CN1222615C - 根据人呼吸道胰蛋白酶基因多态性分析体质 - Google Patents

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Abstract

一种方法，根据人呼吸道胰蛋白酶基因多态性，预测个体对特定疾病的体质，治疗对病人的疗效或治疗后的预后，此特定疾病是例如呼吸系疾病，包括如慢性阻塞性肺病，鼻窦支气管综合征，肺气肿，弥散性细支气管炎和支气管扩张。

Description

根据人呼吸道胰蛋白酶基因 多态性分析体质
技术领域
本发明涉及一种方法，通过分析人呼吸道胰蛋白酶样酶的基因多态性，预测对某些特定疾病发病易感的体质，预测治疗方法对患有这类疾病病人的疗效，或者预测治疗的预后。
技术背景
最近，有关基因的研究不仅在由于单个基因的缺失或突变引起的遗传疾病方面取得了进展，而且在由牵涉到几个遗传诱因和环境因子引起的多因素疾病方面也取得了进展。因此，缺失或点突变和与多因素疾病有关的同种型，以及不影响实际氨基酸翻译序列的遗传成分(内含子或启动子)的进一步突变，已被考虑是这类疾病的危险因素。
发明效果
对骨密度与维生素D受体内含子的基因多态性之间相互关系的认识，作为骨病领域内的现有技术已被发表(Morvison.N.A等，自然，367：284-287，1994)。对于循环器官已报道，血管紧张肽转化酶的I型(***型)和D型(缺失型)基因多态性与心肌梗塞的发作相关联(Cambien.F等，自然359：641-644，1992)，血管紧张素原的M235T氨基酸取代，以及G-6A启动子区的多态性与原发性高血压的发病相关联(Inoue I等，临床诊应杂志，99：1786-1797，1997)。而且，在神经***方面已报道痴呆症的发病与apoE蛋白的同种型之间有关联。在癌症相关的领域，对于谷胱甘肽S-转移酶的基因多态性与癌症发病之间的关系已进行了许多研究。对于呼吸***疾病，已报导哮喘的发作或病理状态与血管紧张肽转化酶的基因多态性有关(Benessiano，J等，***反应与临床免疫学杂志99)1(：53-57，1997)。
而且，注意力已投向作为不同病人对治疗药物敏感性差异原因之一的遗传背景，并且甚至希望通过医学部位提供定向性，例如借助于对基因多态性的诊断，根据单个病人对药物的敏感性选择治疗方法。有人认为，根据基因多态性，通过选择可预期药物效果的病人组，在药物开发研究的临床试验中是有效的(Kleyz K.W.等，科学，281：1820-1821，1998)。有关血管紧张肽转化酶〔ACE(血管紧张肽转化酶)〕内含子的基因多态性和ACE抑制剂作用的效果(Yoshide，H.等，临床研究杂志，96：2162-2161，1995)，以及有关β2-肾上腺素能受体的基因多态性和β-激动剂对哮喘作用的报告(Liggert.S.B.Am.J.Respir.Crit.Care Med.156.(4Pt2)：S 156-162，1997)等，已被引证作为有关药物敏感性和基因多态性的常规性报告。
另一方面，已经从患有慢性呼吸道疾病的病人痰中纯化出与本发明有关的人呼吸道胰蛋白酶样酶(日本未审定专利出版物No.7-067640和Yasuoka，S.等美国呼吸道细胞分子生物学杂志16：300-308，1997)，并且已经将它的氨基酸序列和cDNA序列弄清楚(日本未审定专利出版物No.8-89246和Yameoke，K.等，生物化学杂志，273(19)：11895-11901，1998)。对于这种酶所具有的活性，已在体外进行了一些研究。因为这种酶对某些细胞因子的产生具有促进作用，例如对从包括与粘液纤毛运动有关的人支气管上皮细胞系产生的IL-8或GM-CSF有促进作用，所以考虑此酶可能与呼吸道炎症病理状态相关联(Terao，Norike等，日本呼吸学协会，1998)。因为此酶具有例如对血纤维蛋白原水解的酶性，以及对血纤维蛋白溶酶原激活剂(尿液酶前体)的激活作用(Yoshinaga，Junko等，关于在病理生理学及治疗中的蛋白酶和抑制剂的学术会议，1998)，所以设想此酶可能通过在呼吸道粘膜表面形成血纤维蛋白，或者在慢性呼吸道疾病中修复其病理状态而具有抗炎症作用，并且还考虑此酶可能与癌症转移有关等等。对于此酶在体内与生理功能或病理状态的关系还没有被充分阐明，并且关于基因，对于没有相应于实际被翻译的氨基酸序列的基因成分(内含子或启动子)还完全不了解。另外，关于人呼吸道胰蛋白酶样酶的基因多态性是否存在与疾病的关系，或者基因多态性与疾病的关系，迄今尚未进行过研究。
另外，借助于基因分析，通过对疾病相关体质的预测，可以提供关于预测特殊疾病发作，治疗预后，适当治疗和给药方法的选择等等的许多信息。因此，许多医生和病人都希望进行这种预测，并且可能进一步预防疾病的发作和及早治疗。所以有人认为，这种预测与降低对于今后的医疗护理成为必不可少的医疗护理费用有关。
但是，要找出与疾病有关的基因，并建立对它的分析方法是非常困难的，并且如上面所述，几乎没有可用于识别与疾病关系的基因分析法的实例。因此，强烈地希望发展基因分析技术，用于使多种疾病相关的体质成为可预测的。
另一方面，目前尚未阐明人呼吸道胰蛋白酶样酶与什么疾病有关。
发明内容
作为考虑到现有技术存在的问题而进行深入研究的结果，本发明者设计了一个引物，用于基因扩增在人呼吸道中特异表达的人呼吸道胰蛋白酶样酶基因组上的内含子成分，新确定了所扩增基因片段的末端和在外显子/内含子边缘部分新确定DNA序列的DNA序列，发现在扩增的基因片段和新确定的DNA序列中存在基因多态性，并且还进一步通过分析基因多态性，首先发现人呼吸道胰蛋白酶样酶的基因型与各个病人的疾病有关，从而获得了本发明。
也就是说，本发明的目的是提供一种方法，用于通过分析人呼吸道胰蛋白酶样酶的基因多态性，预测对特殊疾病发病易感人的体质，或者预测治疗对病人的效果或治疗的预后。
进而本发明是一种用于通过分析人呼吸道胰蛋白酶样酶的基因多态性，来诊断粘液纤毛生物防御***中异常性的方法，以及一种用于预测对某些疾病发病易感个人的体质，预测治疗对病人的效果或治疗预后的方法。
而且，本发明是一种含有人呼吸道胰蛋白酶样酶内含子的部分或全部碱基序列的基因片段。
附图简述：
图1显示含有一个基因内含子区的DNA片段琼脂糖凝胶电泳图谱，此基因是由基因扩增获得，它编码人呼吸道胰蛋白酶样酶的成熟蛋白质。可观察到，泳道1和5是标志物(从上面开始是10kb，7kb，5kb，4kb，3kb，2.5kb，2kb，1.5kb和1kb)，泳道2是由引物A1(序列号7)和A2(序列号8)扩增的约6kb的DNA片段，泳道3是由引物B1(序列号9)和B2(序列号10)扩增的约1.5kb的DNA片段，以及泳道4是由引物C1(序列号11)和C2(序列号12)扩增的约3.4kb DNA片段。
图2显示含有一个基因内含子区的DNA片段琼脂糖凝胶电泳图谱，此基因是由基因扩增获得，它编码人呼吸道胰蛋白酶样酶的前体肽。可观察到，泳道1和4是标志物(从上面开始是10kb，7kb，5kb，4kb，3kb，2.5kb，2kb，1.5kb和1kb)，泳道2是由引物D1(序列号13)和D2(序列号14)扩增的大约5.5kb的DNA片段，泳道3是由引物E1(序列号15)和E2(序列号16)扩增的大约5kb的DNA片段。
图3图解说明在人呼吸道胰蛋白酶样酶基因组上内含子A，B和C的相对位置，并显示由TaqI检测的内含子A，以及由MboI和BstUI检测的内含子C的基因多态性(RFLP)的琼脂糖凝胶电泳图谱。
实施本发明的最佳方式
根据本发明，在此提供了一种方法，用于预测个人体质与特定疾病的关系，并提供了一个基因片段或DNA序列，用于对其进行基因分析。
将属于慢性阻塞性肺病(COPD)或粘液纤毛生物防御***异常的呼吸***疾病，肺癌，特别是肺气肿(PE)，鼻窦支气管综合征，弥散性全细支气管炎(diffuse panbronchiolitis，DPB)和支气管扩张(BE)，作为特定疾病的例证，用于通过本发明的方法判断对特定疾病发病易感的体质，对它的治疗效果或治疗预后作出预测性判断。
本发明将分析由检测一个或几个碱基突变分类的基因型和分析由检测一个或几个碱基突变分类的单倍型(haplotype)，作为分析人呼吸道胰蛋白酶样酶基因多态性的方法。
例如分析呼吸道胰蛋白酶样酶基因多态性的方法，是通过分析根据用限制性酶切割的限制性片段长度的多态性(RFLP)来实现。本发明对基因多态性的分析方法，甚至包括对通过应用人呼吸道胰蛋白酶样酶cDNA序列的DNA杂交可检测的基因多态性的分析方法。也就是说，此方法包括应用能够检测本发明公开的基因多态性的限制性酶切割基因组DNA，然后进行凝胶电泳，并转移至硝酸纤维素膜等材料上，随之用人呼吸道胰蛋白酶样酶cDNA作探针，分析人呼吸道胰蛋白酶样酶基因组的切割图谱。甚至可以借助于PCR，通过扩增DNA片段的方法进行分析，以便可包括基因多态性的部位，然后将此扩增的DNA片段转化成单链，并通过不同的电泳迁移率〔PCR-单链构象多态性(SSCP)〕等方法分析所形成的单链。而且，许多方法例如，错配PCR法，应用等位基因特异性寡核苷酸的PCR-等位基因特异性寡(ASO)法，通过应用寡探针实施退火而进行判断的方法，或者用于直接测定基因多态性部位碱基序列的精确定位测序法，都可被引证作为实施检测多态性可能部位的方法，并且甚至可以通过应用DNA芯片，将对基因多态性的分析方法应用于基因诊断。
内含子可被用作对基因多态性进行分析的部位，并且可将如下基因片段作为分析特定基因多态性部位的例证：
(a)一种基因片段，它含有可用由序列号7和序列号8表示的引物扩增的内含子区，
(b)一种基因片段，它含有可用由序列号9和序列号10表示的引物扩增的内含子区，
(c)一种基因片段，它含有可用由序列号11和序列号12表示的引物扩增的内含子区，
(d)一种基因片段，它含有可用由序列号13和序列号14表示的引物扩增的内含子区，
(e)一种基因片段，它含有可用由序列号15和序列号16表示的引物扩增的内含子区，
(f)一种基因片段，它含有可用由序列号11和序列号12表示的引物扩增的内含子C，以及
(g)一种基因片段，它含有可用由序列号7和序列号8表示的引物扩增的内含子A。
内含子C中的一个基因片段被例证作为分析基因多态性的部位，此片段含有在此可由限制性酶BstUI，MboI，MseI或FbaI识别的一个序列部分。在内含子A中的一部分也被例证作为分析基因多态性的部位，此部分含有可由限制性酶MboI，TagI或AfaI识别的一个序列部分，含有由序列号17表示的一个基因多态性部位，或者含有一个或几个它们的组合。基因型或单倍型的分类是通过分析这些部位来判断。
而且，本发明是一种含有人呼吸道胰蛋白酶样酶内含子的部分或全部碱基的基因片段，如下基因片段被特别作为例证：
(a)一种基因片段，它含有可用由序列号7和序列号8表示的引物扩增的内含子区，
(b)一种基因片段，它含有可用由序列号9和序列号10表示的引物扩增的内含子区，
(c)一种基因片段，它含有可用由序列号11和序列号12表示的引物扩增的内含子区，
(d)一种基因片段，它含有可用由序列号13和序列号14表示的引物扩增的内含子区，
(e)一种基因片段，它含有可用由序列号15和序列号16表示的引物扩增的内含子区，
(f)一种含有人呼吸道胰蛋白酶样酶内含子的基因片段，包含由序列号1-序列号6所表示的碱基序列，或者是夹在这些碱基序列之间的基因片段，以及
(g)人呼吸道胰蛋白酶样酶内含子C的基因片段，包括由序列号17表示的碱基序列。
实施例
下面将通过实施例对本发明作详细地说明，条件是不打算以这些实施例作为对本发明方法的限制，此方法是通过分析人呼吸道胰蛋白酶样酶的基因多态性来预测疾病相关的体质。
〔标准操作方法〕
下面将阐述可用于本发明的，标准的DNA提取操作，基因扩增操作，限制性酶切操作和电泳操作。
(a)标准的DNA提取操作
对用于本发明基因扩增的生物样品没有什么特殊限制，但是，血液细胞成分是适合的，因为此标本容易获得，其DNA容易提取。
1.将0.5ml全血(用2Na-EDTA抗凝)置于具有1.5ml容量的微量离心管中。
2.向此离心管内加入0.5ml溶剂，并轻轻拍打离心管几次。然后使离心管上下转动，使液体混匀。
(按照上面的步骤进行如下的混匀操作)
溶剂实例：1×SSC
此溶剂的制备：通过10倍稀释用1升中含有175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠的10N NaOH调节至pH7.0的20×SSC。
3.将此混合物离心(在4℃，10000g离心20秒钟)，然后小心移去上清液，而不要取出暗色的沉淀。
4.加入1ml溶剂，搅拌此混合物。
5.离心此混合物(在4℃，10000g，20秒钟)，然后移去上清液。
6.再重复一次步骤4和5。
7.加入酶反应液200ul和蛋白水解酶10ul并立即混匀。
酶反应液的实例：0.04M DTT(二硫苏糖醇)与0.2M NaOAc(醋酸钠)和0.4％SDS的混合液。
蛋白水解酶液的实例：
10mg/ml的蛋白酶(蛋白酶K)
8.在37℃将此混合液温育1小时(在温育过程中将混合液轻轻振摇混合2-3次)。
9.加入碘化纳溶液300ml，立即混匀。
10.加入异丙醇0.5ml，混匀直至可清晰地看到白色的线状DNA。
11.离心所形成的混合物(在室温下，10000g 10分钟)，然后缓慢地移去上清液。可通过将离心管倒置在滤纸上等方法，充分地除去遗留在管壁上的溶液。
12.加入1ml漂洗液(A)并立即混匀。充分地搅拌此混合液，以便能剥离管壁上的沉淀。
漂洗液(A)的实例：70％乙醇。
13.将所形成的混合液离心(在室温下，10000g，5分钟)，然后移去上清液。
14.加入1ml漂洗液(B)，充分搅拌所形成的混合物，以便剥离管壁上的溶液。
漂洗液(B)的实例：80％乙醇
15.离心此混合物(在室温下，10000g，5分钟)，然后移去上清液。
16.将DNA沉淀作轻度真空干燥(干燥时间在3分钟之内，因为当过分使沉淀干燥时会使DNA不能充分溶解)。
(a)标准的基因扩增操作：
虽然已知有几种关于基因扩增法的原理，但是，在此将描述聚合酶链式反应法(PCR法)作为标准的方法。
反应液的组成：50mM KCl，10mM Tris-HCl(pH9.0，25℃)，0.1％Triton X-100，15mM MgCl2，2mM dNTPs，15μM正向引物，15μM反向引物，1mg/L基因组DNA，以及1单位Taq DNA聚合酶，总体积50ul。
反应循环：在94℃1分钟，64℃1分钟和72℃1分钟作为一次循环。反应进行40次循环。
所用的引物是如下的C1(35个碱基)和C2(35个碱基)：
C1：5’-GGAGC CATCT TGTCT GGAAT GCTGT GTGCT GGAGT-3’
C2：5’-CACAA TAAAC CAAAG CCGCC GTGAG TCTTC TTGTA-3’
(c)标准的限制性酶切割操作：
用于MboI的反应液的组成：10mM Tris-HCl(pH7.4)，10mMMgCl2，100mM NaCl，10mM KCl，1mM DTT，和100μg/ml BSA(牛血清白蛋白)。
以每20ul反应液10单位的浓度加入MboI，在37℃温育3小时。
(b)标准的电泳操作：
用于电泳的缓冲液是0.5×TBE，但必须是5×TBE在1升中含有54g Tris碱，27.5g硼酸和1mM EDTA，并被调节至pH8.0。通过应用1％或3％琼脂糖凝胶〔应用Seakem GTA琼脂糖(FMC BioProducts)〕(含有溴化乙锭0.5μl/ml)，在电压100V进行电泳30分钟。然后用UV灯观测DNA电泳带。
