CN118215675A - 靶向dll3的抗原识别受体和其用途 - Google Patents
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Abstract
当前公开的主题提供了特异性靶向DLL3的抗原识别受体以及包含此类靶向DLL3的抗原识别受体的细胞。当前公开的主题进一步提供了所述靶向DLL3的抗原识别受体用于治疗的用途。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求于2021年9月2日提交的美国临时专利申请号63/240,189的优先权，该临时专利申请的内容通过引用以其整体并入并且要求该临时专利申请的优先权。
序列表
本申请含有已经经由EFS-Web提交并特此通过引用以其整体并入的序列表。创建于2022年8月31日的所述序列表名称为0727341385.xml并且大小为264,802字节。
1.技术领域
当前公开的主题提供了用于免疫疗法的方法和组合物。当前公开的主题涉及特异性靶向DLL3的抗原识别受体(例如，嵌合抗原受体(CAR))、包含此类受体的细胞以及使用此类细胞进行治疗的方法。
2.背景技术
基于细胞的免疫疗法是用于治疗癌症的具有治愈潜力的疗法。T细胞和其它免疫细胞可以通过引入编码抗原的人工或合成受体的遗传材料而被修饰以靶向肿瘤抗原，所述受体被称为嵌合抗原受体(CAR)，对选定的抗原具有特异性。使用CAR的靶向T细胞疗法最近在治疗血液***恶性病和实体瘤方面显示出临床成功。
DLL3在肺的高级别肺神经内分泌肿瘤(LU-NET)和其他神经内分泌癌中选择性表达。Lu-NET包括异源赘生物家族，分为四种组织学变体，即典型类癌(TC)、非典型类癌(AC)、大细胞神经内分泌癌(LCNEC)和小细胞肺癌(SCLC)。在SCLC和LCNEC患者来源的异种移植肿瘤中观察到DLL3表达增加，并且该表达增加在原发性肿瘤中也得到证实。参见Saunders等人,Sci Translational Medicine(302):302ra136(2015)。SCLC和肺LCNEC都是高级别且预后不良的肿瘤，在吸烟者中发病率较高。肺LCNEC表现出与SCLC类似的生物攻击行为。渐渐地，肺LCNEC和SCLC的存活曲线重叠，而且存活低于其他NSCLC。即使在患有可能可切除的I期肺癌的患者中，预后也差，5年存活率在27％至67％范围内。参见Iyoda A.等人,J ThoracCardiovasc Surg.138:446-453(2009)。
鉴于DLL3在各种疾病或疾患中的重要作用，期望靶向DLL3的免疫疗法(例如，CAR)。
3.发明内容
当前公开的主题提供了特异性靶向DLL3的抗原识别受体和包含此类靶向DLL3的抗原识别受体的细胞。当前公开的主题进一步提供了靶向DLL3的抗原识别受体用于治疗的用途。
当前公开的主题提供了一种抗原识别受体，其包含胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，其中该胞外抗原结合结构域与DLL3特异性结合。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是单链可变片段(scFv)。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是人scFv。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是Fab，所述Fab任选地被交联。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是F(ab)2。在某些实施例中，scFv、Fab和F(ab)2中的一者或多者包括在具有异源序列的融合蛋白中以形成所述胞外抗原结合结构域。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(b)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
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(e)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
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(h)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(i)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(j)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(k)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(l)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(m)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(n)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:116中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(o)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(p)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:135中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:137中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(q)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:145中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(r)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:151中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:152中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(s)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:161中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(t)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:167中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:168中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(u)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:176中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:177中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(v)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:184中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:185中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:186中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(w)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:194中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:195中所示的氨基酸序列或其保守修饰；或者
(x)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:201中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:202中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:203中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：
(a)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(b)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:16或其保守修饰；
(c)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(d)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:32或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ IDNO:33中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(e)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
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(g)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(h)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(i)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(j)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(k)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:280中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(l)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(m)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(n)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:117中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(o)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(p)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:130中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(q)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:138中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:139中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:140中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
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(s)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(t)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:162中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(u)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:169中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:170中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:171中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(v)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:178中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:179中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(w)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:187中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:188中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:189中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(x)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:196中所示的氨基酸序列或其保守修饰；或者
(y)轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:204中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:16或其保守修饰；
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列；
(c)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQID NO:23中所示的氨基酸序列；
(d)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列；
(e)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列；
(f)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列；
(g)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列；
(h)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQID NO:65中所示的氨基酸序列；
(i)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列；
(j)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；
(k)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:280中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列；
(l)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列；
(m)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；
(n)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列；
(o)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:116中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:117中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列；
(p)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列；
(q)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:130中所示的氨基酸序列；
(r)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:135中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:137中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:138中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:139中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:140中所示的氨基酸序列；
(s)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:145中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:146中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列；
(t)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:151中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:152中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；
(u)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列；
(v)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:161中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:162中所示的氨基酸序列；
(w)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:167中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:168中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:169中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:170中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:171中所示的氨基酸序列；
(x)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:176中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:177中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:178中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:79中所示的氨基酸序列；
(y)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:184中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:185中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:186中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:187中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:188中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:189中所示的氨基酸序列；
(z)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:194中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:195中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:196中所示的氨基酸序列；或者
(aa)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:201中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:202中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:203中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:204中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:24、SEQID NO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:76、SEQID NO:83、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQID NO:163、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:197或SEQ ID NO:205。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:34、SEQ IDNO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:83、SEQ IDNO:92、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ IDNO:172、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:197或SEQ ID NO:205。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含SEQ IDNO:17中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含轻链可变区，该轻链可变区包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQID NO:35、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:77、SEQID NO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含轻链可变区，该轻链可变区包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:77、SEQ IDNO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQ IDNO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含轻链可变区，该轻链可变区包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含轻链可变区，该轻链可变区包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含轻链可变区，该轻链可变区包含SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：(a)重链可变区，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:76、SEQ IDNO:83、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQ IDNO:163、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:197或SEQ ID NO:205；以及(b)轻链可变区，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQID NO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQID NO:181、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：(a)重链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:83、SEQ IDNO:92、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ IDNO:172、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:197或SEQ ID NO:205；以及(b)轻链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQID NO:35、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:77、SEQID NO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：(a)重链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:24；以及(b)轻链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:25。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列；
(c)重链可变区，其包含SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列；
(d)重链可变区，其包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列；
(e)重链可变区，其包含SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列；
(f)重链可变区，其包含SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列；
(g)重链可变区，其包含SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列；
(h)重链可变区，其包含SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:67中所示的氨基酸序列；
(i)重链可变区，其包含SEQ ID NO:76中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:77中所示的氨基酸序列；
(j)重链可变区，其包含SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列；
(k)重链可变区，其包含SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列；
(l)重链可变区，其包含SEQ ID NO:102中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列；
(m)重链可变区，其包含SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列；
(n)重链可变区，其包含SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:113中所示的氨基酸序列；
(o)重链可变区，其包含SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列；
(p)重链可变区，其包含SEQ ID NO:126中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:127中所示的氨基酸序列；
(q)重链可变区，其包含SEQ ID NO:131中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:132中所示的氨基酸序列；
