CN1267456C - 一种降糖的沙蒿多糖制备方法及其应用 - Google Patents
一种降糖的沙蒿多糖制备方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种以天然沙蒿种子脱去油后的废渣为原料，经过提取、分离、酶解、柱层析制备的沙蒿多糖及其制备方法和应用，其特征是用50-80%乙醇提取，氯仿和正丁醇混合液进行萃取，木瓜蛋白酶进行酶解、通过sephadex G-200柱层析而获得，用于治疗四氧嘧啶引起的化学型糖尿病，减少糖尿病对肝脏、肾脏的受损，降低血液中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮的含量，并能抑制糖尿病导致体重的减轻，生产工艺简单，降糖效果好，无毒副作用，使用方便，用于治疗糖尿病效果良好。
Description
技术领域
本发明涉及一种以天然沙蒿种子脱去油后的废渣为原料，经过提取、分离、酶解、柱层析制备的具有降糖作用的沙蒿多糖制备方法及其应用。
背景技术
糖尿病是一种与遗传因素和多种环境因素相关联的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱综合症，是一种全球范围内的严重危害人类健康的常见疾病。近年来，全球糖尿病患病率及死亡率都呈现一个逐步上升趋势，成为当今世界医学界亟待解决和攻克的重点课题之一。常用降糖药是以合成药物为主的制剂，对肝肾有一定的损伤，不易为患者接受。
专利JP95/00560申请了具有降血糖作用新的吡啶型噻唑烷化合物及其盐；专利CN86104075(86104075)申请了降血糖药物--噻唑烷二酮类的制备方法，它们在治疗高血糖动物中的应用方法以及含有它们的药物配方；专利CN1252273(99121819.1)申请了新一代磺脲类降血糖药-硒代蛋氨酸铬磺脲类降血糖药的制备和应用；专利CN1465342(02112414.0)申请了一种噻唑烷盐类衍生物降血糖药物；CN1113491(95102055.2)通过选择性还原适宜的1-(2-，3-或4-硝基苯磺酰)衍生物制备具有降血糖活性的新的羟胺化合物。
专利US20030072822申请了一种龙蒿乙醇提取物治疗糖尿病的方法；专利US20040151783申请了一种具有降血糖作用的森林匙羹藤叶多糖成分；专利US20030054015申请了一种可兴奋交感神经的香精的成分，其中柚子油对糖尿病患者具有降血糖效果。专利US20030198697申请了一种从薏苡中提取的脂肪酸成分，具有降血糖作用。专利CN1188651(97100285.1)从野生的石莲花中提取的含有降血糖有效成分的一种高效纯天然的降血糖保健品或药品；专利CN1151303(95117499.1)申请了一种以景天科燕子掌等植物为原料提取降血糖与营养物质的新工艺；专利CN1137411(95105954.8)申请了一种由人参、蛤蚧等12种中药组成的康复胰岛降血糖的中药“康复胰岛降糖丹”及制作方法；专利CN1401318(02138749.4)从中药鬼箭羽中提取、分离具有降血糖作用的有效部位及有效成分，包含萜类、酚酸类等，具有降糖尿病小鼠血糖作用，同时影响丙二醛及超氧化物歧化酶，能够减轻或抑制糖尿病并发症的发生和发展；专利CN1456337(03128089.7)申请了一种含多个降血糖活性成分的苦瓜制品及制备方法；专利CN1306752(00101247.9)公开了一种具有降血糖作用的食用保健饼干一缮食纤维百乐饼干的配方及生产工艺。该饼干主要含有面粉、膳食纤维、活性多糖、山药、苦瓜等，经科学方法研制而成。
专利PCT/KR98/00325申请了一种作为降血糖剂的如分子式(I)的生物类黄酮或含有同样生物类黄酮的植物提取物的降低哺乳动物血糖水平的用途；专利CN1348762(00116167.9)用苦参黄酮制备治疗糖尿病的药剂，和用苦参黄酮与黄芪多糖、人参多糖、人参总甙、麦冬多糖、天花粉多糖、桑叶总多糖有效成分中的至少一种制备治疗糖尿病的复方药剂；专利CN1389146(02138749.4)将青钱柳提取物，配以风味剂，辅助物质，并加入海藻酸钠、羧甲基纤维素、琼脂、黄原胶中两种或两种以上物质作为稳定剂，制得的降血糖、降血压、降血脂保健食品；专利CN1245060(98110398.7)将(1)L-肉碱，(2)壳聚糖，(3)富铬微生物多糖份按一定配方组合在一种高效减肥及降血糖药品或保健食品的制备方法；专利CN1398630(02136740.X)从中药材白术中提取具有降血糖活性的糖复合物、其生产方法和用途。国内外专利均未涉及沙蒿多糖为原料的降糖天然产物的制备方法及应用。
发明内容
