CN1218704C - 注射用藻酸双酯钠及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明是一种冻干型注射用藻酸双酯钠，含有藻酸双酯钠、赋形剂(氯化钠、甘露醇、右旋糖酐40等)，其中每1000瓶中含所述各成份的重量配比为：藻酸双酯钠25-200克，赋形剂200-25克。本发明采用先进的低温冷冻干燥工艺，将其制成冻干制剂，即克服了片剂型产品生物利用度较低的缺点，又解决了注射液型产品因受高温灭菌而造成的变色、保存期内不稳定的缺点，使该产品在保存期内更加稳定，更适合于临床应用。具有降低血液粘度、抗凝血、降血脂、改善微循环等作用，用于缺血性心、脑血管病和高脂血症的防治，具有性能稳定，安全可靠，临床使用方便等优点。

Description

注射用藻酸双酯钠及其制备方法

                               技术领域

本发明涉及一种冻干型注射用藻酸双酯钠，属医药配制品。

                               背景技术

藻酸双酯钠是以藻酸为基础原料，用化学方法引入有效基团合成而得，为酸性多糖类药物。藻酸双酯钠具有强分散乳化性能，且不易受外界因子影响，因其具有阴离子聚电解质纤维结构的特点，沿链电荷集中，在其电斥力的作用下，能使富含负电荷的细胞表面增加相互之间的排斥力，故能阻抗红细胞之间和红细胞与血管壁之间的粘附，具有改善血液流变学的粘弹性的作用。另外，藻酸双酯钠能使凝血酶失活，具抗血栓、降血粘度、微动静脉解痉、红细胞及血小板解聚等***素(PG12)样作用。藻酸双酯钠还具有明显降低血脂的作用，能抑制动脉粥样硬化病变的发生和发展，对外周血管有明显的扩张作用，能有效改善微循环，抑制动静脉内血栓的形成。临床上主要用于缺血性脑血管病，如脑血栓、脑栓塞、短暂性脑缺血发作及心血管疾病和高血压、高脂蛋白血症、冠心病、心绞痛等疾病的防治。也可用于治疗弥漫性血管内凝血、慢性肾小球肾炎及出血热等。

目前以藻酸双酯钠为原料的制剂有藻酸双酯钠片、藻酸双酯钠注射液等，临床使用以来深受广大患者的欢迎。通过临床观察，藻酸双酯钠片虽服用较方便，但因其受崩解、首过效应等因素的影响，其生物利用度较低；藻酸双酯钠注射液，虽生物利用度较高、疗效较快，但因其在制造生产过程中需高温灭菌，会使部分活性成分降解，导致外观色泽变化，在保存期内不稳定，从而直接影响疗效。

                               发明内容

本发明的目的是针对上述不足，提供一种性能稳定，安全可靠，临床使用方便的冻干粉针剂注射用藻酸双酯钠。

本发明的注射用藻酸双酯钠中含有藻酸双酯钠、赋形剂(骨架剂)，其中每1000瓶中含所述各成份的重量配比为：

藻酸双酯钠      25-200克

赋  形  剂      200-25克。

上述赋形剂(骨架剂)选自：氯化钠、甘露醇、右旋糖酐40等。

本发明的另一个目的是提供注射用藻酸双酯钠的制备方法，其制备方法包括下述步骤：

(1)量取总体积80％的注射用水，当PH值高于5时用浓度为10％的盐酸溶液、PH值低于3时用浓度为4％的氢氧化钠溶液，调PH值至3-5，加入赋形剂(骨架剂)，搅拌至完全溶解；

(2)称取藻酸双酯钠、占总体积0.1％重量的针用活性炭，加入(1)所得溶液中，搅拌至完全溶解后，补加注射用水至全量，当PH值高于5时用浓度为10％的盐酸溶液、PH值低于3时用浓度为4％的氢氧化钠溶液，调PH值至3-5，经脱炭后用0.45μm微孔薄膜过滤，得粗滤液；

