下述的实施例详细解释了本发明,而并非限制本发明的范围。
实施例1描述了两个组合文库的构建;尤其是前述的LD1和LD2文库。
实施例2详细描述了一系列用R1R1对该LD1和LD2文库进行淘选。
实施例3描述了用菠萝蛋白酶(bromelase)处理及未处理的rbc进行吸收,并且用菠萝蛋白酶处理的DⅥ阳性rbc对该LD1和LD2文库的混合物进行一系列的淘选。
实施例4描述了一种间接凝集实验,它用一个兔抗噬菌体抗体做为相当的Coombs试剂,监测Rhesus D特异性Phabs淘选后的富集情况及其特异性。
实施例5描述了将Fab抗体片段用做诊断试剂的制备和纯化。
实施例6描述了用本发明的序列制备完全抗-Rhesus D免疫球蛋白。实施例1重组文库LD1和LD2的构建
a)淋巴细胞的来源
超免疫Rhesus D供体志愿库中的一成年男子通过静脉注射接受了来自已知血型为O RhD
+的男子2ml经包装的rbc以加强免疫。在加强免疫后的第5天和第18天收集PBL并且通过Ficoll梯度离心分离单核细胞(MNC)(Lymphoprep,Milwaukee,WI)。第5天的供体淋巴细胞分析结果列于表4。用酚-氯仿异硫氰酸胍法直接从第5天的MNC中制备RNA(Chomczynski,P.and Sacchi,N.,Anal.Biochem.162:156,1987)。在用于提取RNA之前,第18天的MNC首先在含有10
3U/ml的IL-2(Sandoz Research Cente,Vienna,Austria)和10μg/ml商陆促***原(PWM;Sigma L9379,Buehs,Switerland)的RPMI-1640培养基(Seromed,Basel)中培养3天。表4静脉注射rbc以加强免疫后第5天供体淋巴细胞免疫荧光分析
细胞表面抗原 |
阳性细胞百分数 |
细胞表面抗原 |
阳性细胞百分数 |
CD20CD38CD20/38CD3CD4 |
1520154734 |
CD8CD25CD57CD14HLA-DR |
127.612.5618 |
b)文库的构建
分别构建名为LD1和LD2的两个单独的文库(详述如上),两者分别对应静脉注射加强免疫后第5天和第18天的细胞(加上3天的PWM刺激,总共21天)。用酚-氯仿异硫氰酸胍法从这些细胞中制备总RNA。用10μg的总RNA以寡聚dT引物(400ng)制备cDNA并根据供应商(B0ehringer Mannheim Germany)提供的条件用M-MuLV反转录酶进行反转录。PCR扩增反应以Vogel,M.et al.,在欧洲免疫学杂志24:1200,1994中描述的方法进行。简而言之,100μl PCR反应体系中包含有:含10mM MgCl2的Perkin-Elmer缓冲液,5μlcDNA,合适的5′和3′引物各150ng,4种dNTP,每种为200μM及2U/ml Taq多聚酶(Perkin Elmer,NJ)。用Stratacyte公司的一套引物分别以PCR扩增Fab分子的重链和轻链(引物细节如下所述)。扩增重链所用的上游引物可与六个家族的VH基因杂交而κ和λ链引物用于扩增轻链。下游引物的设计与重链恒定区γ1和γ3的绞链区相配。轻链的下游引物与κ和λ恒定区的3′末端相配。将重链和轻链PCR产物分别收集,经凝胶纯化后分别以XhoⅠ/SpeⅠ和SacⅠ/XbaⅠ(BoehirgerMannheim)进行限制性酶切割。PCR产物经消化后以酚∶氯仿∶异戊醇抽提并通过凝胶切割进行纯化。XhoⅠ/SpeⅠ消化的Fd片段的***及随后的SacⅠ/XbaⅠ消化的轻链片段连入pComb3载体,其转化入XL1-Blue细胞及噬菌体的产生等一系列过程均按(BarbasⅢ,C.F.andLerner,R.A.Companion Methods Enzymol.2:119,1991)描述的方法进行。
将样品转化XL1-Blue大肠杆菌细胞后,提取样品并将之滴定于平板上以确定文库的大小。结果表明LD1和LD2分别为7.5×106和7.7×106cfu(克隆形成单位)的表达文库。
c)PCR引物VHⅠ 5′-CAC TCC CAG GTG CAG CTG CTC GAG TCT GG-3′VHⅡ 5′-GTG CTG TCC CAG GTC AAC TTA CTC GAG TCT GG-3′VHⅢ 5′-GTC CAG GTG GAG GTG CAG CTG CTC GAG TCT GG-3′VHⅣ 5′-GTC CTG TCC CAG GTG CAG CTG CTC GAG TCG GG-3′VHⅤ 5′-GTC TGT GCC GAG GTG CAG CTG CTC GAG TCT GG-3′VHⅥ 5′-GTC CTG TCA CAG GTA CAG CTG CTC GAG TCA GG-3′CHⅠ(gl) 5′-AGC ATC ACT AGT ACA AGA TTT GGG CTC-3′VL(k) 5′-GT GCG AGA TGT GAG CTC GTG ATG ACC CAG TCT CCA-3′CL(k) 5′-T CCT TCT AGA TTA CTA ACA CTC TCC CCT GTT GAA GCT
CTT TGT GAC GGG CGA ACT C-3′VL(l) 5′C TGC ACA GGG TCC TGG GCC GAG CTC GTG GTG ACT CA-3′CL(l) 5′G CAT TCT AGA CTA TTA TGA ACA TTC TGT AGG GGC-3′
d)载体和菌株
用于克隆Fd和轻链的pComb3载体购自Scripps Research InstituteLa Jolla,CA;(BarbasⅢ,C.F.and Lerner,R.A.,Companion MethodsEnzymol.2:119,1991)。用以转化pComb3载体的大肠杆菌XL-1 Blue和VCSM13辅助噬菌体购自Stratacyte(La Jolla,CA)公司。实施例2
以R1R1 rbc从LD1和LD2文库中选择Rhesus D Phabs
a)吸收和生物淘选
在以O型且Rh阳性(R1R1)的rbc上进行每一轮阳性筛选之前,先以O型且Rh阴性的rbc进行连续三次的阴性吸收。新鲜的rbc被收集于ACD(柠檬酸-葡萄糖)抗凝剂中并以0.9%氯化钠洗涤3次。在Hayems溶液中计数rbc并调节其浓度至40×106/ml。吸收:将贮存于1ml PBS/3%BSA液的噬菌体制备物加于O型且Rh阴性的rbc沉淀(16×106rbc)中并在室温下孵育30分钟,此反应是在12ml管(Greiner 187261,Reinach,Switzerland)中进行的,其间要轻轻摇动试管。所有的试管都需要以PBS/3%BSA在室温下预封闭至少1个小时。以300×g,4℃离心5分钟沉淀rbc。小心收集噬菌体上清并将此过程再重复两次。最后一次吸收后,噬菌体上清被加入到O型且Rh阳性的rbc沉淀上(16×106rbc),并在室温下孵育30分钟,其间要轻轻摇动试管。然后以10ml冰冷的PBS洗涤rbc至少5次,以300×g,4℃离心5分钟,随后以200μl pH2.8,76mM柠檬酸室温洗脱6分钟,以200μl 1M Tris中和。以300×g,4℃离心rbc5分钟,然后小心移去包含有洗脱噬菌体的上清并将之在4℃与载体蛋白(0.3%BSA)保存以备重扩增。每一轮淘选得到的Rhesus D特异的Phabs的数量列于表5。
表5以R1R1 rbc从LD1和LD2文库中选择Rhesus D
+Phabs
洗脱的Rhesus D特异噬菌体的数量 |
淘选轮次a) |
文库D1cfu |
文库D2cfu |
123456 |
8×1066×1071×1083×1083×108nd |
4.6×1071.4×1077.9×1071.3×1081×1082.8×108 |
a)在每一轮中,1012 Phabs在试管中与O型且Rhesus阴性rbc孵育(吸收相),随后被从O型且Rhesus阳性(R1R1)的rbc洗脱下来。
nd=未做
cfu=克隆形成单位实施例3
以DⅥ+rbc从LD1和LD2文库混合物中筛选Rhesus D Phabs
a)以O型且Rh阴性,表型1(r′r,Ccddee)和表型2(ryry,CCddEE吸收)
在以O型且Rh DⅥ阳性的rbc上进行每一轮阳性筛选之前,先以O型且Rh阴性的rbc进行连续四次阴性吸收。阴性吸收以下列序列进行:步骤1)以菠萝蛋白酶处理的表型1;步骤2)未经菠萝蛋白酶处理的表型1;步骤3)以菠萝蛋白酶处理的表型2;步骤4)未经菠萝蛋白酶处理的表型2。冷冻的rbc在山梨醇和磷酸缓冲盐水混合液中溶化,并在此溶液放置至少10分钟,然后以磷酸缓冲盐水洗涤5-6次,最后贮存于稳定溶液(DiaMed EC-Solution)中备用。淘选前,以0.9%氯化钠洗涤rbc3次,随后在Hayems溶液中计数。吸收:在步骤1中,将贮存于1ml PBS/3%BSA液的噬菌体制备物加于rbc沉淀(2×108)中并在室温下孵育30分钟,此反应是在12ml管(Greiner 187261,Reinach,Switzerland)中进行的,其间要轻轻摇动试管。所有的试管都需要以PBS/3%BSA在室温下预封闭至少1个小时。以300×g,4℃离心5分钟沉淀rbc。小心收集噬菌体上清并按上面详细描述的在步骤2,3和4中用rbc重复这个过程。
b)用菠萝蛋白质处理Rhesus D阴性r′r和ryry表型的红细胞及Rhesus DⅥ+红细胞
菠萝蛋白酶30(Baxter,Dudingen,Switzerland)以常规血细胞凝集实验的比例处理Rhesus DⅥ+rbc,即,每2×106rbc用10μl菠萝蛋白酶。因此,将菠萝蛋白酶加于所要求量的rbc中并将其在37℃孵育30分钟,随后以0.9%氯化钠洗涤3次,在Hayems溶液中重新计数并将之在PBS/3%BSA中调节到所要求的浓度以备Phab淘选时应用。
c)以菠萝蛋白酶处理过的Rhesus DⅥ+rbc进行生物淘选
以未经菠萝蛋白酶处理的ryry表型的rbc进行最后一次吸收后,噬菌体上清被分成两等份,并分别加入到酶处理和未经酶处理的O型且RhDⅥ+rbc沉淀(40×106)中并且再次在室温下孵育30分钟,其间轻轻摇动孵育物。然后以10ml冰冷的PBS洗涤这两组rbc至少5次,以300×g,4℃离心5分钟,随后以200μl,pH7.8的76mM柠檬酸室温下洗脱6分钟并且以200μl 1M Tris中和。以300×g,4℃离心rbc5分钟,小心移去上清,上清中包含有从经菠萝蛋白酶及未经菠萝蛋白酶处理的DⅥ+rbc上洗脱下的噬菌体并将上清与载体蛋白(0.3%BSA)贮存于4℃以备重扩增。在更进几轮的淘选中,从经菠萝蛋白酶及未经菠萝蛋白酶处理的DⅥ+rbc上洗脱下的噬菌体分别保存并且经步骤1至步骤4的每一步吸收后,都需要分别保存。洗脱步骤与第1轮的淘选略有不同,因为噬菌体不用再分成两份。只有从经菠萝蛋白酶处理的DⅥ+rbc上洗脱下的噬菌体再从经菠萝蛋白酶处理的DⅥ+rbc上洗脱下来,而只有从未经菠萝蛋白酶处理的DⅥ+rbc上洗脱下的噬菌体再从未经菠萝蛋白酶处理的DⅥ+rbc上洗脱下来。每一轮淘选得到的特异性Phabs数列于表6。
表6以Rhesus DⅥ+红血细胞从LD1和LD2文库的混合物中筛选Rhesus D Phabs
洗脱的Rhesus DⅥ+特异噬菌体的数目 |
淘选轮次a) |
未经菠萝蛋白酶处理cfu |
经菠萝蛋白酶处理cfu |
123456 |
1.9×1061.6×1062.4×1073×1061×1078nd |
4.4×1064×1054.1×1075×1071×1083×108 |
a)在每一轮中,1012 Phabs在试管中与两种不同表型的O型且Rhesus阴性rbc孵育后(吸收),随后被从O型且Rhesus DⅥ+的rbc洗脱下来。实施例4
用兔抗-噬菌体抗体监测淘选及确定富集的Phabs的特异性
间接血凝实验
新鲜收集的不同的ABO和Rhesus血型的rbc以0.9%氯化钠洗涤3次并且调节其在0.9%氯化钠或PBS/3%BSA中的浓度为3.5%(45-50×107/ml)。对每一测试条件,50μl rbc和100μl测试对象(沉淀的扩增的噬菌体或对照抗体)在玻璃血型鉴定管(Baxtex,Dudingen,Switzerland)中一同在37℃孵育30分钟。以0.9%氯化钠洗涤3次rbc并与2滴Coombs试剂(Baxtex,Dudingen,Switzerland)或与100μl以1/1000稀释的兔抗噬菌体抗体(通过以噬菌体VCSM13制备物免疫兔子制备,随后通过Affi-Gel Blue柱子纯化并用大肠杆菌吸收以除掉大肠杆菌特异的抗体)。一同孵育做为阳性对照。试管在37℃孵育20分钟,以125×g离心1分钟,通过小心摇动和用放大观察器检测rbc的凝集。
当纯化的Fab用于检测凝集时,亲合纯化的抗Fab抗体(结合点,Birmingham,U.K.)而不是兔抗噬菌体抗体被应用。
表7展示了以R1R1 rbc淘选不同轮数后Phab样品的血凝实验结果。
表8展示了以Rhesus DⅥ+rbc淘选不同轮数后Phab样品的血凝实验结果。
表9展示了来自文库LD1和LD2的单个Fab克隆与部分D变异体的反应模式。
表7以R1R1 rbc淘选后以间接血凝实验监测来自LD1和LD2文库的Phabs
Phab样品淘选轮 |
文库LD1以O型Rh D+rbc |
文库LD2进行的检测(a) |
No.4未稀释1/41/20No.5未稀释1/41/20No.6未稀释1/41/20辅助噬菌体(b)未稀释,1/4,1/20 | ++-++++-ndndnd- | ++/--++-+++++nd- |
a)间接血凝实验用50μl rbc(40×10
7/ml)和100μl Phabs在玻璃管中进行的,Phabs的起始浓度为4×10
11/ml。37℃30分钟后,洗涤rbc 3次并进一步与1/1000稀释的兔抗噬菌体抗体于37℃孵育20分钟。b)M13辅助噬菌体用作阴性对照,因为单独的噬菌体颗粒不表现出非特异的凝集。通过目视估价血凝分级从+++(强凝集)降至-(无凝集)。nd=未做。
表8以Rhesus DⅥ+rbc淘选后,以间接血凝实验监测
来自LD1和LD2文库混合物的Phabs
Phab样品淘选轮 |
rbc表型 |
|
CCDDee |
ccddee |
Cdddee |
CCddEE |
DⅥ(E.J.) |
DⅥ(K.S. |
未经菠萝蛋白酶处理的DⅥ+rbc | a)-++++ | -- | +/-- | (+)- | +/-- | +/-- |
第3轮第5轮 |
