CN1284564A - 用于生产d－***糖醇、d－木酮糖和木糖醇的方法 - Google Patents

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Abstract

通过以下步骤生产木糖醇:在需氧条件下在含有糖作为主要碳源的培养基中培养属于梅奇酵母属并具有D－***糖醇产生能力的微生物(例如美极梅奇酵母、鲁考弗氏梅奇酵母、二尖梅奇酵母、Metschnikowia lunata和佐贝列氏梅奇酵母),以便在该培养基中产生D－***糖醇,向该培养基中接种具有由D－***糖醇产生D－木酮糖能力的微生物,在培养基中培养该微生物以产生D－木酮糖,然后使得具有将D－木酮糖转化为木糖醇能力的微生物作用于所述含有D－木酮糖的培养基,并且收集所产生的木糖醇。

Description

用于生产D-***糖醇、 D-木酮糖和木糖醇的方法
本发明涉及用于生产D-***糖醇、D-木酮糖和木糖醇的方法。D-***糖醇和D-木酮糖作为生产木糖醇的原料是有用的，而木糖醇在食品工业、医药工业等领域中是有用的。
预计在未来对木糖醇这种天然存在的糖醇的需求将会增加。木糖醇是一种有前途的低卡路里的甜味剂，这是因为与蔗糖相比它具有更低的卡路里但却表现出与蔗糖相当的甜度。另外，由于其抗龋齿的特性，它可以用作预防龋齿的甜味剂。而且，由于木糖醇并不升高葡萄糖的水平，因此它可以用于在糖尿病治疗中的流体疗法。
目前，木糖醇的工业生产主要依赖于如美国专利4，008，285中公开的D-木糖的氢化。用作原料的D-木糖是通过作为原料的植物材料(诸如树木、稻草、玉米芯、燕麦壳以及其它富含木聚糖的材料)的水解获得的。
但是，这种由植物材料的水解生产的D-木糖具有相当昂贵的缺点，而这起因于高生产成本。例如，植物材料水解处理的低产率导致所生产的木糖醇纯度低。因此，水解处理后必须通过离子交换处理除去用于水解的酸和染料，并且得到的D-木糖必须进一步进行结晶以除去其它的半纤维素糖类。为了获得适合于食品的D-木糖，将需要进一步的纯化。所述的离子交换处理和结晶处理导致生产成本的增加。
为了解决这一问题，人们已经期望开发出一种用于生产木糖醇的方法，该方法使用易于得到的原料并几乎不产生废物。因此，已经开发了采用其它戊糖醇作为原料生产木糖醇的多种方法。所述易于得到的戊糖醇之一为D-***糖醇。
已经开发出几种采用D-***糖醇作为原料生产木糖醇的方法。在《应用微生物学》18(1969)1031-1035中已经报道了一种方法，其中通过使用汉逊氏德巴利氏酵母ATCC20121的发酵由葡萄糖生产出D-***糖醇，然后采用弱氧化醋杆菌转化为D-木酮糖，并且通过季也蒙氏假丝酵母soya变种的作用将D-木酮糖转化为木糖醇。
此外，EP 403 392A(申请人：Roquette Freres)和EP 421 882A(申请人：Roquette Freres)公开了这样的方法：通过采用抗渗透酵母进行发酵生产D-***糖醇，然后通过采用属于醋杆菌属、葡糖杆菌属或克雷白氏杆菌属的细菌将D-***糖醇转化为D-木酮糖，通过葡萄糖(木糖)异构酶的作用由D-木酮糖生成木糖和木酮糖的混合物，以及通过氢化将所产生的木糖和木酮糖的混合物转化为木糖醇。还公开了木糖醇的生产方法，该方法包括预先浓缩木糖和木酮糖混合物中的木糖，并且通过氢化将浓缩的木糖转化为木糖醇。
另一方面，至于对D-***糖醇而言，已知属于毕赤氏酵母属、汉逊氏酵母属、德巴利氏酵母属、接合糖酵母属、糖酵母属、假丝酵母属、球拟酵母属等的酵母菌株具有生产D-***糖醇的能力。例如，日本专利出版物(Kokoku)47-20394/1972公开了一种通过采用属于假丝酵母属、糖酵母属或球拟酵母属的微生物将诸如甘油之类的糖转化为D-***糖醇的方法。此外，《加拿大微生物学杂志》31(1985)467-471描述了汉逊氏德巴利氏酵母的细胞在含有葡萄糖、L-***糖等的培养基中在其稳定期时积累***糖醇，而《普通微生物学杂志》139(1993)1047-1054描述了当通过葡萄糖向许多酵母菌株施加渗透压时，它们变得积累起甘油和D-***糖醇。