(3)将(2)所得粗滤液用0.22μm微孔滤膜过滤，得精滤液；

(4)将(3)所得精滤液装瓶、半落塞，冷冻干燥32-41小时，压全塞、压盖得冻干型注射用藻酸双酯钠。

本发明制备方法(4)中所述的冷冻干燥工艺为：

(1)冷冻温度-40℃--45℃，冷冻6-7小时；

(2)第一次升华温度由-40℃升华到30℃，18-22小时；

(3)第二次升华温度由30℃升华到38℃，8-12小时。

本发明的注射用藻酸双酯钠采用先进的低温冷冻干燥工艺制成冻干制剂，即克服了片剂型产品生物利用度较低的缺点，又解决了注射液型产品受高温灭菌影响而造成的易变色、保存期内不稳定的缺点。经高温对比试验表明，在相同的贮存条件下，藻酸双酯钠的冻干型产品比其注射液型产品更加稳定，更适合于临床应用。具有降低血液粘度、抗凝血、降血脂、改善微循环等作用，用于缺血性心、脑血管病和高脂血症的防治，具有性能稳定，安全可靠，临床使用方便等优点。

试验1：注射用藻酸双酯钠的高温对比试验

将供试品放在60℃的恒温箱内放置10天，分别于0天、5天、10天取样检验，其结果如表1。

                                       表1高温对比试验检测结果

时间	剂型、批号	含量(％)	重均分子量及其分布	性状	PH值
						0天	冻干型20010708注射液20010709	92.293.0	36580＝10％≤17224≤10％＝691439580＝10％≤16380≤10％＝5342	白色疏松块状物无色澄明液体	4.54.5
5天	冻干型20010708注射液20010709	91.889.5	39118＝10％≤17539≤10％＝65554989＝10％≤15973≤10％＝4312	白色疏松块状物微黄色澄明液体	4.54.9
						10天	冻干型20010708注射液20010709	91.684.8	38911＝10％≤17506≤10％＝636755128＝10％≤15487≤10％＝3216	类白色疏松块状物黄色澄明液体	4.65.3

结果分析：从以上结果可看出，在相同的贮存条件下，冻干型产品较稳定，各项指标变化不大，均符合标准规定；而注射液型产品各项指标变化较明显，其中含量下降7.4个百分点，颜色由无色变至黄色，PH值由4.5升至5.3，均超出标准规定范围。重均分子量亦有较大变化，小分子物质逐渐减少，大分子物质逐渐增多，表明温度高低对藻酸双酯钠的性质影响较大，在相同的贮存条件下，冻干型产品的稳定性要远远超过注射液型产品的稳定性。

试验2：注射用藻酸双酯钠的溶血性试验

(1)试验目的：观察注射用藻酸双酯钠对家兔红细胞有无溶血和凝集作用。

(2)试验材料：

受试物：注射用藻酸双酯钠，规格：100mg。批号：20020429-3。由吉林市卓怡康纳制药有限公司提供。用生理盐水配制成0.5mg/ml，备试验用。

阴性对照物：氯化钠注射液(生理盐水)，500ml/瓶，由三九益民制药有限公司提供，批号：2001042903。

动物：大耳白兔1只，雄性，体重3kg，由山东鲁抗医药集团提供，合格证号：鲁动质字200008001。

(3)仪器：XLJ-II型离心沉淀机，上海医用分析厂。LSY型电热恒温水浴箱，北京医疗设备厂。

(4)试验方法：

2％的红细胞混悬液的制备：取兔1只，心脏穿刺采血10ml，放入盛有无菌玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白，使成脱纤血液，置刻度离心管中加入适量的生理盐水摇匀，以3000转/分离心，每次10分钟，弃去上清液，反复洗涤数次，至离心后上清液无色为止，将所得红细胞用生理盐水配成2％的红细胞混悬液，供试验用。

溶血试验：取试管7支，按表2配比加入供试药量、2％的红细胞悬液、生理盐水和蒸馏水，轻轻混匀后，放置37℃水浴中分别观察各管在0.5、1.0、2.0、3.0、4.0小时各管有无溶血及红细胞凝集现象。

                               表2注射用藻酸双酯钠溶血试验加样表

组别	检测试管号
								1	2	3	4	5	6	7
	注射用藻酸双酯钠(ml)生理盐水(ml)蒸馏水(ml)2％红细胞混悬液(ml)	0.12.402.5	0.22.302.5	0.22.202.5	0.42.102.5	0.52.002.5	02.502.5								002.52.5