〔实施例1〕获得含有人呼吸道胰蛋白酶样酶基因组上内含子的DNA片段并分析其碱基序列
为了寻找人呼吸道成熟的胰蛋白酶样酶基因组上的内含子部位，参照几种胰蛋白酶相似酶的基因组外显子和内含子的组成，制备了几个引物，以便扩增人基因组DNA。通过引物A1(序列号7)和A2(序列号8)扩增了一个约6Kb的DNA片段(基因片段)，通过引物B1(序列号9)和B2(序列号10)扩增了一个约1.5Kb的DNA片段，通过引物C1(序列号11)和C2(序列号12)扩增了一个约3.4Kb的DNA片段。(图1)
从凝胶上切取DNA片段并纯化，将各个片段***TA克隆载体(由Invitrogen公司制备)。对其几个克隆测定了此***DNA二侧(5’-端和3’-端)的碱基序列，发现存在与此引物序列邻接的人呼吸道胰蛋白酶样酶的cDNA序列，共有序列被发现在外显子-内含子5’-端和3’-端二侧边缘区与它邻接的序列，并且扩增的DNA片段是含有人呼吸道胰蛋白酶样酶内含子区的DNA片段。
在编码人呼吸道胰蛋白酶-样酶成熟蛋白的基因区内，本发明已弄清楚的内含子序列，从5’侧开始，分别被称为内含子A，内含子B和内含子C(图3)。在已弄清楚的各个内含子的5’端和3’-端，其碱基序列由序列号1，2，3，4，5和6表示。至于内含子C，其整个碱基序列由序列号17表示。
另一方面为了进行基因扩增，对编码人呼吸道胰蛋白酶样酶前体肽的区域制备了几个引物。因此，显然约5.5Kb的DNA片段是由引物D1(序列号13)和D2(序列号14)扩增的，约5Kb的DNA片段是由引物E1(序列号15)和E2(序列号16)扩增的(图2)。认为这些基因片段含有这些内含子。
〔实施例2〕分析人呼吸道胰蛋白酶样酶内含子的基因多态性
为了研究在内含子A，B和C中是否存在基因多态性，从23个正常人的全血中提取了基因组DNA(按标准的操作方法)，并分别进行扩增，按照PCR法，用引物A1和A2扩增内含子A，用引物B1和B2扩增内含子B，以及用引用C1和C2扩增内含子C，以便用多种限制性酶比较其切割图谱。结果发现，在内含子A中，用限制性酶MboI，TaqI和AfaI观测到基因多态性。
相反，用限制性酶Tsp509I，AluI，NlaIII，MspI，BstUI，BfaI，HinPI，HaeIII，HindIII，SspI，PstI，EcoRI，SaII和EcoRV未观测到基因多态性。
在内含子B，用如下限制性酶都未观察到基因多态性：Tsp509I，AluI，NlaIII，MspI，BstUI，BfaI，HinPI，HaeIII，MboI，AfaI，TaqI，MseI，ClaI，NsiI，EeoT14I，NdeI，PmlI，ApaLI，ApaI，KpnI，BsmI，HindIII，SspI和EcoRV。
在内含子C，发现用限制性酶MboI，BstUI，MseI和FbaI观测到基因多态性。相反，用下列限制性酶都未观测到基因多态性：AluI，NlaIII，MspI，BfaI，HinPI，HaeIII，AfaI，TaqI，HindIII，SspI，Bg1II，EeoT14I，PvuII，PvuI，EcoRI，BamHI，EcoRV和KpnI。
当用MboI或BstUI切割含有内含子C的DNA片段时(此内含子是通过用C1和C2组合引物扩增的)用MboI的切割实验揭示，根据电泳，一条电泳带出现在1.3Kb时可被判断为基因型MM，一条电泳带出现在1.05Kb时可被判断为基因型mm，以及二条电泳带同时出现在1.3Kb和1.05Kb时可被判断为基因型Mm。另一方面，在用BstUI的情况下，一条电泳带出现在3.4Kb时可被判断为BB，二条电泳带同时出现在2.45Kb和0.95Kb时可被判断为bb以及三条电泳带同时出现时可被判断为Bb。
图3显示出通过TaqI检测的内含子A，以及通过MboI和BstUI检测的内含子C的基因多态性电泳图谱。而且，对内含子C测定了bm单倍型的全部碱基序列，此内含子C是来自从一例bbmm型正常人基因组通过PCR获得的DNA片段。(序列号17)。序列中用空心箭头指示出内含子C的碱基序列中通过BstUI和MboI检测的基因多态性部位。
对一例患有BBmm型BE病人的碱基序列测定发现，用BstUI不能切割Bm单倍型BstUI基因多态性部位的碱基序列，因为CGCG被转变成了ACCG。
〔实施例3〕通过分析人呼吸道胰蛋白酶样酶的内含子基因多态性来分析疾病相关性体质
关于统计学分析，应用统计分析软件Stat View 4.02(AbacusConcepts公司)，按照X-平方测定进行分析。
实施3-1通过基因型分类分析疾病相关的体质
在实施例2公开的基因型中，研究了是否可以对内含子C中以MboI或BstUI检测的基因多态性，进行与人呼吸道胰蛋白酶样酶相关疾病的分类。被选作研究对象的疾病是弥散性全细支气管炎(DPB)，支气管扩张(BE)，肺气肿(PE)，以及支气管哮喘(BA)等呼吸系疾病。
通过选择106名正常人，29名弥散性全细支气管炎病人，38名支气管扩张病人，22名肺气肿病人，以及32名支气管哮喘病人，按照标准的操作方法，对每个人的基因型进行了判断。用MboI或BstUI作限制性酶。
每种基因型出现的人数和出现的频率，以及每种等位基因型的出现数目和出现频率显示在表1和表2中。
                  表1 BstUI基因型
                   出现的人数(人)                               出现的数目(等位基因)
   BB    Bb    bb    总数
正常人DPB病人BE病人PE病人    168115    55121512    359125     106293822
    B     b     总数
正常人DPB病人BE病人PE病人     87283722     125303922     212587644
 BA病人              2         12        15          32       BA病人              16           48         64
            出现频率(％)                       出现频率(％)
   BB    Bb    bb
正常人DPB病人BE病人PE病人   15.127.628.922.7   51.941.439.554.5   33.031.031.622.7
    B     b
正常人DPB病人BE病人PE病人   41.048.348.750.0   59.051.751.350.0
 BA病人             6.3       37.5      56.3      BA病人             25.0        75.0
                表2 MboI基因型
                出现的人数(人)                                        出现的数目(等位基因)
   MM    Mm    mm    总数
正常人DPB病人BE病人PE病人    10333    407156    56192013     106293822
   M     m    总数
正常人DPB病人BE病人PE病人    60132112     152455532     212587644
 BA病人              1         12        19          32      BA病人              14           50          64
             出现频率(％)                  出现频率(％)
    MM    Mm    mm
正常人DPB病人BE病人PE病人     9.410.3.7.913.6   37.724.139.527.3   52.865.552.659.1
   M    m
正常人DPB病人BE病人PE病人   28.322.427.627.3   71.777.672.472.7
 BA病人               3.1     37.5      59.4      BA病人             21.9        78.1
表1和表2显示，通过对上述基因型的判断，BB型的出现频率表现出较高的DPB，BE和PE可能性。也就是说，可以判定，拥有这些基因型的个人具有对DPB，BE和PE易感性体质。而且，当根据慢性阻塞性肺病(COPO)的分类，将DPB，BE和PE收集到患有这三种呼吸系疾病的病人组中时，得到了如下的结果：BB型的出现频率统计学显著地高于正常人的出现频率(X-平方P值＝0.04，X-平方值＝4.2)。
                 观察频率
            三种疾病，BB/非BB
   BB    非BB    总数
正常人    16     90    106
三种呼吸系疾病病人    24     65    89
 总数                  40               155               195
               百分数(行)
           三种疾病，BB/非BB
   BB    非BB    总数
正常人    15     85    100
三种呼吸系疾病病人    27     73    100
 总数                   21               79               100
               列联表分析统计量：
               三种疾病，BB/非BB
  63
  1
  4.182
  .0409
  4.177
  .0410
  .145
  .146
  3.489
  .0618
  .0503
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
实施例3-2通过单倍型分类分析疾病相关的体质
单倍型的出现频率
对于106名正常人，29名弥散性全细支气管炎(DPB)病人，38名支气管扩张(BE)病人，22名肺气肿(PE)病人，和32名支气管哮喘(BA)病人，根据BstUI和MboI的二个基因多态性的组合，将单倍型出现的人数和出现的频率显示在下面的表中。作为对238人的研究结果，此表暗示，在日本人中几乎不存在bM单倍型，由于没有任何人具有Bb-MM，bb-MM和bb-Mm基因型。
                            出现的人数(人)
 BB-MM  BB-Mm  BB-mm   Bb-MM   Bb-Mm   Bb-mm  bb-MM  bb-Mm   bb-mm   总数
 正常人  10   6   0    0   34   21   0   0   35    106
 DPB病人BE病人PE病人   333   270   312    000    586    776   000   000    9125     293822
  BA病人            1       1        0        0       11       1       0       0        18        32
                                             出现的频率(％)
  BB-MM   BB-Mm   BB-mm   Bb-MM   Bb-Mm   Bb-mm   bb-MM    bb-Mm    bb-mm    总数
  正常人   9.4   5.7   0.0   0.0   32.1   19.8   0.0    0.0    33.0    100％
  DPB病人BE病人PE病人   10.37.913.6   6.918.40.0   10.32.69.1   0.00.00.0   17.221.127.3   24.118.427.3   0.00.00.0    0.00.00.0    31.031.622.7    100％100％100％
   BA病人          3.1      3.1       0.0       0.0        34.4      3.1        0.0        0.0       56.3       100％
对于下面的分析，用统计学技术(X-平方法)可加快分析与呼吸系疾病的关联，假设日本人呼吸道基因单倍型的人胰蛋白酶样酶是BM，Bm和bm三种(当出现数是5以上时，将此X-平方P值用作随后P值(the following P Values)，并且在2×2表的情况下，包括4以下出现数的格式，将Fisher’s直接法P值表示为随后P值)。
等位基因分类(1)
对于日本人的三种单倍型进行了关于每种等位基因出现频率的研究，发现在属于COPD的三种呼吸系疾病组(DPB，BE和PE)与具有统计学显著差异的正常人(P＝0.027)之间，存在出现频率分布的偏离。特别是，与正常人相比较，在属于COPD的三种呼吸系疾病组(DPB，BE和PE)中，Bm等位基因的出现频率较高。
在BE，DPB和PE中，对于每种疾病Bm等位基因的出现频率都较高。
相反，对于BA，Bm等位基因的出现频率较低。
                     观察频率：
                 三种疾病，等位基因
    Bm.    BM     b.m.     总数
正常人     27    60     125     212
三种呼吸系疾病病人     41    46     91     178
总数                      68           106               216            390
            百分数(行)：三种疾病，等位基因
    Bm.    BM     b.m.    总数
正常人     13    28     59    100
三种呼吸系疾病病人     23    26     51    100
 总数                      17           27               55             100
                  列联表分析统计量：
                 三种疾病，等位基因
    107
    2
    7.174
    .0277
    7.164
    .0278
    .134
    .136
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数Cramer’s V值
              观察频率：DPB，等位基因
    Bm.    BM     b.m.     总数
  正常人     27    60     125     212
  DPB病人     15    13     30 58
  总数                     42            73              155             270
