ片段显示强杂交信号，将其进一步亚克隆到已经用NotⅠ消化且用小牛肠碱性磷酸酶去磷酸化的pBluescriptⅡSK-中，从而产生pEPO15-N9-16。如上所述分离并DIG标记pEPO15-N9-16的NotⅠ***片段，并在DNA杂交实验中在高度严谨条件下作为针对pEPO15-NH1、pEPO15-NH2、pEPO15-NH6、pEPO15-NH24、pEPO15-H2.7和pEPO15-H3.0的探针使用。对pEPO15-NH6、以及预期的克隆pEPO15-H2.7和pEPO15-NH24检测到强杂交信号。由pEPO15-NH6的两个末端和pEPO15-H2.7不与pEPO15-4-1重叠的那个末端得到核苷酸序列信息。设计朝向HindⅢ位点的PCR引物并用于以pEPO15和在个别实验中以纤维堆囊菌So ce90基因组DNA作为模板的扩增反应。以pEPO15-NH6末端“B”:CACCGAAGCGTCGATCTGGTCCATC(SEQ ID NO:29)和pEPO15-H2.7末端“A”:CGGTCAGATCGACGACGGGCTTTCC(SEQ ID NO:30)作为引物对，在两种模板中都发现特异扩增。将扩增物克隆到pBluescriptⅡSK-中并完全测序。扩增物的序列是相同的，而且还与pEPO15-NH6和pEPO15-NH2.7的末端序列完全一致，在HindⅢ位点融合，确定了pEPO15-NH6和pEPO15-NH2.7的HindⅢ片段是以此顺序相邻的。
所有这些实验，综合起来，确定了覆盖大约55kb区域并由pEPO15-NH6、pEPO15-H2.7、pEPO15-NH24、和pEPO15-NH2的HindⅢ***片段以此顺序组成的HindⅢ片段毗连序列群。剩余的两个HindⅢ亚克隆的***片段(命名为pEPO15-NH1和pEPO15-H3.0)未发现是这个毗连序列群的部分。
实施例10：覆盖epothilone生物合成基因的亚克隆毗连序列群的进一步延伸
将pEPO15-NH2***片段下游末端产生、并因此代表实施例9中描述的亚克隆毗连序列群的下游末端的大约2.2kb BamHⅠ-HindⅢ片段分离出来、DIG标记、并用于针对经多种酶消化的pEPO15和pEPO15-NH2DNA的Southern杂交实验。总是发现在两种目的DNA之间强杂交条带大小相同，说明克隆到pEPO15中的纤维堆囊菌So ce9O基因组DNA片段结束于位于pEPO15-NH2下游末端的HindⅢ位点。
使用已确定的步骤，在pScosTriplex-Ⅱ(Ji等人，基因组学(Genomics)31:185-192(1996))中构建纤维堆囊菌So ce90的粘粒DNA文库。简单的说，将纤维堆囊菌So ce90的高分子量基因组DNA用限制酶Sau3AⅠ部分消化以提供平均大小为大约40kb的片段，并连接到经BamHⅠ和XbaⅠ消化的pScosTriplex-Ⅱ中。连接混合物用GigapackⅢXL(Stratagene)包装，并用于转染大肠杆菌XL1 BlueMR细胞。
用所述大约2.2kb的BamHⅠ-HindⅢ片段(pEPO15-NH2***片段的下游末端产生、作为菌落杂交中的探针使用)筛选粘粒文库，选择到一个强杂交克隆，命名为pEPO4E7。
将pEPO4E7 DNA分离、用多种限制性内切酶消化、并用2.2kb BamHⅠ-HindⅢ片段在Southern杂交中探测。选择到一个大小大约为9kb的强杂交的NotⅠ片段，并亚克隆到pBluescriptⅡSK-以产生pEPO4E7-N9-8。进一步的Southern杂交实验揭示了pEPO4E7-N9-8大约9kb的NotⅠ***片段与pEPO15-NH2的NotⅠ-HindⅢ片段超过6kb重叠，而剩余的大约3kb HindⅢ-NotⅠ将延伸实施例9中描述的亚克隆毗连序列群。然而，末端测序揭示pEPO4E7-N9-8***片段的下游末端包含pScosTriplex-Ⅱ的BamHⅠ-NotⅠ多克隆位点，由此说明：pEPO4E7的基因组DNA***片段终止于HindⅢ-NotⅠ延伸片段中的Sau3AⅠ位点，而NotⅠ位点来自pScosTriplex-Ⅱ。
将pEPO4E7-N9-8的大约3kb HindⅢ-NotⅠ延伸亚片段衍生的大约1.6kb PstⅠ-SalⅠ片段(不含载体，只包含纤维堆囊菌So ce90衍生的序列)，作为针对实施例2中描述的细菌人工染色体文库的探针使用。除了先前分离的EPO15，还发现命名为EPO32的Bac克隆与该探针强杂交。将pEPO32分离、用多种限制性内切酶消化、并与大约1.6kb的PstⅠ-SalⅠ探针杂交。发现大小大约为13kb的HindⅢ-EcoRV片段与该探针强杂交，将其亚克隆到经HindⅢ和HincⅡ消化的pBluescriptⅡSK-中以产生pEPO32-HEV15。
根据pEPO15-NH2的下游末端序列和pEPO32-HEV15的上游(HindⅢ)末端序列设计寡核苷酸引物，并用于以pEPO4E7-N9-8为模板的测序反应。序列揭示了在常规限制性分析中检测不到的一个24bp小HindⅢ片段(EPO4E7-H0.02)的存在，分隔pEPO15-NH2下游末端的HindⅢ位点和pEPO32-HEV15上游末端的HindⅢ位点。
由此，描述于实施例9中的亚克隆毗连序列群延伸到了包括EPO4E7-H0.02的HindⅢ片段和pEPO32-HEV15的***片段，而且由pEPO15-NH6、pEPO15-H2.7、pEPO15-NH24、pEPO15-NH2、EPO4E7-H0.02和pEPO32-HEV15的***片段以此顺序组成。
实施例11：测定覆盖epothilone生物合成基因的亚克隆毗连序列群的核苷酸序列
如下测定实施例10中描述的亚克隆毗连序列群的核苷酸序列。
pEPO15-H2.7。从大肠杆菌DH10B[pEPO15-H2.7]菌株中分离质粒DNA，并测定pEPO15-H2.7的2.7kb BamHⅠ***片段的核苷酸序列。自动DNA测序在双链DNA模板上通过双脱氧核苷酸链终止方法进行，使用Applied Biosystems377型测序仪。使用的引物是通用反向引物(5’GGA AAC AGC TAT GAC CAT G3’(SEQ ID NO:24))和通用正向引物(5’GTA AAA CGA CGG CCA GT3’(SEQ ID NO:25))。在随后几轮测序反应中，使用为先前测定的序列的3’末端设计而定制合成的寡核苷酸来延伸并连接毗连序列群。
pEPO15-NH6、pEPO15-NH24和pEPO15-NH2。分离这些质粒的HindⅢ***片段并用于随机片段化，使用Hydroshear apparatus(GenomicInstrumentation Services,Inc.)以产生平均大小为1-2kb的片段。使用T4 DNA聚合酶和Klenow DNA聚合酶在三磷酸脱氧核苷酸存在时对片段进行末端修复，并用T4 DNA激酶在ribo-ATP存在时磷酸化。从琼脂糖凝胶中分离在1.5-2.2kb大小范围内的片段，并连接到经EcoRV切割和去磷酸化的pBluescriptⅡSK-中。使用通用反向引物和通用正向引物对随机亚克隆测序。
pEPO32-HEV15。将pEPO32-HEV15用HindⅢ和SspⅠ消化，分离得到包含纤维堆囊菌So ce90的大约13kb HindⅢ-EcoRV***片段和pBluescriptⅡSK-的0.3kb HincⅡ-SspⅠ片段的大约13.3kb片段，并用HaeⅢ部分消化以产生平均大小为1-2kb的片段。从琼脂糖凝胶中分离在1.5-2.2kb大小范围内的片段，并连接到经EcoRV切割和去磷酸化的pBluescriptⅡSK-中。使用通用反向引物和通用正向引物对随机亚克隆测序。
分析了色谱图并用Phred、Phrap和Consed程序(Ewing等人，基因组研究(Genome Res.)8(3):175-185(1998)；Ewing等人，基因组研究8(3):186-194(1998)；Gordon等人，基因组研究8(3):195-202(1998))装配成毗连序列群。填充毗连序列群缺口，分析序列差异，并对低准确度区域使用定制设计的用于原始亚克隆或从随机亚克隆文库中选定克隆测序的寡核苷酸引物重新测序。两条链都完全测序，而且每个碱基对的累计Phred得分至少40(置信度99.99％)。
该68750bp毗连序列群的核苷酸序列显示如SEQ ID NO:1。
实施例12：分析epothilone生物合成基因的核苷酸序列
发现SEQ ID NO:1包含22个ORF，详见下表1：
表1
 ORF 起始密码子 终止密码子     推导出来的蛋白质的同源性 推导出来的蛋白质可能的功能
  orf1 测序范围之外  1826
  orf2*  3171  1900 假设蛋白质sP:Q11037；DD-肽酶SP:P15555
  orf3  3415  5556 Na/H反向转运蛋白PID:D1017724     转运
  orf4*  5992  5612
  orf5  6226  6675
  epoA  7610  11875 第一类聚酮化合物合酶 epothilone合酶：形成噻唑环
  epoP  11872  16104 非核糖体肽合成酶 epothilone合酶：形成噻唑环
  epoB  16251  21749 第一类聚酮化合物合酶 epothilone合酶：形成聚酮化合物主链
  epoC  21746  43519 第一类聚酮化合物合酶 epothilone合酶：形成聚酮化合物主链
  epoD  43524  54920 第一类聚酮化合物合酶 epothilone合酶：形成聚酮化合物主链
  epoE  54935  62254 第一类聚酮化合物合酶 epothilone合酶：形成聚酮化合物主链
  epoF  62369  63628 细胞色素P450 epothilone大内酯氧化酶
  orf6  63779  64333
  orf7*  64290  63853
  orf8  64363  64920
  orf9*  64727  64287
  orf10  65063  65767
  orf11*  65874  65008
  orf12*  66338  65871
  orf13  66667  67137
  orf14  67334  68251 假设蛋白质GI:3293544；阳离子流出***蛋白质GI:2623026     转运
   orf15  68346 测序范围之外
*在反向互补链上。编号根据SEQ ID NO:1。
epoA(SEQ ID NO:1的核苷酸7610-11875)编码EPOS A(SEQ IDNO:2)，一种第一类聚酮化合物合酶，由单个模块组成，并包含下列结构域：β-酮脂酰合酶(KS)(SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQID NO:2的氨基酸11-437)、酰基转移酶(acyltransferase,AT)(SEQID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:2的氨基酸543-864)、烯酰基还原酶(enoyl reductase,ER)(SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273)、和酰基载体蛋白同源结构域(ACP)(SEQ ID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385)。序列比较和基元分析(Haydock等人,FEBS通讯(FEBS Lett.)374:246-248(1995)；Tang等人，基因216:255-265(1998))揭示了EPOS A编码的AT对丙二酸单酰CoA是特异的。EPOS A应当是通过将乙酸根单元上载到多酶复合物上最终形成2-甲基噻唑环的部分(C26和C20)，而涉及epothilone生物合成的起始。
epoP(SEQ ID NO:1的核苷酸11872-16104)编码EPOS P(SEQ IDNO:3)，一种非核糖体肽合成酶，含有单个模块。EPOS P包含下列结构域：●肽键形成结构域，由基元K(SEQ ID NO:3的氨基酸72-81[FPLTDIQESY]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置12085-12114)、基元L(SEQ ID NO:3的氨基酸118-125[VVARHDML]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置12223-12246)、基元M(SEQ ID NO:3的氨基酸199-212[SIDLINVDLGSLSI]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置12466-12507)、和基元O(SEQ ID NO:3的氨基酸353-363[GDFTSMVLLDI]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置12928-12960)描绘；●氨酰基腺苷酸形成结构域，由基元A(SEQ ID NO:3的氨基酸549-565[LTYEELSRRSRRLGARL]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置13516-13566)、基元B(SEQ ID NO:3的氨基酸588-603[VAVLAVLESGAAYVPI]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置13633-13680)、基元C(SEQ ID NO:3的氨基酸669-684[AYVIYTSGSTGLPKGV]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置13876-13923)、基元D(SEQ ID NO:3的氨基酸815-821[SLGGATE]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置14313-14334)、基元E(SEQ ID NO:3的氨基酸868-892[GQLYIGGVGLALGYWRDEEKTRKSF]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置14473-14547)、基元F(SEQ ID NO:3的氨基酸903-912[YKTGDLGRYL]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置14578-14607)、基元G(SEQ ID NO:3的氨基酸918-940[EFMGREDNQIKLRGYRVELGEIE]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置14623-14692)、基元H(SEQ ID NO:3的氨基酸1268-1274[LPEYMVP]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置15673-15693)、和基元I(SEQ ID NO:3的氨基酸1285-1297[LTSNGKVDRKALR]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置15724-15762)描绘；●一个未知结构域，***在氨酰基腺苷酸形成结构域的基元G和H之间(SEQ ID NO:3的氨基酸973-1256，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置14788-15639)；和●肽基载体蛋白同源结构域(PCP)，由基元J(SEQ ID NO:3的氨基酸1344-1351[GATSIHIV]，相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位置15901-15924)描绘。
有人提出EPOS P涉及半胱氨酸的腺苷酸化活化(结合经活化的半胱氨酸成为氨酰基-S-PCP，在酶结合的半胱氨酸和EPOS A提供的乙酰基-S-ACP之间形成肽键)和通过分子内杂环化形成最初的噻唑啉环。EPOS P的未知结构域显示与来自芽孢杆菌物种的NAD(P)H氧化酶和还原酶有非常弱的同源性。由此，这个未知结构域和/或EPOS A的ER结构域可能涉及最初的2-甲基噻唑啉环氧化成2-甲基噻唑。
epoB(SEQ ID NO:1的核苷酸16251-21749)编码EPOS B(SEQ IDNO:4)，一种第一类聚酮化合物合酶，由单个模块组成，并包含下列结构域：KS(SEQ ID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432)、AT(SEQ ID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859)、脱水酶(DH)(SEQ ID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:4的氨基酸869-1037)、β-酮还原酶(KR)(SEQ IDNO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684)和ACP(SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792)。序列比较和基元分析揭示了EPOS B编码的AT对甲基丙二酸单酰CoA是特异的。EPOS A可能通过催化2-甲基-4-噻唑羧基-S-PCP起始基团与甲基丙二酸单酰-S-ACP的Claisen样缩合和伴随的C17的β-酮基还原成烯酰基，而参与第一种聚酮化合物链的延伸。
epoC(SEQ ID NO:1的核苷酸21746-43519)编码EPOS C(SEQ IDNO:5)，一种第一类聚酮化合物合酶，由4个模块组成。第一个模块包含KS结构域(SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457)、丙二酸单酰CoA特异的AT(SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQ ID NO:5的氨基酸563-884)、KR(SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399)、和ACP(SEQ ID NO:1的核苷酸26045-26263,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506)。这个模块引入乙酸基延伸单元(C14-C13)，并将位于C15的β-酮基还原成参与epothilone大内酯环最终内酯化的羟基基团。EPOS C的第二个模块包含KS(SEQ ID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQ ID NO:5的氨基酸1524-1950)、丙二酸单酰CoA特异的AT(SEQID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377)、KR(SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895)、和ACP(SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:5的氨基酸2932-3005)。这个模块引入乙酸基延伸单元(C12-C11)，并将位于C13的β-酮基还原成羟基基团。由此，epothilone的初生聚酮化合物链相当于epothiloneA，而在epothiloneB中的C12引入甲基侧链将需要PKS后续C-甲基转移酶活性。位于C13-C12的环氧环的形成也将需要PKS后续氧化步骤。EPOS C的第三个模块包含KS(SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449)、丙二酸单酰CoA特异的AT(SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876)、DH(SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:5的氨基酸3886-4048)、ER(SEQ IDNO:1的核苷酸35042-35902,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719)、KR(SEQ ID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQ ID NO:5的氨基酸4729-4974)、和ACP(SEQ ID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082)。这个模块引入乙酸基延伸单元((C10-C9)，并完全还原位于C11的β-酮基。EPOS C的第四个模块包含KS(SEQ IDNO:1的核苷酸37052-38320,SEQ ID NO:5的氨基酸5103-5525)；甲基丙二酸单酰CoA特异的AT(SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:5的氨基酸5631-5951)、DH(SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132)、ER(SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837)、KR(SEQID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101)、和ACP(SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:5的氨基酸7140-7211)。这个模块引入丙酸基延伸单元(C24和C8-C7)，并完全还原位于C9的β-酮基。
epoD(SEQ ID NO:1的核苷酸43524-54920)编码EPOS D(SEQ IDNO:6)，一种第一类聚酮化合物合酶，由2个模块组成。第一个模块包含KS结构域(SEQ ID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQ ID NO:6的氨基酸35-454)、甲基丙二酸单酰CoA特异的AT(SEQ ID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQ ID NO:6的氨基酸561-881)、KR(SEQ ID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:6的氨基酸1143-1393)、和ACP(SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503)。这个模块引入丙酸基延伸单元(C23和C6-C5)，并将位于C7的β-酮基还原成羟基基团。第二个模块包含KS(SEQ ID NO:1的核苷酸48087-49361,SEQ ID NO:6的氨基酸1522-1946)、甲基丙二酸单酰CoA特异的AT(SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642,SEQ IDNO:6的氨基酸2053-2373)、DH(SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176,SEQ ID NO:6的氨基酸2383-2551)、甲基转移酶(MT,SEQ ID NO:1的核苷酸51534-52657,SEQ ID NO:6的氨基酸2671-3045)、KR(SEQID NO:1的核苷酸53697-54431,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636)、和ACP(SEQ ID NO:1的核苷酸54540-54758,SEQ ID NO:6的氨基酸3673-3745)。这个模块引入丙酸基延伸单元(C21或C22和C4-C3)，并将位于C5的β-酮基还原成羟基基团。这个还原有些出乎意料，因为epothilone在C5含有酮基。然而，PKS模块推断的还原活性和最终聚酮化合物产物相应位置的氧化还原状态之间的这种不一致，已经在文献(见，例如，Schweche等人，美国国家科学院进展92:7839-7843(1995)和Schupp等人，FEMS微生物学通讯159:201-207(1998))中有报导。epothilone的一个重要特征是位于C4的偕甲基侧链基团(C21和C22)的存在。预测EPOS D的第二个模块将丙酸基单元引入到增长的聚酮化合物链，在C4提供一个甲基侧链。这个模块还包含整合到PKS中DH和KR结构域之间的甲基转移酶结构域，与在HMWP1耶尔森菌素合酶(A.M.Gehring,E.DeMoll,J.D.Fetherston,I.Mori,G.F.Mayhew,F.R.Blattner,C.T.Walsh，和R.D.Perry，鼠疫中的铁获取：鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)产生的耶尔森菌素的酶生源论中的模块原理(Iron acquisition in plague:modularlogic in enzymatic biogenesis of yersiniabactin by Yersiniapestis)化学生物学(Chem.Biol.)5,573-586,1998)中看到的排列相似。有人提出EPOS D中的这个MT结构域负责在C4引入该第二个甲基侧链基团(C21或C22)。
epoE(SEQ ID NO:1的核苷酸54935-62254)编码EPOS E(SEQ IDNO:7)，一种第一类聚酮化合物合酶，由一个模块组成，包含KS(SEQID NO:1的核苷酸55028-56284,SEQ ID NO:7的氨基酸32-450)、丙二酸单酰CoA特异的AT(SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565,SEQ IDNO:7的氨基酸556-877)、DH(SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087,SEQ ID NO:7的氨基酸887-1051)、很可能无功能的ER(SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304,SEQ ID NO:7的氨基酸1478-1790)、KR(SEQID NO:1的核苷酸60362-61099,SEQ ID NO:7的氨基酸1810-2055)、ACP(SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426,SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164)、和硫酯酶(TE)(SEQ ID NO:1的核苷酸61427-62254,SEQID NO:7的氨基酸2165-2439)。这个模块中的ER结构域包含活性位点基元，其中具有一些高度不平常的氨基酸取代，可能使得这个结构域无活性。该模块引入乙酸基延伸单元(C2-C1)，并将位于C3的β-酮基还原成烯酰基基团。epothilone在C3含有羟基基团，所以这个还原也显得多余，如在EPOS D的第二个模块中讨论的。EPOS E的TE结构域参与已增长的聚酮化合物链经由C1羧基基团和C15羟基基团之间的内酯化的释放和环化。
在被测序区域中，epoA上游检测到五个ORF。部分测序的orf1在序列数据库中没有同源序列。orf2(SEQ ID NO:1反向互补链上的核苷酸3171-1900)推导的蛋白质产物(Orf2,SEQ ID NO:10)显示与分枝杆菌(Mycobacterium)和天蓝色链霉菌(Streptomycescoelicolor)的假设ORF有强相似性，以及与不同细菌的羧肽酶和DD-肽酶有更远的相似性。orf3(SEQ ID NO:1的核苷酸3415-5556)推导出来的蛋白质产物，Orf3(SEQ ID NO:11)显示与不同细菌的Na/H反向转运蛋白有同源性。Orf3可能参与从生产菌株中运出epothilone。orf4和orf5在序列数据库中没有同源序列。
在被测序区域中，epoE下游检测到十一个ORF。epoF(SEQ ID NO:1的核苷酸62369-63628)编码EPOS F(SEQ ID NO:8)，一种推导出来的与细胞色素P450加氧酶有强序列相似性的蛋白质。EPOS F可能参与调整碳C12、C5、和/或C3的氧化还原状态。orf14(SEQ ID NO:1的核苷酸67334-68251)推导出来的蛋白质，Orf14(SEQ ID NO:22)显示与GI:3293544(没有推测出功能的来自天蓝色链霉菌的假设蛋白质)及GI:2654559(人胚肺蛋白质)有强相似性。它还更远的与来自热自养甲烷杆菌(Methanobacterium thermoautotrophicum)阳离子流出***蛋白质类GI:2623026相关，所以它可能还参与从生产细胞中运出epothilone。剩余的ORF(orf6-orf13和orf15)与序列数据库中的条目不显示同源性。
实施例13：epothilone生物合成基因的重组表达
为了达到比纤维堆囊菌发酵更高的产量，在异源有机体中表达本发明的epothilone合酶基因。用于异源表达的一种优选的宿主是链霉菌，例如天然产生聚酮化合物放线菌紫素的天蓝色链霉菌。用于在此宿主中表达重组PKS基因的技术描述于McDaniel等人，科学262:1546-1550(1993)和Kao等人，科学265:509-512(1994)。还可见，Holmes等人，欧洲分子生物学杂志12(8):3183-3191(1993)和Bibb等人，基因38:215-226(1985)，以及美国专利号5,521,077,5,672,491，和5,712,146，此处引用作为参考。
根据某种方法，处理异源宿主菌株以包含放线菌紫素(act)基因簇的染色体删除。通过将DNA从温度敏感的供体质粒转移到大肠杆菌中的受体穿梭载体(McDaniel等人(1993)和Kao等人(1994))，以至于合酶基因通过载体中的同源重组实现转移，由此构建了含有本发明的epothilone合酶基因的表达质粒。或者，将epothilone合酶基因簇通过限制性片段连接导入载体。按照例如Kao等人(1994)描述的选择后，根据Hopwood等人，链霉菌的基因操作：实验室手册(Genetic Manipulation of Streptomyces:A Laboratory Manual)(John Innes Foundation,Norwich,United Kingdom,1985)提出的方案，将来自载体的DNA导入act-的天蓝色链霉菌菌株(此处引用作为参考)。在R2YE培养基(Hopwood等人(1985))上培养重组链霉菌菌株并生产epothilone。或者，在其它宿主有机体诸如假单胞菌、芽孢杆菌、酵母、昆虫细胞和/或大肠杆菌中表达本发明的epothilone合酶基因。PKS和NRPS基因优选在大肠杆菌中使用pT7-7载体(使用T7启动子)表达。见Tabor等人，美国国家科学院进展82:1074-1078(1985)。在另一个实施方案中，使用表达载体pKK223-3和pKK223-2在大肠杆菌中，以转录或翻译融合形式在tac或trc启动子后表达PKS和NRPS基因。在天然不含有PKS酶翻译后修饰需要的磷酸泛酰巯基乙胺基(phosphopantetheinyl,P-pant)转移酶的异源宿主中表达PKS和NRPS基因，需要在宿主中共表达P-pant转移酶，如Kealey等人，美国国家科学院进展95:505-509(1998)描述的。
实施例14：从生产菌株中分离epothilone
WO93/10121(此处引用作为参考)，在美国专利号5,639,949的实施例57中，在Gerth等人，抗生素杂志49:560-563(1996)，和在瑞士专利申请号396/98(申请日期1998年2月19)，和美国专利申请号09/248,910(还公开了优选的纤维堆囊菌突变菌株)中(此处引用作为参考)给出了培养、发酵、和用来分离聚酮化合物的提取步骤的实施例，对从天然和本发明的重组宿主中提取epothilone有用。下列步骤可以用来从人工培养的纤维堆囊菌菌株诸如So ce90中分离epothilone，而且还可以用来从重组宿主中分离epothilone。A:epothilone生产菌株的培养菌株：纤维堆囊菌Soce-90或本发明的重组宿主菌株菌株保存：液氮培养基：预培养和中间培养：G52
   主要培养：            1B12
   G52培养基：酵母提取物，低盐(BioSpringer,Maison Alfort，法国) 2g/lMgSO4(7H2O)                               1g/lCaCl2(2H2O)                               1g/l脱脂大豆粉Soyamine 50T(Lucas Meyer，汉堡，德国)   2g/1土豆淀粉Noredux A-150(Blattmann,Waedenswil，瑞士) 8g/l
葡萄糖，无水                                  2g/l
EDTA-Fe(Ⅲ)-Na盐(8g/l)                        1ml/l
用KOH调到pH 7.4
灭菌：20mins,120℃
1B12培养基：土豆淀粉Noredux A-150(Blattmann,Waedenswil，瑞士) 20g/l脱脂大豆粉Soyamine 50T(Lucas Meyer，汉堡，德国)   11g/l
EDTA-Fe(Ⅲ)-Na盐                              8mg/l
用KOH调到pH 7.8
灭菌：20mins,120℃添加环糊精和环糊精衍生物：不同浓度的环糊精(Fluka,Buchs，瑞士，或Wacker Chemie,Munich,德国)单独灭菌并在接种前加到1B12培养基中。培养：从液氮安瓿瓶中取1ml纤维堆囊菌Soce-90悬浮液，转移到10m1 G52培养基中(装在50mlErlenmeyer烧瓶中)并在摇床中于180rpm和30℃，25mm振幅培养3天。取5ml此培养物，加到45ml G52培养基中(装在200mlErlenmeyer烧瓶中)并在摇床中于180rpm和30℃，25mm振幅培养3天。然后取50ml此培养物，加到450ml G52培养基中(装在2升的Erlenmeyer烧瓶中)并在摇床中于180rpm和30℃，50mm振幅培养3天。维持培养：每3-4天通过将50ml培养物加入到450ml G52培养基中(装在2升的Erlenmeyer烧瓶中)将培养物过量接种。所有实验和发酵都是用这种维持培养物开始进行的。烧瓶中的测试：(ⅰ)在摇瓶中的预培养
由500ml维持培养物开始，用50ml维持培养物接种1×450ml G52培养基并在摇床中180rpm和30℃，50mm振幅培养4天。(ⅱ)在摇瓶中的主要培养
将添加了5g/14-吗啉代-丙烷磺酸(=MOPS)粉的40ml 1B12培养基(装在200ml Erlenmeyer烧瓶中)与5ml 10×浓缩环糊精溶液混和，接种10ml预培养物并在摇床中以180rpm和30℃，50mm振幅培养5天。发酵：以10升、100升和500升的量进行发酵。20升和100升发酵作为中间培养步骤。预培养和中间培养接种10％(v/v)维持培养物，而主要培养接种20％(v/v)中间培养物。重要：与振摇培养相反，发酵培养基的成分是根据最终培养液体积(包括接种液)计算的。如果，例如，18升培养基+2升接种液混和，那么称量用于20升的物质但是只配制成18升。摇瓶中的预培养物：
由500ml维持培养物开始，4×450ml G52培养基(装在2升Erlenmeyer烧瓶中)每个用50ml维持培养物接种并在摇床中以180rpm和30℃，50mm振幅培养4天。中间培养物，20升或100升：20升：装在总容量30升的发酵罐中的18升G52培养基接种2升预培养物。培养持续3-4天，条件是：30℃,250rpm,0.5升空气每升液体每分钟，0.5巴超压，无pH控制。100升：装在总容量150升的发酵罐中的90升G52培养基接种20升中间培养物中的10升。培养持续3-4天，条件是：30℃,150rpm,0.5升空气每升液体每分钟，0.5巴超压，无pH控制。主要培养物，10升、100升或500升：10升：用于10升1B12的培养基物质在7升水中灭菌，然后加入1升无菌的10％2-(羟丙基)-β-环糊精溶液，并接种2升的20升中间培养物。主要培养的持续时间是6-7天，条件是：30℃,250rpm,0.5升空气每升液体每分钟，0.5巴超压，pH用H2SO4/KOH控制到pH7.6+/-0.5(即pH7.1和8.1之间不用控制)。100升：用于100升1B12的培养基物质在70升水中灭菌，然后加入10升无菌的10％2-(羟丙基)-β-环糊精溶液，并接种20升的20升中间培养物。主要培养的持续时间是6-7天，条件是：30℃,200rpm,0.5升空气每升液体每分钟，0.5巴超压，pH用H2SO4/KOH控制到pH7.6+/-0.5。100升发酵的接种链示意图如下：
维持培养物(500ml)
G52培养基
Figure A9980742100761
500升：用于500升1B12的培养基物质在350升水中灭菌，然后加入50升无菌的10％2-(羟丙基)-β-环糊精溶液，并接种100升的100升中间培养物。主要培养的持续时间是6-7天，条件是：30℃,120rpm,0.5升空气每升液体每分钟，0.5巴超压，pH用H2SO4/KOH控制到pH7.6+/-0.5。产物分析：样品的制备：
将50ml样品与2ml聚苯乙烯树脂Amberlite XAD16(Rohm+Haas,Frankfurt，德国)混和，并于30℃以180rpm振摇一小时。然后使用150μm尼龙筛过滤树脂，用少量水清洗然后与滤器一起加到15ml Nunc试管中。将产物从树脂上洗脱：
向盛有滤器和树脂的试管中加入10ml异丙醇(＞99％)。然后，将密封的试管于室温在Rota-Mixer(Labinco BV，荷兰)上振摇30分钟。然后，离心出2ml液体，并使用移液器将上清液加到HPLC管中。HPLC分析：
层析柱：Waters-Symetry C18,100×4mm,3.5μm
WAT066220+预备柱3.9×20mm
WAT054225
溶剂：    A：    0.02％磷酸
          B：    乙腈(HPLC级)
梯度：    41％B    0-7min
          100％B   7.2-7.8min
          41％B    8-12min
烤箱温度：30℃
检测：    250nm,UV-DAD检测
加样体积：10μl
保持时间：EpoA:4.30min EpoB:5.38minB：加入环糊精和环糊精衍生物对得到的epothilone浓度的影响
环糊精是环形(α-1,4)连接的α-D-吡喃型葡萄糖的寡糖，具有相对疏水的中央腔和亲水的外部表面区域。
具体区分下述物质(括号中的数字给出了每个分子的葡萄糖单元的数目)：α-环糊精(6)、β-环糊精(7)、γ-环糊精(8)、δ-环糊精(9)、ε-环糊精(10)、ζ-环糊精(11)、η-环糊精(12)、和θ-环糊精(13)。尤其优选δ-环糊精，特别是α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精，或者它们的混合物。
环糊精衍生物主要是上述环糊精的衍生物，尤其是α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精的衍生物，主要是那些有一个或几个甚至多达所有羟基(每个葡萄糖自由基有3个)被醚化或酯化的衍生物。醚主要是烷基醚，尤其是低级烷基，诸如甲基或乙基醚，还有丙基或丁基醚；芳香基羟烷基醚，诸如苯基羟基低级烷基醚，尤其苯基羟乙基醚；羟烷基醚，特别是羟基低级烷基醚，尤其是2-羟乙基醚，羟丙基醚诸如2-羟丙基醚或羟丁基醚诸如2-羟丁基醚；羧基烷基醚，特别是羧基低级烷基醚，尤其是羧甲基或羧乙基醚；衍生化羧基烷基醚，特别是衍生化羧基低级烷基醚，其中衍生化羧基是醚化或酰胺化的羧基(主要是氨基羰基、单-或二-低级烷基氨基羰基、吗啉代-、哌啶子基-、吡咯烷子基(pyrrolidino)-或哌嗪子基(piperazino)-羰基、或烷氧基羰基)，特别是低级烷氧羰基-低级烷基醚，例如甲氧羰基丙基醚或乙氧羰基丙基醚；磺基烷基醚，特别是磺基低级烷基醚，尤其是磺基丁基醚；其中一个或几个OH基团被具有下式的基团醚化的环糊精：
-O-[alk-O-]n-H
其中alk是烷基，尤其是低级烷基，而且n是2-12的整数，尤其是2-5，特别是2或3；其中一个或几个OH基团被下式的基团醚化的环糊精：
Figure A9980742100781
其中R’是氢、羟基、-O-(alk-O)z-H、-O-(alk(-R)-O-)p-H或-O-(alk(-R)-O-)q-alk-CO-Y；alk在所有情况中是烷基，尤其是低级烷基；m、n、p、q和z是1-12的整数，优选1-5，特别是1-3；Y是OR1或NR2R3，其中R1、R2和R3互相独立地是氢或低级烷基，或R2和R3与连接氮一起表示吗啉代、哌啶子基、吡咯烷子基或哌嗪子基；或者分支环糊精，其中存在与其它糖分子的醚化或乙缩醛，尤其是葡糖基-、二葡糖基-、(G2-β-环糊精)、麦芽糖基-或二麦芽糖基环糊精，或N-乙酰氨基葡糖基、氨基葡糖基-、N-乙酰氨基半乳糖基-或氨基半乳糖基-环糊精。
酯主要是烷酰酯，特别是低级烷酰酯，诸如环糊精的乙酰酯。
还有可能环糊精中同时存在两种或更多种不同的所述醚和酯基团。
两种或更多种所述环糊精和/或环糊精衍生物的混合物也可以存在。
特别优选的是α-、β-或γ-环糊精或它们的低级烷基醚，诸如甲基-β-环糊精或特别是2,6-二-O-甲基-β-环糊精，或特别是它们的羟基低级烷基醚，诸如2-羟丙基-α-、2-羟丙基-β-或2-羟丙基-γ-环糊精。
向培养基中加入环糊精或环糊精衍生物，其浓度优选0.02-10，更优选0.05-5，尤其0.1-4，例如0.1-2重量百分比(w/v)。
环糊精或环糊精衍生物是已知的或可以通过已知的方法生产(参阅例如US3,459,731；US4,383,992；US4,535,152；US4,659,696；EP0094157；EP0149197；EP0197571；EP0300526；EP0320032；EP0499322；EP0503710；EP0818469；WO90/12035；WO91/11200；WO93/19061；WO95/08993；WO96/14090；GB2,189,245；DE3,118,218；DE3,317,064及其中提到的有关环糊精或环糊精衍生物合成的参考文献或还有：T.Loftsson和M.E.Brewster(1996)，环糊精的药物应用：药物溶解性和稳定性(PharmaceuticalApplications of Cyclodextrins:Drug Solubilization andStabilisation)，药物科学杂志(Journal of PharmaceuticalScience)85(10):1017-1025；R.A.Rajewski和V.J.Stella(1996)，环糊精的药物应用：体内药物投递(Pharmaceutical Applications ofCyclodextrins:In Vivo Drug Delivery)，药物科学杂志85(11):1142-1169)。
这里测试的所有环糊精衍生物可以从Fluka公司，Buchs,CH购得。测试在具有50ml培养容量的200ml摇瓶中进行。作为对照，使用装有吸附剂树脂Amberlite XAD-16(Rohm和Haas,Frankfurt，德国)和无任何吸附剂添加的摇瓶。培养5天后，通过HPLC测定下列epothilone的浓度：
表2：
    添加物 定购号 浓度[％w/v]1 EpoA[mg/l] EpoB[mg/l]
Amberlite XAD-16(v/v) 2.0(％v/v)     9.2     3.8
2-羟丙基-β-环糊精 56332     0.1     2.7     1.7
2-羟丙基-β-环糊精 同上     0.5     4.7     3.3
2-羟丙基-β-环糊精 同上     1.0     4.7     3.4
2-羟丙基-β-环糊精 同上     2.0     4.7     4.1
2-羟丙基-β-环糊精 同上     5.0     1.7     0.5
2-羟丙基-α-环糊精 56330     0.5     1.2     1.2
2-羟丙基-α-环糊精 同上     1.0     1.2     1.2
2-羟丙基-α-环糊精 同上     5.0     2.5     2.3
β-环糊精 28707     0.1     1.6     1.3
β-环糊精 同上     0.5     3.6     2.5
β-环糊精 同上     1.0     4.8     3.7
β-环糊精 同上     2.0     4.8     2.9
β-环糊精 同上     5.0     1.1     0.4
甲基-β-环糊精 66292     0.5     0.8     ＜0.3
甲基-β-环糊精 同上     1.0     ＜0.3     ＜0.3
甲基-β-环糊精 同上     2.0     ＜0.3     ＜0.3
2,6二-o-甲基-β-环糊精 39915     1.0     ＜0.3     ＜0.3
2-羟丙基-γ-环糊精 56334     0.1     0.3     ＜0.3
2-羟丙基-γ-环糊精 同上     0.5     0.9     0.8
2-羟丙基-γ-环糊精 同上     1.0     1.1     0.7
2-羟丙基-γ-环糊精 同上     2.0     2.6     0.7
2-羟丙基-γ-环糊精 同上     5.0     5.0     1.1
无添加物     0.5     0.5
1)除Amberlite(％v/v)之外，所有百分比均为重量百分比(％w/v)。少数测试的环糊精(2,6-二-O-甲基-β-环糊精、甲基-β-环糊精)显示在使用的浓度对epothilone产量没有影响或有负面影响。1-2％2-羟基-丙基-β-环糊精和β-环糊精在实施例中与不使用环糊精生产相比将epothilone产量提高6-8倍。C：有1％2-(羟丙基)-β-环糊精的10升发酵
发酵在15升玻璃发酵罐中进行。培养基含有10g/l的2-(羟丙基)-β-环糊精(购自Wacker Chemie,Munich，德国)。发酵过程列于表3。发酵在6天后停止并开始提取。
表3：10升发酵的过程
  培养时间[天]     epothiloneA[mg/l]     epothiloneB[mg/l]
    0     0     0
    1     0     0
    2     0.5     0.3
    3     1.8     2.5
    4     3.0     5.1
    5     3.7     5.9
    6     3.6     5.7
D：有1％2-(羟丙基)-β-环糊精的100升发酵
发酵在150升发酵罐中进行。培养基含有10g/l的2-(羟丙基)-β-环糊精。发酵过程列于表4。发酵液在7天后收获并提取。
表4：100升发酵的过程
    培养时间[天]     epothiloneA[mg/l]     epothiloneB[mg/l]
    0     0     0
    1     0     0
    2     0.3     0
    3     0.9     1.1
    4     1.5     2.3
    5     1.6     3.3
    6     1.8     3.7
    7     1.8     3.5
E：有1％2-(羟丙基)-β-环糊精的500升发酵
发酵在750升发酵罐中进行。培养基含有10g/l的2-(羟丙基)-β-环糊精。发酵过程列于表5。发酵液在7天后收获并提取。
表5：500升发酵的过程
    培养时间[天]     epothiloneA[mg/l]     epothiloneB[mg/l]
    0     0     0
    1     0     0
    2     0     0
    3     0.6     0.6
    4     1.7     2.2
    5     3.1     4.5
    6     3.1     5.1
F：不加吸附剂的10升发酵比较实施例
发酵在15升玻璃发酵罐中进行。培养基不含有任何环糊精或其它吸附剂。发酵过程列于表6。没有收获并提取发酵液。
表6：不会吸附剂的10升发酵的过程
    培养时间[天]     epothiloneA[mg/l]     epothiloneB[mg/l]
    0     0     0
    1     0     0
    2     0     0
    3     0     0
    4     0.7     0.7
    5     0.7     1.0
    6     0.8     1.3
G：逐步得到epothilone：从500升主要培养物中分离
从实施例2D的500升主要培养收获的体积是450升，并使用Westfalia澄清分离器(clarifying separator)SA-20-06型(rpm=6500)分离成液相(离心液+冲洗水=650升)和固相(细胞=大约15kg)。发现epothilone的主要部分在离心液中。离心所得的细胞浆含有＜15％的测定的epothilone部分，不再进一步处理。然后将650升离心液置于4000升搅拌器中，与10升Amberlite XAD-16(离心液∶树脂=65∶1)混合并搅拌。接触大约2小时后，在Heine溢流式离心机(overflow centrifuge)(桶容量40升；rpm=2800)中离心下树脂。从离心机上卸下树脂，并用10-15升去离子水清洗。解吸附作用通过两次搅拌树脂进行，每次均将一部分与30升异丙醇在30升玻璃搅拌器中搅拌30分钟。使用抽滤器从树脂中分离出异丙醇相。然后在真空操作的循环蒸发器(Schmid-Verdampfer)中加入15-20升水将异丙醇从混合异丙醇相中除去，并将得到的大约10升水相提取3次，每次用10升乙酸乙酯抽提。提取在30升玻璃搅拌器中进行。在真空操作的循环蒸发器(Schmid-Verdampfer)中将乙酸乙酯提取液浓缩至3-5升，之后在真空下在旋转蒸发器(Büchi型)中浓缩至干燥。得到50.2g乙酸乙酯提取物。将乙酸乙酯提取物溶解于500ml甲醇中，使用折叠滤器将不溶部分滤掉，并将溶液加到10kg Sephadex LH 20层析柱(Pharmacia,Uppsala，瑞典)(层析柱直径20cm，填充高度大约1.2m)上。用甲醇作为洗脱液进行洗脱。epothiloneA和B主要存在于级分21-23中(每份级分1升)。在真空中在旋转蒸发器中将这些级分浓缩至干燥(总重量9.0g)。然后将这些Sephadex洗脱峰级分(9.0g)溶解于92ml乙腈∶水∶二氯甲烷=50∶40∶2中，将溶液用折叠滤器过滤并加到RP层析柱(配备Prepbar200,Merck；2.0kgLiChrospher RP-18,Merch，颗粒大小12μm，柱直径10cm，填充高度42cm；Merch,Darmstadt，德国)上。用乙腈∶水=3∶7进行洗脱(流速=500ml/min；epothiloneA的保持时间=大约51-59min；epothiloneB的保持时间=大约60-69min)。级分用UV检测仪于250nm监测。在真空下在Büchi-Rotavapor旋转蒸发器上将级分浓缩至干燥。epothiloneA洗脱峰级分的重量是700mg，而且根据HPLC(外部标准)含量是75.1％。epothiloneB洗脱峰级分的重量是1980mg，而且含量根据HPLC(外部标准)是86.6％。最后，epothiloneA收集部分(700mg)由5ml乙酸乙酯∶甲苯=2∶3结晶，并产生170mgepothiloneA的纯晶体[含量根据HPLC(面积％)=94.3％]。epothiloneB收集部分(1980mg)由18ml甲醇进行结晶并产生1440mgepothiloneB的纯晶体[含量根据HPLC(面积％)=99.2％]。m.p.(epothiloneB)：例如124-125℃；epothiloneB的1H-NMR数据：500MHz-NMR，溶剂：DMSO-d6。化学取代δ以相对于TMS的ppm表示。
s=单峰；d=双峰；m=多重峰δ(峰裂数)    integral(H的数目)7.34(s)           16.50(s)           15.28(d)           15.08(d)           14.46(d)           14.08(m)           13.47(m)           13.11(m)           12.83(dd)          12.64(s)           32.36(m)           22.09(s)           32.04(m)           11.83(m)           11.61(m)           11.47-1.24(m)      41.18(s)           6
1.13(m)       2
1.06(d)       30.89(d+s，重叠)   6
            ∑=41
实施例15：重组生产的epothilone的医疗用途
包含epothilone的药物制剂或组合物可被用于例如癌症(诸如各种人实体瘤)的治疗。这些抗癌制剂包含(例如)活性剂量的epothilone和一种或几种有机或无机液体或固体的适合药用的载体物质。这些制剂以例如肠道、鼻腔、直肠、口腔、或非肠道方式，尤其是肌肉内或静脉内方式给药。活性成分的剂量取决于病人的体重、年龄和体格和药物动力学状况并进一步取决于给药方式。因为epothilone模仿紫杉醇的生物学效应，故epothilone有可能在使用紫杉醇治疗癌症的组合物和方法中取代紫杉醇。见，例如，美国专利号5,496,804,5,565,478，和5,641,803，引用这些作为参考。
例如，用于治疗时，提供的epothiloneB是2ml玻璃瓶单独包装，配制成1mg/ml清亮的、无色静脉注射液浓缩物。该物质用聚乙二醇300(PEG300)配制并用50或100ml 0.9％氯化钠注射液USP稀释以达到药物输液需要的最终浓度。以每21天一次30分钟静脉输液(三周治疗一次)六个循环或者每7天一次30分钟静脉输液(一周治疗一次)进行。
优选的，对于每周一次的治疗，剂量在大约0.1-大约6mg/m2，优选大约0.1-大约5mg/m2，更优选大约0.1-大约3mg/m2，甚至更优选0.1-1.7mg/m2，最优选大约0.3-大约1mg/m2之间；对于三周一次的治疗(每三周一次或每个第三周治疗)，剂量在大约0.3-18mg/m2，优选大约0.3-大约15mg/m2，更优选大约0.3-12mg/m2，甚至更优选大约0.3-大约7.5mg/m2，还要更优选大约0.3-大约5mg/m2，最优选大约1.0-3.0mg/m2之间。优选这个剂量通过对人进行2-180min，优选2-120min，更优选大约5-大约30min，最优选大约10-大约30min(如大约30min)完成静脉内(i.v.)给药。
虽然本发明已经由它们的特定实施方案作为参考描述过，明显的，众多的变化、修饰和实施方案是可能的，相应的，所有这些变化、修饰和实施方案将被看作是在本发明的精神和范围之内。
序列表<110>Novartis AG<120>用于epothilone生物合成的基因<130>4-30582A<140><141><160>30<170>PatentIn Ver.2.0<210>1<211>68750<212>DNA<213>纤维堆囊菌<400>1aagcttcgct cgacgccctc ttcgcccgcg ccacctctgc ccgtgtgctc gatgatggcc 60acggccgggc cacggagcgg catgtgctcg ccgaggcgcg cgggatcgag gacctccgcg 120ccctccgaga gcacctccgc atccaggaag gggggccgtc ctttcactgc atgtgcctcg 180gcgacctgac ggtggagctc ctcgcgcacg accagcccct cgcgtccatc agcttccacc 240atgcccgcag cctgaggcac cccgactgga cctcggacgc gatgctcgtc gacggccccg 300cgctcgtccg gtggctcgcc gcgcgcggcg cgccgggtcc cctccgcgag tacgaagagg 360agcgcgagcg agcccgaacc gcgcaggagg cgaggcgcct gtggctcgcg gccgcgccgc 420cctgcttcgc gcccgatctg ccccgcttcg aggacgacgc caacgggctg ccgctcggcc 480cgatgtcgcc tgaagtcgcc gaggccgagc ggcgcctccg cgcctcgtac gcgactcctg 540agctcgcctg tgccgcgctg ctcgcctggc tcgggacggg cgcgggtccc tggtccggat 600atcccgccta cgagatgctg ccagagaatc tgctcctcgg gtttggcctc ccgaccgcga 660tcgccgcggc ctccgcgccc ggcacatcgg aggccgctct ccgcggcgca gcgcggctgt 720tcgcctcctg ggaggtcgta tcgagcaaga agagccagct cggcaacatc cccgaagccc 780tgtgggagcg gctccggacg atcgtccgcg cgatgggcaa tgccgacaac ctctctcgct 840tcgagcgcgc cgaggcgatc gcggcggagg tgcgccgcct gcgcgcacag ccggcgccct 900tcgcggcggg cgccggcctg gcggtcgctg gggtctcctc gagcggccgg ctctcgggcc 960tcgtgaccga cggagacgca ttgtactccg gcgacggcaa cgacatcgtc atgttccaac 1020ccggccggat ctcgccggtc gtgctgctcg ccggaaccga tcccttcttc gagctcgcac 1080cgcccctcag ccagatgctc ttcgtcgcgc acgccaacgc gggcaccatc tccaaggtcc 1140tgacggaagg cagccccctc atcgtgatgg caagaaacca ggcgcgaccg atgagcctcg 1200tccacgctcg cgggttcatg gcgtgggtca accaggccat ggtgcccgac cccgagcggg 1260gcgcgccctt cgtcgtccag cgctcgacca tcatggaatt cgagcacccc acgcctcgtt 1320gtctccacga gcccgccggc agcgctttct ccctcgcctg cgacgaggag cacctctact 1380ggtgcgagct ttcggctggc cggctcgagc tatggcgcca cccgcaccac cgccccggcg 1440ccccgagccg cttcgcgtac ctcggcgagc accccattgc ggcgacctgg tacccctcgc 1500tcaccctcaa tgcgacccac gtgctgtggg ccgaccctga tcgcagggcc atcctcgggg 1560tcgacaagcg caccggcgta gagcccatcg tcctcgcgga gacgcgccat cccccggcgc 1620acgtcgtgtc cgaggaccgg gacatcttcg cgcttaccgg acagcccgac tcccgcgact 1680ggcacgtcga gcacatccgc tccggcgcct ccaccgtcgt ggccgactac cagcgccagc 1740tatgggaccg ccctgacatg gtgctcaatc ggcgcggcct cttcttcacg acgaacgacc 1800gcatcctgac gctcgcccgc agctgacatc gctcgacgcc gggccgctca tcgagggcgc 1860ccggaccgag ctggcgaccc gccgctggcg ggccgcagct catgccgatt cggtggcgac 1920gtagacgctg cgccagaaac gctcgagagc ccccgagaac aggaagccgg cggattgtgt 1980catcacgatc ccgatcagct cgcggcccgg atcattgatc caggacgtcc cgaacccgcc 2040gtcccaccca tagcgcccgg gcacctccga gaccgcgtcc ggcgccgtga ccacggccat 2100cccataaccc cagccgtgcg tctcgaagaa gcccgggaaa aacgaggacg ccgccttctg 2160ggccggcgtg aggtgatcgg ccgtcatctc gcgcaccgag gcggcgctca agagccgccg 2220gccctcgtgc acaccgccgt tcatgagcat gcgcgcgaac aggaggtagt cgtccaccgt 2280cgacacgagc ccggcggcgc ccgaagggaa cgccggcggg ctggcatagg cgctctcggc 2340cccgtcgcga tccatgcgcg tcttctcccc cgtctgctcg tcggtgaagt aaccgcagcc 2400cgcgaaccga gcgagcttgt ccgccgggac gtgaaagtcg gtgtcccgca tcccgagcgg 2460cgcgaggatg cgctcgcgca cgaacgcatc gaagccctgg tcggccgcgc gccccacgag 2520caccccctgc accaggctcc ccgtgttgta catccactgc gcccccggct gatgcatgag 2580cggcagcgtc ccgagccgcc ggatccactc gtctggcccg tgcggcgtca tcggcaccgg 2640ctgcgcgttg acgagcccga gctcgtcgat ggcccgctgg atcggcgacg atgcgtcgaa 2700cgagattccg aagcccatcg tgaacgtcat caggtcgcgc accgtgatcg gccgctccgc 2760gggcaccgtc tcgtcgatcg gaccatcgat gcgcgccagc accttccggt tcgcgagctc 2820cggcaaccat cggtcgacgg gggagtcgag gtcgagcttg ccttcctcga cgagcatcat 2880caccgccgtc gcggtgaccg ccttcgtcat cgaggcgatc cggaagatcg tgtcccgccg 2940catgggcgcg ctgccgccga gctcggtcac gcccaccgcg tccacgtgca cgtcgtcgcc 3000gcgcgcgacc agccagaccg ctcccggcat ctgccccgcc gccacctccg ccgccatcac 3060ctcgcgcgcg ggcgccagcg cgccggcccc cgcgtcctgc cctggctgcc cctcctcctc 3120ggccccaccc aacgcgcacc ccggcgccgc cacgctgatc aaagctccca taaactcccg 3180ccttctcatg accgtcgatg cctctccgag cgggggcgcc tgcccctgcc gagagcactg 3240actgcccgcg cccgaaaaaa tcatcggtgc cccgtcacga tcgccgccgg gcgtggctcc 3300gcccggccgc ccgctcgggc gcccgcccct ggacgagcaa agctcgcccg cccgcgctca 3360gcacgccgct tgccatgtcc ggcctgcacc cacaccgagg agccacccac cctgatgcac 3420ggcctcaccg agcggcaggt cctgctctcg ctcgtcaccc tcgcgctcat cctcgtgacc 3480gcgcgcgcct ccggcgagct cgcgcggcgg ctgcgccagc ccgaggtgct cggggagctc 3540ttcggcggcg tcgtgctggg cccctccgtc gtcggcgcgc tcgcgcccgg gttccatcga 3600gccctcttcc aggagccggc ggtcggggtc gtgctctcgg gcatctcctg gataggcgcg 3660ctcctcctgc tgctgatggc gggcatcgag gtcgacgtgg gcatcctgcg caaggaggcg 3720cgccccgggg cgctctcggc gctcggcgcg atcgcgcccc cgctcgcggc gggcgccgcc 3780ttctcggcgc tcgtgctcga tcggcccctt ccgagcggcc tcttcctcgg gatcgtgctc 3840tcggtgacgg cggtcagcgt gatcgcgaag gtgctgatcg agcgcgagtc gatgcgccgc 3900agctatgcgc aggtgacgct cgcggcgggg gtggtcagcg aggtcgctgc ctgggtgctc 3960gtcgcgatga cgtcgtcgag ctacggcgcg tcgcccgcgc tggcggtcgc ccggagcgcg 4020ctcctggcga gcggattctt gctgttcatg gtgctcgtcg ggcggcggct cacccacctc 4080gcgatgcgct gggtggccga cgcgacgcgc gtctccaagg gacaggtgtc gctcgtcctc 4140gtcctcacgt tcctggccgc ggcgctgacg cagcggctcg gcctgcaccc gctgctcggc 4200gcgttcgcgc tcggcgtgct gctcaacagc gctcctcgca ccaaccgccc tctcctcgac 4260ggcgtgcaga cgctcgtggc gggcctcttc gcgcctgtgt tcttcgtcct cgcgggcatg 4320cgcgtcgacg tgtcgcagct gcgcacgccg gcggcgtggg ggacggtcgc gttgctgctg 4380gcgaccgcga cggcggcgaa ggtcgtcccc gccgcgctcg gcgcgcggct cggcgggctc 4440aggggcagcg aggcggcgct cgtggcggtg ggcctgaaca tgaagggcgg cacggacctc 4500atcgtcgcga tcgtcggcgt cgagctcggg ctcctctcca acgaggctta tacgatgtac 4560gccgtcgtcg cgctggtcac ggtgaccgcc tcacccgcgc tcctcatctg gctcgagaaa 4620agggcgcctc cgacgcagga ggagtcggct cgcctcgagc gcgaggaggc cgcgaggcgc 4680gcgtacatcc ccggggtcga gcggatcctc gtcccgatcg tggcgcacgc cctgcccggg 4740ttcgccacgg acatcgtgga gagcatcgtc gcctccaagc gaaagctcgg cgagacggtc 4800gacatcacgg agctctccgt ggagcagcag gcgcccggcc catcgcgcgc cgcgggggag 4860gcgagccggg ggctcgcgag gctcggcgcg cgcctccgcg tcggcatctg gcggcaaagg 4920cgcgagctgc gcggctcgat ccaggcgatc ctgcgcgcct cgcgggatca cgatctgctc 4980gtgatcggcg cgcgatcgcc ggcgcgcgcg cgcggaatgt cgttcggtcg cctgcaggac 5040gcgatcgtcc agcgggccga gtccaacgtg ctcgtcgtgg tgggcgaccc tccggcggcg 5100gagcgcgcct ccgcgcggcg gatcctcgtc ccgatcatcg gcctcgagta ctccttcgcc 5160gccgccgatc tcgcggccca cgtggcgctg gcgtgggacg ccgagctcgt gctgctcagc 5220agcgcgcaga ccgatccggg cgcggtcgtc tggcgcgatc gcgagccatc ccgggtgcgc 5280gcggtggcgc ggagcgtcgt cgacgaggcg gtcttccggg ggcgccggct cggcgtgcgc 5340gtctcgtcgc gcgtgcacgt gggcgcgcac ccgagcgacg agataacgcg ggagctcgcg 5400cgcgccccgt acgatctgct cgtgctcgga tgctacgacc atgggccgct cggccggctc 5460tacctcggca gcacggtcga gtcggtggtg gtccggagcc gggtgccggt cgcgttgctc 5520gtcgcgcatg gagggactcg agagcaggtg aggtgaggct tccaccgcgc tcgcccgtga 5580ggaagcgagc gcccggctct gccgacgatc gtcactcccg gtccgtgtag gcgatcgtgc 5640tgagcagcgc gttctccgcc tgacgcgagt cgagccgggt atgctgcacg acgatggggg 5700cgtccgattc gatcacgctg gcatagtccg tatcgcgcgg gatcggctcg ggttcggtca 5760gatcgttgaa ccggacgtgc cgggtgcgcc tcgctggaac ggtcacccgg taaggcccgg 5820cggggtcgcg gtcgctgaag taaacggtga tggcgacctg cgcgtcccgg tccgacgcat 5880tcaacaggca ggccgtctca tggctcgtca tctgcggctc aggtccgttg ctcccgcctg 5940ggatgtagcc ctctgcgatt gcacagcgcg tccgcccgat cggcttgtcc atgtgtcctc 6000cctcctggct cctctttggc agcctccctc tgctgtccag gagcgatggc ctcttcgctc 6060gacgcgctcg gggatccatg gctgaggatc ctcgccgagc gctccctgcc gaccggcgcg 6120ccgagcgccg acgggctttg aaagcgcgcg accggccagc ccggacgcgg gcccgagagg 6180gacagtgggt ccgccgtgaa gcagagaggc gatcgaggtg gtgagatgaa acacgtcgac 6240acgggccgac gattcggccg ccggacaggg cacacgctcg gtcttctcgc gagcatggcg 6300ctcgccggct gcggcggtcc gagcgagaaa accgtgcagg gcacgcggct cgcgcccggc 6360gccgatgcgc gcgtcaccgc cgacgtcgac cccgacgccg cgaccacgcg gccggcggtg 6420gacgccgttc acctctcgcc gcccgagcgg ctcgaggccg gcagcgagcg gttcgtcgtc 6480tggcagcgtc cgagccccga gcccccgtgg cgacgggccg gagtgctcga ctacaatgct 6540gacagccgaa gaggcaagct ggccgagacg accgtgccgt atgccaactt cgagctgctc 6600atcaccgccg agaagcagag cagccctcag tcgccatcgt ctgccgccgt catcgggccg 6660acgtctgtcg ggtgacatcg cgctatcagc agcgctgagc ccgccagcag gccccagggc 6720cctgcctcga tggccttccc catcacccct gcgcactcct ccagcgacgg ccgcgcagcg 6780acggccgcgt ccaagcaacc gccgtgccgg cgcggctcca cgcgcgcgac aggcgagcgt 6840cctggcgcgg cctgcgcatc gctggaagga tcggcggagc atggatagag aatcgaggat 6900cgcgatcttt gttgccatcg cagccaacgt ggcgatcgcg gcggtcaagt tcatcgccgc 6960cgccgtgacc ggcagctcgg cgaggcgttt gccgacttcg gcggcgtccc gcgcgtgctg 7020ctctacgaca acctcaagag cgccgtcgtc gagcgccacg gcgacgcgat ccggttccac 7080cccacgctgc tggctctgtc ggcgcattac cgcttcgagc cgcgccccgt cgccgtcgcc 7140cgcggcaacg agaagggccg cgtccagcgc gccatcacgg cgtggacgac atggcgcgga 7200aacgtcgtcg taaccgccca gcaatgtcat gggaatggcc ccttgaaatg gccccttgag 7260ggggctggcc ggggtcgacg atatcgcgcg atctccccgt caattcccga tggtaaaaga 7320aaaatttgtc atagatcgta agctgtgata gtggtctgtc ttacgttgcg tcttccgcac 7380ctcgagcgag ttctctcgga taactttcaa tttttccgag gggggcttgg tctctggttc 7440ctcaggaagc ctgatcggga cgagctaatt cccatccatt tttttgaggc tctgctcaaa 7500gggattagat cgagtgagac agttcttttg cagtgcgcga agaacctggg cctcgaccgg 7560aggacgatcg acgtccgcga gcgggtcagc cgctgaggat gtgcccgtcg tggcggatcg 7620tcccatcgag cgcgcagccg aagatccgat tgcgatcgtc ggagcgagtt gccgtctgcc 7680cggtggcgtg atcgatctga gcgggttctg gacgctcctc gagggctcgc gcgacaccgt 7740cgggcgagtc cccgccgaac gctgggatgc agcagcgtgg tttgatcccg accccgatgc 7800cccggggaag acgcccgtta cgcgcgcatc tttcctgagc gacgtagcct gcttcgacgc 7860ctccttcttc ggcatctcgc ctcgcgaagc gctgcggatg gaccctgcac atcgactctt 7920gctggaggtg tgctgggagg cgctggagaa cgccgcgatc gctccatcgg cgctcgtcgg 7980tacggaaacg ggagtgttca tcgggatcgg cccgtccgaa tatgaggccg cgctgccgca 8040agcgacggcg tccgcagaga tcgacgctca tggcgggctg gggacgatgc ccagcgtcgg 8100agcgggccga atctcgtatg ccctcgggct gcgagggccg tgtgtcgcgg tggatacggc 8160ctattcgtcc tcgctggtgg ccgttcatct ggcctgtcag agcttgcgct ccggggaatg 8220ctccacggcc ctggctggtg gggtatcgct gatgttgtcg ccgagcaccc tcgtgtggct 8280ctcgaagacc cgggcgctgg ccagggacgg tcgctgcaag gcattttcgg cggaggccga 8340tgggttcgga cgaggcgaag ggtgcgccgt cgtggtcctc aagcggctca gtggagcccg 8400cgcggacggc gatcggatat tggcggtgat tcgaggatcc gcgatcaatc acgacggtgc 8460gagcagcggt ctgaccgtgc cgaacgggag ctcccaagaa atcgtgctga aacgggccct 8520ggcggacgca ggctgcgccg cgtcttcggt gggttatgtc gaggcacacg gcacgggcac 8580gacgcttggt gaccccatcg aaatccaagc tctgaatgcg gtatacggcc tcgggcgaga 8640tgtcgccacg ccgctgctga tcgggtcggt gaagaccaac cttggccatc ctgagtatgc 8700gtcggggatc actgggctgc tgaaggtcgt cttgtccctt cagcacgggc agattcctgc 8760gcacctccac gcgcaggcgc tgaacccccg gatctcatgg ggtgatcttc ggctgaccgt 8820cacgcgcgcc cggacaccgt ggccggactg gaatacgccg cgacgggcgg gggtgagctc 8880gttcggcatg agcgggacca acgcgcacgt ggtgctggaa gaggcgccgg cggcgacgtg 8940cacaccgccg gcgccggagc gaccggcaga gctgctggtg ctgtcggcaa ggaccgcgtc 9000agccctggat gcacaggcgg cgcggctgcg cgaccatctg gagacctacc cttcgcagtg 9060tctgggcgat gtggcgttca gtctggcgac gacgcgcagc gcgatggagc accggctcgc 9120ggtggcggcg acgtcgaggg aggggctgcg ggcagccctg gacgctgcgg cgcagggaca 9180gacgtcgccc ggtgcggtgc gcagtatcgc cgattcctca cgcggcaagc tcgcctttct 9240cttcaccgga cagggggcgc agacgctggg catgggccgt gggctgtacg atgtatggtc 9300cgcgttccgc gaggcgttcg acctgtgcgt gaggctgttc aaccaggagc tcgaccggcc 9360gctccgcgag gtgatgtggg ccgaaccggc cagcgtcgac gccgcgctgc tcgaccagac 9420agccttcacc cagccggcgc tgttcacctt cgaatatgcg ctcgccgcgc tgtggcggtc 9480gtggggtgta gagccggagt tggtcgccgg ccatagcatc ggtgagctgg tggctgcctg 9540cgtggcgggc gtgttctcgc ttgaggacgc ggtgttcctg gtggctgcgc gcgggcgcct 9600gatgcaggcg ctgccggccg gcggggcgat ggtgtcgatc gaggcgccgg aggccgatgt 9660ggctgctgcg gtggcgccgc acgcagcgtc ggtgtcgatc gccgcggtca acgctccgga 9720ccaggtggtc atcgcgggcg ccgggcaacc cgtgcatgcg atcgcggcgg cgatggccgc 9780gcgcggggcg cgaaccaagg cgctccacgt ctcgcatgcg ttccactcac cgctcatggc 9840cccgatgctg gaggcgttcg ggcgtgtggc cgagtcggtg agctaccggc ggccgtcgat 9900cgtcctggtc agcaatctga gcgggaaggc ttgcacagac gaggtgagct cgccgggcta 9960ttgggtgcgc cacgcgcgag aggtggtgcg cttcgcggat ggagtgaagg cgctgcacgc 10020ggccggtgcg ggcaccttcg tcgaggtcgg tccgaaatcg acgctgctcg gcctggtgcc 10080tgcctgcatg ccggacgccc ggccggcgct gctcgcatcg tcgcgcgctg ggcgtgacga 10140gccggcgacc gtgctcgagg cgctcggcgg gctctgggcc gtcggtggcc tggtctcctg 10200ggccggcctc ttcccctcag gggggcggcg ggtgccgctg cccacgtacc cttggcagcg 10260cgagcgctac tggatcgaca cgaaagccga cgacgcggcg cgtggcgacc gccgtgctcc 10320gggagcgggt cacgacgagg tcgaggaggg gggcgcggtg cgcggcggcg accggcgcag 10380cgctcggctc gaccatccgc cgcccgagag cggacgccgg gagaaggtcg aggccgccgg 10440cgaccgtccg ttccggctcg agatcgatga gccaggcgtg cttgatcacc tcgtgcttcg 10500ggtcacggag cggcgcgccc ctggtctggg cgaggtcgag atcgccgtcg acgcggcggg 10560gctcagcttc aatgatgtcc agctcgcgct gggcatggtg cccgacgacc tgccgggaaa 10620gcccaaccct ccgctgctgc tcggaggcga gtgcgccggg cgcatcgtcg ccgtgggcga 10680gggcgtgaac ggcctcgtgg tgggccaacc ggtcatcgcc ctttcggcgg gagcgtttgc 10740tacccacgtc accacgtcgg ctgcgctggt gctgcctcgg cctcaggcgc tctcggcgat 10800cgaggcggcc gccatgcccg tcgcgtacct gacggcatgg tacgcgctcg acagaatagc 10860ccgccttcag ccgggggagc gggtgctgat ccatgcggcg accggcgggg tcggtctcgc 10920cgcggtgcag tgggcgcagc acgtgggagc cgaggtccat gcgacggccg gcacgcccga 10980gaaacgcgcc tacctggagt cgctgggcgt gcggtatgtg agcgattccc gctcggaccg 11040gttcgtcgcc gacgtgcgcg cgtggacggg cggcgaggga gtagacgtcg tgctcaactc 11100gctctcgggc gagctgatcg acaagagttt caatctcctg cgatcgcacg gccggtttgt 11160ggagctcggc aagcgcgact gttacgcgga taaccagctc gggctgcggc cgttcctgcg 11220caatctctcc ttctcgctgg tggatctccg ggggatgatg ctcgagcggc cggcgcgggt 11280ccgtgcgctc ttggaggagc tcctcggcct gatcgcggca ggcgtgttca cccctccccc 11340catcgcgacg ctcccgatcg cccgtgtcgc cgatgcgttc cggagcatgg cgcaggcgca 11400gcatcttggg aagctcgtac tcacgctggg tgacccggag gtccagatcc gtattccaac 11460ccacgcaggc gccggcccgt ccaccgggga tcgggacctg ctcgacaggc tcgcgtcagc 11520tgcgccggcc gcgcgcgcgg cggcgctgga ggcgttcctc cgtacgcagg tctcgcaggt 11580gctgcgcacg cccgaaatca aggtcggcgc ggaggcgctg ttcacccgcc tcggcatgga 11640ctcgctcatg gccgtggagc tgcgcaatcg tatcgaggcg agcctcaagc tgaagctgtc 11700gacgacgttc ctgtccacgt cccccaatat cgccttgttg gcccaaaacc tgttggatgc 11760tctcgccaca gctctctcct tggagcgggt ggcggcggag aacctacggg caggcgtgca 11820aaacgacttc gtctcatcgg gcgcagatca agactgggaa atcattgccc tatgacgatc 11880aatcagcttc tgaacgagct cgagcaccag ggtatcaagc tggcggccga tggggagcgc 11940ctccagatac aggcccccaa gaacgccctg aacccgaacc tgctcgctcg aatctccgag 12000cacaaaagca cgatcctgac gatgctccgt cagagactcc ccgcagaatc catcgtgccc 12060gccccagccg agcggcacgc tccgtttcct ctcacagaca tccaagaatc ctactggctg 12120ggccggacag gagcgtttac ggtccccagc gggatccacg cctatcgcga atacgactgt 12180acggatctcg acgtgccgag gctgagccgc gcctttcgga aagtcgtcgc gcggcacgac 12240atgcttcggg cccacacgct gcccgacatg atgcaggtga tcgagcctaa agtcgacgcc 12300gacatcgaga tcatcgatct gcgcgggctc gaccggagca cacgggaagc gaggctcgtg 12360tcgttgcgag atgcgatgtc gcaccgcatc tatgacaccg agcgccctcc gctctatcac 12420gtcgtcgccg ttcggctgga cgagcggcaa acccgtctcg tgctcagtat cgatctcatt 12480aacgttgacc taggcagcct gtccatcatc ttcaaggact ggctcagctt ctacgaagat 12540cccgagacct ctctccctgt cctggagctc tcgtaccgcg attatgtact cgcgctggag 12600tctcgcaaga agtctgaggc gcatcaacga tcgatggatt actggaagcg gcgcatcgcc 12660gagctcccac ctccgccgac gcttccgatg aaggccgatc catctaccct gaaggagatc 12720cgcttccggc acacggagca atggctgccg tcggactcct ggggtcgatt gaagcggcgt 12780gtcggggagc gcgggctgac cccgacgggc gtcatcctgg ctgcattttc cgaggtgatc 12840gggcgctgga gcgcgagccc ccggtttacg ctcaacataa cgctcttcaa ccggctcccc 12900gtccatccgc gcgtgaacga tatcaccggg gacttcacgt cgatggtcct cctggacatc 12960gacaccactc gcgacaagag cttcgaacag cgcgctaagc gtattcaaga gcagctgtgg 13020gaagcgatgg atcactgcga cgtaagcggt atcgaggtcc agcgagaggc cgcccgggtc 13080ctggggatcc aacgaggcgc attgttcccc gtggtgctca cgagcgcgct taaccagcaa 13140gtcgttggtg tcacctcgtt gcagaggctc ggaactccgg tgtacaccag cacgcagact 13200cctcagctgc tgctggatca tcagctctac gagcacgatg gggacctcgt cctcgcgtgg 13260gacatcgtcg acggagtgtt cccgcccgac cttctggacg acatgctcga agcgtacgtc 13320gtttttctcc ggcggctcac tgaggaacca tggggtgaac aggtgcgctg ttcgcttccg 13380cctgcccagc tagaagcgcg ggcgagcgca aacgcgacca acgcgctgct gagcgagcat 13440acgctgcacg gcctgttcgc ggcgcgggtc gagcagctgc ccatgcagct cgccgtggtg 13500tcggcgcgca agacgctcac gtacgaagag ctttcgcgcc gttcgcggcg acttggcgcg 13560cggctgcgcg agcagggggc acgcccgaac acattggtcg cggtggtgat ggagaaaggc 13620tgggagcagg ttgtcgcggt tctcgcggtg ctcgagtcag gcgcggccta cgtgccgatc 13680gatgccgacc taccggcgga gcgtatccac tacctcctcg atcatggtga ggtaaagctc 13740gtgctgacgc agccatggct ggatggcaaa ctgtcatggc cgccggggat ccagcggctg 13800ctcgtgagcg aggccggcgt cgaaggcgac ggcgaccagc ctccgatgat gcccattcag 13860acaccttcgg atctcgcgta tgtcatctac acctcgggat ccacagggtt gcccaagggg 13920gtgatgatcg atcatcgggg tgccgtcaac accatcctgg acatcaacga gcgcttcgaa 13980atagggcccg gagacagggt gctggcgctc tcctcgctga gcttcgatct ctcggtctat 14040gatgtgttcg ggatcctggc ggcgggcggt acgatcgtgg tgccggacgc gtccaagctg 14100cgcgatccgg cgcattgggc agagttgatc gaacgagaga aggtgacggt gtggaactcg 14160gtgccggcgc tgatgcggat gctcgtcgag cattttgagg gtcgccccga ttcgctcgct 14220aggtctctgc ggctttcgct gctgagcggc gactggatcc cggtgggcct gcctggcgag 14280ctccaggcca tcaggcccgg cgtgtcggtg atcagcctgg gcggggccac cgaagcgtcg 14340atctggtcca tcgggtaccc cgtgaggaac gtcgacctat cgtgggcgag catcccctac 14400ggccgtccgc tgcgcaacca gacgttccac gtgctcgatg aggcgctcga accgcgcccg 14460gtctgggttc cggggcaact ctacattggc ggggtcgggc tggcactggg ctactggcgc 14520gatgaagaga agacgcgcaa gagcttcctc gtgcaccccg agaccgggga gcgcctctac 14580aagaccggcg atctgggccg ctacctgccc gatggaaaca tcgagttcat ggggcgtgag 14640gacaaccaaa tcaagcttcg cggataccgc gttgagctcg gggaaatcga ggaaacgctc 14700aagtcgcatc cgaacgtacg cgacgcggtg attgtgcccg tcgggaacga cgcggcgaac 14760aagctccttc tagcctatgt ggtcccggag ggcacacgga gacgcgctgc cgagcaggac 14820gcgagcctca agaccgagcg gatcgacgcg agagcacacg ccgccgaagc ggacggcttg 14880agcgacggcg agagggtgca gttcaagctc gctcgacacg gactccggag ggacctggac 14940ggaaagcccg tcgtcgatct gaccgggcag gatccgcggg aggcggggct ggacgtctac 15000gcgcgtcgcc gtagcgtccg aacgttcctt gaggccccga ttccgtttgt tgagtttggt 15060cgattcctga gctgcttgag cagcgtggag cccgacggcg cgacccttcc caaattccgt 15120tatccatcgg cgggcagcac gtacccggtg caaacctacg cgtatgtcaa atccggccgc 15180atcgagggcg tggacgaggg cttctattat taccacccgt tcgagcaccg tttgctgaag 15240ctctccgatc acgggatcga gcgcggagcg cacgttcggc aaaacttcga cgtgttcgat 15300gaagcggcgt tcaacctcct gttcgtgggc aggatcgacg ccatcgagtc gctgtatgga 15360tcgtcgtcgc gagaattttg cctgctggag gccggatata tggcgcagct cctgatggag 15420caggcgcctt cctgcaacat cggcgtctgt ccggtggggc aattcaattt tgaacaggtt 15480cggccggttc tcgacctgcg acattcggac gtttacgtgc acggcatgct gggcgggcgg 15540gtagacccgc ggcagttcca ggtctgtacg ctcggtcagg attcctcacc gaggcgcgcc 15600acgacgcgcg gcgcccctcc cggccgcgag cagcacttcg ccgatatgct tcgcgacttc 15660ttgaggacca aactacccga gtacatggtg cctacagtct tcgtggagct cgatgcgttg 15720ccgctgacgt ccaacggcaa ggtcgatcgt aaggccctgc gcgagcggaa ggatacctcg 15780tcgccgcggc attcggggca cacggcgcca cgggacgcct tggaggagat cctcgtcgcg 15840gtcgtacggg aggtgctcgg gctggaggtg gtcgggctcc agcagagctt cgtcgatctt 15900ggtgcgacat cgattcacat cgttcgcatg aggagcctgt tgcagaagag gctggatagg 15960gagatcgcca tcaccgagtt gttccagtac ccgaacctcg gctcgctggc gtccggtttg 16020cgccgagact cgagagatct agatcagcgg ccgaacatgc aggaccgagt ggaggttcgg 16080cgcaagggca ggagacgtag ctaagagcgc cgaacaaaac caggccgagc gggccgatga 16140gccgcaagcc cgcctgcgtc accctgggac tcatctgatc tgatcgcggg tacgcgtcgc 16200gggtgtgcgc gttgagccgt gttgttcgaa cgctgaggaa cggtgagctc atggaagaac 16260aagagtcctc cgctatcgca gtcatcggca tgtcgggccg ttttccgggg gcgcgggatc 16320tggacgaatt ctggaggaac cttcgagacg gcacggaggc cgtgcagcgc ttctccgagc 16380aggagctcgc ggcgtccgga gtcgaccccg cgctggtgct ggacccgagc tacgtccggg 16440cgggcagcgt gctggaagac gtcgaccggt tcgacgctgc tttcttcggc atcagcccgc 16500gcgaggcaga gctcatggat ccgcagcacc ggatcttcat ggaatgcgcc tgggaggcgc 16560tggagaacgc cggatacgac ccgacggctt acgagggctc tatcggcgtg tacgccggcg 16620ccaacatgag ctcgtacttg acgtcgaacc tccacgagca cccagcgatg atgcggtggc 