结果判断：全溶血：溶液澄明红色，管底无红细胞残留。

          部分溶血：溶液澄明红色或棕色，管底有少量红细胞残留。

         无溶血：红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。

         凝集：虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。

(5)结果：见表3所示，除第7支管(蒸馏水对照)出现溶血外，供试药物各管均未出现溶血或凝集反应。

               表3注射用藻酸双酯钠试验结果

观察时间(h)	检测试管号
								1	2	3	4	5	6	7
	0.5	-	-	-	-	-	-								+
1.0								-	-	-	-	-	-	+
	2.0	-	-	-	-	-	-								+
3.0								-	-	-	-	-	-	+
	4.0	-	-	-	-	-	-								+

(6)结论：试验结果表明，注射用藻酸双酯钠在观察时间内无明显溶血及红细胞凝集现象发生。

试验3：注射用藻酸双酯钠的过敏性试验

(1)试验目的：观察注射用藻酸双酯钠对豚鼠有无致敏反应，为临床安全用药提供试验依据。

(2)试验材料：

受试物：注射用藻酸双酯钠，规格：100mg。批号：20020429-3。由吉林市卓怡康纳制药有限公司提供。用生理盐水配制成0.5mg/ml，备试验用。

阴性对照物：氯化钠注射液(生理盐水)，500ml/瓶，由三九益民制药有限公司提供，批号：2001042903。

阳性对照物：5％卵白蛋白生理盐水溶液，无菌条件下取新鲜蛋清，用生理盐水配成5％浓度备用。

动物：豚鼠，18只，体重250-300g，雌雄兼用，由济南三九益民制药有限公司提供，合格证号：鲁动质字200001012。

(3)动物饲养环境：

SPF动物实验室，合格证号：鲁动环字200001002，温度20-24℃，湿度40-70％，风速0.1-0.2m/秒，气流≥28次/时。

笼具：吴县通安医学实验设备厂生产，合格证号：苏动(笼)94005。

饲料：山东省实验动物中心提供，合格证号：鲁动饲字200001001。

(4)试验方法：

取豚鼠18只，随机分为阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(卵白蛋白)及药物组，每组6只。各组动物间日腹腔注射相应药液0.5ml/只，连续3次。分别在第一次注射后14日及21日每组各取3只豚鼠静脉注射相应药液1ml/只，观察注射后15分钟内各组豚鼠有无过敏反应。

结果判断：根据《中华人民共和国药典》(2000版，二部)规定，观察给药后15分钟内豚鼠有无过敏反应，如有竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕或咳嗽3声等现象中的两种或两种以上者，或有啰音、抽搐、虚脱或死亡现象之一者，应判为阳性。

(5)结果：豚鼠于第一次给药后14天及21天静脉注射受试物1ml/只，均未出现竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕或咳嗽3声等现象，也未出现啰音、抽搐、虚脱或死亡等，与阴性对照组无差异。阳性对照组动物于第一次给药后14天及21天静脉注射5％卵白蛋白生理盐水溶液后，均出现站立不稳、抽搐、呼吸困难等症状，6只豚鼠均在给药后4分钟内死亡。

(6)结论：根据《中华人民共和国药典》(2000版，二部)规定，注射用藻酸双酯钠过敏试验结果为阴性。

试验4：注射用藻酸双酯钠的静脉刺激性试验

(1)试验目的：观察静脉滴注注射用藻酸双酯钠对大耳白兔血管(静脉)的刺激作用。

(2)试验材料：

受试物：注射用藻酸双酯钠，规格：100mg。批号：20020429-3。由吉林市卓怡康纳制药有限公司提供。用生理盐水配制成0.5mg/ml，备试验用。

阴性对照物：氯化钠注射液(生理盐水)，500ml/瓶，由三九益民制药有限公司提供，提，批号：2001042903。

动物：大耳白兔6只，雌雄兼用，体重2.0-2.5kg，由山东鲁抗医药集团提供，合格证号：鲁动质字200008001。

(3)试验方法：家兔6只，按体重随机分为注射用藻酸双酯钠给药组及氯化钠注射液对照组，每组3只。将动物固定于兔箱内，左侧耳缘静脉点滴相应药液，点滴量为15ml/kg，滴注速度1ml/分钟。每日滴注1次，连续3天。滴注期间及滴注后，注意观察滴注部位有无红肿等刺激作用。在末次给药24小时后，将动物处死，剪下左侧兔耳自进针部位近心端1cm处取材，进行病理组织学检查。