经菠萝蛋白酶处理的DⅥ+rbc | ++++++++++ | --- | +/-+/-- | -+/-- | (+)(+++)+++ | +/-+++++ |
第4轮第5轮第6轮 |
LD1-6-17 | | |
与C和E反应 | | |
LD1/2-6-3LD1/2-6-33 |
++++++++ |
-- |
-- |
-- |
+/-+ |
ndnd |
a)通过目视估价血凝分级从++++(强血凝)降至-(无血凝)。
nd=未做注:只有从经菠萝蛋白酶处理的DⅥ+rbc洗脱下的Phabs表现出其对
两种不同DⅥ+供体具血凝反应。
表9源自文库D1和LD2的抗Rhesus D克隆Fab
与部分D变异体反应性的克隆分析
部分D变异体 |
(a)Fab克隆号 |
Rh33 |
DⅢ |
DⅣa |
DⅣb |
DⅤa |
DⅥ |
DⅦ |
LD1-40-52-84-110-117LD2-1-4-5-10-11-14-17-20LD1/2-6-3LD1/2-6-33 |
---(+)-+-+(-)-+++--+-+/- |
(b)++++++++++++++nd+++nd+++-+++++++++++++++ |
+--++-+++-++++++-+++++++++++++++ |
+--+-++++++++++-++++-++++ |
+/-+++-+-+--+-++++/-+/-++++++ |
-------------++ |
+++++++-++++++++++++++++++++++++++ |
a)从每个克隆制备可溶性Fab,随后进行间接血凝实验。b)通过目视估价血凝分级从+++(所有细胞凝集成团)降至-(无细胞凝集)。实施例5用作诊断试剂的Fab抗体片段的制备和纯化
经过实施例2和3描述的生物淘选程序后,对Rhesus D+rbc具特异性凝集反应的一个噬菌体群被筛选到并用于制备噬菌粒DNA。更精确地说,以R1R1 rbc筛选的Phabs经对LD1和LD2文库分别进行第5轮和第6轮生物淘选以及以DⅥ+rbc进行第5轮淘选以分离LD1-6-17克隆后被应用。为了制备可溶性Fab,编码噬菌体颗粒pⅢ尾部蛋白的gⅢ基因序列必须被删除。
用Nucleotrap试剂盒(Machey-Nagel)制备噬菌粒DNA并且通过以NheⅠ/SpeⅠ消化分离到的噬菌粒DNA以除掉gⅢ基因序列,如文献所述进行(Burton,D.R.et al.,美国科学院院报,1989)。转化入XL1-Blue后,单个克隆被选择(名字列于表1)并在含有50μg/ml羟苄青霉素的LB(Luria Broth)中于37℃培养至OD6.0=600nm。以2mM的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)(Biofinex,Praroman,Switzerland)诱导培养并于37℃培养过夜。以10000×g 4℃离心全部培养物30分钟以沉淀细菌。以溶菌酶/DNase溶液处理细菌沉淀以使细胞内的Fab片段释放出来。由于某些Fab被释放至培养上清中,这些上清也要单独收获。这些Fab制备物被混到一起并以60%的硫酸铵沉淀(Merck,Darmstadt,Germany)以浓缩Fab,随后以磷酸缓冲盐水(PBS)充分透析之并以200000×g超速离心以沉淀所有不溶复合物。用PBS(缓冲液A)和PBS+0.5M氯化钠(缓冲液B)梯度洗脱从神经酰胺羟基磷灰石柱上(HTP Econo Cartridge,BioRad,Glattbrugg,Switzerland)纯化Fab制备物。设定的线型梯度是40分钟内Buffer B从0%-100%。在Buffer B 40-60%处Fab为一个单一的峰被洗脱。用一个过氧化物酶偶联的抗Fab(结合位点,Birmingham,U.K.)以免印斑点试验鉴定为阳性的组分被收集混合,以聚乙醇浓缩并对PBS进行充分透析。羟(基)磷灰石柱上的每一个克隆的阳性组分用以经典的间接血凝实验,实验在玻璃管中进行,标准的Coombs试剂(BaxtexDiagnostics AG Dade,抗人血清)或一个抗Fab(结合位点,Birmingham,U.K.)用作交联试剂。示于18页的对部分D变异体有确定的特异性的Fab可被用于未知部分D表型的红血细胞分型。实施例6完全球蛋白基因的构建
用特异引物以多聚酶链式反应(PCR)从编码抗Rhesus D的Fab质粒LD2-14中扩增LD2-14重链V基因(VH基因)。5′引物的序列为:5′-GGGTCGACGCACAGGTGAAACTGCTCGAGTCTGG-3′,而3′引物具有以下序列:5′-GCCGATGTGTAAGGTGACCGTGGTCCCCTTG-3′。
PCR反应用New England Biolabs公司的Deep Vent DNA多聚酶和缓冲液(2mM Mg++)在制造商推荐的条件下进行,包括每种引物为100pmol,4种脱氧核苷酸的浓度为每种脱氧核苷酸250μM。反应进行30个循环,温度条件为:94℃60秒(第1个循环中,延长为2分钟),57℃60秒,72℃60秒(在最后1个循环中,延长为10分钟)。随后加入1单位的Taq DNA聚合酶(Boehringer Mannheim,Germany)于72℃孵育10分钟可完成扩增后3′A突出端的添加。用QIAquick PCR纯化试剂盒(Qiagen,Switzerland)可将PCR产物纯化并用Invitrogen公司的TA克隆试剂盒(San Diego,USA)将PCR产物克隆到载体pCRⅡ。以SalⅠ和BstEⅡ消化得到的质粒TAVH14,用Qiagen公司的QIAquick凝胶提取试剂盒可将经制备性琼脂糖凝胶电泳的VH基因分离到。
包含有无关但完整的人类基因组免疫球蛋白VH基因的Vector # 150(Sandoz Pharma,Basel)以SalⅠ/BstEⅡ切割,可用Qiagen公司的QIAquick凝胶提取试剂盒可将经制备性琼脂糖凝胶电泳的载体片段分离到。用快速DNA连接试剂盒(Boehringer Mannheim,Germany)以20μl体系中,将载体和PCR产物于25℃连接两小时。连接后,反应混合物中加入20μl H2O并以10倍体积的正丁醇抽提以去除盐。然后离心沉淀DNA,真空干燥并重悬于10μl H2O中。以GenePulser(BioRad,Gaithersburg)将5μl的DNA溶液电转(0.1cm电转杯,1.9kV,200Ω,25μFD)入电穿孔感受态大肠杆菌XL1-blue MRF′(Stratagene,LaJolla)中,以SOC培养基稀释电转物,于37℃孵育1小时后,涂布于含有氨苄青霉素(50μg/ml)的LB平板上。得到的克隆的小量制备质粒(Qiagen,Basel),经限制性酶消化以检测合适***片段的存在。
经过上述步骤,载体#150中的无关VH基因被扩增到抗Rhesus DLD-14的VH基因序列取代而产生了质粒cassVH14。得到的免疫球蛋白VH基因构建物的结构通过测序证实,用EcoRⅠ和BamHⅠ消化将之切割下来并通过凝胶纯化。包含有人类基因组免疫球蛋白Cr1基因片段的表达载体#10(Sandoz Pharma,Basel)也以EcoRⅠ和BamHⅠ消化,经制备琼脂糖凝胶电泳分离,与先前从质粒cassVH14中得到的EcoRⅠ/BamHⅠ-VH基因片段相连接并电转入大肠杆菌XL1-blue MRF′,方法如上所述。从而产生了含有完全抗Rhesus D免疫球蛋白重链基因的表达载体14IgG1(图和)。
用特定引物以PCR从同一个抗Rhesus D的Fab质粒LD2-14中扩增了LD2-14轻链V基因(VL基因)。5′引物的序列为:5′-TACGCGTTGTGACATCGTGATGACCCAGTCTCCAT-3′,而3′引物的序列为:5′-AGTCGCTCAGTTCGTTTGATTTCAAGCTTGGTCC-3′。
PCR反应,产物纯化以及随后的克隆步骤与VH基因相似,只是使用了合适的轻链载体。简而言之,VL PCR产物被克隆到pCRⅡ载体中产生质粒TAVL14,以MluⅠ和HindⅢ将PCR产物从TAVL14中切下来并以凝胶抽提分离之。随后VL基因被克隆到载体#151(SandozPharma,Basel)的MluⅠ和HindⅢ位点,这样扩增的抗Rhesus D的LD2-14 VL序列取代了无关VL基因。质粒cassVL-14的序列经证实后,包含VL基因的EcoRⅠ/XbaⅠ片段亚克隆至载体#98的EcoRⅠ和XbaⅠ限制性位点,载体#98(Sandoz Pharma,Basel)包含有人类基因组免疫球蛋白Cκ基因片段。这种方法取代了质粒#98中的无关的VL基因从而产生了包含有完全的抗Rhesus D轻链免疫球蛋白基因的表达载体14kappa。
分别以单切点EcoRⅠ和NotⅠ线性化的表达载体14IgG1和14kappa通过电穿孔法被共转染入小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0-Ag 14(ATCC CRL1581)。电穿孔法如下所述进行:洗涤对数期生长的细胞两次并且以2×107细胞/ml将细胞悬浮于磷酸蔗糖缓冲液中(272mM蔗糖,1mM氯化镁,7mM磷酸二氢钠,pH7.4),将0.8ml的细胞加于0.4cm电转杯中,与15μg线性化的质粒14 IgG1和14kappa混匀,在冰上放置15分钟,以290 Volts,200Ω,25μFD电穿孔,在冰上再放置15分钟,随后细胞被转至一个T75细胞培养瓶中,培养瓶中含20ml冷的RPMⅠ1640培养基(10%热灭活的胎牛血清,50μMβ-琉基乙醇),在室温下放置2小时后,于37℃孵育60小时。然后,将细胞转移至50ml含有1mg/mlG418的培养基中进行筛选。稳定转化子在浓度逐渐升高的氨甲喋呤中被选择以扩增整合的DNA,借此提高相应抗体rD2-14的表达。
通过酶联免疫吸附实验(ELISA)监测培养物上清中针对人类γ1和Kappa链的rD2-14的表达(SrD2-14)。按照Ph.Eur.中的抗D分析方法对Rhesus D特异的免疫球蛋白进行定量,结果表明在这样的上清中凝集抗体的量为1.1-11.4μg/ml。他们对Rhesus阴性rbc检测结果为凝集阴性并且与大肠杆菌表达的Fab LD2-14对部分D变异体有相同的凝集能力。数据列于表10。表10抗-Rhesus D Fab克隆LD2-14与抗体rD2-14
对部分D变异体反应性的比较分析
|
部分D变异体 |
|
R1R1 |
rr |
Rh33 |
DⅢ |
DⅣa |
DⅣb |
DⅤa |
DⅥ |
DⅦ |
LD2-14SrD2-14TCB |
++++++- |
--- |
++++++ |
++++++ |
++++++ |
++++++ |
++++++ |
-- |
++++++ |
通过目视估价将凝集反应分级从+++(所有细胞凝集成一团)降至-(无细胞凝集)。LD2-4:按实施例5的方法制备的Fab片段;SrD2-14:含有抗体rD2-14的细胞培养物上清;TCB:未转染细胞培养物上清。
序列表
(1)一般信息:
(ⅰ)申请人:
(A)名称:Rotkreuzstiftung Zentrallaboratorium
Blutspendedienst
(B)街道:Wankdorfstrasse 10
(C)城市:Bern 22
(E)国家:瑞士
(F)邮政编码:CH-3000
(ⅱ)发明题目:
能够形成特异性针对Rhesus D抗原的抗原结合结构的多肽,编码这些多肽的DNA,包括Fab片段的完整抗体及它们的制备方法
(ⅲ)序列数目:64
(ⅳ)计算机可读形式:
(A)媒介类型:软盘
(B)计算机:IBM PC兼容机
(C)操作***:PC-DOS/MS-DOS
(D)软件:Patentln Release#1.0,Version#1.30(EPO)
(ⅴ)当前申请数据:
申请号:PCT/EP 97/03253
(ⅵ)优先申请数据:
(A)申请号:EP 96810421.6
(B)申请日期:1996年6月24日
(2)SEQ ID NO:1的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:375个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型(haplotype):二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD1
(B)克隆:LD1-40
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第14号染色体
(B)图位:q32.3
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
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115 120 125
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115 120 125
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115 120 125
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(A)生物:人类
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(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
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(A)文库:cDNA文库,LD1
(B)克隆:LD1-84
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(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
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(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..315
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
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(E)单元型:二倍体