16680ccggctggtt tcagacgttg atcggcaacg acaaggatta cctcgcgacc cacgtctcct 16740acaggctgaa tctgagaggg ccgagcatct ccgttcaaac tgcctgctcc acctcgctcg 16800tggcggttca cttggcgtgc atgagcctcc tggaccgcga gtgcgacatg gcgctggccg 16860gcgggattac cgtccggatc ccccatcgag ccggctatgt atatgctgag gggggcatct 16920tctctcccga cggccattgc cgggccttcg acgccaaggc gaacggcacg atcatgggca 16980acggctgcgg cgttgtcctc ctgaagccgc tggaccgggc gctctccgat ggtgatcccg 17040tccgcgcggt tatccttggg tctgccacaa acaacgacgg agcgaggaag atcgggttca 17100ctgcgcccag tgaggtgggc caggcgcaag cgatcatgga ggcgctggcg ctggcagggg 17160tcgaggcccg gtccatccaa tacatcgaga cccacgggac cggcacgctg ctcggagacg 17220ccatcgagac ggcggcgctg cggcgggtgt tcggtcgcga cgcttcggcc cggaggtctt 17280gcgcgatcgg ctccgtgaag accggcatcg gacacctcga atcggcggct ggcatcgccg 17340gtttgatcaa gacggtcttg gcgctggagc accggcagct gccgcccagc ctgaacttcg 17400agtctcctaa cccatcgatc gatttcgcga gcagcccgtt ctacgtcaat acctctctta 17460aggattggaa taccggctcg actccgcggc gggccggcgt cagctcgttc gggatcggcg 17520gcaccaacgc ccatgtcgtg ctggaggaag cgcccgcggc gaagcttcca gccgcggcgc 17580cggcgcgctc tgccgagctc ttcgtcgtct cggccaagag cgcagcggcg ctggatgccg 17640cggcggcacg gctacgagat catctgcagg cgcaccaggg gatttcgttg ggcgacgtcg 17700ccttcagcct ggcgacgacg cgcagcccca tggagcaccg gctcgcgatg gcggcgccgt 17760cgcgcgaggc gttgcgagag gggctcgacg cagcggcgcg aggccagacc ccgccgggcg 17820ccgtgcgtgg ccgctgctcc ccaggcaacg tgccgaaggt ggtcttcgtc tttcccggcc 17880agggctctca gtgggtcggc atgggccggc agctcctggc tgaggaaccc gtcttccacg 17940cggcgctttc ggcgtgcgac cgggccatcc aggccgaagc tggttggtcg ctgctcgcgg 18000agctcgccgc cgacgaaggg tcctcccagc tcgagcgcat cgacgtggtg cagccggtgc 18060tgttcgccct cgcggtggca tttgcggcgc tgtggcggtc gtggggtgtc gcgcccgacg 18120tcgtgatcgg ccacagcatg ggcgaggtag ccgccgcgca tgtggccggg gcgctgtcgc 18180tcgaggatgc ggtggcgatc atctgccggc gcagccggct gctccggcgc atcagcggtc 18240agggcgagat ggcggtgacc gagctgtcgc tggccgaggc cgaggcggcg ctccgaggct 18300acgaggatcg ggtgagcgtg gccgtgagca acagcccgcg ctcgacggtg ctctcgggcg 18360agccggcagc gatcggcgag gtgctgtcgt ccctgaacgc gaagggggtg ttctgccgtc 18420gggtgaaggt ggatgtcgcc agccacagcc cgcaggtcga cccgctgcgc gaggacctct 18480tggcagccct gggcgggctc cggccgggtg cggctgcggt gccgatgcgc tcgacggtga 18540cgggcgccat ggtagcgggc ccggagctcg gagcgaatta ctggatgaac aacctcaggc 18600agccagtgcg cttcgccgag gtagtccagg cgcagctcca aggcggccac ggtctgttcg 18660tggagatgag cccgcatccg atcctaacga cttcggtcga ggagatgcgg cgcgcggccc 18720agcgggcggg cgcagcggtg ggctcgctgc ggcgggggca ggacgagcgc ccggcgatgc 18780tggaggcgct gggcacgctg tgggcgcagg gctaccctgt accctggggg cggctgtttc 18840ccgcgggggg gcggcgggta ccgctgccga cctatccctg gcagcgcgag cggtactgga 18900tcgaagcgcc ggccaagagc gccgcgggcg atcgccgcgg cgtgcgtgcg ggcggtcacc 18960cgctcctcgg tgaaatgcag accctgtcaa cccagacgag cacgcggctg tgggagacga 19020cgctggatct caagcggctg ccgtggctcg gcgaccaccg ggtgcaggga gcggtcgtgt 19080ttccgggcgc ggcgtacctg gagatggcga tttcgtcggg ggccgaggct ttgggcgatg 19140gccctttgca gataactgac gtggtgctcg ccgaggcgct ggccttcgcg ggcgacgcgg 19200cggtgttggt ccaggtggtg acgacggagc agccgtcggg gcggctgcag ttccagatcg 19260cgagccgggc gccgggcgct ggccacgcgt ccttccgggt ccacgctcgc ggcgcgttgc 19320tccgagtgga gcgcaccgag gtcccggctg ggcttacgct ttccgctgtg cgcgcgcggc 19380tccaggccag catacccgcc gcggccacct acgcggagct gaccgagatg gggctgcagt 19440acggccctgc cttccagggg attgctgagc tatggcgggg tgaaggcgag gcgctgggac 19500gggtacgcct gcccgacgcg gccggctcgg cagcggagta tcggttgcat cctgcgctgc 19560tggacgcgtg cttccagatc gtcggcagcc tcttcgcccg cagtggcgag gcgacgccgt 19620gggtgcccgt ggagttgggc tcgctgcggc tcttgcagcg gccttcgggg gagctgtggt 19680gccatgcgcg cgtcgtgaac catgggcacc aaacccccga tcggcagggc gccgactttt 19740gggtggtcga cagctcgggt gcagtggtcg ccgaagtttg cgggctcgtg gcgcagcggc 19800ttccgggagg ggtgcgccgg cgcgaagaag acgattggtt cctggagctc gagtgggaac 19860ccgcagcggt cggcacagcc aaggtcaacg cgggccggtg gctgctcgtc ggcggcggcg 19920gtgggctcgg cgccgcgttg cgcgcgatgc tggaggccgg cggccatgcc gtcgtgcatg 19980cggcagagaa caacacgagc gctgccggcg tacgcgcgct cctggcaaag gcctttgacg 20040gccaggctcc gacggcggtg gtgcacctcg gcagcctcga tgggggtggc gagctcgacc 20100cagggctcgg ggcgcaaggc gcattggacg cgccccggag cgccgacgtc agtcccgatg 20160ccctcgatcc ggcgctggta cgtggctgcg acagcgtgct ctggaccgtg caggccctgg 20220ccggcatggg ctttcgagac gccccgcgat tgtggctttt gacccgcggc gcacaggccg 20280tcggcgccgg cgacgtctcc gtgacacagg caccgctgct ggggctgggc cgcgtcatcg 20340ccatggagca cgcggatctg cgctgcgctc gggtcgacct cgatccagcc cggcccgagg 20400gggagctcgc tgccctgctg gccgagctgc tggccgacga cgccgaagcg gaagtcgcgt 20460tgcgcggtgg cgagcgatgc gtcgctcgga tcgtccgccg gcagcccgag acccggcccc 20520gggggaggat cgagagctgc gttccgaccg acgtcaccat ccgcgcggac agcacctacc 20580ttgtgaccgg cggtctgggt gggctcggtc tgagcgtggc cggatggctg gccgagcgcg 20640gcgctggtca cctggtgctg gtgggccgct ccggcgcggc gagcgtggag caacgggcag 20700ccgtcgcggc gctcgaggcc cgcggcgcgc gcgtcaccgt ggcgaaggcg gatgtcgccg 20760atcgggcgca gctcgagcgg atcctccgcg aggttaccac gtcggggatg ccgctgcggg 20820gcgtcgtcca tgcggccggc atcttggacg acgggctgct gatgcagcag actcccgcgc 20880ggtttcgtaa ggtgatggcg cccaaggtcc agggggcctt gcacctgcac gcgttgacgc 20940gcgaagcgcc gctttccttc ttcgtgctgt acgcttcggg agtagggctc ttgggctcgc 21000cgggccaggg caactacgcc gcggccaaca cgttcctcga cgctctggcg caccaccgga 21060gggcgcaggg gctgccagcg ttgagcgtcg actggggcct gttcgcggag gtgggcatgg 21120cggccgcgca ggaagatcgc ggcgcgcggc tggtctcccg cggaatgcgg agcctcaccc 21180ccgacgaggg gctgtccgct ctggcacggc tgctcgaaag cggccgcgct caggtggggg 21240tgatgccggt gaacccgcgg ctgtgggtgg agctctaccc cgcggcggcg tcttcgcgaa 21300tgttgtcgcg cctggtgacg gcgcatcgcg cgagcgccgg cgggccagcc ggggacgggg 21360acctgctccg ccgcctcgcc gctgccgagc cgagcgcgcg gagcgcgctc ctggagccgc 21420tcctccgcgc gcagatctcg caggtgctgc gcctccccga gggcaagatc gaggtggacg 21480ccccgctcac gagcctgggc atgaactcgc tgatggggct cgagctgcgc aaccgcatcg 21540aggccatgct gggcatcacc gtaccggcaa cgctgttgtg gacctgtccc acggtggcgg 21600cgctgagcgg gcatctggcg cgggaggcat gcgaagccgc tcctgtggag tcaccgcaca 21660ccaccgccga ctctgccgtc gagatcgagg agatgtcgca ggacgatctg acgcagttga 21720tcgcagcaaa attcaaggcg cttacatgac tactcgcggt cctacggcac agcagaatcc 21780gctgaaacaa gcggccatca tcattcagcg gctggaggag cggctcgctg ggctcgcaca 21840ggcggagctg gaacggaccg agccgatcgc catcgtcggt atcggctgcc gcttccctgg 21900cggtgcggac gctccggaag cgttttggga gctgctcgac gcggagcgcg acgcggtcca 21960gccgctcgac atgcgctggg cgctggtggg tgtcgctccc gtcgaggccg tgccgcactg 22020ggcggggctg ctcaccgagc cgatagattg cttcgatgct gcgttcttcg gcatctcgcc 22080tcgggaggcg cgatcgctcg acccgcagca tcgtctgttg ctggaggtcg cttgggaggg 22140gctcgaggac gccggtatcc cgccccggtc catcgacggg agccgcaccg gtgtgttcgt 22200cggcgctttc acggcggact acgcgcgcac ggtcgctcgg ctgccgcgcg aggagcgaga 22260cgcgtacagc gccaccggca acatgctcag catcgccgcc ggacggctgt cgtacacgct 22320ggggttgcag ggaccttgcc tgaccgtcga cacggcgtgc tcgtcatcgc tggtggcgat 22380tcacctcgcc tgccgcagcc tgcgcgcagg agagagcgat ctcgcgttgg cgggaggggt 22440cagcgcgctc ctctcccccg acatgatgga agccgcggcg cgcacgcaag cgctgtcgcc 22500cgatggtcgt tgccggacct tcgatgcttc ggccaacggg ttcgtccgtg gcgagggctg 22560tggcctggtc gtcctcaaac ggctctccga cgcgcaacgg gatggcgacc gcatctgggc 22620gctgatccgg ggctcggcca tcaaccatga tggccggtcg accgggttga ccgcgcccaa 22680cgtgctggct caggagacgg tcttgcgcga ggcgctgcgg agcgcccacg tcgaagctgg 22740ggccgtcgat tacgtcgaga cccacggaac agggacctcg ctgggcgatc ccatcgaggt 22800cgaggcgctg cgggcgacgg tggggccggc gcgctccgac ggcacacgct gcgtgctggg 22860cgcggtgaag accaacatcg gccatctcga ggccgcggca ggcgtagcgg gcctgatcaa 22920ggcagcgctt tcgctgacgc acgagcgcat cccgagaaac ctcaacttcc gcacgctcaa 22980tccgcggatc cggctcgagg gcagcgcgct cgcgttggcg accgagccgg tgccgtggcc 23040gcgcacggac cgcccgcgct tcgcgggggt gagctcgttc gggatgagcg gaacgaacgc 23100gcatgtggtg ctggaagagg cgccggcggt ggagctgtgg cctgccgcgc cggagcgctc 23160ggcggagctt ttggtgctgt cgggcaagag cgagggggcg ctcgatgcgc aggcggcgcg 23220gctgcgcgag cacctggaca tgcacccgga gctcgggctc ggggacgtgg cgttcagcct 23280ggcgacgacg cgcagcgcga tgagccaccg gctcgcggtg gcggtgacgt cgcgcgaggg 23340gctgctggcg gcgctctcgg ccgtggcgca ggggcagacg ccggcggggg cggcgcgctg 23400catcgcgagc tcctcgcgcg gcaagctggc gttcctgttc accggacagg gcgcgcagac 23460gccgggcatg ggccgggggc tttgcgcggc gtggccagcg ttccgggagg cgttcgaccg 23520gtgcgtggcg ctgttcgacc gggagctgga ccgcccgctg cgcgaggtga tgtgggcgga 23580ggcggggagc gccgagtcgt tgttgctcga ccagacggcg ttcacccagc ccgcgctctt 23640cgcggtggag tacgcgctga cggcgctgtg gcggtcgtgg ggcgtagagc cggagctcct 23700ggttgggcat agcatcgggg agctggtggc ggcgtgcgtg gcgggggtgt tctcgctgga 23760agatggggtg aggctcgtgg cggcgcgcgg gcggctgatg caggggctct cggcgggcgg 23820cgcgatggtg tcgctcggag cgccggaggc ggaggtggcg gcggcggtgg cgccgcacgc 23880ggcgtcggtg tcgatcgcgg cggtcaatgg gccggagcag gtggtgatcg cgggcgtgga 23940gcaagcggtg caggcgatcg cggcggggtt cgcggcgcgc ggcgcgcgca ccaagcggct 24000gcatgtctcg cacgcgttcc actcgccgct gatggaaccg atgctggagg agttcgggcg 24060ggtggcggcg tcggtgacgt accggcggcc aagcgtttcg ctggtgagca acctgagcgg 24120gaaggtggtc acggacgagc tgagcgcgcc ggggtactgg gtgcggcacg tgcgggaggc 24180ggtgcgcttc gcggacgggg tgaaggcgct gcacgaagcc ggcgcgggga cgttcgtcga 24240agtgggcccg aagccgacgc tgctcgggct gttgccagcc tgcctgccgg aggcggagcc 24300gacgctgctg gcgtcgttgc gcgccgggcg cgaggaggct gcgggggtgc tcgaggcgct 24360gggcaggctg tgggccgccg gcggctcggt cagctggccg ggcgtcttcc ccacggctgg 24420gcggcgggtg ccgctgccga cctatccgtg gcagcggcag cggtactgga tcgaggcgcc 24480ggccgaaggg ctcggagcca cggccgccga tgcgctggcg cagtggttct accgggtgga 24540ctggcccgag atgcctcgct catccgtgga ttcgcggcga gcccggtccg gcgggtggct 24600ggtgctggcc gaccggggtg gagtcgggga ggcggccgcg gcggcgcttt cgtcgcaggg 24660atgttcgtgc gccgtgctcc atgcgcccgc cgaggcctcc gcggttgccg agcaggtgac 24720ccaggccctc ggtggccgca acgactggca gggggtgctg tacctgtggg gtctggacgc 24780cgtcgtggag gcgggggcat cggccgaaga ggtcgccaaa gtcacccatc ttgccgcggc 24840gccggtgctc gcgctgattc aggcgctcgg cacggggccg cgctcacccc ggctctggat 24900cgtgacccga ggggcctgca cggtgggcgg cgagcctgac gctgccccct gtcaggcggc 24960gctgtggggt atgggccggg tcgcggcgct agagcatccc ggctcctggg gcgggctcgt 25020ggacctggat ccggaggaga gcccgacgga ggtcgaggcc ctggtggccg agctgctttc 25080gccggacgcc gaggatcagc tggcattccg ccaggggcgc cggcgcgcag cgcggcttgt 25140ggccgcccca ccggagggaa acgcagcgcc ggtgtcgctg tctgcggagg ggagttactt 25200ggtgacgggt gggctgggcg cccttggcct cctcgttgcg cggtggttgg tggagcgcgg 25260ggcggggcac cttgtgctga tcagccggca cggattgccc gaccgcgagg aatggggccg 25320agatcagccg ccagaggtgc gcgcgcgcat tgcggcgatc gaggcgctgg aggcgcaggg 25380cgcgcgggtc accgtggcgg cggtcgacgt ggccgatgcc gaaggcatgg cggcgctctt 25440ggcggccgtc gagccgccgc tgcggggggt agtgcacgcc gcgggtctgc tcgacgacgg 25500gctgctggcc caccaggacg ctggtcggct cgcccgggtg ttgcgcccca aggtggaggg 25560ggcatgggtg ctgcacaccc ttacccgcga gcagccgctg gacctcttcg tactgttttc 25620ctcggcgtcg ggcgtcttcg gctcgatcgg ccagggcagc tacgcggcag gcaatgcctt 25680tttggacgcg ctggcggacc tccgccgaac gcaggggctc gccgccctga gcatcgcctg 25740gggcctgtgg gcggaggggg ggatgggctc gcaggcgcag cgccgggaac acgaggcatc 25800gggaatctgg gcgatgccga cgagtcgggc cctggcggcg atggaacggc tgctcggtac 25860gcgcgcgacg cagcgcgtgg tcatccagat ggattgggcc catgcgggag cggcgccgcg 25920cgacgcgagc cgaggccgct tctgggatcg gctggtaact gccacgaaag aggcctcctc 25980ctcggccgtg ccagctgcgg agcgctggcg caacgcgtct gttgtggaga cccgctcggc 26040gctctacgag cttgtgcgcg gcgtggtcgc cggggtgatg ggctttaccg accagggcac 26100gctcgacgtg cgacgaggct tcgccgagca gggcctcgac tccctgatgg ccgtggagat 26160ccgcaaacgg cttcagggtg agctgggtat gccgctgtcg gcgacgctag cgttcgacca 26220tccgaccgtg gagcggctgg tggaatactt gctgagccag gcgctggagc tgcaggaccg 26280caccgacgtg cggagcgttc ggttgccggc gacagaggac ccgatcgcca tcgtgggtgc 26340cgcctgccgc ttcccgggcg gggtcgagga cctggagtcc tactggcagc tgttgaccga 26400gggcgtggtg gtcagcaccg aggtgccggc cgaccggtgg aatggggcag acgggcgcgt 26460ccccggctcg ggagaggcac agagacagac ctacgtgccc aggggtggct ttctgcgcga 26520ggtggagacg ttcgatgcgg cgttcttcca catctcgcct cgggaggcga tgagcctgga 26580cccgcaacag cggctgctgc tggaagtgag ctgggaggcg atcgagcgcg cgggccagga 26640cccgtcggcg ctgcgcgaga gccccacggg cgtgttcgtg ggcgcgggcc ccaacgaata 26700tgccgagcgg gtgcaggaac tcgccgatga ggcggcgggg ctctacagcg gcaccggcaa 26760catgctcagc gttgcggcgg gacggctatc atttttcctg ggcctgcacg ggccgaccct 26820ggctgtggat acggcgtgct cctcgtcgct ggtggcgctg cacctcggct gccagagctt 26880gcgacggggc gagtgcgacc aagccctggt tggcggggtc aacatgctgc tctcgccgaa 26940gaccttcgcg ctgctctcac ggatgcacgc actttcgccc ggcgggcggt gcaagacgtt 27000ctcggccgac gcggacggct acgcgcgggc cgagggctgc gccgtggtgg tgctcaagcg 27060gctctccgac gcgcagcgcg accgcgaccc catcctggcg gtgatccggg gtacggcgat 27120caatcatgat ggcccgagca gcgggctgac agtgcccagc ggccctgccc aggaggcgct 27180gttacgccag gcgctggcgc acgcaggggt ggttccggcc gacgtcgatt tcgtggaatg 27240ccacgggacc gggacggcgc tgggcgaccc gatcgaggtg cgtgcgctga gcgacgtgta 27300cgggcaagcc cgccctgcgg accgaccgct gatcctggga gccgccaagg ccaaccttgg 27360gcacatggag cccgcggcgg gcctggccgg cttgctcaag gcggtgctcg cgctggggca 27420agagcaaata ccagcccagc cggagctggg cgagctcaac ccgctcttgc cgtgggaggc 27480gctgccggtg gcggtggccc gcgcagcggt gccgtggccg cgcacggacc gcccgcgctt 27540cgcgggggtg agctcgttcg ggatgagcgg aacgaacgcg catgtggtgc tggaagaggc 27600gccggcggtg gagctgtggc ctgccgcgcc ggagcgctcg gcggagcttt tggtgctgtc 27660gggcaagagc gagggggcgc tcgatgcgca ggcggcgcgg ctgcgcgagc acctggacat 27720gcacccggag ctcgggctcg gggacgtggc gttcagcctg gcgacgacgc gcagcgcgat 27780gaaccaccgg ctcgcggtgg cggtgacgtc gcgcgagggg ctgctggcgg cgctttcggc 27840cgtggcgcag gggcagacgc cgccgggggc ggcgcgctgc atcgcgagct cgtcgcgcgg 27900caagctggcg ttcctgttca ccggacaggg cgcgcagacg ccgggcatgg gccgggggct 27960ttgcgcggcg tggccagcgt tccgggaggc gttcgaccgg tgcgtggcgc tgttcgaccg 28020ggagctggac cgcccgctgc gcgaggtgat gtgggcggag ccggggagcg ccgagtcgtt 28080gttgctcgac cagacggcgt tcacccagcc cgcgctcttc acggtggagt acgcgctgac 28140ggcgctgtgg cggtcgtggg gcgtagagcc ggagctggtg gctgggcata gcgccgggga 28200gctggtggcg gcgtgcgtgg cgggggtgtt ctcgctggaa gatggggtga ggctcgtggc 28260ggcgcgcggg cggctgatgc aggggctctc ggcgggcggc gcgatggtgt cgctcggagc 28320gccggaggcg gaggtggcgg cggcggtggc gccgcacgcg gcgtcggtgt cgatcgcggc 28380ggtcaatggg ccggagcagg tggtgatcgc gggcgtggag caagcggtgc aggcgatcgc 28440ggcggggttc gcggcgcgcg gcgcgcgcac caagcggctg catgtctcgc acgcgtccca 28500ctcgccgctg atggaaccga tgctggagga gttcgggcgg gtggcggcgt cggtgacgta 28560ccggcggcca agcgtttcgc tggtgagcaa cctgagcggg aaggtggtcg cggacgagct 28620gagcgcgccg gggtactggg tgcggcacgt gcgggaggcg gtgcgcttcg cggacggggt 28680gaaggcgctg cacgaagccg gtgcgggcac gttcgtcgaa gtgggcccga agccgacgct 28740gctcgggctg ttgccagcct gcctgccgga ggcggagccg acgctgctgg cgtcgttgcg 28800cgccgggcgc gaggaggctg cgggggtgct cgaggcgctg ggcaggccgt gggccgccgg 28860cggctcggtc agctggccgg gcgtcttccc cacggctggg cggcgggtgc cgctgccgac 28920ctatccgtgg cagcggcagc ggtactggcc cgacatcgag cctgacagcc gtcgccacgc 28980agccgcggat ccgacccaag gctggttcta tcgcgtggac tggccggaga tacctcgcag 29040cctccagaaa tcagaggagg cgagccgcgg gagctggctg gtattggcgg ataagggtgg 29100agtcggcgag gcggtcgctg cagcgctgtc gacacgtgga cttccatgcg tcgtgctcca 29160tgcgccggca gagacatccg cgaccgccga gctggtgacc gaggctgccg gcggtcgaag 29220cgattggcag gtagtgctct acctgtgggg tctggacgcc gtcgtcggtg cggaggcgtc 29280gatcgatgag atcggcgacg cgacccgtcg tgctaccgcg ccggtgctcg gcttggctcg 29340gtttctgagc accgtgtctt gtccgccccg actctgggcc gtgacccggg gggcacgcat 29400cgttggcgac gagcccgcga tcgccccctg tcaggcggcg ttacggggca tgggccgggc 29460ggcggcgccc gagcatcccg gggcccgggg cgggctcgtg gacctggatc cccgagcgag 29520cccgccccaa gccagcccga tcgacggcga gatgctcgtc accgagctat tgtcgcagga 29580gaccgaggat cagctcgcct tccgccatgg gcgccggcac gcggcacggc tggtggccgc 29640cccgccacag gggcaagcgg caccggtgtc gctgtctgcg gaggcgagct acctggtgac 29700gggaggcccc ggcgggctgg gcctgatcgc ggcccagtgg ctggcggagc tgggagcgcg 29760gcacttggtg ctgaccagcc ggcgcgggtt gcccgaccgg caggcgtggt gcgagcagca 29820gccgcctgag atccgcgcgc ggatcgcagc ggtcgaggcg ctggaggcgc ggggtgcacg 29880ggtgaccgtg gcagcggtgg acgtggccga cgtcgaaccg atgacagcgc tggtttcgtc 29940ggtcgagccc ccgctgcgag gggtggtgca cgccgctggc gtcagcgtca tgcgtccact 30000ggcggagacg gacgagaccc tgctcgagtc ggtgctccgt cccaaggtgg ccgggagctg 30060gctgctgcac cggctgctgc acggccggcc tctcgacctg ttcgtgctgt tctcgtcggg 30120cgcagcggtg tggggtagcc atagccaggg tgcgtacgcg gcggccaacg ctttcctcga 30180cgggctcgcg catcttcggc gttcgcaatc gctgcctgcg ttgagcgtcg cgtggggtct 30240gtgggccgag ggaggcatgg cggacgcgga ggctcatgca cgtctgagcg acatcggggt 30300tctgcccatg tcgacgtcgg cagcgttgtc ggcgctccag cgcctggtgg agaccggcgc 30360ggctcagcgc acggtgaccc ggatggactg ggcgcgcttc gcgccggtgt acaccgctcg 30420agggcgtcgc aacctgcttt cggcgctggt cgcagggcgc gacatcatcg cgccttcccc 30480tccggcggca gcaacccgga actggcgtgg cctgtccgtt gcggaagccc gcgtggctct 30540gcacgagatc gtccatgggg ccgtcgctcg ggtgctgggc ttcctcgacc cgagcgcgct 30600cgatcctggg atggggttca atgagcaggg cctcgactcg ttgatggcgg tggagatccg 30660caacctcctt caggctgagc tggacgtgcg gctttcgacg acgctggcct ttgatcatcc 30720gacggtacag cggctggtgg agcatctgct cgtcgatgta ctgaagctgg aggatcgcag 30780cgacacccag catgttcggt cgttggcgtc agacgagccc atcgccatcg tgggagccgc 30840ctgccgcttc ccgggcgggg tggaggacct ggagtcctac tggcagctat tggccgaggg 30900cgtggtggtc agcgccgagg tgccggccga ccggtgggat gcggcggact ggtacgaccc 30960tgatccggag atcccaggcc ggacttacgt gaccaaaggc gccttcctgc gcgatttgca 31020gagattggat gcgaccttct tccgcatctc gcctcgcgag gcgatgagcc tcgacccgca 31080gcagcggttg ctcctggagg taagctggga agcgctcgag agcgcgggta tcgctccgga 31140tacgctgcga gatagcccca ccggggtgtt cgtgggtgcg gggcccaatg agtactacac 31200gcagcggctg cgaggcttca ccgacggagc ggcagggttg tacggcggca ccgggaacat 31260gctcagcgtt acggctggac ggctgtcgtt tttcctgggt ctgcacggcc cgacgctggc 31320catggatacg gcgtgctcgt catccctggt cgcgctgcac ctcgcctgcc agagcctgcg 31380actgggcgag tgcgatcaag cgctggttgg cggggtcaac gtgctgctcg cgccggagac 31440cttcgtgctg ctctcacgga tgcgcgcgct ttcgcccgac gggcggtgca agacgttctc 31500ggccgacgcg gacggctacg cgcggggcga ggggtgcgcc gtggtggtgc tcaagcggct 31560gcgcgatgcg cagcgcgccg gcgactccat cctggcgctg atccggggaa gcgcggtgaa 31620ccacgacggc ccgagcagcg ggctgaccgt acccaacgga cccgcccagc aagcattgct 31680gcgccaggcg ctttcgcaag caggcgtgtc tccggtcgac gttgattttg tggagtgtca 31740cgggacaggg acggcgctgg gcgacccgat cgaggtgcag gcgctgagcg aggtgtatgg 31800tccagggcgc tccggggacc gaccgctggt gctgggggcc gccaaggcca acgtcgcgca 31860tctggaggcg gcatctggct tggccagcct gctcaaggcc gtgcttgcgc tgcggcacga 31920gcagatcccg gcccagccgg agctggggga gctcaacccg cacttgccgt ggaacacgct 31980gccggtggcg gtgccacgta aggcggtgcc gtgggggcgc ggcgcacgcc cgcgtcgggc 32040cggcgtgagc gcgttcgggt tgagcggaac caacgtgcat gtcgtgctgg aggaggcacc 32100ggaggtggag ccggcgcccg cggcgccggc gcgaccggtg gagctggtcg tgctatcggc 32160caagagcgcg gcggcgctgg acgccgcggc ggcacggctc tcggcgcacc tgtccgcgca 32220cccggagctg agcctcggcg acgtggcgtt cagcctggcg acgacgcgca gcccgatgga 32280gcaccggctc gccatcgcga cgacctcgcg cgaggccctg cgaggcgcgc tggacgccgc 32340ggcgcagcaa aagacgccgc agggcgcggt gcgcggcaag gccgtgtcct cacgcggtaa 32400gctggctttc ctgttcaccg gacagggcgc gcaaatgccg ggcatgggcc gtgggctgta 32460cgaaacgtgg cctgcgttcc gggaggcgtt cgaccggtgc gtggcgctct tcgatcggga 32520gatcgaccag cctctgcgcg aggtgatgtg ggctgcgccg ggcctcgctc aggcggcgcg 32580gctcgatcag accgcgtacg cgcagccggc tctctttgcg ctggagtacg cgctggctgc 32640cctgtggcgt tcgtggggcg tggagccgca cgtactgctc ggtcatagca tcggcgagct 32700ggtcgccgcc tgcgtggcgg gcgtgttctc gctcgaagat gcggtgaggt tggtggccgc 32760gcgcgggcgg ctgatgcagg cgctacccgc cggcggtgcc atggtagcca tcgcagcgtc 32820cgaggccgag gtggccgcct ccgtggcgcc ccacgccgcc acggtgtcga tcgccgcggt 32880caacggtcct gacgccgtcg tgatcgccgg cgccgaggta caggtgctcg ccctcggcgc 32940gacgttcgcg gcgcgtggga tacgcacgaa gaggctcgcc gtctcccatg cgttccactc 33000gccgctcatg gatccgatgc tggaagactt ccagcgggtc gctgcgacga tcgcgtaccg 33060cgcgccagac cgcccggtgg tgtcgaatgt caccggccac gtcgcaggcc ccgagatcgc 33120cacgcccgag tattgggtcc ggcatgtgcg aagcgccgtg cgcttcggcg acggggcaaa 33180ggcgttgcat gccgcgggtg ccgccacgtt cgtcgaggtt ggcccgaagc cggtcctgct 33240cgggctgttg ccagcgggcc tcggggaagc ggacgcggtc ctcgtgccgt cgctacgcgc 33300ggaccgctcg gaatgcgagg tggtcctcgc ggcgctcggg gcttggtatg cctggggggg 33360tgcgctcgac tggaagggcg ggggccccga tggcgcgcgc cgcgtggctc tgcccatgta 33420tccatggcag cgtgagcgcc attggatgga cctcaccccg cgaagcgccg cgcctgcagg 33480gatcgcaggt cgctggccgc tggctggtgt cgggctctgc atgcccggcg ctgtgttgca 33540ccacgtgctc tcgatcggac cacgccatca gcccttcctc ggtgatcacc tcgtgtttgg 33600caaggtggtg gtgcccggcg cctttcatgt cgcggtgatc ctcagcatcg ccgccgagcg 33660ctggcccgag cgggcgatcg agctgacagg cgtggagttc ctgaaggcca tcgcgatgga 33720gcccgaccag gaggtcgagc tccacgccgt gctcaccccc gaagccgccg gggatggcta 33780cctgttcgag ctggcgaccc tggcggcgcc ggagaccgaa cgccgatgga cgacccacgc 33840ccgcggtcgg gtgcagccga cagacggcgc gcccggcgcg ttgccgcgcc tcgaggtgct 33900ggaggaccgc gcgatccagc ccctcgactt cgccggattc ctcgacaggt tatcggcggt 33960gcggatcggc tggggtccgc tttggcgatg gctgcaggac gggcgcgtcg gcgacgaggc 34020ctcgcttgcc accctcgtgc cgacctatcc gaacgcccac gacgtggcgc ccttgcaccc 34080gatcctgctg gacaacggct ttgcggtgag cctgctgtca acccggagcg agccggagga 34140cgacgggacg cccccgctgc cgttcgccgt ggaacgggtg cggtggtggc gggcgccggt 34200tggaagggtg cggtgtggcg gcgtgccgcg gtcgcaggca ttcggtgtct cgagcttcgt 34260gctggtcgac gaaactggcg aggtggtcgc cgaggtggag ggatttgttt gccgccgggc 34320gccgcgagag gtgttcctgc ggcaggagtc gggcgcgtcg actgcagcct tgtaccgcct 34380cgactggccc gaagcgccct tgcccgatgc gcctgcggaa cggatcgagg agagctgggt 34440cgtggtggca gcacctggct cggagatggc cgcggcgctc gcaacacggc tcaaccgctg 34500cgtcctcgcc gaacccaaag gcctcgaggc ggccctcgcg ggggtgtctc ccgcaggtgt 34560gatctgcctc tgggaggctg gagcccacga ggaagctccg gcggcggcgc agcgtgtggc 34620gaccgagggc ctctcggtgg tgcaggcgct cagggaccgc gcggtgcgcc tgtggtgggt 34680gaccatgggc gcagtggccg tcgaggccgg tgagcgggtg caggtcgcca cagcgccggt 34740atggggcctc ggccggacag tgatgcagga gcgcccggag ctcagctgca ctctggtgga 34800tttggagccg gaggccgatg cagcgcgctc agctgacgtt ctgttgcggg agctcggtcg 34860cgctgacgac gagacacagg tggctttccg ttccggaaag cgccgcgtag cgcggctggt 34920caaagcgacg acccccgaag ggctcctggt ccctgacgca gagtcctatc gactggaggc 34980tgggcagaag ggcacattgg accagctccg cctcgcgccg gcacagcgcc gggcacctgg 35040cccgggcgag gtcgagatca aggtaaccgc ctcggggctc aacttccgga ccgtcctcgc 35100tgtgctggga atgtatccgg gcgacgccgg gccgatgggc ggagattgtg ccggtgtcgc 35160cacggcggtg ggccaggggg tgcgccacgt cgcggtcggc gatgctgtca tgacgctggg 35220gacgttgcat cgattcgtca cggtcgacgc gcggctggtg gtccggcagc ctgcagggct 35280gactcccgcg caggcagcta cggtgccggt cgcgttcctg acggcctggc tcgctctgca 35340cgacctgggg aatctgcggc gcggcgagcg ggtgctgatc catgctgcgg ccggcggtgt 35400gggcatggcc gcggtgcaaa tcgcccgatg gataggggcc gaggtgttcg ccacggcgag 35460cccgtccaag tgggcagcgg ttcaggccat gggcgtgccg cgcacgcaca tcgccagctc 35520gcggacgctg gagtttgctg agacgttccg gcaggtcacc ggcggccggg gcgtggacgt 35580ggtgctcaac gcgctggccg gcgagttcgt ggacgcgagc ctgtccctgc tgtcgacggg 35640cgggcggttc ctcgagatgg gcaagaccga catacgggat cgagccgcgg tcgcggcggc 35700gcatcccggt gttcgctatc gggtattcga catcctggag ctcgctccgg atcgaactcg 35760agagatcctc gagcgcgtgg tcgagggctt tgctgcggga catctgcgcg cattgccggt 35820gcatgcgttc gcgatcacca aggccgaggc agcgtttcgg ttcatggcgc aagcgcggca 35880tcagggcaag gtcgtgctgc tgccggcgcc ctccgcagcg cccttggcgc cgacgggcac 35940cgtactgctg accggtgggc tgggagcgtt ggggctccac gtggcccgct ggctcgccca 36000gcagggcgtg ccgcacatgg tgctcacagg tcggcggggc ctggatacgc cgggcgctgc 36060caaagccgtc gcggagatcg aagcgctcgg cgctcgggtg acgatcgcgg cgtcggatgt 36120cgccgatcgg aatgcgctgg aggctgtgct ccaggccatt ccggcggagt ggccgttaca 36180gggcgtgatc catgcagccg gagcgctcga tgatggtgtg cttgatgagc agaccaccga 36240ccgcttctcg cgggtgctgg caccgaaggt gactggcgcc tggaatctgc atgagctcac 36300ggcgggcaac gatctcgctt tcttcgtgct gttctcctcc atgtcggggc tcttgggctc 36360ggccgggcag tccaactatg cggcggccaa caccttcctc gacgcgctgg ccgcgcatcg 36420gcgggccgaa ggcctggcgg cgcagagcct cgcgtggggc ccatggtcgg acggaggcat 36480ggcagcgggg ctcagcgcgg cgctgcaggc gcggctcgct cggcatggga tgggagctct 36540gtcgccggct cagggcaccg cgctgctcgg gcaggcgctg gctcggccgg aaacgcagct 36600cggggcgatg tcgctcgacg tgcgtgcggc aagccaagct tcgggagcgg cagtgccgcc 36660tgtgtggcgc gcgttggtgc gcgcggaggc gcgccatacg gcggctgggg cgcagggggc 36720attggccgcg cgtcttgggg cgctgcccga ggcgcgtcgc gccgacgagg tgcgcaaggt 36780cgtgcaggcc gagatcgcgc gcgtgctttc atggagcgcc gcgagcgccg tgcccgtcga 36840tcggccgctg tcggacttgg gcctcgactc gctcacggcg gtggagctgc gcaacgtgct 36900cggccagcgg gtgggtgcga cgctgccggc gacgctggca ttcgatcacc cgacggtcga 36960cgcgctcacg cgctggctgc tcgataaggt cctggccgtg gccgagccga gcgtatcgtc 37020cgcaaagtcg tcgccgcagg tcgccctcga cgagcccatt gccatcatcg gcatcggctg 37080ccgtttccca ggcggcgtgg ccgatccgga gtcgttttgg cggctgctcg aagagggcag 37140cgatgccgtc gtcgaggtgc cgcatgagcg atgggacatc gacgcgttct atgatccgga 37200tccggatgtg cgcggcaaga tgacgacacg ctttggcggc ttcctgtccg atatcgaccg 37260gttcgatccg gccttcttcg gcatctcgcc gcgcgaagcg acgaccatgg atccgcagca 37320gcggctgctc ctggagacga gctgggaggc gttcgagcgc gccgggattt tgcccgagcg 37380gctgatgggc agcgataccg gcgtgttcgt ggggctcttc taccaggagt acgctgcgct 37440cgccggcggc atcgaggcgt tcgatggcta tctaggcacc ggcaccacgg ccagcgtcgc 37500ctcgggcagg atctcttatg tgctcgggct aaaggggccg agcctgacgg tggacaccgc 37560gtgctcctcg tcgctggtcg cggtgcacct ggcctgccag gcgctgcggc ggggcgagtg 37620ttcggtggcg ctggccggcg gcgtggcgct gatgctcacg ccggcgacgt tcgtggagtt 37680cagccggctg cgaggcctgg ctcccgacgg acggtgcaag agcttctcgg ccgcagccga 37740cggcgtgggg tggagcgaag gctgcgccat gctcctgctc aaaccgcttc gcgatgcgca 37800gcgcgatggg gatccgatcc tggcggtgat ccgcggcacc gcggtgaacc aggatgggcg 37860cagcaacggg ctgacggcgc ccaacgggtc gtcgcagcaa gaggtgatcc gtcgggccct 37920ggagcaggcg gggctggctc cggcggacgt cagctacgtc gagtgccacg gcaccggcac 37980gacgttgggc gaccccatcg aagtgcaggc cctgggcgcc gtgctggcac aggggcgacc 38040ctcggaccgg ccgctcgtga tcgggtcggt gaagtccaat atcggacata cgcaggctgc 38100ggcgggcgtg gccggtgtca tcaaggtggc gctggcgctc gagcgcgggc ttatcccgag 38160gagcctgcat ttcgacgcgc ccaatccgca cattccgtgg tcggagctcg ccgtgcaggt 38220ggccgccaaa cccgtcgaat ggacgagaaa cggcgtgccg cgacgagccg gggtgagctc 38280gtttggcgtc agcgggacca acgcgcacgt ggtgctggag gaggcgccag cggcggcgtt 38340cgcgcccgcg gcggcgcgtt cagcggagct tttcgtgctg tcggcgaaga gcgccgcggc 38400gctggacgcg caggcggcgc ggctttcggc gcacgtcgtt gcgcacccgg agctcggcct 38460cggcgacctg gcgttcagcc tggcgacgac ccgcagcccg atgacgtacc ggctcgcggt 38520ggcggcgacc tcgcgcgagg cgctgtctgc cgcgctcgac acagcggcgc aggggcaggc 38580gccgcccgca gcggctcgcg gccacgcttc cacaggcagc gccccaaagg tggttttcgt 38640ctttcctggc cagggctccc agtggctggg catgggccaa aagctcctct cggaggagcc 38700cgtcttccgc gacgcgctct cggcgtgtga ccgagcgatt caggccgaag ccggctggtc 38760gctgctcgcc gagctcgcgg ccgatgagac cacctcgcag ctcggccgca tcgacgtggt 38820gcagccggcg ctgttcgcga tcgaggtcgc gctgtcggcg ctgtggcggt cgtggggcgt 38880cgagccggat gcagtggtag gccacagcat gggcgaagtg gcggccgcgc acgtcgccgg 38940cgccctgtcg ctcgaggatg ctgtagcgat catctgccgg cgcagcctgc tgctgcggcg 39000gatcagcggc caaggcgaga tggcggtcgt cgagctttcc ctggccgagg ccgaggcagc 39060gctcctgggc tacgaagacc ggctcagcgt ggcggtgagc aacagcccgc gctcgacggt 39120gctggcgggc gagccggcag cgctcgcaga ggtgctggcg atccttgcgg caaagggggt 39180gttctgccgt cgagtcaagg tggacgtcgc cagccacagc ccacagatcg acccgctgcg 39240cgacgagcta ttggcagcat tgggcgagct cgagccgcga caagcgaccg tgtcgatgcg 39300ctcgacggtg acgagcacga tcatggcggg cccggagctc gtggcgagct actgggcgga 39360caacgttcga cagccggtgc gcttcgccga agcggtgcaa tcgttgatgg aagacggtca 39420tgggctgttc gtggagatga gcccgcatcc gatcctgacg acatcggtcg aggagatccg 39480acgggcgacg aagcgggagg gagtcgcggt gggctcgttg cggcgtggac aggacgagcg 39540cctgtccatg ttggaggcgc tgggagcgct ctgggtacac ggccaggcgg tgggctggga 39600gcggctgttc tccgcgggcg gcgcgggcct ccgtcgcgtg ccgctgccga cctatccctg 39660gcagcgcgag cggtactggg tcgatgcgcc gaccggcggc gcggcgggcg gcagccgctt 39720tgctcatgcg ggcagtcacc cgctcctggg tgaaatgcag accctgtcga cccagaggag 39780cacgcgcgtg tgggagacga cgctggatct caaacggctg ccgtggctcg gcgatcaccg 39840ggtgcagggg gcggtcgtgt tcccgggcgc ggcgtacctg gagatggcgc tttcgtccgg 39900ggccgaggcc ttgggtgacg gtccgctcca ggtcagcgat gtggtgctcg ccgaggcgct 39960ggccttcgcg gatgatacgc cggcggcggt gcaggtcatg gcgaccgagg agcgaccagg 40020ccgcctgcaa ttccacgttg cgagccgggt gccgggccac ggcggtgctg cctttcgaag 40080ccatgcccgc ggggtgctgc gccagatcga gcgcgccgag gtcccggcga ggctggatct 40140ggccgcgctt cgtgcccggc ttcaggccag cgcacccgct gcggctacct atgcggcgct 40200ggccgagatg gggctcgagt acggcccagc gttccagggg cttgtcgagc tgtggcgggg 40260ggagggcgag gcgctgggac gtgtgcggct ccccgaggcc gccggctccc cagccgcgtg 40320ccggctccac cccgcgctct tggatgcgtg cttccacgtg agcagcgcct tcgctgaccg 40380cggcgaggcg acgccatggg tacccgtgga aatcggctcg ctgcggtggt tccagcggcc 40440gtcgggggag ctgtggtgtc atgcgcggag tgtgagccac ggaaagccaa cacccgaccg 40500gcggagtacc gacttctggg tggtcgacag cacgggcgcg atcgtcgccg agatctccgg 40560gctcgtggcg cagcggctcg cgggaggtgt acgccggcgc gaagaagacg actggttcat 40620ggagccggct tgggaaccga ccgcggtccc cggatccgag gtcatggcgg gccggtggct 40680gctcatcggc tcgggcggcg ggctcggcgc tgcgctccac tcggcgctga cggaagctgg 40740ccattccgtc gtccacgcga cagggcgcgg cacgagcgcc gccgggttgc aggcactctt 40800gacggcgtcc ttcgacggcc aggccccgac gtcggtggtg cacctcggca gcctcgatga 40860gcgtggcgtg ctcgacgcgg atgccccctt cgacgccgat gcgcttgagg agtcgctggt 40920gcgcggctgc gacagcgtgc tctggaccgt gcaggccgtg gccggggcgg gcttccgaga 40980tcctccgcgg ttgtggctcg tgacacgcgg cgctcaggcc atcggcgccg gcgacgtctc 41040tgtggcgcaa gcgccgctcc tggggctggg ccgcgttatc gccttggagc acgccgagct 41100gcgctgcgct cggatcgacc tcgatccagc gcggcgcgac ggagaagtcg atgagctgct 41160tgccgagctg ttggccgacg acgccgagga ggaagtcgcg tttcgcggcg gtgagcggcg 41220cgtggcccgg ctcgtccgaa ggctgcccga gaccgactgc cgagagaaaa tcgagcccgc 41280ggaaggccgg ccgttccggc tggagatcga tgggtccggc gtgctcgacg acctggtgct 41340ccgagccacg gagcggcgcc ctcctggccc gggcgaggtc gagatcgccg tcgaggcggc 41400ggggctcaac tttctcgacg tgatgagggc catggggatc taccctgggc ccggggacgg 41460tccggttgcg ctgggcgccg agtgctccgg ccgaattgtc gcgatgggcg aaggtgtcga 41520gagccttcgt atcggccagg acgtcgtggc cgtcgcgccc ttcagtttcg gcacccacgt 41580caccatcgac gcccggatgc tcgcacctcg ccccgcggcg ctgacggccg cgcaggcagc 41640cgcgctgccc gtcgcattca tgacggcctg gtacggtctc gtccatctgg ggaggctccg 41700ggccggcgag cgcgtgctca tccactcggc gacggggggc accgggctcg ctgctgtgca 41760gatcgcccgc cacctcggcg cggagatatt tgcgaccgct ggtacaccgg agaagcgggc 41820gtggctgcgc gagcagggga tcgcgcacgt gatggactcg cggtcgctgg acttcgccga 41880gcaagtgctg gccgcgacga agggcgaggg ggtcgacgtc gtgttgaact cgctgtctgg 41940cgccgcgatc gacgcgagcc tttcgaccct cgtgccggac ggccgcttca tcgagctcgg 42000caagacggac atctatgcag atcgctcgct ggggctcgct cacttcagga agagcctgtc 42060ctacagcgcc gtcgatcttg cgggcttggc cgtgcgtcgg cccgagcgcg tcgcagcgct 42120gctggcggag gtggtggacc tgctcgcacg gggagcgctg cagccgcttc cggtagagat 42180cttccccctc tcgcgggccg cggacgcgtt ccggaaaatg gcgcaagcgc agcatctcgg 42240gaagctcgtg ctcgcgctgg aggacccgga cgtgcggatc cgcgttccgg gcgaatccgg 42300cgtcgccatc cgcgcggacg gcgcctacct cgtgaccggc ggtctggggg ggctcggtct 42360gagcgtggct ggatggctgg ccgagcaggg ggctgggcat ctggtgctgg tgggccgctc 42420cggcgcggtg agcgcggagc agcagacggc tgtcgccgcg ctcgaggcgc acggcgcgcg 42480tgtcacggta gcgagggcag acgtcgccga tcgggcgcag atggagcgga tcctccgcga 42540ggttaccgcg tcggggatgc cgctccgcgg cgtcgttcat gcggccggaa tcctggacga 42600cgggctgctg atgcagcaaa cccccgcgcg gttccgcgcg gtcatggcgc ccaaggtccg 42660aggggccttg cacctgcatg cgttgacacg cgaagcgccg ctctccttct tcgtgctgta 42720cgcttcggga gcagggctct tgggctcgcc gggccagggc aactacgccg cggccaacac 42780gttcctcgac gcactggcac accaccggag ggcgcagggg ctgccagcat tgagcatcga 42840ctggggcctg ttcgcggacg tgggtttggc cgccgggcag caaaatcgcg gcgcacggct 42900ggtcacccgc gggacgcgga gcctcacccc cgacgaaggg ctgtgggcgc tcgagcgcct 42960gctcgacggc gatcgcaccc aggccggggt catgccgttc gacgtgcggc agtgggtgga 43020gttctacccg gcggcggcat cttcgcggag gttgtcgcgg ctcatgacgg cacggcgcgt 43080ggcttccggt cggctcgccg gggatcggga cctgctcgaa cggctcgcca ccgccgaggc 43140gggcgcgcgg gcagggatgc tgcaggaggt cgtgcgcgcg caggtctcgc aggtgctgcg 43200cctctccgaa ggcaagctcg acgtggatgc gccgctcacg agcctgggaa tggactcgct 43260gatggggcta gagctgcgca accgcatcga ggccgtgctc ggcatcacca tgccggcgac 43320cctgctgtgg acctacccca cggtggcagc gctgagtgcg catctggctt ctcatgtcgt 43380ctctacgggg gatggggaat ccgcgcgccc gccggataca gggagcgtgg ctccaacgac 43440ccacgaagtc gcttcgctcg acgaagacgg gttgttcgcg ttgattgatg cgtcactcgc 43500gcgcgcggga aagaggtgat tgcgtgacag accgagaagg ccagctcctg gagcgcttgc 43560gtgaggttac tctggccctt cgcaagacgc tgaacgagcg cgataccctg gagctcgaga 43620agaccgagcc gatcgccatc gtggggatcg gctgccgctt ccccggcgga gcgggcactc 43680cggaggcgtt ctgggagctg ctcgacgacg ggcgcgacgc gatccggccg ctcgaggagc 43740gctgggcgct cgtaggtgtc gacccaggcg acgacgtacc gcgctgggcg gggctgctca 43800ccgaggccat cgacggcttc gacgccgcgt tcttcggtat cgccccccgg gaggcacggt 43860cgctcgaccc gcagcatcgc ctgctgctgg aggtcgcctg ggaggggttc gaagacgccg 43920gcatcccgcc caggtccctc gtcgggagcc gcaccggcgt gttcgtcggc gtctgcgcca 43980cggagtacct ccacgccgcc gtcgcgcacc agccgcgcga agagcgggac gcgtacagca 44040ccaccggcaa catgctcagc atcgccgccg gacggctatc gtacacgctg gggctgcagg 44100gaccttgcct gaccgtcgat acggcgtgct cgtcatcgct ggtggccatt cacctcgcct 44160gccgcagcct gcgcgctcga gagagcgatc tcgcgctggc gggaggggtc aacatgcttc 44220tctcccccga cacgatgcga gctctggcgc gcacccaggc gctgtcgccc aatggccgtt 44280gccagacctt cgacgcgtcg gccaacgggt tcgtccgtgg ggagggctgc ggtctgatcg 44340tgctcaagcg attgagcgac gcgcggcggg atggggaccg gatctgggcg ctgatccgag 44400gatcggccat caatcaggac ggccggtcga cggggttgac ggcgcccaac gtgctcgccc 44460agggggcgct cttgcgcgag gcgctgcgga acgccggcgt cgaggccgag gccatcggtt 44520acatcgagac ccacggggcg gcaacctcgc tgggcgaccc catcgagatc gaagcgctgc 44580gcgctgtggt ggggccggcg cgagccgacg gagcgcgctg cgtgctgggc gcggtgaaga 44640ccaacctcgg ccacctggag ggcgctgccg gcgtggcggg cctgatcaag gcgacgcttt 44700cgctacatca cgagcgcatc ccgaggaacc tcaactttcg tacgctcaat ccgcggatcc 44760ggatcgaggg gaccgcgctc gcgttggcga ccgaaccggt gccctggccg cggacgggcc 44820ggacgcgctt cgcgggagtg agctcgttcg ggatgagcgg gaccaacgcg catgtggtgt 44880tggaggaggc gccggcggtg gagcctgagg ccgcggcccc cgagcgcgca gcggagctgt 44940tcgtcctgtc ggcgaagagc gcggcggcgc tggatgcgca ggcagcccgg ctgcgggacc 45000acctggagaa gcacgtcgag cttggcctcg gcgatgtggc gttcagcctg gcgacgacgc 45060gcagcgcgat ggagcaccgg ctggcggtgg ccgcgagctc gcgcgaggcg ctgcgagggg 45120cgctttcggc cgcagcgcag gggcacacgc cgccgggagc cgtgcgtggg cgggcctcgg 45180gcggcagcgc gccgaaggtg gtcttcgtgt ttcccggtca gggctcgcag tgggtgggca 45240tgggccgaaa gctcatggcc gaagagccgg tcttccgggc ggcgctggag ggttgcgacc 45300gggccatcga ggcggaagcg ggctggtcgc tgctcgggga gctctccgcc gacgaggccg 45360cctcgcagct cgggcgcatc gacgtggttc agccggtgct cttcgccatg gaagtagcgc 45420tttctgcgct gtggcggtcg tggggagtgg agccggaagc ggtggtgggc cacagcatgg 45480gcgaggttgc ggcggcgcac gtggccggcg cgctgtcgct cgaggacgcg gtggcgatca 45540tctgccggcg cagccggctg ctgcggcgga tcagcggtca gggggagatg gcgctggtcg 45600agctgtcgct ggaggaggcc gaggcggcgc tgcgtggcca tgagggtcgg ctgagcgtgg 45660cggtgagcaa cagcccgcgc tcgaccgtgc tcgccggcga gccggcggcg ctctcggagg 45720tgctggcggc gctgacggcc aagggggtgt tctggcggca ggtgaaggtg gacgtcgcca 45780gccatagccc gcaggtcgac ccgctgcgcg aagagctgat cgcggcgctg ggagcgatcc 45840ggccgcgagc ggctgcggtg ccgatgcgct cgacggtgac gggcggggtg atcgcgggtc 45900cggagctcgg tgcgagctac tgggcggaca accttcggca gccggtgcgc ttcgctgcgg 45960cggcgcaagc gctgctggag ggtggccccg cgctgttcat cgagatgagc ccgcacccga 46020tcctggtgcc gcccctggac gagatccaga cggcggccga gcaagggggc gctgcggtgg 46080gctcgctgcg gcgagggcag gacgagcgcg cgacgctgct ggaggcgctg gggacgctgt 46140gggcgtccgg ctatccggtg agctgggctc ggctgttccc cgcgggcggc aggcgggttc 46200cgctgccgac ctatccctgg cagcacgagc ggtgctggat cgaggtcgag cctgacgccc 46260gccgcctcgc cgcagccgac cccaccaagg actggttcta ccgaacggac tggcccgagg 46320tgccccgcgc cgccccgaaa tcggagacag ctcatgggag ctggctgctg ttggccgaca 46380ggggtggggt cggtgaggcg gtcgctgcag cgctgtcgac gcgcggactt tcctgcaccg 46440tgcttcatgc gtcggctgac gcctccaccg tcgccgagca ggtatccgaa gctgccagtc 46500gccgaaacga ctggcaggga gtcctctacc tgtggggcct cgacgccgtc gtcgatgctg 46560gggcatcggc cgacgaagtc agcgaggcta cccgccgtgc caccgcaccc gtccttgggc 46620tggttcgatt cctgagcgct gcgccccatc ctcctcgctt ctgggtggtg acccgcgggg 46680catgcacggt gggcggcgag ccagaggcct ctctttgcca agcggcgttg tggggcctcg 46740cgcgcgtcgc ggcgctggag caccccgctg cctggggtgg cctcgtggac ctggatcctc 46800agaagagccc gacggagatc gagcccctgg tggccgagct gctttcgccg gacgccgagg 46860atcaactggc gttccgcagc ggtcgcaggc acgcagcacg ccttgtagcc gccccgccgg 46920agggcgacgt cgcaccgata tcgctgtccg cggaggggag ctacctggtg acgggcgggc 46980tgggtggcct tggtctgctc gtggctcggt ggctggtgga gcggggagct cgacatctgg 47040tgctcaccag ccggcacggg ctgccagagc gacaggcgtc gggcggagag cagccgccgg 47100aggcccgcgc gcgcatcgca gcggtcgagg ggctggaagc gcagggcgcg cgggtgaccg 47160tggcagcggt ggatgtcgcc gaggccgatc ccatgacggc gctgctggcc gccatcgagc 47220ccccgttgcg cggggtggtg cacgccgccg gcgtcttccc cgtgcgtcac ctggcggaga 47280cggacgaggc cctgctggag tcggtgctcc gtcccaaggt ggccgggagc tggctgctgc 47340accggctgct gcgcgaccgg cctctcgacc tgttcgtgct gttctcgtcg ggcgcggcgg 47400tgtggggtgg caaaggccaa ggcgcatacg ccgcggccaa tgcgttcctc gacgggctcg 47460cgcaccatcg ccgcgcgcac tcgctgccgg cgttgagcct cgcctggggc ttatgggccg 47520agggaggcat ggttgatgca aaggctcatg cacgtctgag cgacatcggg gtcctgccca 47580tggccacggg gccggccttg tcggcgctgg agcgcctggt gaacaccagc gctgtccagc 47640gttcggtcac acggatggac tgggcgcgct tcgcgccggt ctatgccgcg cgagggcggc 47700gcaacttgct ttcggctctg gtcgcggagg acgagcgcgc tgcgtctccc ccggtgccga 47760cggcaaaccg gatctggcgc ggcctgtccg ttgcggagag ccgctcagcc ctctacgagc 47820tcgttcgcgg catcgtcgcc cgggtgctgg gcttctccga cccgggcgcg ctcgacgtcg 47880gccgaggctt cgccgagcag gggctcgact ccctgatggc tctggagatc cgtaaccgcc 47940ttcagcgcga gctgggcgaa cggctgtcgg cgactctggc cttcgaccac ccgacggtgg 48000agcggctggt ggcgcatctc ctcaccgacg tgctgaagct ggaggaccgg agcgacaccc 48060ggcacatccg gtcggtggcg gcggatgacg acatcgccat cgtcggtgcc gcctgccggt 48120tcccaggtgg ggatgagggc ctggagacat actggcggca tctggccgag ggcatggtgg 48180tcagcaccga ggtgccagcc gaccggtggc gcgcggcgga ctggtacgac cccgatccgg 48240aggttccggg ccggacctat gtggccaagg gtgccttcct ccgcgatgtg cgcagcttgg 48300atgcggcgtt cttcgccatt tcccctcgtg aggcgatgag cctggacccg caacagcggc 48360tgttgctgga ggtgagctgg gaggcgatcg agcgcgctgg ccaggacccg atggcgctgc 48420gcgagagcgc cacgggcgtg ttcgtgggca tgatcgggag cgagcacgcc gagcgggtgc 48480agggcctcga cgacgacgcg gcgttgctgt acggcaccac cggcaacctg ctcagcgtcg 48540ccgctggacg gctgtcgttc ttcctgggtc tgcacggccc gacgatgacg gtggacaccg 48600cctgctcgtc gtcgctggtg gcgttgcacc tcgcctgcca gagcctgcga ttgggcgagt 48660gcgaccaggc cctggccggc gggtccagcg tgcttttgtc gccgcggtca ttcgtcgcgg 48720cgtcgcgcat gcgtttgctt tcgccagatg ggcggtgcaa gacgttctcg gccgctgcag 48780acggctttgc gcgggccgag ggctgcgccg tggtggtgct caagcggctc cgtgacgcgc 48840agcgcgaccg cgaccccatc ctggcggtgg tcaggagcac ggcgatcaac cacgatggcc 48900cgagcagcgg gctcacggtg cccagcggtc ctgcccagca ggcgttgcta cgccaggcgc 48960tggcgcaagc gggcgtggcg ccggccgagg tcgatttcgt ggagtgccac gggacgggga 49020cagcgctggg tgacccgatc gaggtgcagg cgctgggcgc ggtgtacggg cggggccgcc 49080ccgcggagcg gccgctctgg ctgggcgctg tcaaggccaa cctcggccac ctggaggccg 49140cggcgggctt ggccggcgtg ctcaaggtgc tcttggcgct ggagcacgag cagattccgg 49200ctcaaccgga gctcgacgag ctcaacccgc acatcccgtg ggcagagctg ccagtggccg 49260ttgtccgcag ggcggtcccc tggccgcgcg gcgcgcgccc gcgtcgtgca ggcgtgagcg 49320ctttcggcct gagcgggacc aacgcgcatg tggtgttgga ggaggcgccg gcggtggagc 49380ctgtggccgc ggcccccgag cgcgcagcgg agctgttcgt cctgccggcg aagagcgcgg 49440cggcgctgga tgcgcaggca gcccggctgc gggaccacct ggagaagcat gtcgagcttg 49500gcctcggcga tgtggcgttc agcctggcga cgacgcgcag cgcgatggag caccggctgg 49560cggtggccgc gagctcgcgc gaggcgctgc gaggggcgct ttcggccgca gcgcaggggc 49620acacgccgcc gggagccgtg cgtgggcggg cctcgggcgg cagcgcgccg aaggtggtct 49680tcgtgtttcc cggccagggc tcgcagtggg tgggcatggg ccgaaagctc atggccgaag 49740agccggtctt ccgggcggcg ctggagggtt gcgaccgggc catcgaggcg gaagcgggct 49800ggtcgctgct cggggagctc tccgccgacg aggccgcctc gcagctcggg cgcatcgacg 49860tggttcagcc ggtgctgttc gccatggaag tagcgctttc tgcgctgtgg cggtcgtggg 49920gagtggagcc ggaagcggtg gtgggccaca gcatgggcga ggttgcggcg gcgcacgtgg 49980ccggcgcgct gtcgctcgag gacgcggtgg cgatcatctg ccggcgcagc cggctgctgc 50040ggcggatcag cggtcagggg gagatggcgc tggtcgagct gtcgctggag gaggccgagg 50100cggcgctgcg tggccatgag ggtcggctga gcgtggcggt gagcaacagc ccgcgctcga 50160ccgtgctcgc cggcgagccg gcggcgctct cggaggtgct ggcggcgctg acggccaagg 50220gggtgttctg gcggcaggtg aaggtggacg tcgccagcca tagcccgcag gtcgacccgc 50280tgcgcgaaga gctgatcgcg gcgctgggag cgatccggcc gcgagcggct gcggtgccga 50340tgcgctcgac ggtgacgggc ggggtgatcg cgggtccgga gctcggtgcg agctactggg 50400cggacaacct tcggcagccg gtgcgcttcg ctgcggcggc gcaagcgctg ctggagggtg 50460gccccgcgct gttcatcgag atgagcccgc acccgatcct ggtgccgccc ctggacgaga 50520tccagacggc ggccgagcaa gggggcgctg cggtgggctc gctgcggcga gggcaggacg 50580agcgcgcgac gctgctggag gcgctgggga cgctgtgggc gtccggctat ccggtgagct 50640gggctcggct gttccccgcg ggcggcaggc gggttccgct gccgacctat ccctggcagc 50700acgagcggta ctggatcgag gacagcgtgc atgggtcgaa gccctcgctg cggcttcggc 50760agcttcgcaa cggcgccacg gaccatccgc tgctcggggc tccattgctc gtctcggcgc 50820gacccggagc tcacttgtgg gagcaagcgc tgagcgacga gaggctatcc tacctttcgg 50880aacatagggt ccatggcgaa gccgtgttgc ccagcgcggc gtatgtagag atggcgctcg 50940ccgccggcgt agatctctat ggcacggcga cgctggtgct ggagcagctg gcgctcgagc 51000gagccctcgc cgtgccctcc gaaggcggac gcatcgtgca agtggccctc agcgaagaag 51060gtcccggtcg ggcctcattc caggtatcga gtcgtgagga ggcaggtagg agctgggtgc 51120ggcacgccac ggggcacgtg tgtagcggcc agagctcagc ggtgggagcg ttgaaggaag 51180ctccgtggga gattcaacgg cgatgtccga gcgtcctgtc gtcggaggcg ctctatccgc 51240tgctcaacga gcacgccctc gactatggtc cctgcttcca gggcgtggag caggtgtggc 51300tcggcacggg ggaggtgctc ggccgggtac gcttgccagg agacatggca tcctcaagtg 51360gcgcctaccg gattcatccc gccttgttgg atgcatgttt tcaggtgctg acagcgctgc 51420tcaccacgcc ggaatccatc gagattcgga ggcggctgac ggatctccac gaaccggatc 51480tcccgcggtc cagggctccg gtgaatcaag cggtgagtga cacctggctg tgggacgccg 51540cgctggacgg tggacggcgc cagagcgcga gcgtgcccgt cgacctggtg ctcggcagct 51600tccatgcgaa gtgggaggtc atggagcgcc tcgcgcaggc gtacatcatc ggcactctcc 51660gcatatggaa cgtcttctgc gctgctggag agcgtcacac gatagacgag ttgctcgtca 51720ggcttcaaat ctctgtcgtc tacaggaagg tcatcaagcg atggatggaa caccttgtcg 51780cgatcggcat ccttgtaggg gacggagagc attttgtgag ctctcagccg ctgccggagc 51840ctgatttggc ggcggtgctc gaggaggccg ggagggtgtt cgccgacctc ccagtcctat 51900ttgagtggtg caagtttgcc ggggaacggc tcgcggacgt attgaccggt aagacgctcg 51960cgctcgagat cctcttccct ggtggctcgt tcgatatggc ggagcgaatc tatcgagatt 52020cgcccatcgc ccgttactcg aacggcatcg tgcgcggtgt cgtcgagtcg gcggcgcggg 52080tggtagcacc gtcgggaatg ttcagcatct tggagatcgg agcagggacg ggcgcgacca 52140ccgccgccgt cctcccggtg ttgctgcctg accggacgga gtaccatttc accgatgttt 52200ctccgctctt ccttgctcgc gcggagcaaa gatttcgaga ttatccattc ctgaagtatg 52260gcattctgga tgtcgaccag gagccagctg gccagggata cgcacatcag aggtttgacg 52320tcatcgtcgc ggccaatgtc atccatgcga cccgcgatat aagagccacg gcgaagcgtc 52380tcctgtcgtt gctcgcgccc ggaggccttc tggtgctggt cgagggcaca gggcatccga 52440tctggttcga tatcaccacg ggattgattg aggggtggca gaagtacgaa gatgatcttc 52500gtatcgacca tccgctcctg cctgctcgga cctggtgtga cgtcctgcgc cgggtaggct 52560ttgcggacgc cgtgagtctg ccaggcgacg gatctccggc ggggatcctc ggacagcacg 52620tgatcctctc gcgcgcgccg ggcatagcag gagccgcttg tgacagctcc ggtgagtcgg 52680cgaccgaatc gccggccgcg cgtgcagtac ggcaggaatg ggccgatggc tccgctgacg 52740tcgtccatcg gatggcgttg gagaggatgt acttccaccg ccggccgggc cggcaggttt 52800gggtccacgg tcgattgcgt accggtggag gcgcgttcac gaaggcgctc gctggagatc 52860tgctcctgtt cgaagacacc gggcaggtcg tggcagaggt tcaggggctc cgcctgccgc 52920agctcgaggc ttctgctttc gcgccgcggg acccgcggga agagtggttg tacgctttgg 52980aatggcagcg caaagaccct ataccagagg ctccggcagc cgcgtcttct tcctccgcgg 53040gggcttggct cgtgctgatg gaccagggcg ggacaggcgc tgcgctcgta tcgctgctgg 53100aagggcgagg cgaggcgtgc gtgcgcgtca tcgcgggtac ggcatacgcc tgcctcgcgc 53160cggggctgta tcaagtcgat ccggcgcagc cagatggctt tcataccctg ctccgcgatg 53220cattcggcga ggaccggatt tgtcgcgcgg tagtgcatat gtggagcctt gatgcgacgg 53280cagcagggga gagggcgaca gcggagtcgc ttcaggccga tcaactcctg gggagcctga 53340gcgcgctttc tctggtgcag gcgctggtgc gccggaggtg gcgcaacatg ccgcggcttt 53400ggctcttgac ccgcgccgtg catgcggtgg gcgcggagga cgcagcggcc tcggtggcgc 53460aggcgccggt gtggggcctc ggtcggacgc tcgcgctcga gcatccagag ctgcggtgca 53520cgctcgtgga cgtgaacccg gcgccgtctc cagaggacgc agccgcactg gcggtggagc 53580tcggggcgag cgacagagag gaccaggtcg cattgcgctc ggatggccgc tacgtggcgc 53640gcctcgtgcg gagctccttt tccggcaagc ctgctacgga ttgcggcatc cgggcggacg 53700gcagctatgt gatcaccgat ggcatgggga gagtggggct ctcggtcgcg caatggatgg 53760tgatgcaggg ggcccgccat gtggtgctcg tggatcgcgg cggcgcttcc gaggcatccc 53820gggatgccct ccggtccatg gccgaggctg gcgcggaggt gcagatcgtg gaggccgacg 53880tggctcggcg