            百分数(行)：DPB，等位基因
    Bm.    BM     b.m.    总数
 正常人     13    28     59    100
 DPB病人     26    22     52    100
  总数                     16            27               57             100
                  列联表分析统计量：
                    DPB，等位基因
    227
    2
    6.044
    .0487
    5.488
    .0643
    .148
    .150
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数Cramer’s V值
                 观察频率：BE，等位基因
    Bm.    BM     b.m.    总数
  BE病人     16    21      39     76
  正常人     27    60     125     212
  总数                    43             81               164            288
           百分数(行)：BE，等位基因
    Bm.    BM     b.m.     总数
BE病人     21    28      51     100
正常人     13    28      59     100
 总数                     15            28                57             100
                      列联表分析统计量：
                        BE，等位基因
   209
   2
   3.175
   .2044
   3.007
   .2224
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值
   .104
   .105
列联表分析系数Cramer’s V值
            观察频率：PE，等位基因
    Bm.    BM     b.m.     总数
PE病人     10    12     22     44
正常人     27    60     125     212
 总数                      37            72               147             256
           百分数(行)：PE，等位基因
    Bm.    BM     b.m.     总数
PE病人     23    27     50     100
正常人     13    28     59     100
 总数                      14            28               57              100
                 列联表分析统计量：
                   PE，等位基因
   241
   2
   3.040
   .2187
   2.765
   .2510
   .108
   .109
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数Cramer’s V值
             观察频率：BA，等位基因
    Bm.    BM     b.m.     总数
BA病人     2    14     48     64
正常人     27    60     125     212
  总数                     29            74               173             276
          百分数(行)：BA，等位基因
    Bm.    BM     b.m.     总数
BA病人     3    22     75     100
正常人     13    28     59     100
 总数                      11           27               63               100
                  列联表分析统计量：
                    BA，等位基因
  221
  2
  7.096
  .0288
  8.264
  .0160
  .158
  .160
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数Cramer’s V值
等位基因分类(2)
因为根据上面的描述，认为Bm等位基因与疾病的关联较强，所以对此基因型给予了特别的关注，分析了Bm型等位基因的数目与除了Bm型之外的等位基因数目的关系。
考虑到属于COPD的三种呼吸系疾病组(DPB，BE和PE)，当将患有此三种疾病的病人与正常人相比较时，在患有这三种呼吸系疾病的病人组，Bm等位基因的出现频率，比正常人的显著地较高，并且在分布偏离中统计学显著性差异被认可(P＝0.0002)。通过上述比较显示出Bm型等位基因与属于COPD的三种呼吸系疾病(DPB，BE和PE)的发病相关联。
对于每种疾病，与正常人相比较，属于COPD的三种呼吸系疾病组(DPB，BE和PE)的任何一组都具有较高的出现频率(BE∶P＝0.012，DPB∶P＝0.0025，以及PE∶P＝0.0052)。
另一方面，与正常人相比较，Bm型的出现频率显著地较低(P＝0.049)。
               观察频率
           三种疾病，Bm/非Bm
   Bm    非Bm     总数
正常人    27    185     212
三种呼吸系疾病病人    49    129     178
 总数                   76              314                 390
               百分数(行)
            三种疾病，Bm/非Bm
   Bm    非Bm     总数
正常人    13     87     100
三种呼吸系疾病病人    28     72     100
 总数                  19               81                 100
               列联表分析统计量：
               三种疾病，Bm/非Bm
   107
   1
   13.494
   .0002
   13.534
   .0002
   .183
   .186
   12.568
   .0004
   .0003
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
       观察频率：DPB，Bm/非Bm
    Bm.    非Bm     总数
正常人     27    185     212
DPB病人     17    41     58
  总数                    44            226              270
      百分数(行)：DPB，Bm/非Bm
    Bm.    非Bm     总数
正常人     13     87     100
DPB病人     29     71     100
 总数                     16             84              100
                 列联表分析统计量：
                   DPB，Bm/非Bm
   227
   1
   9.172
   .0025
   8.202
   .0042
   .181
   .184
   7.997
   .0047
   .0045
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
         观察频率：BE，Bm/非Bm
    Bm.    非Bm     总数
BE病人     19     57     76
正常人     27     185     212
 总数                     46             242             288
       百分数(行)：BE，Bm/非Bm
    Bm.    非Bm     总数
BE病人     25     75     100
正常人     13     87     100
 总数                      16             84                100
列联表分析统计量：
BE，Bm/非Bm
   209
   1
   6.270
   .0123
   5.824
   .0158
   .146
   .148
   5.389
   .0203
   .0172
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
        观察频率：PE，Bm/非Bm
    Bm.    非Bm     总数
PE病人     13     31     44
正常人     27     185     212
 总数                      40              216              256
       百分数(行)：PE，Bm/非Bm
    Bm.    非Bm     总数
PE病人     30     70     100
正常人     13     87     100
  总数                      16             84               100
              列联表分析统计量：
                 PE，Bm/非Bm
  241
  1
  7.810
  .0052
  6.802
  .0091
  .172
  .175
  6.587
  .0103
  .0104
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
        观察频率：BA，Bm/非Bm
    Bm.    非Bm    总数
BA病人      2     62     64
正常人     27     185     212
  总数          29          247         276
       百分数(行)：BA，Bm/非Bm
    Bm.    非Bm     总数
BA病人     3     97     100
正常人     13     87     100
 总数                       11              89               100
             列联表分析统计量：
               BA，Bm/非Bm
  221
  1
  4.829
  .0280
  6.035
  .0140
  .131
  .132
  3.861
  .0494
  .0340
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
个体分类(1)
因为根据等位基因分类的分析结果，认为在三种单倍型中Bm型与这几种呼吸系疾病的关联特别深，所以特别注意到Bm型。对没有Bm型的个体，具有一个Bm型(异型)的个体，以及具有二个Bm型(同型)的个体，进行了分类和分析。
对于三种属于COPO的呼吸系疾病组(DPB，BE和PE)，基于在正常人与患有这三种呼吸系疾病的病人组比较中的Bm，观察到与单倍型分类Bm-0.1和Bm-2出现频率有关的显著分布差异(P＝0.0093)。
对于每种疾病，观察到发生DPB和PE病人分布偏离的显著差异(DPB∶P＝0.0024；和PE∶P＝0.0069)。甚至对BE也存在可能性(P＝0.089)。
                      观察频率
                    三种疾病，Bm
   Bm-0    Bm-1    Bm-2    总数
正常人     79     27     0     106
三种呼吸系疾病病人     54     29     6     89
 总数                     133              56                  6                  195
                      百分数(行)
                     三种疾病，Bm
    Bm-0    Bm-1    Bm-2     总数
正常人      75     25     0     100
三种呼吸系疾病病人      61     33     7     100100
 总数                      68              29                  3                   100
               列联表分析统计量：
                 三种疾病，Bm
    63
    2
    9.360
    .0093
      .
      .
    .214
    .219
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数Cramer’s V值
            观察频率：DPB，Bm
  Bm-0   Bm-1   Bm-2     总数
正常人    79    27    0     106
DPB病人    17    9    3     29
 总数                     96             36              3                 135
               百分数(行)：DPB，Bm
   Bm-0    Bm-1    Bm-2     总数
 正常人     75     25     0     100
 DPB病人     59     31     10     100
 总数                       71             27             2                100
              列联表分析统计量：
                 DPB，Bm
   123
   2
   12.040
   .0024
     .
     .
    .286