(r)重链可变区，其包含SEQ ID NO:141中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:142中所示的氨基酸序列；
(s)重链可变区，其包含SEQ ID NO:147中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:148中所示的氨基酸序列；
(t)重链可变区，其包含SEQ ID NO:153中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:154中所示的氨基酸序列；
(u)重链可变区，其包含SEQ ID NO:157中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:158中所示的氨基酸序列；
(v)重链可变区，其包含SEQ ID NO:163中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:164中所示的氨基酸序列；
(w)重链可变区，其包含SEQ ID NO:172中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:173中所示的氨基酸序列；
(x)重链可变区，其包含SEQ ID NO:180中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:181中所示的氨基酸序列；
(y)重链可变区，其包含SEQ ID NO:190中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:191中所示的氨基酸序列；
(z)重链可变区，其包含SEQ ID NO:197中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:198中所示的氨基酸序列；或者
(aa)重链可变区，其包含SEQ ID NO:205中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:206中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：重链可变区，其包含SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：重链可变区，其包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：重链可变区，其包含SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含胞外抗原结合结构域的重链可变区与轻链可变区之间的接头。在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213或SEQ ID NO:214。
在某些实施例中，胞外抗原结合与该结构域包含胞外抗原结合结构域的5'末端共价接合的信号肽。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD8多肽、CD28多肽、CD3ζ多肽、CD4多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、CTLA-4多肽、PD-1多肽、LAG-3多肽、2B4多肽、BTLA多肽或其组合。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含CD3ζ多肽。在某些实施例中，CD3ζ多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:221。
在某些实施例中，胞内信号传导结构域进一步包括至少一个共刺激信号传导区。在某些实施例中，至少一个共刺激信号传导区包含CD28多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、DAP-10多肽或其组合。在某些实施例中，至少一个共刺激信号传导区包含CD28多肽。在某些实施例中，CD28多肽包含以下项的氨基酸180至220或由其组成：SEQ ID NO:7。在某些实施例中，CD28多肽包含突变的YMNM基序。在某些实施例中，CD28多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:276、SEQ IDNO:277、SEQ ID NO:278或SEQ ID NO:279。
在某些实施例中，抗原识别受体是嵌合抗原受体(CAR)或T细胞样融合蛋白。在某些实施例中，抗原识别受体是CAR。
在某些实施例中，抗原识别受体是重组表达的。在某些实施例中，抗原识别受体由载体表达。在某些实施例中，载体是γ逆转录病毒载体。
当前公开的主题提供了细胞，其包含当前公开的抗原识别受体。在某些实施例中，细胞用所述抗原识别受体转导。在某些实施例中，抗原识别受体在细胞的表面上组成性地表达。在某些实施例中，细胞进一步包含外源IL-18多肽。在某些实施例中，外源IL-18多肽是人IL-18多肽。
在某些实施例中，细胞是免疫应答细胞。在某些实施例中，细胞是淋系的细胞或髓系的细胞。在某些实施例中，以及可以从其分化淋巴样细胞的细胞选自由以下组成的组：T细胞、自然杀伤(NK)细胞以及可从其分化淋巴样细胞的干细胞。在某些实施例中，细胞是T细胞。在某些实施例中，T细胞是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)或调节性T细胞。在某些实施例中，干细胞是多能干细胞。在某些实施例中，多能干细胞是胚胎干细胞或诱导多能干细胞。
当前公开的主题进一步提供了核酸，其编码当前公开的抗原识别受体。当前公开的主题进一步提供了载体，其包括当前公开的核酸分子。在某些实施例中，载体是病毒载体。在某些实施例中，载体是γ逆转录病毒载体。
另外，当前公开的主题提供了宿主细胞，其表达本文公开的核酸分子。在某些实施例中，宿主细胞是T细胞。
当前公开的主题进一步提供了组合物，其包括本文公开的细胞。在某些实施例中，组合物是进一步包括药学上可接受的载剂的药物组合物。
当前公开的主题还提供了脂质纳米颗粒，其包含编码当前公开的抗原识别受体的核酸。当前公开的主题进一步提供了组合物，其包含本文公开的脂质纳米颗粒。在某些实施例中，组合物是进一步包括药学上可接受的载剂的药物组合物。
当前公开的主题进一步提供了治疗或改善受试者的疾病或疾患的方法。在某些实施例中，方法包括向所述受试者施用当前公开的细胞或组合物。
在某些实施例中，疾病或疾患表达DLL3。在某些实施例中，疾病或疾患与DLL3的过表达相关联。在某些实施例中，疾病或疾患是肿瘤。在某些实施例中，肿瘤是癌症。在某些实施例中，疾病或疾患选自由以下项组成的组：肺神经内分泌肿瘤、肺外神经内分泌癌、黑色素瘤、神经内分泌***癌、乳腺癌、胃肠道神经内分泌肿瘤、胰腺癌、甲状腺髓样癌、小细胞膀胱癌、卵巢小细胞癌、低级别胶质瘤、胶质母细胞瘤和神经母细胞瘤。在某些实施例中，肺神经内分泌肿瘤选自由以下项组成的组：肺神经内分泌癌(包括典型类癌肿瘤和非典型类癌肿瘤)、大细胞神经内分泌癌和小细胞肺癌。在某些实施例中，肿瘤是小细胞肺癌。
当前公开的主题进一步提供了用于治疗或改善受试者的疾病或疾患的试剂盒，其包括当前公开的细胞、核酸或组合物。在某些实施例中，试剂盒进一步包括用于使用当前公开的细胞或组合物来治疗或改善受试者的疾病或疾患的书面说明书。
另外，当前公开的主题提供了产生靶向DLL3的抗原识别受体的方法，其包括将编码抗原识别受体的核酸引入到细胞中。
最后，当前公开的主题提供了本文公开的细胞和/或组合物，其用于治疗或改善受试者的疾病或疾患。在某些实施例中，疾病或疾患表达DLL3。在某些实施例中，疾病或疾患与DLL3的过表达相关联。在某些实施例中，疾病或疾患是肿瘤。在某些实施例中，肿瘤是癌症。在某些实施例中，疾病或疾患选自由以下项组成的组：肺神经内分泌肿瘤、肺外神经内分泌癌、黑色素瘤、神经内分泌***癌、乳腺癌、胃肠道神经内分泌肿瘤、胰腺癌、甲状腺髓样癌、小细胞膀胱癌、卵巢小细胞癌、低级别胶质瘤、胶质母细胞瘤和神经母细胞瘤。在某些实施例中，肺神经内分泌肿瘤选自由以下项组成的组：肺神经内分泌癌(包括典型类癌肿瘤和非典型类癌肿瘤)、大细胞神经内分泌癌和小细胞肺癌。在某些实施例中，肿瘤是小细胞肺癌。
4.附图说明
以下通过举例给出但不旨在将本发明限制于所描述的具体实施例的详细描述可以结合附图进行理解。
图1A至1C描绘了本文公开的代表性嵌合抗原受体(CAR)的概述。图1A显示了本文公开的CAR的结构域的示意图，该结构域与截短的EGFR结构域共表达。图1B显示了本文公开的具有用于检测的CD8信号肽和Flag标签的三种代表性CAR的胞外抗原结合结构域的示意图。VH：重链；VL：轻链。图1C显示了通过流式细胞术测量的转导T细胞上所示CAR的表达。灰色：未转导的T细胞。
图2A至2C描绘了表达本文公开的靶向DLL3的BBz CAR的T细胞的功能活性。图2A显示了表达本文公开的抗原识别受体的人T细胞针对DLL3+小细胞肺癌细胞系H82和H69的细胞毒性。图2B显示了长期增殖测定。图2C显示了经刺激的表达本文公开的靶向DLL3的CAR的人T细胞对促炎细胞因子的分泌。
图3A和3B描绘了表达本文公开的靶向DLL3的28z CAR的T细胞的体内活性。图3A显示了接受本文公开的细胞的NSG小鼠中转移性H82-GFP-荧光素酶的肿瘤生长。图3B显示了接受本文公开的细胞的NSG小鼠的存活率曲线。
图4A至4C描绘了表达本文公开的靶向DLL3的28z CAR(包括IL-18多肽)的T细胞的活性。图4A显示了具有截短的EGFRt、2J8-28z CAR和外源IL-18多肽的逆转录病毒载体的示意图。图4B显示了与H82或H69 SCLC细胞共培养的CAR T细胞的增殖(E:T比率为1:5)。图4C显示了接受表达本文公开的靶向DLL3的28z CAR(包括IL-18多肽)的T细胞的小鼠中H82肿瘤或H69肿瘤的平均辐射率。
图5A至5C描绘了表达本文公开的靶向DLL3的28z CAR(包括指定为“2J8-28YSNVz”的CD28突变体多肽)的T细胞的活性。图5A显示了表达本文公开的2J8-28YSNVz CAR的T细胞在患有H82肿瘤的小鼠中的作用。图5B显示了接受表达本文公开的2J8-28YSNVz CAR(且包括外源IL-18多肽)的T细胞的小鼠中转移性SHP-77SCLC肿瘤的平均辐射率。十字指示因GvHD导致的死亡。
5.具体实施方式
当前公开的主题提供了特异性靶向DLL3的抗原识别受体(例如，嵌合抗原受体(CAR))。当前公开的主题进一步提供了包含此类受体的细胞。细胞可以是免疫应答细胞，例如遗传修饰的免疫应答细胞(例如，T细胞或NK细胞)。当前公开的主题还提供了使用此类细胞进行治疗(例如，治疗和/或改善与DLL3相关联的疾病或疾患)的方法。
本说明书和实例描述了本公开的非限制性实施例。
为了本公开的清楚起见而非限制性地，详细描述被分成以下子部分：
5.1.定义；
5.2.DLL3；
5.3.抗原识别受体；
5.4.细胞；
5.5.组合物和载体；
5.6.多肽；
5.7.调配物和施用；
5.8.治疗方法；
5.9.试剂盒；以及
5.10.示例性实施例。
5.1.定义
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。以下参考文献为技术人员提供了本发明中使用的许多术语的一般定义：Singleton等人,Dictionary of Microbiology andMolecular Biology(第2版1994)；The Cambridge Dictionary of Science andTechnology(Walker编,1988)；The Glossary of Genetics,第5版,R.Rieger等人(编辑),Springer Verlag(1991)；以及Hale&Marham,The Harper Collins Dictionary ofBiology(1991)。除非另有说明，否则如本文所用的以下术语具有以下赋予它们的含义。
如本文所使用的，术语“约(about)”或“大约(approximately)”意指在如由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，这将部分地取决于所述值是如何测量或确定的，即，测量***的局限性。例如，“约”可以意指根据本领域的实践在3个或多于3个标准偏差内。可替代地，“约”可以意指给定值的高达20％，优选地高达10％，更优选地高达5％并且还更优选地高达1％的范围。可替代地，特别是对于生物***或过程，术语可以表示处于一个数量级内，优选地在值的5倍内，并且更优选地在2倍内。
“免疫应答细胞”意指在免疫应答中起作用的细胞或其祖细胞或子代细胞。在某些实施例中，免疫应答细胞是淋系细胞。淋系细胞的非限制性实例包括T细胞、自然杀伤(NK)细胞、B细胞以及可从其分化淋巴样细胞的干细胞。在某些实施例中，免疫应答细胞是髓系细胞。
“激活免疫应答细胞”意指诱导细胞中信号转导或蛋白质表达的变化，导致免疫应答的启动。例如，当CD3链响应于配体结合和免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITAM)而聚集时，产生信号转导级联。在某些实施例中，当外源性CAR与抗原结合时，发生免疫突触的形成，包括许多分子聚集在结合的受体(例如，CD4或CD8、CD3γ/δ/ε/ζ等)附近。这种膜结合信号传导分子的聚集使得包含在CD3链中的ITAM基序被磷酸化。这种磷酸化进而启动T细胞激活通路，最终激活转录因子，诸如NF-κB和AP-1。这些转录因子诱导T细胞的整体基因表达，以增加IL-2的产生，用于主调节T细胞蛋白的增殖和表达，从而启动T细胞介导的免疫应答。
“刺激免疫应答细胞”意指导致稳健和持续免疫应答的信号。在各个实施例中，这发生在免疫细胞(例如，T细胞)激活之后或伴随地通过受体介导，所述受体包含但不限于CD28、CD137(4-1BB)、OX40、CD40和ICOS。接受多种刺激信号对建立稳健和长期的T细胞介导的免疫应答可能是重要的。T细胞可能很快被抑制，并且对抗原没有应答性。虽然这些共刺激信号的作用可能不同，但它们通常使得基因表达增加，以产生长期存活、增殖和抗凋亡的T细胞，所述细胞对抗原产生稳健应答，以实现完全和持续的根除。
如本文所使用的，术语“抗原识别受体”是指能够识别靶抗原(例如，DLL3)的受体。在某些实施例中，抗原识别受体能够在与靶抗原结合后激活免疫或免疫应答细胞(例如，T细胞)。
如本文所使用的，术语“抗体”不仅意指完整的抗体分子，还意指保留免疫原结合能力的抗体分子片段。此类片段在本领域中也是熟知的，并且通常在体外和体内采用。因此，如本文所使用的，术语“抗体”不仅意指完整的免疫球蛋白分子，还意指熟知的活性片段F(ab')2和Fab。F(ab')2和缺乏完整抗体得Fe片段的Fab片段，从循环中清除更快，并且可能具有较少的完整抗体的非特异性组织结合(Wahl等人,Nucl Med(1983)；24:316-325)。如本文所使用的，包含全天然抗体、双特异性抗体；嵌合抗体；Fab、Fab'、单链V区片段(scFv)、融合多肽和非常规抗体。在某些实施例中，“抗体”是一种包括通过二硫键互连的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白。每条重链包含重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定(CH)区。重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2以及CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定CL区。轻链恒定区由一个结构域，即CL构成。VH区和VL区可以进一步细分为被称作互补决定区(CDR)的超变区，所述超变区散布有更保守的被称作构架区(FR)的区。每个VH和VL由按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包含免疫***的各种细胞(例如，效应细胞)以及经典补体***的第一组分(C1q)。
如本文所使用的，“CDR”被定义为抗体的互补决定区氨基酸序列，所述互补决定区氨基酸序列是免疫球蛋白重链和轻链的高变区。参见例如，Kabat等人,Sequences ofProteins of Immunological Interest,第4版U.S.Department of Health and HumanServices,National Institutes of Health(1987)，或者IMGT编号***(Lefranc,TheImmunologist(1999)；7:132-136；Lefranc等人,Dev.Comp.Immunol.(2003)；27:55-77)。通常，抗体在可变区包括三个重链和三个轻链CDR或CDR区。CDR为抗体与抗原或表位的结合提供了大部分接触残基。在某些实施例中，CDR区使用IMGT编号***来描述。在某些实施例中，CDR区使用可在http://www.imgt.org/IMGT_vquest/input处访问的IMGT编号***来描绘。
如本文所使用的，术语“单链可变片段”或“scFv”是免疫球蛋白(例如，小鼠或人)的重链(VH)和轻链(VL)的可变区共价连接形成VH:VL异二聚体的融合蛋白。重链(VH)和轻链(VL)直接连接或者通过编码肽的接头(例如，10个、15个、20个、25个氨基酸)连接，所述接头将VH的N末端与VL的C末端连接，或者将VH的C末端与VL的N末端连接。接头通常富含甘氨酸用于柔性，以及富含丝氨酸或苏氨酸用于溶解度。接头可以连接胞外抗原结合结构域的重链可变区和轻链可变区。接头的非限制性实例公开于Shen等人,Anal.Chem.80(6):1910-1917(2008)和WO 2014/087010，该参考文献的内容特此通过引用以其整体并入。在某些实施例中，接头是G4S接头。
在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:209，其提供如下：
GGGGSGGGGSGGGSGGGGS[SEQ ID NO:209]
在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:210，其提供如下：
GGGGSGGGGSGGGGS[SEQ ID NO:210]
在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:211，其提供如下：
GGGGSGGGGSGGGGSGGGSGGGGS[SEQ ID NO:211]
在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:212，其提供如下：
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSGGGGS[SEQ ID NO:212]
在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:213，其提供如下：
GGGGS[SEQ ID NO:213]
在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:214，其提供如下：
GGGGSGGGGS[SEQ ID NO:214]
尽管去除了恒定区并引入了接头，scFv蛋白仍保留了原始免疫球蛋白的特异性。单链Fv多肽抗体可以由包含VH和VL编码序列的核酸表达，如Huston等人Proc.Nat.Acad.Sci.USA,(1988)；85:5879-5883；美国专利号5,091,513、5,132,405和4,956,778；以及美国专利公开号20050196754和20050196754中所述。已经描述了具有抑制活性的拮抗scFv(参见例如，Zhao等人,Hyrbidoma(Larchmt)(2008)；27(6):455-51；Peter等人,JCachexia Sarcopenia Muscle(2012)；8月12日；Shieh等人,J Imunol(2009)；183(4):2277-85；Giomarelli等人,Thromb Haemost(2007)；97(6):955-63；Fife等人,J ClinInvst(2006)；116(8):2252-61；Brocks等人,Immunotechnology 1997 3(3):173-84；Moosmayer等人,Ther Immunol 1995 2(10:31-40)。已经描述了具有刺激活性的激动性scFv(Peter等人,J Biol Chern(2003)；25278(38):36740-7；Xie等人,Nat Biotech 199715(8):768-71；Ledbetter等人,Crit Rev Immunol(1997)；17(5-6):427-55；Ho等人,BioChim Biophys Acta(2003)；1638(3):257-66。
如本文所使用的，术语“嵌合抗原受体”或“CAR”是指包含胞外抗原结合结构域和跨膜结构域的分子，该胞外抗原结合结构域与能够激活或刺激免疫应答细胞的胞内信号传导结构域融合。在某些实施例中，CAR的胞外抗原结合结构域包含scFv。scFv可以源自将抗体的可变重链和轻链区融合。可替代地或另外地，scFv可以源自Fab'(而不是源自抗体，例如从Fab文库获得)。在某些实施例中，scFv与跨膜结构域融合，并且然后与胞内信号传导结构域融合。“基本上相同”或“基本上同源”意指多肽或核酸分子表现出与参考氨基酸序列(例如，本文所描述的任何氨基酸序列)或参考核酸序列(例如，本文所描述的任何核酸序列)至少约50％同源或相同。在某些实施例中，此类序列与用于比较的氨基酸或核酸的序列至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或至少约100％同源或相同。
序列同一性可以通过使用序列分析软件(例如，威斯康星州麦迪逊大学大道1710号威斯康星大学生物技术中心，邮编53705的遗传计算机组的序列分析软件包BLAST、BESTFIT、GAP或PILEUP/PRETTYBOX程序)来测量。此类软件通过对各种取代、缺失和/或其它修饰指定同源性程度来匹配相同或相似的序列。保守取代通常包含以下组中的取代：甘氨酸、丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺；丝氨酸、苏氨酸；赖氨酸、精氨酸；和苯丙氨酸、酪氨酸。在确定同一性程度的示例性方法中，可以使用BLAST程序，其中e-3与e-100之间的概率得分表示密切相关的序列。
如本文所使用的，两个氨基酸序列之间的同源性百分比相当于两个序列之间的同一性百分比。两个序列之间的同一性百分比是由所述序列所共有的相同位置的数量的函数(即，同源性％＝相同位置的#/位置的总#×100)，所述函数考虑了需要针对两个序列的最佳比对而引入的空位的数量和每个空位的长度。序列的比较和两个序列之间的同一性百分比的确定可以使用数学算法实现。
两个氨基酸序列之间的同源性百分比可以使用E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl.Biosci.,4:11-17(1988))的算法(已经合并到ALIGN程序(版本2.0)中)，使用PAM120权重残基表、空位长度罚分12和空位罚分4来确定。另外，两个氨基酸序列之间的同源性百分比可以使用Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48:444-453(1970))算法(已经合并到GCG软件包(可在www.gcg.com获得)中的GAP程序中)，使用Blossom 62矩阵或PAM250矩阵和空位权重16、14、12、10、8、6或4以及长度权重1、2、3、4、5或6确定。
另外或可替代地，当前公开的主题的氨基酸序列可以进一步用作“查询序列”以对公共数据库进行搜索，以例如标识相关序列。此类检索可以使用Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-10的XBLAST程序(版本2.0)来进行。可以用XBLAST程序进行BLAST蛋白搜索，得分＝50，字长＝3，以获得与本文公开的特定序列(例如，scFv m903、m904、m905、m906和m900的重链和轻链可变区序列)同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的有空位的比对，可以利用带空位的BLAST，如在以下中所描述的：Altschul等人,(1997)NucleicAcids Res.25(17):3389-3402。当利用BLAST程序和带空位的BLAST程序时，可以使用相应程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。
“有效量”是足以在治疗时影响有益的或期望的临床结果的量。可以以一个或多个剂量将有效量施用于受试者。在某些实施例中，有效量可以是足以缓解、改善、稳定、逆转或减慢疾病进展或以其它方式减少疾病的病理后果的量。有效量可以由医生根据具体情况确定并且在本领域的技术人员的能力范围内。在确定实现有效量的适当剂量时，通常要考虑若干因素。这些因素包含受试者的年龄、性别和体重、所治疗的病状、病状的严重程度以及所施用的细胞的形式和有效浓度。
如本文所使用的，术语“保守序列修饰”是指不显著影响或改变当前公开的包含氨基酸序列的靶向DLL3的CAR(例如，胞外抗原结合结构域)的结合特性的氨基酸修饰。保守修饰可以包含氨基酸取代、添加和缺失。通过本领域已知的标准技术，如定点诱变和PCR介导的诱变，可以将修饰引入到当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域中。根据氨基酸的物理化学性质，如电荷和极性，可以将氨基酸分类成组。保守氨基酸取代是氨基酸残基被同一组中的氨基酸替代的取代。例如，氨基酸可以按电荷分类：带正电荷的氨基酸包含赖氨酸、精氨酸、组氨酸；带负电荷的氨基酸包含天冬氨酸、谷氨酸；带中性电荷的氨基酸包含丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。另外，氨基酸可以按极性分类：极性氨基酸包含精氨酸(碱性极性)、天冬酰胺、天冬氨酸(酸性极性)、谷氨酸(酸性极性)、谷氨酰胺、组氨酸(碱性极性)、赖氨酸(碱性极性)、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸；非极性氨基酸包含丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸和缬氨酸。因此，CDR区内的一个或多个氨基酸残基可以被来自同一组的其它氨基酸残基替代，并且可以使用本文所描述的功能测定测试改变的抗体的保留功能(即，上文(c)至(l)中所述的功能)。在某些实施例中，特定序列或CDR区内不超过一个、不超过两个、不超过三个、不超过四个、不超过五个残基被改变。
如本文所使用的，术语“内源”是指通常在细胞或组织中表达的核酸分子或多肽。
如本文所使用的，术语“外源”是指细胞中非内源性存在的核酸分子或多肽。因此，术语“外源”将涵盖在细胞中表达的任何重组核酸分子或多肽，如外来的、异源的和过表达的核酸分子和多肽。“外源”核酸意指不存在于天然野生型细胞中的核酸；例如，外源核酸可以在序列、位置/定位或两者方面与内源对应物不同。为了清楚起见，外源核酸相对于其天然内源对应物可以具有相同或不同的序列；它可以通过基因工程化到细胞本身或其祖细胞中，并且可以任选地与替代性控制序列，如非天然启动子或分泌序列连接。
“异源核酸分子或多肽”意指通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中的核酸分子(例如，cDNA、DNA或RNA分子)或多肽。此核酸可以来自另一种生物体，或者它可以是例如在细胞或样品中不正常表达的mRNA分子。
“增加”意指正向改变至少约5％。改变可以是约5％、约10％、约25％、约30％、约50％、约75％、约100％或更多。
“减少”意指负向改变至少约5％。改变可以是约5％、约10％、约25％、约30％、约50％、约75％或甚至约100％。
术语“分离的”、“纯化的”或“生物学上纯的”是指在不同程度上在其天然状态下发现的通常伴随其的组分的材料。“分离”表示与原始来源或周围环境的分离程度。“纯化”表示分开程度高于分离。“纯化的”或“生物学上纯的”蛋白质充分不含其它材料，使得任何杂质都不会实质性地影响蛋白质的生物学性质或引起其它不良后果。也就是说，如果核酸或肽在通过重组DNA技术产生时基本上不含细胞材料、病毒材料或培养基，或者在化学合成时基本上不含化学前体或其它化学品，则所述核酸或肽是纯化的。纯度和均匀性通常使用分析化学技术，例如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱确定。术语“纯化的”可以表示核酸或蛋白质在电泳凝胶中基本上产生一条带。对于可以进行修饰(例如，磷酸化或糖基化)的蛋白质，不同的修饰可以产生不同的分离的蛋白质，所述蛋白质可以单独纯化。
“分离的细胞”意指与天然伴随细胞的分子和/或细胞组分分离的细胞。
如本文所使用的，术语“抗原结合结构域”是指能够与细胞上存在的特定抗原决定簇或抗原决定簇组特异性结合的结构域。
“识别”意指与靶标选择性地结合。识别肿瘤的T细胞可以表达与肿瘤抗原结合的受体(例如，CAR)。
“信号序列”或“前导序列”意指存在于新合成蛋白的N末端的肽序列(例如，5个、10个、15个、20个、25个或30个氨基酸)，所述肽序列将所述蛋白引导到分泌通路中。
“特异性结合”或“特异性结合至”或“特异性靶向”意指识别和/或结合所关注生物分子(例如，多肽，例如DLL3多肽)，但基本上不识别和/或结合样品(例如，天然包括当前公开的多肽(例如，DLL3多肽)的生物学样品)中的其它分子的多肽或其片段。
如本文所使用的，术语“衍生物”是指衍生自一些其他化合物并保持其一般结构的化合物。例如但不限于，三氯甲烷(氯仿)是甲烷的衍生物。