本发明的目的是以沙蒿脱去油后的废渣为原料，经过提取、分离、酶解、柱层析等制备的一种天然的能降低血糖，并能减少糖尿病造成的对肝脏、肾脏的损伤即降低血液中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮的含量，以及抑制糖尿病导致体重减轻的天然生物多糖沙蒿多糖及其制备方法和应用。
本发明的步骤如下，
步骤1：沙蒿种子经CO2超临界萃取脱去油脂后，用水充分溶解，原料与水的比例为1∶30-50，在水溶液中加入乙醇，乙醇含量达到50-80％后静止、过夜、离心，收集沉淀，真空干燥得物质A；
步骤2：称取一定重量的物质A，用80-100倍重量的水溶解，在水溶液中加入木瓜蛋白酶进行酶解，再用1∶2-4氯仿和正丁醇混合液进行萃取，收集水层溶液减压浓缩、干燥得物质B，A水溶液与萃取液按体积比比例为4∶1、木瓜蛋白酶用量为24.00U/2000ml水溶液；
步骤3：将物质B通过sephadex G-200柱层析，洗脱液为：0.05molNacl溶液，流速：8ml/h，收集层析后洗脱液每份1.5ml，洗脱液减压浓缩后放入透析袋中透析36-48h，透析液加入2-3倍量乙醇静止、过夜、离心，收集沉淀，真空干燥得纯沙蒿种子天然生物多糖。
分子量、化学组成：分子量Mn约为1.42×105g/mol，第二维利系数是3.64×10-5cm3mol/g2；由L-***糖、D-木糖、D-来苏糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖等六种单糖组成，摩尔比为0.14∶0.09∶1.51∶0.17∶0.07∶1.45，白色粉末。
此天然生物多糖主要用于治疗化学性糖尿病，并能减少糖尿病对肝、肾的损伤等经对大鼠药理实验表明：30天喂养该制剂使高血糖动物的血糖降低13.98％，谷丙转氨酶(GPT)降低25.48％、谷草转氨酶(GOT)降低28.7％、尿素氮含量降低51.27％、显著减缓糖尿病引起的体重下降。
本发明的特点：本发明以沙蒿脱去油后的废渣为原料，经过提取、分离、酶解、柱层析等制备的一种天然的能降低血糖，并能减少糖尿病对肝脏、肾脏的损伤即降低血液中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮的含量，并能抑制糖尿病导致体重减轻的制剂。与其它降糖药相比具有生产工艺简单，降糖效果好，无毒副作用，使用方便，对I型、II型糖尿病等都有较好的疗效。
具体实施方式
实施例1：
沙蒿种子中降糖天然产物的制备方法及其应用
步骤1：沙蒿种子经CO2超临界萃取脱去油脂后的部分用水充分溶解(原料与水的比例为1∶30)，在水溶液中加入乙醇(乙醇含量达到50％)静止、过夜、离心，收集沉淀真空干燥得物质A；
步骤2：称取一定重量的物质A用80倍重量的水溶解，在水溶解中加入木瓜蛋白酶进行酶解，再用氯仿和正丁醇(1∶2)混合液进行萃取，收集水层溶液减压浓缩、干燥得物质B，A水溶液与萃取液按体积比比例为4∶1，木瓜蛋白酶用量为24.00U/2000ml水溶液；
步骤3：将物质B通过sephadex G-200柱层析(洗脱液为：0.05molNacl溶液，流速：8ml/h，收集层析后洗脱液每份1.5ml)，洗脱液减压浓缩后放入透析袋中透析36h，透析液加入2倍量乙醇静止、过夜、离心，收集沉淀真空干燥得纯降糖天然产物。
降糖作用：四氧嘧啶引起的化学型糖尿病大鼠服用本品后血液中血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮均降低结果如下表：
| 对照组 | 高血糖组 | 高血糖组+本品 | ||
| 血糖(m mol/L) | 3.77 | 5.71 | 4.48 | 降低13.98％ |
| 谷丙转氨酶(Iμ/L) | 27.0375 | 77.025 | 51.5136 | 降低降低25.48％ |
| 谷草转氨酶(Iμ/L) | 146.375 | 230 | 165 | 降低28.7％ |
| 尿素氮(m mol/L) | 7.0225 | 26.7425 | 13.0136 | 降低51.27％ |
体重变化：每组体重平均值见(表1)，对照组体重增加，高血糖组体重明显降低，降低率为7.69％，而喂纯天然沙蒿多糖组的糖尿病大鼠个体体重略减轻，降低率为1.56％，说明其对高血糖个体体重的减轻有一定的抑制作用。
表1 实验各组大鼠体重(g/只)
| 天数 | 1 | 30天 | 生长趋势 |
| 高血糖组 | 260.1 | 240.1 | -7.69％ |
| 高血糖+沙蒿多糖 | 269.2 | 265.5 | -1.56％ |
| 对照组 | 266.2 | 289 | +8.56％ |