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(A)染色体/片段:第14号染色体
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(B)位置:1..375
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
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20 25 30GCC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG 144Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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115 120 125
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50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Lle Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe65 70 75 80Leu His Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
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(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD1
(B)克隆:LD1-110
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..315
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
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(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
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(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
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115 120 125
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85 90 95Ala Arg Glu Thr Ser Val Arg Leu Gly Tyr Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr
100 105 110Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Ile Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:19的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:318个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD1
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100 105
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100 105
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(A)染色体/片段:第14号染色体
(B)图位:q32.3
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115 120 125
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100 105 110Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:23的信息:
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(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
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(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
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100 105 110
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100 105 110
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(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-4
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第14号染色体
(B)图位:q32.3
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..375
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(91..105,148..198,295..342)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:25:CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCG GGG GGA GGC GTG GTC CAG CCG GGG GGG 48Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15TCC CTG AGA CTC TCC TGT GAA GCG TCT GGA TTC ACC CTC AGA AGT TCT 96Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Arg Ser Ser
20 25 30GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCT GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG 144Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45GCA CTT ATA TGG TTT GAT GGA AGT ATC AGA TCG TAT GCA GAA TCC GTG 192Ala Leu Ile Trp Phe Asp Gly Ser Ile Arg Ser Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC ACT TCC AAG AAC ACC CTA TAT 240Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80CTC CAA ATG CGC AGT CTG AGT GCC GAC GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT 288Leu Gln Met Arg Ser Leu Ser Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95GCG AGA GAC AAG GCG GTT CGG GGA ATT AGC AGG TAC AAC TAT TAC ATG 336Ala Arg Asp Lys Ala Val Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Met
100 105 110GAC GTC TGG GGC AAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 375Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:26的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:125个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:26:Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Arg Ser Ser
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85 90 95Ala Arg Asp Lys Ala Val Arg Gly Ile Ser Arg Tyr ASn Tyr Tyr Met
100 105 110Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:27的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:312个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-4
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..312
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(64..96,142..162,259..282)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:27:GTG ATG ACC CAG TCT CCA TCC TCC CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC AGA 48Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg1 5 10 15GTC ACC ATC ACT TGC CGG ACA AGT CAG ACC ATT AGC AGA AAT TTA AAT 96Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Thr Ile Ser Arg Asn Leu Asn
20 25 30TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG CTC CTG ATC TAT GCT 144Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
35 40 45ACA TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGT GGC AGT GGA 192Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
50 55 60TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AAT AGT CTA CAA CCT GAA GAT 240Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80TTT GCA ACT TAC TAC TGT CAA CAG AGT TAC ACT ACC CCT TCG TTC GGC 288Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Ser Phe Gly
85 90 95CAA GGG ACC AAG GTG GAA ATC AAA 312Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100
(2)SEQ ID NO:28的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:104个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:28:Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg1 5 10 15Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Thr Ile Ser Arg Asn Leu Asn
20 25 30Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
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50 55 60Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Ser Phe Gly
85 90 95Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100
(2)SEQ ID NO:29的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:375个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-4
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..375