术语“包含(comprise)”、“包含(comprising)”旨在具有美国专利法中赋予其的广义含义并且可以意指“包括(include)”、“包括(including)”等。
如本文所使用的，“治疗”是指试图改变正被治疗的个体或细胞的疾病进程的临床干预，并且可以被执行以用于预防或者在临床病理学进程期间执行。治疗的治疗作用包含但不限于预防疾病发生或复发、缓解症状、减少疾病的任何直接或间接病理性后果、预防转移、降低疾病进展速率、改善或缓和疾病状态以及缓解或改进预后。通过预防疾病或疾患的进展，治疗可以防止受影响或诊断的受试者或怀疑患有所述疾患的受试者的由于疾患引起的恶化，而且治疗可以预防有患上所述疾患的风险或怀疑患有所述疾患的受试者的所述疾患的发作或所述疾患的症状。
本文中的“个体”或“受试者”是脊椎动物，如人类或非人类动物，例如哺乳动物。哺乳动物包含但不限于人类、灵长类动物、农场动物、运动动物、啮齿动物和宠物。非人类动物受试者的非限制性实例包含啮齿动物，如小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠；兔子；狗；猫；绵羊；猪；山羊；牛；马；以及非人灵长类动物，诸如猿、猴。如本文所使用的，术语“免疫受损”是指患有免疫缺陷的受试者。受试者非常容易受到机会性感染，机会性感染是由通常不会在免疫***健康的人身上引起疾病但会影响免疫***功能低下或受抑制的人的生物体引起的感染。
当前公开的主题的其它方面在以下公开中描述，并且在当前公开的主题的范围内。
5.2.DLL3
DLL3在肺的高级别肺神经内分泌肿瘤(LU-NET)和其他神经内分泌癌中选择性表达。Lu-NET包括异源赘生物家族，分为四种组织学变体，即典型类癌(TC)、非典型类癌(AC)、大细胞神经内分泌癌(LCNEC)和小细胞肺癌(SCLC)。在SCLC和LCNEC患者来源的异种移植肿瘤中观察到DLL3表达增加，并且该表达增加在原发性肿瘤中也得到证实。参见Saunders等人,Sci Translational Medicine(302):302ra136(2015)。SCLC和肺LCNEC都是高级别且预后不良的肿瘤，在吸烟者中发病率较高。肺LCNEC表现出与SCLC类似的生物攻击行为。渐渐地，肺LCNEC和SCLC的存活曲线重叠，而且存活低于其他NSCLC。即使在患有可能可切除的I期肺癌的患者中，预后也差，5年存活率在27％至67％范围内。参见Iyoda A.等人,J ThoracCardiovasc Surg.138:446-453(2009)。
δ是Notch的果蝇配体中的一者，其激活相邻细胞中的信号传导。人类有四种已知的Notch受体(NOTCH1至NOTCH4)，以及δ的三种同源物，
称为δ样配体：DLL1、DLL3和DLL4。据报道，与DLL1和DLL4不同，DLL3抑制Notch信号传导，而不是激活它。
DLL3(也称为δ样3或SCDO1)是Notch DSL配体的δ样家族的成员。异常的DLL3表达(基因型和/或表型)与各种致瘤细胞亚群(诸如癌症干细胞和肿瘤起始细胞)相关。
在某些实施例中，抗原识别受体与人DLL3结合。在某些实施例中，人DLL3包含具有以下UniProt参考号的氨基酸序列或由该氨基酸序列组成：Q9NYJ7-1(SEQ ID NO:215)或其片段。SEQ ID NO:215在下文提供。在某些实施例中，DLL3包含胞外结构域、跨膜结构域和胞质结构域。在某些实施例中，胞外结构域包含以下项的氨基酸27至492或由其组成：SEQ IDNO:215。在某些实施例中，跨膜结构域包含以下项的氨基酸493至513或由其组成：SEQ IDNO:215。在某些实施例中，胞质结构域包含以下项的氨基酸514至618或由其组成：SEQ IDNO:215。
在某些实施例中，DLL3的胞外结构域包含DSL结构域、EGF样1结构域、EGF样2结构域、EGF样3结构域、EGF样4结构域和EGF样5结构域以及EGF样6结构域。在某些实施例中，DSL结构域包含以下项的氨基酸176至215或由其组成：SEQ ID NO:215。在某些实施例中，EGF样1结构域包含以下项的氨基酸216至249或由其组成：SEQ ID NO:215。在某些实施例中，EGF样2结构域包含以下项的氨基酸274至310或由其组成：SEQ ID NO:215。在某些实施例中，EGF样3结构域包含以下项的氨基酸312至351或由其组成：SEQ ID NO:215。在某些实施例中，EGF样4结构域包含以下项的氨基酸353至389或由其组成：SEQ ID NO:215。在某些实施例中，EGF样5结构域包含以下项的氨基酸391至427或由其组成：SEQ ID NO:215。在某些实施例中，EGF样6结构域包含以下项的氨基酸429至465或由其组成：SEQ ID NO:215。
在某些实施例中，DLL3包含与以下项中所示的氨基酸序列或其片段至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％、至少约100％相同的氨基酸序列或由该氨基酸序列组成：SEQ ID NO:215。
在某些实施例中，抗原识别受体与人DLL3的一部分结合。在某些实施例中，抗原识别受体与DLL3的胞外结构域结合。在某些实施例中，抗原识别受体与以下项的氨基酸27至492结合：SEQ ID NO:215。
在某些实施例中，抗原识别受体与DLL3的EGF样3结构域结合。在某些实施例中，抗原识别受体与以下项的氨基酸312至351结合：SEQ ID NO:215。在某些实施例中，抗原识别受体与DLL3的EGF样4结构域结合。在某些实施例中，抗原识别受体与以下项的氨基酸353至389结合：SEQ ID NO:215。在某些实施例中，抗原识别受体与DLL3的EGF样5结构域结合。在某些实施例中，抗原识别受体与以下项的氨基酸391至427结合：SEQ ID NO:215。在某些实施例中，抗原识别受体与DLL3的EGF样6结构域结合。在某些实施例中，抗原识别受体与以下项的氨基酸429至465结合：SEQ ID NO:215。
5.3.抗原识别受体
当前公开的抗原识别受体特异性靶向DLL3或与其结合。在某些实施例中，抗原识别受体为嵌合抗原受体(CAR)。在某些实施例中，抗原识别受体是TCR样融合分子。
当前公开的主题还提供了核酸分子，所述核酸分子编码当前公开的抗原识别受体。在某些实施例中，核酸分子包含编码本文公开的靶向DLL3的抗原识别受体的多肽的核苷酸序列。
5.3.1.胞外抗原结合结构域
在某些实施例中，抗原识别受体的胞外抗原结合结构域与DLL3结合。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv是人scFv。在某些实施例中，scFv是人源化scFv。在某些实施例中，scFv是鼠scFv。在某些实施例中，通过用抗原-Fc融合蛋白筛选scFv噬菌体文库来鉴定scFv。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是Fab。在某些实施例中，Fab是交联的。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是F(ab)2。
前述分子中的任一个分子可以包括在具有异源序列的融合蛋白中以形成胞外抗原结合结构域。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(体现为例如scFv)以例如具有以下解离常数(KD)的结合亲和力与DLL3(例如，人DLL3)结合：约1×10-8M或更少、约5×10-9M或更少、约1×10-9M或更少、约5×10-10M或更少、约1×10-10M或更少、约5×10-11M或更少、约1×10-11M或更少、约5×10-12M或更少或者约1×10-12M或更少。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(体现为例如scFv)以例如具有以下解离常数(KD)的结合亲和力与DLL3(例如，人DLL3)结合：约1×10-8M或更少、约5×10-9M或更少、约1×10-9M或更少、约5×10-10M或更少、约1×10-10M或更少、约5×10-11M或更少或者约1×10-11M或更少、约5×10-12M或更少或者约1×10-12M或更少。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(体现为例如scFv)以例如具有以下解离常数(KD)的结合亲和力与DLL3(例如，人DLL3)结合：约5×10-9M或更少。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(体现为例如scFv)以例如具有以下解离常数(KD)的结合亲和力与DLL3(例如，人DLL3)结合：约1×10-9M或更少。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(体现为例如scFv)以例如具有以下解离常数(KD)的结合亲和力与DLL3(例如，人DLL3)结合：约3.5×10-9M。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(体现为例如scFv)以例如具有以下解离常数(KD)的结合亲和力与DLL3(例如，人DLL3)结合：约1.5×10-9M。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(体现为例如scFv)以例如具有以下解离常数(KD)的结合亲和力与DLL3(例如，人DLL3)结合：约1×10-12M。
胞外抗原结合结构域的结合可以通过例如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、FACS分析、生物测定(例如，生长抑制)或Western印记测定来确认。这些测定中的每种测定通常通过采用对目的复合物具有特异性的标记试剂(例如，抗体或scFv)来检测特定目的蛋白质-抗体复合物的存在。例如，scFv可以被放射性标记并且用于放射免疫测定(RIA)(参见例如，Weintraub,B.,Principles of Radioimmunoassays,Seventh TrainingCourse on Radioligand Assay Techniques,The Endocrine Society,1986年3月，所述文献通过引用并入本文)。放射性同位素可以通过γ计数器或闪烁计数器或通过放射自显影等方式进行检测。在某些实施例中，用荧光标志物标记靶向DLL3的胞外抗原结合结构域。荧光标志物的非限制性实例包含绿色荧光蛋白(GFP)、蓝色荧光蛋白(例如，EBFP、EBFP2、石青和mKalama1)、青色荧光蛋白(例如，ECFP、天青和CyPet)和黄色荧光蛋白(例如，YFP、柠檬黄、Venus和YPet)。在某些实施例中，用GFP标记靶向DLL3的人scFv。
在某些实施例中，CDR根据IMGT编号***来鉴定。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:1至3提供在表1中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:4至6提供在表1中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列，CDR1，该CDR1包含SEQ IDNO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:7。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:7。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:7的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:9中。SEQ ID NO:7和9提供在下表1中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:8的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:10中。SEQ ID NO:8和10提供在下表1中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“J8”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv，可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表1
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:11至13提供在表2中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:14至16提供在表2中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:146中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:17。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:17。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:17的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:19中。SEQ ID NO:17和19提供在下表2中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:18。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:18。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:18的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:20中。SEQ ID NO:16和20提供在下表2中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“L22”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表2
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、2和22提供于表3中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:4、5和23提供于表3中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:24。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:24。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:24的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:26中。SEQ ID NO:24和26提供在下表3中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:25。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:25。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:25的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:27中。SEQ ID NO:25和27提供在下表3中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“B2”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表3
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:28至30提供在表4中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:31至33提供在表4中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:34。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:34。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:34的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:36中。SEQ ID NO:34和36提供在下表4中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:35。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:35。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:35的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:37中。SEQ ID NO:35和37提供在下表4中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“A18”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表4
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、38和39提供于表5中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:40、5和41提供于表5中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:42。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:42。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:42的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:44中。SEQ ID NO:42和44提供于下表5中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:43。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:43。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:43的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:45中。SEQ ID NO:43和45提供在下表5中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“E9”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表5
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:46至48提供在表6中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:49至51提供在表6中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:52。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:52。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:52的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:54中。SEQ ID NO:52和54提供在下表6中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:53。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:51。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:53的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:55中。SEQ ID NO:53和55提供在下表6中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“G3”。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表6
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、2和56提供于表7中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:57至59提供在表7中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:214中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:60。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:59。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:60的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:62中。SEQ ID NO:60和62提供在下表7中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:61。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:61。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:61的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:63中。SEQ ID NO:61和63提供在下表7中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“M11”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表7
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、2和64提供于表8中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:4、5和65提供于表8中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:66。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:66。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:66的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:68中。SEQ ID NO:66和68提供在下表8中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:67。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:67。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:67中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:67的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:69中。SEQ ID NO:67和69提供在下表8中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:67中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“O24”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表8
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:70至72提供在表9中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:73至75提供在表9中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:76。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:76。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:76中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:76的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:78中。SEQ ID NO:76和78提供在下表9中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:77。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:77。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:77中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:77的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:79中。SEQ ID NO:77和79提供在下表9中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:76中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:77中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“P4”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表9
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在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、80和81提供于表10中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:57、58和82提供于表10中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:83。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:83。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:83的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:85中。SEQ ID NO:83和85提供在下表10中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:84。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:84。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:84的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:86中。SEQ ID NO:84和86提供在下表10中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“J23”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表10