cgacgatgtc gctcggctcc tctcgaagat cgaaccgtcg atgccgccgc 53940ttcgggggat cgtgtacgtg gacgggacct tccagggcga ctcctcgatg ctggagctgg 54000atgcccgtcg cttcaaggag tggatgtatc ccaaggtgct cggagcgtgg aacctgcacg 54060cgctgaccag ggatagatcg ctggacttct tcgtcctgta ttcctcgggc acctcgcttc 54120tgggcttgcc aggacagggg agccgcgccg ccggtgacgc cttcttggac gccatcgcgc 54180atcaccggtg caaggtgggc cttacagcga tgagcatcaa ctggggattg ctctccgaag 54240catcatcgcc ggcgaccccg aacgacggcg gagcacggct cgaataccgg gggatggaag 54300gcctcacgct ggagcaggga gcggcggcgc tcgggcgctt gctcgcacga cccagggcgc 54360aggtaggggt gatgcggctg aatctgcgcc agtggttgga gttctatccc aacgcggccc 54420gattggcgct gtgggcggag ctgctgaagg agcgtgaccg cgccgaccga ggcgcgtcga 54480acgcgtcgaa cctgcgcgag gcgctgcaga gcgccaggcc cgaagatcgt cagttgattc 54540tggagaagca cttgagcgag ctgttggggc gggggctgcg ccttccgccg gagaggatcg 54600agcggcacgt gccgttcagc aatctcggca tggactcgct gataggcctg gagctccgca 54660accgcatcga ggccgcgctc ggcatcaccg tgccggcgac cctgctatgg acctacccta 54720acgtagcagc tctgagcggg agcttgctag acattctgtt tccgaatgcc ggcgcgaccc 54780acgctccggc caccgagcgg gagaagagct tcgagaacga tgccgcagat ctcgaggctc 54840tgcggggcat gacggacgag cagaaggacg cgttgctcgc cgaaaagctg gcgcagctcg 54900cgcagatcgt tggtgagtaa gggaccgagg gagtatggcg accacgaatg ccgggaagct 54960tgagcatgcc cttctgctca tggacaagct tgcgaaaaag aacgcgtctt tggagcaaga 55020gcggaccgag ccgatcgcca tcgtaggcat tggctgccgc ttccccggcg gagcggacac 55080tccggaggca ttctgggagc tgctcgactc aggccgagac gcggtccagc cgctcgaccg 55140gcgctgggcg ctggtcggcg tccatcccag cgaggaggtg ccgcgctggg ccggactgct 55200caccgaggcg gtggacggct tcgacgccgc gttctttggc acctcgcctc gggaggcgcg 55260gtcgctcgat cctcagcaac gcctgctgct ggaggtcacc tgggaagggc tcgaggacgc 55320cggcatcgca ccccagtccc tcgacggcag ccgcaccggg gtgttcctgg gcgcatgcag 55380cagcgactac tcgcataccg ttgcgcaaca gcggcgcgag gagcaggacg catacgacat 55440caccggcaat acgctcagcg tcgccgccgg acggttgtct tatacgctag ggctgcaggg 55500accctgcctg accgtcgaca cggcctgctc gtcgtcgctc gtggccatcc accttgcctg 55560ccgcagcctg cgcgctcgcg agagcgatct cgcgctggcg ggaggcgtca acatgctcct 55620ttcgtccaag acgatgataa tgctggggcg catccaggcg ctgtcgcccg atggccactg 55680ccggacattc gacgcctcgg ccaacgggtt cgtccgtggg gagggctgcg gtatggtcgt 55740gctcaaacgg ctctccgacg cccagcgaca cggcgatcgg atctgggctc tgatccgggg 55800ttcggccatg aatcaggatg gccggtcgac agggttgatg gcacccaatg tgctcgctca 55860ggaggcgctc ttgcgcgagg cgctgcagag cgctcgcgtc gacgccgggg ccatcggtta 55920tgtcgagacc cacggaacgg ggacctcgct cggcgacccg atcgaggtcg aggcgctgcg 55980tgccgtgttg gggccggcgc gggccgatgg gagccgctgc gtgctgggcg cagtgaagac 56040aaacctcggc cacctggagg gcgctgcagg cgtggcgggt ttgatcaagg cggcgctggc 56100tctgcaccac gaactgatcc cgcgaaacct ccatttccac acgctcaatc cgcggatccg 56160gatcgagggg accgcgctcg cgctggcgac ggagccggtg ccgtggccgc gggcgggccg 56220accgcgcttc gcgggggtga gcgcgttcgg cctcagcggc accaacgtcc atgtcgtgct 56280ggaggaggcg ccggccacgg tgctcgcacc ggcgacgccg gggcgctcag cggagctttt 56340ggtgctgtcg gcgaagagcg ccgccgcgct ggacgcacag gcggcgcggc tctcagcgca 56400catcgccgcg tacccggagc agggtctcgg agacgtcgcg ttcagcctgg tatcgacgcg 56460tagcccgatg gagcaccggc tcgcggtggc ggcgacctcg cgcgaggcgc tgcgaagcgc 56520gctggaggtt gcggcgcagg ggcagacccc ggcaggcgcg gcgcgcggca gggccgcttc 56580ctcgcccggc aagctcgcct tcctgttcgc cgggcagggc gcgcaggtgc cgggcatggg 56640ccgtgggttg tgggaggcgt ggccggcgtt ccgcgagacc ttcgaccggt gcgtcacgct 56700cttcgaccgg gagctccatc agccgctctg cgaggtgatg tgggccgagc cgggcagcag 56760caggtcgtcg ttgctggacc agacggcgtt cacccagccg gcgctctttg cgctggagta 56820cgcgctggcc gcgctcttcc ggccgtgggg cgtggagccg gagctcgtcg ccggccatag 56880cctcggcgag ctggtggccg cctgcgtggc gggtgtgttc tccctcgagg acgccgtgcg 56940cttggtggtc gcgcgcggcc ggttgatgca ggcgctgccg gccggcggcg cgatggtatc 57000gatcgccgcg ccggaggccg acgtggctgc cgcggtggcg ccgcacgcag cgttggtgtc 57060gatcgcggca gtcaatgggc cggagcaggt ggtgatcgcg ggcgccgaga aattcgtgca 57120gcagatcgcg gcggcgttcg cggcgcgggg ggcgcgaacc aaaccgctgc atgtctcgca 57180cgcgttccac tcgccgctca tggatccgat gctggaggcg ttccggcggg tgactgagtc 57240ggtgacgtac cggcggcctt cgatcgcgct ggtgagcaac ctgagcggga agccctgcac 57300cgatgaggtg agcgcgccgg gttactgggt gcgtcacgcg cgagaggcgg tgcgcttcgc 57360ggacggagtg aaggcgctgc acgcggccgg tgcgggcctc ttcgtcgagg tggggccgaa 57420gccgacgctg ctcggccttg tgccggcctg cctgccggat gccaggccgg tgctgctccc 57480agcgtcgcgc gccgggcgtg acgaggctgc gagcgcgcta gaggcgctgg gtgggttctg 57540ggtcgtcggt ggatcggtca cctggtcggg tgtcttccct tcgggcggac ggcgggtacc 57600gctgccaacc tatccctggc agcgcgagcg ttactggatc gaagcgccgg tcgatcgtga 57660ggcggacggc accggccgtg ctcgggcggg gggccacccc cttctgggtg aagtcttttc 57720cgtgtcgacc catgccggtc tgcgcctgtg ggagacgacg ctggaccgaa agcggctgcc 57780gtggctcggc gagcaccggg cgcaggggga ggtcgtgttt cctggcgccg ggtacctgga 57840gatggcgctg tcgtcggggg ccgagatctt gggcgatgga ccgatccagg tcacggatgt 57900ggtgctcatc gagacgctga ccttcgcggg cgatacggcg gtaccggtcc aggtggtgac 57960gaccgaggag cgaccgggac ggctgcggtt ccaggtagcg agtcgggagc cgggggaacg 58020tcgcgcgccc ttccggatcc acgcccgcgg cgtgctgcgc cggatcgggc gcgtcgagac 58080cccggcgagg tcgaacctcg ccgccctgcg cgcccggctt catgccgccg tgcccgctgc 58140ggctatctat ggtgcgctcg ccgagatggg gcttcaatac ggcccggcgt tgcgggggct 58200cgccgagctg tggcggggtg agggcgaggc gctgggcagg gtgagactgc ctgaggccgc 58260cggctccgcg acagcctacc agctgcatcc ggtgctgctg gacgcgtgcg tccaaatgat 58320tgttggcgcg ttcgccgatc gcgatgaggc gacgccgtgg gcgccggtgg aggtgggctc 58380ggtgcggctg ttccagcggt ctcctgggga gctatggtgc catgcgcgcg tcgtgagcga 58440tggtcaacag gcctccagcc ggtggagcgc cgactttgag ttgatggacg gtacgggcgc 58500ggtggtcgcc gagatctccc ggctggtggt ggagcggctt gcgagcggtg tacgccggcg 58560cgacgcagac gactggttcc tggagctgga ttgggagccc gcggcgctcg gtgggcccaa 58620gatcacagcc ggccggtggc tgctgctcgg cgagggtggt gggctcgggc gctcgttgtg 58680ctcggcgctg aaggccgccg gccatgtcgt cgtccacgcc gcgggggacg acacgagcac 58740tgcaggaatg cgcgcgctcc tggccaacgc gttcgacggc caggccccga cggccgtggt 58800gcacctcagc agcctcgacg ggggcggcca gctcggcccg gggctcgggg cgcagggcgc 58860gctcgacgcg ccccggagcc cagatgtcga tgccgatgcc ctcgaatcgg cgctgatgcg 58920tggttgcgac agcgtgctct ccctggtgca agcgctggtc ggcatggacc tccgaaacgc 58980gccgcggctg tggctcttga cccgcggggc tcaggcggcc gccgccggcg atgtctccgt 59040ggtgcaagcg ccgctgttgg ggctgggccg caccatcgcc ttggagcacg ccgagctgcg 59100ctgtatcagc gtcgacctcg atccagccga gcctgaaggg gaagccgatg ctttgctggc 59160cgagctactt gcagatgatg ccgaggagga ggtcgcgctg cgcggtggcg accggctcgt 59220tgcgcggctc gtccaccggc tgcccgacgc tcagcgccgg gagaaggtcg agcccgccgg 59280tgacaggccg ttccggctag agatcgatga acccggcgcg ctggaccaac tggtgctccg 59340agccacgggg cggcgcgctc ctggtccggg cgaggtcgag atctccgtcg aagcggcggg 59400gctcgactcc atcgacatcc agctggcgtt gggcgttgct cccaatgatc tgcctggaga 59460agaaatcgag ccgttggtgc tcggaagcga gtgcgccggg cgcatcgtcg ctgtgggcga 59520gggcgtgaac ggccttgtgg tgggccagcc ggtgatcgct cttgcggcgg gagtatttgc 59580tacccatgtc accacgtcgg ccacgctggt gttgcctcgg cctctggggc tctcggcgac 59640cgaggcggcc gcgatgcccc tcgcgtattt gacggcctgg tacgccctcg acaaggtcgc 59700ccacctgcag gcgggggagc gggtgctgat ccatgcggag gccggtggtg tcggtctttg 59760cgcggtgcga tgggcgcagc gcgtgggcgc cgaggtgtat gcgaccgccg acacgcccga 59820gaaccgtgcc tacctggagt cgctgggcgt gcggtacgtg agcgattccc gctcgggccg 59880gttcgtcaca gacgtgcatg catggacgga cggcgagggt gtggacgtcg tgctcgactc 59940gctttcgggc gagcgcatcg acaagagcct catggtcctg cgcgcctgtg gtcgccttgt 60000gaagctgggc aggcgcgacg actgcgccga cacgcagcct gggctgccgc cgctcctacg 60060gaatttttcc ttctcgcagg tggacttgcg gggaatgatg ctcgatcaac cggcgaggat 60120ccgtgcgctc ctcgacgagc tgttcgggtt ggtcgcagcc ggtgccatca gcccactggg 60180gtcggggttg cgcgttggcg gatccctcac gccaccgccg gtcgagacct tcccgatctc 60240tcgcgcagcc gaggcattcc ggaggatggc gcaaggacag catctcggga agctcgtgct 60300cacgctggac gacccggagg tgcggatccg cgctccggcc gaatccagcg tcgccgtccg 60360cgcggacggc acctaccttg tgaccggcgg tctgggtggc ctcggtctgc gcgtggccgg 60420atggctggcc gagcggggcg cggggcaact ggtgctggtg ggccgctccg gtgcggcgag 60480cgcagagcag cgagccgccg tggcggcgct ggaggcccac ggcgcgcgcg tcacggtggc 60540gaaagcggac gtcgccgatc ggtcacagat cgagcgggtc ctccgcgagg ttaccgcgtc 60600ggggatgccg ctgcggggtg tcgtgcatgc ggcaggtctc gtggacgacg ggctgctgat 60660gcagcagact ccggcgcggt tccgcacggt gatgggacct aaggtccagg gggccttgca 60720cttgcacacg ctgacacgcg aagcgcctct ttccttcttc gtgctgtacg cttctgcagc 60780tgggcttttc ggctcgccag gccagggcaa ctacgccgca gccaacgcgc tcctcgacgc 60840cctttcgcat caccgaaggg cgcagggcct gccggcgctg agcatcgact ggggcatgtt 60900cacggaggtg gggatggccg tcgcgcaaga aaaccgtggc gcgcggcaga tctctcgcgg 60960gatgcggggc accacccccg atgagggtct gtcagctctg gcgcgcttgc tcgagggtga 61020tcgcgtgcag acgggggtga taccgatcac tccgcggcag tgggtggagt tctacccggc 61080aacagcggcc tcacggaggt tgtcgcggct ggtgaccacg cagcgcgcgg tcgctgatcg 61140gaccgccggg gatcgggacc tgctcgaaca gcttgcgtcg gctgagccga gcgcgcgggc 61200ggggctgctg caggacgtcg tgcgcgtgca ggtctcgcat gtgctgcgtc tccctgaaga 61260caagatcgag gtggatgccc cgctctcgag catgggcatg gactcgctga tgagcctgga 61320gctgcgcaac cgcatcgagg ctgcgctggg cgtcgccgcg cctgcagcct tggggtggac 61380gtacccaacg gtagcagcga taacgcgctg gctgctcgac gacgccctcg tcgtccggct 61440tggcggcggg tcggacacgg acgaatcgac ggcgagcgcc ggttcgttcg tccacgtcct 61500ccgctttcgt cctgtcgtca agccgcgggc tcgtctcttc tgttttcacg gttctggcgg 61560ctcgcccgag ggcttccgtt cctggtcgga gaagtctgag tggagcgatc tggaaatcgt 61620ggccatgtgg cacgatcgca gcctcgcctc cgaggacgcg cctggtaaga agtacgtcca 61680agaggcggcc tcgctgattc agcactatgc agacgcaccg tttgcgttag tagggttcag 61740cctgggtgtc cggttcgtca tggggacagc cgtggagctc gccagtcgtt ccggcgcacc 61800ggctccgctg gccgtcttca cgttgggcgg cagcttgatc tcttcttcag agatcacccc 61860ggagatggag accgatataa tagccaagct cttcttccga aatgccgcgg gtttcgtgcg 61920atccacccaa caagtccagg ccgatgctcg cgcagacaag gtcatcacag acaccatggt 61980ggctccggcc cccggggact cgaaggagcc gcccgtgaag atcgcggtcc ctatcgtcgc 62040catcgccggc tcggacgatg tgatcgtgcc tccgagcgac gttcaggatc tacaatctcg 62100caccacggag cgcttctata tgcatctcct tcccggagat cacgaatttc tcgtcgatcg 62160agggcgcgag atcatgcaca tcgtcgactc gcatctcaat ccgctgctcg ccgcgaggac 62220gacgtcgtca ggccccgcgt tcgaggcaaa atgatggcag cctccctcgg gcgcgcgaga 62280tggttgggag cagcgtgggc gctggcggcc ggcggcaggc cgcggaggcg catgagcctt 62340cctggacgtt tgcagtatag gagattttat gacacaggag caagcgaatc agagtgagac 62400gaagcctgct ttcgacttca agccgttcgc gcctgggtac gcggaggacc cgttccccgc 62460gatcgagcgc ctgagagagg caacccccat cttctactgg gatgaaggcc gctcctgggt 62520cctcacccga taccacgacg tgtcggcggt gttccgcgac gaacgcttcg cggtcagtcg 62580agaagagtgg gaatcgagcg cggagtactc gtcggccatt cccgagctca gcgatatgaa 62640gaagtacgga ttgttcgggc tgccgccgga ggatcacgct cgggtccgca agctcgtcaa 62700cccgtcgttt acgtcacgcg ccatcgacct gctgcgcgcc gaaatacagc gcaccgtcga 62760ccagctgctc gatgctcgct ccggacaaga ggagttcgac gttgtgcggg attacgcgga 62820gggaatcccg atgcgcgcga tcagcgctct gttgaaggtt ccggccgagt gtgacgagaa 62880gttccgtcgc ttcggctcgg cgactgcgcg cgcgctcggc gtgggtttgg tgccccaggt 62940cgatgaggag accaagaccc tggtcgcgtc cgtcaccgag gggctcgcgc tgctccatga 63000cgtcctcgat gagcggcgca ggaacccgct cgaaaatgac gtcttgacga tgctgcttca 63060ggccgaggcc gacggcagca ggctgagcac gaaggagctg gtcgcgctcg tgggtgcgat 63120tatcgctgct ggcaccgata ccacgatcta ccttatcgcg ttcgctgtgc tcaacctgct 63180gcggtcgccc gaggcgctcg agctggtgaa ggccgagccc gggctcatga ggaacgcgct 63240cgatgaggtg ctccgcttcg acaatatcct cagaatagga actgtgcgtt tcgccaggca 63300ggacctggag tactgcgggg catcgatcaa gaaaggggag atggtctttc tcctgatccc 63360gagcgccctg agagatggga ctgtattctc caggccagac gtgtttgatg tgcgacggga 63420cacgggcgcg agcctcgcgt acggtagagg cccccatgtc tgccccgggg tgtcccttgc 63480tcgcctcgag gcggagatcg ccgtgggcac catcttccgt aggttccccg agatgaagct 63540gaaagaaact cccgtgtttg gataccaccc cgcgttccgg aacatcgaat cactcaacgt 63600catcttgaag ccctccaaag ctggatagct cgcgggggta tcgcttcccg aacctcattc 63660cctcatgata cagctcgcgc gcgggtgctg tctgccgcgg gtgcgattcg atccagcgga 63720caagcccatt gtcagcgcgc gaagatcgaa tccacggccc ggagaagagc ccgtccgggt 63780gacgtcggaa gaagtgccgg gcgccgccct gggagcgcaa agctcgctcg ttcgcgctca 63840gcacgccgct cgtcatgtcc ggccctgcac ccgcgccgag gagccgcccg ccctgatgca 63900cggcctcacc gagcggcagg ttctgctctc gctcgtcgcc ctcgcgctcg tcctcctgac 63960cgcgcgcgcc ttcggcgagc tcgcgcggcg gctgcgccag cccgaggtgc tcggcgagct 64020cttcggcggc gtggtgctgg gcccgtccgt cgtcggcgcg ctcgctcctg ggttccatcg 64080agtcctcttc caggatccgg cggtcggggt cgtgctctcc ggcatctcct ggataggcgc 64140gctcgtcctg ctgctcatgg cgggtatcga ggtcgatgtg agcatcctgc gcaaggaggc 64200gcgccccggg gcgctctcgg cgctcggcgc gatcgcgccc ccgctgcgca cgccggggcc 64260gctggtgcag cgcatgcagg gcgcgttcac gtgggatctc gacgtctcgc cgcgacgctc 64320tgcgcaagcc tgagcctcgg cgcctgctcg tacacctcgc cggtgctcgc tccgcccgcg 64380gacatccggc cgcccgccgc ggcccagctc gagccggact cgccggatga cgaggccgac 64440gaggccgacg aggcgctccg cccgttccgc gacgcgatcg ccgcgtactc ggaggccgtt 64500cggtgggcgg aggcggcgca gcggccgcgg ctggagagcc tcgtgcggct cgcgatcgtg 64560cggctgggca aggcgctcga caaggtccct ttcgcgcaca cgacggccgg cgtctcccag 64620atcgccggca gactccagaa cgatgcggtc tggttcgatg tcgccgcccg gtacgcgagc 64680ttccgcgcgg cgacggagca cgcgctccgc gacgcggcgt cggccatgga ggcgctcgcg 64740gccggcccgt accgcggatc gagccgcgtg tccgctgccg taggggagtt tcggggggag 64800gcggcgcgcc ttcaccccgc ggaccgtgta cccgcgtccg accagcagat cctgaccgcg 64860ctgcgcgcag ccgagcgggc gctcatcgcg ctctacactg cgttcgcccg tgaggagtga 64920gcctctctcg ggcgcagccg agcggcggcg tgccggtggt tccctcttcg caaccatgac 64980cggagccgcg ctcggtccgc gcagcggcta gcgcgcgtcg cggcagagat cgctggagcg 65040acaggcgacg acccgcccga gggtgtcgaa cggattgccg cagccctcat tgcggatccc 65100ctccagacac tcgttcagct gcttggcgtc gatgccgcct gggcactcgc cgaaggtcag 65160ctcgtcgcgc cactcggatc ggatcttgtt cgagcacgcg tccttgctcg aatactcccg 65220gtcttgtccg atgttgttgc accgcgcctc gcggtcgcac cgcgccgcca cgatgctatc 65280gacggcgctg ccgactggca ccggcgcctc gccctgcgcg ccacccgggg tttgcgcctc 65340cccgcctgac cgcttttcgc cgccgcacgc cgcgagcagg ctcattcccg acaccgagat 65400caggcccacg accagcttcc cagcaatctt ttgcatggct tcccctccct cacgacacgt 65460cacatcagag actctccgct cggctcgtcg gttcgacagc cggcgacggc cacgagcaga 65520accgtccccg accagaacag ccgcatgcgg gtttctcgca acatgccccg acatccttgc 65580gactagcgtg cctccgctcg tgccgagatc ggctgtcctg tgcgacggca atatcctgcg 65640atcggccggg caggaggtac cgacacgggc gccgggcggg aggtgccgcc acgggctcga 65700aatgtgctgc ggcaggcgcc tccatgcccg cagccgggaa cgcggcgccc ggccagcctc 65760ggggtgacgc cgcaaacggg agatgctccc ggagaggcgc cgggcacagc cgagcgccgt 65820caccaccgtg cgcactcgtg agctccagct cctcggcata gaagagaccg tcactcccgg 65880tccgtgtagg cgatcgtgct gatcagcgcg ttctccgcct gacgcgagtc gagccgggta 65940tgctgcacga caatgggaac gtccgattcg atcacgctgg catagtccgt atcgcgcggg 66000atcggctcgg gttcggtcag atcgttgaac cggacgtgcc gggtgcgcct cgctgggacg 66060gtcacccggt acggcccggc ggggtcgcgg tcgctgaagt agacggtgat ggcgacctgc 66120gcgtcccggt ccgacgcatt caacaggcag gccgtctcat ggctcgtcat ctgcggctcg 66180ggtccgttgc tccggcctgg gatgtagccc tctgcgattg cccagcgcgt ccgcccgatc 66240ggcttctcca tatgtcctcc ctgctggctc ctctttggct gcctccctct gctgtccagg 66300agcgacggcc tcttctcccg acgcgctcgg ggatccatgg ctgaggatcc tcgccgagcg 66360ctccttgccg accggcgcgc cgagcgccga cgggctttga aagcacgcga ccggacacgt 66420gatgccggcg cgacgaggcc gccccgcgtc tgatcccgat cgtgacatcg cgacgtccgc 66480cggcgcctct gcaggccggc ctgagcgttg cgcggtcatg gtcgtcctcg cgtcaccgcc 66540acccgccgat tcacatccca ccgcggcacg acgcttgctc aaaccgcggc gagacggccg 66600ggcggctgtg gtaccggcca gcccggacgc gaggcccgag agggacagtg ggtccgccgt 66660gaagcagtga ggcgatcgag gtggcagatg aaacacgttg acacgggccg acgagtcggc 66720cgccggatag ggctcacgct cggtctcctc gcgagcatgg cgctcgccgg ctgtggcggc 66780ccgagcgaga aaatcgtgca gggcacgcgg ctcgcgcccg gcgccgatgc gcacgtcgcc 66840gccgacgtcg accccgacgc cgcgaccacg cggctggcgg tggacgtcgt tcacctctcg 66900ccgcccgagc gcatcgaggc cggcagcgag cggttcgtcg tctggcagcg tccgagctcc 66960gagtccccgt ggcaacgggt cggagtgctc gactacaacg ctgccagccg aagaggcaag 67020ctggccgaga cgaccgtgcc gcatgccaac ttcgagctgc tcatcaccgt cgagaagcag 67080agcagccctc agtctccatc ttctgccgcc gtcatcgggc cgacgtccgt cgggtaacat 67140cgcgctatca gcagcgctga gcccgccagc aggccccaga gccctgcctc gatcgccttc 67200tccatcatat catccctgcg tactcctcca gcgacggccg cgtcgaagca accgccgtgc 67260cggcgcggct ctacgtgcgc gacaggagag cgtcctggcg cggcctgcgc atcgctggaa 67320ggatcggcgg agcatggaga aagaatcgag gatcgcgatc tacggcgcca tcgcagccaa 67380cgtggcgatc gcggcggtca agttcatcgc cgccgccgtg accggcagct cggcgatgct 67440ctccgagggc gtgcactccc tcgtcgatac tgcagacggg ctcctcctcc tgctcggcaa 67500gcaccggagc gcacgcccgc ccgacgccga gcatccgttc ggccacggca aggagctcta 67560tttctggacg ctgatcgtcg ccatcatgat cttcgccgcg ggcggcggcg tctcgatcta 67620cgaagggatc ttgcacctct tgcacccgcg ccagatcgag gatccgacgt ggaactacgt 67680cgtcctcggc gcagcggccg tcttcgaggg gacgtcgctc atcatctcga tccacgagtt 67740caagaagaag gacggacagg gctacctcgc ggcgatgcgg tccagcaagg acccgacgac 67800gttcacgatc gtcctggagg actccgcggc gctcgccggg ctcaccatcg ccttcctcgg 67860cgtctggctc gggcaccgcc tgggaaaccc ctacctcgac ggcgcggcgt cgatcggcat 67920cggcctcgtg ctcgccgcgg tcgcggtctt cctcgccagc cagagccgtg ggctcctcgt 67980gggggagagc gcggacaggg agctcctcgc cgcgatccgc gcgctcgcca gcgcagatcc 68040tggcgtgtcg gcggtggggc ggcccctgac gatgcacttc ggtccgcacg aagtcctggt 68100cgtgctgcgc atcgagttcg acgccgcgct cacggcgtcc ggggtcgcgg aggcgatcga 68160gcgcatcgag acccggatac ggagcgagcg acccgacgtg aagcacatct acgtcgaggc 68220caggtcgctc caccagcgcg cgagggcgtg acgcgccgtg gagagaccgc gcgcggcctc 68280cgccatcctc cgcggcgccc gggctcaggt ggccctcgca gcagggcgcg cctggcgggc 68340aaaccgtgca gacgtcgtcc ttcgacgcga ggtacgctgg ttgcaagtcg tcacgccgta 68400tcgcgaggtc cggcagcgcc ggagcccggg cgggccgggc gcacgaaggc gcggcgagcg 68460caggcttcga ggggggcgac gtcatgagga aggccagggc gcatggggcg atgctcggcg 68520ggcgagatga cggctggcgt cgcggcctcc ccggcgccgg cgcgcttcgc gccgcgctcc 68580agcgcggtcg ctcgcgcgat ctcgcccggc gccggctcat cgcctccgtg tccctcgccg 68640gcggcgccag catggcggtc gtctcgctgt tccagctcgg gatcatcgag cgcctgcccg 68700atcctccgct tccagggttc gattcggcca aggtgacgag ctccgatatc            68750<210>2<211>1421<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>2Val Ala Asp Arg Pro Ile Glu Arg Ala Ala Glu Asp Pro Ile Ala Ile1               5                  10                  15Val Gly Ala Ser Cys Arg Leu Pro Gly Gly Val Ile Asp Leu Ser Gly20                  25                  30Phe Trp Thr Leu Leu Glu Gly Ser Arg Asp Thr Val Gly Arg Val Pro35                  40                  45Ala Glu Arg Trp Asp Ala Ala Ala Trp Phe Asp Pro Asp Pro Asp Ala50                  55                  60Pro Gly Lys Thr Pro Val Thr Arg Ala Ser Phe Leu Ser Asp Val Ala65                  70                  75                  80Cys Phe Asp Ala Ser Phe Phe Gly Ile Ser Pro Arg Glu Ala Leu Arg85                  90                  95Met Asp Pro Ala His Arg Leu Leu Leu Glu Val Cys Trp Glu Ala Leu100                 105                 110Glu Asn Ala Ala Ile Ala Pro Ser Ala Leu Val Gly Thr Glu Thr Gly115                 120                 125Val Phe Ile Gly Ile Gly Pro Ser Glu Tyr Glu Ala Ala Leu Pro Gln130                 135                 140Ala Thr Ala Ser Ala Glu Ile Asp Ala His Gly Gly Leu Gly Thr Met145                 150                 155                 160Pro Ser Val Gly Ala Gly Arg Ile Ser Tyr Ala Leu Gly Leu Arg Gly165                 170                 175Pro Cys Val Ala Val Asp Thr Ala Tyr Ser Ser Ser Leu Val Ala Val180                 185                 190His Leu Ala Cys Gln Ser Leu Arg Ser Gly Glu Cys Ser Thr Ala Leu195                 200                 205Ala Gly Gly Val Ser Leu Met Leu Ser Pro Ser Thr Leu Val Trp Leu210                 215                 220Ser Lys Thr Arg Ala Leu Ala Arg Asp Gly Arg Cys Lys Ala Phe Ser225                 230                 235                 240Ala Glu Ala Asp Gly Phe Gly Arg Gly Glu Gly Cys Ala Val Val Val245                 250                 255Leu Lys Arg Leu Ser Gly Ala Arg Ala Asp Gly Asp Arg Ile Leu Ala260                 265                 270Val Ile Arg Gly Ser Ala Ile Asn His Asp Gly Ala Ser Ser Gly Leu275                 280                 285Thr Val Pro Asn Gly Ser Ser Gln Glu Ile Val Leu Lys Arg Ala Leu290                 295                 300Ala Asp Ala Gly Cys Ala Ala Ser Ser Val Gly Tyr Val Glu Ala His305                 310                 315                 320Gly Thr Gly Thr Thr Leu Gly Asp pro Ile Glu Ile Gln Ala Leu Asn              325                 330                 335Ala Val Tyr Gly Leu Gly Arg Asp Val Ala Thr Pro Leu Leu Ile Gly340                 345                 350Ser Val Lys Thr Asn Leu Gly His Pro Glu Tyr Ala Ser Gly Ile Thr355                 360                 365Gly Leu Leu Lys Val Val Leu Ser Leu Gln His Gly Gln Ile Pro Ala370                 375                 380His Leu His Ala Gln Ala Leu Asn Pro Arg Ile Ser Trp Gly Asp Leu385                 390                 395                 400Arg Leu Thr Val Thr Arg Ala Arg Thr Pro Trp Pro Asp Trp Asn Thr405                 410                 415Pro Arg Arg Ala Gly Val Ser Ser Phe Gly Met Ser Gly Thr Asn Ala420                 425                 430His Val Val Leu Glu Glu Ala Pro Ala Ala Thr Cys Thr Pro Pro Ala435                 440                 445Pro Glu Arg Pro Ala Glu Leu Leu Val Leu Ser Ala Arg Thr Ala Ser450                 455                 460Ala Leu Asp Ala Gln Ala Ala Arg Leu Arg Asp His Leu Glu Thr Tyr465                 470                 475                 480Pro Ser Gln Cys Leu Gly Asp Val Ala Phe Ser Leu Ala Thr Thr Arg485                 490                 495Ser Ala Met Glu His Arg Leu Ala Val Ala Ala Thr Ser Arg Glu Gly500                 505                 510Leu Arg Ala Ala Leu Asp Ala Ala Ala Gln Gly Gln Thr Ser Pro Gly515                 520                 525Ala Val Arg Ser Ile Ala Asp Ser Ser Arg Gly Lys Leu Ala Phe Leu530                 535                 540Phe Thr Gly Gln Gly Ala Gln Thr Leu Gly Met Gly Arg Gly Leu Tyr545                 550                 555                 560Asp Val Trp Ser Ala Phe Arg Glu Ala Phe Asp Leu Cys Val Arg Leu565                 570                 575Phe Asn Gln Glu Leu Asp Arg Pro Leu Arg Glu Val Met Trp Ala Glu580                 585                 590Pro Ala Ser Val Asp Ala Ala Leu Leu Asp Gln Thr Ala Phe Thr Gln595                 600                 605Pro Ala Leu Phe Thr Phe Glu Tyr A la Leu Ala Ala Leu Trp Arg Ser610                 615                  620Trp Gly Val Glu Pro Glu Leu Val Ala Gly His Ser Ile Gly Glu Leu625                 630                 635                 640Val Ala Ala Cys Val Ala Gly Val Phe Ser Leu Glu Asp Ala Val Phe645                 650                 655Leu Val Ala Ala Arg Gly Arg Leu Met Gln Ala Leu Pro Ala Gly Gly660                 665                 670Ala Met Val Ser Ile Glu Ala Pro Glu Ala Asp Val Ala Ala Ala Val675                 680                 685Ala Pro His Ala Ala Ser Val Ser Ile Ala Ala Val Asn Ala Pro Asp690                 695                 700Gln Val Val Ile Ala Gly Ala Gly Gln Pro Val His Ala Ile Ala Ala705                 710                 715                 720Ala Met Ala Ala Arg Gly Ala Arg Thr Lys Ala Leu His Val Ser His725                 730                 735Ala Phe His Ser Pro Leu Met Ala Pro Met Leu Glu Ala Phe Gly Arg740                 745                 750Val Ala Glu Ser Val Ser Tyr Arg Arg Pro Ser Ile Val Leu Val Ser755                 760                 765Ash Leu Ser Gly Lys Ala Cys Thr Asp Glu Val Ser Ser Pro Gly Tyr770                 775                 780Trp Val Arg His Ala Arg Glu Val Val Arg Phe Ala Asp Gly Val Lys785                 790                 795                 800Ala Leu His Ala Ala Gly Ala Gly Thr Phe Val Glu Val Gly Pro Lys805                 810                 815Ser Thr Leu Leu Gly Leu Val Pro Ala Cys Met Pro Asp Ala Arg Pro820                 825                 830Ala Leu Leu Ala Ser Ser Arg Ala Gly Arg Asp Glu Pro Ala Thr Val835                 840                 845Leu Glu Ala Leu Gly Gly Leu Trp Ala Val Gly Gly Leu Val Ser Trp850                 855                 860Ala Gly Leu Phe Pro Ser Gly Gly Arg Arg Val Pro Leu Pro Thr Tyr865                 870                 875                 880Pro Trp Gln Arg Glu Arg Tyr Trp Ile Asp Thr Lys Ala Asp Asp Ala885                 890                 895Ala Arg Gly Asp Arg Arg Ala Pro Gly Ala Gly His Asp Glu Val Glu900                 905                 910Glu Gly Gly Ala Val Arg Gly Gly Asp Arg Arg Ser Ala Arg Leu Asp915                 920                 925His Pro Pro Pro Glu Ser Gly Arg Arg Glu Lys Val Glu Ala Ala Gly930                 935                 940Asp Arg Pro Phe Arg Leu Glu Ile Asp Glu Pro Gly Val Leu Asp His945                 950                 955                 960Leu Val Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Pro Gly Leu Gly Glu Val965                 970                 975Glu Ile Ala Val Asp Ala Ala Gly Leu Ser Phe Asn Asp Val Gln Leu980                 985                 990Ala Leu Gly Met Val Pro Asp Asp Leu Pro Gly Lys Pro Asn Pro Pro995                1000                1005Leu Leu Leu GlyGly Glu Cys Ala GlyArg Ile Val Ala Val Gly Glu1010               1015               1020Gly Val Asn Gly Leu Val Val Gly Gln Pro Val Ile Ala Leu Ser Ala1025               1030                1035                1040Gly Ala Phe Ala Thr His Val Thr Thr Ser Ala Ala Leu Val Leu Pro1045                1050                1055Arg Pro Gln Ala Leu Ser Ala Ile Glu Ala Ala Ala Met Pro Val Ala1060                1065                1070Tyr Leu Thr Ala Trp Tyr Ala Leu Asp Arg Ile Ala Arg Leu Gln Pro1075                1080                1085Gly Glu Arg Val Leu Ile His Ala Ala Thr Gly Gly Val Gly Leu Ala1090                1095                1100Ala Val Gln Trp Ala Gln His Val Gly Ala Glu Val His Ala Thr Ala1105               1110                1115                1120Gly Thr Pro Glu Lys Arg Ala Tyr Leu Glu Ser Leu Gly Val Arg Tyr1125                1130                1135Val Ser Asp Ser Arg Ser Asp Arg Phe Val Ala Asp Val Arg Ala Trp1140                1145                1150Thr Gly Gly Glu Gly Val Asp Val Val Leu Asn Ser Leu Ser Gly Glu1155                1160                1165Leu Ile Asp Lys Ser Phe Asn Leu Leu Arg Ser His Gly Arg Phe Val1170                1175                1180Glu Leu Gly Lys Arg Asp Cys Tyr Ala Asp Asn Gln Leu Gly Leu Arg1185               1190                1195                1200Pro Phe Leu Arg Asn Leu Ser Phe Ser Leu Val Asp Leu Arg Gly Met1205                1210                1215Met Leu Glu Arg Pro Ala Arg Val Arg Ala Leu Leu Glu Glu Leu Leu1220                1225                1230Gly Leu Ile Ala Ala Gly Val Phe Thr Pro Pro Pro Ile Ala Thr Leu1235                1240                1245Pro Ile Ala Arg Val Ala Asp Ala Phe Arg Ser Met Ala Gln Ala Gln1250                1255                1260His Leu Gly Lys Leu Val Leu Thr Leu Gly Asp Pro Glu Val Gln Ile1265               1270                1275                1280Arg Ile Pro Thr His Ala Gly Ala Gly Pro Ser Thr Gly Asp Arg Asp1285                1290                1295Leu Leu Asp Arg Leu Ala Ser Ala Ala Pro Ala Ala Arg Ala Ala Ala1300                1305                1310Leu Glu Ala Phe Leu Arg Thr Gln Val Ser Gln Va1 Leu Arg Thr Pro1315                1320                1325Glu Ile Lys Val Gly Ala Glu Ala Leu Phe Thr Arg Leu Gly Met Asp1330                1335                1340Ser Leu Met Ala Val Glu Leu Arg Asn Arg Ile Glu Ala Ser Leu Lys1345               1350                1355                1360Leu Lys Leu Ser Thr Thr Phe Leu Ser Thr Ser Pro Asn Ile Ala Leu             1365                1370                1375Leu Ala Gln Asn Leu Leu Asp Ala Leu Ala Thr Ala Leu Ser Leu Glu1380                1385                1390Arg Val Ala Ala Glu Asn Leu Arg Ala Gly Val Gln Asn Asp Phe Val1395                1400                1405Ser Ser Gly Ala Asp Gln Asp Trp Glu Ile Ile Ala Leu1410                1415                1420<210>3<211>1410<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>3Met Thr Ile Asn Gln Leu Leu Asn Glu Leu Glu His Gln Gly Ile Lys1               5                  10                  15Leu Ala Ala Asp Gly Glu Arg Leu Gln Ile Gln Ala Pro Lys Asn Ala20                  25                  30Leu Asn Pro Asn Leu Leu Ala Arg Ile Ser Glu His Lys Ser Thr Ile35                  40                  45Leu Thr Met Leu Arg Gln Arg Leu Pro Ala Glu Ser Ile Val Pro Ala50                  55                  60Pro Ala Glu Arg His Ala Pro Phe Pro Leu Thr Asp Ile Gln Glu Ser65                  70                  75                  80Tyr Trp Leu Gly Arg Thr Gly Ala Phe Thr Val Pro Ser Gly Ile His85                  90                  95Ala Tyr Arg Glu Tyr Asp Cys Thr Asp Leu Asp Val Pro Arg Leu Ser100                 105                 110Arg Ala Phe Arg Lys Val Val Ala Arg His Asp Met Leu Arg Ala His115                 120                 125Thr Leu Pro Asp Met Met Gln Val Ile Glu Pro Lys Val Asp Ala Asp130                 135                 140Ile Glu Ile Ile Asp Leu Arg Gly Leu Asp Arg Ser Thr Arg Glu Ala145                 150                 155                 160Arg Leu Val Ser Leu Arg Asp Ala Met Ser His Arg Ile Tyr Asp Thr165                 170                 175Glu Arg Pro Pro Leu Tyr His Val Val Ala Val Arg Leu Asp Glu Arg180                 185                 190Gln Thr Arg Leu Val Leu Ser Ile Asp Leu Ile Asn Val Asp Leu Gly195                 200                 205Ser Leu Ser Ile Ile Phe Lys Asp Trp Leu Ser Phe Tyr Glu Asp Pro210                 215                 220Glu Thr Ser Leu Pro Val Leu Glu Leu Ser Tyr Arg Asp Tyr Val Leu225                 230                 235                 240Ala Leu Glu Ser Arg Lys Lys Ser Glu Ala His Gln Arg Ser Met Asp245                 250                 255Tyr Trp Lys Arg Arg Ile Ala Glu Leu Pro Pro Pro Pro Thr Leu Pro260                 265                 270Met Lys Ala Asp Pro Ser Thr Leu Lys Glu Ile Arg Phe Arg His Thr275                 280                 285Glu Gln Trp Leu Pro Ser Asp Ser Trp Gly Arg Leu Lys Arg Arg Val290                 295                 300Gly Glu Arg Gly Leu Thr Pro Thr Gly Val Ile Leu Ala Ala Phe Ser305                 310                 315                 320Glu Val Ile Gly Arg Trp Ser Ala Ser Pro Arg Phe Thr Leu Asn Ile325                 330                 335Thr Leu Phe Asn Arg Leu Pro Val His Pro Arg Val Asn Asp Ile Thr340                 345                 350Gly Asp Phe Thr Ser Met Val Leu Leu Asp Ile Asp Thr Thr Arg Asp355                 360                 365Lys Ser Phe Glu Gln Arg Ala Lys Arg Ile Gln Glu Gln Leu Trp Glu370                 375                 380Ala Met Asp His Cys Asp Val Ser Gly Ile Glu Val Gln Arg Glu Ala385                 390                 395                 400Ala Arg Val Leu Gly Ile Gln Arg Gly Ala Leu Phe Pro Val Val Leu405                 410                 415Thr Ser Ala Leu Asn Gln Gln Val Val Gly Val Thr Ser Leu Gln Arg420                 425                 430Leu Gly Thr Pro Val Tyr Thr Ser Thr Gln Thr Pro Gln Leu Leu Leu435                 440                 445Asp His Gln Leu Tyr Glu His Asp Gly Asp Leu Val Leu Ala Trp Asp450                 455                 460Ile Val Asp Gly Val Phe Pro Pro Asp Leu Leu Asp Asp Met Leu Glu465                 470                 475                 480Ala Tyr Val Val Phe Leu Arg Arg Leu Thr Glu Glu Pro Trp Gly Glu485                 490                 495Gln Val Arg Cys Ser Leu Pro Pro Ala Gln Leu Glu Ala Arg Ala Ser500                 505                 510Ala Asn Ala Thr Asn Ala Leu Leu Ser Glu His Thr Leu His Gly Leu515                 520                 525Phe Ala Ala Arg Val Glu Gln Leu Pro Met Gln Leu Ala Val Val Ser530                 535                 540Ala Arg Lys Thr Leu Thr Tyr Glu Glu Leu Ser Arg Arg Ser Arg Arg545                 550                 555                 560Leu Gly Ala Arg Leu Arg Glu Gln Gly Ala Arg Pro Asn Thr Leu Val565                 570                 575Ala Val Val Met Glu Lys Gly Trp Glu Gln Val Val Ala Val Leu Ala580                 585                 590Val Leu Glu Ser Gly Ala Ala Tyr Val Pro Ile Asp Ala Asp Leu Pro      595                 600                 605Ala Glu Arg Ile His Tyr Leu Leu Asp His Gly Glu Val Lys Leu Val610                 615                 620Leu Thr Gln Pro Trp Leu Asp Gly Lys Leu Ser Trp Pro Pro Gly Ile625                 630                 635                 640Gln Arg Leu Leu Val Ser Glu Ala Gly Val Glu Gly Asp Gly Asp Gln645                 650                 655Pro Pro Met Met Pro Ile Gln Thr Pro Ser Asp Leu Ala Tyr Val Ile660                 665                 670Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Gly Leu Pro Lys Gly Val Met Ile Asp His675                 680                 685Arg Gly Ala Val Asn Thr Ile Leu Asp Ile Asn Glu Arg Phe Glu Ile690                 695                 700Gly Pro Gly Asp Arg Val Leu Ala Leu Ser Ser Leu Ser Phe Asp Leu705                 710                 715                 720Ser Val Tyr Asp Val Phe Gly Ile Leu Ala Ala Gly Gly Thr Ile Val725                 730                 735Val Pro Asp Ala Ser Lys Leu Arg Asp Pro Ala His Trp Ala Glu Leu740                 745                 750Ile Glu Arg Glu Lys Val Thr Val Trp Asn Ser Val Pro Ala Leu Met755                 760                 765Arg Met Leu Val Glu His Phe Glu Gly Arg Pro Asp Ser Leu Ala Arg770                 775                 780Ser Leu Arg Leu Ser Leu Leu Ser Gly Asp Trp Ile Pro Val Gly Leu785                 790                 795                 800Pro Gly Glu Leu Gln Ala Ile Arg Pro Gly Val Ser Val Ile Ser Leu805                 810                 815Gly Gly Ala Thr Glu Ala Ser Ile Trp Ser Ile Gly Tyr Pro Val Arg820                 825                 830Asn Val Asp Leu Ser Trp Ala Ser Ile Pro Tyr Gly Arg Pro Leu Arg835                 840                 845Asn Gln Thr Phe His Val Leu Asp Glu A la Leu Glu Pro Arg Pro Val850                 855                  860Trp Val Pro Gly Gln Leu Tyr Ile Gly Gly Val Gly Leu Ala Leu Gly865                 870                 875                 880Tyr Trp Arg Asp Glu Glu Lys Thr Arg Lys Ser Phe Leu Val His Pro885                 890                 895Glu Thr Gly Glu Arg Leu Tyr Lys Thr Gly Asp Leu Gly Arg Tyr Leu900                 905                 910Pro Asp Gly Asn Ile Glu Phe Met Gly Arg Glu Asp Asn Gln Ile Lys915                 920                 925Leu Arg Gly Tyr Arg Val Glu Leu Gly Glu Ile Glu Glu Thr Leu Lys930                 935                 940Ser His Pro Asn Val Arg Asp Ala Val Ile Val Pro Val Gly Asn Asp945                 950                 955                 960Ala Ala Asn Lys Leu Leu Leu Ala Tyr Val Val Pro Glu Gly Thr Arg965                 970                 975Arg Arg Ala Ala Glu Gln Asp Ala Ser Leu Lys Thr Glu Arg Ile Asp980                 985                 990Ala Arg Ala His Ala Ala Glu Ala Asp Gly Leu Ser Asp Gly Glu Arg995                1000                1005Val Gln Phe Lys Leu Ala Arg His Gly Leu Arg Arg Asp Leu Asp Gly1010                1015                1020Lys Pro Val Val Asp Leu Thr Gly Gln Asp Pro Arg Glu Ala Gly Leu1025               1030                1035                1040Asp Val Tyr Ala Arg Arg Arg Ser Val Arg Thr Phe Leu Glu Ala Pro1045                1050                1055Ile Pro Phe Val Glu Phe Gly Arg Phe Leu Ser Cys Leu Ser Ser Val1060                1065                1070Glu Pro Asp Gly Ala Thr Leu Pro Lys Phe Arg Tyr Pro Ser Ala Gly1075                1080                1085Ser Thr Tyr Pro Val Gln Thr Tyr Ala Tyr Val Lys Ser Gly Arg Ile1090                1095                1100Glu Gly Val Asp Glu Gly Phe Tyr Tyr Tyr His Pro Phe Glu His Arg1105               1110                1115                1120Leu Leu Lys Leu Ser Asp His Gly Ile Glu Arg Gly Ala His Val Arg1125                1130                1135Gln Asn Phe Asp Val Phe Asp Glu Ala Ala Phe Asn Leu Leu Phe Val1140                1145                1150Gly Arg Ile Asp Ala Ile Glu Ser Leu Tyr Gly Ser Ser Ser Arg Glu1155                1160                1165Phe Cys Leu Leu Glu Ala Gly Tyr Met Ala Gln Leu Leu Met Glu Gln1170                1175                1180Ala Pro Ser Cys Asn Ile Gly Val Cys Pro Val Gly Gln Phe Asn Phe1185               1190                1195                1200Glu Gln Val Arg Pro Val Leu Asp Leu Arg His Ser Asp Val Tyr Val1205                1210                1215His Gly Met Leu Gly Gly Arg Val Asp Pro Arg Gln Phe Gln Val Cys1220                1225                1230Thr Leu Gly Gln Asp Ser Ser Pro Arg Arg Ala Thr Thr Arg Gly Ala1235                1240                1245Pro Pro Gly Arg Glu Gln His Phe Ala Asp Met Leu Arg Asp Phe Leu1250                1255                1260Arg Thr Lys Leu Pro Glu Tyr Met Val Pro Thr Val Phe Val Glu Leu1265               1270                1275                1280Asp Ala Leu Pro Leu Thr Ser Asn Gly Lys Val Asp Arg Lys Ala Leu1285                1290                1295Arg Glu Arg Lys Asp Thr Ser Ser Pro Arg His Ser Gly His Thr Ala1300                1305                1310Pro Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ile Leu Val Ala Val Val Arg Glu Val1315                1320                1325Leu Gly Leu Glu Val Val Gly Leu Gln Gln Ser Phe Val Asp Leu Gly1330                1335                1340Ala Thr Ser Ile His Ile Val Arg Met Arg Ser Leu Leu Gln Lys Arg1345               1350                1355                1360Leu Asp Arg Glu Ile Ala Ile Thr Glu Leu Phe Gln Tyr Pro Asn Leu1365                1370                1375Gly Ser Leu Ala Ser Gly Leu Arg Arg Asp Ser Arg Asp Leu Asp Gln1380                1385                1390Arg Pro Asn Met Gln Asp Arg Val Glu Val Arg Arg Lys Gly Arg Arg1395                1400                1405Arg Ser1410<210>4<211>1832<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>4Met Glu Glu Gln Glu Ser Ser Ala Ile Ala Val Ile Gly Met Ser Gly1               5                  10                  15Arg Phe Pro Gly Ala Arg Asp Leu Asp Glu Phe Trp Arg Asn Leu Arg20                  25                  30Asp Gly Thr Glu Ala Val Gln Arg Phe Ser Glu Gln Glu Leu Ala Ala35                  40                  45Ser Gly Val Asp Pro Ala Leu Val Leu Asp Pro Ser Tyr Val Arg Ala50                  55                  60Gly Ser Val Leu Glu Asp Val Asp Arg Phe Asp Ala Ala Phe Phe Gly65                  70                  75                  80Ile Ser Pro Arg Glu Ala Glu Leu Met Asp Pro Gln His Arg Ile Phe85                  90                  95Met Glu Cys Ala Trp Glu Ala Leu Glu Asn Ala Gly Tyr Asp Pro Thr100                 105                 110Ala Tyr Glu Gly Ser Ile Gly Val Tyr Ala Gly Ala Asn Met Ser Ser115                 120                 125Tyr Leu Thr Ser Asn Leu His Glu His Pro Ala Met Met Arg Trp Pro130                 135                 140Gly Trp Phe Gln Thr Leu Ile Gly Asn Asp Lys Asp Tyr Leu Ala Thr145                 150                 155                 160His Val Ser Tyr Arg Leu Asn Leu Arg Gly Pro Ser Ile Ser Val Gln165                 170                 175Thr Ala Cys Ser Thr Ser Leu Val Ala Val His Leu Ala Cys Met Ser180                 185                 190Leu Leu Asp Arg Glu Cys Asp Met Ala Leu Ala Gly Gly Ile Thr Val195                 200                 205Arg Ile Pro His Arg Ala Gly Tyr Val Tyr Ala Glu Gly Gly Ile Phe210                 215                 220Ser Pro Asp Gly His Cys Arg Ala Phe Asp Ala Lys Ala Asn Gly Thr225                 230                 235                 240Ile Met Gly Asn Gly Cys Gly Val Val Leu Leu Lys Pro Leu Asp Arg245                 250                 255Ala Leu Ser Asp Gly Asp Pro Val Arg Ala Val Ile Leu Gly Ser Ala260                 265                 270Thr Asn Asn Asp Gly Ala Arg Lys Ile Gly Phe Thr Ala Pro Ser Glu275                 280                 285Val Gly Gln Ala Gln Ala Ile Met Glu Ala Leu Ala Leu Ala Gly Val290                 295                 300Glu Ala Arg Ser Ile Gln Tyr Ile Glu Thr His Gly Thr Gly Thr Leu305                 310                 315                 320Leu Gly Asp Ala Ile Glu Thr Ala Ala Leu Arg Arg Val Phe Gly Arg325                 330                 335Asp Ala Ser Ala Arg Arg Ser Cys Ala Ile Gly Ser Val Lys Thr Gly340                 345                 350Ile Gly His Leu Glu Ser Ala Ala Gly Ile Ala Gly Leu Ile Lys Thr355                 360                 365Val Leu Ala Leu Glu His Arg Gln Leu Pro Pro Ser Leu Asn Phe Glu370                 375                 380Ser Pro Asn Pro Ser Ile Asp Phe Ala Ser Ser Pro Phe Tyr Val Asn385                 390                 395                 400Thr Ser Leu Lys Asp Trp Asn Thr Gly Ser Thr Pro Arg Arg Ala Gly405                 410                 415Val Ser Ser Phe Gly Ile Gly Gly Thr Asn Ala His Val Val Leu Glu420                 425                 430Glu Ala Pro Ala Ala Lys Leu Pro Ala Ala Ala Pro Ala Arg Ser Ala435                 440                 445Glu Leu Phe Val Val Ser Ala Lys Ser Ala Ala Ala Leu Asp Ala Ala450                 455                 460Ala Ala Arg Leu Arg Asp His Leu Gln Ala His Gln Gly Ile Ser Leu465                 470                 475                 480Gly Asp Val Ala Phe Ser Leu Ala Thr Thr Arg Ser Pro Met Glu His485                 490                 495Arg Leu Ala Met Ala Ala Pro Ser Arg Glu Ala Leu Arg Glu Gly Leu500                 505                 510Asp Ala Ala Ala Arg Gly Gln Thr Pro Pro Gly Ala Val Arg Gly Arg515                 520                 525Cys Ser Pro Gly Asn Val Pro Lys Val Val Phe Val Phe Pro Gly Gln530                 535                 540Gly Ser Gln Trp Val Gly Met Gly Arg Gln Leu Leu Ala Glu Glu Pro545                 550                 555                 560Val Phe His Ala Ala Leu Ser Ala Cys Asp Arg Ala Ile Gln Ala Glu565                 570                 575Ala Gly Trp Ser Leu Leu Ala Glu Leu Ala Ala Asp Glu Gly Ser Ser580                 585                 590Gln Leu Glu Arg Ile Asp Val Val Gln Pro Val Leu Phe Ala Leu Ala595                 600                 605Val Ala Phe Ala Ala Leu Trp Arg Ser Trp Gly Val Ala Pro Asp Val610                 615                 620Val Ile Gly His Ser Met Gly Glu Val Ala Ala Ala His Val Ala Gly625                 630                 635                 640Ala Leu Ser Leu Glu Asp Ala Val Ala Ile Ile Cys Arg Arg Ser Arg645                 650                 655Leu Leu Arg Arg Ile Ser Gly Gln Gly Glu Met Ala Val Thr Glu Leu660                 665                 670Ser Leu Ala Glu Ala Glu Ala Ala Leu Arg Gly Tyr Glu Asp Arg Val675                 680                 685Ser Val Ala Val Ser Asn Ser Pro Arg Ser Thr Val Leu Ser Gly Glu690                 695                 700Pro Ala Ala Ile Gly Glu Val Leu Ser Ser Leu Asn Ala Lys Gly Val705                 710                 715                 720Phe Cys Arg Arg Val Lys Val Asp Val Ala Ser His Ser Pro Gln Val725                 730                 735Asp Pro Leu Arg Glu Asp Leu Leu Ala Ala Leu Gly Gly Leu Arg Pro740                 745                 750Gly Ala Ala Ala Val Pro Met Arg Ser Thr Val Thr Gly Ala Met Val755                 760                 765Ala Gly Pro Glu Leu Gly Ala Asn Tyr Trp Met Asn Asn Leu Arg Gln770                 775                 780Pro Val Arg Phe Ala Glu Val Val Gln Ala Gln Leu Gln Gly Gly His785                 790                 795                 800Gly Leu Phe Val Glu Met Ser Pro His Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val805                 810                 815Glu Glu Met Arg Arg Ala Ala Gln Arg Ala Gly Ala Ala Val Gly Ser820                 825                 830Leu Arg Arg Gly Gln Asp Glu Arg Pro Ala Met Leu Glu Ala Leu Gly835                 840                 845Thr Leu Trp Ala Gln Gly Tyr Pro Val Pro Trp Gly Arg Leu Phe Pro850                 855                 860Ala Gly Gly Arg Arg Val Pro Leu Pro Thr Tyr Pro Trp Gln Arg Glu865                 870                 875                 880Arg Tyr Trp Ile Glu Ala Pro Ala Lys Ser Ala Ala Gly Asp Arg Arg885                 890                 895Gly Val Arg Ala Gly Gly His Pro Leu Leu Gly Glu Met Gln Thr Leu900                 905                 910Ser Thr Gln Thr Ser Thr Arg Leu Trp Glu Thr Thr Leu Asp Leu Lys915                 920                 925Arg Leu Pro Trp Leu Gly Asp His Arg Val Gln Gly Ala Val Val Phe930                 935                 940Pro Gly Ala Ala Tyr Leu Glu Met Ala Ile Ser Ser Gly Ala Glu Ala945                 950                 