(4)结果：

肉眼观察：每次滴注期间及滴注后观察，受试药物组兔耳部位未出现明显的血管扩张、充血、发热等刺激反应，与对照组相比无明显差异。

病理组织学检查：对照组送检标本组织结构正常，耳缘静脉未见扩张，血管内皮细胞也未见增多及排列紊乱等改变，血管壁无增厚及炎症等病理形态学改变；受试药物组送检标本组织结构正常，血管内皮细胞未见增多及排列紊乱等改变，耳缘静脉也未见扩张，血管壁无增厚及炎症等病理形态改变，与对照组比较无明显差异(病理照片省略)。

(5)结论：注射用藻酸双酯钠静脉滴注无明显血管刺激作用。

试验5：注射用藻酸双酯钠的药物稳定性试验

(1)仪器与材料：

高压液相色谱仪(美国)，凝胶柱(300×7.8mm)，SYSTEMRI-150示差检测器(美国TSP公司)，GPC软件(北京龙智达公司)。

恒温培养箱：立鹤牌电热恒温培养箱，山东潍坊医疗器械股份有限公司。

人工气候箱(光照4500lx)型号LRH-250-GS，广东医疗器械厂。

标准多糖，购于中国生物制品检定所生化室。

其它试剂均为分析纯。

(2)加速实验：

考察方法：

将样品，于40℃±2℃恒温培养箱中放置6个月，分别于0，1，2，3，6月取样，考察其鉴别、性状、藻酸双酯钠含量、重均分子量及分子量分布的变化。

样品来源  吉林市卓怡康纳制药有限公司  批号20010708-1，20010708-2，20010708-3

考察项目按“质量标准”项下方法进行，重均分子量及其分布按中国药典二部多糖分子量的分布和测定方法进行。结果见表4、5、6。

                          批号20010708-1表4 40℃±2℃加速试验检测结果

时间	含量(％)	重均分子量及其分布	性状	PH	澄明度	溶液的颜色
							0月1月2月3月6月	92.291.492.391.890.6	36582＝10％≤17224≤10％＝691434913＝10％≤16922≤10％＝535034794＝10％≤16946≤10％＝539634779＝10％≤16816≤10％＝531135047＝10％≤16980≤10％＝5373	白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状物	4.54.54.54.54.5	合格合格合格合格合格	合格合格合格合格合格
含量RSD％＝0.58           重均分子量RSD％＝0.88

结果：从表4可以看出，本品性状、PH、澄明度、溶液的颜色均符合要求，含量与重均分子量RSD％均小于5％，即变化不明显，产品稳定。

                        批号20010708-2表5 40℃±2℃加速试验检测结果

时间	含量(％)	重均分子量及其分布	性状	PH	澄明度	溶液的颜色
							0月1月2月3月6月	91.891.090.891.490.6	37942＝10％≤17233≤10％＝661134631＝10％≤16815≤10％＝533134928＝10％≤16973≤10％＝543535077＝10％≤17011≤10％＝537734645＝10％≤16794≤10％＝5311	白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状物	4.54.54.54.54.5	合格合格合格合格合格	合格合格合格合格合格
含量RSD％＝0.42              重均分子量RSD％＝0.76

结论：从表5可以看出，本品性状、PH、澄明度、溶液的颜色均符合要求，含量重均分子量RSD％均小于5％，即变化不明显，产品稳定。

                         批号20010708-3表6 40℃±2℃加速试验检测结果

时间	含量(％)	重均分子量	性状	PH	澄明度	溶液的颜色
							0月1月2月3月6月	93.493.692.892.092.4	38488＝10％34660＝10％35047＝10％35182＝10％34557＝10％	白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状物	4.54.54.54.54.5	合格合格合格合格合格	合格合格合格合格合格
含量RSD％＝0.57           重均分子量RSD％＝0.96