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:87至89提供于表11中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:280中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:90、280和91提供于表11中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及VH CDR3，其包含SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:280中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:280中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:92。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:92。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:92的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:94中。SEQ ID NO:92和94提供在下表11中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:93。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:93。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:93的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:95中。SEQ ID NO:93和95提供于下表11中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“K19”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表11
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:96至98提供在表12中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:99至101提供在表12中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:102。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:102。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:102中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:102的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:104中。SEQ ID NO:102和104提供在下表12中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:103。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:103。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:103的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:105中。SEQ ID NO:103和105提供在下表12中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:102中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“N10”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表12
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、106和107提供于表13中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:57、58和82提供于表13中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:108。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:108。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:108的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:110中。SEQ ID NO:108和110提供在下表13中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:109。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:109。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:109的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:111中。SEQ ID NO:109和111提供在下表13中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“B16-v1”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表13
/>
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、106和107提供于表14中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:4、5和112提供于表14中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:108。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:108。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:108的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:110中。SEQ ID NO:108和110提供在下表14中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:113。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:113。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:113中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:113的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:113中。SEQ ID NO:113和114提供在下表14中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:113中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“B16-v2”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果
胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表14
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:116中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:96、115和116提供于表15中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:117中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:117、100和118提供于表15中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:116中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:117中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:116中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:117中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:119。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:119。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:119的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:121中。SEQ ID NO:119和121提供在下表15中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:120。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:120。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:120的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:122中。SEQ ID NO:120和122提供在下表15中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“E23”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果
胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表15
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、2和123提供于表16中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:124、58和125提供于表16中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:126。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:126。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:126中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:126的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:128中。SEQ ID NO:126和128提供在下表16中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:127。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:127。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:127中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:127的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:129中。SEQ ID NO:127和129提供在下表16中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:126中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:127中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“F9”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表16
/>
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、2和56提供于表17中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:130中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:57、58和130提供于表17中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:130中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:130中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:131。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:131。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:131中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:131的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:133中。SEQ ID NO:131和133提供在下表17中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:132。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:132。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:132中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:132的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:134中。SEQ ID NO:132和134提供在下表17中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:131中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:132中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“L12”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表17
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:135中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:137中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:135至137提供在表17中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:138中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:139中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:140中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:139至140提供在表17中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:135中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:137中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:138中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:139中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:140中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:135中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:137中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:138中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:139中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:140中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:141。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:141。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:141中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:141的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:143中。SEQ ID NO:141和143提供在下表18中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:142。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:142。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:142中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:142的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:144中。SEQ ID NO:142和144提供在下表18中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ IDNO:141中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:142中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“B22”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表18
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:145中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、2和145提供于表19中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:146中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:57、146和125提供于表19中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:145中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:146中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:145中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:146中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:147。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:147。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:147中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:147的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:149中。SEQ ID NO:147和149提供在下表19中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:148。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)
包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:148。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:148中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:148的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:150中。SEQID NO:148和150提供在下表19中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:147中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:148中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“C22”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果
胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表19
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:151中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:152中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:151、2和152提供于表20中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:57、58和82提供于表20中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:151中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:152中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:151中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:152中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:151。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:153。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:153中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:153的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:155中。SEQ ID NO:153和155提供在下表20中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:154。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)
包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:154。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:154中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:154的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:156中。SEQID NO:154和156提供在下表20中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:153中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:154中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“D8”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表20
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、2和123提供于表21中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:124、58和59提供于表21中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:157。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:157。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:157中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:157的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:159中。SEQ ID NO:157和159提供在下表21中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:158。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)
包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:158。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:158中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:158的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:160中。SEQID NO:158和160提供在下表21中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ IDNO:157中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:158中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“G16”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表21
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:161中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:11、136和161提供于表22中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:162中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:73、74和162提供于表22中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:161中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:162中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:161中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:162中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:163。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:163。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:163中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:163的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:165中。SEQ ID NO:163和165提供在下表22中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:164。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:148。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:164中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:164的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:166中。SEQ ID NO:164和166提供在下表22中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:163中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:164中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“F21”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表22