955                 960Leu Gly Asp Gly Pro Leu Gln Ile Thr Asp Val Val Leu Ala Glu Ala965                 970                 975Leu Ala Phe Ala Gly Asp Ala Ala Val Leu Val Gln Val Val Thr Thr980                 985                 990Glu Gln Pro Ser Gly Arg Leu Gln Phe Gln Ile Ala Ser Arg Ala Pro995                1000                1005Gly Ala Gly His Ala Ser Phe Arg Val His Ala Arg Gly Ala Leu Leu1010                1015                1020Arg Val Glu Arg Thr Glu Val Pro Ala Gly Leu Thr Leu Ser Ala Val1025               1030                1035                1040Arg Ala Arg Leu Gln Ala Ser Ile Pro Ala Ala Ala Thr Tyr Ala Glu1045                1050                1055Leu Thr Glu Met Gly Leu Gln Tyr Gly Pro Ala Phe Gln Gly Ile Ala1060                1065                1070Glu Leu Trp Arg Gly Glu Gly Glu Ala Leu Gly Arg Val Arg Leu Pro1075                1080                1085Asp Ala Ala Gly Ser Ala Ala Glu Tyr Arg Leu His Pro Ala Leu Leu1090                1095                1100Asp Ala Cys Phe Gln Ile Val Gly Ser Leu Phe Ala Arg Ser Gly Glu1105               1110                1115                1120Ala Thr Pro Trp Val Pro Val Glu Leu Gly Ser Leu Arg Leu Leu Gln1125                1130                1135Arg Pro Ser Gly Glu Leu Trp Cys His Ala Arg Val Val Asn His Gly1140                1145                1150His Gln Thr Pro Asp Arg Gln Gly Ala Asp Phe Trp Val Val Asp Ser1155                1160                1165Ser Gly Ala Val Val Ala Glu Val Cys Gly Leu Val Ala Gln Arg Leu1170                1175                1180Pro Gly Gly Val Arg Arg Arg Glu Glu Asp Asp Trp Phe Leu Glu Leu1185               1190                1195                1200Glu Trp Glu Pro Ala Ala Val Gly Thr Ala Lys Val Asn Ala Gly Arg1205                1210                1215Trp Leu Leu Leu Gly Gly Gly Gly Gly Leu Gly Ala Ala Leu Arg Ala1220                1225                1230Met Leu Glu Ala Gly Gly His Ala Val Val His Ala Ala Glu Asn Asn1235                1240                1245Thr Ser Ala Ala Gly Val Arg Ala Leu Leu Ala Lys Ala Phe Asp Gly1250                1255                1260Gln Ala Pro Thr Ala Val Val His Leu Gly Ser Leu Asp Gly Gly Gly1265               1270                1275                1280Glu Leu Asp Pro Gly Leu Gly Ala Gln Gly Ala Leu Asp Ala Pro Arg1285                1290                1295Ser Ala Asp Val Ser Pro Asp Ala Leu Asp Pro Ala Leu Val Arg Gly1300                1305                1310Cys Asp Ser Val Leu Trp Thr Val Gln Ala Leu Ala Gly Met Gly Phe1315                1320                1325Arg Asp Ala Pro Arg Leu Trp Leu Leu Thr Arg Gly Ala Gln Ala Val1330                1335                1340Gly Ala Gly Asp Val Ser Val Thr Gln Ala Pro Leu Leu Gly Leu Gly1345               1350                1355                1360Arg Val Ile Ala Met Glu His Ala Asp Leu Arg Cys Ala Arg Val Asp1365                1370                1375Leu Asp Pro Ala Arg Pro Glu Gly Glu Leu Ala Ala Leu Leu Ala Glu1380                1385                1390Leu Leu Ala Asp Asp Ala Glu Ala Glu Val Ala Leu Arg Gly Gly Glu1395                1400                1405Arg Cys Val Ala Arg Ile Val Arg Arg Gln Pro Glu Thr Arg Pro Arg1410                1415                1420Gly Arg Ile Glu Ser Cys Val Pro Thr Asp Val Thr Ile Arg Ala Asp1425               1430                1435                1440Ser Thr Tyr Leu Val Thr Gly Gly Leu Gly Gly Leu Gly Leu Ser Val1445                1450                1455Ala Gly Trp Leu Ala Glu Arg Gly Ala Gly His Leu Val Leu Val GlyArg Ser Gly Ala Ala Ser Val Glu Gln Arg Ala Ala Val Ala Ala Leu1475                1480                1485Glu Ala Arg Gly Ala Arg Val Thr Val Ala Lys Ala Asp Val Ala Asp1490                1495                1500Arg Ala Gln Leu Glu Arg Ile Leu Arg Glu Val Thr Thr Ser Gly Met1505               1510                1515                1520Pro Leu Arg Gly Val Val His Ala Ala Gly Ile Leu Asp Asp Gly Leu1525                1530                1535Leu Met Gln Gln Thr Pro Ala Arg Phe Arg Lys Val Met Ala Pro Lys1540                1545                1550Val Gln Gly Ala Leu His Leu His Ala Leu Thr Arg Glu Ala Pro Leu1555                1560                1565Ser Phe Phe Val Leu Tyr Ala Ser Gly Val Gly Leu Leu Gly Ser Pro1570                1575                1580Gly Gln Gly Asn Tyr Ala Ala Ala Asn Thr Phe Leu Asp Ala Leu Ala1585               1590                1595                1600His His Arg Arg Ala Gln Gly Leu Pro Ala Leu Ser Val Asp Trp Gly1605                1610                1615Leu Phe Ala Glu Val Gly Met Ala Ala Ala Gln Glu Asp Arg Gly Ala1620                1625                1630Arg Leu Val Ser Arg Gly Met Arg Ser Leu Thr Pro Asp Glu Gly Leu1635                1640                1645Ser Ala Leu Ala Arg Leu Leu Glu Ser Gly Arg Ala Gln Val Gly Val1650                1655                1660Met Pro Val Asn Pro Arg Leu Trp Val Glu Leu Tyr Pro Ala Ala Ala1665               1670                1675                1680Ser Ser Arg Met Leu Ser Arg Leu Val Thr Ala His Arg Ala Ser Ala1685                1690                1695Gly Gly Pro Ala Gly Asp Gly Asp Leu Leu Arg Arg Leu Ala Ala Ala1700                1705                1710Glu Pro Ser Ala Arg Ser Ala Leu Leu Glu Pro Leu Leu Arg Ala Gln1715                1720                1725Ile Ser Gln Val Leu Arg Leu Pro Glu Gly Lys Ile Glu Val Asp Ala1730                1735                1740Pro Leu Thr Ser Leu Gly Met Asn Ser Leu Met Gly Leu Glu Leu Arg1745               1750                1755                1760Asn Arg Ile Glu Ala Met Leu Gly Ile Thr Val Pro A la Thr Leu Leu1765                1770                 1775Trp Thr Tyr Pro Thr Val Ala Ala Leu Ser Gly His Leu Ala Arg Glu1780                1785                1790Ala Cys Glu Ala Ala Pro Val Glu Ser Pro His Thr Thr Ala Asp Ser1795                1800                1805Ala Val Glu Ile Glu Glu Met Ser Gln Asp Asp Leu Thr Gln Leu Ile1810                1815                1820Ala Ala Lys Phe Lys Ala Leu Thr1825               1830<210>5<211>7257<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>5Met Thr Thr Arg Gly Pro Thr Ala Gln Gln Asn Pro Leu Lys Gln Ala1               5                  10                  15Ala Ile Ile Ile Gln Arg Leu Glu Glu Arg Leu Ala Gly Leu Ala Gln20                  25                  30Ala Glu Leu Glu Arg Thr Glu Pro Ile Ala Ile Val Gly Ile Gly Cys35                  40                  45Arg Phe Pro Gly Gly Ala Asp Ala Pro Glu Ala Phe Trp Glu Leu Leu50                  55                  60Asp Ala Glu Arg Asp Ala Val Gln Pro Leu Asp Met Arg Trp Ala Leu65                  70                  75                  80Val Gly Val Ala Pro Val Glu Ala Val Pro His Trp Ala Gly Leu Leu85                  90                  95Thr Glu Pro Ile Asp Cys Phe Asp Ala Ala Phe Phe Gly Ile Ser Pro100                 105                 110Arg Glu Ala Arg Ser Leu Asp Pro Gln His Arg Leu Leu Leu Glu Val115                 120                 125Ala Trp Glu Gly Leu Glu Asp Ala Gly Ile Pro Pro Arg Ser Ile Asp130                 135                 140Gly Ser Arg Thr Gly Val Phe Val Gly Ala Phe Thr Ala Asp Tyr Ala145                 150                 155                 160Arg Thr Val Ala Arg Leu Pro Arg Glu Glu Arg Asp Ala Tyr Ser Ala165                 170                 175Thr Gly Asn Met Leu Ser Ile Ala Ala Gly Arg Leu Ser Tyr Thr Leu180                 185                 190Gly Leu Gln Gly Pro Cys Leu Thr Val Asp Thr Ala Cys Ser Ser Ser195                 200                 205Leu Val Ala Ile His Leu Ala Cys Arg Ser Leu Arg Ala Gly Glu Ser210                 215                 220Asp Leu Ala Leu Ala Gly Gly Val Ser Ala Leu Leu Ser Pro Asp Met225                 230                 235                 240Met Glu Ala Ala Ala Arg Thr Gln Ala Leu Ser Pro Asp Gly Arg Cys245                 250                 255Arg Thr Phe Asp Ala Ser Ala Asn Gly Phe Val Arg Gly Glu Gly Cys260                 265                 270Gly Leu Val Val Leu Lys Arg Leu Ser Asp Ala Gln Arg Asp Gly Asp275                 280                 285ArG Ile Trp Ala Leu Ile Arg Gly Ser Ala Ile Asn His Asp Gly Arg290                 295                 300Ser Thr Gly Leu Thr Ala Pro Asn Val Leu Ala Gln Glu Thr Val Leu305                 310                 315                 320Arg Glu Ala Leu Arg Ser Ala His Val Glu Ala Gly Ala Val Asp Tyr325                 330                 335Val Glu Thr His Gly Thr Gly Thr Ser Leu Gly Asp Pro Ile Glu Val340                 345                 350Glu Ala Leu Arg Ala Thr Val Gly Pro Ala Arg Ser Asp Gly Thr Arg355                 360                 365Cys Val Leu Gly Ala Val Lys Thr Asn Ile Gly His Leu Glu Ala Ala370                 375                 380Ala Gly Val Ala Gly Leu Ile Lys Ala Ala Leu Ser Leu Thr His Glu385                 390                 395                 400Arg Ile Pro Arg Asn Leu Asn Phe Arg Thr Leu Asn Pro Arg Ile Arg405                 410                 415Leu Glu Gly Ser Ala Leu Ala Leu Ala Thr Glu Pro Val Pro Trp Pro420                 425                 430Arg Thr Asp Arg Pro Arg Phe Ala Gly Val Ser Ser Phe Gly Met Ser435                 440                 445Gly Thr Asn Ala His Val Val Leu Glu Glu Ala Pro Ala Val Glu Leu450                 455                 460Trp Pro Ala Ala Pro Glu Arg Ser Ala Glu Leu Leu Val Leu Ser Gly465                 470                 475                 480Lys Ser Glu Gly Ala Leu Asp Ala Gln Ala Ala Arg Leu Arg Glu His485                 490                 495Leu Asp Met His Pro Glu Leu Gly Leu Gly Asp Val Ala Phe Ser Leu500                 505                 510Ala Thr Thr Arg Ser Ala Met Ser His Arg Leu Ala Val Ala Val Thr515                 520                 525Ser Arg Glu Gly Leu Leu Ala Ala Leu Ser Ala Val Ala Gln Gly Gln530                 535                 540Thr Pro Ala Gly Ala Ala Arg Cys Ile Ala Ser Ser Ser Arg Gly Lys545                 550                 555                 560Leu Ala Phe Leu Phe Thr Gly Gln Gly Ala Gln Thr Pro Gly Met Gly565                 570                 575Arg Gly Leu Cys Ala Ala Trp Pro Ala Phe Arg Glu Ala Phe Asp Arg580                 585                 590Cys Val Ala Leu Phe Asp Arg Glu Leu Asp Arg Pro Leu Arg Glu Val595                 600                 605Met Trp Ala Glu Ala Gly Ser Ala Glu Ser Leu Leu Leu Asp Gln Thr610                 615                 620Ala Phe Thr Gln Pro Ala Leu Phe Ala Val Glu Tyr Ala Leu Thr Ala625                 630                 635                 640Leu Trp Arg Ser Trp Gly Val Glu Pro Glu Leu Leu Val Gly His Ser645                 650                 655Ile Gly Glu Leu Val Ala Ala Cys Val Ala Gly Val Phe Ser Leu Glu660                 665                 670Asp Gly Val Arg Leu Val Ala Ala Arg Gly Arg Leu Met Gln Gly Leu675                 680                 685Ser Ala Gly Gly Ala Met Val Ser Leu Gly Ala Pro Glu Ala Glu Val690                 695                 700Ala Ala Ala Val Ala Pro His Ala Ala Ser Val Ser Ile Ala Ala Val705                 710                 715                 720Asn Gly Pro Glu Gln Val Val Ile Ala Gly Val Glu Gln Ala Val Gln              725                 730                 735Ala Ile Ala Ala Gly Phe Ala Ala Arg Gly Ala Arg Thr Lys Arg Leu740                 745                 750His Val Ser His Ala Phe His Ser Pro Leu Met Glu Pro Met Leu Glu755                 760                 765Glu Phe Gly Arg Val Ala Ala Ser Val Thr Tyr Arg Arg Pro Ser Val770                 775                 780Ser Leu Val Ser Asn Leu Ser Gly Lys Val Val Thr Asp Glu Leu Ser785                 790                 795                 800Ala Pro Gly Tyr Trp Val Arg His Val Arg Glu Ala Val Arg Phe Ala805                 810                 815Asp Gly Val Lys Ala Leu His Glu Ala Gly Ala Gly Thr Phe Val Glu820                 825                 830Val Gly Pro Lys Pro Thr Leu Leu Gly Leu Leu Pro Ala Cys Leu Pro835                 840                 845Glu Ala Glu Pro Thr Leu Leu Ala Ser Leu Arg Ala Gly Arg Glu Glu850                 855                 860Ala Ala Gly Val Leu Glu Ala Leu Gly Arg Leu Trp Ala Ala Gly Gly865                 870                 875                 880Ser Val Ser Trp Pro Gly Val Phe Pro Thr Ala Gly Arg Arg Val Pro885                 890                 895Leu Pro Thr Tyr Pro Trp Gln Arg Gln Arg Tyr Trp Ile Glu Ala Pro900                 905                 910Ala Glu Gly Leu Gly Ala Thr Ala Ala Asp Ala Leu Ala Gln Trp Phe915                 920                 925Tyr Arg Val Asp Trp Pro Glu Met Pro Arg Ser Ser Val Asp Ser Arg930                 935                 940Arg Ala Arg Ser Gly Gly Trp Leu Val Leu Ala Asp Arg Gly Gly Val945                 950                 955                 960Gly Glu Ala Ala Ala Ala Ala Leu Ser Ser Gln Gly Cys Ser Cys Ala965                 970                 975Val Leu His Ala Pro Ala Glu Ala Ser Ala Val Ala Glu Gln Val Thr980                 985                 990Gln Ala Leu Gly Gly Arg Asn Asp Trp Gln Gly Val Leu Tyr Leu Trp995                1000                1005Gly Leu Asp Ala Val Val Glu Ala Gly Ala Ser Ala Glu Glu Val Ala1010                1015                1020Lys Val Thr His Leu Ala Ala Ala Pro Val Leu Ala Leu Ile Gln Ala1025               1030                1035                1040Leu Gly Thr Gly Pro Arg Ser Pro Arg Leu Trp Ile Val Thr Arg Gly1045                1050                1055Ala Cys Thr Val Gly Gly Glu Pro Asp Ala Ala Pro Cys Gln Ala Ala1060                1065                1070Leu Trp Gly Met Gly Arg Val Ala Ala Leu Glu His Pro Gly Ser Trp1075                1080                1085Gly Gly Leu Val Asp Leu Asp Pro Glu Glu Ser Pro Thr Glu Val Glu1090                1095                1100Ala Leu Val Ala Glu Leu Leu Ser Pro Asp Ala Glu Asp Gln Leu Ala1105               1110                1115                1120Phe Arg Gln Gly Arg Arg Arg Ala Ala Arg Leu Val Ala Ala Pro Pro1125                1130                1135Glu Gly Asn Ala Ala Pro Val Ser Leu Ser Ala Glu Gly Ser Tyr Leu1140                1145                1150Val Thr Gly Gly Leu Gly Ala Leu Gly Leu Leu Val Ala Arg Trp Leu1155                1160                1165Val Glu Arg Gly Ala Gly His Leu Val Leu Ile Ser Arg His Gly Leu1170                1175                1180Pro Asp Arg Glu Glu Trp Gly Arg Asp Gln Pro Pro Glu Val Arg Ala1185               1190                1195                1200Arg Ile Ala Ala Ile Glu Ala Leu Glu Ala Gln Gly Ala Arg Val Thr1205                1210                1215Val Ala Ala Val Asp Val Ala Asp Ala Glu Gly Met Ala Ala Leu Leu1220                1225                1230Ala Ala Val Glu Pro Pro Leu Arg Gly Val Val His Ala Ala Gly Leu1235                1240                1245Leu Asp Asp Gly Leu Leu Ala His Gln Asp Ala Gly Arg Leu Ala Arg1250                1255                1260Val Leu Arg Pro Lys Val Glu Gly Ala Trp Val Leu His Thr Leu Thr1265               1270                1275                1280Arg Glu Gln Pro Leu Asp Leu Phe Val Leu Phe Ser Ser Ala Ser Gly1285                1290                1295Val Phe Gly Ser Ile Gly Gln Gly Ser Tyr Ala Ala Gly Asn Ala Phe1300                1305                1310Leu Asp Ala Leu Ala Asp Leu Arg Arg Thr Gln Gly Leu Ala Ala Leu1315                1320                1325Ser Ile Ala Trp Gly Leu Trp Ala Glu Gly Gly Met Gly Ser Gln Ala1330                1335                1340Gln Arg Arg Glu His Glu Ala Ser Gly Ile Trp Ala Met Pro Thr Ser1345               1350                1355                1360Arg Ala Leu Ala Ala Met Glu Trp Leu Leu Gly Thr Arg Ala Thr Gln1365                1370                1375Arg Va1 Val Ile Gln Met Asp Trp Ala His Ala Gly Ala Ala Pro Arg1380                    1385            1390Asp Ala Ser Arg Gly Arg Phe Trp Asp Arg Leu Val Thr Ala Thr Lys1395                    1400            1405Glu Ala Ser Ser Ser Ala Val Pro Ala Val Glu Arg Trp Arg Asn Ala1410                    1415            1420Ser Val Val Glu Thr Arg Ser Ala Leu Tyr Glu Leu Val Arg Gly Val1425               1430                1435                1440Val Ala Gly Val Met Gly Phe Thr Asp Gln Gly Thr Leu Asp Val Arg1445                1450                1455Arg Gly Phe Ala Glu Gln Gly Leu Asp Ser Leu Met Ala Val Glu Ile1460                1465                1470Arg Lys Arg Leu Gln Gly Glu Leu Gly Met Pro Leu Ser Ala Thr Leu1475                1480                1485Ala Phe Asp His Pro Thr Val Glu Arg Leu Val Glu Tyr Leu Leu Ser1490                1495                1500Gln Ala Leu Glu Leu Gln Asp Arg Thr Asp Val Arg Ser Val Arg Leu1505               1510                1515                1520Pro Ala Thr Glu Asp Pro Ile Ala Ile Val Gly Ala Ala Cys Arg Phe1525                1530                1535Pro Gly Gly Val Glu Asp Leu Glu Ser Tyr Trp Gln Leu Leu Thr Glu1540                1545                1550Gly Val Val Val Ser Thr Glu Val Pro Ala Asp Arg Trp Asn Gly Ala1555                1560                1565Asp Gly Arg Val Pro Gly Ser Gly Glu Ala Gln Arg Gln Thr Tyr Val1570                1575                1580Pro Arg Gly Gly Phe Leu Arg Glu Val Glu Thr Phe Asp Ala Ala Phe1585               1590                1595                1600Phe His Ile Ser Pro Arg Glu Ala Met Ser Leu Asp Pro Gln Gln Arg1605                1610                1615Leu Leu Leu Glu Val Ser Trp Glu Ala Ile Glu Arg Ala Gly Gln Asp1620                1625                1630Pro Ser Ala Leu Arg Glu Ser Pro Thr Gly Val Phe Val Gly Ala Gly1635                1640                1645Pro Asn Glu Tyr Ala Glu Arg Val Gln Glu Leu Ala Asp Glu Ala Ala1650                1655                1660Gly Leu Tyr Ser Gly Thr Gly Asn Met Leu Ser Val Ala Ala Gly Arg1665               1670                1675                1680Leu Ser Phe Phe Leu Gly Leu His Gly Pro Thr Leu Ala Val Asp Thr1685                1690                1695Ala Cys Ser Ser Ser Leu Val Ala Leu His Leu Gly Cys Gln Ser Leu1700                1705                1710Arg Arg Gly Glu Cys Asp Gln Ala Leu Val Gly Gly Val Asn Met Leu1715                 1720                1725Leu Ser Pro Lys Thr Phe Ala Leu Leu Ser Arg Met His Ala Leu Ser1730                1735                1740Pro Gly Gly Arg Cys Lys Thr Phe Ser Ala Asp Ala Asp Gly Tyr Ala1745               1750                1755                1760Arg Ala Glu Gly Cys Ala Val Val Val Leu Lys Arg Leu Ser Asp Ala             1765                1770                1775Gln Arg Asp Arg Asp Pro Ile Leu Ala Val Ile Arg Gly Thr Ala Ile1780                1785                1790Asn His Asp Gly Pro Ser Ser Gly Leu Thr Val Pro Ser Gly Pro Ala1795                1800                1805Gln Glu Ala Leu Leu Arg Gln Ala Leu Ala His Ala Gly Val Val Pro1810                1815                1820Ala Asp Val Asp Phe Val Glu Cys His Gly Thr Gly Thr Ala Leu Gly1825               1830                1835                1840Asp Pro Ile Glu Val Arg Ala Leu Ser Asp Val Tyr Gly Gln Ala Arg1845                1850                1855Pro Ala Asp Arg Pro Leu Ile Leu Gly Ala Ala Lys Ala Asn Leu Gly1860                1865                1870His Met Glu Pro Ala Ala Gly Leu Ala Gly Leu Leu Lys Ala Val Leu1875                1880                1885Ala Leu Gly Gln Glu Gln Ile Pro Ala Gln Pro Glu Leu Gly Glu Leu1890                1895                1900Asn Pro Leu Leu Pro Trp Glu Ala Leu Pro Val Ala Val Ala Arg Ala1905               1910                1915                1920Ala Val Pro Trp Pro Arg Thr Asp Arg Pro Arg Phe Ala Gly Val Ser1925                1930                1935Ser Phe Gly Met Ser Gly Thr Asn Ala His Val Val Leu Glu Glu Ala1940                1945                1950Pro Ala Val Glu Leu Trp Pro Ala Ala Pro Glu Arg Ser Ala Glu Leu1955                1960                1965Leu Val Leu Ser Gly Lys Ser Glu Gly Ala Leu Asp Ala Gln Ala Ala1970                1975                1980Arg Leu Arg Glu His Leu Asp Met His Pro Glu Leu Gly Leu Gly Asp1985               1990                1995                2000Val Ala Phe Ser Leu Ala Thr Thr Arg Ser Ala Met Asn His Arg Leu2005                2010                2015Ala Val Ala Val Thr Ser Arg Glu Gly Leu Leu Ala Ala Leu Ser Ala2020                2025                2030Val Ala Gln Gly Gln Thr Pro Pro Gly Ala Ala Arg Cys Ile Ala Ser2035                2040                2045Ser Ser Arg Gly Lys Leu Ala Phe Leu Phe Thr Gly Gln Gly Ala Gln2050                2055                2060Thr Pro Gly Met Gly Arg Gly Leu Cys Ala Ala Trp Pro Ala Phe Arg2065               2070                2075                2080Glu Ala Phe Asp Arg Cys Val Ala Leu Phe Asp Arg Glu Leu Asp Arg2085                2090                2095Pro Leu Arg Glu Val Met Trp Ala Glu Pro Gly Ser Ala Glu Ser Leu2100                2105                2110Leu Leu Asp Gln Thr Ala Phe Thr Gln Pro Ala Leu Phe Thr Val Glu2115                2120                2125Tyr Ala Leu Thr Ala Leu Trp Arg Ser Trp Gly Val Glu Pro Glu Leu2130                2135                2140Val Ala Gly His Ser Ala Gly Glu Leu Val Ala Ala Cys Val Ala Gly2145               2150                2155                2160Val Phe Ser Leu Glu Asp Gly Val Arg Leu Val Ala Ala Arg Gly Arg2165                2170                2175Leu Met Gln Gly Leu Ser Ala Gly Gly Ala Met Val Ser Leu Gly Ala2180                2185                2190Pro Glu Ala Glu Val Ala Ala Ala Val Ala Pro His Ala Ala Ser Val2195                2200                2205Ser Ile Ala Ala Val Asn Gly Pro Glu Gln Val Val Ile Ala Gly Val2210                2215                2220Glu Gln Ala Val Gln Ala Ile Ala Ala Gly Phe Ala Ala Arg Gly Ala2225               2230                2235                2240Arg Thr Lys Arg Leu His Val Ser His Ala Ser His Ser Pro Leu Met2245                2250                2255Glu Pro Met Leu Glu Glu Phe Gly Arg Val Ala Ala Ser Val Thr Tyr2260                2265                2270Arg Arg Pro Ser Val Ser Leu Val Ser Asn Leu Ser Gly Lys Val Val2275                2280                2285Ala Asp Glu Leu Ser Ala Pro Gly Tyr Trp Val Arg His Val Arg Glu2290                2295                2300Ala Val Arg Phe Ala Asp Gly Val Lys Ala Leu His Glu Ala Gly Ala2305               2310                2315                2320Gly Thr Phe Val Glu Val Gly Pro Lys Pro Thr Leu Leu Gly Leu Leu2325                2330                2335Pro Ala Cys Leu Pro Glu Ala Glu Pro Thr Leu Leu Ala Ser Leu Arg2340                2345                2350Ala Gly Arg Glu Glu Ala Ala Gly Val Leu Glu Ala Leu Gly Arg Leu2355                2360                2365Trp Ala Ala Gly Gly Ser Val Ser Trp Pro Gly Val Phe Pro Thr Ala2370                2375                2380Gly Arg Arg Val Pro Leu Pro Thr Tyr Pro Trp Gln Arg Gln Arg Tyr2385               2390                2395                2400Trp Pro Asp Ile Glu Pro Asp Ser Arg Arg His Ala Ala Ala Asp Pro2405                2410                2415Thr Gln Gly Trp Phe Tyr Arg Val Asp Trp Pro Glu Ile Pro Arg Ser2420                2425                2430Leu Gln Lys Ser Glu Glu Ala Ser Arg Gly Ser Trp Leu Val Leu Ala2435                2440                2445Asp Lys Gly Gly Val Gly Glu Ala Val Ala Ala Ala Leu Ser Thr Arg2450                2455            2460Gly Leu Pro Cys Val Val Leu His Ala Pro Ala Glu Thr Ser Ala Thr2465               2470                2475                2480Ala Glu Leu Val Thr Glu Ala Ala Gly Gly Arg Ser Asp Trp Gln Val2485                2490                2495Val Leu Tyr Leu Trp Gly Leu Asp Ala Val Val Gly Ala Glu Ala Ser2500                2505                2510Ile Asp Glu Ile Gly Asp Ala Thr Arg Arg Ala Thr Ala Pro Val Leu2515                2520                2525Gly Leu Ala Arg Phe Leu Ser Thr Val Ser Cys Ser Pro Arg Leu Trp2530                2535                2540Val Val Thr Arg Gly Ala Cys Ile Val Gly Asp Glu Pro Ala Ile Ala2545               2550                2555                2560Pro Cys Gln Ala Ala Leu Trp Gly Met Gly Arg Val Ala Ala Leu Glu2565                2570                2575His Pro Gly Ala Trp Gly Gly Leu Val Asp Leu Asp Pro Arg Ala Ser2580                2585                2590Pro Pro Gln Ala Ser Pro Ile Asp Gly Glu Met Leu Val Thr Glu Leu2595                2600                2605Leu Ser Gln Glu Thr Glu Asp Gln Leu Ala Phe Arg His Gly Arg Arg2610                2615                2620His Ala Ala Arg Leu Val Ala Ala Pro Pro Gln Gly Gln Ala Ala Pro2625               2630                2635                2640Val Ser Leu Ser Ala Glu Ala Ser Tyr Leu Val Thr Gly Gly Leu Gly2645                2650                2655Gly Leu Gly Leu Ile Val Ala Gln Trp Leu Val Glu Leu Gly Ala Arg2660                2665                2670His Leu Val Leu Thr Ser Arg Arg Gly Leu Pro Asp Arg Gln Ala Trp2675                2680                2685Cys Glu Gln Gln Pro Pro Glu Ile Arg Ala Arg Ile Ala Ala Val Glu2690                2695                2700Ala Leu Glu Ala Arg Gly Ala Arg Val Thr Val Ala Ala Val Asp Val2705               2710                2715                2720Ala Asp Val Glu Pro Met Thr Ala Leu Val Ser Ser Val Glu Pro Pro2725                2730                2735Leu Arg Gly Val Val His Ala Ala Gly Val Ser Val Met Arg Pro Leu2740                2745                2750Ala Glu Thr Asp Glu Thr Leu Leu Glu Ser Val Leu Arg Pro Lys Val2755                2760                2765Ala Gly Ser Trp Leu Leu His Arg Leu Leu His Gly Arg Pro Leu Asp2770                2775                2780Leu Phe Val Leu Phe Ser Ser Gly Ala Ala Val Trp Gly Ser His Ser2785               2790                2795                2800Gln Gly Ala Tyr Ala Ala Ala Asn Ala Phe Leu Asp Gly Leu Ala His             2805                2810                2815Leu Arg Arg Ser Gln Ser Leu Pro Ala Leu Ser Val Ala Trp Gly Leu2820                2825                2830Trp Ala Glu Gly Gly Met Ala Asp Ala Glu Ala His Ala Arg Leu Ser2835                2840                2845Asp Ile Gly Val Leu Pro Met Ser Thr Ser Ala Ala Leu Ser Ala Leu2850                2855                2860Gln Arg Leu Val Glu Thr Gly Ala Ala Gln Arg Thr Val Thr Arg Met2865               2870                2875                2880Asp Trp Ala Arg Phe Ala Pro Val Tyr Thr Ala Arg Gly Arg Arg Asn2885                2890                2895Leu Leu Ser Ala Leu Val Ala Gly Arg Asp Ile Ile Ala Pro Ser Pro2900                2905                2910Pro Ala Ala Ala Thr Arg Asn Trp Arg Gly Leu Ser Val Ala Glu Ala2915                2920                2925Arg Val Ala Leu His Glu Ile Val His Gly Ala Val Ala Arg Val Leu2930                2935                2940Gly Phe Leu Asp Pro Ser Ala Leu Asp Pro Gly Met Gly Phe Asn Glu2945               2950                2955                2960Gln Gly Leu Asp Ser Leu Met Ala Val Glu Ile Arg Asn Leu Leu Gln2965                2970                2975Ala Glu Leu Asp Val Arg Leu Ser Thr Thr Leu Ala Phe Asp His Pro2980                2985                2990Thr Val Gln Arg Leu Val Glu His Leu Leu Val Asp Val Leu Lys Leu2995                3000                3005Glu Asp Arg Ser Asp Thr Gln His Val Arg Ser Leu Ala Ser Asp Glu3010                 3015                3020Pro Ile Ala Ile Val Gly Ala Ala Cys Arg Phe Pro Gly Gly Val Glu3025               3030                3035                3040Asp Leu Glu Ser Tyr Trp Gln Leu Leu Ala Glu Gly Val Val Val Ser3045                3050                3055Ala Glu Val Pro Ala Asp Arg Trp Asp Ala Ala Asp Trp Tyr Asp Pro3060                3065                3070Asp Pro Glu Ile Pro Gly Arg Thr Tyr Val Thr Lys Gly Ala Phe Leu3075                3080                3085Arg Asp Leu Gln Arg Leu Asp Ala Thr Phe Phe Arg Ile Ser Pro Arg3090                3095                3100Glu Ala Met Ser Leu Asp Pro Gln Gln Arg Leu Leu Leu Glu Val Ser3105               3110                3115                3120Trp Glu Ala Leu Glu Ser Ala Gly Ile Ala Pro Asp Thr Leu Arg Asp3125                3130                3135Ser pro Thr Gly Val Phe Val Gly Ala Gly Pro Asn Glu Tyr Tyr Thr3140                3145                3150Gln Arg Leu Arg Gly Phe Thr Asp Gly A la Ala Gly Leu Tyr Gly Gly3155                3160                 3165Thr Gly Asn Met Leu Ser Val Thr Ala Gly Arg Leu Ser Phe Phe Leu3170                3175                3180Gly Leu His Gly Pro Thr Leu Ala Met Asp Thr Ala Cys Ser Ser Ser3185               3190                3195                3200Leu Val Ala Leu His Leu Ala Cys Gln Ser Leu Arg Leu Gly Glu Cys3205                3210                3215Asp Gln Ala Leu Val Gly Gly Val Asn Val Leu Leu Ala Pro Glu Thr3220                3225                3230Phe Val Leu Leu Ser Arg Met Arg Ala Leu Ser Pro Asp Gly Arg Cys3235                3240                3245Lys Thr Phe Ser Ala Asp Ala Asp Gly Tyr Ala Arg Gly Glu Gly Cys3250                3255                3260Ala Val Val Val Leu Lys Arg Leu Arg Asp Ala Gln Arg Ala Gly Asp3265               3270                3275                3280Ser Ile Leu Ala Leu Ile Arg Gly Ser Ala Val Asn His Asp Gly Pro3285                3290                3295Ser Ser Gly Leu Thr Val Pro Asn Gly Pro Ala Gln Gln Ala Leu Leu3300                3305                3310Arg Gln Ala Leu Ser Gln Ala Gly Val Ser Pro Val Asp Val Asp Phe3315                3320                3325Val Glu Cys His Gly Thr Gly Thr Ala Leu Gly Asp Pro Ile Glu Val3330                3335                3340Gln Ala Leu Ser Glu Val Tyr Gly Pro Gly Arg Ser Gly Asp Arg Pro3345               3350                3355                3360Leu Val Leu Gly Ala Ala Lys Ala Asn Val Ala His Leu Glu Ala Ala3365                3370                3375Ser Gly Leu Ala Ser Leu Leu Lys Ala Val Leu Ala Leu Arg His Glu3380                3385                3390Gln Ile Pro Ala Gln Pro Glu Leu Gly Glu Leu Asn Pro His Leu Pro3395                3400                3405Trp Asn Thr Leu Pro Val Ala Val Pro Arg Lys Ala Val Pro Trp Gly3410                3415                3420Arg Gly Ala Arg Pro Arg Arg Ala Gly Val Ser Ala Phe Gly Leu Ser3425               3430                3435                3440Gly Thr Asn Val His Val Val Leu Glu Glu Ala Pro Glu Val Glu Pro3445                3450                3455Ala Pro Ala Ala Pro Ala Arg Pro Val Glu Leu Val Val Leu Ser Ala3460                3465                3470Lys Ser Ala Ala Ala Leu Asp Ala Ala Ala Ala Arg Leu Ser Ala His3475                3480                3485Leu Ser Ala His Pro Glu Leu Ser Leu Gly Asp Val Ala Phe Ser Leu3490                 3495                3500Ala Thr Thr Arg Ser Pro Met Glu His Arg Leu Ala Ile Ala Thr Thr3505               3510                3515                3520Ser Arg Glu Ala Leu Arg Gly Ala Leu Asp Ala Ala Ala Gln Gln Lys3525                3530                3535Thr Pro Gln Gly Ala Val Arg Gly Lys Ala Val Set Ser Arg Gly Lys3540                3545                3550Leu Ala Phe Leu Phe Thr Gly Gln Gly Ala Gln Met Pro Gly Met Gly3555                3560                3565Arg Gly Leu Tyr Glu Thr Trp Pro Ala Phe Arg Glu Ala Phe Asp Arg3570                3575                3580Cys Val Ala Leu Phe Asp Arg Glu Ile Asp Gln Pro Leu Arg Glu Val3585               3590                3595                3600Met Trp Ala Ala Pro Gly Leu Ala Gln Ala Ala Arg Leu Asp Gln Thr3605                3610                3615Ala Tyr Ala Gln Pro Ala Leu Phe Ala Leu Glu Tyr Ala Leu Ala Ala3620                3625                3630Leu Trp Arg Ser Trp Gly Val Glu Pro His Val Leu Leu Gly His Ser3635                3640                3645Ile Gly Glu Leu Val Ala Ala Cys Val Ala Gly Val Phe Ser Leu Glu3650                3655                3660Asp Ala Val Arg Leu Val Ala Ala Arg Gly Arg Leu Met Gln Ala Leu3665               3670                3675                3680Pro Ala Gly Gly Ala Met Val Ala Ile Ala Ala Ser Glu Ala Glu Val3685                3690                3695Ala Ala Ser Val Ala Pro His Ala Ala Thr Val Ser Ile Ala Ala Val3700                3705                3710Asn Gly Pro Asp Ala Val Val Ile Ala Gly Ala Glu Val Gln Val Leu3715                3720                3725Ala Leu Gly Ala Thr Phe Ala Ala Arg Gly Ile Arg Thr Lys Arg Leu3730                3735                3740Ala Val Ser His Ala Phe His Ser Pro Leu Met Asp Pro Met Leu Glu3745               3750                3755                3760Asp Phe Gln Arg Val Ala Ala Thr Ile Ala Tyr Arg Ala Pro Asp Arg3765                3770                3775Pro Val Val Ser Asn Val Thr Gly His Val Ala Gly Pro Glu Ile Ala3780                3785                3790Thr Pro Glu Tyr Trp Val Arg His Val Arg Ser Ala Val Arg Phe Gly3795                3800                3805Asp Gly Ala Lys Ala Leu His Ala Ala Gly Ala Ala Thr Phe Val Glu3810                3815                3820Val Gly Pro Lys Pro Val Leu Leu Gly Leu Leu Pro Ala Cys Leu Gly3825               3830                3835                3840Glu Ala Asp Ala Val Leu Val Pro Ser Leu Arg Ala Asp Arg Ser Glu             3845                3850                3855Cys Glu Val Val Leu Ala Ala Leu Gly Ala Trp Tyr Ala Trp Gly Gly3860                3865                3870Ala Leu Asp Trp Lys Gly Val Phe Pro Asp Gly Ala Arg Arg Val Ala3875                3880                3885Leu Pro Met Tyr Pro Trp Gln Arg Glu Arg His Trp Met Asp Leu Thr3890                3895                3900Pro Arg Ser Ala Ala Pro Ala Gly Ile Ala Gly Arg Trp Pro Leu Ala3905               3910                3915                3920Gly Val Gly Leu Cys Met Pro Gly Ala Val Leu His His Val Leu Ser3925                3930                3935Ile Gly Pro Arg His Gln Pro Phe Leu Gly Asp His Leu Val Phe Gly3940                3945                3950Lys Val Val Val Pro Gly Ala Phe His Val Ala Val Ile Leu Ser Ile3955                3960                3965Ala Ala Glu Arg Trp Pro Glu Arg Ala Ile Glu Leu Thr Gly Val Glu3970                3975                3980Phe Leu Lys Ala Ile Ala Met Glu Pro Asp Gln Glu Val Glu Leu His3985               3990                 3995               4000Ala Val Leu Thr Pro Glu Ala Ala Gly Asp Gly Tyr Leu Phe Glu Leu4005                4010                4015Ala Thr Leu Ala Ala Pro Glu Thr Glu Arg Arg Trp Thr Thr His Ala4020                4025                4030Arg Gly Arg Val Gln Pro Thr Asp Gly Ala Pro Gly Ala Leu Pro Arg4035                4040                4045Leu Glu Val Leu Glu Asp Arg Ala Ile Gln Pro Leu Asp Phe Ala Gly4050                4055                4060Phe Leu Asp Arg Leu Ser Ala Val Arg Ile Gly Trp Gly Pro Leu Trp4065               4070                4075                4080Arg Trp Leu Gln Asp Gly Arg Val Gly Asp Glu Ala Ser Leu Ala Thr4085                4090                4095Leu Val Pro Thr Tyr Pro Asn Ala His Asp Val Ala Pro Leu His Pro4100                4105                4110Ile Leu Leu Asp Asn Gly Phe Ala Val Ser Leu Leu Ser Thr Arg Ser4115                4120                4125Glu Pro Glu Asp Asp Gly Thr Pro Pro Leu Pro Phe Ala Val Glu Arg4130                4135                4140Val Arg Trp Trp Arg Ala Pro Val Gly Arg Val Arg Cys Gly Gly Val4145               4150                4155                4160Pro Arg Ser Gln Ala Phe Gly Val Ser Ser Phe Val Leu Val Asp Glu4165                4170                4175Thr Gly Glu Val Val Ala Glu Val Glu Gly Phe Val Cys Arg Arg Ala4180                4185                4190Pro Arg Glu Val Phe Leu Arg Gln Glu Ser Gly Ala Ser Thr Ala Ala4195                4200                4205Leu Tyr Arg Leu Asp Trp Pro Glu Ala Pro Leu Pro Asp Ala Pro Ala4210                 4215                4220Glu Arg Ile Glu Glu Ser Trp Val Val Val Ala Ala Pro Gly Ser Glu4225               4230                4235                4240Met Ala Ala Ala Leu Ala Thr Arg Leu Asn Arg Cys Val Leu Ala Glu4245                4250                4255Pro Lys Gly Leu Glu Ala Ala Leu Ala Gly Val Ser Pro Ala Gly Val4260                4265                4270Ile Cys Leu Trp Glu Ala Gly Ala His Glu Glu Ala Pro Ala Ala Ala4275                4280                4285Gln Arg Val Ala Thr Glu Gly Leu Ser Val Val Gln Ala Leu Arg Asp4290                4295                4300Arg Ala Val Arg Leu Trp Trp Val Thr Met Gly Ala Val Ala Val Glu4305               4310                4315                4320Ala Gly Glu Arg Val Gln Val Ala Thr Ala Pro Val Trp Gly Leu Gly4325                4330                4335Arg Thr Val Met Gln Glu Arg Pro Glu Leu Ser Cys Thr Leu Val Asp4340                4345                4350Leu Glu Pro Glu Ala Asp Ala Ala Arg Ser Ala Asp Val Leu Leu Arg4355                4360                4365Glu Leu Gly Arg Ala Asp Asp Glu Thr Gln Val Ala Phe Arg Ser Gly4370                4375                4380Lys Arg Arg Val Ala Arg Leu Val Lys Ala Thr Thr Pro Glu Gly Leu4385               4390                4395                4400Leu Val Pro Asp Ala Glu Ser Tyr Arg Leu Glu Ala Gly Gln Lys Gly4405                4410                4415Thr Leu Asp Gln Leu Arg Leu Ala Pro Ala Gln Arg Arg Ala Pro Gly4420                4425                4430Pro Gly Glu Val Glu Ile Lys Val Thr Ala Ser Gly Leu Asn Phe Arg4435                4440                4445Thr Val Leu Ala Val Leu Gly Met Tyr Pro Gly Asp Ala Gly Pro Met4450                4455                4460Gly Gly Asp Cys Ala Gly Val Ala Thr Ala Val Gly Gln Gly Val Arg4465               4470                4475                4480His Val Ala Val Gly Asp Ala Val Met Thr Leu Gly Thr Leu His Arg4485                4490                4495Phe Val Thr Val Asp Ala Arg Leu Val val Arg Gln Pro Ala Gly Leu4500                4505                4510Thr Pro Ala Gln Ala Ala Thr Val Pro val Ala Phe Leu Thr Ala Trp4515                4520                4525Leu Ala Leu His Asp Leu Gly Asn Leu Arg Arg Gly Glu Arg Val Leu4530                4535                4540Ile His Ala Ala Ala Gly Gly Val Gly Met Ala Ala Val Gln Ile Ala4545               4550                4555                4560Arg Trp Ile Gly Ala Glu Val Phe Ala Thr Ala Ser Pro Ser Lys Trp4565                4570                4575Ala Ala Val Gln Ala Met Gly Val Pro Arg Thr His Ile Ala Ser Ser4580                4585                4590Arg Thr Leu Glu Phe Ala Glu Thr Phe Arg Gln Val Thr Gly Gly Arg4595                4600                4605Gly Val Asp Val Val Leu Asn Ala Leu Ala Gly Glu Phe Val Asp Ala4610                4615                4620Ser Leu Ser Leu Leu Ser Thr Gly Gly Arg Phe Leu Glu Met Gly Lys4625               4630                 4635               4640Thr Asp Ile Arg Asp Arg Ala Ala Val Ala Ala Ala His Pro Gly Val4645                4650                4655Arg Tyr Arg Val Phe Asp Ile Leu Glu Leu Ala Pro Asp Arg Thr Arg4660                4665                4670Glu Ile Leu Glu Arg Val Val Glu Gly Phe Ala Ala Gly His Leu Arg4675                4680                4685Ala Leu Pro Val His Ala Phe Ala Ile Thr Lys Ala Glu Ala Ala Phe4690                4695                4700Arg Phe Met Ala Gln Ala Arg His Gln Gly Lys Val Val Leu Leu Pro4705               4710                4715                4720Ala Pro Ser Ala Ala Pro Leu Ala Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu Thr4725                4730                4735Gly Gly Leu Gly Ala Leu Gly Leu His Val Ala Arg Trp Leu Ala Gln4740                4745                4750Gln Gly Val Pro His Met Val Leu Thr Gly Arg Arg Gly Leu Asp Thr4755                4760                4765Pro Gly Ala Ala Lys Ala Val Ala Glu Ile Glu Ala Leu Gly Ala Arg4770                 4775                 4780Val Thr Ile Ala Ala Ser Asp Val Ala Asp Arg Asn Ala Leu Glu Ala4785               4790                4795                4800Val Leu Gln Ala Ile Pro Ala Glu Trp Pro Leu Gln Gly Val Ile His4805                4810                4815Ala Ala Gly Ala Leu Asp Asp Gly Val Leu Asp Glu Gln Thr Thr Asp4820                4825                4830Arg Phe Ser Arg Val Leu Ala Pro Lys Val Thr Gly Ala Trp Asn Leu4835                4840                4845His Glu Leu Thr Ala Gly Asn Asp Leu Ala Phe Phe Val Leu Phe Ser4850                4855                4860Ser Met Ser Gly Leu Leu Gly Ser Ala Gly Gln Ser Asn Tyr Ala Ala4865               4870                4875                4880Ala Asn Thr Phe Leu Asp Ala Leu Ala Ala His Arg Arg Ala Glu Gly             4885                4890                4895Leu Ala Ala Gln Ser Leu Ala Trp Gly Pro Trp Ser Asp Gly Gly Met4900                4905                4910Ala Ala Gly Leu Ser Ala Ala Leu Gln Ala Arg Leu Ala Arg His Gly4915                4920                4925Met Gly Ala Leu Ser Pro Ala Gln Gly Thr Ala Leu Leu Gly Gln Ala4930                4935                4940Leu Ala Arg Pro Glu Thr Gln Leu Gly Ala Met Ser Leu Asp Val Arg4945               4950                4955                4960Ala Ala Ser Gln Ala Ser Gly Ala Ala Val Pro Pro Val Trp Arg Ala4965                4970                4975Leu Val Arg Ala Glu Ala Arg His Thr Ala Ala Gly Ala Gln Gly Ala4980                4985                4990Leu Ala Ala Arg Leu Gly Ala Leu Pro Glu Ala Arg Arg Ala Asp Glu4995                5000                5005Val Arg Lys Val Val Gln Ala Glu Ile Ala Arg Val Leu Ser Trp Ser5010                5015                5020Ala Ala Ser Ala Val Pro Val Asp Arg Pro Leu Ser Asp Leu Gly Leu5025               5030                5035                5040Asp Ser Leu Thr Ala Val Glu Leu Arg Asn Val Leu Gly Gln Arg Val5045                5050                5055Gly Ala Thr Leu Pro Ala Thr Leu Ala Phe Asp His Pro Thr Val Asp5060                5065                5070Ala Leu Thr Arg Trp Leu Leu Asp Lys Val Leu Ala Val Ala Glu Pro5075                5080                5085Ser Val Ser Ser Ala Lys Ser Ser Pro Gln Val Ala Leu Asp Glu Pro5090                5095                5100Ile Ala Ile Ile Gly Ile Gly Cys Arg Phe Pro Gly Gly Val Ala Asp5105               5110                5115                5120Pro Glu Ser Phe Trp Arg Leu Leu Glu Glu Gly Ser Asp Ala Val Val5125                5130                5135Glu Val Pro His Glu Arg Trp Asp Ile Asp Ala Phe Tyr Asp Pro Asp5140                5145                5150Pro Asp Val Arg Gly Lys Met Thr Thr Arg Phe Gly Gly Phe Leu Ser5155                5160                5165Asp Ile Asp Arg Phe Asp Pro Ala Phe Phe Gly Ile Ser Pro Arg Glu5170                5175                5180Ala Thr Thr Met Asp Pro Gln Gln Arg Leu Leu Leu Glu Thr Ser Trp5185               5190                5195                5200Glu Ala Phe Glu Arg Ala Gly Ile Leu Pro Glu Arg Leu Met Gly Ser5205                5210                5215Asp Thr Gly Val Phe Val Gly Leu Phe Tyr Gln Glu Tyr Ala Ala Leu5220                5225                5230Ala Gly Gly Ile Glu Ala Phe Asp Gly Tyr Leu Gly Thr Gly Thr Thr5235            5240                5245Ala Ser Val Ala Ser Gly Arg Ile Ser Tyr Val Leu Gly Leu Lys Gly5250                5255                5260Pro Ser Leu Thr Val Asp Thr Ala Cys Ser Ser Ser Leu Val Ala Val5265               5270                5275                5280His Leu Ala Cys Gln Ala Leu Arg Arg Gly Glu Cys Ser Val Ala Leu5285                5290                5295Ala Gly Gly Val Ala Leu Met Leu Thr Pro Ala Thr Phe Val Glu Phe5300                5305                5310Ser Arg Leu Arg Gly Leu Ala Pro Asp Gly Arg Cys Lys Ser Phe Ser5315                5320                5325Ala Ala Ala Asp Gly Val Gly Trp Ser Glu Gly Cys Ala Met Leu Leu5330                5335                5340Leu Lys Pro Leu Arg Asp Ala Gln Arg Asp Gly Asp Pro Ile Leu Ala5345               5350                5355                5360Val Ile Arg Gly Thr Ala Val Asn Gln Asp Gly Arg Ser Asn Gly Leu5365                5370                5375Thr Ala Pro Asn Gly Ser Ser Gln Gln Glu Val Ile Arg Arg Ala Leu5380                5385                5390Glu Gln Ala Gly Leu Ala Pro Ala Asp Val Ser Tyr Val Glu Cys His5395                5400                5405Gly Thr Gly Thr Thr Leu Gly Asp Pro Ile Glu Val Gln Ala Leu Gly5410                5415                5420Ala Val Leu Ala Gln Gly Arg Pro Ser Asp Arg Pro Leu Val Ile Gly5425               5430                5435                5440Ser Val Lys Ser Asn Ile Gly His Thr Gln Ala Ala Ala Gly Val Ala5445                5450                5455Gly Val Ile Lys Val Ala Leu Ala Leu Glu Arg Gly Leu Ile Pro Arg5460                5465                5470Ser Leu His Phe Asp Ala