结论：从表6可以看出，本品性状、PH、澄明度、溶液的颜色均符合要示，含量与重均分子量RSD％均小于5％，即变化不明，产品稳定。

结论：根据6个月加速实验考察结果表明，中试3批样品前后变化不明显，说明样品稳定。

(3)长期试验

考察方法：

将此批号为20010708-1，20010708-2，20010708-3的试品于25℃±2℃恒温培养箱中长期放置12个月，定期取样检测性状、鉴别、含量、澄明度、溶液的颜色、重均分子量及PH的变化。

考察指标按“质量标准”进行，重均分子量按中国药典2000年版二部多糖分子量的分布和测定方法进行，在10000-25000道尔顿；分子量分布大于50000，小于10％；小于3000小于10％。结果见表7、8、9。

                          批号20010708-1表7 25℃±2℃长期试验检测结果

时间	鉴别	含量(％)	重均分子量及其分布	性状	PH	澄明度	溶液的颜色
								0月3月6月9月12月	(1)(2)(1)(2)(1)(2)(1)(2)(1)(2)	92.291.692.091.491.8	36582＝10％≤17224≤10％＝691434681＝10％≤16782≤10％＝531134749＝10％≤16751≤10％＝524334779＝10％≤16870≤10％＝537335914＝10％≤16502≤10％＝6284	白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状物	4.54.44.44.54.3	合格合格合格合格合格	合格合格合格合格合格
含量RSD％＝0.31             重均分子量RSD％＝0.26

鉴别项符合要求

结论：从表7可以看出，本品性状、鉴别、PH、澄明度、溶液的颜色均无明显变化，藻酸双酯钠含量RSD％与重均分子量RSD％均小于5％，说明本品放置12个月前后变化不明显，本品稳定。

                         批号20010708-2表8 25℃±2℃长期试验检测结果

时间	鉴别	含量(％)	重均分子量及其分布	性状	PH	澄明度	溶液的颜色
								0月3月6月9月12月	(1)(2)(1)(2)(1)(2)(1)(2)(1)(2)	91.892.091.091.490.8	37942＝10％≤17233≤10％＝661134779＝10％≤16826≤10％＝533134498＝10％≤16669≤10％＝524834719＝10％≤16770≤10％＝528235639＝10％≤16611≤10％＝6645	白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状物	4.54.54.44.44.3	合格合格合格合格合格	合格合格合格合格合格
含量RSD％＝1.97             重均分子量RSD％＝0.99

鉴别项符合要求

结论：从表8可以看出，本品性状、鉴别、PH、澄明度、溶液的颜色均符合要求，藻酸双酯钠RSD％与重均分子量RSD％均小于5％，说明本品放置一年，变化不明显，本品稳定。

                           批号20010708-3表9 25℃±2℃长期试验检测结果

时间	鉴别	含量(％)	重均分子量及其分布	性状	PH	澄明度	溶液的颜色
								0月3月6月9月12月	(1)(2)(1)(2)(1)(2)(1)(2)(1)(2)	93.492.893.092.492.2	38488＝10％≤17399≤10％＝650735333＝10％≤16992≤10％＝533134631＝10％≤16795≤10％＝537335047＝10％≤16846≤10％＝526837098＝10％≤17134≤10％＝6644	白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状块白色疏松块状物白色疏松块状物	4.24.34.24.14.2	合格合格合格合格合格	合格合格合格合格合格
含量RSD％＝0.40                 重均分子量RSD％＝1.10

