CN1189481C - 人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 - Google Patents

人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN1189481C
CN1189481C CN 02116263 CN02116263A CN1189481C CN 1189481 C CN1189481 C CN 1189481C CN 02116263 CN02116263 CN 02116263 CN 02116263 A CN02116263 A CN 02116263A CN 1189481 C CN1189481 C CN 1189481C
Authority
CN
China
Prior art keywords
ser
trail
protein
glu
leu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN 02116263
Other languages
English (en)
Other versions
CN1448405A (zh
Inventor
陈佺
陈英玉
马大龙
韩文玲
金海京
王晓慧
李现亭
史须
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Peking University
Institute of Zoology of CAS
Original Assignee
Peking University
Institute of Zoology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Peking University, Institute of Zoology of CAS filed Critical Peking University
Priority to CN 02116263 priority Critical patent/CN1189481C/zh
Publication of CN1448405A publication Critical patent/CN1448405A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1189481C publication Critical patent/CN1189481C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白是一个包含氨基酸112-281 TRAIL蛋白的一个片段，在蛋白质一级结构中，N末端为脯氨酸，C末端为甘氨酸，含有11个精氨酸、6个组氨酸、11个赖氨酸、一个半胱氨酸，等电点PI＝9.27，为一碱性蛋白；该蛋白质的二级结构中包含两个反向平行的β片层；该蛋白的cDNA序列由510个核苷酸组成，编码170个氨基酸；该蛋白能够显著诱导肿瘤细胞的凋亡，杀死或/和抑制动物体内肿瘤细胞的生长，与国际上普遍使用的TRAIL95-281片段比较，本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白具有分子量小、活性高的特点，在肿瘤治疗药物的制备中具有广阔的应用前景。