Pro Asn Pro His Ile Pro Trp Ser Glu Leu5475                5480                5485Ala Val Gln val Ala Ala Lys Pro Val Glu Trp Thr Arg Asn Gly Val5490                5495                5500Pro Arg Arg Ala Gly Val Ser Ser Phe Gly Val Ser Gly Thr Asn Ala5505               5510                5515                5520His Val Val Leu Glu Glu Ala Pro Ala Ala Ala Phe Ala Pro Ala Ala5525                5530                5535Ala Arg Ser Ala Glu Leu Phe Val Leu Ser Ala Lys Ser Ala Ala Ala5540                5545                5550Leu Asp Ala Gln Ala Ala Arg Leu Ser Ala His Val Val Ala His Pro5555                5560                5565Glu Leu Gly Leu Gly Asp Leu Ala Phe Ser Leu Ala Thr Thr Arg Ser5570                5575                5580Pro Met Thr Tyr Arg Leu Ala Val Ala Ala Thr Ser Arg Glu Ala Leu5585               5590                5595                5600Ser Ala Ala Leu Asp Thr Ala Ala Gln Gly Gln Ala Pro Pro Ala Ala5605                5610                5615Ala Arg Gly His Ala Ser Thr Gly Ser Ala Pro Lys Val Val Phe Val5620                5625                5630Phe Pro Gly Gln Gly Ser Gln Trp Leu Gly Met Gly Gln Lys Leu Leu5635                5640                5645Ser Glu Glu Pro Val Phe Arg Asp Ala Leu Ser Ala Cys Asp Arg Ala5650                5655                5660Ile Gln Ala Glu Ala Gly Trp Ser Leu Leu Ala Glu Leu Ala Ala Asp5665               5670                5675                5680Glu Thr Thr Ser Gln Leu Gly Arg Ile Asp Val Val Gln Pro Ala Leu5685                5690                5695Phe Ala Ile Glu Val Ala Leu Ser Ala Leu Trp Arg Ser Trp Gly Val5700                5705                5710Glu Pro Asp Ala Val Val Gly His Ser Met Gly Glu Val Ala Ala Ala5715                5720                5725His Val Ala Gly Ala Leu Ser Leu Glu Asp Ala Val Ala Ile Ile Cys5730                5735                5740Arg Arg Ser Leu Leu Leu Arg Arg Ile Ser Gly Gln Gly Glu Met Ala5745               5750                5755                5760Val Val Glu Leu Ser Leu Ala Glu Ala Glu Ala Ala Leu Leu Gly Tyr5765                5770                5775Glu Asp Arg Leu Ser Val Ala Val Ser ASn Ser Pro Arg Ser Thr Val5780                5785                5790Leu Ala Gly Glu Pro Ala Ala Leu Ala Glu Val Leu Ala Ile Leu Ala5795                5800                5805Ala Lys Gly Val Phe Cys Arg Arg Val Lys Val Asp Val Ala Ser His5810                5815                5820Ser Pro Gln Ile Asp Pro Leu Arg Asp Glu Leu Leu Ala Ala Leu Gly5825               5830                5835                5840Glu Leu Glu Pro Arg Gln Ala Thr Val Ser Met Arg Ser Thr Val Thr5845                5850                5855Ser Thr Ile Met Ala Gly Pro Glu Leu Val Ala Ser Tyr Trp Ala Asp5860                5865                5870Asn Val Arg Gln Pro Val Arg Phe Ala Glu Ala Val Gln Ser Leu Met5875                5880                5885Glu Asp Gly His Gly Leu Phe Val Glu Met Ser Pro His Pro Ile Leu5890                5895                5900Thr Thr Ser Val Glu Glu Ile Arg Arg Ala Thr Lys Arg Glu Gly Val5905               5910                5915                5920Ala Val Gly Ser Leu Arg Arg GlY Gln Asp Glu Arg Leu Ser Met Leu             5925                5930                5935Glu Ala Leu Gly Ala Leu Trp Val His Gly Gln Ala Val Gly Trp Glu5940                5945                5950Arg Leu Phe Ser Ala Gly Gly Ala Gly Leu Arg Arg Val Pro Leu Pro5955                5960                5965Thr Tyr Pro Trp Gln Arg Glu Arg Tyr Trp Val Asp Ala Pro Thr Gly5970                5975                5980Gly Ala Ala Gly Gly Ser Arg Phe Ala His Ala Gly Ser His Pro Leu5985               5990                5995                6000Leu Gly Glu Met Gln Thr Leu Ser Thr Gln Arg Ser Thr Arg Val Trp6005                6010                6015Glu Thr Thr Leu Asp Leu Lys Arg Leu Pro Trp Leu Gly Asp His Arg6020                6025                6030Val Gln Gly Ala Val Val Phe Pro Gly Ala Ala Tyr Leu Glu Met Ala6035                6040                6045Leu Ser Ser Gly Ala Glu Ala Leu Gly Asp Gly Pro Leu Gln Val Ser6050                6055                6060Asp Val Val Leu Ala Glu Ala Leu Ala Phe Ala Asp Asp Thr Pro Ala6065               6070                6075                6080Ala Val Gln Val Met Ala Thr Glu Glu Arg Pro Gly Arg Leu Gln Phe6085                6090                6095His Val Ala Ser Arg Val Pro Gly His Gly Gly Ala Ala Phe Arg Ser6100                6105                6110His Ala Arg Gly Val Leu Arg Gln Ile Glu Arg Ala Glu Val Pro Ala6115                6120                6125Arg Leu Asp Leu Ala Ala Leu Arg Ala Arg Leu Gln Ala Ser Ala Pro6130                6135                6140Ala Ala Ala Thr Tyr Ala Ala Leu Ala Glu Met Gly Leu Glu Tyr Gly6145               6150                6155                6160Pro Ala Phe Gln Gly Leu Val Glu Leu Trp Arg Gly Glu Gly Glu Ala6165                6170                6175Leu Gly Arg Val Arg Leu Pro Glu Ala Ala Gly Ser Pro Ala Ala Cys6180                6185                6190Arg Leu His Pro Ala Leu Leu Asp Ala Cys Phe His Val Ser Ser Ala6195                6200                6205Phe Ala Asp Arg Gly Glu Ala Thr Pro Trp Val Pro Val Glu Ile Gly6210                6215                6220Ser Leu Arg Trp Phe Gln Arg Pro Ser Gly Glu Leu Trp Cys His Ala6225               6230                6235                6240Arg Ser Val Ser His Gly Lys Pro Thr Pro Asp Arg Arg Ser Thr Asp6245                6250                6255Phe Trp Val Val Asp Ser Thr Gly Ala Ile Val Ala Glu Ile Ser Gly6260                6265                6270Leu Val Ala Gln Arg Leu Ala Gly Gly Val Arg Arg Arg Glu Glu Asp6275                6280                6285Asp Trp Phe Met Glu Pro Ala Trp Glu Pro Thr Ala Val Pro Gly Ser6290                6295                6300Glu Val Met Ala Gly Arg Trp Leu Leu Ile Gly Ser Gly Gly Gly Leu6305               6310                6315                6320Gly Ala Ala Leu His Ser Ala Leu Thr Glu Ala Gly His Ser Val Val6325                6330                6335His Ala Thr Gly Arg Gly Thr Ser Ala Ala Gly Leu Gln Ala Leu Leu6340                6345                6350Thr Ala Ser Phe Asp Gly Gln Ala Pro Thr Ser Val Val His Leu Gly6355                6360                6365Ser Leu Asp Glu Arg Gly Val Leu Asp Ala Asp Ala Pro Phe Asp Ala6370                6375                6380Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Val Arg Gly Cys Asp Ser Val Leu Trp6385               6390                6395                6400Thr Val Gln Ala Val Ala Gly Ala Gly Phe Arg Asp Pro Pro Arg Leu6405                6410                6415Trp Leu Val Thr Arg Gly Ala Gln Ala Ile Gly Ala Gly Asp Val Ser6420                6425                6430Val Ala Gln Ala Pro Leu Leu Gly Leu Gly Arg Val Ile Ala Leu Glu6435                6440                6445His Ala Glu Leu Arg Cys Ala Arg Ile Asp Leu Asp Pro Ala Arg Arg6450                6455                6460Asp Gly Glu Val Asp Glu Leu Leu Ala Glu Leu Leu Ala Asp Asp Ala6465               6470                6475                6480Glu Glu Glu Val Ala Phe Arg Gly Gly Glu Arg Arg Val Ala Arg Leu6485                6490                6495Val Arg Arg Leu Pro Glu Thr Asp Cys Arg Glu Lys Ile Glu Pro Ala6500                6505                6510Glu Gly Arg Pro Phe Arg Leu Glu Ile Asp Gly Ser Gly Val Leu Asp6515                6520                6525Asp Leu Val Leu Arg Ala Thr Glu Arg Arg Pro Pro Gly Pro Gly Glu6530                6535                6540Val Glu Ile Ala Val Glu Ala Ala Gly Leu Asn Phe Leu Asp Val Met6545               6550                6555                6560Arg Ala Met Gly Ile Tyr Pro Gly Pro Gly Asp Gly Pro Val Ala Leu6565                6570                6575Gly Ala Glu Cys Ser Gly Arg Ile Val Ala Met Gly Glu Gly Val Glu6580                6585                6590Ser Leu Arg Ile Gly Gln Asp Val Val Ala Val Ala Pro Phe Ser Phe6595                6600                6605Gly Thr His Val Thr Ile Asp Ala Arg Met Leu Ala Pro Arg Pro Ala6610                6615                6620Ala Leu Thr Ala Ala Gln Ala Ala Ala Leu Pro Val Ala Phe Met Thr6625               6630                6635                6640Ala Trp Tyr Gly Leu Val His Leu Gly Arg Leu Arg Ala Gly Glu Arg6645                6650                6655Val Leu Ile His Ser Ala Thr Gly Gly Thr Gly Leu Ala Ala Val Gln6660                6665                6670Ile Ala Arg His Leu Gly Ala Glu Ile Phe Ala Thr Ala Gly Thr Pro6675                6680                6685Glu Lys Arg Ala Trp Leu Arg Glu Gln Gly Ile Ala His Val Met Asp6690                6695                6700Ser Arg Ser Leu Asp Phe Ala Glu Gln Val Leu Ala Ala Thr Lys Gly6705               6710                6715                6720Glu Gly Val Asp Val Val Leu Asn Ser Leu Ser Gly Ala Ala Ile Asp6725                6730                6735Ala Ser Leu Ser Thr Leu Val Pro Asp Gly Arg Phe Ile Glu Leu Gly6740                6745                6750Lys Thr Asp Ile Tyr Ala Asp Arg Ser Leu Gly Leu Ala His Phe Arg6755                6760                6765Lys Ser Leu Ser Tyr Ser Ala Val Asp Leu Ala Gly Leu Ala Val Arg6770                6775                6780Arg Pro Glu Arg Val Ala Ala Leu Leu Ala Glu Val Val Asp Leu Leu6785               6790                6795                6800Ala Arg Gly Ala Leu Gln Pro Leu Pro Val Glu Ile Phe Pro Leu Ser6805                6810                6815Arg Ala Ala Asp Ala Phe Arg Lys Met Ala Gln Ala Gln His Leu Gly6820                6825                6830Lys Leu Val Leu Ala Leu Glu Asp Pro Asp Val Arg Ile Arg Val Pro6835                6840                6845Gly Glu Ser Gly Val Ala Ile Arg Ala Asp Gly Ala Tyr Leu Val Thr6850                6855                6860Gly Gly Leu Gly Gly Leu Gly Leu Ser Val Ala Gly Trp Leu Ala Glu6865               6870                6875                6880Gln Gly Ala Gly His Leu Val Leu Val Gly Arg Ser Gly Ala Val Ser6885                6890                6895Ala Glu Gln Gln Thr Ala Val Ala Ala Leu Glu Ala His Gly Ala Arg6900                6905                6910Val Thr Val Ala Arg Ala Asp Val Ala Asp Arg Ala Gln Met Glu Arg6915                6920                6925Ile Leu Arg Glu Val Thr Ala Ser Gly Met Pro Leu Arg Gly Val Val6930                6935                6940His Ala Ala Gly Ile Leu Asp Asp Gly Leu Leu Met Gln Gln Thr Pro6945               6950                6955                6960Ala Arg Phe Arg Ala Val Met Ala Pro Lys Val Arg Gly Ala Leu His             6965                6970                6975Leu His Ala Leu Thr Arg Glu Ala Pro Leu Ser Phe Phe Val Leu Tyr6980                6985                6990Ala Ser Gly Ala Gly Leu Leu Gly Ser Pro Gly Gln Gly Asn Tyr Ala6995                7000                7005Ala Ala Asn Thr Phe Leu Asp Ala Leu Ala His His Arg Arg Ala Gln7010                7015                7020Gly Leu Pro Ala Leu Ser Ile Asp Trp Gly Leu Phe Ala Asp Val Gly7025               7030                7035                7040Leu Ala Ala Gly Gln Gln Asn Arg Gly Ala Arg Leu Val Thr Arg Gly7045                7050                7055Thr Arg Ser Leu Thr Pro Asp Glu Gly Leu Trp Ala Leu Glu Arg Leu7060                7065                7070Leu Asp Gly Asp Arg Thr Gln Ala G1y Val Met Pro Phe Asp Val Arg7075                7080                7085Gln Trp Val Glu Phe Tyr Pro Ala Ala Ala Ser Ser Arg Arg Leu Ser7090                7095                7100Arg Leu Met Thr Ala Arg Arg Val Ala Ser Gly Arg Leu Ala Gly Asp7105               7110                7115                7120Arg Asp Leu Leu Glu Arg Leu Ala Thr Ala Glu Ala Gly Ala Arg Ala7125                7130                7135Gly Met Leu Gln Glu Val Val Arg Ala Gln Val Ser Gln Val Leu Arg7140                7145                7150Leu Ser Glu Gly Lys Leu Asp Val Asp Ala Pro Leu Thr Ser Leu Gly7155                7160                7165Met Asp Ser Leu Met Gly Leu Glu Leu Arg Asn Arg Ile Glu Ala Val7170                7175                7180Leu Gly Ile Thr Met Pro Ala Thr Leu Leu Trp Thr Tyr Pro Thr Val7185               7190                7195                7200Ala Ala Leu Ser Ala His Leu Ala Ser His Val Val Ser Thr Gly Asp7205                7210                7215Gly Glu Ser Ala Arg Pro Pro Asp Thr Gly Ser Val Ala Pro Thr Thr7220                7225                7230His Glu Val Ala Ser Leu Asp Glu Asp Gly Leu Phe Ala Leu Ile Asp7235                7240                7245Glu Ser Leu Ala Arg Ala Gly Lys Arg7250                7255<210>6<211>3798<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>6Val Thr Asp Arg Glu Gly Gln Leu Leu Glu Arg Leu Arg Glu Val Thr1               5                  10                  15Leu Ala Leu Arg Lys Thr Leu Asn Glu Arg Asp Thr Leu Glu Leu Glu20                  25                  30Lys Thr Glu Pro Ile Ala Ile Val Gly Ile Gly Cys Arg Phe Pro Gly35                  40                  45Gly Ala Gly Thr Pro Glu Ala Phe Trp Glu Leu Leu Asp Asp Gly Arg50                  55                  60Asp Ala Ile Arg Pro Leu Glu Glu Arg Trp Ala Leu Val Gly Val Asp65                  70                  75                  80Pro Gly Asp Asp Val Pro Arg Trp Ala Gly Leu Leu Thr Glu Ala Ile85                  90                  95Asp Gly Phe Asp Ala Ala Phe Phe Gly Ile Ala Pro Arg Glu Ala Arg100                 105                 110Ser Leu Asp Pro Gln His Arg Leu Leu Leu Glu Val Ala Trp Glu Gly115                 120                 125Phe Glu Asp Ala Gly Ile Pro Pro Arg Ser Leu Val Gly Ser Arg Thr130                 135                 140Gly Val Phe Val Gly Val Cys Ala Thr Glu Tyr Leu His Ala Ala Val145                 150                 155                 160Ala His Gln Pro Arg Glu Glu Arg Asp Ala Tyr Ser Thr Thr Gly Asn165                 170                 175Met Leu Ser Ile Ala Ala Gly Arg Leu Ser Tyr Thr Leu Gly Leu Gln180                 185                 190Gly Pro Cys Leu Thr Val Asp Thr Ala Cys Ser Ser Ser Leu Val Ala195                 200                 205Ile His Leu Ala Cys Arg Ser Leu Arg Ala Arg Glu Ser Asp Leu Ala210                 215                 220Leu Ala Gly Gly Val Asn Met Leu Leu Ser Pro Asp Thr Met Arg Ala225                 230                 235                 240Leu Ala Arg Thr Gln Ala Leu Ser Pro Asn Gly Arg Cys Gln Thr Phe245                 250                 255Asp Ala Ser Ala Asn Gly Phe Val Arg Gly Glu Gly Cys Gly Leu Ile260                 265                 270Val Leu Lys Arg Leu Ser Asp Ala Arg Arg Asp Gly Asp Arg Ile Trp275                 280                 285Ala Leu Ile Arg Gly Ser Ala Ile Asn Gln Asp Gly Arg Ser Thr Gly290                 295                 300Leu Thr Ala Pro Asn Val Leu Ala Gln Gly Ala Leu Leu Arg Glu Ala305                 310                 315                 320Leu Arg Asn Ala Gly Val Glu Ala Glu Ala Ile Gly Tyr Ile Glu Thr325                 330                 335His Gly Ala Ala Thr Ser Leu Gly Asp Pro Ile Glu Ile Glu Ala Leu340                 345                 350Arg Ala Val Val Gly Pro Ala Arg Ala Asp Gly Ala Arg Cys Val Leu      355                 360                 365Gly Ala Val Lys Thr Asn Leu Gly His Leu Glu Gly Ala Ala Gly Val370                 375                 380Ala Gly Leu Ile Lys Ala Thr Leu Ser Leu His His Glu Arg Ile Pro385                 390                 395                 400Arg Asn Leu Asn Phe Arg Thr Leu Asn Pro Arg Ile Arg Ile Glu Gly405                 410                 415Thr Ala Leu Ala Leu Ala Thr Glu Pro Val Pro Trp Pro Arg Thr Gly420                 425                 430Arg Thr Arg Phe Ala Gly Val Ser Ser Phe Gly Met Ser Gly Thr Asn435                 440                 445Ala His Val Val Leu Glu Glu Ala Pro Ala Val Glu Pro Glu Ala Ala450                 455                 460Ala Pro Glu Arg Ala Ala Glu Leu Phe Val Leu Ser Ala Lys Ser Ala465                 470                 475                 480Ala Ala Leu Asp Ala Gln Ala Ala Arg Leu Arg Asp His Leu Glu Lys485                 490                 495His Val Glu Leu Gly Leu Gly Asp Val Ala Phe Ser Leu Ala Thr Thr500                 505                 510Arg Ser Ala Met Glu His Arg Leu Ala Val Ala Ala Ser Ser Arg Glu515                 520                 525Ala Leu Arg Gly Ala Leu Ser Ala Ala Ala Gln Gly His Thr Pro Pro530                 535                 540Gly Ala Val Arg Gly Arg Ala Ser Gly Gly Ser Ala Pro Lys Val Val545                 550                 555                 560Phe Val Phe Pro Gly Gln Gly Ser Gln Trp Val Gly Met Gly Arg Lys565                 570                 575Leu Met Ala Glu Glu Pro Val Phe Arg Ala Ala Leu Glu Gly Cys Asp580                 585                 590Arg Ala Ile Glu Ala Glu Ala Gly Trp Ser Leu Leu Gly Glu Leu Ser595                 600                 605Ala Asp Glu Ala Ala Ser Gln Leu Gly Arg Ile Asp Val Val Gln Pro610                 615                 620Val Leu Phe Ala Met Glu Val Ala Leu Ser Ala Leu Trp Arg Ser Trp625                 630                 635                 640Gly Val Glu Pro Glu Ala Val Val Gly His Ser Met Gly Glu Val Ala645                 650                 655Ala Ala His Val Ala Gly Ala Leu Ser Leu Glu Asp Ala Val Ala Ile660                 665                 670Ile Cys Arg Arg Ser Arg Leu Leu Arg Arg Ile Ser Gly Gln Gly Glu675                 680                 685Met Ala Leu Val Glu Leu Ser Leu Glu Glu Ala Glu Ala Ala Leu Arg690                 695                 700Gly His Glu Gly Arg Leu Ser Val Ala Val Ser Asn Ser Pro Arg Ser705                 710                 715                 720Thr Val Leu Ala Gly Glu Pro Ala Ala Leu Ser Glu Val Leu Ala Ala725                 730                 735Leu Thr Ala Lys Gly Val Phe Trp Arg Gln Val Lys Val Asp Val Ala740                 745                 750Ser His Ser Pro Gln Val Asp Pro Leu Arg Glu Glu Leu Ile Ala Ala755                 760                 765Leu Gly Ala Ile Arg Pro Arg Ala Ala Ala Val Pro Met Arg Ser Thr770                 775                 780Val Thr Gly Gly Val Ile Ala Gly Pro Glu Leu Gly Ala Ser Tyr Trp785                 790                 795                 800Ala Asp Asn Leu Arg Gln Pro Val Arg Phe Ala Ala Ala Ala Gln Ala805                 810                 815Leu Leu Glu Gly Gly Pro Ala Leu Phe Ile Glu Met Ser Pro His Pro820                 825                 830Ile Leu Val Pro Pro Leu Asp Glu Ile Gln Thr Ala Ala Glu Gln Gly835                 840                 845Gly Ala Ala Val Gly Ser Leu Arg Arg Gly Gln Asp Glu Arg Ala Thr850                 855                 860Leu Leu Glu Ala Leu Gly Thr Leu Trp Ala Ser Gly Tyr Pro Val Ser865                 870                 875                 880Trp Ala Arg Leu Phe Pro Ala Gly Gly Arg Arg Val Pro Leu Pro Thr885                 890                 895Tyr Pro Trp Gln His Glu Arg Cys Trp Ile Glu Val Glu Pro Asp Ala900                 905                 910Arg Arg Leu Ala Ala Ala Asp Pro Thr Lys Asp Trp Phe Tyr Arg Thr915                 920                 925Asp Trp Pro Glu Val Pro Arg Ala Ala Pro Lys Ser Glu Thr Ala His930                 935                 940Gly Ser Trp Leu Leu Leu Ala Asp Arg Gly Gly Val Gly Glu Ala Val945                 950                 955                 960Ala Ala Ala Leu Ser Thr Arg Gly Leu Ser Cys Thr Val Leu His Ala965                 970                 975Ser Ala Asp Ala Ser Thr Val Ala Glu Gln Val Ser Glu Ala Ala Ser980                 985                 990Arg Arg Asn Asp Trp Gln Gly Val Leu Tyr Leu Trp Gly Leu Asp Ala995                1000                1005Val Val Asp Ala Gly Ala Ser Ala Asp Glu Val Ser Glu Ala Thr Arg1010                1015                1020Arg Ala Thr Ala Pro Val Leu Gly Leu Val Arg Phe Leu Ser Ala Ala1025               1030                1035                1040Pro His Pro Pro Arg Phe Trp Val Val Thr Arg Gly Ala Cys Thr Val1045                1050                1055Gly Gly Glu Pro Glu Ala Ser Leu Cys Gln Ala Ala Leu Trp Gly Leu1060                1065                1070Ala Arg Val Ala Ala Leu Glu His Pro Ala Ala Trp Gly Gly Leu Val1075                1080                1085Asp Leu Asp Pro Gln Lys Ser Pro Thr Glu Ile Glu Pro Leu Val Ala1090                1095                1100Glu Leu Leu Ser Pro Asp Ala Glu Asp Gln Leu Ala Phe Arg Ser Gly1105               1110                1115                1120Arg Arg His Ala Ala Arg Leu Val Ala Ala Pro Pro Glu Gly Asp Val1125                1130                1135Ala Pro Ile Ser Leu Ser Ala Glu Gly Ser Tyr Leu Val Thr Gly Gly1140                1145                1150Leu Gly Gly Leu Gly Leu Leu Val Ala Arg Trp Leu Val Glu Arg Gly1155                1160                1165Ala Arg His Leu Val Leu Thr Ser Arg His Gly Leu Pro Glu Arg Gln1170                1175                1180Ala Ser Gly Gly Glu Gln Pro Pro Glu Ala Arg Ala Arg Ile Ala Ala1185               1190                1195                1200Val Glu Gly Leu Glu Ala Gln Gly Ala Arg Val Thr Val Ala Ala Val1205                1210                1215Asp Val Ala Glu Ala Asp Pro Met Thr Ala Leu Leu Ala Ala Ile Glu1220                1225                1230Pro Pro Leu Arg Gly Val Val His Ala Ala Gly Val Phe Pro Val Arg1235                1240                1245His Leu Ala Glu Thr Asp Glu Ala Leu Leu Glu Ser Val Leu Arg Pro1250                1255                1260Lys Val Ala Gly Ser Trp Leu Leu His Arg Leu Leu Arg Asp Arg Pro1265               1270                1275                1280Leu Asp Leu Phe Val Leu Phe Ser Ser Gly Ala Ala Val Trp Gly Gly1285                1290                1295Lys Gly Gln Gly Ala Tyr Ala Ala Ala Asn Ala Phe Leu Asp Gly Leu1300                1305                1310Ala His His Arg Arg Ala His Ser Leu Pro Ala Leu Ser Leu Ala Trp1315                1320                1325Gly Leu Trp Ala Glu Gly Gly Met Val Asp Ala Lys Ala His Ala Arg1330                1335                1340Leu Ser Asp Ile Gly Val Leu Pro Met Ala Thr Gly Pro Ala Leu Ser1345               1350                1355                1360Ala Leu Glu Arg Leu Val Asn Thr Ser Ala Val Gln Arg Ser Val Thr1365                1370                1375Arg Met Asp Trp Ala Arg Phe Ala Pro Val Tyr Ala Ala Arg Gly Arg1380                1385                1390Arg Asn Leu Leu Ser Ala Leu Val Ala Glu Asp Glu Arg Ala Ala Ser     1395                1400                1405Pro Pro Val Pro Thr Ala Asn Arg Ile Trp Arg Gly Leu Ser Val Ala1410                1415                1420Glu Ser Arg Ser Ala Leu Tyr Glu Leu Val Arg Gly Ile Val Ala Arg1425               1430                1435                1440Val Leu Gly Phe Ser Asp Pro Gly Ala Leu Asp Val Gly Arg Gly Phe1445                 1450                1455Ala Glu Gln Gly Leu Asp Ser Leu Met Ala Leu Glu Ile Arg Asn Arg1460                1465                1470Leu Gln Arg Glu Leu Gly Glu Arg Leu Ser Ala Thr Leu Ala Phe Asp1475                1480                1485His Pro Thr Val Glu Arg Leu Val Ala His Leu Leu Thr Asp Val Leu1490                1495                1500Lys Leu Glu Asp Arg Ser Asp Thr Arg His Ile Arg Ser Val Ala Ala1505               1510                1515                1520Asp Asp Asp Ile Ala Ile Val Gly Ala Ala Cys Arg Phe Pro Gly Gly1525                1530                1535Asp Glu Gly Leu Glu Thr Tyr Trp Arg His Leu Ala Glu Gly Met Val1540                1545                1550Val Ser Thr Glu Val Pro Ala Asp Arg Trp Arg Ala Ala Asp Trp Tyr1555                1560                1565Asp Pro Asp Pro Glu Val Pro Gly Arg Thr Tyr Val Ala Lys Gly Ala1570                1575                1580Phe Leu Arg Asp Val Arg Ser Leu Asp Ala Ala Phe Phe Ala Ile Ser1585               1590                1595                1600Pro Arg Glu Ala Met Ser Leu Asp Pro Gln Gln Arg Leu Leu Leu Glu1605                1610                1615Val Ser Trp Glu Ala Ile Glu Arg Ala Gly Gln Asp Pro Met Ala Leu1620                1625                1630Arg Glu Ser Ala Thr Gly Val Phe Val Gly Met Ile Gly Ser Glu His1635                1640                1645Ala Glu Arg Val Gln Gly Leu Asp Asp Asp Ala Ala Leu Leu Tyr Gly1650                1655                1660Thr Thr Gly Asn Leu Leu Ser Val Ala Ala Gly Arg Leu Ser Phe Phe1665               1670                1675                1680Leu Gly Leu His Gly Pro Thr Met Thr Val Asp Thr Ala Cys Ser Ser1685                1690                1695Ser Leu Val Ala Leu His Leu Ala Cys Gln Ser Leu Arg Leu Gly Glu1700                1705                1710Cys Asp Gln Ala Leu Ala Gly Gly Ser Ser Val Leu Leu Ser Pro Arg1715                1720                1725Ser Phe Val Ala Ala Ser Arg Met Arg Leu Leu Ser Pro Asp Gly Arg1730                1735                1740Cys Lys Thr Phe Ser Ala Ala Ala Asp Gly Phe Ala Arg Ala Glu Gly1745               1750                1755                1760Cys Ala Val Val Val Leu Lys Arg Leu Arg Asp Ala Gln Arg Asp Arg1765                1770                1775Asp Pro Ile Leu Ala Val Val Arg Ser Thr Ala Ile Asn His Asp Gly1780                1785                1790Pro Ser Ser Gly Leu Thr Val Pro Ser Gly Pro Ala Gln Gln Ala Leu1795                1800                1805Leu Arg Gln Ala Leu Ala Gln Ala Gly Val Ala Pro Ala Glu Val Asp1810                1815                1820Phe Val Glu Cys His Gly Thr Gly Thr Ala Leu Gly Asp Pro Ile Glu1825               1830                1835                1840Val Gln Ala Leu Gly Ala Val Tyr Gly Arg Gly Arg Pro Ala Glu Arg1845                1850                1855Pro Leu Trp Leu Gly Ala Val Lys Ala Asn Leu Gly His Leu Glu Ala1860                1865                1870Ala Ala Gly Leu Ala Gly Val Leu Lys Val Leu Leu Ala Leu Glu His1875                1880                1885Glu Gln Ile Pro Ala Gln Pro Glu Leu Asp Glu Leu Asn Pro His Ile1890                1895                1900Pro Trp Ala Glu Leu Pro Val Ala Val Val Arg Arg Ala Val Pro Trp1905               1910                1915                1920Pro Arg Gly Ala Arg Pro Arg Arg Ala Gly Val Ser Ala Phe Gly Leu1925                1930                1935Ser Gly Thr Asn Ala His Val Val Leu Glu Glu Ala Pro Ala Val Glu1940                1945                1950Pro Val Ala Ala Ala Pro Glu Arg Ala Ala Glu Leu Phe Val Leu Ser1955                1960                1965Ala Lys Ser Ala Ala Ala Leu Asp Ala Gln Ala Ala Arg Leu Arg Asp1970                1975                1980His Leu Glu Lys His Val Glu Leu Gly Leu Gly Asp Val Ala Phe Ser1985               1990                1995                2000Leu Ala Thr Thr Arg Ser Ala Met Glu His Arg Leu Ala Val Ala Ala2005                2010                2015Ser Ser Arg Glu Ala Leu Arg Gly Ala Leu Ser Ala Ala Ala Gln Gly2020                2025                2030His Thr Pro Pro Gly Ala Val Arg Gly Arg Ala Ser Gly Gly Ser Ala2035                2040                2045Pro Lys Val Val Phe Val Phe Pro Gly Gln Gly Ser Gln Trp Val Gly2050                2055                2060Met Gly Arg Lys Leu Met Ala Glu Glu Pro Val Phe Arg Ala Ala Leu2065               2070                2075                2080Glu Gly Cys Asp Arg Ala Ile Glu Ala Glu Ala Gly Trp Ser Leu Leu2085                2090                2095Gly Glu Leu Ser Ala Asp Glu Ala Ala Ser Gln Leu Gly Arg Ile Asp2100                2105                2110Val Val Gln Pro Val Leu Phe Ala Met Glu Val Ala Leu Ser Ala Leu2115                2120                2125Trp Arg Ser Trp Gly Val Glu Pro Glu Ala Val Val Gly His Ser Met2130                2135                2140Gly Glu Val Ala Ala Ala His Val Ala Gly Ala Leu Ser Leu Glu Asp2145               2150                2155                2160Ala Val Ala Ile Ile Cys Arg Arg Ser Arg Leu Leu Arg Arg Ile Ser2165                2170                2175Gly Gln Gly Glu Met Ala Leu Val Glu Leu Ser Leu Glu Glu Ala Glu2180                2185                2190Ala Ala Leu Arg Gly His Glu Gly Arg Leu Ser Val Ala Val Ser Asn2195                2200                2205Ser Pro Arg Ser Thr Val Leu Ala Gly Glu Pro Ala Ala Leu Ser Glu2210                2215                2220Val Leu Ala Ala Leu Thr Ala Lys Gly Val Phe Trp Arg Gln Val Lys2225               2230                2235                2240Val Asp Val Ala Ser His Ser Pro Gln Val Asp Pro Leu Arg Glu Glu2245                2250                2255Leu Ile Ala Ala Leu Gly Ala Ile Arg Pro Arg Ala Ala Ala Val Pro2260                2265                2270Met Arg Ser Thr Val Thr Gly Gly Val Ile Ala Gly Pro Glu Leu Gly2275                2280                2285Ala Ser Tyr Trp Ala Asp Asn Leu Arg Gln Pro Val Arg Phe Ala Ala2290                2295                2300Ala Ala Gln Ala Leu Leu Glu Gly Gly Pro Ala Leu Phe Ile Glu Met2305               2310                2315                2320Ser Pro His Pro Ile Leu Val Pro Pro Leu Asp Glu Ile Gln Thr Ala2325                2330                2335Ala Glu Gln Gly Gly Ala Ala Val Gly Ser Leu Arg Arg Gly Gln Asp2340                2345                2350Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Ala Leu Gly Thr Leu Trp Ala Ser Gly2355                2360                2365Tyr Pro Val Ser Trp Ala Arg Leu Phe Pro Ala Gly Gly Arg Arg Val2370                2375                2380Pro Leu Pro Thr Tyr Pro Trp Gln His Glu Arg Tyr Trp Ile Glu Asp2385               2390                2395                2400Ser Val His Gly Ser Lys Pro Ser Leu Arg Leu Arg Gln Leu Arg Asn2405                2410                2415Gly Ala Thr Asp His Pro Leu Leu Gly Ala Pro Leu Leu Val Ser Ala2420                2425                2430Arg Pro Gly Ala His Leu Trp Glu Gln Ala Leu Ser Asp Glu Arg Leu     2435                2440                2445Ser Tyr Leu Ser Glu His Arg Val His Gly Glu Ala Val Leu Pro Ser2450                2455                2460Ala Ala Tyr Val Glu Met Ala Leu Ala Ala Gly Val Asp Leu Tyr Gly2465               2470                2475                2480Thr Ala Thr Leu Val Leu Glu Gln Leu Ala Leu Glu Arg Ala Leu Ala2485                2490                2495Val Pro Ser Glu Gly Gly Arg Ile Val Gln Val Ala Leu Ser Glu Glu2500                2505                2510Gly Pro Gly Arg Ala Ser Phe Gln Val Ser Ser Arg Glu Glu Ala Gly2515                2520                2525Arg Ser Trp Val Arg His Ala Thr Gly His Val Cys Ser Gly Gln Ser2530                 2535               2540Ser Ala Val Gly Ala Leu Lys Glu Ala Pro Trp Glu Ile Gln Arg Arg2545               2550                2555                2560Cys Pro Ser Val Leu Ser Ser Glu Ala Leu Tyr Pro Leu Leu Asn Glu2565                2570                2575His Ala Leu Asp Tyr Gly Pro Cys Phe Gln Gly Val Glu Gln Val Trp2580                2585                2590Leu Gly Thr Gly Glu Val Leu Gly Arg Val Arg Leu Pro Gly Asp Met2595                2600                2605Ala Ser Ser Ser Gly Ala Tyr Arg Ile His Pro Ala Leu Leu Asp Ala2610                2615                2620Cys Phe Gln Val Leu Thr Ala Leu Leu Thr Thr Pro Glu Ser Ile Glu2625               2630                2635                2640Ile Arg Arg Arg Leu Thr Asp Leu His Glu Pro Asp Leu Pro Arg Ser2645                2650                2655Arg Ala Pro Val Asn Gln Ala Val Ser Asp Thr Trp Leu Trp Asp Ala2660                2665                2670Ala Leu Asp Gly Gly Arg Arg Gln Ser Ala Ser Val Pro Val Asp Leu2675                2680                2685Val Leu Gly Ser Phe His Ala Lys Trp Glu Val Met Glu Arg Leu Ala2690                2695                2700Gln Ala Tyr Ile Ile Gly Thr Leu Arg Ile Trp Asn Val Phe Cys Ala2705               2710                2715                2720Ala Gly Glu Arg His Thr Ile Asp Glu Leu Leu Val Arg Leu Gln Ile2725                2730                2735Ser Val Val Tyr Arg Lys Val Ile Lys Arg Trp Met Glu His Leu Val2740                2745                2750Ala Ile Gly Ile Leu Val Gly Asp Gly Glu His Phe Val Ser Ser Gln2755                2760                2765Pro Leu Pro Glu Pro Asp Leu Ala Ala Val Leu Glu Glu Ala Gly Arg2770                2775                2780Val Phe Ala Asp Leu Pro Val Leu Phe Glu Trp Cys Lys Phe Ala Gly2785               2790                2795                2800Glu Arg Leu Ala Asp Val Leu Thr Gly Lys Thr Leu Ala Leu Glu Ile2805                2810                2815Leu Phe Pro Gly Gly Ser Phe Asp Met Ala Glu Arg Ile Tyr Arg Asp2820                2825                2830Ser Pro Ile Ala Arg Tyr Ser Asn Gly Ile Val Arg Gly Val Val Glu2835                2840                2845Ser Ala Ala Arg Val Val Ala Pro Ser Gly Met Phe Ser Ile Leu Glu2850                2855                2860Ile Gly Ala Gly Thr Gly Ala Thr Thr Ala Ala Val Leu Pro Val Leu2865               2870                2875                2880Leu Pro Asp Arg Thr Glu Tyr His Phe Thr Asp Val Ser Pro Leu Phe2885                2890                2895Leu Ala Arg Ala Glu Gln Arg Phe Arg Asp Tyr Pro Phe Leu Lys Tyr2900                2905                2910Gly Ile Leu Asp Val Asp Gln Glu Pro Ala Gly Gln Gly Tyr Ala His2915                2920                2925Gln Arg Phe Asp Val Ile Val Ala Ala Asn Val Ile His Ala Thr Arg2930                2935                2940Asp Ile Arg Ala Thr Ala Lys Arg Leu Leu Ser Leu Leu Ala Pro Gly2945               2950                2955                2960Gly Leu Leu Val Leu Val Glu Gly Thr Gly His Pro Ile Trp Phe Asp2965                2970                2975Ile Thr Thr Gly Leu Ile Glu Gly Trp Gln Lys Tyr Glu Asp Asp Leu2980                2985                2990Arg Ile Asp His Pro Leu Leu Pro Ala Arg Thr Trp Cys Asp Val Leu2995                3000                3005Arg Arg Val Gly Phe Ala Asp Ala Val Ser Leu Pro Gly Asp Gly Ser3010                3015                3020Pro Ala Gly Ile Leu Gly Gln His Val Ile Leu Ser Arg Ala Pro Gly3025               3030                3035                3040Ile Ala Gly Ala Ala Cys Asp Ser Ser Gly Glu Ser Ala Thr Glu Ser3045                3050                3055Pro Ala Ala Arg Ala Val Arg Gln Glu Trp Ala Asp Gly Ser Ala Asp3060                3065                3070Val Val His Arg Met Ala Leu Glu Arg Met Tyr Phe His Arg Arg Pro3075                3080                3085Gly Arg Gln Val Trp Val His Gly Arg Leu Arg Thr Gly Gly Gly Ala3090                3095                3100Phe Thr Lys Ala Leu Ala Gly Asp Leu Leu Leu Phe Glu Asp Thr Gly3105               3110                3115                3120Gln Val Val Ala Glu Val Gln Gly Leu Arg Leu Pro Gln Leu Glu Ala3125                3130                3135Ser Ala Phe Ala Pro Arg Asp Pro Arg Glu Glu Trp Leu Tyr Ala Leu3140                3145                3150Glu Trp Gln Arg Lys Asp Pro Ile Pro Glu Ala Pro Ala Ala Ala Ser3155                3160                3165Ser Ser Ser Ala Gly Ala Trp Leu Val Leu Met Asp Gln Gly Gly Thr3170                3175                3180Gly Ala Ala Leu Val Ser Leu Leu Glu Gly Arg Gly Glu Ala Cys Val3185               3190                3195                3200Arg Val Ile Ala Gly Thr Ala Tyr Ala Cys Leu Ala Pro Gly Leu Tyr3205                3210                3215Gln Val Asp Pro Ala Gln Pro Asp Gly Phe His Thr Leu Leu Arg Asp3220                3225                3230Ala Phe Gly Glu Asp Arg Ile Cys Arg Ala Val Val His Met Trp Ser3235                3240                3245Leu Asp Ala Thr Ala Ala Gly Glu Arg Ala Thr Ala Glu Ser Leu Gln3250                3255                3260Ala Asp Gln Leu Leu Gly Ser Leu Ser Ala Leu Ser Leu Val Gln Ala3265               3270                3275                3280Leu Val Arg Arg Arg Trp Arg Asn Met Pro Arg Leu Trp Leu Leu Thr3285                3290                3295Arg Ala Val His Ala Val Gly Ala Glu Asp Ala Ala Ala Ser Val Ala3300                3305                3310Gln Ala Pro Val Trp Gly Leu Gly Arg Thr Leu Ala Leu Glu His Pro3315                3320                3325Glu Leu Arg Cys Thr Leu Val Asp Val Asn Pro Ala Pro Ser Pro Glu3330                3335                3340Asp Ala Ala Ala Leu Ala Val Glu Leu Gly Ala Ser Asp Arg Glu Asp3345               3350                3355                3360Gln Val Ala Leu Arg Ser Asp Gly Arg Tyr Val Ala Arg Leu Val Arg3365                3370                3375Ser Ser Phe Ser Gly Lys Pro Ala Thr Asp Cys Gly Ile Arg Ala Asp3380                3385                3390Gly Ser Tyr Val Ile Thr Asp Gly Met Gly Arg Val Gly Leu Ser Val3395                3400                3405Ala Gln Trp Met Val Met Gln Gly Ala Arg His Val Val Leu Val Asp3410                3415                3420Arg Gly Gly Ala Ser Glu Ala Ser Arg Asp Ala Leu Arg Ser Met Ala3425               3430                3435                3440Glu Ala Gly Ala Glu Val Gln Ile Val Glu Ala Asp Val Ala Arg Arg3445                3450                3455Asp Asp Val Ala Arg Leu Leu Ser Lys Ile Glu Pro Ser Met Pro Pro3460                3465                3470Leu Arg Gly Ile Val Tyr Val Asp Gly Thr Phe Gln Gly Asp Ser Ser     3475                3480                3485Met Leu Glu Leu Asp Ala Arg Arg Phe Lys Glu Trp Met Tyr Pro Lys3490                3495                3500Val Leu Gly Ala Trp Asn Leu His Ala Leu Thr Arg Asp Arg Ser Leu3505               3510                3515                3520Asp Phe Phe Val Leu Tyr Ser Ser Gly Thr Ser Leu Leu Gly Leu Pro3525                3530                3535Gly Gln Gly Ser Arg Ala Ala Gly Asp Ala Phe Leu Asp Ala Ile Ala3540                3545                3550His His Arg Cys Lys Val Gly Leu Thr Ala Met Ser Ile Asn Trp Gly3555                3560                3565Leu Leu Ser Glu Ala Ser Ser Pro Ala Thr Pro Asn Asp Gly Gly Ala3570                3575                3580Arg Leu Glu Tyr Arg Gly Met Glu Gly Leu Thr Leu Glu Gln Gly Ala3585               3590                3595                3600Ala Ala Leu Gly Arg Leu Leu Ala Arg Pro Arg Ala Gln Val Gly Val3605                3610                3615Met Arg Leu Asn Leu Arg Gln Trp Leu Glu Phe Tyr Pro Asn Ala Ala3620                3625                3630Arg Leu Ala Leu Trp Ala Glu Leu Leu Lys Glu Arg Asp Arg Ala Asp3635                3640                3645Arg Gly Ala Ser Asn Ala Ser Asn Leu Arg Glu Ala Leu Gln Ser Ala3650                3655                3660Arg Pro Glu Asp Arg Gln Leu Ile Leu Glu Lys His Leu Ser Glu Leu3665               3670                3675                3680Leu Gly Arg Gly Leu Arg Leu Pro Pro Glu Arg Ile Glu Arg His Val3685                3690                3695Pro Phe Ser Asn Leu Gly Met Asp Ser Leu Ile Gly Leu Glu Leu Arg3700                3705                3710Asn Arg Ile Glu Ala Ala Leu Gly Ile Thr Val Pro Ala Thr Leu Leu3715                3720                3725Trp Thr Tyr Pro Asn Val Ala Ala Leu Ser Gly Ser Leu Leu Asp Ile3730                3735                3740Leu Phe Pro Asn Ala Gly Ala Thr His Ala Pro Ala Thr Glu Arg Glu3745               3750                3755                3760Lys Ser Phe Glu Asn Asp Ala Ala Asp Leu Glu Ala Leu Arg Gly Met3765                3770                3775Thr Asp Glu Gln Lys Asp Ala Leu Leu Ala Glu Lys Leu Ala Gln Leu3780                3785                3790Ala Gln Ile Val Gly Glu3795<210>7<211>2439<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>7Met Ala Thr Thr Asn Ala Gly Lys Leu Glu His Ala Leu Leu Leu Met1               5                  10                  15Asp Lys Leu Ala Lys Lys Asn Ala Ser Leu Glu Gln Glu Arg Thr Glu20                  25                  30Pro Ile Ala Ile Val Gly Ile Gly Cys Arg Phe Pro Gly Gly Ala Asp35                  40                  45Thr Pro Glu Ala Phe Trp Glu Leu Leu Asp Ser Gly Arg Asp Ala Val50                  55                  60Gln Pro Leu Asp Arg Arg Trp Ala Leu Val Gly Val His Pro Ser Glu65                  70                  75                  80Glu Val Pro Arg Trp Ala Gly Leu Leu Thr Glu Ala Val Asp Gly Phe85                  90                  95Asp Ala Ala Phe Phe Gly Thr Ser Pro Arg Glu Ala Arg Ser Leu Asp100                 105                 110Pro Gln Gln Arg Leu Leu Leu Glu Val Thr Trp Glu Gly Leu Glu Asp115                 120                 125Ala Gly Ile Ala Pro Gln Ser Leu Asp Gly Ser Arg Thr Gly Val Phe130                 135                 140Leu Gly Ala Cys Ser Ser Asp Tyr Ser His Thr Val Ala Gln Gln Arg145                 150                 155                 160Arg Glu Glu Gln Asp Ala Tyr Asp Ile Thr Gly Asn Thr Leu Ser Val165                 170                 175Ala Ala Gly Arg Leu Ser Tyr Thr Leu Gly Leu Gln Gly Pro Cys Leu180                 185                 190Thr Val Asp Thr Ala Cys Ser Ser Ser Leu Val Ala Ile His Leu Ala195                 200                 205Cys Arg Ser Leu Arg Ala Arg Glu Ser Asp Leu Ala Leu Ala Gly Gly210                 215                 220Val Asn Met Leu Leu Ser Ser Lys Thr Met Ile Met Leu Gly Arg Ile225                 230                 235                 240Gln Ala Leu Ser Pro Asp Gly His Cys Arg Thr Phe Asp Ala Ser Ala245                 250                 255Asn Gly Phe Val Arg Gly Glu Gly Cys Gly Met Val Val Leu Lys Arg260                 265                 270Leu Ser Asp Ala Gln Arg His Gly Asp Arg Ile Trp Ala Leu Ile Arg275                 280                 285Gly Ser Ala Met Asn Gln Asp Gly Arg Ser Thr Gly Leu Met Ala Pro290                 295                 300Asn Val Leu Ala Gln Glu Ala Leu Leu Arg Glu Ala Leu Gln Ser Ala305                 310                 315                 320Arg Val Asp Ala Gly Ala Ile Gly Tyr Val Glu Thr His Gly Thr Gly              325                 330                 335Thr Ser Leu Gly Asp Pro Ile Glu Val Glu Ala Leu Arg Ala Val Leu340                 345                 350Gly Pro Ala Arg Ala Asp Gly Ser Arg Cys Val Leu Gly Ala Val Lys355                 360                 365Thr Asn Leu Gly His Leu Glu Gly Ala Ala Gly Val Ala Gly Leu Ile370                 375                 380Lys Ala Ala Leu Ala Leu His His Glu Leu Ile Pro Arg Asn Leu His385                 390                 395                 400Phe His Thr Leu Asn Pro Arg Ile Arg Ile Glu Gly Thr Ala Leu Ala405                 410                 415Leu Ala Thr Glu Pro Val Pro Trp Pro Arg Ala Gly Arg Pro Arg Phe420                 425                 430Ala Gly Val Ser Ala Phe Gly Leu Ser Gly Thr Asn Val His Val Val435                 440                 445Leu Glu Glu Ala Pro Ala Thr Val Leu Ala Pro Ala Thr Pro Gly Arg450                 455                 460Ser Ala Glu Leu Leu Val Leu Ser Ala Lys Ser Ala Ala Ala Leu Asp465                 470                 475                 480Ala Gln Ala Ala Arg Leu Ser Ala His Ile Ala Ala Tyr Pro Glu Gln485                 490                 495Gly Leu Gly Asp Val Ala Phe Ser Leu Val Ser Thr Arg Ser Pro Met500                 505                 510Glu His Arg Leu Ala Val Ala Ala Thr Ser Arg Glu Ala Leu Arg Ser515                 520                 525Ala Leu Glu Val Ala Ala Gln Gly Gln Thr Pro Ala Gly Ala Ala Arg530                 535                 540Gly Arg Ala Ala Ser Ser Pro Gly Lys Leu Ala Phe Leu Phe Ala Gly545                 550                 555                 560Gln Gly Ala Gln Val Pro Gly Met Gly Arg Gly Leu Trp Glu Ala Trp565                 570                 575Pro Ala Phe Arg Glu Thr Phe Asp Arg Cys Val Thr Leu Phe Asp Arg580                 585                 590Glu Leu His Gln Pro Leu Cys Glu Val Met Trp Ala Glu Pro Gly Ser595                 600                 605Ser Arg Ser Ser Leu Leu Asp Gln Thr Ala Phe Thr Gln Pro Ala Leu610                615                  620Phe Ala Leu Glu Tyr Ala Leu Ala Ala Leu Phe Arg Ser Trp Gly Val625                 630                 635                 640Glu Pro Glu Leu Val Ala Gly His Ser Leu Gly Glu Leu Val Ala Ala645                 650                 655Cys Val Ala Gly Val Phe Ser Leu Glu Asp Ala Val Arg Leu Val Val660                 665                 670Ala Arg Gly Arg Leu Met Gln Ala Leu Pro Ala Gly Gly Ala Met Val675                 680                 685Ser Ile Ala Ala Pro Glu Ala Asp Val Ala Ala Ala Val Ala Pro His690                 695                 700Ala Ala Leu Val Ser Ile Ala Ala Val Asn Gly Pro Glu Gln Val Val705                 710                 715                 720Ile Ala Gly Ala Glu Lys Phe Val Gln Gln Ile Ala Ala Ala Phe Ala725                 730                 735Ala Arg Gly Ala Arg Thr Lys Pro Leu His Val Ser His Ala Phe His740                 745                 750Ser Pro Leu Met Asp Pro Met Leu Glu