顺便指出，在有关通过葡萄酒酵母生产糖醇的研究中，已经报道了当将葡萄汁用作发酵底物时，几种酵母菌株生产出D-阿拉白糖醇(《Chem.Mikrobiol.Technol.Lebensm.》10，19-24(1986))。例如，经证实通过美极梅奇酵母由183 g／L的底物葡萄糖生产出5 g／L的D-***糖醇。在这种情况下，剩余葡萄糖的量为73 g／L，因此就消耗的葡萄糖而言的重量产率是极低的、即约为2％。首先，这些研究的目的并不在于生产D-***糖醇，而且检测仅仅是定性地测量葡萄酒中存在的如D-***糖醇这样的糖醇的来源。因此，它们根本没有公开D-***糖醇有效生产方法的概念。此外，在不采用通气或搅拌的相对厌氧的条件下进行葡萄酒酿造中葡萄汁的发酵，从而在需氧条件下通过培养属于梅奇酵母属的酵母菌株可以有效地生产D-***糖醇尚未为人所知。
本发明的一个目的在于提供一种有效生产D-***糖醇的方法，以及通过使用该方法来生产D-木酮糖和木糖醇的方法。
为了实现以上提及的目的，本发明的发明人针对D-***糖醇的生产能力测试了多种微生物并就生产条件进行了试验。结果，他们发现当在需氧条件下培养属于梅奇酵母属(Metschnikowia)的微生物时，从诸如葡萄糖之类的可发酵的糖生产并积累了显著量的D-阿拉白糖醇，从而完成了本发明。
也就是说，本发明提供了一种用于生产D-***糖醇的方法，该方法包括在需氧条件下在含有糖作为主要碳源的培养基中培养属于梅奇酵母属并具有D-***糖醇产生能力的微生物，以便在该培养基中产生D-***糖醇。作为糖，可以提到葡萄糖。作为属于梅奇酵母属的微生物，可以提到鲁考弗氏梅奇酵母、二尖梅奇酵母、Metschnikowia lunata和佐贝列氏梅奇酵母。
本发明还提供了一种用于生产D-木酮糖的方法，该方法包括下列步骤：在需氧条件下在含有糖作为主要碳源的培养基中培养属于梅奇酵母属并具有D-***糖醇产生能力的微生物，以便在该培养基中产生D-***糖醇，向该培养基中接种具有由D-***糖醇产生D-木酮糖能力的微生物，并且在培养基中培养该微生物以产生D-木酮糖。
本发明进一步提供了一种用于生产木糖醇的方法，该方法包括下列步骤：在需氧条件下在含有糖作为主要碳源的培养基中培养属于梅奇酵母属并具有D-***糖醇产生能力的微生物以便在该培养基中产生D-***糖醇，向该培养基中接种具有由D-***糖醇产生D-木酮糖能力的微生物，在培养基中培养该微生物以产生D-木酮糖，使得具有将D-木酮转化为木糖醇能力的微生物作用于所述含有D-木酮糖的培养基，并且收集所产生的木糖醇。
根据本发明，通过采用属于梅奇酵母属的微生物菌株的发酵可以有效地生产D-***糖醇。此外，通过使用所述D-***糖醇作为原料可以生产D-木酮糖或木糖醇。
此后，将会详细地解释本发明。
对属于梅奇酵母属的微生物并不作特别的限制，而只要它具有由诸如葡萄糖之类的糖产生D-***糖醇的能力。可以提到的例如有美极梅奇酵母、二尖梅奇酵母、鲁考弗氏梅奇酵母、Metschnikowia lunata、佐贝列氏梅奇酵母、澳洲梅奇酵母、Metschnikowia agaveae、Metschnikowia gruessii、夏威夷梅奇酵母、克里斯氏梅奇酵母等。在这些当中，美极梅奇酵母、鲁考弗氏梅奇酵母、二尖梅奇酵母、Metschnikowia lunata和佐贝列氏梅奇酵母是优选的。作为具体的菌株，可以提到美极梅奇酵母ATCC 18406、鲁考弗氏梅奇酵母ATCC 18407、二尖梅奇酵母ATCC24179、Metschnikowia lunata ATCC 22033、佐贝列氏梅奇酵母ATCC 22302以及美极梅奇酵母FERM BP-7161。这些菌株可以从美国典型培养物保藏中心获得，地址为：12301 Parklawn道，Rockville，马里兰州20852，美国。美极梅奇酵母FERMBP-7161最初于1998年1月16日保藏在国际贸易与工业部工业科学与技术局的国立生物科学与人体技术研究所(邮政编码：305-8566，1-3 Higashi 1-Chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，日本)，保藏号为FERM P-16592，并于2000年5月15日遵照布达佩斯条约将该菌株由原始保藏转换为国际保藏，而且已经以保藏号FERM BP-7161进行了保藏。