    .299
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数Cramer’s V值
                 观察频率：BE，Bm
   Bm-0    Bm-1    Bm-2     总数
BE病人     23     14     1     38
正常人     79     27     0     106
 总数                        102            41              1                144
                  百分数(行)：BE，Bm
  Bm-0   Bm-1   Bm-2     总数
BE病人    61    37    3     100
正常人    75    25    0     100
 总数                     71             28             1               100
              列联表分析统计量：
                  BE，Bm
   114
   2
   4.834
   .0892
     .
     .
    .180
    .183
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数Cramer’s V值
观察频率：PE，Bm
  Bm-0   Bm-1   Bm-2     总数
PE病人    14    6    2     22
正常人    79    27    0     106
 总数                     93            33             2                128
             百分数(行)：PE，Bm
  Bm-0   Bm-1   Bm-2     总数
PE病人    64    27    9     100
正常人    75    25    0     100
 总数                    73             26            2                100
             列联表分析统计量：
                PE，Bm
  130
  2
  9.957
  .0069
    .
    .
  .0269
  .0279
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数Cramer’s V值
个体分类(2)
分析了是否具有Bm单倍型(Bm-0与Bm-1.2相比较)。
对于三种属于COPO的呼吸系疾病组(DPB，BE和PE)，将它与正常人比较时，在三种呼吸道疾病组中，具有Bm的个体出现频率较高，并观察到分布偏离的显著差异(P＝0.039)。另一方面，反过来也一样，在BA中存在较多没有Bm单倍型的个体，并且注意到，当与正常人组相比较时，具有显著的分布偏离(P＝0.037)。
               观察频率
         三种疾病，Bm-0/Bm-1.2
   Bm-0     Bm-1.2   总数
正常人     79      27     106
三种呼吸系疾病病人     54      35     89
 总数                   133               62                195
             百分数(行)
      三种疾病，Bm-0/Bm--1.2
  Bm-0   Bm-1.2   总数
正常人     75     25     100
三种呼吸系疾病病人     61     39     100
 总数                   68               32                100
             列联表分析统计量：
           三种疾病，Bm-0/Bm-1.2
  63
  1
  4.282
  .0385
  4.279
  .0386
  .147
  .148
  3.670
  .0554
  .0453
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
      观察频率：BA，Bm-0/Bm-1.2
  Bm-0   Bm-1.2     总数
BA病人     30     2     32
正常人     79     27     106
 总数                     109            29              138
       百分数(行)：BA，Bm-0/Bm-1.2
  Bm-0   Bm-1.2     总数
BA病人     94     6     100
正常人     75     25     100
 总数                     79             21              100
             列联表分析统计量：
              BA，Bm-0/Bm-1.2
    120
    1
    5.471
    .0193
    6.641
    .0100
    .195
    .199
    4.375
    .0365
    .0241
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
      观察频率：DPB，Bm-0/Bm-1.2
  Bm-0   Bm-1.2     总数
正常人     79     27     106
DPB病人     17     12     29
  总数          96        39            135
       百分数(行)：DPB，Bm-0/Bm-1.2
  Bm-0   Bm-1.2     总数
正常人     75     25     100
DPB病人     59     41     100
 总数                      71             29              100
             列联表分析统计量：
             DPB，Bm-0/Bm-1.2
  123
  1
  2.805
  .0940
  2.674
  .1020
  .143
  .144
  2.089
  .1484
  .1086
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
      观察频率：BE，Bm-0/Bm-1.2
  Bm-0   Bm-1.2     总数
BE病人     23     15     38
正常人     79     27     106
 总数                      102           42               144
     百分数(行)：BE，Bm-0/Bm-1.2
 Bm-0  Bm-1.2     总数
BE病人     61     39     100
正常人     75     25     100
 总数                     71             29              100
                  列联表分析统计量：
                   BE，Bm-0/Bm-1.2
  114
  1
  2.654
  .1033
  2.564
  .1093
  .135
  .136
  2.020
  .1552
  .1444
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
     观察频率：PE，Bm-0/Bm-1.2
  Bm-0   Bm-1.2     总数
PE病人     14     8     22
正常人     79     27     106
 总数                     93             35              128
     百分数(行)：PE，Bm-0/Bm-1.2
 Bm-0   Bm-1.2     总数
PE病人     64     36     100
正常人     75     25     100
 总数                      73            27              100
             列联表分析统计量：
              PE，Bm-0/Bm-1.2
  130
  1
  1.088
  .2969
  1.040
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值
  .3079
  .092
  .092
  .609
  4.353
  .3035
G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
个体分类(3)
而且，在具有作为同型的Bm单倍型(BBmm，Bm-2)的个体与没有单倍型(Bm-0.1)的个体之间，对出现频率进行了比较(Bm-0.1与Bm-2相比较)。对于三种属于COPD的呼吸系疾病组(DPB，BE和PE)，当将此三个呼吸系疾病组与正常人比较时，在具有作为同型的Bm单倍型(BBmm)的个体与没有Bm单倍型的个体之间，观察到出现频率的显著差异(P＝0.021)，并且，具有Bm同型型(Bm-2)的全部6个人都受到了属于COPD的三种呼吸系疾病(DPE，BE和PE)中任何一种的侵袭。其中3个人受到DPB的侵袭，1个人受到BE的侵袭。在106名正常人和32名BA病人中，未发现具有Bm同型型(Bm-2)的人。
对于每种疾病，观察到患有DPB和PE的病人分布偏离的显著统计学差异(DPB∶P＝0.0082，PE∶P＝0.029)。
                   观察频率
            三种疾病，Bm-0.1/Bm-2
  Bm-0.1     Bm-2     总数
正常人     106     0     106
三种呼吸系疾病病人     83     6     89
 总数                    189             6                  195
                 百分数(行)
            三种疾病，Bm-0.1/Bm-2
  Bm-0.1     Bm-2     总数
正常人     100     0     100
三种呼吸系疾病病人     93     7     100
 总数                    97              3                 100
               列联表分析统计量：
             三种疾病，Bm-0.1/Bm-2
    63
    1
    7.373
    .0066
      .
      .
    .191
    .194
    5.295
    .0214
    .0082
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
     观察频率：DPB，Bm-0.1/Bm-2
  Bm-0.1     Bm-2     总数
正常人     106     0     106
DPB病人     26     3     29
 总数                     132            3              135
      百分数(行)：DPB，Bm-0/Bm-1.2
  Bm-0.1     Bm-2     总数
正常人     100     0     100
DPB病人     90     10     100
  总数                     98             2               100
            列联表分析统计量：
            DPB，Bm-0.1/Bm-2
  123
  1
  11.215
  .0008
    .
    .
  .277
  .288
  6.987
  .0082
  .0091
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
    观察频率：PE，Bm-0.1/Bm-2
  Bm-0.1   Bm-2     总数
PE病人     20     2     22
正常人     106     0     106
 总数                      126           2               128
       百分数(行)：PE，Bm-0.1/Bm-2
 Bm-0.1     Bm-2     总数
PE病人     91     9     100
正常人     100     0     100
 总数                     98             2               100
              列联表分析统计量：
               PE，Bm-0.1/Bm-2
    130
    1
    9.789
    .0018
     .
     .
    .267
    .277
    4.771
    .0289
    .0284
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
    观察频率：BE，Bm-0.1/Bm-2
 Bm-0.1   Bm-2     总数
BE病人     37     1     38
正常人     106     0     106
 总数                      143           1                144
      百分数(行)：BE，Bm-0.1/Bm-2
 Bm-0.1   Bm-2     总数
BE病人     97     3     100
正常人     100     0     100
 总数                      99            1               100
            列联表分析统计量：
             BE，Bm-0.1/Bm-2
  114
  1
  2.809
  .0937
    .
    .
  .138
  .140
  .289
  .5909
  .2639
遗漏值的数目自由度X-平方值X-平方p值G-平方值G-平方p值列联表分析系数ФX-平方值(Yates’连续修正量)X-平方p值(Yates’连续修正量)Fisher’s直接法p值
        观察频率：BA，Bm-0.1/Bm-2