Ala Phe Arg Arg Val Thr Glu755                 760                 765Ser Val Thr Tyr Arg Arg Pro Ser Ile Ala Leu Val Ser Asn Leu Ser770                 775                 780Gly Lys Pro Cys Thr Asp Glu Val Ser Ala Pro Gly Tyr Trp Val Arg785                 790                 795                 800His Ala Arg Glu Ala Val Arg Phe Ala Asp Gly Val Lys Ala Leu His805                 810                 815Ala Ala Gly Ala Gly Leu Phe Val Glu Val Gly Pro Lys Pro Thr Leu820                 825                 830Leu Gly Leu Val Pro Ala Cys Leu Pro Asp Ala Arg Pro Val Leu Leu835                 840                 845Pro Ala Ser Arg Ala Gly Arg Asp Glu Ala Ala Ser Ala Leu Glu Ala850                 855                 860Leu Gly Gly Phe Trp Val Val Gly Gly Ser Val Thr Trp Ser Gly Val865                 870                 875                 880Phe Pro Ser Gly Gly Arg Arg Val Pro Leu Pro Thr Tyr Pro Trp Gln885                 890                 895Arg Glu Arg Tyr Trp Ile Glu Ala Pro Val Asp Arg Glu Ala Asp Gly900                 905                 910Thr Gly Arg Ala Arg Ala Gly Gly His Pro Leu Leu Gly Glu Val Phe915                 920                 925Ser Val Ser Thr His Ala Gly Leu Arg Leu Trp Glu Thr Thr Leu Asp930                 935                 940Arg Lys Arg Leu Pro Trp Leu Gly Glu His Arg Ala Gln Gly Glu Val945                 950                 955                 960Val Phe Pro Gly Ala Gly Tyr Leu Glu Met Ala Leu Ser Ser Gly Ala965                 970                 975Glu Ile Leu Gly Asp Gly Pro Ile Gln Val Thr Asp Val Val Leu Ile980                 985                 990Glu Thr Leu Thr Phe Ala Gly Asp Thr Ala Val Pro Val Gln Val Val995                1000                1005Thr Thr Glu Glu Arg Pro Gly Arg Leu Arg Phe Gln Val Ala Ser Arg1010                1015                1020Glu Pro Gly Glu Arg Arg Ala Pro Phe Arg Ile His Ala Arg Gly Val1025               1030                1035                1040Leu Arg Arg Ile Gly Arg Val Glu Thr Pro Ala Arg Ser Asn Leu Ala1045                1050                1055Ala Leu Arg Ala Arg Leu His Ala Ala Val Pro Ala Ala Ala Ile Tyr1060                1065                1070Gly Ala Leu Ala Glu Met Gly Leu Gln Tyr Gly Pro Ala Leu Arg Gly1075                1080                1085Leu Ala Glu Leu Trp Arg Gly Glu Gly Glu Ala Leu Gly Arg Val Arg1090                1095                1100Leu Pro Glu Ala Ala Gly Ser Ala Thr Ala Tyr Gln Leu His Pro Val1105               1110                1115                1120Leu Leu Asp Ala Cys Val Gln Met Ile Val GlyAla Phe Ala Asp Arg1125                1130               1135Asp Glu Ala Thr Pro Trp Ala Pro Val Glu Val Gly Ser Val Arg Leu1140                1145                1150Phe Gln Arg Ser Pro Gly Glu Leu Trp Cys His Ala Arg Val Val Ser1155                1160                1165Asp Gly Gln Gln Ala Ser Ser Arg Trp Ser Ala Asp Phe Glu Leu Met1170                1175                1180Asp Gly Thr Gly Ala Val Val Ala Glu Ile Ser Arg Leu Val Val Glu1185               1190                1195                1200Arg Leu Ala Ser Gly Val Arg Arg Arg Asp Ala Asp Asp Trp Phe Leu1205                1210                1215Glu Leu Asp Trp Glu Pro Ala Ala Leu Gly Gly Pro Lys Ile Thr Ala1220                1225                1230Gly Arg Trp Leu Leu Leu Gly Glu Gly Gly Gly Leu Gly Arg Ser Leu1235                1240                1245Cys Ser Ala Leu Lys Ala Ala Gly His Val Val Val His Ala Ala Gly1250                1255                1260Asp Asp Thr Ser Thr Ala Gly Met Arg Ala Leu Leu Ala Asn Ala Phe1265               1270                1275                1280Asp Gly Gln Ala Pro Thr Ala Val Val His Leu Ser Ser Leu Asp Gly1285                1290                1295Gly Gly Gln Leu Gly Pro Gly Leu Gly Ala Gln Gly Ala Leu Asp Ala1300                1305                1310Pro Arg Ser Pro Asp Val Asp Ala Asp Ala Leu Glu Ser Ala Leu Met1315                1320                1325Arg Gly Cys Asp Ser Val Leu Ser Leu Val Gln Ala Leu Val Gly Met1330                1335                1340Asp Leu Arg Asn Ala Pro Arg Leu Trp Leu Leu Thr Arg Gly Ala Gln1345               1350                 1355               1360Ala Ala Ala Ala Gly Asp Val Ser Val Val Gln Ala Pro Leu Leu Gly             1365                1370                1375Leu Gly Arg Thr Ile Ala Leu Glu His Ala Glu Leu Arg Cys Ile Ser1380                1385                1390Val Asp Leu Asp Pro Ala Glu Pro Glu Gly Glu Ala Asp Ala Leu Leu1395                1400                1405Ala Glu Leu Leu Ala Asp Asp Ala Glu Glu Glu Val Ala Leu Arg Gly1410                1415                1420Gly Asp Arg Leu Val Ala Arg Leu Val His Arg Leu Pro Asp Ala Gln1425               1430                1435                1440Arg Arg Glu Lys Val Glu Pro Ala Gly Asp Arg Pro Phe Arg Leu Glu1445                1450                1455Ile Asp Glu Pro Gly Ala Leu Asp Gln Leu Val Leu Arg Ala Thr Gly1460                1465                1470Arg Arg Ala Pro Gly Pro Gly Glu Val Glu Ile Ser Val Glu Ala Ala1475                1480                1485Gly Leu Asp Ser Ile Asp Ile Gln Leu Ala Leu Gly Val Ala Pro Asn1490                1495                1500Asp Leu Pro Gly Glu Glu Ile Glu Pro Leu Val Leu Gly Ser Glu Cys1505               1510                1515                1520Ala Gly Arg Ile Val Ala Val Gly Glu Gly Val Asn Gly Leu Val Val1525                1530                1535Gly Gln Pro Val Ile Ala Leu Ala Ala Gly Val Phe Ala Thr His Val1540                1545                1550Thr Thr Ser Ala Thr Leu Val Leu Pro Arg Pro Leu Gly Leu Ser Ala1555                1560                1565Thr Glu Ala Ala Ala Met Pro Leu Ala Tyr Leu Thr Ala Trp Tyr Ala1570                1575                1580Leu Asp Lys Val Ala His Leu Gln Ala Gly Glu Arg Val Leu Ile His1585               1590                1595                1600Ala Glu Ala Gly Gly Val Gly Leu Cys Ala Val Arg Trp Ala Gln Arg1605                1610                1615Val Gly Ala Glu Val Tyr Ala Thr Ala Asp Thr Pro Glu Asn Arg Ala1620                1625                1630Tyr Leu Glu Ser Leu Gly Val Arg Tyr Val Ser Asp Ser Arg Ser Gly1635                1640                1645Arg Phe Val Thr Asp Val His Ala Trp Thr Asp Gly Glu Gly Val Asp1650                1655                1660Val Val Leu Asp Ser Leu Ser Gly Glu Arg Ile Asp Lys Ser Leu Met1665               1670                1675                1680Val Leu Arg Ala Cys Gly Arg Leu Val Lys Leu Gly Arg Arg Asp Asp1685                1690                1695Cys Ala Asp Thr Gln Pro Gly Leu Pro Pro Leu Leu Arg Asn Phe Ser1700                1705                1710Phe Ser Gln Val Asp Leu Arg Gly Met Met Leu Asp Gln Pro Ala Arg1715                1720                1725Ile Arg Ala Leu Leu Asp Glu Leu Phe Gly Leu Val Ala Ala Gly Ala1730                1735                1740Ile Ser Pro Leu Gly Ser Gly Leu Arg Val Gly Gly Ser Leu Thr Pro1745               1750                1755                1760Pro Pro Val Glu Thr Phe Pro Ile Ser Arg Ala Ala Glu Ala Phe Arg1765                1770                1775Arg Met Ala Gln Gly Gln His Leu Gly Lys Leu Va1 Leu Thr Leu Asp1780                1785                1790Asp Pro Glu Val Arg Ile Arg Ala Pro Ala Glu Ser Ser Val Ala Val1795                1800                1805Arg Ala Asp Gly Thr Tyr Leu Val Thr Gly Gly Leu Gly Gly Leu Gly1810                1815                1820Leu Arg Val Ala Gly Trp Leu Ala Glu Arg Gly Ala Gly Gln Leu Val1825               1830                1835                1840Leu val Gly Arg Ser Gly Ala Ala Ser Ala Glu Gln Arg Ala Ala Val1845                1850                1855Ala Ala Leu Glu Ala His Gly Ala Arg Val Thr Val Ala Lys Ala Asp1860                1865                1870Val Ala Asp Arg Ser Gln Ile Glu Arg Val Leu Arg Glu Val Thr Ala1875                1880                1885Ser Gly Met Pro Leu Arg Gly Val Val His Ala Ala Gly Leu Val Asp1890                1895                1900Asp Gly Leu Leu Met Gln Gln Thr Pro Ala Arg Phe Arg Thr Val Met1905               1910                1915                1920Gly Pro Lys Val Gln Gly Ala Leu His Leu His Thr Leu Thr Arg Glu1925                1930                1935Ala Pro Leu Ser Phe Phe Val Leu Tyr Ala Ser Ala Ala Gly Leu Phe1940                1945                1950Gly Ser Pro Gly Gln Gly Asn Tyr Ala Ala Ala Asn Ala Phe Leu Asp1955                1960                1965Ala Leu Ser His His Arg Arg Ala Gln Gly Leu Pro Ala Leu Ser Ile1970                1975                1980Asp Trp Gly Met Phe Thr Glu Val Gly Met Ala Val Ala Gln Glu Asn1985               1990                1995                2000Arg Gly Ala Arg Gln Ile Ser Arg Gly Met Arg Gly Ile Thr Pro Asp2005                2010                2015Glu Gly Leu Ser Ala Leu Ala Arg Leu Leu Glu Gly Asp Arg Val Gln2020                2025                2030Thr Gly Val Ile Pro Ile Thr Pro Arg Gln Trp Val Glu Phe Tyr Pro2035                2040                2045Ala Thr Ala Ala Ser Arg Arg Leu Ser Arg Leu Val Thr Thr Gln Arg2050                2055                2060Ala Val Ala Asp Arg Thr Ala Gly Asp Arg Asp Leu Leu Glu Gln Leu2065               2070                2075                2080Ala Ser Ala Glu Pro Ser Ala Arg Ala Gly Leu Leu Gln Asp Val Val2085                2090                2095Arg Val Gln Val Ser His Val Leu Arg Leu Pro Glu Asp Lys Ile Glu2100                2105                2110Val Asp Ala Pro Leu Ser Ser Met Gly Met Asp Ser Leu Met Ser Leu2115                2120                2125Glu Leu Arg Asn Arg Ile Glu Ala A la Leu Gly Val Ala Ala Pro Ala2130                2135                 2140Ala Leu Gly Trp Thr Tyr Pro Thr Val Ala Ala Ile Thr Arg Trp Leu2145               2150                2155                2160Leu Asp Asp Ala Leu Val Val Arg Leu Gly Gly Gly Ser Asp Thr Asp2165                2170                2175Glu Ser Thr Ala Ser Ala Gly Ser Phe Val His Val Leu Arg Phe Arg2180                2185                2190Pro Val Val Lys Pro Arg Ala Arg Leu Phe Cys Phe His Gly Ser Gly2195                2200                2205Gly Ser Pro Glu Gly Phe Arg Ser Trp Ser Glu Lys Ser Glu Trp Ser2210                2215                2220Asp Leu Glu Ile Val Ala Met Trp His Asp Arg Ser Leu Ala Ser Glu2225               2230                2235                2240Asp Ala Pro Gly Lys Lys Tyr Val Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ile Gln2245                2250                2255His Tyr Ala Asp Ala Pro Phe Ala Leu Val Gly Phe Ser Leu Gly Val2260                2265                2270Arg Phe Val Met Gly Thr Ala Val Glu Leu Ala Ser Arg Ser Gly Ala2275                2280                2285Pro Ala Pro Leu Ala Val Phe Thr Leu Gly Gly Ser Leu Ile Ser Ser2290                2295                2300Ser Glu Ile Thr Pro Glu Met Glu Thr Asp Ile Ile Ala Lys Leu Phe2305               2310                2315                2320Phe Arg Asn Ala Ala Gly Phe Val Arg Ser Thr Gln Gln Val Gln Ala2325                2330                2335Asp Ala Arg Ala Asp Lys Val Ile Thr Asp Thr Met Val Ala Pro Ala2340                2345                2350Pro Gly Asp Ser Lys Glu Pro Pro Val Lys Ile Ala Val Pro Ile Val2355                2360                2365Ala Ile Ala Gly Ser Asp Asp Val Ile Val Pro Pro Ser Asp Val Gln2370                2375                2380Asp Leu Gln Ser Arg Thr Thr Glu Arg Phe Tyr Met His Leu Leu Pro2385               2390                2395                2400Gly Asp His Glu Phe Leu Val Asp Arg Gly Arg Glu Ile Met His Ile             2405                2410                2415Val Asp Ser His Leu Asn Pro Leu Leu Ala Ala Arg Thr Thr Ser Ser2420                2425                2430Gly Pro Ala Phe Glu Ala Lys2435<210>8<211>419<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>8Met Thr Gln Glu Gln Ala Asn Gln ser Glu Thr Lys Pro Ala Phe Asp1               5                  10                  15Phe Lys Pro Phe Ala Pro Gly Tyr Ala Glu Asp Pro Phe Pro Ala Ile20                  25                  30Glu Arg Leu Arg Glu Ala Thr Pro Ile Phe Tyr Trp Asp Glu Gly Arg35                  40                  45Ser Trp Val Leu Thr Arg Tyr His Asp Val Ser Ala Val Phe Arg Asp50                  55                  60Glu Arg Phe Ala Val Ser Arg Glu Glu Trp Glu Ser Ser Ala Glu Tyr65                  70                  75                  80Ser Ser Ala Ile Pro Glu Leu Ser Asp Met Lys Lys Tyr Gly Leu Phe85                  90                  95Gly Leu Pro Pro Glu Asp His Ala Arg Val Arg Lys Leu Val Asn Pro100                 105                 110Ser Phe Thr Ser Arg Ala Ile Asp Leu Leu Arg Ala Glu Ile Gln Arg115                 120                 125Thr Val Asp Gln Leu Leu Asp Ala Arg Ser Gly Gln Glu Glu Phe Asp130                 135                 140Val Val Arg Asp Tyr Ala Glu Gly Ile Pro Met Arg Ala Ile Ser Ala145                 150                 155                 160Leu Leu Lys Val Pro Ala Glu Cys Asp Glu Lys Phe Arg Arg Phe Gly165                 170                 175Ser Ala Thr Ala Arg Ala Leu Gly Val Gly Leu Val Pro Gln Val Asp180                 185                 190Glu Glu Thr Lys Thr Leu Val Ala Ser Val Thr Glu Gly Leu Ala Leu195                 200                 205Leu His Asp Val Leu Asp Glu Arg Arg Arg Asn Pro Leu Glu Asn Asp210                 215                 220Val Leu Thr Met Leu Leu Gln Ala Glu Ala Asp Gly Ser Arg Leu Ser225                 230                 235                 240Thr Lys Glu Leu Val Ala Leu Val Gly Ala Ile Ile Ala Ala Gly Thr245                 250                 255Asp Thr Thr Ile Tyr Leu Ile Ala Phe Ala Val Leu Asn Leu Leu Arg260                 265                 270Ser Pro Glu Ala Leu Glu Leu Val Lys Ala Glu Pro Gly Leu Met Arg275                 280                 285Asn Ala Leu Asp Glu Val Leu Arg Phe Asp Asn Ile Leu Arg Ile Gly290                 295                 300Thr Val Arg Phe Ala Arg Gln Asp Leu Glu Tyr Cys Gly Ala Ser Ile305                 310                 315                 320Lys Lys Gly Glu Met Val Phe Leu Leu Ile Pro Ser Ala Leu Arg Asp325                 330                 335Gly Thr Val Phe Ser Arg Pro Asp Val Phe Asp Val Arg Arg Asp Thr340                 345                 350Gly Ala Ser Leu Ala Tyr Gly Arg Gly Pro His Val Cys Pro Gly Val355                 360                 365Ser Leu Ala Arg Leu Glu Ala Glu Ile Ala Val Gly Thr Ile Phe Arg370                 375                 380Arg Phe Pro Glu Met Lys Leu Lys Glu Thr Pro Val Phe Gly Tyr His385                 390                 395                 400Pro Ala Phe Arg Asn Ile Glu Ser Leu Asn Val Ile Leu Lys Pro Ser405                 410                 415Lys Ala Gly<210>9<211>607<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>9Ala Ser Leu Asp Ala Leu Phe Ala Arg Ala Thr Ser Ala Arg Val Leu1               5                  10                  15Asp Asp Gly His Gly Arg Ala Thr Glu Arg His Val Leu Ala Glu Ala20                  25                  30Arg Gly Ile Glu Asp Leu Arg Ala Leu Arg Glu His Leu Arg Ile Gln35                  40                  45Glu Gly Gly Pro Ser Phe His Cys Met Cys Leu Gly Asp Leu Thr Val50                  55                  60Glu Leu Leu Ala His Asp Gln Pro Leu Ala Ser Ile Ser Phe His His65                  70                  75                  80Ala Arg Ser Leu Arg His Pro Asp Trp Thr Ser Asp Ala Met Leu Val85                  90                  95Asp Gly Pro Ala Leu Val Arg Trp Leu Ala Ala Arg Gly Ala Pro Gly100                 105                 110Pro Leu Arg Glu Tyr Glu Glu Glu Arg Glu Arg Ala Arg Thr Ala Gln115                 120                 125Glu Ala Arg Arg Leu Trp Leu Ala Ala Ala Pro Pro Cys Phe Ala Pro130                 135                 140Asp Leu Pro Arg Phe Glu Asp Asp Ala Asn Gly Leu Pro Leu Gly Pro145                 150                 155                 160Met Ser Pro Glu Val Ala Glu Ala Glu Arg Arg Leu Arg Ala Ser Tyr165                 170                 175Ala Thr Pro Glu Leu Ala Cys Ala Ala Leu Leu Ala Trp Leu Gly Thr180                 185                 190Gly Ala Gly Pro Trp Ser Gly Tyr Pro Ala Tyr Glu Met Leu Pro Glu195                 200                 205Asn Leu Leu Leu Gly Phe Gly Leu Pro Thr Ala Ile Ala Ala Ala Ser210                 215                 220Ala Pro Gly Thr Ser Glu Ala Ala Leu Arg Gly Ala Ala Arg Leu Phe225                 230                 235                 240Ala Ser Trp Glu Val Val Ser Ser Lys Lys Ser Gln Leu Gly Asn Ile245                 250                 255Pro Glu Ala Leu Trp Glu Arg Leu Arg Thr Ile Val Arg Ala Met Gly260                 265                 270Asn Ala Asp Asn Leu Ser Arg Phe Glu Arg Ala Glu Ala Ile Ala Ala275                 280                 285Glu Val Arg Arg Leu Arg Ala Gln Pro Ala Pro Phe Ala Ala Gly Ala290                 295                 300Gly Leu Ala Val Ala Gly Val Ser Ser Ser Gly Arg Leu Ser Gly Leu305                 310                 315                 320Val Thr Asp Gly Asp Ala Leu Tyr Ser Gly Asp Gly Asn Asp Ile Val325                 330                 335Met Phe Gln Pro Gly Arg Ile Ser Pro Val Val Leu Leu Ala Gly Thr340                 345                 350Asp Pro Phe Phe Glu Leu Ala Pro Pro Leu Ser Gln Met Leu Phe Val355                 360                 365Ala His Ala Asn Ala Gly Thr Ile Ser Lys Val Leu Thr Glu Gly Ser370                 375                 380Pro Leu Ile Val Met Ala Arg Asn Gln Ala Arg Pro Met Ser Leu Val385                 390                 395                 400His Ala Arg Gly Phe Met Ala Trp Val Asn Gln Ala Met Val Pro Asp405                 410                 415Pro Glu Arg Gly Ala Pro Phe Val Val Gln Arg Ser Thr Ile Met Glu420                 425                 430Phe Glu His Pro Thr Pro Arg Cys Leu His Glu Pro Ala Gly Ser Ala435                 440                 445Phe Ser Leu Ala Cys Asp Glu Glu His Leu Tyr Trp Cys Glu Leu Ser450                 455                 460Ala Gly Arg Leu Glu Leu Trp Arg His Pro His His Arg Pro Gly Ala465                 470                 475                 480Pro Ser Arg Phe Ala Tyr Leu Gly Glu His Pro Ile Ala Ala Thr Trp485                 490                 495Tyr Pro Ser Leu Thr Leu Asn Ala Thr His Val Leu Trp Ala Asp Pro500                 505                 510Asp Arg Arg Ala Ile Leu Gly Val Asp Lys Arg Thr Gly Val Glu Pro515                 520                 525Ile Val Leu Ala Glu Thr Arg His Pro Pro Ala His Val Val Ser Glu530                 535                 540Asp Arg Asp Ile Phe Ala Leu Thr Gly Gln Pro Asp Ser Arg Asp Trp545                 550                 555                 560His Val Glu His Ile Arg Ser Gly Ala Ser Thr Val Val Ala Asp Tyr565                 570                 575Gln Arg Gln Leu Trp Asp Arg Pro Asp Met Val Leu Asn Arg Arg Gly580                 585                 590Leu Phe Phe Thr Thr Asn Asp Arg Ile Leu Thr Leu Ala Arg Ser595                 600                 605<210>l0<211>423<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>10Met Gly Ala Leu Ile Ser Val Ala Ala Pro Gly Cys Ala Leu Gly Gly1               5                  10                  15Ala Glu Glu Glu Gly Gln Pro Gly Gln Asp Ala Gly Ala Gly Ala Leu20                  25                  30Ala Pro Ala Arg Glu Val Met Ala Ala Glu Val Ala Ala Gly Gln Met35                  40                  45Pro Gly Ala Val Trp Leu Val Ala Arg Gly Asp Asp Val His Val Asp50                  55                  60Ala Val Gly Val Thr Glu Leu Gly Gly Ser Ala Pro Met Arg Arg Asp65                  70                  75                  80Thr Ile Phe Arg Ile Ala Ser Met Thr Lys Ala Val Thr Ala Thr Ala85                  90                  95Val Met Met Leu Val Glu Glu Gly Lys Leu Asp Leu Asp Ser Pro Val100                 105                 110Asp Arg Trp Leu Pro Glu Leu Ala Asn Arg Lys Val Leu Ala Arg Ile115                 120                 125Asp Gly Pro Ile Asp Glu Thr Val Pro Ala Glu Arg Pro Ile Thr Val130                 135                 140Arg Asp Leu Met Thr Phe Thr Met Gly Phe Gly Ile Ser Phe Asp Ala145                 150                 155                 160Ser Ser Pro Ile Gln Arg Ala Ile Asp Glu Leu Gly Leu Val Asn Ala165                 170                 175Gln Pro Val Pro Met Thr Pro His Gly Pro Asp Glu Trp Ile Arg Arg180                 185                 190 65                  70                  75                  80Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Met Ala Gly Ile Glu Val Asp Val Gly85                  90                  95Ile Leu Arg Lys Glu Ala Arg Pro Gly Ala Leu Ser Ala Leu Gly Ala100                 105                 110Ile Ala Pro Pro Leu Ala Ala Gly Ala Ala Phe Ser Ala Leu Val Leu115                 120                 125Asp Arg Pro Leu Pro Ser Gly Leu Phe Leu Gly Ile Val Leu Ser Val130                 135                 140Thr Ala Val Ser Val Ile Ala Lys Val Leu Ile Glu Arg Glu Ser Met145                 150                 155                 160Arg Arg Ser Tyr Ala Gln Val Thr Leu Ala Ala Gly Val Val Ser Glu165                 170                 175Val Ala Ala Trp Val Leu Val Ala Met Thr Ser Ser Ser Tyr Gly Ala180                 185                 190Ser Pro Ala Leu Ala Val Ala Arg Ser Ala Leu Leu Ala Ser Gly Phe195                 200                 205Leu Leu Phe Met Val Leu Val Gly Arg Arg Leu Thr His Leu Ala Met210                 215                 220Arg Trp Val Ala Asp Ala Thr Arg Val Ser Lys Gly Gln Val Ser Leu225                 230                 235                 240Val Leu Val Leu Thr Phe Leu Ala Ala Ala Leu Thr Gln Arg Leu Gly245                 250                 255Leu His Pro Leu Leu Gly Ala Phe Ala Leu Gly Val Leu Leu Asn Ser260                 265                 270Ala Pro Arg Thr Asn Arg Pro Leu Leu Asp Gly Val Gln Thr Leu Val275                 280                 285Ala Gly Leu Phe Ala Pro Val Phe Phe Val Leu Ala Gly Met Arg Val290                 295                 300Asp Val Ser Gln Leu Arg Thr Pro Ala Ala Trp Gly Thr Val Ala Leu305                 310                 315                 320Leu Leu Ala Thr Ala Thr Ala Ala Lys Val Val Pro Ala Ala Leu Gly325                 330                 335Ala Arg Leu Gly Gly Leu Arg Gly Ser Glu Ala Ala Leu Val Ala Val340                 345                 350Gly Leu Asn Met Lys Gly Gly Thr Asp Leu Ile Val Ala Ile Val Gly355                 360                 365Val Glu Leu Gly Leu Leu Ser Asn Glu Ala Tyr Thr Met Tyr Ala Val370                 375                 380Val Ala Leu Val Thr Val Thr Ala Ser Pro Ala Leu Leu Ile Trp Leu385                 390                 395                 400Glu Lys Arg Ala Pro Pro Thr Gln Glu Glu Ser Ala Arg Leu Glu Arg405                 410                 415Leu Gly Thr Leu Pro Leu Met His Gln Pro Gly Ala Gln Trp Met Tyr195                 200                 205Asn Thr Gly Ser Leu Val Gln Gly Val Leu Val Gly Arg Ala Ala Asp210                 215                 220Gln Gly Phe Asp Ala Phe Val Arg Glu Arg Ile Leu Ala Pro Leu Gly225                 230                 235                 240Met Arg Asp Thr Asp Phe His Val Pro Ala Asp Lys Leu Ala Arg Phe245                 250                 255Ala Gly Cys Gly Tyr Phe Thr Asp Glu Gln Thr Gly Glu Lys Thr Arg260                 265                 270Met Asp Arg Asp Gly Ala Glu Ser Ala Tyr Ala Ser Pro Pro Ala Phe275                 280                 285Pro Ser Gly Ala A la Gly Leu Val Ser Thr Val Asp Asp Tyr Leu Leu290                  295                 300Phe Ala Arg Met Leu Met Asn Gly Gly Val His Glu Gly Arg Arg Leu305                 310                 315                 320Leu Ser Ala Ala Ser Val Arg Glu Met Thr Ala Asp His Leu Thr Pro325                 330                 335Ala Gln Lys Ala Ala Ser Ser Phe Phe Pro Gly Phe Phe Glu Thr His340                 345                 350Gly Trp Gly Tyr Gly Met Ala Val Val Thr Ala Pro Asp Ala Val Ser355                 360                 365Glu Val Pro Gly Arg Tyr Gly Trp Asp Gly Gly Phe Gly Thr Ser Trp370                     375                 380Ile Asn Asp Pro Gly Arg Glu Leu Ile Gly Ile Val Met Thr Gln Ser385                 390                 395                 400Ala Gly Phe Leu Phe Ser Gly Ala Leu Glu Arg Phe Trp Arg Ser Val405                 410                 415Tyr Val Ala Thr Glu Ser Ala420<210>11<211>713<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>11Met His Gly Leu Thr Glu Arg Gln Val Leu Leu Ser Leu Val Thr Leu1               5                  10                  15Ala Leu Ile Leu Val Thr Ala Arg Ala Ser GlyGlu Leu Ala Arg Arg20                  25                 30Leu Arg Gln Pro Glu Val Leu Gly Glu Leu Phe Gly Gly Val Val Leu35                  40                  45Gly Pro Ser Val Val Gly Ala Leu Ala Pro Gly Phe His Arg Ala Leu50                  55                  60Phe Gln Glu Pro Ala Val Gly Val Val Leu Ser Gly Ile Ser Trp IleGlu Glu Ala Ala Arg Arg Ala Tyr Ile Pro Gly Val Glu Arg Ile Leu420                 425                 430Val Pro Ile Val Ala His Ala Leu Pro Gly Phe Ala Thr Asp Ile Val435                 440                 445Glu Ser Ile Val Ala Ser Lys Arg Lys Leu Gly Glu Thr Val Asp Ile450                 455                 460Thr Glu Leu Ser Val Glu Gln Gln A la Pro Gly Pro Ser Arg Ala Ala465                 470                  475                 480Gly Glu Ala Ser Arg Gly Leu Ala Arg Leu Gly Ala Arg Leu Arg Val485                 490                 495Gly Ile Trp Arg Gln Arg Arg Glu Leu Arg Gly Ser Ile Gln Ala Ile500                 505                 510Leu Arg Ala Ser Arg Asp His Asp Leu Leu Val Ile Gly Ala Arg Ser515                 520                 525Pro Ala Arg Ala Arg Gly Met Ser Phe Gly Arg Leu Gln Asp Ala Ile530                 535                 540Val Gln Arg Ala Glu Ser Asn Val Leu Val Val Val Gly Asp Pro Pro545                 550                 555                 560Ala Ala Glu Arg Ala Ser Ala Arg Arg Ile Leu Val Pro Ile Ile Gly565                 570                 575Leu Glu Tyr Ser Phe Ala Ala Ala Asp Leu Ala Ala His Val Ala Leu580                 585                 590Ala Trp Asp Ala Glu Leu Val Leu Leu Ser Ser Ala Gln Thr Asp Pro595                 600                 605Gly Ala Val Val Trp Arg Asp Arg Glu Pro Ser Arg Val Arg Ala Val610                 615                 620Ala Arg Ser Val Val Asp Glu Ala Val Phe Arg Gly Arg Arg Leu Gly625                 630                 635                 640Val Arg Val Ser Ser Arg Val His Val Gly Ala His Pro Ser Asp Glu645                 650                 655Ile Thr Arg Glu Leu Ala Arg Ala Pro Tyr Asp Leu Leu Val Leu Gly660                 665                 670Cys Tyr Asp His Gly Pro Leu Gly Arg Leu Tyr Leu Gly Ser Thr Val675                 680                 685Glu Ser Val Val Val Arg Ser Arg Val Pro Val Ala Leu Leu Val Ala690                 695                 700His Gly Gly Thr Arg Glu Gln Val Arg705                 710<210>12<211>126<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>12Met Asp Lys Pro Ile Gly Arg Thr Arg Cys Ala Ile Ala Glu Gly Tyr  1               5                  10                  15Ile Pro Gly Gly Ser Asn Gly Pro Glu Pro Gln Met Thr Ser His Glu20                  25                  30Thr Ala Cys Leu Leu Asn Ala Ser Asp Arg Asp Ala Gln Val Ala Ile35                  40                  45Thr Val Tyr Phe Ser Asp Arg Asp Pro Ala Gly Pro Tyr Arg Val Thr50                  55                  60Val Pro Ala Arg Arg Thr Arg His Val Arg Phe Asn Asp Leu Thr Glu65                  70                  75                  80Pro Glu Pro Ile Pro Arg Asp Thr Asp Tyr Ala Ser Val Ile Glu Ser85                  90                  95Asp Ala Pro Ile Val Val Gln His Thr Arg Leu Asp Ser Arg Gln Ala100                 105                 110Glu Asn Ala Leu Leu Ser Thr Ile Ala Tyr Thr Asp Arg Glu115                 120                 125<210>13<211>149<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>13Met Lys His Val Asp Thr Gly Arg Arg Phe Gly Arg Arg Ile Gly His1               5                  10                  15Thr Leu Gly Leu Leu Ala Ser Met Ala Leu Ala Gly Cys Gly Gly Pro20                  25                  30Ser Glu Lys Thr Val Gln Gly Thr Arg Leu Ala Pro Gly Ala Asp Ala35                  40                  45Arg Val Thr Ala Asp Val Asp Pro Asp Ala Ala Thr Thr Arg Leu Ala50                  55                  60Val Asp Val Val His Leu Ser Pro Pro Glu Arg Leu Glu Ala Gly Ser65                  70                  75                  80Glu Arg Phe Val Val Trp Gln Arg Pro Ser Pro Glu Ser Pro Trp Arg85                  90                  95Arg Val Gly Val Leu Asp Tyr Asn Ala Asp Ser Arg Arg Gly Lys Leu100                 105                 110Ala Glu Thr Thr Val Pro Tyr Ala Asn Phe Glu Leu Leu Ile Thr Ala115                 120                 125Glu Lys Gln Ser Ser Pro Gln Ser Pro Ser Ser Ala Ala Val Ile Gly130                 135                 140Pro Thr Ser Val Gly145<210>14<211>184<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>14Val Thr Ser Glu Glu Val Pro Gly Ala Ala Leu Gly Ala Gln Ser Ser1               5                  10                  15Leu Val Arg Ala Gln His Ala Ala Arg His Val Arg Pro Cys Thr Arg20                  25                  30Ala Glu Glu Pro Pro Ala Leu Met His Gly Leu Thr Glu Arg Gln Val35                  40                  45Leu Leu Ser Leu Val Ala Leu Ala Leu Val Leu Leu Thr Ala Arg Ala50                  55                  60Phe Gly Glu Leu Ala Arg Arg Leu Arg Gln Pro Glu Val Leu Gly Glu65                  70                  75                  80Leu Phe Gly Gly Val Val Leu Gly Pro Ser Val Val Gly Ala Leu Ala85                  90                  95Pro Gly Phe His Arg Val Leu Phe Gln Asp Pro Ala Val Gly Val Val100                 105                 110Leu Ser Gly Ile Ser Trp Ile Gly Ala Leu Val Leu Leu Leu Met Ala115                 120                 125Gly Ile Glu Val Asp Val Ser Ile Leu Arg Lys Glu Ala Arg Pro Gly130                 135                 140Ala Leu Ser Ala Leu Gly Ala Ile Ala Pro Pro Leu Arg Thr Pro Gly145                 150                 155                 160Pro Leu Val Gln Arg Met Gln Gly Ala Phe Thr Trp Asp Leu Asp Val165                 170                 175Ser Pro Arg Arg Ser Ala Gln Ala180<210>15<211>145<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>15Val Asn Ala Pro Cys Met Arg Cys Thr Ser Gly Pro Gly Val Arg Ser1               5                  10                  15Gly Gly Ala Ile Ala Pro Ser Ala Glu Ser Ala Pro Gly Arg Ala Ser20                  25                  30Leu Arg Arg Met Leu Thr Ser Thr Ser Ile Pro Ala Met Ser Ser Arg35                  40                  45Thr Ser Ala Pro Ile Gln Glu Met Pro Glu Ser Thr Thr Pro Thr Ala50                  55                  60Gly Ser Trp Lys Arg Thr Arg Trp Asn Pro Gly Ala Ser Ala Pro Thr65                  70                  75                  80Thr Asp Gly Pro Ser Thr Thr Pro Pro Lys Ser Ser Pro Ser Thr Ser85                  90                  95Gly Trp Arg Ser Arg Arg Ala Ser Ser Pro Lys Ala Arg Ala Val Arg100                 105                 110Arg Thr Ser Ala Arg Ala Thr Ser Glu Ser Arg Thr Cys Arg Ser Val115                 120                 125Arg Pro Cys Ile Arg Ala Gly Gly Ser Ser Ala Arg Val Gln Gly Arg130                 135                 140Thr145<210>16<211>185<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>16Val Leu Ala Pro Pro Ala Asp Ile Arg Pro Pro Ala Ala Ala Gln Leu1               5                  10                  15Glu Pro Asp Ser Pro Asp Asp Glu Ala Asp Glu A la Asp Glu Ala Leu20                  25                   30Arg Pro Phe Arg Asp Ala Ile Ala Ala Tyr Ser Glu Ala Val Arg Trp35                  40                  45Ala Glu Ala Ala Gln Arg Pro Arg Leu Glu Ser Leu Val Arg Leu Ala50                  55                  60Ile Val Arg Leu Gly Lys Ala Leu Asp Lys Val Pro Phe Ala His Thr65                  70                  75                  80Thr Ala Gly Val Ser Gln Ile Ala Gly Arg Leu Gln Asn Asp Ala Val85                  90                  95Trp Phe Asp Val Ala Ala Arg Tyr Ala Ser Phe Arg Ala Ala Thr Glu100                 105                 110His Ala Leu Arg Asp Ala Ala Ser Ala Met Glu Ala Leu Ala Ala Gly115                 120                 125Pro Tyr Arg Gly Ser Ser Arg Val Ser Ala Ala Val Gly Glu Phe Arg130                 135                 140Gly Glu Ala Ala Arg Leu His Pro Ala Asp Arg Val Pro Ala Ser Asp145                 150                 155                 160Gln Gln Ile Leu Thr Ala Leu Arg Ala Ala Glu Arg Ala Leu Ile Ala165                 170                 175Leu Tyr Thr Ala Phe Ala Arg Glu Glu180                 185<210>17<211>146<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>17Met Ala Asp Ala Ala Ser Arg Ser Ala Cys Ser Val Ala Ala Arg Lys1               5                  10                  15Leu Ala Tyr Arg Ala Ala Thr Ser Asn Gln Thr Ala Ser Phe Trp Ser20                  25                  30Leu Pro Ala Ile Trp Glu Thr Pro Ala Val Val Cys Ala Lys Gly Thr35                  40                  45Leu Ser Ser Ala Leu Pro Ser Arg Thr Ile Ala Ser Arg Thr Arg Leu50                  55                  60Ser Ser Arg Gly Arg Cys Ala Ala Ser Ala His Arg Thr Ala Ser Glu65                  70                  75                  80Tyr Ala Ala Ile Ala Ser Arg Asn Gly Arg Ser Ala Ser Ser Ala Ser85                  90                  95Ser Ala Ser Ser Ser Gly Glu Ser Gly Ser Ser Trp Ala Ala Ala Gly100                 105                 110Gly Arg Met Ser Ala Gly Gly Ala Ser Thr Gly Glu Val Tyr Glu Gln115                 120                 125Ala Pro Arg Leu Arg Leu Ala Gln Ser Val Ala Ala Arg Arg Arg Asp130                 135                 140Pro Thr145<210>18<211>288<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>18Val Thr Val Ser Ser Met Pro Arg Ser Trp Ser Ser Arg Val Arg Thr1               5                  10                  15Val Val Thr Ala Leu Gly Cys Ala Arg Arg Leu Ser Gly Ser Ile Ser20                  25                  30Arg Leu Arg Arg His Pro Glu Ala Gly Arg Ala Pro Arg Ser Arg Leu35                  40                  45Arg Ala Trp Arg Arg Leu Pro Gln His Ile Ser Ser Pro Trp Arg His50                  55                  60Leu Pro Pro Gly Ala Arg Val Gly Thr Ser Cys Pro Ala Asp Arg Arg65                  70                  75                  80Ile Leu Pro Ser His Arg Thr Ala Asp Leu Gly Thr Ser Gly Gly Thr85                  90                  95Leu Val Ala Arg Met Ser Gly His Val Ala Arg Asn Pro His Ala Ala100                 105                 110Val Leu Val Gly Asp Gly Ser Ala Arg Gly Arg Arg Arg Leu Ser Asn115                 120                 125Arg Arg Ala Glu Arg Arg Val Ser Asp Val Thr Cys Arg Glu Gly Gly130                 135                 140Glu Ala Met Gln Lys Ile Ala Gly Lys Leu Val Val Gly Leu Ile Ser145                 150                 155                 160Val Ser Gly Met Ser Leu Leu Ala Ala Cys Gly Gly Glu Lys Arg Ser165                 170                 175Gly Gly Glu Ala Gln Thr Pro Gly Gly Ala Gln Gly Glu Ala Pro Val180                 185                 190Pro Val Gly Ser Ala Val Asp Ser Ile Val Ala Ala Arg Cys Asp Arg195                 200                 205Glu Ala Arg Cys Asn Asn Ile Gly Gln Asp Arg Glu Tyr Ser Ser Lys210                 215                 220Asp Ala Cys Ser Asn Lys Ile Arg Ser Glu Trp Arg Asp Glu Leu Thr225                 230                 235                 240Phe Gly Glu Cys Pro Gly Gly Ile Asp Ala Lys Gln Leu Asn Glu Cys245                 250                 255Leu Glu Gly Ile Arg Asn Glu Gly Cys Gly Asn Pro Phe Asp Thr Leu260                 265                 270Gly Arg Val Val Ala Cys Arg Ser Ser Asp Leu Cys Arg Asp Ala Arg275                 280                 285<210>19<211>288<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>19Val Thr Val Ser Ser Met Pro Arg Ser Trp Ser Ser Arg Val Arg Thr1               5                  10                  15Val Val Thr Ala Leu Gly Cys Ala Arg Arg Leu Ser Gly Ser Ile Ser20                  25                  30Arg Leu Arg Arg His Pro Glu Ala Gly Arg Ala Pro Arg Ser Arg Leu35                  40                  45Arg Ala Trp Arg Arg Leu Pro Gln His Ile Ser Ser Pro Trp Arg His50                  55                  60Leu Pro Pro Gly Ala Arg Val Gly Thr Ser Cys Pro Ala Asp Arg Arg65                  70                  75                  80Ile Leu Pro Ser His Arg Thr Ala Asp Leu Gly Thr Ser Gly Gly Thr85                  90                  95Leu Val Ala Arg Met Ser Gly His Val Ala Arg Asn Pro His Ala Ala100                 105                 110Val Leu Val Gly Asp Gly Ser Ala Arg Gly Arg Arg Arg Leu Ser Asn115                 120                 125Arg Arg Ala Glu Arg Arg Val Ser Asp Val Thr Cys Arg Glu Gly Gly130                 135                 140Glu Ala Met Gln Lys Ile Ala Gly Lys Leu Val Val Gly Leu Ile Ser145                 150                 155                 160Val Ser Gly Met Ser Leu Leu Ala Ala Cys Gly Gly Glu Lys Arg Ser165                 170                 175Gly Gly Glu Ala Gln Thr Pro Gly Gly Ala Gln Gly Glu Ala Pro Val          180                 185                 190Pro Val Gly Ser Ala Val Asp Ser Ile Val Ala Ala Arg Cys Asp Arg195                 200                 205Glu Ala Arg Cys Asn Asn Ile Gly Gln Asp Arg Glu Tyr Ser Ser Lys210                 215                 220Asp Ala Cys Ser Asn Lys Ile Arg Ser Glu Trp Arg Asp Glu Leu Thr225                 230                 235                 240Phe Gly Glu Cys Pro Gly Gly Ile Asp Ala Lys Gln Leu Asn Glu Cys245                 250                 255Leu Glu Gly Ile Arg Asn Glu Gly Cys Gly Asn Pro Phe Asp Thr Leu260                 265                 270Gly Arg Val Val Ala Cys Arg Ser Ser Asp Leu Cys Arg Asp Ala Arg275                 280                 285<210>20<211>155<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>20Met Asp Pro Arg Ala Arg Arg Glu Lys Arg Pro Ser Leu Leu Asp Ser1               5                  10                  15Arg Gly Arg Gln Pro Lys Arg Ser Gln Gln Gly Gly His Met Glu Lys20                  25                  30Pro Ile Gly Arg Thr Arg Trp Ala Ile Ala Glu Gly Tyr Ile Pro Gly35                  40                  45Arg Ser Asn Gly Pro Glu Pro Gln Met Thr Ser His Glu Thr Ala Cys50                  55                  60Leu Leu Asn Ala Ser Asp Arg Asp Ala Gln Val Ala Ile Thr Val Tyr65                  70                  75                  80Phe Ser Asp Arg Asp Pro Ala Gly Pro Tyr Arg Val Thr Val Pro Ala85                  90                  95Arg Arg Thr Arg His Val Arg Phe Asn Asp Leu Thr Glu Pro Glu Pro100                 105                 110Ile Pro Arg Asp Thr Asp Tyr Ala Ser Val Ile Glu Ser Asp Val Pro115                 120                 125Ile Val Val Gln His Thr Arg Leu Asp Ser Arg Gln Ala Glu Asn Ala130                 135                 140Leu Ile Ser Thr Ile Ala Tyr Thr Asp Arg Glu145                 150                 155<210>21<211>156<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>21Val Arg Arg Ser Arg Trp Gln Met Lys His Val Asp Thr Gly Arg Arg1               5                  10                  15Val Gly Arg Arg Ile Gly Leu Thr Leu Gly Leu Leu Ala Ser Met Ala20                  25                  30Leu Ala Gly Cys Gly Gly Pro Ser Glu Lys Ile Val Gln Gly Thr Arg35                  40                  45Leu Ala Pro Gly Ala Asp Ala His Val Ala Ala Asp Val Asp Pro Asp50                  55                  60Ala Ala Thr Thr Arg Leu Ala Val Asp Val Val His Leu Ser Pro Pro65                  70                  75                  80Glu Arg Ile Glu Ala Gly Ser Glu Arg Phe Val Val Trp Gln Arg Pro85                  90                  95Ser Ser Glu Ser Pro Trp Gln Arg Val Gly Val Leu Asp Tyr Asn Ala100                 105                 110Ala Ser Arg Arg Gly Lys Leu Ala Glu Thr Thr Val Pro His Ala Asn115                 120                 125Phe Glu Leu Leu Ile Thr Val Glu Lys Gln Ser Ser Pro Gln Ser Pro130                 135                 140Ser Ser Ala Ala Val Ile Gly Pro Thr Ser Val Gly145                 150                 155<210>22<211>305<212>PRT<2l3>纤维堆囊菌<400>22Met Glu Lys Glu Ser Arg Ile Ala Ile Tyr Gly Ala Ile Ala Ala Asn1               5                  10                  15Val Ala Ile Ala Ala Val Lys Phe Ile Ala Ala Ala Val Thr Gly Ser20                  25                  30Ser Ala Met Leu Ser Glu Gly Val His Ser Leu Val Asp Thr Ala Asp35                  40                  45Gly Leu Leu Leu Leu Leu Gly Lys His Arg Ser Ala Arg Pro Pro Asp50                  55                  60Ala Glu His Pro Phe Gly His Gly Lys Glu Leu Tyr Phe Trp Thr Leu65                  70                  75                  80Ile Val Ala Ile Met Ile Phe Ala Ala Gly Gly Gly Val Ser Ile Tyr85                  90                  95Glu Gly Ile Leu His Leu Leu His Pro Arg Gln Ile Glu Asp Pro Thr100                 105                 110Trp Asn Tyr Val Val Leu Gly Ala Ala Ala Val Phe Glu Gly Thr Ser115                 120                 125Leu Ile Ile Ser Ile His Glu Phe Lys Lys Lys Asp Gly Gln Gly Tyr130                 135                 140Leu Ala Ala Met Arg Ser Ser Lys Asp Pro Thr Thr Phe Thr Ile Val145                 150                 155                 160Leu Glu Asp Ser Ala Ala Leu Ala Gly Leu Thr Ile Ala Phe Leu Gly165                 170                 175Val Trp Leu Gly His Arg Leu Gly Asn Pro Tyr Leu Asp Gly Ala Ala180                  185                 190Ser Ile Gly Ile Gly Leu Val Leu Ala Ala Val Ala Val Phe Leu Ala195                 200                 205Ser Gln Ser Arg Gly Leu Leu Val Gly Glu Ser Ala Asp Arg Glu Leu210                 215                 220Leu Ala Ala Ile Arg Ala Leu Ala Ser Ala Asp Pro Gly Val Ser Ala225                 230                 235                 240Val Gly Arg Pro Leu Thr Met His Phe Gly Pro His Glu Val Leu Val245                 250                 255Val Leu Arg Ile Glu Phe Asp Ala Ala Leu Thr Ala Ser Gly Val Ala260                 265                 270Glu Ala Ile Glu Arg Ile Glu Thr Arg Ile Arg Ser Glu Arg Pro Asp275                 280                 285Val Lys His Ile Tyr Val Glu Ala Arg Ser Leu His Gln Arg Ala Arg290                 295                 300Ala305<210>23<211>135<212>PRT<213>纤维堆囊菌<400>23Val Gln Thr Ser Ser Phe Asp Ala Arg Tyr Ala Gly Cys Lys Ser Ser1               5                  10                  15Arg Arg Ile Ala Arg Ser Gly Ser Ala Gly Ala Arg Ala Gly Arg Ala20                  25                  30His Glu Gly Ala Ala Ser Ala Gly Phe Glu Gly Gly Asp Val Met Arg35                  40                  45Lys Ala Arg Ala His Gly Ala Met Leu Gly Gly Arg Asp Asp Gly Trp50                  55                  60Arg Arg Gly Leu Pro Gly Ala Gly Ala Leu Arg Ala Ala Leu Gln Arg65                  70                  75                  80Gly Arg Ser Arg Asp Leu Ala Arg Arg Arg Leu Ile Ala Ser Val Ser85                  90                  95Leu Ala Gly Gly Ala Ser Met Ala Val Val Ser Leu Phe Gln Leu Gly100                 105                 110Ile Ile Glu Arg Leu Pro Asp Pro Pro Leu Pro Gly Phe Asp Ser Ala115                 120                 125Lys Val Thr Ser Ser Asp Ile130                 135<210>24<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：通用反向引物<400>24ggaaacagct atgaccatg                     19<210>25<211>17<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：通用正向引物<400>25gtaaaacgac ggccagt                       17<210>26<211>28<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：PCR引物NH24末端”B”<400>26gtgactggcg cctggaatct gcatgagc           28<210>27<211>28<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：PCR引物NH2末端”A”<400>27agcgggagct tgctagacat tctgtttc           28<210>28<211>24<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：PCR引物NH2末端”B”<400>28gacgcgcctc gggcagcgcc ccaa               24<210>29<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：PCR引物pEPO15-NH6末端”B”<400>29caccgaagcg tcgatctggt ccatc              25<210>30<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述：PCR引物pEPO15H2.7末端”A”<400>30cggtcagatc gacgacgggc tttcc              25