通过在需氧条件下在含有糖作为主要碳源的培养基中培养以上提及的这样一种属于梅奇酵母属的微生物，便可以在该培养基中产生D-***糖醇。虽然可以使用一种属于梅奇酵母属的微生物，但也可以同时使用任意的两种或多种这样的微生物。
在本发明中，通常使用液体培养基作为培养基。对糖并不作特别的限制，只要当在需氧条件下将其用于培养属于梅奇酵母属的微生物时产生D-***糖醇即可。例如，可以提到的有葡萄糖、果糖、蔗糖等。至于这些糖在培养基中的量，希望以5-40 g/dl范围内的量来使用它们。在培养过程中可以逐步加入糖。
作为氮源，可以使用可被微生物利用的氮化合物，例如硫酸铵、酵母提取物、胨、麦芽提取物、酪蛋白氨基酸、玉米浆等。此外，作为加入培养基中的无机盐，例如可以使用如硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和氢氧化钾之类的盐。再者，当需要时，可以加入为微生物生长所需的各种有机物质和无机物质、以及通常使用的表面活性剂和消泡剂。当需要时，还可以添加培养基组分，如氮源、天然盐和其它营养物。
在需氧条件下培养本发明属于梅奇酵母属的微生物。术语“需氧条件”意指在比静置培养中得到的浓度高的培养基中的氧浓度下进行培养。优选控制氧的浓度，以便在整个培养期中溶氧浓度应当表示为正值，并且更优选控制该浓度以便氧的分压应当为0.05至0.1个大气压。这样的氧浓度可以通过搅拌培养基、渗透、通气等来达到。
例如通过将在30℃下在含有2 g／dlD-葡萄糖、1 g／dl酵母提取物、1 g／dl麦芽提取物和2 g/dl琼脂、pH 7.0的斜面培养基上培养了24小时的细胞直接接种到生产培养基中，或者通过接种已经通过预培养分别获得的种子培养肉汤，实现了属于梅奇酵母属的微生物的接种。例如通过将一白金环在斜面培养基上培养的上述细胞接种到无菌的培养肉汤中(所述培养肉汤含有5 g／dl葡萄糖、0.3 g/dl酵母提取物、0.15 g／dl硫酸铵、0.1 g／dl磷酸二氢钾、0.3 g／dl磷酸氢二钾、0.1 g硫酸镁七水合物以及2.5 g／dl碳酸钙(独立灭菌)，pH5-7)并且在30-34℃的温度下将它们培养12-24小时，制备出种子培养肉汤。
主要培养物的培养温度应当在属于梅奇酵母属的微生物能够生长的范围内。即通常在25-37℃的温度范围内进行培养，其中优选在30-34℃的范围内。此外，通常将培养基的pH控制在3-9的范围内，优选4-7。虽然培养期可能随所用培养基的种类和作为培养基主要碳源的糖浓度发生变化，但它通常为大约12小时至10天。优选当将培养基中的营养源利用到最大程度并且培养基中产生的D-***糖醇的积累量达到最大值时，结束本发明的培养。
通过采用如高效液相层析这样的公知技术，可以迅速地测定培养肉汤中产生的D-***糖醇的量。可以以常规的方式从培养肉汤中收集如上所述在培养肉汤中积累的D-***糖醇，或者当将D-***糖醇用作将要转化为另一种物质的底物时，可以在培养肉汤中使用它。当需要时，通过在该领域中常用的众所周知的技术(如过滤、离心、真空浓缩、离子交换或吸附层析、溶剂萃取、蒸馏和结晶)的适当组合，从培养肉汤中收集D-***糖醇。例如，通过过滤或离心从培养肉汤中除去细胞，用活性炭处理培养基以除去色素物质等，通过使用离子交换树脂去离子，并且在真空下浓缩以生成糖浆。然后，可以用醇提取糖浆，从提取物中可以沉积出晶体并从醇中进行重结晶以获得纯净的晶体。
通过使用如上所述在培养基中产生和积累的或者收集的D-***糖醇作为原料，可以生产D-木酮糖或木糖醇。也就是说，通过使具有由D-***糖醇产生D-木酮糖能力的微生物作用于D-***糖醇或含有D-***糖醇的培养肉汤，可以生产D-木酮糖。