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:167中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:168中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:96、167和168提供于表23中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:169中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:170中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:171中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:169至171提供在表23中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:167中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:168中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:169中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:170中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:171中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:167中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:168中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:169中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:170中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:171中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:172。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:172。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:172中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:172的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:174中。SEQ ID NO:172和174提供在下表23中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:173。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:173。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:173中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:173的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:175中。SEQ ID NO:173和175提供在下表23中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:172中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:173中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“N12”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表23
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:176中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:177中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:21、176和177提供于表24中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:178中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:179中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:178、50和179提供于表24中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:176中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:177中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:178中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:179中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:176中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:177中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:178中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:179中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:180。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:180。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:180中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:180的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:182中。SEQ ID NO:180和182提供在下表24中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:181。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:181。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:181中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:181的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:183中。SEQ ID NO:181和183提供在下表24中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:180中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:181中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“G23”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表24
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:184中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:185中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:186中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:184至186提供在表25中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:187中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:188中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:189中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:187至189提供在表25中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:184中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:185中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:186中所示的氨基酸序列或其保守修饰；VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:187中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:188中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:189中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:184中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:185中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:186中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:187中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:188中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:189中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:190。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:190。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:190中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:190的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:192中。SEQ ID NO:190和192提供在下表25中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:191。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:191。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:191中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:191的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:193中。SEQ ID NO:191和193提供在下表25中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:190中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:191中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“I1”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表25
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:194中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:195中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:11、194和195提供于表26中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:196中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:4、5和196提供于表26中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:194中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:195中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:196中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:194中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:195中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:196中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:197。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:197。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:197中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:197的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:199中。SEQ ID NO:197和199提供在下表26中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:198。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:198。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:198中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:198的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:200中。SEQ ID NO:198和200提供在下表26中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:197中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:198中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“C8”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表26
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在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:201中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:202中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:203中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:201至203提供在表27中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:204中所示的氨基酸序列或其保守修饰。SEQ ID NO:57、58和204提供于表27中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:201中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:202中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:203中所示的氨基酸序列或其保守修饰；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，该CDR2包含SEQ IDNO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:204中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:201中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:202中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:203中所示的氨基酸序列；以及VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:204中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:205。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VH，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:205。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQ ID NO:205中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:205的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:207中。SEQ ID NO:205和207提供在下表27中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:206。例如，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含VL，其包含与以下项中所示的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:206。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含：VL，其包含SEQ ID NO:206中所示的氨基酸序列。编码SEQ ID NO:206的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:208中。SEQ ID NO:206和208提供在下表27中。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域(例如，scFv)包含：VH，其包含SEQ ID NO:205中所示的氨基酸序列，以及VL，其包含SEQ ID NO:206中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施例中，scFv被指定为“O18”。在某些实施例中，VH和VL通过接头连接。在某些实施例中，接头包含SEQ ID NO:210中所示的氨基酸序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
表27
与特定序列(例如，SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:93、SEQID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ IDNO:108、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:132、SEQID NO:141、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:172、SEQID NO:173、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:197、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206)具有至少约80％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、或至少约95％(例如，约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％)同源性或同一性的VH和/或VL氨基酸序列可以含有相对于指定序列的取代(例如，保守取代)、***或删除，但保留与DLL3结合的能力。
在某些实施例中，在特定序列(例如，SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ IDNO:92、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:127、SEQ IDNO:131、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:163、SEQ IDNO:164、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:197、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206)中取代、***和/或删除总共1至10个氨基酸。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在胞外抗原结合结构域的CDR之外的区中(例如，在FR中)。在某些实施例中，胞外抗原结合结构域包含VH和/或VL序列，其选自SEQ ID NO:7、8、17、18、24、25、34、35、42、43、52、53、60、61、66、67、76、77、83、84、92、93、102、103、108、109、113、119、120、126、127、131、132、141、142、147、148、153、154、157、158、163、164、172、173、180、181、190、191、197、198、205或206，包括该序列的翻译后修饰(SEQ ID NO:7、8、17、18、24、25、34、35、42、43、52、53、60、61、66、67、76、77、83、84、92、93、102、103、108、109、113、119、120、126、127、131、132、141、142、147、148、153、154、157、158、163、164、172、173、180、181、190、191、197、198、205或206)。
在某些实施例中，当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合片段交叉竞争与DLL3(例如，人DLL3)结合，该参考抗体或其抗原结合片段包含例如当前公开的scFv中的任一者(例如)的VH CDR1、CDR2和CDR3序列以及VL CDR1、CDR2和CDR3序列。在某些实施例中，当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合部分交叉竞争与DLL3(例如，人DLL3)结合，该参考抗体或其抗原结合部分包含例如当前公开的scFv中的任一者(例如，J8、L22、B2、A18、E9、G3、M11、O24、P4、J23、K19、N10、B16-v1、B16-v2、E23、F9、L12、B22、C22、D8、G16、F21、N12和G23)的VH和VL序列。
在某些实施例中，当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合部分交叉竞争与DLL3(例如，人DLL3)结合，该参考抗体或其抗原结合部分包含scFv J8的VH CDR1、CDR2和CDR3序列以及VL CDR1、CDR2和CDR3序列。例如，当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合部分交叉竞争与DLL3(例如，人DLL3)结合，该参考抗体或其抗原结合部分包含：VH CDR1，其包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，VH CDR2，其包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列；VH CDR3，其包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列；VL CDR1，其包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；VL CDR2，其包含具有SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的氨基酸；以及VL CDR3，其包含具有SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的氨基酸。在某些实施例中，当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合部分交叉竞争与DLL3(例如，人DLL3)结合，该参考抗体或其抗原结合部分包含scFv J8的VH和VL序列。例如，当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合部分交叉竞争与DLL3(例如，人DLL3)结合，该参考抗体或其抗原结合部分包含：VH，其包含具有SEQID NO:7中所示的氨基酸序列的氨基酸，以及VL，其包含具有SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列的氨基酸。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合部分与DLL3(例如，人DLL3)上的同一表位区结合。例如，当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合部分与DLL3(例如，人DLL3)上的同一表位区结合，该参考抗体或其抗原结合部分包含例如当前公开的scFv中的任一者(例如，J8、L22、B2、A18、E9、G3、M11、O24、P4、J23、K19、N10、B16-v1、B16-v2、E23、F9、L12、B22、C22、D8、G16、F21、N12和G23)的VH CDR1、CDR2和CDR3序列以及VL CDR1、CDR2和CDR3序列。在某些实施例中，当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合部分与DLL3(例如，人DLL3)上的同一表位区结合，该参考抗体或其抗原结合部分包含例如当前公开的scFv中的任一者(例如，J8、L22、B2、A18、E9、G3、M11、O24、P4、J23、K19、N10、B16-v1、B16-v2、E23、F9、L12、B22、C22、D8、G16、F21、N12和G23)的VH和VL序列。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合部分交叉竞争与DLL3(例如，人DLL3)结合。在某些实施例中，当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合部分交叉竞争与DLL3(例如，人DLL3)结合，该参考抗体或其抗原结合部分包含例如当前公开的scFv中的任一者(例如，J8、L22、B2、A18、E9、G3、M11、O24、P4、J23、K19、N10、B16-v1、B16-v2、E23、F9、L12、B22、C22、D8、G16、F21、N12和G23)的VH CDR1、CDR2和CDR3序列以及VL CDR1、CDR2和CDR3序列。在某些实施例中，当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域与参考抗体或其抗原结合部分与DLL3(例如，人DLL3)上的同一表位区结合，该参考抗体或其抗原结合部分包含例如当前公开的scFv中的任一者(例如，J8、L22、B2、A18、E9、G3、M11、O24、P4、J23、K19、N10、B16-v1、B16-v2、E23、F9、L12、B22、C22、D8、G16、F21、N12和G23)的VH和VL序列。