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(91..105,148..198,295..342)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:29:CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTC CAG CCG GGG GGG 48Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15TCC CTG AGA CTC TCC TGT GTA GCG TCT GGA TTC ACC TTC AGG AGT TAT 96Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGC CTG GAG TGG GTG 144Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45GCT TTT ATA TGG TTT GAT GGA AGT AAT AAA GGA TAT GTA GAC TCC GTG 192Ala Phe Ile Trp Phe Asp Gly Ser Ash Lys Gly Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC CGA GAC AAT TCC AAG AAC ATG CTC TAT 240Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Met Leu Tyr65 70 75 80CTG CAA ATG AAT AGC CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCT GTA TAT TAT TGT 288Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95GCG AGA GAG AAG GCG CTT CGG GGA ATC AGT AGA TAC AAC TAT TAC CTG 336Ala Arg Glu Lys Ala Leu Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Leu
100 105 110GAC GTC TGG GGC AAG GGG GCC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 375Asp Val Trp Gly Lys Gly Ala Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:30的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:125个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:30:Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45Ala Phe Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Lys Gly Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Met Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Ara Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95Ala Arg Glu Lys Ala Leu Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Leu
100 105 110Asp Val Trp Gly Lys Gly Ala Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:31的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:318个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-5
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..318
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(64..96,142..162,259..288)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:31:GTG ATG ACC CAG TCT CCA TCC TCC CTG TCT GCA TCT ATA GGC GAC AGA 48Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly Asp Arg1 5 10 15GTC ACC ATC ACT TGC CGG GCA AGT CAG AGC GTT ACC AGG TCT TTA AAT 96Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Arg Ser Leu Asn
20 25 30TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGG AAA GCC CCT AGG CTC CTA ATC TTT GCT 144Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile Phe Ala
35 40 45GCG TCC ACT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGT GGC AGT GGA 192Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
50 55 60TCT GGG ACA GAT TTC ACC CTC ACC ATC AGC AGT CTG CAA CCT GAG GAT 240Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Tle Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80TTT GGA ACT TAC TAC TGT CAA CAG AAT TAC AGG ACC CCT CAG TGG ACG 288Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr Arg Thr Pro Gln Trp Thr
85 90 95TTC GGC CAA GGG ACC AAG GTA GAA ATC AAA 318Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:32的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:106个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
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50 55 60Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr Arg Thr Pro Gln Trp Thr
85 90 95Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:33的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:378个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
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(A)染色体/片段:第14号染色体
(B)图位:q32.3
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..378
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
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115 120 125
(2)SEQ ID NO:34的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:126个氨基酸
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35 40 45Ala Phe Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Lys Gly Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Met Val Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Tyr
85 90 95Cys Ala Arg Glu Lys Ala Leu Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr
100 105 110Leu Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:35的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:333个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-10
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第22号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..333
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
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100 105 110
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100 105 110
(2)SEQ ID NO:37的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:375个碱基对
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(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-11
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第14号染色体
(B)图位:q32.3
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
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(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(91..105,148..198,295..342)
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20 25 30GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCT GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG 144Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45GCA CTT ATA TGG TTT GAT GGA AGT ATC AGA TCG TAT GCA GAA TCC GTG 192Ala Leu Ile Trp Phe Asp Gly Ser Ile Arg Ser Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC ACT TCC AAG AAC ACC CTA TAT 240Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80CTC CAA ATG CGC AGT CTG AGT GCC GAC GAC ACC GCT GTG TAT TAC TGT 288Leu Gln Met Arg Ser Leu Ser Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95GCG AGA GAC AAG GCG GTT CGG GGA ATT AGC AGG TAC AAC TAT TAC ATG 336Ala Arg Asp Lys Ala Val Ayg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Met
100 105 110GAC GTC TGG GGC AAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 375Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:38的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:125个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:38:Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Arg Ser Ser