例如，正如在《应用微生物学》18，1031-1035(1969)中所述的那样，通过使弱氧化醋杆菌作用于D-***糖醇，可以将由发酵产生的D-***糖醇转化为D-木酮糖。另一方面，正如EP 403 392A和EP 421 882A中所述的那样，通过使醋杆菌属的细菌、葡糖杆菌属的细菌或克雷白氏杆菌属的细菌作用于D-***糖醇，可以将由发酵产生的D-***糖醇转化为D-木酮糖。作为这类细菌菌株的一个具体的例子，可以提到氧化葡糖杆菌ATCC 621菌株。
作为具有将D-***糖醇转化为D-木酮糖能力的其它微生物，可以提到的有属于下列属的微生物：无色杆菌属、土壤杆菌属、产碱杆菌属、节杆菌属、金杆菌属、固氮杆菌属、短杆菌属、棒状杆菌属、肠杆菌属、欧文氏杆菌属、黄杆菌属、微球菌属、摩根氏菌属、诺卡氏菌属、游动球菌属、变形菌属、丙酸杆菌属、假单胞菌属、红球菌属、芽孢八叠球菌属、葡萄球菌属、弧菌属、马杜拉放线菌属、放线菌属、北里孢菌属、链霉菌属、气单胞菌属、金杆菌属、芽孢杆菌属、埃希氏杆菌属、微杆菌属、沙雷氏菌属、沙门氏菌属以及黄单胞菌属。
通过把以上提到的具有将D-***糖醇转化为D-木酮糖能力的这样一种微生物接种到其中产生了D-阿拉白糖醇的梅奇酵母属酵母的培养肉汤中或者接种到从中除去了梅奇酵母属酵母细胞的这样一种培养肉汤中，并且培养所述的微生物，也可以生产D-木酮糖。
此外，通过使具有将D-木酮糖转化为木糖醇能力的微生物作用于如上所述产生的D-木酮糖，可以生产木糖醇。作为具有将D-木酮糖转化为木糖醇能力的微生物，季也蒙氏假丝酵母soya变种(《应用微生物学》18，1031-1035 (1969))已是公知的。
再者，通过使得用木糖醇脱氢酶基因转化的并具有提供还原本领能力的微生物作用于D-木酮糖，也可以生产木糖醇。本文所用的术语“提供还原本领的能力”意指以足以使由木糖醇脱氢酶(D-木酮糖还原酶)催化的D-木酮糖至木糖醇之还原反应进行的量来提供NADH(还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)的能力。作为具有所述能力的微生物的具体例子，可以提到埃希氏杆菌属的细菌，如大肠杆菌。
另一方面，正如EP 403 392A和EP 421 882A中公开的那样，通过使葡萄糖异构酶(木糖异构酶)作用于D-木酮糖，可以将所产生的D-木酮糖转化为D-木糖，然后可以使所产生的D-木糖氢化以转化成木糖醇。
此外，通过使用属于葡糖杆菌属或醋杆菌属的并具有将D-***糖醇转化为木糖醇能力的微生物，由通过使用梅奇酵母属酵母生产的D-***糖醇生产木糖醇也是有可能的(WO 99/20782)。
用于由D-***糖醇生产D-木酮糖或木糖醇的方法并不局限于以上提到的那些，并且可以采用任何公知的方法。此外，甚至一种迄今尚未公知的方法也可以用于本发明。
下面，参照下列实施例将更加具体地解释本发明。
实施例1：D-***糖醇的生产
通过使用美极梅奇酵母ATCC 18406菌株、二尖梅奇酵母ATCC 24179菌株、鲁考弗氏梅奇酵母ATCCl 8407菌株、Metschnikowia lunata ATCC 22033菌株、佐贝列氏梅奇酵母ATCC 22302菌株以及美极梅奇酵母FERM BP-7161菌株作为属于梅奇酵母属的微生物，生产D-***糖醇。
在30℃下，在含有2g／dl D-葡萄糖、1 g／dl酵母提取物、1 g／dl麦芽提取物和2 g／dl琼脂、pH 7.0的斜面培养基上培养前面提到的每一种菌株24小时，将一白金环的细胞接种到包含于500-ml坂口烧瓶中的20ml种子培养基中(5 g／dl D-葡萄糖、0.3 g／dl酵母提取物、0.15 g硫酸铵、0.1 g／dl磷酸二氢钾、0.3 g／dl磷酸氢二钾、0.1 g／dl硫酸镁七水合物以及2.5 g／dl碳酸钙(独立灭菌)，pH7.0，在120℃下灭菌20分钟)，并于30℃下在120 rpm下振荡培养18小时。把获得的培养基用作种子培养肉汤。