Description

人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用
                             发明领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及一种人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用。
                             背景技术
TRAIL(TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand)/Apo-2L是1995年发现的能诱导多种肿瘤细胞发生凋亡的细胞因子，属TNF超家族成员之一。人的TRAIL蛋白属于II型跨膜蛋白，它的一级结构由281个氨基酸组成，分子量为32kDa，其中胞浆区有17个氨基酸，跨膜区有21个氨基酸，胞外区则有243个氨基酸。
TRAIL蛋白的分布非常广泛，在心肌细胞、淋巴细胞、脾细胞、胸腺细胞、***细胞、卵巢和小肠细胞上均有表达，但在正常的肝细胞、脑细胞和睾丸细胞上则不表达。TRAIL的胞外区可被金属蛋白酶割裂下来而成为可溶性的细胞因子，生物学功能研究证实，可溶性TRAIL蛋白可诱导不同来源的肿瘤细胞及病毒转化的细胞发生凋亡，包括肠癌、乳腺癌、黑色素瘤、肺癌、肾癌、中枢神经***肿瘤、白血病、皮肤癌和多发性骨髓瘤细胞等。动物全身使用重组的可溶性TRAIL，可诱导所接种的肿瘤细胞发生凋亡、肿瘤生长受抑、提高荷瘤动物的存活期，而且在啮齿类和其它灵长类动物的体内实验中没有发现任何毒副作用。
目前国际上普遍使用的重组可溶性TRAIL包含一个氨基酸95～281的片段。该蛋白质分子量大、杀肿瘤细胞活性低，诱导50％细胞凋亡率的蛋白质浓度在200ng/ml以上。
                           发明内容
本发明的目的在于提供一种具有分子量小、活性高的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白；
本发明的另一目的在于该人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白在制备肿瘤治疗药物中的应用。
本发明的技术方案如下：
本发明提供的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白是一个包含氨基酸112～281TRAIL蛋白的一个片段，在蛋白质一级结构中，N末端为脯氨酸，C末端为甘氨酸，含有11个精氨酸、6个组氨酸、11个赖氨酸、一个半胱氨酸，等电点PI＝9.27，为一碱性蛋白；人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的二级结构中包含两个反向平行的β片层；该蛋白的cDNA序列有510个核苷酸组成，编码170个氨基酸。
该人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的cDNA序列为序列1；
该人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的氨基酸序列为序列2。
本发明提供的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白在制备肿瘤治疗药物中的应用，即可用于制备肿瘤治疗药物。
本发明提供的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白能显著诱导肿瘤细胞凋亡，杀死或/和抑制动物体内肿瘤细胞的生长；与国际上普遍使用的TRAIL95～281片段比较，TRAIL112～281具有分子量小、杀肿瘤细胞活性高(诱导50％细胞凋亡率的蛋白质浓度在10ng/ml左右)的特点，比TRAIL95～281蛋白的杀肿瘤细胞活性高20倍，是一个值得开发的潜在的抗肿瘤药物。
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的制备如下：
1.构建pGEX-4T-TRAIL-170质粒载体
根据已知的人TRAIL cDNA序列，设计了上游和下游两条寡聚核苷酸引物，上游引物为：CGG AAT TCC CCT AGT GAG AGA AAG AGG；下游引物为：CGG AAT TCTTAA CCA ACT AAA AAG GCC CC；以pSectagA-TRAIL为模板，用PCR方法扩增长度为510bp的TRAIL cDNA片段；将PCR产物进行回收、纯化，用T4 DNA Ligase连接过夜，克隆至pGEX-4T载体中，构建成pGEX-4T-TRAIL170质粒载体(图1，图1为pGEX-4T-TRAIL170质粒载体的构建示意图)；
2.将该质粒转化DH5α菌，筛选阳性克隆，得到表达人截短型重组可溶性TRAIL-170质粒的菌株，从菌株中提取质粒，将得到的质粒在3100测序仪上进行测序及DNA序列分析，结果证明：该质粒的cDNA序列与Gene Bank登录的TRAILcDNA全长序列中的421～930碱基序列完全相同；
将pGEX-4T-TRAIL-170质粒转化BL21大肠杆菌，加入IPTG(50μM)，在30℃振荡培养4小时，6000rpm离心10min，弃上清，PBS混悬细菌沉淀，加入溶菌酶(100μg/ml)，冰浴后超声波裂解菌体，16000rpm离心30min，收集上清，过谷胱甘肽-Sepharose-4B柱，再经凝血酶酶切，收集切割下来的蛋白溶液；该蛋白溶液即为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白；经SDS-PAGE电泳显示，所得的TRAIL-170蛋白纯度为85％以上，见图2，图2为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白在大肠杆菌的表达和纯化的电泳图，图2中，1为未诱导的BL21菌株，2为诱导的BL21菌株，3为包涵体，4为纯化的TRAIL-170蛋白，5为GST蛋白，6为中分子量蛋白标准，由图2可知，本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白纯度为85％以上；
经测定，本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的生物学特性为：
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白是一个包含氨基酸112-281 TRAIL蛋白的一个片段，在蛋白质一级结构中，N末端为脯氨酸，C末端为甘氨酸，含有11个精氨酸、6个组氨酸、11个赖氨酸、一个半胱氨酸，等电点PI＝9.27，为一碱性蛋白；该蛋白的二级结构中包含两个反向平行的β片层；该人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的cDNA序列由510个核苷酸组成，编码170个氨基酸；
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的cDNA序列为序列1；
本发明人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的氨基酸序列为序列2。
                              附图说明
附图1为pGEX-4T-TRAIL-170质粒载体的构建示意图；
附图2为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白在大肠杆菌的表达和纯化的电泳图；
1为未诱导的BL21菌株     2为诱导的BL21菌株
3为包涵体               5为GST蛋白
4为纯化的本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白
6为中分子量蛋白标准
附图3-1至图3-8为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白诱导Jurkat细胞凋亡的流式细胞术检测示意图，呈现剂量依赖性关系；本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著诱导肿瘤细胞的凋亡；
其中：
附图3-1：未用TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞对照组，细胞的凋亡率为21.5％；
附图3-2：100ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为89.55％；
附图3-3：50ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为86.55％；
附图3-4：25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为82.53％；
附图3-5：12.5ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为79.53％；
附图3-6：6.25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为66.68％；
附图3-7：3.125ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为57.19％；
附图3-8：1.56ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为45.53％；
附图4-1至图4-8为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白诱导MCF7细胞凋亡的流式细胞检测示意图；本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著诱导肿瘤细胞的凋亡；
附图4-1：未用TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞对照组，细胞的凋亡率为6.36％；
附图4-2：1000ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为67.01％；
附图4-3：500ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为55.29％；
附图4-4：250ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为48.85％；
附图4-5：100ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为44.35％；