  Bm-0.1     Bm-2     总数
BA病人     32     0     32
正常人     106     0     106
 总数                     138            0               138
       百分数(行)：BA，Bm-0.1/Bm-2
 Bm-0.1     Bm-2     总数
BA病人     100     0     100
正常人     100     0     100
 总数                      100            0               100
通过分析人呼吸道胰蛋白酶样酶的内含子基因多态性，上述结果明确地显示，按照某种机制，Bm型单倍型与呼吸系疾病中的慢性呼吸道炎症相关联。而且还显示，在属于慢性阻塞性肺病(COPD)的三种疾病DPB，BE和PE与BA之间，人呼吸道胰蛋白酶样酶与这些疾病的关联是不同的。
因为具有某种基因多态性的个体都不会发生某些疾病，所以人呼吸道胰蛋白酶样酶的基因多态性不是例如所谓遗传病的决定性发病因素，并可确实地被认为是一个容易发病的因素。也就是说，当具有Bm单倍型的个体加上环境因素等，这些个体对呼吸系疾病如BE，PE和DPB的发病将是易感的。
从上述结果表明，通过应用人呼吸道胰蛋白酶样酶的基因多态性，可将与人呼吸道胰蛋白酶样酶相关联的疾病分类。对于人呼吸道胰蛋白酶样酶基因多态性的分析法，是一种可用于预测个人与人呼吸道胰蛋白酶样酶相关联疾病发病体质的手段，并可预测对这类疾病的治疗效果，预测其预后复发的可能性。
产业应用的可能性
本发明提供了一种方法，通过分析人呼吸道胰蛋白酶样酶的基因多态性，确定个人的疾病相关性体质。因此，当借助于这种分析这类与人呼吸道胰蛋白酶样酶相关联的疾病可能鉴定时，可以设想，具有人呼吸道胰蛋白酶样酶的某种基因型的个体，对某些疾病是易感的。
也就是说，通过预测疾病发病的体质(具有对某些疾病易感性体质的个人)，可在早期阶段对个人提供关于治疗方法的信息，并且关系到早诊断和早治疗。即使在治疗之后也可估计这类疾病复发的可能性。也就是说，医生可对病人给予密切的关注，并通过预测治疗预后(对病人治疗后的医疗过程和复发的危险性)提供适当的指导。
而且，对人呼吸道胰蛋白酶样酶的基因多态性分析，有可能提供一种方法，用于确定将给予的药物效果，以及用于在药物开发研究中，对于与人呼吸道胰蛋白酶样酶相关联的病态，缩小对其给药有效的病人组。
如上述所述，早诊断，早治疗和指导适当的预防方法，以及治疗后的适当用药和适当随诊，都将关系到降低在当前造成难题的巨大医疗费用。
[序列表]
序列号：1
序列长度：
序列类型：核酸
链数：双链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(基因组序列)
序列特征：内含子A5’-末端
序列：
                               30
GTGAGGCCAC CACTACCTAC CCATCTGGGA
CACTCCGGTG GTGATGGATG GGTAGACCCT
                               60
ACAATTAGAA TAGACAGGTC ATGAAGACTG
TGTTAATCTT ATCTGTCCAG TACTTCTGAC
                               90
CACCCTCTAC CCTAGGATTG AATTGAGGCA
GTGGGAGATG GGATCCTAAC TTAACTCGGT
GAAATAATTC AATGCAA
CTTTATTAAG TTACGTT
序列号：2
序列长度：
序列类型：核酸
链数：双链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(基因组序列)
序列特征：内含子A3’-末端
序列：
                               30
TAAACTCACT TGCCAGCTAT AATGCAGGAA
ATTTGAGTGA ACGGTCGATA TTACGTCCTT
                               60
ATATAGCAAG AGATGTGGAT GCAATAGTTC
TATATCGTTC TCTACACCTA GGTTATCAAG
                               90
TAGATAGTGG TACAGGATGG CTAAGATGAA
ATCTATCACC ATGTCCTACC GATTCTACTT
                               120
TTATATATCT GAAATGTTCA CAAATTCCCT
AATATATAGA CTTTACAAGT GTTTAAGGGA
                               150
AGTCATATAG GATGTTTGAT AATGTTTTAG
TGAGTATATC GTACAAAGTA TTACAAAATC
序列号：3
序列长度：
序列类型：核酸
链数：双链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(基因组序列)
序列特征：内含子B5’-末端
序列：
                               30
GTAAGTGTCT CGGAAAAAAA AATTAACAAT
CATTCACAGA GCCTTTTTTT TTAATTGTTA
                               60
AGAAATGTCT TATATTTGCT ATTAGGTAAT
TCTTTACAGA ATATAAACGA TAATCCATTA
                               90
TTTTTAAATT AGGAAACATC TGGAATAGGT
AAAAATTTAA TCCTTTGTAG ACCTTATCCA
                               120
GTTTCTATTC TTCTACAGAC AGAACCATTC
CAAAGATAAG AAGATGTCTG TCTTGGTAAG
                               150
TATATTCTGC TCAGCCCAAG CTCTGGCTAC
ATATAAGACG AGTCGGGTTC GAGACCGATG
CCCTGAGTCT CCT
GGGACTCAGA GGA
序列号：4
序列长度：
序列类型：核酸
链数：双链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(基因组序列)
序列特征：内含子B3’-末端
序列：
                               30
TCCTCATGTA CTTGGGGAAT TTTGGCTGCG
AGGAGTAGAT GAACCCCTTA AAACCGACGC
                               60
AAGAAACTCC AAAGTAAATC TTTAGAAGCC
TTCTTTGAGG TTTCATTTAG AAATCTTCGG
                               90
TTCATTGTTA AATATGAAAT AATGTTTGGA
AAGTAACAAT TTATACTTTA TTACAAACCT
                               120
GTACATTTAT TTCTTCTCAA ATTTATTATA
CATGTAAATA AAGAAGAGTT TAAATAATAT
                               150
GGGTCAATAA TGTACACATC TTGAAGTGCA
CCCAGTTATT ACATGTGTAG AACTTGAGGT
TTTTTTTCCT GCTTTTATAA CAAACAG
AAAAAAAGGA CGAAAATATT GTTTGTC
序列号：5
序列长度：
序列类型：核酸
链数：双链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(基因组序列)
序列特征：内含子C5’-末端
序列：
                               30
GTAAGCTCAA GACAATCTCA TCCATGTCAT
CATTCGAGTT CTGTTAGAGT AGGTACAGTA
                               60
CATCCAAGAA GTGTATAAGC ACTTCCTAGT
GTAGGTTCTT CACATATTCG TGAAGGATCA
                               90
ATGTGATAAT GTGATAGACA TAAGTGTAAC
TACACTATTA CACTATCTGT ATTCACATTG
                               120
AGTTACAATA CACAGCCCTG TTCCTCTAAA
TCAATGTTAT GTGTCGGGAC AAGGAGATTT
序列号：6
序列长度：
序列类型：核酸
链数：双链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(基因组序列)
序列特征：内含子C3’-末端
序列：
                               30
GGAAATAGGC TGACTTTATT TGTATAATGA
CCTTTATCCG ACTGAAATAA ACATATTACT
                               60
ATGTGACTCC TTCCTCGACT GCCATAGAAA
TACACTGAGG AAGGAGCTGA CGGTATCTTT
                               90
TAAACTCCTT AATATTTTGG GTTTGTCTTT
ATTTGAGGAA TTATAAAACC CAAACAGAAA
                               120
GCACTTAAGT AATCAGTCAT TCTGTTTTTT
CGTGAATTCA TTAGTCAGTA AGACAAAAAA
TACAG
ATGTC
序列号：7
序列长度：35
序列类型：核酸
链数：单链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(引物)
序列特征：A1
序列：
                               30
AAGTCAGTCT GCGGCTCAAT AATGCCCACC
ACTGT
序列号：8
序列长度：35
序列类型：核酸
链数：单链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(引物)
序列特征：A2
序列：
                               30
CTCATTCTTA GTTTAGGAAA TGTTGTGGAA
ATACC
序列号：9
序列长度：35
序列类型：核酸
链数：单链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(引物)
序列特征：B1
序列：
                               30
ACCCAGAATA TTCCACCTGG CTCTACTGCT
TATGT
序列号：10
序列长度：35
序列类型：核酸
链数：单链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(引物)
序列特征：B2
序列：
                               30
CATTACTTAT TATTCTGACC TGTCCTTGCC
TTAGC
序列号：11
序列长度：35
序列类型：核酸
链数：单链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(引物)
序列特征：C1
序列：
                               30
GGAGCCATCT TGTCTGGAAT GCTGTGTGCT
GGAGT
序列号：12
序列长度：35
序列类型：核酸
链数：单链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(引物)
序列特征：C2
序列：
                               30
CACAATAAAC CAAAGCCGCC GTGAGTCTTC
TTGTA
序列号：13
序列长度：
序列类型：核酸
链数：单链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(引物)
序列特征：D1
序列：
5′>TGT CGT CGC AGG GGT AGT GAT CCT GGC AGT CAC CA<3′
序列号：14
序列长度：
序列类型：核酸
链数：单链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(引物)
序列特征：D2
序列：
5′>TTC AAT TCT TCC ACT CAA AGT CCT GTA TTC CTG TG<3′
序列号：15
序列长度：
序列类型：核酸
链数：单链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(引物)
序列特征：E1
序列：
5′>TGA GGC AAG ATG GTA GTG GTG TGA GAG GGG ATG TT<3′
序列号：16
序列长度：
序列类型：核酸
链数：单链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(引物)
序列特征：E2
序列：
5′>GGC CAG CTT CCC TCC TCA GCC TCA GTG CCT CCA AG<3
序列号：17
序列长度：3234
序列类型：核酸
链数：双链
拓扑结构：线性
序列种类：核酸(基因组序列)
序列特征：内含子C
序列：
        10         20         30         40         50         60         70         80         90        100
1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890
                                                                               HpaI
 EcoRI        NlaIV                BsmI                  EslI                 NspHI   FckI           FckI
           