把l毫升种子培养肉汤接种到包含于500-ml坂口烧瓶中的20ml主要培养基中(10 g／dl D-葡萄糖、0.5 g／dl酵母提取物、0.15 g／dl硫酸铵、0.1 g／dl磷酸二氢钾、0.3 g／dl磷酸氢二钾、0.1 g／dl硫酸镁七水合物以及2.5 g／dl碳酸钙(独立灭菌)，pH7.0，在120℃下灭菌20分钟)，并于30℃下在120rpm下振荡培养。
定期地测定培养肉汤中生成的D-***糖醇和剩余的D-葡萄糖的浓度。对D-***糖醇浓度的测定而言，通过离心从每次培养肉汤收集的部分中除去细胞，将上清液适当地稀释并进行高效液相层析以测定出D-***糖醇的浓度。通过采用Shodex Sugar SC1211作为层析柱，以含有12.5 mg／L硝酸钙和12.5 mg／LEDTA的50％(v/v)乙腈作流动相，在60℃的柱温和0.8 ml/min的流速下，进行高效液相层析。分析结果如表1所示。表1：通过梅奇酵母属的酵母由D-葡萄糖
发酵生产D-***糖醇
菌株 在时刻时的糖浓度(g/dl) 培养时间(小时) 积累的D-***糖醇的浓度(g/dl) 剩余的糖(g/dl)
美极梅奇酵母ATCC 18406     9.5     54     1.3     0.0
鲁考弗氏梅奇酵母ATCC 18407     9.5     54     2.1     0.0
二尖梅奇酵母ATCC 24179     9.5     54     2.6     0.0
Metschnikowia lunataATCC 22033     9.5     54     2.7     0.0
佐贝列氏梅奇酵母ATCC 22302     9．5     30     0.7     2.7
美极梅奇酵母FERMBP-7161     9.5     30     1.7     0.0
如表1所示，通过所有使用的梅奇酵母属的酵母菌株都生成了D-***糖醇，并且基于消耗糖的重量产率(生成的D-***糖醇的重量与消耗糖的重量之比)达到了最大值28％。
通过离心从如上所述获得的各种培养肉汤中除去细胞，通过分别采用阳离子交换树脂和阴离子交换树脂从培养肉汤中连续地除去阳离子和阴离子。在真空下浓缩得到的溶液，以便基本完全地除去水分，并用乙醇提取。使提取物结晶，并使该晶体从乙醇中重结晶以获得纯的D-***糖醇的晶体。
实施例2：D-木酮糖的生产
以与实施例1相同的方式，通过使用Metschnikowia lunata ATCC 22033菌株获得含有D-***糖醇的培养肉汤，并且通过离心从该培养肉汤中除去细胞以获得含2.7 g/dl D-***糖醇的培养肉汤。
将以上氧化葡糖杆菌的培养肉汤以5％的浓度接种到上面提到的含D-***糖醇的培养肉汤中，并在30℃下振荡培养。在17个小时后，结束培养并通过离心除去细胞。结果，由接种时2.5 g／dl的D-***糖醇获得了2.3 g／dl的D-木酮糖(产率：92％)。
实施例3：木糖醇的生产(1)制备用木糖醇脱氢酶基因转化的大肠杆菌
在来源于摩氏摩根氏菌ATCC 25829的木糖醇脱氢酶基因公知的核苷酸序列(DDBJ/GenBank／EMBL登记号为L34345)的基础上，合成出具有如序歹列表中SEQID NOS：1和2所示核苷酸序列的寡核苷酸。
在通常的条件下，通过采用合成的寡核苷酸作引物并以所述菌株的基因组DNA作模板来进行PCR。结果，扩增出含木糖醇脱氢酶基因的大约1.2kb的DNA片段。通过琼脂旨糖凝胶电泳分离并收集该DNA片段，用EoRI和BanHI消化该片段的两端，并连接到pUC18(Takara Shuzo)的EcoRI和BamHI消化产物上。用连接产物转化大肠杆菌JM109，并选出含木糖醇脱氢酶基因的转化菌株。如果克隆的片段含有木糖醇脱氢酶基因的话，那么在lac启动子的控制下，将以带有lacZ’基因的融合基因来表达所述的基因。