附图4-6：50ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为40.13％；
附图4-7：25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为23.05％；
附图4-8：12.5ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为17.81％；
附图5为PBS组和本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组的肿瘤重量比较示意图；本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著抑制小鼠体内肿瘤细胞的生长，p＝0.049＜0.05；
附图6为PBS组和本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组的肿瘤大小比较示意图；本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著抑制小鼠体内肿瘤细胞的生长，p＝0.023＜0.05。
                           具体实施方式
实施例1，本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白具有杀伤肿瘤细胞作用的实验：
将纯化的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理各种不同的肿瘤细胞系，如Jurkat细胞系(人T淋巴细胞白血病细胞)、MCF-7细胞系(人乳腺癌细胞)、KU-8细胞系(人***癌细胞)、U937细胞系(人髓样白血病细胞)、NCI-H929细胞系和IM-9细胞系(人骨髓瘤细胞)，以FITC-Annexin V和PI染色为细胞凋亡的检测指标，流式细胞术分析TRAIL-170诱导肿瘤细胞凋亡的情况，结果证明，TRAIL-170具有广泛的杀伤肿瘤细胞的作用，但不同类型的肿瘤细胞敏感程度不一样，其中，Jurkat细胞系和MCF-7细胞系对TRAIL-170的敏感性最高，诱导Jurkat细胞50％凋亡率的TRAIL170蛋白浓度在10ng/ml左右，见附图3-1至附图3-8和附图4-1至附图4-8；
附图3-1至图3-8为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白诱导Jurkat细胞凋亡的流式细胞术检测示意图，呈现剂量依赖性关系；
其中：
附图3-1：未用TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞对照组，细胞的凋亡率为21.5％；
附图3-2：100ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为89.55％；
附图3-3：50ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为86.55％；
附图3-4：25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为82.53％；
附图3-5：12.5ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为79.53％；
附图3-6：6.25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为66.68％；
附图3-7：3.125ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为57.19％；
附图3-8：1.56ng/ml TRAIL-170蛋白处理的Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡率为45.53％；
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著诱导肿瘤细胞的凋亡；
附图4-1至图4-8为本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白诱导MCF7细胞凋亡的流式细胞检测示意图；
其中
附图4-1：未用TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞对照组，细胞的凋亡率为6.36％；
附图4-2：1000ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为67.01％；
附图4-3：500ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为55.29％
附图4-4：250ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为48.85％；
附图4-5：100ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为44.35％；
附图4-6：50ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为40.13％；
附图4-7：25ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为23.05％；
附图4-8：12.5ng/ml TRAIL-170蛋白处理的MCF7细胞凋亡，细胞凋亡率为17.81％；
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著诱导肿瘤细胞的凋亡；
实施例2，本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白具有杀伤小鼠体内肿瘤细胞的作用的实验：
实验用动物：Balb/C小鼠，共10只，分成两组，每组5只，一组为PBS阴性对照，另一组为TRAIL-170蛋白处理组；将体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞，4×106/只)连同TRAIL-170蛋白(100μg/只)或PBS，注射于小鼠背部皮下，5天后同剂量TRAIL-170蛋白或PBS加强注射，21天后处死小鼠，测量形成肿瘤的大小和重量，结果显示，PBS组小鼠背部均有肿瘤生长，且大小均匀，而TRAIL-170蛋白处理的小鼠有两只背部未长肿瘤，一只肿瘤较小，两只肿瘤的大小同PBS组，将两组的数据进行t检验，证明二者有显著性差异，见附图5和附图6，附图5为PBS组和本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组的肿瘤重量比较示意图；本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著抑制小鼠体内肿瘤细胞的生长，p＝0.049＜0.05；附图6为PBS组和本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组的肿瘤大小比较示意图；本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白处理组可显著抑制小鼠体内肿瘤细胞的生长，p＝0.023＜0.05；说明TRAIL-170蛋白在体内可以发挥杀肿瘤细胞作用，抑制肿瘤的生长。
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的cDNA序列为序列1：
cccctagtga  gagaaagagg  tcctcagaga  gtagcagctc  acataactgg
gaccagagga  agaagcaaca  cattgtcttc  tccaaactcc  aagaatgaaa
aggctctggg  ccgcaaaata  aactcctggg  aatcatcaag  gagtgggcat
tcattcctga  gcaacttgca  cttgaggaat  ggtgaactgg  tcatccatga
aaaagggttt  tactacatct  attcccaaac  atactttcga  tttcaggagg
aaataaaaga  aaacacaaag  aacgacaaac  aaatggtcca  atatatttac
aaatacacaa  gttatcctga  ccctatattg  ttgatgaaaa  gtgctagaaa
tagttgttgg  tctaaagatg  cagaatatgg  actctattcc  atctatcaag
ggggaatatt  tgagcttaag  gaaaatgaca  gaatttttgt  ttctgtaaca
aatgagcact  tgatagacat  ggaccatgaa  gccagttttt  tcggggcctt
tttagttggc
本发明的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白的氨基酸序列为序列2：
Pro Leu Val Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His Ile
Thr Gly Thr Arg Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn Ser
Lys Asn Glu Lys Ala Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu Ser
Ser Arg Ser Gly His Ser Phe Leu Ser Asn Leu His Leu Arg Asn
Gly Glu Leu Val Ile His Glu Lys Gly Phe Tyr Tyr Ile Tyr Ser
Gln Thr Tyr Phe Arg Phe Gln Glu Glu Ile Lys Glu Asn Thr Lys
Asn Asp Lys Gln Met Val Gln Tyr Ile Tyr Lys Tyr Thr Ser Tyr
Pro Asp Pro Ile Leu Leu Met Lys Ser Ala Arg Asn Ser Cys Trp
Ser Lys Asp Ala Glu Tyr Gly Leu Tyr Ser Ile Tyr Gln Gly Gly
Ile Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile Phe Val Ser Val Thr
Asn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala Ser Phe Phe Gly
Ala Phe Leu Val Gly