20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45Ala Leu Ile Trp Phe Asp Gly Ser Ile Arg Ser Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Arg Ser Leu Ser Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95Ala Arg Asp Lys Ala Val Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Met
100 105 110Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:39的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:315个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-11
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..315
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(64..96,142..162,259..285)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:39:GTG TTG ACC CAG TCT CCA TCC TCC CTG TCT GCA TCT ATA CGA GAC AGA 48Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Arg Asp Arg1 5 10 15GTC ACC ATC ACT TGC CGG GCA AGT CAG AAC ATT GGC AGT TAT TTA AAT 96Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Gly Ser Tyr Leu Asn
20 25 30TGG TAT CAG CAC AAA CCA GGG ACA GCC CCT AAA CTC CTG ATC TAT GCT 144Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
35 40 45GTA TCC GCr TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCG AGG TTC AGT GGC AGT AGA 192Val Ser Ala Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg
50 55 60TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGT CTG CAA CCT GAA GAT 240Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80TTT GCA ACT TAC TAC TGT CAA CAG AGT TAC AGT CCC CCG TAC ACT TTC 288Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln (ln Ser Tyr Ser Pro Pro Tyr Thr Phe
85 90 95GGC CAG GGG ACC AAC CTG CAG ATC AAA 315Gly Gln Gly Thr Asn Leu Gln Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:40的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:105个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:40:Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Arg Asp Arg1 5 10 15Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Gly Ser Tyr Leu Asn
20 25 30Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
35 40 45Val Ser Ala Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg
50 55 60Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Pro Pro Tyr Thr Phe
85 90 95Gly Gln Gly Thr Asn Leu Gln Ile lys
100 105
(2)SEQ ID NO:41的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:375个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-14
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第14号染色体
(B)图位:q32.3
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..375
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(91..105,148..198,295..342)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:41:CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC GTG GTC CAG CCG GGG GGG 48Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15TCC CTG AGA GTC GCC TGT GTA GCG TCT GGA TTC ACC TTC AGG AAT TTT 96Ser Leu Arg Val Ala Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Phe
20 25 30GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG 144Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45GCT TTT ATT TGG TTr GAT GCA AGT AAT AAA GGA TAT GGA GAC TCC GTT 192Ala Phe lle Trp Phe Asp Ala Ser Asn Lys Gly Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60AAG GGC CGA TTC ACC GTC TCC ACA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTC TAT 240Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80CTG CAA ATG AAC GGC CTG AGA GCC GAA GAC ACG GCT GTA TAT TAT TGT 288Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95GCG AGA GAG AAG GCG GTT CGG GGA ATT AGT AGA TAC AAC TAC TAC ATG 336Ala Arg Glu Lys Ala Val Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Met
100 105 110GAC GTC TGG GGC AAG GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 375Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:42的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:125个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:42:Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Val Ala Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Phe
20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45Ala Phe Ile Trp Phe Asp Ala Ser Asn Lys Gly Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95Ala Arg Glu Lys Ala Val Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Met
100 105 110Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:43的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:315个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-14
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..315
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(64..96,142..162,259..285)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:43:GTG ATG ACC CAG TCT CCA TCC TCC CTG TCT GCA TCT GTG GGA GAC AGA 48Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg1 5 10 15GTC ACC ATC ACT TGC CGG GCA AGT CAG AGC ATT ATC AAC AAT TTA AAT 96Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ile Asn Asn Leu Asn
20 25 30TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGC AAA GCC CCT GAA CTC CTG ATC TAT GCT 144Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Glu Leu Leu Ile Tyr Ala
35 40 45GCA TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCT TCA AGG TTC CGT GGC AGT GGA 192Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly Ser Gly
50 55 60TCT GGG AGA GAT TTC ACT CTC ACC GTC ACC AGT CTG CAA CCT GAA GAT 240Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Val Thr Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80TTT GCA ACT TAC TAC TGT CAA CAG AGT TAC AGT ACC CTG TGG ACG TTC 288Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Leu Trp Thr Phe
85 90 95GGC CAA GGG ACC AAG GTG GAA ATC AAA 315Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:44的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:105个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:44:Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg1 5 10 15Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ile Asn Asn Leu Asn
20 25 30Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Glu Leu Leu Ile Tyr Ala
35 40 45Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly Ser Gly
50 55 60Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Val Thr Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Leu Trp Thr Phe