Figure C9881364600502
                    
Figure C9881364600503
                  
Figure C9881364600504
    
Figure C9881364600505
Figure C9881364600506
Figure C9881364600507
    
Figure C9881364600508
                  
Figure C9881364600509
CAATTCGGCT TGGAGCCATC TTGTCTGGAA TGCTGTGTGC TGGAGTACCT CAAGGTGGAG TGGACGCATG TCAAGTAAGC TCAAGACAAT CTCATCCATG 100
CTTAAGCCGA ACCTCCGIAG AACAGACCTT ACGACACACG ACCTCATGGA GTTCCACCTC ACCTGCGTAC AGTCCATTCG AGTTCTGTTA GAGTAGGTAC
                                                                               
Figure C98813646005010
                                                                        外显子    内含子C
                                                                                
TCATCATCCA AGAAGTGTAT AAGCACTTCC TAGTATGTGA TAATGTGATA GACATAAGTG TAACAGTTAC AAIACACAGC CCTGTTCCTC TAAAATTTAT 200
AGTAGTAGGT TCTTCACATA TTPGTGAAGG ATCATACACT ATTACACTAT CTCTATTCAC ATTGTCAATG TTATGTGTCG GGACAAGGAC ATTTTAAATA
                                                                                                 HpaI
xoai                                           BspHI                    HaeIII  FckI             HincII
 
Figure C98813646005011
                                                                      
Figure C98813646005013
              
Figure C98813646005015
AATCTAGATT TTAGAAATAA ATTTTTTTAT GAATGAAGTT TATCTATCAT GAAAGCATTA ACTCTGAGAG GCCAAATTAC AGAGTAGTTA ACCATCCAAA 300
TTAGATCTAA AATCTTTATT TAAAAAAATA CTTACTTCAA ATAGATAGTA CTTTCGTAAT TGAGACTCTC CGGTTTAATC TCTCATCAAT TGGTAGGTTT
       TfiI            TaqI   EcoRI
                        