与参考抗体或其抗原结合部分交叉竞争或竞争与DLL3(例如，人DLL3)结合的胞外抗原结合结构域可以通过使用本领域已知的常规方法来鉴定，该方法包括但不限于ELISA、放射免疫测定(RIA)、Biacore、流式细胞术、Western印迹和任何其它合适的定量或定性抗体结合测定。竞争ELISA描述于Morris,“Epitope Mapping of Protein Antigens byCompetition ELISA”,The Protein Protocols Handbook(1996),第595-600页,J.Walker编辑中，该文献通过引用整体并入。在某些实施例中，抗体结合测定包括测量参考抗体与DLL3多肽的初始结合，将参考抗体与测试胞外抗原结合结构域混合，在存在测试胞外抗原结合结构域的情况下测量参考抗体与DLL3多肽的第二次结合，以及将初始结合与参考抗体的第二次结合进行比较，其中与初始结合相比，参考抗体与DLL3多肽的第二次结合减少表明测试胞外抗原结合结构域与参考抗体交叉竞争与DLL3结合，例如，识别相同或基本上相同的表位、重叠表位或相邻表位。在某些实施例中，参考抗体被标记，例如，用荧光染料、生物素或过氧化物酶标记。在某些实施例中，DLL3多肽在细胞中表达，例如在流式细胞术测试中。在某些实施例中，DLL3多肽被固定到表面上，该表面包括Biacore芯片(例如，在Biacore测试中)，或适于表面等离子体共振分析的其它介质。在存在完全不相关的抗体(不与DLL3结合)的情况下，参考抗体的结合可以充当对照高值。对照低值可以通过将标记的参考抗体与未标记的参考抗体一起温育来获得，其中标记的参考抗体的结合会发生竞争和减少。在某些实施例中，将参考抗体与DLL3多肽的结合减少至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约95％的测试胞外抗原结合结构域被认为是与参考抗体交叉竞争与DLL3结合的胞外抗原结合结构域。在某些实施例中，测定在室温下进行。
在某些实施例中，抗体结合测定包括测量测试胞外抗原结合结构域与DLL3多肽的初始结合，将测试胞外抗原结合结构域与参考抗体混合，在存在参考抗体的情况下测量测试胞外抗原结合结构域与DLL3多肽的第二次结合，以及将初始结合与测试胞外抗原结合结构域的第二次结合进行比较，其中与初始结合相比，测试胞外抗原结合结构域与DLL3多肽的第二次结合减少表明测试胞外抗原结合结构域与参考抗体交叉竞争与DLL3结合，例如，识别相同或基本上相同的表位、重叠表位或相邻表位。在某些实施例中，测试胞外抗原结合结构域被标记，例如，用荧光染料、生物素或过氧化物酶标记。在某些实施例中，DLL3多肽在细胞中表达，例如在流式细胞术测试中。在某些实施例中，DLL3多肽被固定到表面上，该表面包括Biacore芯片(例如，在Biacore测试中)，或适于表面等离子体共振分析的其它介质。在存在完全不相关的抗体(不与DLL3结合)的情况下，测试胞外抗原结合结构域的结合可以充当对照高值。通过将标记的测试胞外抗原结合结构域与未标记的测试胞外抗原结合结构域一起温育，可以获得对照低值，其中标记的测试胞外抗原结合结构域的结合会发生竞争和减少。在某些实施例中，在存在参考抗体的情况下，与DLL3多肽的结合减少至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约95％的测试胞外抗原结合结构域被认为是与参考抗体交叉竞争与DLL3结合的胞外抗原结合结构域。在某些实施例中，测定在室温下进行。
在某些非限制性实施例中，当前公开的CAR的胞外抗原结合结构域包含连接胞外抗原结合结构域的重链可变区和轻链可变区的接头序列或肽接头。在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:209。在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:210。在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:211。在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:212。在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:213。在某些实施例中，接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQID NO:214。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得重链可变区(VH)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VH-VL。
在某些实施例中，胞外抗原结合结构域内的可变区必须一个接一个地连接，使得轻链可变区(VL)定位于胞外抗原结合结构域的N末端处。在某些实施例中，如果胞外抗原结合结构域是scFv，则可变区定位于从N末端至C末端：VL-VH。
5.3.2.嵌合抗原受体(CAR)
在某些实施例中，抗原识别受体是CAR。CAR是工程化受体，其将所关注的特异性移植或赋予免疫效应细胞。CAR可以用于将单克隆抗体的特异性移植到T细胞上；通过逆转录病毒载体促进其编码序列的转移。
存在三代CAR。“第一代”CAR通常由与跨膜结构域融合的胞外抗原结合结构域(例如，scFv)构成，所述跨膜结构域与胞质/胞内信号传导结构域融合。“第一代”CAR可以提供从头抗原识别，并通过单个融合分子中的CD3ζ链信号传导结构域激活CD4+和CD8+T细胞两者，而不依赖HLA介导的抗原呈递。“第二代”CAR将来自各种共刺激分子(例如，CD28、4-1BB、ICOS、OX40)的胞内信号传导结构域添加到CAR的胞质尾部，以向T细胞提供另外的信号。“第二代”CAR包括提供共刺激(例如，CD28或4-1BB)和激活(CD3ζ)两者的那些。“第三代”CAR包括提供多种共刺激(例如，CD28和4-1BB)和激活(CD3ζ)两者的那些。在某些实施例中，所述抗原识别受体是第一代CAR。在某些实施例中，抗原识别受体是不包括共刺激分子或其片段的胞内信号传导结构域的CAR。在某些实施例中，抗原识别受体是第二代CAR。
在某些实施例中，CAR包含与DLL3特异性结合的胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。
5.3.2.1.CAR的胞外抗原结合结构域
CAR的胞外抗原结合结构域可以是本文例如第4.3.1节中公开的任何胞外抗原结合结构域。
在某些实施例中，CAR包含第4.3.1节中公开的胞外抗原结合结构域。
另外，胞外抗原结合结构域可以包括引导新生蛋白进入内质网的前导肽或信号肽。CAR被糖基化和锚定在细胞膜中，则信号肽或前导肽可能是必不可少的。信号序列或前导序列可以是存在于新合成蛋白的N末端的肽序列(例如，约5个、约10个、约15个、约20个、约25个或约30个氨基酸)，所述肽序列将所述蛋白引导到分泌通路中。在某些实施例中，信号肽与胞外抗原结合结构域的5'末端共价接合。在某些实施例中，信号肽包括CD8多肽，例如，CAR包括截短的CD8信号肽。
5.3.2.2.CAR的跨膜结构域
在某些非限制性实施例中，CAR的跨膜结构域包含跨膜的至少一部分的疏水性α螺旋。不同的跨膜结构域产生不同的受体稳定性。在抗原识别之后，受体聚集，并且信号传递到细胞。根据当前公开的主题，CAR的跨膜结构域可以包括CD8或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、CD28或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、CD3ζ或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、CD4或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、4-1BB或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、OX40或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、ICOS或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、CD84或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、CD166或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、CD8a或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、CD8b或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、ICAM-1或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、CTLA-4或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、CD27或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、CD40或其片段的天然或经修饰的跨膜结构域、NKGD2或其片段或其组合。
在某些实施例中，CAR的跨膜结构域包含CD8多肽(例如，CD8或其片段的跨膜结构域)。在某些实施例中，CAR的跨膜结构域包含人CD8或其片段的跨膜结构域。在某些实施例中，CD8多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列与具有NCBI参考号：NP_001139345.1的氨基酸序列(SEQ ID NO:216)或其片段至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同，和/或可以任选地包含多达一个或多达两个或多达三个保守氨基酸取代。在某些实施例中，CD8多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列为SEQ ID NO:216的连续部分，其长度为至少20、或至少30、或至少40、或至少50、且多达235个氨基酸。可替代地或另外地，在非限制性的各种实施例中，CD8多肽包含以下项的氨基酸1至235、1至50、50至100、100至150、150至200、137至209、或200至235的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:216。在某些实施例中，CAR的跨膜结构域包含CD8多肽，该CD8多肽包含以下项的氨基酸137至209或由其组成：SEQ ID NO:216。SEQ ID NO:216在下文提供。
MALPVTALLLPLALLLHAARPSQFRVSPLDRTWNLGETVELKCQVLLSNPTSGCSWLFQPRGAAASPTF
LLYLSQNKPKAAEGLDTQRFSGKRLGDTFVLTLSDFRRENEGYYFCSALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPT
TTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRRRVCKCPRPVVKSGDKPSLSARYV[SEQ ID NO:216]
在某些实施例中，CAR的跨膜结构域包含小鼠CD8或其片段的跨膜结构域。在某些实施例中，CD8多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列与具有NCBI参考号：AAA92533.1(SEQ ID NO:217)或其片段至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同，和/或可以任选地包含多达一个或多达两个或多达三个保守氨基酸取代。在某些实施例中，CD8多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列为SEQ ID NO:217的连续部分，其长度为至少20、或至少约30、或至少约40、或至少约50、或至少约60、或至少约70、或至少约100、或至少约200以及多达247个氨基酸。可替代地或另外地，在非限制性的各种实施例中，CD8多肽包含以下项的氨基酸1至247、1至50、50至100、100至150、150至200、151至219、或200至247的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:217。在某些实施例中，CAR的跨膜结构域包含CD8多肽，该CD8多肽包含以下项的氨基酸151至219或由其组成：SEQ ID NO:217。SEQ ID NO:217在下文提供。
在某些实施例中，当前公开的CAR的跨膜结构域包含CD28多肽(例如，CD28或其片段的跨膜结构域)。
在某些实施例中，CAR的跨膜结构域包含人CD28或其片段的跨膜结构域。在某些实施例中，CD28多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列与具有NCBI参考号：NP_006130的氨基酸序列(SEQ ID No:218)或其片段至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同，和/或可以任选地包含多达一个或多达两个或多达三个保守氨基酸取代。在非限制性的某些实施例中，CD28多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列为SEQ ID NO:218的连续部分，其长度为至少20、或至少30、或至少40、或至少50、且多达220个氨基酸。可替代地或另外地，在非限制性的各种实施例中，CD28多肽包含以下项的氨基酸1至220、1至50、50至100、100至150、150至200、153至179、或200至220的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，CAR的跨膜结构域包含CD28多肽，该CD28多肽包含以下项的氨基酸153至179或由其组成：SEQ ID NO:218。SEQ ID NO:218提供如下：
在某些实施例中，CAR的跨膜结构域包含CD28多肽(例如，小鼠CD28或其片段的跨膜结构域)。在某些实施例中，CD28多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列与具有NCBI参考号：NP_031668.3的氨基酸序列(SEQ ID No:219)或其片段至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同，和/或可以任选地包含多达一个或多达两个或多达三个保守氨基酸取代。在非限制性的某些实施例中，CD28多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列为SEQ ID NO:219的连续部分，其长度为至少20、或至少30、或至少40、或至少50、且多达218个氨基酸。可替代地或另外地，在非限制性的各个实施例中，CD28多肽包含以下项的氨基酸1至220、1至50、50至100、100至150、150至200、151至177或200至218的氨基酸序列或由其组成：SEQ IDNO:219。在某些实施例中，CAR的跨膜结构域包含CD28多肽，该CD28多肽包含以下项的氨基酸151至177或由其组成：SEQ ID NO:219。SEQ ID NO:219提供如下：
在某些非限制性实施例中，CAR进一步包括将胞外抗原结合结构域与跨膜结构域连接的间隔子区。间隔子区可以是足够柔性的，以允许抗原结合结构域在不同方向上定向，从而促进抗原识别，同时保持CAR的激活活性。
在某些实施例中，CAR的铰链/间隔子区包括CD8或其片段的天然或经修饰的铰链区、CD28或其片段的天然或经修饰的铰链区、CD3ζ或其片段的天然或经修饰的铰链区、CD40或其片段的天然或经修饰的铰链区、4-1BB或其片段的天然或经修饰的铰链区、OX40或其片段的天然或经修饰的铰链区、CD84或其片段的天然或经修饰的铰链区、CD166或其片段的天然或经修饰的铰链区、CD8a或其片段的天然或经修饰的铰链区、CD8b或其片段的天然或经修饰的铰链区、ICOS或其片段的天然或经修饰的铰链区、ICAM-1或其片段的天然或经修饰的铰链区、CTLA-4或其片段的天然或经修饰的铰链区、CD27或其片段的天然或经修饰的铰链区、CD40或其片段的天然或经修饰的铰链区、NKGD2或其片段的天然或经修饰的铰链区、合成多肽(不基于与免疫应答相关的蛋白质)或其组合。铰链/间隔子区可以是来自IgG1的铰链区或免疫球蛋白的CH2CH3区以及CD3的若干部分、CD28多肽的一部分(例如SEQ ID NO:218或219的一部分)，CD8多肽的一部分(例如，SEQ ID NO:216或217的一部分)，与其至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％同源或相同的前述中任一者的变体，或者合成的间隔子序列。
5.3.2.3.CAR的胞内信号传导结构域
在某些实施例中，CAR包括胞内信号传导结构域。在某些非限制性实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含CD3ζ多肽。CD3ζ可以激活或刺激细胞(例如，淋系的细胞，例如T细胞)。野生型(“天然”)CD3ζ包括三个功能性免疫受体基于酪氨酸的激活基序(ITAM)、三个功能性富含碱基的伸展(BRS)区(BRS1、BRS2和BRS3)。抗原被结合后，CD3ζ向细胞(例如，淋系的细胞，例如T细胞)传递激活信号。CD3ζ链的胞内信号传导结构域是内源性TCR的信号的主要传递者。
在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含天然CD3ζ。在某些实施例中，CD3ζ多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列与具有NCBI参考号：NP_932170的氨基酸序列(SEQ ID NO:220)或其片段至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同，和/或可以任选地包含多达一个或多达两个或多达三个保守氨基酸取代。在某些非限制性实施例中，CD3ζ多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列为SEQ ID NO:220的连续部分，其长度为至少20、或至少30、或至少40、或至少50、且多达164个氨基酸。可替代地或另外地，在非限制性的各个实施例中，CD3ζ多肽包含以下项的氨基酸1至164、1至50、50至100、52至164、100至150、或150至164的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:220。在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含CD3ζ多肽，该CD3ζ多肽包含以下项的氨基酸52至164或由其组成：SEQ ID NO:220。SEQ ID NO:220提供如下：
在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含CD3多肽，该CD3多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:221。SEQ ID NO:221在下文提供。
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR[SEQ ID NO:221]
编码SEQ ID NO:221的氨基酸序列的示例性核苷酸序列示于SEQ ID NO:222中，其提供如下。
AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAG
CTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGG
GGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAG
GCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC[SEQ ID NO:222]
在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域进一步包含至少共刺激信号传导区。在某些实施例中，共刺激信号传导区包括至少一个共刺激分子或其片段。在某些实施例中，共刺激信号传导区包括至少一个共刺激分子或其片段的胞内结构域。
如本文所使用的，“共刺激分子”是指除抗原受体或其配体之外的可以提供淋巴细胞对抗原的高效应答的细胞表面分子。在某些实施例中，共刺激分子可以提供最佳的淋巴细胞激活。共刺激分子的非限制性实例包含CD28、4-1BB、OX40、ICOS、DAP-10、CD27、CD40、NKGD2、CD2、FN14、HVEM、LTBR、CD28H、TNFR1、TNFR2、BAFF-R、BCMA、TACI、TROY、RANK、CD40、CD27、CD30、EDAR、XEDAR、GITR、DR6和NGFR以及其组合。共刺激分子可以与共刺激配体结合，所述共刺激配体是一种在与其受体结合时产生共刺激应答，即当抗原识别受体(例如，嵌合抗原受体(CAR))与其靶抗原结合时产生影响刺激的胞内应答的在细胞表面上表达的蛋白质。作为一个实例，4-1BB配体(即，4-1BBL)可以与4-1BB结合以提供胞内信号，所述信号与CAR信号结合诱导CAR+T细胞的效应细胞功能。
在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导区，该共刺激信号传导区包含CD28多肽，例如CD28或其片段的胞内结构域。在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，例如人CD28的胞内结构域或其片段。在某些实施例中，CD28多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列与SEQ ID NO:218中所示的氨基酸序列或其片段至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％、至少约100％同源或相同，和/或可以任选地包含多达一个或多达两个或多达三个保守氨基酸取代。在非限制性的某些实施例中，CD28多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列为SEQ ID NO:218的连续部分，其长度为至少20、或至少30、或至少40、或至少50、且多达220个氨基酸。可替代地或另外地，在非限制性的各个实施例中，CD28多肽包含以下项的氨基酸1至220、1至50、50至100、100至150、114至220、150至200、180至220、或200至220的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含以下项的氨基酸180至220的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:218。
在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，例如，小鼠CD28的胞内结构域或其片段。在某些实施例中，CD28多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列与SEQ ID NO:219中所示的氨基酸序列或其片段至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％、至少约100％同源或相同，和/或可以任选地包含多达一个或多达两个或多达三个保守氨基酸取代。在非限制性的某些实施例中，CD28多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列为SEQ ID NO:219的连续部分，其长度为至少约20、或至少约30、或至少约40、或至少约50、且多达218个氨基酸。可替代地或另外地，在非限制性的各个实施例中，CD28多肽包含以下项的氨基酸1至218、1至50、50至100、100至150、150至218、178至218、或200至218的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:219。在某些实施例中，当前公开的CAR的共刺激信号传导区包含CD28多肽，该CD28多肽包含以下项的氨基酸178至218或由其组成：SEQ ID NO:219。
在某些实施例中，当前公开的CAR的共刺激信号传导区包含CD28多肽，其包含突变的YMNM基序。CD28是跨膜蛋白，其通过充当共刺激分子在T细胞激活中发挥关键作用。CD28拥有胞内结构域，其包含对于CD28有效信号传导至关重要的胞内基序。在某些实施例中，CD28胞内结构域包含调节TCR刺激后信号传导通路的胞内子结构域(也称为“胞内基序”)。CD28包括三个胞内基序：YMNM基序和两个富含脯氨酸的基序：PRRP基序和PYAP基序。CD28胞内基序可以充当许多衔接子分子的对接位点，这些衔接子分子通过其SH2或SH3结构域与这些基序相互作用。此类相互作用转导下游信号，终止于调节基因表达的转录因子。例如，天然YMNM基序与磷酸肌醇3-激酶(PI3K)的p85亚基结合。天然YMNM基序还与生长因子受体结合蛋白2(Grb2)和/或Grb2相关衔接子蛋白2(GADS)结合。Grb2与Gab1和Gab2结合，进而可以募集PI3K的p85亚基。
在某些实施例中，天然YMNM基序由YMNM(SEQ ID NO:224)中所示的氨基酸序列组成。在某些实施例中，天然YMNM基序经由共有序列YMxM(SEQ ID NO:225)与PI3K的p85亚基结合，其中x不是天冬氨酸(N)。在某些实施例中，天然YMNM基序经由共有序列YxNx(SEQ IDNO:226)与Grb2和/或GADs结合，其中x不是甲硫氨酸(M)。
在某些实施例中，与包含天然YMNM基序的CD28分子相比，包含当前公开的突变的YMNM基序的CD28多肽的PI3K的p85亚基的募集减少。在某些实施例中，PI3K的p85亚基不与突变的YMNM基序结合，由此减少PI3K的p85亚基对CD28多肽的募集。阻断PI3K的p85亚基的结合的突变的YMNM基序保留了其与Grb2和/或GADS的结合。因此，Grb2/GADS的下游信号传导保持完整，例如，引起IL-2分泌的下游信号传导保持完整。此类突变的YMNM基序被称为“GADS/Grb2允许突变体”。
在某些实施例中，突变的YMNM与PI3K的p85亚基结合，但不与Grb2和/或GADS结合。由于PI3K p85的结合被保留，因此PI3K的下游信号传导保持完整。由于Grb2/GADS的结合被阻断，因此由Grb2与Gab1和Gab2的结合触发的PI3K p85亚基的募集被减少或阻断。此外，Grb2/GADS的下游信号传导被阻断。此类突变的YMNM基序被称为“PI3K允许突变体”。
在某些实施例中，突变的YMNM不与PI3K的p85亚基结合，并且不与Grb2和/或GADS结合。此类突变的YMNM基序被称为“非功能性突变体”。非功能性突变体不提供PI3K、Grb2或GADS在YMNM基序处与CD28的结合，但不排除这些信号传导分子与CD28分子中的其他位置结合。
在某些实施例中，突变的YMNM仅保留YMNM基序中存在的两个甲硫氨酸残基中的一个甲硫氨酸残基，即YMxx或YxxM。这些基序通过限制可以结合PI3K的p85亚基的甲硫氨酸残基数量来潜在地调节经由PI3K的信号传导。此类突变的YMNM基序被称为“混合‘HEMI’突变体”。