Claims (93)

1．一种分离的核酸分子，其包含编码至少一种涉及epothilone生物合成的多肽的核苷酸序列。
2．权利要求1的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列是由粘细菌分离的。
3．权利要求2的分离的核酸分子，其中所述粘细菌是纤维堆囊菌。
4．包含与权利要求1的核酸分子可操作连接的异源启动子序列的嵌合基因。
5．包含权利要求4的嵌合基因的重组载体。
6．包含权利要求4的嵌合基因的重组宿主细胞。
7．权利要求6的重组宿主细胞，其是细菌。
8．权利要求7的重组宿主细胞，其是放线菌。
9．权利要求8的重组宿主细胞，其是链霉菌。
10．包含权利要求1的核酸分子的Bac克隆。
11．权利要求10的Bac克隆，其是pEPO15。
12．权利要求1的分离的核酸分子，其中所述多肽包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:2的氨基酸11-437,SEQ ID NO:2的氨基酸543-864,SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:3的氨基酸72-81,SEQ ID NO:3的氨基酸118-125,SEQ ID NO:3的氨基酸199-212,SEQ ID NO:3的氨基酸353-363,SEQ ID NO:3的氨基酸549-565,SEQ ID NO:3的氨基酸588-603,SEQ ID NO:3的氨基酸669-684,SEQ ID NO:3的氨基酸815-821,SEQ ID NO:3的氨基酸868-892,SEQ ID NO:3的氨基酸903-912,SEQ ID NO:3的氨基酸918-940,SEQ ID NO:3的氨基酸1268-1274,SEQ ID NO:3的氨基酸1285-1297,SEQ ID NO:3的氨基酸973-1256,SEQ ID NO:3的氨基酸1344-1351,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859,SEQ ID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457,SEQ ID NO:5的氨基酸563-884,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQ ID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQ ID NO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQ IDNO:5的氨基酸3886-4048,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719,SEQID NO:5的氨基酸4729-4974,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQ ID NO:5的氨基酸5103-5525,SEQ ID NO:5的氨基酸5631-5951,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ ID NO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:6的氨基酸35-454,SEQ ID NO:6的氨基酸561-881,SEQ ID NO:6的氨基酸1143-1393,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503,SEQ ID NO:6的氨基酸1522-1946,SEQ ID NO:6的氨基酸2053-2373,SEQ ID NO:6的氨基酸2383-2551,SEQ ID NO:6的氨基酸2671-3045,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636,SEQ ID NO:6的氨基酸3673-3745,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:7的氨基酸32-450,SEQ ID NO:7的氨基酸556-877,SEQ ID NO:7的氨基酸887-1051,SEQ ID NO:7的氨基酸1478-1790,SEQ ID NO:7的氨基酸1810-2055,SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164,SEQ ID NO:7的氨基酸2165-2439,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:11，和SEQ ID NO:22。
13．权利要求12的分离的核酸分子，其中所述多肽包含选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:2的氨基酸11-437,SEQID NO:2的氨基酸543-864,SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:3的氨基酸72-81,SEQ ID NO:3的氨基酸118-125,SEQ ID NO:3的氨基酸199-212,SEQ ID NO:3的氨基酸353-363,SEQ ID NO:3的氨基酸549-565,SEQ ID NO:3的氨基酸588-603,SEQ ID NO:3的氨基酸669-684,SEQ ID NO:3的氨基酸815-821,SEQ ID NO:3的氨基酸868-892,SEQ ID NO:3的氨基酸903-912,SEQ ID NO:3的氨基酸918-940,SEQ ID NO:3的氨基酸1268-1274,SEQ ID NO:3的氨基酸1285-1297,SEQ ID NO:3的氨基酸973-1256,SEQ ID NO:3的氨基酸1344-1351,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859,SEQ ID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457,SEQID NO:5的氨基酸563-884,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQ ID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQ ID NO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQ ID NO:5的氨基酸3886-4048,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719,SEQ IDNO:5的氨基酸4729-4974,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQID NO:5的氨基酸5103-5525,SEQ ID NO:5的氨基酸5631-5951,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ ID NO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:6的氨基酸35-454,SEQ IDNO:6的氨基酸561-881,SEQ ID NO:6的氨基酸1143-1393,SEQ IDNO:6的氨基酸1430-1503,SEQ ID NO:6的氨基酸1522-1946,SEQID NO:6的氨基酸2053-2373,SEQ ID NO:6的氨基酸2383-2551,SEQ ID NO:6的氨基酸2671-3045,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636,SEQ ID NO:6的氨基酸3673-3745,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:7的氨基酸32-450,SEQ ID NO:7的氨基酸556-877,SEQ ID NO:7的氨基酸887-1051,SEQ ID NO:7的氨基酸1478-1790,SEQ ID NO:7的氨基酸1810-2055,SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164,SEQ IDNO:7的氨基酸2165-2439,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:10,SEQ IDNO:11，和SEQ ID NO:22。
14．权利要求12的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸1900-3171的互补序列，SEQ ID NO:1的核苷酸3415-5556,SEQ ID NO:1的核苷酸7610-11875,SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQ ID NO:1的核苷酸11872-16104,SEQ ID NO:1的核苷酸12085-12114,SEQ ID NO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQ ID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQ ID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQID NO:1的核苷酸14313-14334,SEQ ID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQ ID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQ ID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQ ID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQ ID NO:1的核苷酸14788-15639,SEQ ID NO:1的核苷酸15901-15924,SEQ ID NO:1的核苷酸16251-21749,SEQID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQ ID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ ID NO:1的核苷酸21746-43519,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQID NO:1的核苷酸26045-26263,SEQ ID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQ ID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸35042-35902,SEQID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQ ID NO:I的核苷酸36773-36991,SEQ ID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸43524-54920,SEQID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQ ID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQ ID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸48087-49361,SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176,SEQ ID NO:1的核苷酸51534-52657,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431,SEQID NO:1的核苷酸54540-54758,SEQ ID NO:1的核苷酸54935-62254,SEQ ID NO:1的核苷酸55028-56284,SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565,SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087,SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304,SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099,SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426,SEQ ID NO:1的核苷酸61427-62254,SEQID NO:1的核苷酸62369-63628,SEQ ID NO:1的核苷酸67334-68251,和SEQ ID NO:1的核苷酸1-68750。
15．权利要求12的核酸分子，其中所述核苷酸序列选自下组:SEQID NO:1的核苷酸1900-3171的互补序列，SEQ ID NO:1的核苷酸3415-5556,SEQ ID NO:1的核苷酸7610-11875,SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ ID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQID NO:1的核苷酸11872-16104,SEQ ID NO:1的核苷酸12085-12114,SEQ ID NO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQ ID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQ ID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQ ID NO:1的核苷酸14313-14334,SEQID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQ ID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQ ID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQ ID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQ ID NO:1的核苷酸14788-15639,SEQ ID NO:1的核苷酸15901-15924,SEQ ID NO:1的核苷酸16251-21749,SEQ ID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ ID NO:1的核苷酸21746-43519,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQ ID NO:1的核苷酸26045-26263,SEQID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQ ID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸35042-35902,SEQ ID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQ ID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸43524-54920,SEQ ID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQ ID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸48087-49361,SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176,SEQ ID NO:1的核苷酸51534-52657,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431,SEQ ID NO:1的核苷酸54540-54758,SEQID NO:1的核苷酸54935-62254,SEQ ID NO:1的核苷酸55028-56284,SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565,SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087,SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304,SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099,SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426,SEQ ID NO:1的核苷酸61427-62254,SEQ ID NO:1的核苷酸62369-63628,SEQID NO:1的核苷酸67334-68251，和SEQ ID NO:1的核苷酸1-68750。
16．包含与权利要求12的核酸分子可操作连接的异源启动子序列的嵌合基因。
17．包含权利要求16的嵌合基因的重组载体。
18．包含权利要求16的嵌合基因的重组宿主细胞。
19．权利要求18的重组宿主细胞，其是细菌。
20．权利要求19的重组宿主细胞，其是放线菌。
21．权利要求20的重组宿主细胞，其是链霉菌。
22．权利要求1的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中连续的20个碱基对的部分序列相同的连续20个碱基对核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸1900-3171的互补序列，SEQ ID NO:1的核苷酸3415-5556,SEQ ID NO:1的核苷酸7610-11875,SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ IDNO:1的核苷酸11549-11764,SEQ ID NO:1的核苷酸11872-16104,SEQ ID NO:1的核苷酸12085-12114,SEQ ID NO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQ ID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQ ID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQID NO:1的核苷酸14313-14334,SEQ ID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQ ID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQ ID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQ ID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQ ID NO:1的核苷酸14788-15639,SEQ ID NO:1的核苷酸15901-15924,SEQ ID NO:1的核苷酸16251-21749,SEQID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQ ID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ ID NO:1的核苷酸21746-43519,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQID NO:1的核苷酸26045-26263,SEQ ID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQ ID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸35042-35902,SEQID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQ ID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQ ID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸43524-54920,SEQID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQ ID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQ ID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸48087-49361,SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176,SEQ ID NO:1的核苷酸51534-52657,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431,SEQID NO:1的核苷酸54540-54758,SEQ ID NO:1的核苷酸54935-62254,SEQ ID NO:1的核苷酸55028-56284,SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565,SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087,SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304,SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099,SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426,SEQ ID NO:1的核苷酸61427-62254,SEQID NO:1的核苷酸62369-63628,SEQ ID NO:1的核苷酸67334-68251，和SEQ ID NO:1的核苷酸1-68750。
23．包含与权利要求22的核酸分子可操作连接的异源启动子序列的嵌合基因。
24．包含权利要求23的嵌合基因的重组载体。
25．包含权利要求23的嵌合基因的重组宿主细胞。
26．权利要求25的重组宿主细胞，其是细菌。
27．权利要求26的重组宿主细胞，其是放线菌。
28．权利要求27的重组宿主细胞，其是链霉菌。
29．一种分离的核酸分子，其包含编码至少一个epothilone合酶结构域的核苷酸序列。
30．权利要求29的分离的核酸分子，其中所述epothilone合酶结构域是β-酮脂酰合酶结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸11-437,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457,SEQ ID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449,SEQ ID NO:5的氨基酸5103-5525,SEQ ID NO:6的氨基酸35-454,SEQ ID NO:6的氨基酸1522-1946，和SEQ ID NO:7的氨基酸32-450。
31．权利要求30的分离的核酸分子，其中所述β-酮脂酰合酶结构域包含选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2的氨基酸11-437,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457,SEQID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449,SEQ ID NO:5的氨基酸5103-5525,SEQ ID NO:6的氨基酸35-454,SEQ ID NO:6的氨基酸1522-1946，和SEQ ID NO:7的氨基酸32-450。
32．权利要求30的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQ ID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQ ID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQ ID NO:1的核苷酸48087-49361，和SEQ IDNO:1的核苷酸55028-56284。
33．权利要求30的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中连续20个碱基对的部分序列相同的连续20个碱基对核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQ ID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQ ID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQ ID NO:1的核苷酸48087-49361，和SEQ ID NO:1的核苷酸55028-56284。
34．权利要求30的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸7643-8920,SEQ ID NO:1的核苷酸16269-17546,SEQ ID NO:1的核苷酸21860-23116,SEQ ID NO:1的核苷酸26318-27595,SEQ ID NO:1的核苷酸30815-32092,SEQ ID NO:1的核苷酸37052-38320,SEQ ID NO:1的核苷酸43626-44885,SEQID NO:1的核苷酸48087-49361，和SEQ ID NO:1的核苷酸55028-56284。
35．权利要求29的分离的核酸分子，其中所述epothilone合酶结构域是酰基转移酶结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸543-864,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859,SEQ ID NO:5的氨基酸563-884,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQ IDNO:5的氨基酸5631-5951,SEQ ID NO:6的氨基酸561-881,SEQ IDNO:6的氨基酸2053-2373，和SEQ ID NO:7的氨基酸556-877。
36．权利要求35的分离的核酸分子，其中所述酰基转移酶结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸543-864,SEQ IDNO:4的氨基酸539-859,SEQ ID NO:5的氨基酸563-884,SEQ IDNO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQID NO:5的氨基酸5631-5951,SEQ ID NO:6的氨基酸561-881,SEQ ID NO:6的氨基酸2053-2373，和SEQ ID NO:7的氨基酸556-877。
37．权利要求35的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQ ID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642，和SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565。
38．权利要求35的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中连续20个碱基对的部分序列相同的连续20个碱基对核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQ ID NO:1的核苷酸49680-50642，和SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565。
39．权利要求35的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸9236-10201,SEQ ID NO:1的核苷酸17865-18827,SEQ ID NO:1的核苷酸23431-24397,SEQ ID NO:1的核苷酸27911-28876,SEQ ID NO:1的核苷酸32408-33373,SEQ ID NO:1的核苷酸38636-39598,SEQ ID NO:1的核苷酸45204-46166,SEQID NO:1的核苷酸49680-50642，和SEQ ID NO:1的核苷酸56600-57565。
40．权利要求29的分离的核酸分子，其中所述epothilone合酶结构域是烯酰基还原酶结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837，和SEQID NO:7的氨基酸1478-1790。
41．权利要求40的分离的核酸分子，其中所述烯酰基还原酶结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837，和SEQ ID NO:7的氨基酸1478-1790。
42．权利要求40的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ ID NO:1的核苷酸35042-35902,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256，和SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304。
43．权利要求40的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中连续20个碱基对的部分序列相同的连续20个碱基对核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ IDNO:1的核苷酸35042-35902,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256,和SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304。
44．权利要求40的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸10529-11428,SEQ ID NO:1的核苷酸35042-35902,SEQ ID NO:1的核苷酸41369-42256，和SEQ ID NO:1的核苷酸59366-60304。
45．权利要求29的分离的核酸分子，其中所述epothilone合酶结构域是酰基载体蛋白结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQ IDNO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQID NO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503,SEQ ID NO:6的氨基酸3673-3745，和SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164。
46．权利要求45的分离的核酸分子，其中所述酰基载体蛋白结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQ ID NO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQ ID NO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503,SEQ ID NO:6的氨基酸3673-3745，和SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164。
47．权利要求45的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ ID NO:1的核苷酸26045-26263,SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸54540-54758，和SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426。
48．权利要求45的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中连续20个碱基对的部分序列相同的连续20个碱基对核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQ IDNO:1的核苷酸21414-21626,SEQ ID NO:1的核苷酸26045-26263,SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQ ID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸54540-54758，和SEQ IDNO:1的核苷酸61211-61426。
49．权利要求45的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸11549-11764,SEQ ID NO:1的核苷酸21414-21626,SEQ ID NO:1的核苷酸26045-26263,SEQ ID NO:1的核苷酸30539-30759,SEQ ID NO:1的核苷酸36773-36991,SEQID NO:1的核苷酸43163-43378,SEQ ID NO:1的核苷酸47811-48032,SEQ ID NO:1的核苷酸54540-54758，和SEQ ID NO:1的核苷酸61211-61426。
50．权利要求29的分离的核酸分子，其中所述epothilone合酶结构域是脱水酶结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:5的氨基酸3886-4048,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ ID NO:6的氨基酸2383-2551，和SEQ ID NO:7的氨基酸887-1051。
51．权利要求50的分离的核酸分子，其中所述脱水酶结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:5的氨基酸3886-4048,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ IDNO:6的氨基酸2383-2551，和SEQ ID NO:7的氨基酸887-1051。
52．权利要求50的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176，和SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087。
53．权利要求50的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中连续20个碱基对的部分序列相同的连续20个碱基对核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ IDNO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176，和SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087。
54．权利要求50的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸18855-19361,SEQ ID NO:1的核苷酸33401-33889,SEQ ID NO:1的核苷酸39635-40141,SEQ ID NO:1的核苷酸50670-51176，和SEQ ID NO:1的核苷酸57593-58087。
55．权利要求29的分离的核酸分子，其中所述epothilone合酶结构域是β-酮还原酶结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQ ID NO:5的氨基酸4729-4974,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ IDNO:6的氨基酸1143-1393,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636，和SEQ ID NO:7的氨基酸1810-2055。
56．权利要求55的分离的核酸分子，其中所述β-酮还原酶结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQ ID NO:5的氨基酸4729-4974,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ ID NO:6的氨基酸1143-1393,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636，和SEQ ID NO:7的氨基酸1810-2055。
57．权利要求55的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQ ID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431，和SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099。
58．权利要求55的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中连续20个碱基对的部分序列相同的连续20个碱基对核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ IDNO:1的核苷酸25184-25942,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQ ID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431，和SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099。
59．权利要求55的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸20565-21302,SEQ ID NO:1的核苷酸25184-25942,SEQ ID NO:1的核苷酸29678-30429,SEQ ID NO:1的核苷酸35930-36667,SEQ ID NO:1的核苷酸42314-43048,SEQID NO:1的核苷酸46950-47702,SEQ ID NO:1的核苷酸53697-54431,和SEQ ID NO:1的核苷酸60362-61099。
60．权利要求29的分离的核酸分子，其中所述epothilone合酶结构域是甲基转移酶结构域，其包含与SEQ ID NO:6的氨基酸2671-3045基本相似的氨基酸序列。
61．权利要求60的分离的核酸分子，其中所述甲基转移酶结构域包含SEQ ID NO:6的氨基酸2671-3045。
62．权利要求60的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列与SEQID NO:1的核苷酸51534-52657基本相似。
63．权利要求60的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸51534-52657中连续20个碱基对的部分序列相同的连续20个碱基对核苷酸部分。
64．权利要求60的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列是SEQID NO:1的核苷酸51534-52657。
65．权利要求29的分离的核酸分子，其中所述epothilone合酶结构域是硫酯酶结构域，其包含与SEQ ID NO:7的氨基酸2165-2439基本相似的氨基酸序列。
66．权利要求65的分离的核酸分子，其中所述硫酯酶结构域包含SEQ ID NO:7的氨基酸2165-2439。
67．权利要求65的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列与SEQID NO:1的核苷酸61427-62254基本相似。
68．权利要求65的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸61427-62254中连续20个碱基对的部分序列相同的连续20个碱基对核苷酸部分。
69．权利要求65的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列是SEQID NO:1的核苷酸61427-62254。
70．一种分离的核酸分子，其包含编码非核糖体肽合成酶的核苷酸序列，其中所述非核糖体肽合成酶包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:3的氨基酸72-81,SEQ ID NO:3的氨基酸118-125,SEQ ID NO:3的氨基酸199-212,SEQ ID NO:3的氨基酸353-363,SEQ ID NO:3的氨基酸549-565,SEQ ID NO:3的氨基酸588-603,SEQ ID NO:3的氨基酸669-684,SEQ ID NO:3的氨基酸815-821,SEQ ID NO:3的氨基酸868-892,SEQ ID NO:3的氨基酸903-912,SEQ ID NO:3的氨基酸918-940,SEQ ID NO:3的氨基酸1268-1274,SEQ ID NO:3的氨基酸1285-1297,SEQ ID NO:3的氨基酸973-1256，和SEQ ID NO:3的氨基酸1344-1351。
71．权利要求70的分离的核酸分子，其中所述非核糖体肽合成酶包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:3的氨基酸72-81,SEQ ID NO:3的氨基酸118-125,SEQ ID NO:3的氨基酸199-212,SEQ ID NO:3的氨基酸353-363,SEQ ID NO:3的氨基酸549-565,SEQ ID NO:3的氨基酸588-603,SEQ ID NO:3的氨基酸669-684,SEQ ID NO:3的氨基酸815-821,SEQ ID NO:3的氨基酸868-892,SEQ ID NO:3的氨基酸903-912,SEQ ID NO:3的氨基酸918-940,SEQ ID NO:3的氨基酸1268-1274,SEQ ID NO:3的氨基酸1285-1297,SEQ ID NO:3的氨基酸973-1256，和SEQ IDNO:3的氨基酸1344-1351。
72．权利要求70的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列与选自下组的核苷酸序列基本相似：SEQ ID NO:1的核苷酸11872-16104,SEQ ID NO:1的核苷酸12085-12114,SEQ ID NO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQ ID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQ ID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQID NO:1的核苷酸14313-14334,SEQ ID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQ ID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQ ID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQ ID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQ ID NO:1的核苷酸14788-15639，和SEQ IDNO:1的核苷酸15901-15924。
73．权利要求70的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列包含与选自下组的核苷酸序列中连续20个碱基对的部分序列相同的连续20个碱基对核苷酸部分：SEQ ID NO:1的核苷酸11872-16104,SEQ IDNO:1的核苷酸12085-12114,SEQ ID NO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQ ID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQ ID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQ ID NO:1的核苷酸14313-14334,SEQ ID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQ ID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQ ID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQ ID NO:1的核苷酸14788-15639，和SEQ ID NO:1的核苷酸15901-15924。
74．权利要求70的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列选自下组：SEQ ID NO:1的核苷酸11872-16104,SEQ ID NO:1的核苷酸12085-12114,SEQ ID NO:1的核苷酸12223-12246,SEQ ID NO:1的核苷酸12466-12507,SEQ ID NO:1的核苷酸12928-12960,SEQID NO:1的核苷酸13516-13566,SEQ ID NO:1的核苷酸13633-13680,SEQ ID NO:1的核苷酸13876-13923,SEQ ID NO:1的核苷酸14313-14334,SEQ ID NO:1的核苷酸14473-14547,SEQ ID NO:1的核苷酸14578-14607,SEQ ID NO:1的核苷酸14623-14692,SEQ ID NO:1的核苷酸15673-15693,SEQ ID NO:1的核苷酸15724-15762,SEQID NO:1的核苷酸14788-15639，和SEQ ID NO:1的核苷酸15901-15924。
75．在重组宿主中异源表达epothilone的方法，包括：
a)将权利要求4的嵌合基因导入宿主；和
b)在适合宿主生物合成epothilone的条件下培养宿主。
76．生产epothilone的方法，包括：
c)用权利要求75的方法在重组宿主中表达epothilone；和
d)从重组宿主中提取epothilone。
77．一种分离的多肽，其包含由epothilone合酶结构域组成的氨基酸序列。
78．权利要求77的分离的多肽,其中所述epothilone合酶结构域是β-酮脂酰合酶结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸11-437,SEQ ID NO:4的氨基酸7-432,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457,SEQ ID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449,SEQ ID NO:5的氨基酸5103-5525,SEQ ID NO:6的氨基酸35-454,SEQ ID NO:6的氨基酸1522-1946，和SEQ ID NO:7的氨基酸32-450。
79．权利要求78的分离的多肽，其中所述β-酮脂酰合酶结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸11-437,SEQ IDNO:4的氨基酸7-432,SEQ ID NO:5的氨基酸39-457,SEQ ID NO:5的氨基酸1524-1950,SEQ ID NO:5的氨基酸3024-3449,SEQ IDNO:5的氨基酸5103-5525,SEQ ID NO:6的氨基酸35-454,SEQ IDNO:6的氨基酸1522-1946，和SEQ ID NO:7的氨基酸32-450。
80．权利要求77的分离的多肽，其中所述epothilone合酶结构域是酰基转移酶结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸543-864,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859,SEQ ID NO:5的氨基酸563-884,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQ ID NO:5的氨基酸5631-5951,SEQ ID NO:6的氨基酸561-881,SEQ ID NO:6的氨基酸2053-2373，和SEQ ID NO:7的氨基酸556-877。
81．权利要求80的分离的多肽，其中所述酰基转移酶结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸543-864,SEQ ID NO:4的氨基酸539-859,SEQ ID NO:5的氨基酸563-884,SEQ ID NO:5的氨基酸2056-2377,SEQ ID NO:5的氨基酸3555-3876,SEQ IDNO:5的氨基酸5631-5951,SEQ ID NO:6的氨基酸561-881,SEQ IDNO:6的氨基酸2053-2373，和SEQ ID NO:7的氨基酸556-877。
82．权利要求77的分离的多肽，其中所述epothilone合酶结构域是烯酰还原酶结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837，和SEQ ID NO:7的氨基酸1478-1790。
83．权利要求82的分离的多肽，其中所述烯酰还原酶结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸974-1273,SEQ ID NO:5的氨基酸4433-4719,SEQ ID NO:5的氨基酸6542-6837，和SEQID NO:7的氨基酸1478-1790。
84．权利要求77的分离的多肽，其中所述epothilone合酶结构域是酰基载体蛋白结构域，所述多肽包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ ID NO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQ IDNO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQID NO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503,SEQ ID NO:6的氨基酸3673-3745，和SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164。
85．权利要求84的分离的多肽，其中所述酰基载体蛋白结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2的氨基酸1314-1385,SEQ IDNO:4的氨基酸1722-1792,SEQ ID NO:5的氨基酸1434-1506,SEQID NO:5的氨基酸2932-3005,SEQ ID NO:5的氨基酸5010-5082,SEQ ID NO:5的氨基酸7140-7211,SEQ ID NO:6的氨基酸1430-1503,SEQ ID NO:6的氨基酸3673-3745，和SEQ ID NO:7的氨基酸2093-2164。
86．权利要求77的分离的多肽，其中所述epothilone合酶结构域是脱水酶结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:5的氨基酸3886-4048,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ ID NO:6的氨基酸2383-2551，和SEQ ID NO:7的氨基酸887-1051。
87．权利要求86的分离的多肽，其中所述脱水酶结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸869-1037,SEQ ID NO:5的氨基酸3886-4048,SEQ ID NO:5的氨基酸5964-6132,SEQ IDNO:6的氨基酸2383-2551，和SEQ ID NO:7的氨基酸887-1051。
88．权利要求77的分离的多肽，其中所述epothilone合酶结构域是β-酮还原酶结构域，其包含与选自下组的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ ID NO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQ ID NO:5的氨基酸4729-4974,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ IDNO:6的氨基酸1143-1393,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636,和SEQ ID NO:7的氨基酸1810-2055。
89．权利要求88的分离的多肽，其中所述β-酮还原酶结构域包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4的氨基酸1439-1684,SEQ IDNO:5的氨基酸1147-1399,SEQ ID NO:5的氨基酸2645-2895,SEQID NO:5的氨基酸4729-4974,SEQ ID NO:5的氨基酸6857-7101,SEQ ID NO:6的氨基酸1143-1393,SEQ ID NO:6的氨基酸3392-3636，和SEQ ID NO:7的氨基酸1810-2055。
90．权利要求77的分离的多肽，其中所述epothilone合酶结构域是甲基转移酶结构域，其包含与SEQ ID NO:6的氨基酸2671-3045基本相似的氨基酸序列。
91．权利要求90的分离的多肽，其中所述甲基转移酶结构域包含SEQ ID NO:6的氨基酸2671-3045。
92．权利要求77的分离的多肽，其中所述epothilone合酶结构域是硫酯酶结构域，其包含与SEQ ID NO:7的氨基酸2165-2439基本相似的氨基酸序列。
93．权利要求77的分离的多肽，其中所述硫酯酶结构域包含SEQ IDNO:7的氨基酸2165-2439。
CNB998074217A 1998-06-18 1999-06-16 用于epothilone生物合成的基因 Expired - Fee Related CN100374565C (zh)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9950498A 1998-06-18 1998-06-18
US09/099,504 1998-06-18
US10163198P 1998-09-24 1998-09-24
US60/101,631 1998-09-24
US11890699P 1999-02-05 1999-02-05
US60/118,906 1999-02-05