Figure C98813646005018
GCTCAAGAAT CAGAAAGACC TCAATTTGAA TTCCTTAACC TCTATTACCA AGTCTCTTTA ACTAAAAGCT GGGGATAATC ATAATAGCAC CTAACTTTTT 400
CGAGTTCTTA GTCTTTCTGG AGCTAAACTT AAGGAATTGG ACATAATGGT TCAGAGAAAT TGATTTTCGA CCCCTATTAG TATTATCGTG GATTGAAAAA
                                                                                                        StyI
                                                                                                        SecI
                                                                                                        NccI
                              BfaI                                                         AccI         BsaII
                              
Figure C98813646005019
                                                              
Figure C98813646005020
 
GGGTACTAAG AAAAGTTAAA TGAAGACTAA ATATATCAGG CACATGGTAA ACAACAAAGA AATCTCATCT ATTTCACTAT TATTAATGTA GACCATGGTC 500
CCCATGATTC TTTTCAATTT ACTTCTGATT TATATAGTCC GTGTACCATT TGTTGTTTCT TTAGAGTAGA TAAAGTGATA ATAATTACAT CTGGTACCAG
ACTCGTGTTA ATAACTTTAA CCTCAACCTT TTAACTGCTA TGAAGGATTA AATAAAAAAT TAATCACTAT ATTATAAAAA TTAATTGATA TATAATAAAT 600
TGAGCACAAT TATTGAAATT GGAGTTGGAA AATTGACGAT ACTTCCTAAT TTATTTTTTA ATTAGTGATA TAATATTTTT AATTAACTAT ATATTATTTA
        10         20         30         40         50         60         70         80         90        100
1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890
                SnaBI
                BsaAI
               MaeII    PleI                                                             PleI
                                                                                 
GAATTTAAGA AATACGTAAT AATTCATGGA CTCCTTGAAG ATAGAAAATT TATACAAAAT CCTAGTAATT TGAGTCACAA AAGCTCCTAC AATAATCAAA 700
CTTAAATTCT TTATGCATTA TTAAGTACCT GAGGAACTTC TATCTTTTAA ATATGTTTTA GGATCATTAA ACTCAGTGTT TTCGAGGATG TTATTACTTT
                                              DpnI
                                            Sau3aI
                                            MooI
                                            DpnII
                                            BstYI AlwI
                                           
Figure C9881364600514
 
Figure C9881364600516
CAGTATGAAT GAAAAAGAAA AGAAATAACT ATTATATTTG GATCTAGCCC ATAATTTTTA ACCAAATGCA CAAAAACAAA CAACAAATAT GAAATTCTCA 800
GTCATACTTA CTTTTTCTTT TCTTTATTGA TAATATAAAC CTAGATCGGG TATTAAAAAT TGGTTTACGT GTTTTTGTTT GTTGTTTATA CTTTAAGAGT
               BsaBI        EcoRI           DraI            SfaNT
                                       
Figure C9881364600519
           
Figure C98813646005110
CTGTAAAGTG ATTAAAATCA AATTTGAATT CTAAAATTTT AAATTAAATT ATCTAAACAT AATTGATGCA GTTATATGTT TTAATAGGTT TTGTTCACAT 900
GACATTTCAC TAATTTTAGT TTAAACTTAA GATTTTAAAA TTTAATTTAA TAGATTTGTA TTAACTACGT CAATATACAA AATTATCCAA AACAAGTGTA
                                      PvuII
                                      NspBlI               SspI                   DraI
                                    
Figure C98813646005111
                  
Figure C98813646005112
                    
ATCTGAAATC CAACTCCACA TAGTAGCAGG AACAGCTGGT GTCAGAAATT AAATATTCTT TTAGTCTGGA GTTTTAAAAA ATCAATCTGT TTACTTGAGT 1000
TAGACTTTAG GTTGAGGTGT ATCATCGTCC TTGTCGACCA CAGTCTTTAA TTTATAAGAA AATCAGACCT CAAAATTTTT TAGTTAGACA AATGAACTCA
                                  Bst1107I                                                          HgiAI
                                 AccI                                   SfaNI                       Bsp1286I
                                
Figure C98813646005114
                                  
Figure C98813646005115
                        
AATTTGTTGC TGTTTTCATG GGTGAATTGT ATACAGAAGG ATAGGAATTA TTCTTCGCAT CAAAAGGTCA CTGACTTTCA TATTTAGTGC TCATCGTCTT 1100
TTAAACAACG ACAAAAGTAC CCACTTAACA TATGTCTTCC TATCCTTAAT AAGAAGCGTA GTTTTCCAGT GACTGAAAGT ATAAATCACG AGTACCAGAA
                                                                HgiAI
 DraI                                                           Bsp1286I
Figure C98813646005117
                                                           
TAAAAAATGG ATAAAAAGTA GTTCTCACAT TTCATGGAAA GCCCCCAATC CATGAGCACA TTTCCCAAAA TTGAAACATT TTTATCAACT GCAAGTTGTG 1200
ATTTTTTACC TATTTTTCAT CAAGAGTGTA AAGTACCTTT CGGGGGTTAG GTACTCGTGT AAAGGGTTTT AACTTTGTAA AAATAGTTGA CGTTCAACAC
        10         20         30         40         50         60         70         80         90        100
1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890
                        MunI                                             BslI                          XmnI
                       
Figure C9881364600521
                                                                         
Figure C9881364600523
TGTAGGTGGA GATTTGTTTT TCAATTGTCA AGATACTGTT AATTACCCAG TCCTTTATCT CCTTTTGGTG GAGATGTCTC TGTGCTAGGA AACCCTTCTT 1300
ACATCCACCT CTAAACAAAA AGTTAACAGT TCTATGACAA TTAATGGGTC AGGAAATAGA GGAAAACCAC CTCTACAGAG ACACGATCCT TTGGGAAGAA
                                   BsrI
                                  HaeIII
                                 Sau96I                       BspHI                           TfiI
                               
Figure C9881364600524
                        
Figure C9881364600525
                 
Figure C9881364600526
GCTCTCCTTC CTGTTTCTCT TTTACTACTG GCCCTGAAAC AACAAATTCT CAAGTTTCAT GACAGCTTTC CAAAGAATCC ATCAATCAAA TAAGCAACAC 1400
CGAGAGGAAG GACAAAGAGA AAATGATGAC CGGGACTTTG TTGTTTAAGA GTTCAAAGTA CTGTCGAAAG GTTTCTTAGG TAGTTAGTTT ATTCGTTGTG
    TaqI                                             PacI                 DraI
   
Figure C9881364600527
                                     
Figure C9881364600528
                          
Figure C9881364600529
AACTCGACAC TGACAATTCC AGACCTACTA AGAGCATTAA TTAAGACTTA AAAATAAACA TGAGTTTTAA AAGGGTGTTA TTCATTATTT TCCCATTTAT 1500
TTGAGCTGTG ACTGTTAAGG TCTGGATGAT TCTCGTAATT AATTCTGAAT TTTTATTTGT ACTCAAAATT TTCCCACAAT AAGTAATAAA AGGGTAAATA
MaeII
 
AACGTCCCTT ACCTTCTGTC CTTCAGTGCA TACAAATTAT TATCTTCCTT GAAGCCCAGT TCAAGCCGTA CCTCACCATG ATACCTTCCA TGTATATTCC 1600
TTGCAGGGAA TGGAAGACAG GAAGTCACGT ATGTTTAATA ATAGAAGGAA CTTCGGGTCA AGTTCGGCAT GGAGTGGTAC TATGGAAGGT ACATATAAGG
                                                                                                         NlaIV
                                                                                                         DpnI
                                                                                                        Sau3aI
       StuI                                                                                             MooI
       HaeIII                                                                                           DpnII
     SaFI                                                                                               BstyI
     BstNI                                    NsiI                                                 AlwI BamHI
                                       
Figure C98813646005213
                                                  
Figure C98813646005214
 
Figure C98813646005216
ACTCCAGGCC TCACTGATTT TTAACTGAAA TACTATAATG CATAGTTCAC AATTAAAAAA AAAAAAAACA CAGCACTTTA CATAAGAGCT TACAGGATCC 1700
TGAGGTCCGG AGTGACTAAA AATTGACTTT ATGATATTAC GTATCAAGTG TTAATTTTTT TTTTTTTTGT GTCGTGAAAT GTATTCTCGA ATGTCCTAGG
                                                                                                   HpaI
   AlwI                                                                                   MaeII    HincII
                                                                                     
Figure C98813646005218
       
TATTTGTTTT ATCCATTCTT TTGTTCATTT TTACAATCAT TAATTCAAAG GAATTATATT AATTACTTTC TATGCACCCG ACGTTGTGTT AACACAACAA 1800
ATAAACAAAA TAGGTAAGAA AACAAGTAAA AATGTTAGTA ATTAAGTTTC CTTAATATAA TTAATGAAAG ATACGTGGGC TGCAACACAA TTGTGTTGTT
    10         20         30         40         50         60         70         80         90        100
1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890
            BsmI                 AccI                           SfcI
          
Figure C9881364600531
                                               
Figure C9881364600533
TACTATCCCT GCATTCAGCA AGTCTATGGT CTACAAGAGA GGACACAAAT TCAAATGTCT GTAGTCAAGC AGTGAAGCTG GCTAGATATG GAAAAATTAC 1900
ATGATAGGGA CGTAAGTCGT TCAGATACCA GATGTTCTCT CCTGTGTTTA AGTTTACAGC CATCAGTTCG TCACTTCGAC CGATCTATAC CTTTTTAATG
                                     