Claims (3)

1.一种人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白，其特征在于，该蛋白是TRAIL全长分子的一个片断，从TRAIL全长分子的第112位氨基酸开始，到281位氨基酸结束；在该蛋白质一级结构中，N末端为脯氨酸，C末端为甘氨酸，含有11个精氨酸、6个组氨酸、11个赖氨酸、一个半胱氨酸，等电点PI＝9.27，为一碱性蛋白；该蛋白质的二级结构中包含两个反向平行的β片层；TRAIL-170蛋白的cDNA序列由510个核苷酸组成，编码170个氨基酸。
2.按权利要求1所述的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白，其特征在于，该人截短型重组可溶性TRAIL-170的cDNA序列为：
cccctagtga gagaaagagg tcctcagaga gtagcagctc acataactgg
gaccagagga agaagcaaca cattgtcttc tccaaactcc aagaatgaaa
aggctctggg ccgcaaaata aactcctggg aatcatcaag gagtgggcat
tcattcctga gcaacttgca cttgaggaat ggtgaactgg tcatccatga
aaaagggttt tactacatct attcccaaac atactttcga tttcaggagg
aaataaaaga aaacacaaag aacgacaaac aaatggtcca atatatttac
aaatacacaa gttatcctga ccctatattg ttgatgaaaa gtgctagaaa
tagttgttgg tctaaagatg cagaatatgg actctattcc atctatcaag
ggggaatatt tgagcttaag gaaaatgaca gaatttttgt ttctgtaaca
aatgagcact tgatagacat ggaccatgaa gccagttttt tcggggcctt
tttagttggc
该人截短型重组可溶性TRAIL-170的氨基酸序列为：
Pro Leu Val Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His Ile
Thr Gly Thr Arg Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn Ser
Lys Asn Glu Lys Ala Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu Ser
Ser Arg Ser Gly His Ser Phe Leu Ser Asn Leu His Leu Arg Asn
Gly Glu Leu Val Ile His Glu Lys Gly Phe Tyr Tyr Ile Tyr Ser
Gln Thr Tyr Phe Arg Phe Gln Glu Glu Ile Lys Glu Asn Thr Lys
Asn Asp Lys Gln Met Val Gln Tyr Ile Tyr Lys Tyr Thr Ser Tyr
Pro Asp Pro Ile Leu Leu Met Lys Ser Ala Arg Asn Ser Cys Trp
Ser Lys Asp Ala Glu Tyr Gly Leu Tyr Ser Ile Tyr Gln Gly Gly
Ile Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile Phe Val Ser Val Thr
Asn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala Ser Phe Phe Gly
Ala Phe Leu Val Gly
3、一种权利要求1所述的人截短型重组可溶性TRAIL-170蛋白在制备肿瘤治疗药物中的应用。
CN 02116263 2002-03-28 2002-03-28 人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 Expired - Fee Related CN1189481C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 02116263 CN1189481C (zh) 2002-03-28 2002-03-28 人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 02116263 CN1189481C (zh) 2002-03-28 2002-03-28 人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1448405A CN1448405A (zh) 2003-10-15
CN1189481C true CN1189481C (zh) 2005-02-16