鉴别项符合要求

结论：从表9可以看出，本品性状、鉴别、PH、澄明度、溶液的颜色符合要求，藻酸双酯钠含量RSD％与重均分子量RSD％均小于5％，说明本品前后变化不明显，本品稳定。

(5)结论

从上述加速实验、长期试验结果表明，本品在40℃±2℃条件下放置6个月，各项指标均符合质量标准规定，长期放置12个月，各项指要均无显著变化。

                             具体实施方式

下面结合注射用藻酸双酯钠制备的实施例对本发明作进一步描述。

实施例1：

各原料的配比为：

藻酸双酯钠     200克

氯  化  钠     25克

注 射 用 水    2000毫升  制成1000瓶

制备方法如下：取注射用水1600毫升，用浓度为10％盐酸溶液或浓度为4％氢氧化钠溶液调PH值至4.5，加入氯化钠25克，搅拌至完全溶解；取藻酸双酯钠200克、针用活性炭2克，加入上述溶液中，搅拌至完全溶解后，补加注射用水至2000毫升，用浓度为10％盐酸溶液或浓度为4％氢氧化钠溶液调PH值至4.5，经脱炭后用0.45μm微孔薄膜过滤后再用0.22μm微孔滤膜过滤；将所得精滤液装瓶、半加塞，冷冻干燥36小时，其中：冷冻温度-40℃，冷冻6小时；第一次升华温度由-40℃升华到30℃，20小时；第二次升华温度由30-38℃，10小时；之后压全塞、压盖得注射用藻酸双酯钠。

本实施例制成的注射用藻酸双酯钠，规格：100mg/瓶；用法与用量：静脉滴注，成人，按体重一次1-3mg/kg(50-100mg)，最大不超过150mg。临用前溶于输液(生理盐水或5％葡萄糖、6％羟乙基淀粉等)500-1000ml中稀释后，缓慢滴注，一日1次，10-14日为一疗程。

实施例2：

各原料的配比为：

藻酸双酯钠     100克

甘  露  醇     50克

注 射 用 水    2000毫升  制成1000瓶

制备方法与实施例1基本相同，冷冻干燥37小时，其中：冷冻温度-40℃，冷冻7小时；第一次升华温度由-40℃升华到30℃，20小时；第二次升华温度由30-38℃，10小时。

实施例3：

各原料的配比为：

藻酸双酯钠     25克

右旋糖酐40     200克

注 射 用 水    2000毫升  制成1000瓶

制备方法与实施例1基本相同，冷冻干燥36小时，其中：冷冻温度-40℃，冷冻6小时；第一次升华温度由-40℃升华到30℃，20小时；第二次升华温度由30-38℃，10小时。

各实施例中所用原辅料的来源及质量标准如下：

原辅料        来源                          质量标准

藻酸双酯钠    大连奥森制药厂海滨分厂        中国***部颁标准95年二部第四分册

氯化钠        威海亚太药业有限公司          中国药典2000年版二部

甘露醇        吉林市康乃尔药业股份有限公司  中国药典2000年版二部

右旋糖酐40    上海葡萄糖厂                  中国药典2000年版二部

注射用水      山东绿叶制药股份有限公司      中国药典2000年版二部

针用活性炭    上海活性炭厂                  中国药典2000年版二部

Claims (2)

1、一种冻干型注射用藻酸双酯钠，其特征在于含有藻酸双酯钠、赋形剂，其中每1000瓶中含所述各成份的重量配比为：

藻酸双酯钠         100克

甘  露  醇         50克。

2、如权利要求1的注射用藻酸双酯钠的制备方法，其特征在于其制备方法包括下述步骤：

(1)量取总体积80％的注射用水，当PH值高于5时用浓度为10％的盐酸溶液、PH值低于3时用浓度为4％的氢氧化钠溶液，调PH值至3-5，加入赋形剂，搅拌至完全溶解；

(2)称取藻酸双酯钠、占总体积0.1％重量的针用活性炭，加入(1)所得溶液中，搅拌至完全溶解后，补加注射用水至全量，当PH值高于5时用浓度为10％的盐酸溶液、PH值低于3时用浓度为4％的氢氧化钠溶液，调PH值至3-5，经脱炭后用0.45μm微孔薄膜过滤，得粗滤液；

(3)将(2)所得粗滤液用0.22μm微孔滤膜过滤，得精滤液；

(4)将(3)所得精滤液装瓶、半落塞，冷冻干燥37小时，其中：冷冻温度-40℃，冷冻7小时；第一次升华温度由-40℃升华到30℃，20小时；第二次升华温度由30-38℃，10小时，压全塞、压盖得注射用藻酸双酯钠。