如下测定出转化菌株的木糖醇脱氢酶活性。通过超声处理破碎在L培养基(1％胰化蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.5％NaCl)中过夜培养的细胞，并将上清液用作粗酶溶液。在30℃下，在1ml反应混合物中反应1分钟，其中反应混合物含有100mM甘氨酸缓冲液(pH9.5)、100mM木糖醇、2mMNAD以及100μl粗酶溶液。基于340 nm下吸光度的增加来检测NADH或NADPH的生成。把在上述条件下在1分钟里氧化1μmol的木糖醇以产生1μmol NADH的酶活性定义为1个单位。
结果，在转化菌株中观察到3.9 U/mg的木糖醇脱氢酶活性，而在用作对照的大肠杆菌JM109(宿主菌株)中却没有观察到所述的酶活性。因此，经证实转化的菌株具有木糖醇脱氢酶基因。(2)采用以木糖醇脱兑氢酶基因转化的大肠杆菌生产木糖醇
将以上获得的转化菌株接种到包含于体积为500-ml的***50 ml培养基(pH6.0)中，所述培养基含有0.5 g/dl酵母提取物、0.5 g/dl胨、0.5 g/dl牛肉膏、0.5 g/dl 硫酸铵、0.1 g/dl磷酸二氢钾、0.3 g/dl磷酸氢二钾、0.05 g/dl 硫酸镁七水合物、0.001 g/dl硫酸亚铁七水合物、0.001 g/dl硫酸锰n水合物、1 g/dl甘油以及2 g/dl碳酸钙(独立灭菌)，并在30℃下振荡培养3小时。向该培养物中以1 mM的最终浓度加入异丙基-β-D-硫代半乳吡喃糖苷(IPTG)，并且进一步培养4小时。
把如上所述获得的培养肉汤以5％的最终浓度加入实施例2中得到的含D-木酮糖的氧化葡糖杆菌培养上清液中，并以1 g/dl的最终浓度再加入D-葡萄糖。然后，在30℃下进行振荡培养。结果，通过24小时的培养，从培养开始时2.2 g/dl的D-木酮糖获得了2.1 g/dl的木糖醇(产率：95％)。序列表<110>Ajinomoto有限公司<120>用于生产D-***糖醇、D-木酮糖和木糖醇的方法<130>OP951<141>2000-06-<150>JP 11-178514<151>1999-06-24<160>2<170>PatentIn2．0版<210>1<211>26<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物<400>1cgggaattcg atatcatttt aatgaa                  26<210>2<211>29<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：引物<400>2ggcggatccg cagtcaatac cggcataga                    29

Claims (5)

1．一种用于生产D-***糖醇的方法，该方法包括在需氧条件下在含有糖作为主要碳源的培养基中培养属于梅奇酵母属并具有D-***糖醇产生能力的微生物以便在该培养基中产生D-***糖醇的步骤。
2．根据权利要求1的方法，其中所述的糖为葡萄糖。
3．根据权利要求1的方法，其中所述的属于梅奇酵母属的微生物选自美极梅奇酵母、鲁考弗氏梅奇酵母、二尖梅奇酵母、Metschnikowia lunata和佐贝列氏梅奇酵母。
4．一种用于生产D-木酮糖的方法，该方法包括下列步骤：
在需氧条件下在含有糖作为主要碳源的培养基中培养属于梅奇酵母属并具有D-***糖醇产生能力的微生物，以便在该培养基中产生D-***糖醇；以及
向该培养基中接种具有由D-***糖醇产生D-木酮糖能力的微生物，并且培养该微生物，以便在该培养基中产生D-木酮糖。
5．一种用于生产木糖醇的方法，该方法包括下列步骤：
在需氧条件下在含有糖作为主要碳源的培养基中培养属于梅奇酵母属并具有D-***糖醇产生能力的微生物，以便在该培养基中产生D-***糖醇；
向该培养基中接种具有由D-***糖醇产生D-木酮糖能力的微生物，培养该微生物以便在该培养基中产生D-木酮糖；以及
使得具有将D-木酮糖转化为木糖醇能力的微生物作用于所述含有D-木酮糖的培养基，并且收集所产生的木糖醇。
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