85 90 95Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:45的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:375个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库
(B)克隆:LD2-17
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第14号染色体
(B)图位:q32.43
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..375
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(91..105,148..198,295..342)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:45:CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC GTG GTC CAG CCG GGG GGG 48Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15TCC CTG AGA CTC TCC TGT GTA GCG TCT GGA TTC ACC TTC AGG AGT TAT 96Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGC CTG GAG TGG GTG 144Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45GCT TTT ATA TGG TTT GAT GGA AGT AAT AAA GGA TAT GTA GAC TCC GTG 192Ala Phe Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Lys Gly Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC CGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTC TAT 240Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80CTG CAA ATG AAG AGC CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCT GTA TAT TAT TGT 288Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95GCG AGA GAG AAG GCG CTT CGG GGA ATC AGT AGA TAC AAC TAT TAC CTG 336Ala Arg Glu Lys Ala Leu Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Leu
100 105 110GAC GTC TGG GGC AAG GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 375Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:46的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:125个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:46:Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45Ala Phe Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Lys Gly Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95Ala Arg Glu Lys Ala Leu Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Leu
100 105 110Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:47的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:315个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-17
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..315
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(64..96,142..162,259..285)
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20 25 30TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGG ACA GCC CCT AAG CTC CTG ATC TAT GCT 144Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
35 40 45GCA TCC AGG TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGT GGC AGT GGG 192Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
50 55 60TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC ACT CTG CAA CCT GAA GAT 240Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Thr Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80TTT GCG ACT TAC TAC TGT CAA CAG AGT TAC AGT GCC CCT TGG ACG TTC 288Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ala Pro Trp Thr Phe
85 90 95GGC CAA GGG ACC AAG CTG GAA ATC AAA 315Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:48的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:105个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:48:Val Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg1 5 10 15Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Arg Ser Phe Leu Ser
20 25 30Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
35 40 45Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
50 55 60Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Thr Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ala Pro Trp Thr Phe
85 90 95Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:49的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:375个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-20
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第14号染色体
(B)图位:q32.3
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
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(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
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20 25 30GCC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGC CTG GAG TGG GTG 144Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
50 55 60GCT TTT ATA TGG TTT GAT GGA AGT AAT AAA GGA TAT GTA GAC TCC GTG 192Ala Phe Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Lys Gly Tyr Val Asp Ser Val65 70 75 80AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC CGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTC TAT 240Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
85 90 95CTG CAA ATG AAG AGC CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCT GTA TAT TAT TGT 288Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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205 210 215GAC GTC TGG GGC AAG GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 375Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:50的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:125个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:50:Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Ser Arg Ser Tyr
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85 90 95Ala Arg Glu Lys Ala Leu Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Leu
100 105 110Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:51的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:315个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD2
(B)克隆:LD2-20
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
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(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
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20 25 30TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG CTC CTG ATC TAT GCT 144Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Lou Leu Ile Tyr Ala
35 40 45GCA TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGT GGC AGT GGA 192Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
50 55 60TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGT CTG CAA CCT GAA GAT 240Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80TTT GCA ACT TAC TAC TGT CAA CAG AGT TAC AGT ACC CGA TTC ACT TTC 288Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Arg Phe Thr Phe
85 90 95GGC CCT GGG ACC AAA GTG GAT ATC AAA 315Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