在某些实施例中，突变的YMNM基序是GADS/Grb-2允许突变体。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YxNx(SEQ ID NO:226)中所示的氨基酸序列组成，其中x不是甲硫氨酸(M)。在某些实施例中，x选自由以下项组成的组：氨基酸A、R、N、D、C、E、Q、G、H、I、K、F、P、S、T、W、Y、V和L。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YENV(SEQ ID NO:227)、YSNV(SEQ ID NO:228)、YKNL(SEQ ID NO:229)、YENQ(SEQ ID NO:230)、YKNI(SEQ ID NO:231)、YINQ(SEQ ID NO:232)、YHNK(SEQ ID NO:233)、YVNQ(SEQ ID NO:234)、YLNP(SEQ ID NO:235)、YLNT(SEQ IDNO:236)、YDND(SEQ ID NO:237)、YENI(SEQ ID NO:238)、YENL(SEQ ID NO:239)、YKNQ(SEQID NO:240)、YKNV(SEQ ID NO:241)或YANG(SEQ ID NO:242)中所示的氨基酸序列组成。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YSNV(SEQ ID NO:228)中所示的氨基酸序列组成。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YKNI(SEQ ID NO:231)中所示的氨基酸序列组成。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YENV(SEQ ID NO:227)中所示的氨基酸序列组成。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YKNL(SEQ ID NO:229)中所示的氨基酸序列组成。
在某些实施例中，突变的YMNM基序是PI3K允许突变体。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YMxM(SEQ ID NO:225)中所示的氨基酸序列组成，其中x不是天冬氨酸(N)。在某些实施例中，x选自由以下项组成的组：氨基酸A、R、D、C、E、Q、G、H、I、K、M、F、P、S、T、W、Y、V和L。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YMDM(SEQ ID NO:243)、YMPM(SEQ ID NO:244)、YMRM(SEQ ID NO:245)或YMSM(SEQ ID NO:246)中所示的氨基酸序列组成。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YMDM(SEQ ID NO:243)中所示的氨基酸序列组成。
在某些实施例中，突变的YMNM基序由YbxM(SEQ ID NO:247)中所示的氨基酸序列组成，其中x不是天冬氨酸(N)，并且b不是甲硫氨酸(M)。在某些实施例中，x选自由以下项组成的组：氨基酸A、R、D、C、E、Q、G、H、I、K、M、F、P、S、T、W、Y、V和L。在某些实施例中，b选自由以下项组成的组：氨基酸A、R、N、C、E、Q、G、H、I、K、N、F、P、S、T、W、Y、V和L。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YTHM(SEQ ID NO:248)、YVLM(SEQ ID NO:249)、YIAM(SEQ ID NO:250)、YVEM(SEQ ID NO:251)、YVKM(SEQ ID NO:252)或YVPM(SEQ ID NO:253)中所示的氨基酸序列组成。
在某些实施例中，突变的YMNM基序由YMxb(SEQ ID NO:254)中所示的氨基酸序列组成，其中x不是天冬氨酸(N)，并且b不是甲硫氨酸(M)。在某些实施例中，x选自由以下项组成的组：氨基酸A、R、D、C、E、Q、G、H、I、K、M、F、P、S、T、W、Y、V和L。在某些实施例中，b选自由以下项组成的组：氨基酸A、R、N、C、E、Q、G、H、I、K、N、F、P、S、T、W、Y、V和L。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YMAP(SEQ ID NO:255)中所示的氨基酸序列组成。
某些突变的YMNM基序描述于Mol Cell Proteomics.2010年11月；9(11):2391-404；Virology.2015年5月；0:568–577中，这两篇参考文献通过引用以其整体并入本文。
在某些实施例中，突变的YMNM基序是混合‘HEMI’突变体。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YMNx(SEQ ID NO:256)或YxNM(SEQ ID NO:257)中所示的氨基酸序列组成，其中x不是甲硫氨酸(M)。在某些实施例中，x选自由以下项组成的组：氨基酸A、R、N、C、E、Q、G、H、I、K、N、F、P、S、T、W、Y、V和L。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YMNV(SEQ ID NO:258)、YENM(SEQ ID NO:259)、YMNQ(SEQ ID NO:260)、YMNL(SEQ ID NO:261)或YSNM(SEQ ID NO:262)中所示的氨基酸序列组成。
在某些实施例中，突变的YMNM基序是非功能性突变体。在某些实施例中，突变的YMNM基序由氨基酸序列Ybxb(SEQ ID NO:263)中所示的氨基酸序列组成，其中x不是天冬氨酸(N)，并且b不是甲硫氨酸(M)。在某些实施例中，x选自由以下项组成的组：A、R、D、C、E、Q、G、H、I、K、M、F、P、S、T、W、Y、V和L。在某些实施例中，b选自由以下项组成的组：A、R、N、D、C、E、Q、G、H、I、K、F、P、S、T、W、Y、V和L。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YGGG(SEQ ID NO:264)、YAAA(SEQ ID NO:265)、YFFF(SEQ ID NO:266)、YETV(SEQ ID NO:267)、YQQQ(SEQ IDNO:268)、YHAE(SEQ ID NO:269)、YLDL(SEQ ID NO:270)、YLIP(SEQ ID NO:271)、YLRV(SEQID NO:272)、YTAV(SEQ ID NO:273)或YVHV(SEQ ID NO:274)中所示的氨基酸序列组成。在某些实施例中，突变的YMNM基序由YGGG(SEQ ID NO:264)中所示的氨基酸序列组成。
在某些实施例中，当前公开的嵌合受体的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导结构域，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含突变的YMNM基序，该突变的YMNM基序由YENV(SEQ ID NO:227)中所示的氨基酸序列组成，其中CD28多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:275。SEQ ID NO:275在下文提供。
RSKRSRLLHSDYENVTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS[SEQ ID NO:275]
在某些实施例中，当前公开的嵌合受体的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导结构域，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含突变的YMNM基序，该突变的YMNM基序由YKNI(SEQ ID NO:231)中所示的氨基酸序列组成，其中CD28多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:276。SEQ ID NO:276在下文提供。
RSKRSRLLHSDYKNITPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS[SEQ ID NO:276]
在某些实施例中，当前公开的嵌合受体的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导结构域，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含突变的YMNM基序，该突变的YMNM基序由YMDM(SEQ ID NO:243)中所示的氨基酸序列组成，其中CD28多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:277。SEQ ID NO:277在下文提供。
RSKRSRLLHSDYMDMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS[SEQ ID NO:277]
在某些实施例中，当前公开的嵌合受体的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导结构域，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含突变的YMNM基序，该突变的YMNM基序由YGGG(SEQ ID NO:264)中所示的氨基酸序列组成，其中CD28多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:278。SEQ ID NO:278在下文提供。
RSKRSRLLHSDYGGGTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS[SEQ ID NO:278]
在某些实施例中，当前公开的嵌合受体的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导结构域，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含突变的YMNM基序，该突变的YMNM基序由YSNV(SEQ ID NO:228)中所示的氨基酸序列组成，其中CD28多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:279。SEQ ID NO:279在下文提供。
RSKRSRLLHSDYSNVTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS[SEQ ID NO:279]
在某些实施例中，当前公开的CAR的胞内信号传导结构域包含第一共刺激信号传导结构域和第二共刺激信号传导结构域，该第一共刺激信号传导结构域包含含有突变的YMNM基序(如本文公开的)的CD28多肽，该第二共刺激信号传导结构域包含共刺激分子的胞内结构域。关于包括包含突变的YMNM基序的CD28多肽的CAR的额外信息可以见于国际专利公开号WO 2021/158850，该专利通过引用以其整体并入。
在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导区，该共刺激信号传导区包括4-1BB多肽，例如4-1BB或其片段的胞内结构域。在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导区，其包含4-1BB多肽，例如人4-1BB的胞内结构域或其片段。在某些实施例中，4-1BB多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列与具有NCBI参考号：NP_001552(SEQ ID NO:221)或其片段至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同，和/或可以任选地包含多达一个或多达两个或多达三个保守氨基酸取代。在非限制性的某些实施例中，4-1BB多肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列为SEQ ID NO:223的连续部分，其长度为至少20、或至少30、或至少40、或至少50、或至少100、或至少150、或至少150、且多达255个氨基酸。可替代地或另外地，在非限制性的各种实施例中，4-1BB多肽包含以下项的氨基酸1至255、1至50、50至100、100至150、150至200、或200至255的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:223。在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导区，其包含4-1BB多肽，该4-1BB多肽包含以下项的氨基酸214至255的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:223。SEQ ID NO:223在下文提供。
在某些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导区，该共刺激信号传导区包括两个或更多个共刺激分子或其部分的胞内结构域，例如CD28或其片段的胞内结构域和4-1BB或其片段的胞内结构域，或者CD28或其片段的胞内结构域和OX40或其片段的胞内结构域。
在某些实施例中，当前公开的CAR进一步包括用于在人细胞中表达核酸序列的诱导型启动子。用于表达CAR基因的启动子可以是组成型启动子，如泛素C(UbiC)启动子。
5.3.2.4.示例性CAR
在某些实施例中，CAR是靶向DLL3的CAR。在某些实施例中，CAR包含(a)胞外抗原结合结构域，其包含(i)VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列，以及(ii)VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；(b)包含CD28多肽的跨膜结构域(例如，人CD28的跨膜结构域或其片段)，以及(c)胞内信号传导结构域，其包含(i)CD3ζ多肽，以及(ii)包含CD28多肽的共刺激信号传导区(例如，人CD28的胞内结构域或其片段)。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD28多肽，其包含以下项的氨基酸153至179：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含(i)CD3ζ多肽，其包含SEQ ID NO:221中所示的氨基酸序列，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含以下项的氨基酸180至220：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，VH和VL经由包含以下项中所示的氨基酸序列或由其组成的接头连接：SEQ IDNO:210。在某些实施例中，VH和VL定位于从N末端到C末端：VL-VH。在某些实施例中，CAR被指定为“J8-LH_h28z”。
在某些实施例中，CAR是靶向DLL3的CAR。在某些实施例中，CAR包含(a)胞外抗原结合结构域，其包含(i)VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列，以及(ii)VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；(b)包含CD28多肽的跨膜结构域(例如，人CD28的跨膜结构域或其片段)，以及(c)胞内信号传导结构域，其包含(i)CD3ζ多肽，以及(ii)包含4-1BB多肽的共刺激信号传导区(例如，人4-1BB的胞内结构域或其片段)。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD28多肽，其包含以下项的氨基酸153至179：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含(i)CD3ζ多肽，其包含SEQ ID NO:221中所示的氨基酸序列，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含4-1BB多肽，该4-1BB多肽包含以下项的氨基酸214至255：SEQ ID NO:223。在某些实施例中，VH和VL经由包含以下项中所示的氨基酸序列或由其组成的接头连接：SEQ ID NO:210。在某些实施例中，VH和VL定位于从N末端到C末端：VL-VH。在某些实施例中，CAR被指定为“J8-LH_hBBz”。
在某些实施例中，CAR是靶向DLL3的CAR。在某些实施例中，CAR包含(a)胞外抗原结合结构域，其包含(i)VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列，以及(ii)VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQID NO:16中所示的氨基酸序列；(b)包含CD28多肽的跨膜结构域(例如，人CD28的跨膜结构域或其片段)，以及(c)胞内信号传导结构域，其包含(i)CD3ζ多肽，以及(ii)包含CD28多肽的共刺激信号传导区(例如，人CD28的胞内结构域或其片段)。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD28多肽，其包含以下项的氨基酸153至179：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含(i)CD3ζ多肽，其包含SEQ ID NO:221中所示的氨基酸序列，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含以下项的氨基酸180至220：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，VH和VL经由包含以下项中所示的氨基酸序列或由其组成的接头连接：SEQ ID NO:210。在某些实施例中，VH和VL定位于从N末端到C末端：VH-VL。在某些实施例中，CAR被指定为“L22-HL_h28z”。
在某些实施例中，CAR是靶向DLL3的CAR。在某些实施例中，CAR包含(a)胞外抗原结合结构域，其包含(i)VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列，以及(ii)VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQID NO:16中所示的氨基酸序列；(b)包含CD28多肽的跨膜结构域(例如，人CD28的跨膜结构域或其片段)，以及(c)胞内信号传导结构域，其包含(i)CD3ζ多肽，以及(ii)包含4-1BB多肽的共刺激信号传导区(例如，人4-1BB的胞内结构域或其片段)。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD28多肽，其包含以下项的氨基酸153至179：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含(i)CD3ζ多肽，其包含SEQ ID NO:221中所示的氨基酸序列，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含4-1BB多肽，该4-1BB多肽包含以下项的氨基酸214至255：SEQ IDNO:223。在某些实施例中，VH和VL经由包含以下项中所示的氨基酸序列或由其组成的接头连接：SEQ ID NO:210。在某些实施例中，VH和VL定位于从N末端到C末端：VH-VL。在某些实施例中，CAR被指定为“L22-HL_hBBz”。
在某些实施例中，CAR是靶向DLL3的CAR。在某些实施例中，CAR包含(a)胞外抗原结合结构域，其包含(i)VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列，以及(ii)VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ IDNO:23中所示的氨基酸序列；(b)包含CD28多肽的跨膜结构域(例如，人CD28的跨膜结构域或其片段)，以及(c)胞内信号传导结构域，其包含(i)CD3ζ多肽，以及(ii)包含CD28多肽的共刺激信号传导区(例如，人CD28的胞内结构域或其片段)。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD28多肽，其包含以下项的氨基酸153至179：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含(i)CD3ζ多肽，其包含SEQ ID NO:221中所示的氨基酸序列，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含以下项的氨基酸180至220：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，VH和VL经由包含以下项中所示的氨基酸序列或由其组成的接头连接：SEQID NO:210。在某些实施例中，VH和VL定位于从N末端到C末端：VL-VH。在某些实施例中，CAR被指定为“B2-LH_h28z”。
在某些实施例中，CAR是靶向DLL3的CAR。在某些实施例中，CAR包含(a)胞外抗原结合结构域，其包含(i)VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列，以及(ii)VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ IDNO:23中所示的氨基酸序列；(b)包含CD28多肽的跨膜结构域(例如，人CD28的跨膜结构域或其片段)，以及(c)胞内信号传导结构域，其包含(i)CD3ζ多肽，以及(ii)包含4-1BB多肽的共刺激信号传导区(例如，人4-1BB的胞内结构域或其片段)。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD28多肽，其包含以下项的氨基酸153至179：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含(i)CD3ζ多肽，其包含SEQ ID NO:221中所示的氨基酸序列，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含4-1BB多肽，该4-1BB多肽包含以下项中所示的氨基酸214至255：SEQID NO:223。在某些实施例中，VH和VL经由包含以下项中所示的氨基酸序列或由其组成的接头连接：SEQ ID NO:210。在某些实施例中，VH和VL定位于从N末端到C末端：VL-VH。在某些实施例中，CAR被指定为“B2-LH_hBBz”。
在某些实施例中，CAR是靶向DLL3的CAR。在某些实施例中，CAR包含(a)胞外抗原结合结构域，其包含(i)VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列，以及(ii)VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；(b)包含CD28多肽的跨膜结构域(例如，人CD28的跨膜结构域或其片段)，以及(c)胞内信号传导结构域，其包含(i)CD3ζ多肽，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含突变的YMNM基序，该突变的YMNM基序由YSNV(SEQ ID NO:228)中所示的氨基酸序列组成。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD28多肽，其包含以下项的氨基酸153至179：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含(i)CD3ζ多肽，其包含SEQ ID NO:221中所示的氨基酸序列，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:279。在某些实施例中，VH和VL经由包含以下项中所示的氨基酸序列或由其组成的接头连接：SEQ ID NO:210。在某些实施例中，VH和VL定位于从N末端到C末端：VL-VH。在某些实施例中，CAR被指定为“2J8-28YSNVz”。
5.3.3.TCR样融合分子
在某些实施例中，抗原识别受体是TCR样融合分子。TCR融合分子的非限制性实例包括HLA非依赖性的基于TCR的嵌合抗原受体(也被称为“HIT-CAR”，例如在国际专利申请号PCT/US19/017525中公开的那些，该国际专利申请通过引用以其整体并入)和T细胞受体融合构建体(TRuC)(例如，Baeuerle等人,“Synthetic TRuC receptors engaging thecomplete T cell receptor for potent anti-tumor response,”NatureCommunications第10卷,文章编号:2087(2019)中公开的那些，该参考文献通过引用以其整体并入)。
在某些实施例中，TCR样融合分子包括抗原结合链，所述抗原结合链包括胞外抗原结合结构域和恒定结构域，其中所述TCR样融合分子以HLA非依赖性方式与抗原结合。在某些实施例中，恒定结构域包含T细胞受体恒定区，该T细胞受体恒定区选自由以下组成的组：天然或经修饰的TRAC肽、天然或经修饰的TRBC肽、天然或经修饰的TRDC肽、天然或经修饰的TRGC肽以及其任何变体或功能片段。在某些实施例中，恒定结构域包含天然或经修饰的TRAC肽。在某些实施例中，恒定结构域包含天然或经修饰的TRBC肽。在某些实施例中，恒定结构域能够与另一个恒定结构域形成同二聚体或异二聚体。在某些实施例中，抗原结合链能够与CD3ζ多肽缔合。在某些实施例中，抗原结合链在与抗原结合后，能够激活与抗原结合链缔合的CD3ζ多肽。在某些实施例中，CD3ζ多肽的激活能够激活免疫应答细胞。在某些实施例中，TCR样融合分子能够与CD3复合物整合，并且提供HLA非依赖性抗原识别。在某些实施例中，TCR样融合分子替代CD3/TCR复合物中的内源性TCR。在某些实施例中，TCR样融合分子的胞外抗原结合结构域能够与另一个胞外抗原结合结构域二聚化。在某些实施例中，TCR样融合分子的胞外抗原结合结构域包含细胞表面受体的配体、细胞表面配体的受体、抗体或其片段的抗原结合部分或TCR的抗原结合部分。在某些实施例中，TCR样融合分子的胞外抗原结合结构域包含一个或两个免疫球蛋白可变区。在某些实施例中，TCR样融合分子的胞外抗原结合结构域包含抗体的重链可变区(VH)。在某些实施例中，TCR样融合分子的胞外抗原结合结构域包含抗体的轻链可变区(VL)。在某些实施例中，TCR样融合分子的胞外抗原结合结构域能够与另一个胞外抗原结合结构域二聚化。在某些实施例中，TCR样融合分子的胞外抗原结合结构域包含抗体的VH，其中VH能够与包括抗体VL的另一个胞外抗原结合结构域二聚化，并且形成可变片段(Fv)。在某些实施例中，TCR样融合分子的胞外抗原结合结构域包含抗体的VL，其中VL能够与包括抗体VH的另一个胞外抗原结合结构域二聚化，并且形成可变片段(Fv)。
5.4.细胞
当前公开的主题提供了包含当前公开的靶向DLL3的抗原识别受体(例如，第4.3节中公开的抗原识别受体)的细胞。在某些实施例中，细胞选自由以下组成的组：淋系细胞、髓系细胞、淋系细胞可以来源于的干细胞和髓系细胞可以来源于的干细胞。在某些实施例中，细胞是免疫应答细胞。在某些实施例中，免疫应答细胞是淋系细胞。
在某些实施例中，细胞是淋系的细胞。淋系的细胞可以产生抗体、调节细胞免疫***、检测血液中的外来药剂、检测宿主的外来细胞等。淋系的细胞的非限制性实例包括T细胞、自然杀伤(NK)细胞、B细胞、树突状细胞以及可从其分化淋巴样细胞的干细胞。在某些实施例中，干细胞是多能干细胞(例如，胚胎干细胞)。
在某些实施例中，细胞是T细胞。T细胞可以是在胸腺中成熟的淋巴细胞，并且主要负责细胞介导的免疫。T细胞涉及适应性免疫***。当前公开的主题的T细胞可以是任何类型的T细胞，包含但不限于辅助T细胞、细胞毒性T细胞、记忆T细胞(包含中枢记忆T细胞)、干细胞样记忆T细胞(或干样记忆T细胞)和以下两种类型的效应记忆T细胞：例如，TEM细胞和TEMRA细胞、调节性T细胞(也被称为抑制性T细胞)、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)、自然杀伤T细胞、粘膜相关不变T细胞和γδT细胞。细胞毒性T细胞(CTL或杀伤T细胞)是T淋巴细胞的子集，能够诱导受感染的体细胞或肿瘤细胞死亡。通过引入抗原识别受体，例如CAR，可以对患者自身的T细胞进行基因修饰以靶向特定抗原。在某些实施例中，免疫应答细胞是T细胞。T细胞可以是CD4+T细胞或CD8+T细胞。在某些实施例中，T细胞是CD4+T细胞。在某些实施例中，T细胞是CD8+T细胞。
在某些实施例中，细胞是NK细胞。自然杀伤(NK)细胞可以是作为细胞介导免疫的一部分并且在先天免疫应答期间起作用的淋巴细胞。NK细胞不需要预先激活就能对靶细胞产生细胞毒性作用。
当前公开的主题的人类淋巴细胞的类型包括但不限于外周供体淋巴细胞。例如，Sadelain等人,Nat Rev Cancer(2003)；3:35-45(公开了经基因修饰以表达CAR的外周供体淋巴细胞)，Morgan,R.A.,等人2006Science 314:126-129(公开了经基因修饰以表达包含α和β异二聚体的全长肿瘤抗原识别T细胞受体复合物的外周供体淋巴细胞)，Panelli等人,JImmunol(2000)；164:495-504；Panelli等人,J Immunol(2000)；164:4382-4392(公开了源自肿瘤活检中的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的淋巴细胞培养物)，以及Dupont等人,CancerRes(2005)；65:5417-5427；Papanicolaou等人,Blood(2003)；102:2498-2505(公开了使用人工抗原呈递细胞(AAPC)或脉冲树突状细胞选择性体外扩增的抗原特异性外周血白细胞)中公开的那些。