利用动静态光散射仪、气相色谱、红外光谱、核磁共振等表征纯降糖天然产物的分子量和化学组成。
动静态光散射仪、气相色谱证实：纯降糖天然产物重均分子量Mn约为1.42×105g/mol，第二维利系数是3.64×10-5cm3mol/g2；由L-***糖、D-木糖、D-来苏糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖等六种单糖组成，摩尔比为0.14∶0.09∶1.51∶0.17∶0.07∶1.45，白色粉末。
葡萄糖(Glu)用葡萄糖氧化酶法测定、谷丙转氨酶(GPT)与谷草转氨酶(GOT)分别用连续检测法测定，尿素氮(BuN)使用终点法测定等指标。仪器使用全自动生化分析仪，OLYcupus AU400型(日本)。四氧嘧啶购自sigma公司产品。
服用本品后使四氧嘧啶引起的化学型糖尿病动物的血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮含量均降低，表明降糖效果较好。
实施例2：
沙蒿种子中降糖天然产物的制备方法及其应用
步骤1：沙蒿种子经CO2超临界萃取脱去油脂后的部分用水充分溶解(原料与水的比例为1∶50)，在水溶液中加入乙醇(乙醇含量达到80％)静止、过夜、离心，收集沉淀真空干燥得物质A；
步骤2：称取一定重量的物质A用100倍重量的水溶解，在水溶解中加入木瓜蛋白酶进行酶解，再用氯仿和正丁醇(1∶4)混合液进行萃取，收集水层溶液减压浓缩、干燥得物质B，A水溶液与萃取液按体积比比例为4∶1、木瓜蛋白酶用量为24.00U/2000ml水溶液；
步骤3：将物质B通过sephadex G-200柱层析(洗脱液为：0.05molNacl溶液，流速：8ml/h，收集层析后洗脱液每份1.5ml)，洗脱液减压浓缩后放入透析袋中透析48h，透析液加入3倍量乙醇静止、过夜、离心，收集沉淀真空干燥得纯降糖天然产物。
大鼠试验结果与实施例1同，利用动静态光散射仪、气相色谱、红外光谱、核磁共振等表征纯降糖天然产物的分子量和化学组成与实施例1同。
实施例3：
沙蒿种子中降糖天然产物的制备方法及其应用
步骤1：沙蒿种子经CO2超临界萃取脱去油脂后的部分用水充分溶解(原料与水的比例为1∶40)，在水溶液中加入乙醇(乙醇含量达到70％)静止、过夜、离心，收集沉淀真空干燥得物质A；
步骤2：称取一定重量的物质A用90倍重量的水溶解，在水溶解中加入木瓜蛋白酶进行酶解，再用氯仿和正丁醇(1∶3)混合液进行萃取，收集水层溶液减压浓缩、干燥得物质B，A水溶液与萃取液按体积比比例为4∶1、木瓜蛋白酶用量为24.00U/2000ml水溶液；
步骤3：将物质B通过sephadex G-200柱层析(洗脱液为：0.05molNacl溶液，流速：8ml/h，收集层析后洗脱液每份1.5ml)，洗脱液减压浓缩后放入透析袋中透析36-48h，透析液加入2.5倍量乙醇静止、过夜、离心，收集沉淀真空干燥得纯降糖天然产物。
大鼠试验结果与实施例1同，利用动静态光散射仪、气相色谱、红外光谱、核磁共振等表征纯降糖天然产物的分子量和化学组成与实施例1同。
Claims (3)
1.一种降糖的沙蒿多糖制备方法，其特征在于：利用天然生物沙蒿脱去油后的废渣为原料经下列步骤获得：
步骤1：沙蒿种子经CO2超临界萃取脱去油脂后，用水充分溶解，原料与水的比例为1∶30-50，在水溶液中加入乙醇，乙醇含量达到50-80％后静止、过夜、离心，收集沉淀，真空干燥得物质A；
步骤2：称取一定重量的物质A，用80-100倍重量的水溶解，在水溶解中加入木瓜蛋白酶进行酶解，再用1∶2-4氯仿和正丁醇混合液进行萃取，收集水层溶液减压浓缩、干燥得物质B，A水溶液与萃取液按体积比比例为4∶1、木瓜蛋白酶用量为24.00U/2000ml水溶液；
步骤3：将物质B通过sephadex G-200柱层析，洗脱液为：0.05molNacl溶液，流速：8ml/h，收集层析后洗脱液每份1.5ml，洗脱液减压浓缩后放入透析袋中透析36-48h，透析液加入2-3倍量乙醇静止、过夜、离心，收集沉淀，真空干燥得纯沙蒿种子天然生物多糖。
2.根据权利要求1所述的沙蒿多糖的制备方法制备的沙蒿多糖，其特征在于：它由L-***糖、D-木糖、D-来苏糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖六种单糖组成，摩尔比依次为0.14∶0.09∶1.51∶0.17∶0.07∶1.45，重均分子量Mn为1.42×105g/mol。
3.根据权利要求2所述的沙蒿多糖的应用，其特征在于：用于治疗四氧嘧啶引起的化学型糖尿病。
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