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(ⅰ)序列特征:
(A)长度:105个氨基酸
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20 25 30Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
35 40 45Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
50 55 60Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Arg Phe Thr Phe
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100 105
(2)SEQ ID NO:53的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:384个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
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(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-未端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD1
(B)克隆:LD1-6-17
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第14号染色体
(B)图位:q32.3
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..384
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(91..105,148..198,295..351)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:53:CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC GTG GTC CAG CCT GGG AGG 48Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg1 5 10 15TCC CTG AGA CTT TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTT ACC TTC AGT AGC TAT 96Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG 144Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45GCA GAT ATA TGG TTT GAT GGA GGT AAT AAA CAT TAT GCA GAC TTC GTG 192Ala Asp Ile Trp Phe Asp Gly Gly Asn Lys His Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG GTG TAT 240Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr65 70 75 80CTA CAA ATG AAC AGC CTG AGA GTC GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT 288Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95GCG AGG GAT TAC TAT AGC GTT ACT AAG AAA CTC AGA CTC CAC TAC TAC 336Ala Arg Asp Tyr Tyr Ser Val Thr Lys Lys Leu Arg Leu His Tyr Tyr
100 105 110TAC TAC ATG GAC GTC TGG GGC AAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 384Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
220 225 230
(2)SEQ ID NO:54的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:128个氨基酸
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(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:54:Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45Ala Asp Ile Trp Phe Asp Gly Gly Asn Lys Eis Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95Ala Arg Asp Tyr Tyr Ser Val Thr Lys Lys Leu Arg Leu His Tyr Tyr
100 105 110Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:55的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:315个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD1
(B)克隆:LD1-6-17
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..315
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(64..96,142..162,259..285)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:55:GTG ATG ACC CAG TCT CCA TCC TCC CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC AGA 48Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg1 5 10 15GTC ACC ATC ACT TGC CGG GCA AGT CAG GGC ATT AGA AAT GAT TTA ACC 96Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Thr
20 25 30TGG TAT CAG CAA AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG CTC CTG ATC TAT GCT 144Trp Tyr Gln Gln Lys Pro GLy Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
35 40 45GCA TCC AAT TTA CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGC GGC AGT GGA 192Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
50 55 60TCT GGC ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGC CTG CAG CCT GAA GAT 240Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80TTT GCA ACT TAT TAC TGT CTA CAA GAT AAC AAT TTC CCG TAC ACT TTT 288Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Asn Asn Phe Pro Tyr Thr Phe
85 90 95GGC CAG GGG ACC AAG CTG GAG ATC AAA 315Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:56的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:105个氨基酸
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20 25 30Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
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50 55 60Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Asn Asn Phe Pro Tyr Thr Phe
85 90 95Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:57的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:375个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD1和LD2
(B)克隆:LD1/2-6-3
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第14号染色体
(B)图位:q32.3
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..375
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(91..105,148..198,295..342)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:57:CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC GTG GTC CAG CCG GGG GGG 48Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15TCC CTG AGA GTC GCC TGT GTA GCG TCT GGA TTC ACC TTC AGG AAT TTT 96Ser Leu Arg Val Ala Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Phe
20 25 30GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG 144Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45GCT TTT ATT TGG TTT GAT GCA AGT AAT AAA GGA TAT GGA GAC TCC GTT 192Ala Phe Ile Trp Phe Asp Ala Ser Asn Lys Gly Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60AAG GGC CGA TTC ACC GTC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTC TAT 240Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80CTG CAA ATG AAC GGC CTG AGA GCC GAA GAC ACG GCT GTA TAT TAT TGT 288Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95GCG AGA GAG AAG GCG GTT CGG GGA ATT AGT AGA TAC AAC TAC TAC ATG 336Ala Arg Glu Lys Ala Val Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Met
100 105 110GAC GTC TGG GGC AAG GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 375Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:58的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:125个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:58:Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Val Ala Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Phe
20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45Ala Phe Ile Trp Phe Asp Ala Ser Asn Lys Gly Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95Ala Arg Glu Lys Ala Val Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Met