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2004100637938A Division CN100374566C (zh) 1998-06-18 1999-06-16 用于epothilone生物合成的基因
CNA2007100890997A Division CN101161817A (zh) 1998-06-18 1999-06-16 用于epothilone生物合成的基因

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1305530A true CN1305530A (zh) 2001-07-25
CN100374565C CN100374565C (zh) 2008-03-12

Family

ID=27378840

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB998074217A Expired - Fee Related CN100374565C (zh) 1998-06-18 1999-06-16 用于epothilone生物合成的基因

Country Status (16)

Country Link
EP (1) EP1088078A2 (zh)
JP (3) JP2002518004A (zh)
KR (1) KR100511233B1 (zh)
CN (1) CN100374565C (zh)
AU (1) AU753567B2 (zh)
BR (1) BR9911349A (zh)
CA (1) CA2329774A1 (zh)
HU (1) HUP0102186A3 (zh)
ID (1) ID29128A (zh)
IL (3) IL139735A0 (zh)
NO (2) NO20006195L (zh)
NZ (1) NZ508326A (zh)
PL (1) PL200157B1 (zh)
SK (1) SK19242000A3 (zh)
TR (1) TR200003759T2 (zh)
WO (1) WO1999066028A2 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100381566C (zh) * 1998-11-20 2008-04-16 科森生物科学公司 产生环氧噻酮及其衍生物的重组方法和材料

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69734362T2 (de) 1996-12-03 2006-07-20 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthese von epothilonen, zwischenprodukte dazu, analoga und verwendungen davon
FR2775187B1 (fr) 1998-02-25 2003-02-21 Novartis Ag Utilisation de l'epothilone b pour la fabrication d'une preparation pharmaceutique antiproliferative et d'une composition comprenant l'epothilone b comme agent antiproliferatif in vivo
DE19846493A1 (de) * 1998-10-09 2000-04-13 Biotechnolog Forschung Gmbh DNA-Sequenzen für die enzymatische Synthese von Polyketid- oder Heteropolyketidverbindungen
US6410301B1 (en) 1998-11-20 2002-06-25 Kosan Biosciences, Inc. Myxococcus host cells for the production of epothilones
US20030113715A1 (en) * 2000-01-21 2003-06-19 Daniel Santi Method for cloning polyketide synthase genes
US6998256B2 (en) 2000-04-28 2006-02-14 Kosan Biosciences, Inc. Methods of obtaining epothilone D using crystallization and /or by the culture of cells in the presence of methyl oleate
ATE309369T1 (de) * 2000-04-28 2005-11-15 Kosan Biosciences Inc Heterologe herstellung von polyketiden
WO2002030356A2 (en) 2000-10-13 2002-04-18 The University Of Mississipi Synthesis of epothilones and relates analogs
US7257562B2 (en) 2000-10-13 2007-08-14 Thallion Pharmaceuticals Inc. High throughput method for discovery of gene clusters
ES2337134T3 (es) 2002-03-12 2010-04-21 Bristol-Myers Squibb Company Derivados de c3-ciano-epotilona.
EP1856262B1 (en) * 2005-01-31 2012-08-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Upstream and a downstream purification process for large scale production of plasmid dna
WO2012103516A1 (en) 2011-01-28 2012-08-02 Amyris, Inc. Gel-encapsulated microcolony screening
CN103518136A (zh) 2011-05-13 2014-01-15 阿迈瑞斯公司 用于检测水不混溶性化合物的微生物生成的方法和组合物
BR112015002724B1 (pt) 2012-08-07 2022-02-01 Total Marketing Services Método para produzir um composto não catabólico heterólogo, e, composição de fermentação
JP6595449B2 (ja) 2013-03-15 2019-10-23 アミリス， インコーポレイテッド アセチル補酵素ａ由来化合物を生産するためのホスホケトラーゼおよびホスホトランスアセチラーゼの使用
WO2015020649A1 (en) 2013-08-07 2015-02-12 Amyris, Inc. Methods for stabilizing production of acetyl-coenzyme a derived compounds
WO2016210350A1 (en) 2015-06-25 2016-12-29 Amyris, Inc. Maltose dependent degrons, maltose-responsive promoters, stabilization constructs, and their use in production of non-catabolic compounds
CN106916834B (zh) * 2015-12-24 2022-08-05 武汉合生科技有限公司 化合物的生物合成基因簇及其应用
CN111138444B (zh) * 2020-01-08 2022-05-03 山东大学 一组埃博霉素b葡萄糖苷类化合物及其酶法制备与应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ335383A (en) * 1996-11-18 2000-10-27 Biotechnolog Forschung Gmbh Epothilone C,D,E and F for plant protection and cytostatic effects shown in kidney cells

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100381566C (zh) * 1998-11-20 2008-04-16 科森生物科学公司 产生环氧噻酮及其衍生物的重组方法和材料

Also Published As

Publication number Publication date
SK19242000A3 (sk) 2001-07-10
KR100511233B1 (ko) 2005-08-31
TR200003759T2 (tr) 2001-06-21
JP2008092958A (ja) 2008-04-24
CN100374565C (zh) 2008-03-12
CA2329774A1 (en) 1999-12-23
NZ508326A (en) 2003-10-31
KR20010052962A (ko) 2001-06-25
NO20006195L (no) 2001-02-16
IL190391A0 (en) 2008-11-03
WO1999066028A3 (en) 2000-06-29
HUP0102186A3 (en) 2005-10-28
IL139735A0 (en) 2002-02-10
EP1088078A2 (en) 2001-04-04
PL200157B1 (pl) 2008-12-31
AU4611699A (en) 2000-01-05
BR9911349A (pt) 2001-03-13
NO20006195D0 (no) 2000-12-06
HUP0102186A2 (hu) 2001-10-28
JP2002518004A (ja) 2002-06-25
WO1999066028A2 (en) 1999-12-23
PL345579A1 (en) 2001-12-17
ID29128A (id) 2001-08-02
JP2006061166A (ja) 2006-03-09
NO20091055L (no) 2001-02-16
IL139735A (en) 2009-06-15
AU753567B2 (en) 2002-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6858404B2 (en) Genes for the biosynthesis of epothilones
CN1305530A (zh) 用于epothilone生物合成的基因
CN1267557C (zh) 合成抗病原体物质的基因
KR100851418B1 (ko) 에포틸론 및 에포틸론 유도체의 생산을 위한 재조합 방법 및 물질
EP1652926B1 (en) Crystalline epothilone d
CN106434702B (zh) 一种帕克特酰胺的生物合成基因簇及其应用
JP2023012549A (ja) 改変ストレプトマイセス・フンジシディカス分離株およびその使用
CN1252440A (zh) 用于提高除虫菌素产量的阿维链霉菌调节基因
CN1732263A (zh) 生物合成糖肽类抗生素a40926的基因及蛋白
RU2265054C2 (ru) Рекомбинантная клетка-хозяин (варианты) и клон вас
RU2234532C2 (ru) Нуклеиновая кислота (варианты), ее использование для экспрессии эпотилонов, полипептид (варианты), клон бактерий е.coli
CN100374566C (zh) 用于epothilone生物合成的基因
CN1681840A (zh) 参与钴胺素生物合成的基因的转录活化基因
CN113046251B (zh) 生产纽莫康定b0的基因工程菌、其制备方法及应用
KR20130097538A (ko) 해양 미생물 하헬라 제주엔시스의 제주엔올라이드 생합성 유전자 클러스터
KR101748678B1 (ko) 글라이코펩타이드 화합물 생산증대방법
CN114774443B (zh) 生产小白菊内酯的重组酿酒酵母菌株及其构建方法
KR20200131041A (ko) 오명사마이신 a의 생산능이 증대된 스트렙토마이세스 속 변이 균주 및 이를 이용한 오명사마이신 a의 생산 방법
CN108864294A (zh) 一种由牛白蛋白与牛干扰素γ组成的融合蛋白及其制备方法和一种重组牛长效干扰素γ
Julien et al. Genetic Engineering of Myxobacterial Natural Product Biosynthetic Genes
CZ20004693A3 (cs) Izolovaná nukleová kyselina kódující polypeptid účastnící se biosyntézy epothilonu, chimérický gen, vektor a hostitelské buňky obsahující tuto nukleovou kyselinu
MXPA00012342A (en) Genes for the biosynthesis of epothilones

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C56 Change in the name or address of the patentee

Owner name: NOVARTIS CO., LTD.

Free format text: FORMER NAME: NOVARTIS AG

CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: Basel

Patentee after: Novartis Ag

Address before: Basel

Patentee before: Novartis AG

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20080312

Termination date: 20140616

EXPY Termination of patent right or utility model