Family

ID=28680659

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 02116263 Expired - Fee Related CN1189481C (zh) 2002-03-28 2002-03-28 人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN1189481C (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK1915626T3 (da) * 2005-08-16 2012-02-13 Genentech Inc Apoptosesensitivitet mod Apo2L/TRAIL ved testning for GalNac-T14-ekspression i celler/væv
CN1958794B (zh) * 2005-11-03 2010-05-05 成都地奥九泓制药厂 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体编码cDNA及制备方法和应用
CN102370987B (zh) * 2010-08-26 2013-05-29 复旦大学 一种包载抗肿瘤药物组合物的注射用脂质体
WO2013037090A1 (zh) * 2011-09-16 2013-03-21 北京沙东生物技术有限公司 包含trail/apo2l环化变构体的融合蛋白及其编码基因与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN1448405A (zh) 2003-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1106846C (zh) 抗癌症剂
CN1869072A (zh) 与胶原特异结合的神经生长因子及其编码基因与应用
CN1189481C (zh) 人截短型重组可溶性trail－170蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用
CN1040033A (zh) 两亲肽及其用途
CN104311672A (zh) 一种具有肿瘤细胞靶向性的抑制剂多肽
CN1281623C (zh) 抗病毒活性的人α干扰素衍生物
CN1448404A (zh) 人截短型重组可溶性trail－180蛋白及其在制备肿瘤治疗药物中的应用
CN1207305C (zh) 一种重组人白细胞介素－11的制备方法
CN100335633C (zh) 用重组大肠杆菌制备N－末端乙酰化修饰的胸腺素α的方法
CN1121411C (zh) 多肽药物的高效基因工程生产方法
CN1724663A (zh) 以串连表达方式制备天然人胸腺素α1的方法
CN1760203A (zh) 一种抗菌三肽及其化学修饰物与应用
CN1861635A (zh) 人胰高血糖素相关肽－2类似物
CN1436792A (zh) 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体胞外区突变多肽及其制法与用途
CN100335499C (zh) C端氨基酸内酯修饰型胸腺素α1及其应用
CN1375500A (zh) 新的干扰素－胸腺肽融合蛋白及其制法和用途
CN1854296A (zh) 重组人干扰素β的生产方法
CN1170845C (zh) 大蹼铃蟾抗肿瘤蛋白及其制备方法和其基因
CN1234727C (zh) 人胸腺素α原基因突变体合成、表达及应用
CN1240436C (zh) 成骨生长肽与粒细胞集落刺激因子在造血方面的协同作用
CN1232536C (zh) 人干细胞因子巨噬细胞集落刺激因子双功能蛋白及制备
CN1448406A (zh) 人b淋巴细胞刺激因子突变体及其构建方法和编码基因
CN1259337C (zh) 人甲状旁腺激素基因突变体合成、表达、制备及应用
CN1260359C (zh) 高可溶性表达的天花粉蛋白突变体及其制备方法
CN1324046C (zh) 一种具有抗hiv活性的蛋白和糖结合蛋白

Legal Events

Date Code Title Description
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20050216

Termination date: 20130328