100 105 110Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:59的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:315个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD1和LD2
(B)克隆:LD1/2-6-3
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..315
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(64..96,142..162,259..285)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:59:GTG ATG ACC CAG TCT CCA TCC TCC CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC AGA 48Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg1 5 10 15GTC ACC ATC ACT TGC CGG GCA AGT CAG AGC ATT ATC AGA TAT TTA AAT 96Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ile Arg Tyr Leu Asn
20 25 30TGG TAT CAG CAC AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG CTC CTG ATC CAT ACT 144Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile His Thr
35 40 45GCA TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCG TCA AGG TTC AGT GGC AGT GTA 192Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Val
50 55 60TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGT CTG CAA CCT GAA GAT 240Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80TTT GCA ACT TAC TAC TGT CAA CAG AGT TAC ACT ACC CCG TAC ACT TTT 288Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Phe
85 90 95GGC CAG GGG ACC AAG CTG CAG ATC AAA 315Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:60的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:105个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:60:Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg1 5 10 15Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ile Arg Tyr Leu Asn
20 25 30Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile His Thr
35 40 45Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Val
50 55 60Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Phe
85 90 95Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:61的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:375个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
(ⅳ)反义:否
(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD1和LD2
(B)克隆:LD1/2-2-33
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第14号染色体
(B)图位:q32.3
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..375
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(91..105,148..198,295..342)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:61:CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC GTG GTC CAG CCG GGG GGG 48Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15TCC CTG AGA GTC GCC TGT GTA GCG TCT GGA TTC ACC TTC AGG AAT TTT 96Ser Leu Arg Val Ala Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Phe
20 25 30GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG 144Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45GCT TTT ATT TGG TTT GAT GCA AGT AAT AAA GGA TAT GGA GAC TCC GTT 192Ala Phe Ile Trp Phe Asp Ala Ser Asn Lys Gly Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60AAG GGC CGA TTC ACC GTC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTC TAT 240Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80CTG CAA ATG AAC GGC CTG AGA GCC GAA GAC ACG GCT GTA TAT TAT TGT 288Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95GCG AGA GAG AAG GCG GTT CGG GGA ATT AGT AGA TAC AAC TAC TAC ATG 336Ala Arg Glu Lys Ala Val Arg Gly Ile Ser Arg Tyr Asn Tyr Tyr Met
100 105 110GAC GTC TGG GGC AAG GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 375Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:62的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:125个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:62:Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Val Ala Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Phe
20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45Ala Phe Ile Trp Phe Asp Ala Ser Ash Lys Gly Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95Ala Arg Glu Lys Ala Val Arg Gly Ile Ser Arg Tyr ASn Tyr Tyr Met
100 105 110Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
(2)SEQ ID NO:63的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:315个碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:cDNA至mRNA
(ⅲ)假定的:否
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(ⅴ)片段类型:N-末端
(ⅵ)最初来源:
(A)生物:人类
(C)分离个体:超免疫Rhesus D供体
(D)发育阶段:成年人
(E)单元型:二倍体
(G)细胞类型:外周B淋巴细胞
(ⅶ)最近来源:
(A)文库:cDNA文库,LD1和LD2
(B)克隆:LD1/2-6-33
(ⅷ)在基因组中的位置:
(A)染色体/片段:第2号染色体
(B)图位:p11
(C)单位:染色体带数目
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDS
(B)位置:1..315
(D)其他信息:/产物=“免疫球蛋白,Fab”
(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:CDR1,CDR2,CDR3
(B)位置:连接(64..96,142..162,259..285)
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:63:GTG ATG ACC CAG TCT CCA TCC TTC CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC AGA 48Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg1 5 10 15GTC ACC ATC ACT TGC CGG GCA AGT CAG AGC ATI ATC AGA TAT TTA AAT 96Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ile Arg Tyr Leu Asn
20 25 30TGG TAT CAG CAC AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG CTC CTG ATC CAT GCT 144Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile His Ala
35 40 45GCA TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCG TCA AGG TTC AGT GGC AGT GTA 192Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Val
50 55 60TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGT CTG CAA CCT GAA GAT 240Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80TTT GCA ACT TAC TAC TGT CAA CAG AGT TAC ACT ACC CCG TAC ACT TTT 288Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Phe
85 90 95GGC CAG GGG ACC AAG CTG CAG ATC AAA 315Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Lys
100 105
(2)SEQ ID NO:64的信息:
(ⅰ)序列特征:
(A)长度:105个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(D)拓扑结构:线性
(ⅱ)分子类型:蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:64:Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg1 5 10 15Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ile Arg Tyr Leu Asn
20 25 30Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile His Ala
35 40 45Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Val
50 55 60Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp65 70 75 80Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Phe
85 90 95Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Lys
100 105