Figure C9881364600536
                            
Figure C9881364600537
AAGTCCCTCT TGCTTTAACA TTTGCTTGCC CACATTTGAT CAGACATCAT GCAAAATAAT TTCTCACTAT AGAGAAAAAA ACACTACAAA ACCAATAATA 2000
TTCAGGGAGA ACGAAATTGT AAACGAACGG GTGTAAACTA GTCTGTAGTA CGTTTTATTA AAGAGTGATA TCTCTTTTTT TGTGATGTTT TGGTTATTAT
                                     NsiI
                                     NdeI
                                   SphI
                   BsrI          NspHI         BspMI                       BspHI    ScaI         NsiI
                                      
Figure C98813646005311
                               
Figure C98813646005313
           
TAAAGAACTG AGAACTGGTT TACTGAAGCA TGCATATGTC ATCTAAAAGA AGCAGGTGAC GACCAGCTTC ATGAAGTACT TGCCATGCAT ATTGGCACTT 2100
ATTTCTTGAC TCTTGACCAA ATGACTTCGT ACGTATACAG TAGATTTTCT TCGTCCACTG CTGGTCGAAG TACTTCATGA ACGGTACGTA TAACCGTCAA
                                                          NoeI     FckI    Fru4HI       BbvI
                                                         
Figure C98813646005315
     
Figure C98813646005316
                
Figure C98813646005318
CACACACTGA CCCTTCTCCC CACCTAGACC AGTAATTAAA CAGGTATGGA TGAGCTAGCT ACTAAGAGCA GCCAACTGAA TAGCTGACTA ATTTAGAAGC 2200
GTGTGTGACT GGGAAGAGGG GTGGATCTGG TCATTAATTT GTCCATACCT ACTCGATCGA TCATTCTCGT CGGTTGACTT ATCGACTGAT TAAATCTTCG
                                                       EspI
                                   ScaI                Bpu1102I                      DraI
                                  
Figure C98813646005319
                
Figure C98813646005320
                            
Figure C98813646005321
ACACTTGGTA ATAATAGCTG ACTTTTATTA GTACTGACTA TACTATATGC TAAGCTGTAC TCAAAGTGCT TTGACTTTTA AACTGATACA AACATTATAT 2300
TGTGAACCAT TATTATCGAC TGAAAATAAT CATGACTGAT ATGATATACG ATTCGACATG AGTTTCACGA AACTCAAAAT TTGACTATGT TTGTATTATA
                                                                              
GAGGAAACAG ACGTACAGAG AGCTATTCAC CAGCTTACCA AAGGTCACAT AGCTGGTAAG TGGAGGACTT AAACCCAGAC TATCTAGTTT CAGAACGCGC 2400
CTCCTTTGTC TCCATGTCTC TCGATAAGTG GTCGAATGGT TTCCAGTGTA TCGACCATTC ACCTCCTGAA TTTGGCTCTG ATAGATCAAA GTCTTGCGCG
        10         20         30         40         50         60         70         80         90        100
1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890
                                                                           HgiAI
                                                                           Bspl286I
                                                          BslI        ApaLI      SspI
                                                       
Figure C9881364600541
                    
AGACTTAATC CATCGTGCAG AACATAAGAC ATACTCCATC TGTCTCCCCA ACTAGGTTAT TATGTGCACA AATATTTATT GGTTGGTTGG TTCATTATTA 2500
TCTGAATTAG GTAGCACGTC TTGTATTCTG TATGAGGTAG ACAGAGGGGT TGATCCAATA ATACACGTGT TTATAAATAA CCAACCAACC AAGTAATAAT
                                                                                 BosI
        BsrI                                                                  XmnI                     NsiI
                                                                             
Figure C9881364600546
 
Figure C9881364600547
                  
TGACTGGGTG GTAAGTATGT CATTAGGAGT GTTTTGCTTA TGACTATATA AATTTCTTCA CCAAAAGAAG ACTTTCTGAT GATATACTAT GCATCAGACA 2600
ACTGACCCAC CATTCATACA GTAATCCCAC CAAAACGAAT ACTGATATAT TTAAAGAAGT GGTTTTCTTC TGAAAGACTA CTATATGATA CGTAGTCTGT
SfaNI                                     XoaI                               Bsu36I      HindIII
Figure C9881364600549
                                                                                    
Figure C98813646005412
CCACGCAGGG TGCTAAGGTT AGGAAGATAA GTGAGACTTC TAGAAAGTCA TTCATTCAAC AAATATCTCC TAAGGGCTAG AAGCTTAGGT TTCAGCAGTG 2700
GGTGCGTCCC ACGATTCCAA TCCTTCTATT CACTCTGAAG ATCTTTGAGT AAGTAAGTTG TTTATAGAGG ATTCCCGATC TTCGAATCCA TTCAGCAGTG
                                 Sau96I
                                 AvaII
                                                                                                     
AACAGAATAG GTATGTTCTC TTTCGTGTTG GACCTTATAG TATATCTGGG AAAACAGACA TTGAATAAAT ATCACAAATG CAAGTGAGTG TTTCAGAGAC 2800
TTGTCTTATC CATACAAGAG AAAGCACAAC CTGGAATATC ATATAGACCC TTTTGTCTGT AACTTATTTA GTTCACTCAC AAAGTCTCTG
       Fru4HI
      PvuII
      NspBII
    Fru4HI
  NspHI         BtvI
    
Figure C98813646005416
        
ATGCAGCTGC TACATCAAAC CAAAACAGAA CAAAACAAAC AACCCAAAAA CTGACCAGTG GGATTAAGTG TAAATAGGCA CACAAATGCA CAAATATGCT 2900
TACGTCGACG ATGTAGTTTG GTTTTGTCTT GTTTTGTTTG TTGGGTTTTT GACTGGTCAC CCTAATTCAC ATTTATCCGT GTGTTTCGTA GTTTATACGA
                                                                                  BslI
                                                                             Bsp1286I
                                                                        MunI BanII
                                                                  
Figure C98813646005418
     
Figure C98813646005419
   
TTTATAAAAT ACTGAAGCAG TGACAGAGAC ACACACAAGA TATAAAGACA CAATGAAGAA CAATTGAGCC CAAAGCTGGA AAGGGTGAGA GTGTGAAGGA 3000
AAATATTTTA TCACTTCGTC ACTGTCTCTG TGTGTGTTCT ATATTTCTGT GTTACTTCTT GTTAACTCGG GTTTCGACCT TTCCCACTCT CACACTTCCT
        10         20         30         40         50         60         70         80         90        100
1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890
           DpnI
       Sau3aI
       MooI
       Fba-I
       DpnII                                 SccFI
       BclI                                  BstNI           FckI       DraIII
       
Figure C9881364600551
                                                      
Figure C9881364600555
AAAAGGTTGA TCAGAGAAGT TTTCCCGAAG GAGAGAAAGC CTGGATGATT AGGAGGCAAC CACTCGGTGA CTGAGGGAAA TCTGAAAAAT GTATTTGTCA 3100
TTTTCCAACT AGTCTCTTCA AAAGGGCTTC CTCTCTTTCG GACCTACTAA TCCTCCGTTG GTGAGCCACT GACTCCCTTT AGACTTTTTA CATAAACAGT
                                                                      PflMI
                                                                      BslI       SspI
                                                                   
Figure C9881364600556
          
TCTTCTCAGA CTTGCTGAAG GAATGACTTG GGTACTTTGA GGATTTCAGT AATTTTTCCA TGACTTGGTA TAATATTTCA AAAGGAAATA GGCTGACTTT 3200
AGAAGAGTCT GAACGACTTC CTTACTGAAC CCATGAAACT CCTAAAGTCA TTAAAAAGGT ACTGAACCAT ATTATAAAGT TTTCCTTTAT CCGACTGAAA
             PleI             TaqI                           SspI                   AflII
                                                       
Figure C98813646005510
                    
ATTTGTATAA TGAATGTGAC TCCTTCCTCG ACTGCCATAG AAATAAACTC CTTAATATTT TGGGTTTGTC TTTGCACTTA AGTAATCAGT CATTCTGTTT 3300
TAAACATATT ACTTACACTG AGGAAGGAGC TGACGGTATC TTTATTTGAG GAATTATAAA ACCCAAACAG AAACGTGAAT TCATTAGTCA GTAAGACAAA
                             SpeI
                        HaeIII                    AciI
      PleI             Sau96I       PleI       BbsI Fru4HI                     EcoRI
    
Figure C98813646005513
                             
Figure C98813646005518
                      
Figure C98813646005519
TTTTACAGGG TGACTCTGGT GGCCCACTAG TACAAGAAGA CTCACGGCGG CTTTGGTTTA TTGTGAAGCC GAATTC                           3376
AAAATGTCCC ACTGAGACCA CCGGGTGATC TTGTTCTTCT GAGTGCCGAA GAAACCAAAT AACACTTCGG CTTAAG
       
内含子C外显子
       

Claims (2)

1.人呼吸道胰蛋白酶样酶内含子C的基因片段，包含由序列号17表示的碱基序列。
2.一对能够扩增包含序列号17所示的Mbo I RFLP位点或Bst UIRFLP位点的DNA片段的PCR引物，它是引物对C1和C2，即序列号11和12。
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