细胞(例如，T细胞)可以是自体的、非自体的(例如，同种异体的)或从工程化的祖细胞或干细胞体外衍生。
当前公开的主题的细胞可以是髓系细胞。髓系细胞的非限制性实例包含单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨核细胞、肥大细胞、红细胞、血小板和髓系细胞可以从其分化的干细胞。在某些实施例中，干细胞是多能干细胞(例如，胚胎干细胞或诱导多能干细胞)。
在某些实施例中，当前公开的细胞能够调节肿瘤微环境。肿瘤具有不利于宿主免疫应答的微环境，微环境涉及恶性细胞保护自身免于免疫识别和消除的一系列机制。这种“不利的肿瘤微环境”包括多种免疫抑制因子，包含浸润性调节性CD4+T细胞(Treg)、骨髓源性抑制细胞(MDSC)、肿瘤相关巨噬细胞(TAM)、免疫抑制性细胞因子(包含TGF-β)和靶向由激活的T细胞表达的免疫抑制性受体的配体表达(CTLA-4和PD-1)。这些免疫抑制机制在维持耐受性和抑制不适当的免疫应答中发挥作用，然而在肿瘤微环境中，这些机制阻止了有效的抗肿瘤免疫应答。总的来说，这些免疫抑制因子在遇到靶向肿瘤细胞时，可以诱导适应性转移的CAR修饰的T细胞的显著无反应性或凋亡。
在某些实施例中，细胞可以用当前公开的靶向DLL3的抗原识别受体转导，使得细胞表达抗原识别受体。
在某些实施例中，当前公开的细胞进一步包含结合具有免疫抑制活性或免疫刺激活性的多肽的可溶性单链可变片段(scFv)。在某些实施例中，免疫抑制活性是指细胞(例如，激活的免疫应答细胞)中信号转导的诱导或蛋白质表达的变化，从而引起免疫应答的降低。已知经由其结合抑制或降低免疫应答的多肽包括CD47、PD-1、CTLA-4和它们相应的配体，包括SIRPα、PD-L1、PD-L2、B7-1和B7-2。此类多肽存在于肿瘤微环境中并抑制对肿瘤细胞的免疫应答。在各种实施例中，抑制、阻断或拮抗免疫抑制多肽和/或其配体的相互作用增强免疫应答细胞的免疫应答。
在某些实施例中，免疫刺激活性是指细胞(例如，激活的免疫应答细胞)中信号转导的诱导或蛋白质表达的变化，从而引起免疫应答的增加。免疫刺激活性可以包括促炎活性。已知经由其结合刺激或增强免疫应答的多肽包括CD28、OX-40、4-IBB和它们相应的配体，包括B7-1、B7-2、OX-40L和4-1BBL。此类多肽存在于肿瘤微环境中并激活对肿瘤细胞的免疫应答。在各种实施例中，促进、刺激或激动促炎性多肽和/或其配体增强免疫应答细胞的免疫应答。
包含CAR和结合具有免疫抑制活性或免疫刺激活性的多肽的可溶性scFv的细胞公开于国际专利公开号WO 2014/134165中，该国际专利公开通过引用以其整体并入。
在某些实施例中，当前公开的细胞进一步包含外源CD40L。包含CAR和外源CD40L的细胞公开于国际专利公开号WO 2014/134165中。
此外，在某些实施例中，当前公开的细胞被工程化以表达IL-18。在某些实施例中，当前公开的细胞进一步包含外源IL-18多肽或其片段。在某些实施例中，当前公开的细胞进一步包含在IL-18基因座处的修饰的启动子/增强子，其可以增加IL-18基因表达，例如，放置组成型或诱导型启动子以驱动IL-18基因表达。包含嵌合受体并被工程化以表达IL-18的细胞(例如，包含外源IL-18多肽或其片段或在IL-18基因座处的修饰的启动子/增强子的细胞)公开于国际专利公开号WO2018/027155中，该国际专利公开通过引用以其整体并入。
另外或可替代地，当前公开的细胞被工程化以表达IL-33。在某些实施例中，当前公开的细胞进一步包含外源IL-33多肽或其片段。在某些实施例中，当前公开的细胞进一步包含在IL-33基因座处的修饰的启动子/增强子，其可以增加IL-33基因表达，例如，被放置以驱动IL-33基因表达的组成型或诱导型启动子。包含嵌合受体并被工程化以表达IL-33的细胞(例如，包含外源IL-33多肽或其片段或在IL-33基因座处的修饰的启动子/增强子的细胞)公开于国际专利公开号WO2019/099479中，该国际专利公开通过引用以其整体并入。
另外或可替代地，当前公开的细胞被工程化以表达IL-36。在某些实施例中，当前公开的细胞进一步包含外源IL-36多肽或其片段。在某些实施例中，当前公开的细胞进一步包含在IL-36基因座处的修饰的启动子/增强子，其可以增加IL-36基因表达，例如，被放置以驱动IL-36基因表达的组成型或诱导型启动子。包含嵌合受体并被工程化以表达IL-36的细胞(例如，包含外源IL-36多肽或其片段或在IL-36基因座处的修饰的启动子/增强子的细胞)公开于国际专利公开号WO2019/099483中，该国际专利公开通过引用以其整体并入。
5.4.1.示例性细胞
在某些实施例中，细胞包含抗原识别受体。在某些实施例中，抗原识别受体是CAR。在某些实施例中，CAR是靶向DLL3的CAR。在某些实施例中，CAR包含(a)胞外抗原结合结构域，其包含(i)VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列，以及(ii)VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；(b)包含CD28多肽的跨膜结构域(例如，人CD28的跨膜结构域或其片段)，以及(c)胞内信号传导结构域，其包含(i)CD3ζ多肽，以及(ii)包含CD28多肽的共刺激信号传导区(例如，人CD28的胞内结构域或其片段)。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD28多肽，其包含以下项的氨基酸153至179：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含(i)CD3ζ多肽，其包含SEQ ID NO:221中所示的氨基酸序列，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含以下项的氨基酸180至220：SEQ ID NO:218。
在某些实施例中，细胞包含抗原识别受体。在某些实施例中，抗原识别受体是CAR。在某些实施例中，CAR是靶向DLL3的CAR。在某些实施例中，CAR包含(a)胞外抗原结合结构域，其包含(i)VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列，以及(ii)VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；(b)包含CD28多肽的跨膜结构域(例如，人CD28的跨膜结构域或其片段)，以及(c)胞内信号传导结构域，其包含(i)CD3ζ多肽，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含突变的YMNM基序，该突变的YMNM基序由YSNV(SEQ ID NO:228)中所示的氨基酸序列组成。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD28多肽，其包含以下项的氨基酸153至179：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含(i)CD3ζ多肽，其包含SEQ ID NO:221中所示的氨基酸序列，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该包CD28多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:279。
在某些实施例中，细胞包含抗原识别受体和外源IL-18多肽。在某些实施例中，抗原识别受体是CAR。在某些实施例中，CAR是靶向DLL3的CAR。在某些实施例中，CAR包含(a)胞外抗原结合结构域，其包含(i)VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ IDNO:3中所示的氨基酸序列，以及(ii)VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQID NO:6中所示的氨基酸序列；(b)包含CD28多肽的跨膜结构域(例如，人CD28的跨膜结构域或其片段)，以及(c)胞内信号传导结构域，其包含(i)CD3ζ多肽，以及(ii)包含CD28多肽的共刺激信号传导区(例如，人CD28的胞内结构域或其片段)。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD28多肽，其包含以下项的氨基酸153至179：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含(i)CD3ζ多肽，其包含SEQ ID NO:221中所示的氨基酸序列，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含以下项的氨基酸180至220：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，外源IL-18多肽是人IL-18多肽。
在某些实施例中，细胞包含抗原识别受体和外源IL-18多肽。在某些实施例中，抗原识别受体是CAR。在某些实施例中，CAR是靶向DLL3的CAR。在某些实施例中，CAR包含(a)胞外抗原结合结构域，其包含(i)VH，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQ IDNO:3中所示的氨基酸序列，以及(ii)VL，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，该CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，该CDR3包含SEQID NO:6中所示的氨基酸序列；(b)包含CD28多肽的跨膜结构域(例如，人CD28的跨膜结构域或其片段)，以及(c)胞内信号传导结构域，其包含(i)CD3ζ多肽，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含突变的YMNM基序，该突变的YMNM基序由YSNV(SEQ IDNO:228)中所示的氨基酸序列组成。在某些实施例中，跨膜结构域包含CD28多肽，其包含以下项的氨基酸153至179：SEQ ID NO:218。在某些实施例中，胞内信号传导结构域包含(i)CD3ζ多肽，其包含SEQ ID NO:221中所示的氨基酸序列，以及(ii)共刺激信号传导区，其包含CD28多肽，该CD28多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:279。在某些实施例中，外源IL-18多肽是人IL-18多肽。
5.5.核酸组合物和载体
当前公开的主题提供了一种核酸，其编码当前公开的靶向DLL3的抗原识别受体(例如，第4.3节中公开的抗原识别受体)。进一步提供了包括本文公开的核酸的核酸组合物。还提供了包含此类核酸组合物的细胞。
在某些实施例中，核酸组合物进一步包含与当前公开的靶向DLL3的抗原识别受体可操作地连接的启动子。
在某些实施例中，启动子是内源性或外源性的。在某些实施例中，外源性启动子选自延伸因子(EF)-1启动子、巨细胞病毒立即早期启动子(CMV)启动子、猿猴病毒40早期启动子(SV40)启动子、磷酸甘油酸激酶(PGK)启动子和金属硫蛋白启动子。在某些实施例中，启动子是诱导型启动子。在某些实施例中，诱导型启动子选自NFAT转录应答元件(TRE)启动子、CD69启动子、CD25启动子和IL-2启动子。
组合物和核酸组合物可以通过本领域已知的方法或如本文所描述施用于受试者或/和递送到细胞中。细胞(例如，T细胞或NK细胞)的基因修饰可以通过用重组DNA构建体转导基本上同质的细胞组合物来完成。在某些实施例中，逆转录病毒载体(例如，γ逆转录病毒载体或慢病毒载体)用于将DNA构建体引入到细胞中。例如，可以将编码抗原识别受体的多核苷酸克隆到逆转录病毒载体中，并且可以由其内源性启动子、逆转录病毒长末端重复序列或对所关注靶细胞类型具有特异性的启动子驱动表达。也可以使用非病毒载体。
为了对细胞进行初始基因修饰以包括当前公开的靶向DLL3的抗原识别受体(例如，CAR)，可以采用逆转录病毒载体进行转导，然而可以使用任何其它合适的病毒载体或非病毒递送***。抗原识别受体可以构建在单个多顺反子表达盒、单个载体的多个表达盒或多个载体中。产生多顺反子表达盒的元件的实例包含但不限于各种病毒和非病毒内部核糖体进入位点(IRES，例如FGF-1IRES、FGF-2IRES、VEGF IRES、IGF-II IRES、NF-κB IRES、RUNX1 IRES、p53 IRES、甲型肝炎IRES、丙型肝炎IRES、瘟病病毒IRES、口疮病毒IRES、小核糖核酸病毒IRES、脊髓灰质炎病毒IRES和脑心肌炎病毒IRES)和可切割接头(例如，2A肽，例如P2A肽、T2A肽、E2A肽和F2A肽)。逆转录病毒载体和适当的包装系的组合也是合适的，其中衣壳蛋白将具有感染人体细胞的功能。已知多种产生兼嗜性病毒的细胞系，包含但不限于PA12(Miller等人,(1985)Mol Cell Biol(1985)；5:431-437)；PA317(Miller等人,MolCell Biol(1986)；6:2895-2902)；以及CRIP(Danos等人,Proc Natl Acad Sci USA(1988)；85:6460-6464)。非兼嗜性颗粒也是合适的，例如，用VSVG、RD114或GALV包膜和任何其它本领域已知的颗粒假型。
可能的转导方法还包括细胞与生产细胞的直接共培养(Bregni等人,Blood(1992)；80:1418-1422)，或者与单独的病毒上清液或者含有或不含适当的生长因子和聚阳离子的浓缩载体原液一起培养(Xu等人,Exp Hemat(1994)；22:223-230；和Hughes等人JClin Invest(1992)；89:1817)。
其它转导病毒载体可以用于修饰细胞。在某些实施例中，选择的载体表现出高效的感染以及稳定的整合和表达(参见例如，Cayouette等人,Human Gene Therapy 8:423-430,1997；Kido等人,Current Eye Research 15:833-844,1996；Bloomer等人,Journal ofVirology71:6641-6649,1997；Naldini等人,Science 272:263-267,1996；和Miyoshi等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94:10319,1997)。可以使用的其它病毒载体包含例如腺病毒、慢病毒和腺嘌呤相关病毒载体、痘苗病毒、牛***瘤病毒或疱疹病毒，如爱泼斯坦-巴尔病毒(还参见例如，以下中的载体：Miller,Human Gene Thera(1990)；15-14；Friedman,Science244:1275-1281,1989；Eglitis等人,BioTechniques(1988)；6:608-614；Tolstoshev等人,Cur Opin Biotechnol(1990)；1:55-61；Sharp,The Lancet(1991)；337:1277-78；Cornetta等人,Nucleic Acid Research and Molecular Biology 36:311-22,1987；Anderson,Science(1984)；226:401-409；Moen,Blood Cells 17:407-16,1991；Miller等人,Biotechnol(1989)；7:980-90；LeGal La Salle等人,Science(1993)；259:988-90；以及Johnson,Chest(1995)107:77S-83S)。逆转录病毒载体特别成熟并已用于临床环境中(Rosenberg等人,N Engl J Med(1990)；323:370,1990；Anderson等人，美国专利号5,399,346)。
非病毒方法也可以用于细胞的基因修饰。例如，可以通过在存在脂转染的情况下施用核酸(Feigner等人,Proc Natl Acad Sci U.S.A.(1987)；84:7413；Ono等人,NeurosciLett(1990)；17:259；Brigham等人,Am J Med Sci(1989)；298:278；Staubinger等人,Methods in Enzymol(1983)；101:512，Wu等人,J Biol Chem(1988)；263:14621；Wu等人,JBiol Chem(1989)；264:16985)，或者通过在手术条件下的微注射(Wolff等人,Science(1990)；247:1465)来将核酸分子引入细胞中。其它用于基因转移的非病毒手段包含使用磷酸钙、DEAE葡聚糖、电穿孔和原生质体融合进行体外转染。脂质体对于将DNA递送到细胞中而言也可能具有潜在的益处。将正常基因移植到受试者的受影响组织中也可以通过将正常核酸离体转移到可培养的细胞类型(例如，自体或异源原代细胞或其子代)中、之后将细胞(或其后代)注射到靶向组织中或全身性注射来完成。重组受体也可以使用转座酶或靶向核酸酶(例如，锌指核酸酶、大范围核酸酶或TALE核酸酶、CRISPR)衍生或获得。瞬时表达可以通过RNA电穿孔获得。
任何靶向基因组编辑方法也可以用于将当前公开的抗原识别受体递送到细胞或受试者。在某些实施例中，CRISPR***用于递送本文公开的当前公开的抗原识别受体。在某些实施例中，锌指核酸酶用于递送抗原识别受体。在某些实施例中，TALEN***用于递送当前公开的抗原识别受体。
成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)***是在原核细胞中发现的基因组编辑工具。当用于基因组编辑时，所述***包含Cas9(一种能够利用crRNA作为其向导来修饰DNA的蛋白质)、CRISPR RNA(crRNA，含有Cas9使用的RNA，以引导其到达宿主DNA的正确区段，以及与tracrRNA(通常呈发夹环形式)结合的区，从而与Cas9形成活性复合物)、反式激活crRNA(tracrRNA，与crRNA结合并且与Cas9形成活性复合物)和DNA修复模板的任选区段(引导细胞修复过程的DNA，允许***特定的DNA序列)。CRISPR/Cas9通常采用质粒来转染靶细胞。crRNA需要针对每个应用进行设计，因为这是Cas9用来鉴定并直接与细胞中靶DNA结合的序列。携带CAR表达盒的修复模板也需要针对每个应用而设计，因为它必须与切割的任一侧上的序列重叠，并且编码***序列。多个crRNA和tracrRNA可以包装在一起形成单向导RNA(sgRNA)。此sgRNA可以与Cas9基因接合在一起，并且制成质粒，以便转染到细胞中。
锌指核酸酶(ZFN)是一种人工限制酶，其是通过将锌指DNA结合结构域与DNA切割结构域组合而产生的。锌指结构域可以被工程化以靶向特定DNA序列，这允许锌指核酸酶靶向基因组内的期望序列。单独的ZFN的DNA结合结构域通常含有多个单独的锌指重复序列，并且每个都可以识别多个碱基对。用于产生新的锌指结构域的最常见方法应组合具有已知特异性的较小锌指“模块”。ZFN中最常见的切割结构域是来自IIs型限制性核酸内切酶FokI的非特异性切割结构域。使用内源性同源重组(HR)机制和携带CAR表达盒的同源DNA模板，ZFN可用于将CAR表达盒***到基因组中。当靶向序列被ZFN切割时，HR机制搜索受损染色体与同源DNA模板之间的同源性，并且然后在染色体的两个断裂端之间复制模板的序列，由此同源DNA模板被整合到基因组中。
转录激活因子样效应子核酸酶(TALEN)是限制性酶，其可以被工程化以切割特定的DNA序列。TALEN***的操作原理与ZFN几乎相同。它们是通过将转录激活因子样效应子DNA结合结构域与DNA切割结构域组合而产生的。转录激活因子样效应物(TALE)由33-34个氨基酸重复基序构成，具有两个可变位置，对特定核苷酸具有强识别能力。通过组装这些TALE阵列，可以工程化TALE DNA结合结构域来结合所需的DNA序列，并由此引导核酸酶在基因组中的特定位置进行切割。用于多核苷酸治疗方法的cDNA表达可以由任何合适的启动子(例如，人巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)或金属硫蛋白启动子)引导，并由任何合适的哺乳动物调节元件或内含子(例如，延伸因子1a增强子/启动子/内含子结构)调节。例如，如果期望的话，已知优先在特定细胞类型中引导基因表达的增强子可以用于引导核酸的表达。所使用的增强子可以包含但不限于被表征为组织或细胞特异性增强子的增强子。可替代地，如果将基因组克隆用作治疗性构建体，则可以通过同源调节序列或(如果期望的话)通过源自包含上文所描述的任何启动子或调节元件的异源来源的调节序列来介导调节。
5.5.1.递送方法
用于递送基因组编辑剂/***的方法可以根据需要而变化。在某些实施例中，所选基因组编辑方法的组分作为一个或多个质粒中的DNA构建体被递送。在某些实施例中，这些组分通过病毒载体递送。常见的递送方法包含但不限于电穿孔、显微注射、基因枪、穿刺、流体静压、连续输注、超声处理、磁感染、腺相关病毒、病毒载体的包膜蛋白假型、复制型载体顺式和反式作用元件、单纯疱疹病毒和化学媒剂(例如，寡核苷酸、脂质体复合物(lipoplex)、聚合物囊泡、聚复合物、树枝状聚合物、无机纳米颗粒和细胞穿透肽)。
在某些实施例中，递送方法包括使用胶体。如本文所使用的，术语“胶体”是指其中存在两个或更多个相的***，其中一个相(例如，分散相)分布在另一相(例如，连续相)中。此外，该相中的至少一者具有小尺寸(在约10-9至约10-6m的范围内)。当前公开的主题涵盖的胶体的非限制性实例包括大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠子和基于脂质的***(例如，胶束、脂质体和脂质纳米颗粒)。
在某些实施例中，递送方法包括使用脂质体。如本文所使用的，术语“脂质体”是指由溶解在有机溶剂中并且然后分散在水性介质中的脂质产生的单层或多层球形脂质双层结构。在实验和治疗上用于将活性药物成分(例如，本文公开的核酸组合物)递送至细胞，脂质体与细胞膜融合，因此内容物被转移到细胞质中。
在某些实施例中，递送方法包括使用脂质纳米颗粒。如本文所使用的，术语“脂质纳米颗粒”是指具有至少一个纳米级(例如，约1nm至约1,000nm)尺寸并包括至少一种脂质的颗粒。在某些实施例中，脂质纳米颗粒可以包括用于递送至细胞的活性药物成分(例如，本文公开的核酸组合物)。脂质纳米颗粒的形态可以不同于脂质体。虽然脂质体的特征在于围绕亲水性核心的脂质双层，但脂质纳米颗粒具有电子致密核心，其中阳离子脂质和/或可电离脂质被组织成围绕活性药物成分(例如，本文公开的核酸组合物)的反胶束。有关脂质纳米颗粒和脂质体的形态和性质的其他信息可以见于Wilczewska等人,Pharmacologicalreports 64,第5期(2012):1020-1037；Eygeris等人,Accounts of Chemical Research55,第1期(2021):2-12；Zhang等人,Chemical Reviews 121,第20期(2021):12181-12277；和Fan等人,Journal of pharmaceutical and biomedical analysis 192(2021):113642。
在某些实施例中，脂质纳米颗粒的平均直径为约30nm至约150nm、约40nm至约150nm、约50nm至约150nm、约60nm至约130nm、约70nm至约110nm、约70nm至约100nm、约80nm至约100nm、约90nm至约100nm、约70至约90nm、约80nm至约90nm、约70nm至约80nm，或者约30nm、35nm、40nm、45nm、50nm、55nm、60nm、65nm、70nm、75nm、80nm、85nm、90nm、95nm、100nm、105nm、110nm、115nm、120nm、125nm、130nm、135nm、140nm、145nm或150nm。
在某些实施例中，脂质纳米颗粒可以包括阳离子脂质或可电离脂质。术语“阳离子脂质”是指包括带有永久正电荷的头部基团的脂质。当前公开的主题涵盖的阳离子脂质的非限制性实例包括1,2-二-O-十八碳烯基-3-三甲基铵-丙烷(DOTMA)、1,2-二油酰基-3-三甲基铵-丙烷(DOTAP)、2,3-二油酰氧基-N-[2-(精胺甲酰胺基)乙基]-N,N-二甲基-1-丙铵三氟乙酸盐(DOSPA)和乙基磷脂酰胆碱(ePC)。
如本文所使用的，术语“可电离脂质”是指在低pH下质子化并且在生理pH下呈中性的脂质。可电离脂质的pH敏感性特别有利于体内递送(例如，本文公开的核酸组合物的递送)，因为中性脂质与血细胞的阴离子膜的相互作用较少，并且因此改善了脂质纳米颗粒的生物相容性。一旦被捕获在内体中，可电离的脂质就会被质子化并促进膜不稳定，从而使纳米颗粒逸出内体。当前公开的主题涵盖的可电离脂质的非限制性实例包括四(8-甲基壬基)3,3',3”,3”'-(((甲基氮烷二基)双(丙烷-3,1二基))双(氮烷三基))四丙酸酯；癸基(2-(二辛基铵基)乙基)磷酸酯；((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)；双(2-(十二烷基二硫烷基)乙基)3,3'-((3-甲基-9-氧代-10-氧杂-13,14-二硫杂-3,6-二氮杂二十六烷基)氮烷二基)二丙酸酯；1,1'-((2-(4-(2-((2-(双(2-羟基十二烷基)氨基)乙基)(2-羟基十二烷基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)乙基)氮杂二基)双(十二烷-2-醇)；cKK-E12，3,6-双(4-(双(2-羟基十二烷基)氨基)丁基)哌嗪-2,5-二酮；(6Z,9Z,28Z,31Z)-三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基4-(二甲基氨基)丁酸酯；六(辛-3-基)9,9',9”,9”',9””,9””'-((((苯-1,3,5-三羰基)三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基))三(氮杂三基))六壬酸酯；十七烷-9-基8-((2-羟基乙基)(6-氧代-6-(十一烷基氧基)己基)氨基)辛酸酯；和(((3,6-二氧代哌嗪-2,5-二基)双(丁烷-4,1-二基))双(氮杂三基))四(乙烷-2,1-二基)(9Z,9'Z,9”Z,9”'Z,12Z,12'Z,12”Z,12”'Z)-四(十八碳-9,12-二烯酸酯)。
另外，在某些实施例中，脂质纳米颗粒可以包括其他脂质。例如但不限于，当前公开的主题的脂质纳米颗粒可以包括磷脂、胆固醇、聚乙二醇(PEG)官能化脂质(PEG-脂质)。这些脂质可以改善脂质纳米颗粒的某些特性(例如，稳定性、生物分布等)。例如，胆固醇通过调节完整性和刚性来增强脂质纳米颗粒的稳定性。脂质纳米颗粒中存在的其他脂质的非限制性实例包括胆固醇、DC-胆固醇、β-谷甾醇、BHEM-胆固醇、ALC-0159、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰-磷脂酰乙醇胺(POPE)和二油酰-磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-甲酸酯(DOPE-mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、16-O-单甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、1-硬脂酰-2-油酰-磷脂酰乙醇胺(SOPE)和l,2-二反油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(反式DOPE)。
在某些实施例中，脂质纳米颗粒可以包括与配体结合的靶向部分。靶向部分的使用允许将活性药物成分(例如，本文公开的核酸组合物)选择性递送至表达配体的靶细胞(例如，T细胞)。在某些实施例中，靶向部分可以是与细胞表面受体结合的抗体或其抗原结合片段。例如但不限于，靶向结构域是与T细胞表面上表达的受体(例如，CD3、CD4、CD8、CD16、CD40L、CD95、FasL、CTLA-4、OX40、GITR、LAG3、ICOS和PD-1)结合的抗体或其抗原结合片段。
在某些实施例中，递送方法是体内递送方法。在某些实施例中，递送方法是离体递送方法。
5.6.多肽
当前公开的主题提供了用于通过在序列中产生改变来优化氨基酸序列或核酸序列的方法。此类改变可以包含某些突变、缺失、***或翻译后修饰。当前公开的主题进一步包括本文公开的任何天然存在的多肽的类似物(包括但不限于DLL3、CD8、CD28、4-1BB和CD3ζ)。类似物可以通过氨基酸序列差异、翻译后修饰或两者与本文公开的天然存在的多肽不同。类似物可以表现出与当前公开的主题的天然存在的氨基酸序列的全部或部分至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更多同源或相同。序列比较的长度为至少5个、10个、15个或20个氨基酸残基，例如至少25个、50个或75个氨基酸残基，或超过100个氨基酸残基。同样，在确定同一性程度的示例性方法中，可以使用BLAST程序，其中e-3与e-100之间的概率得分表示密切相关的序列。修饰包含多肽的体内和体外化学衍生，例如乙酰化、羧基化、磷酸化或糖基化；此类修饰可以在多肽合成或加工期间发生，或者在用分离的修饰酶处理后发生。类似物也可以通过一级序列的改变而不同于天然存在的多肽。这些包括天然的和诱导的基因变体(例如，由照射或暴露于甲基磺酸乙酯的随机诱变或定点诱变产生，如Sambrook,Fritsch和Maniatis,MolecularCloning:A Laboratory Manual(第2版),CSH Press,1989或Ausubel等人，同上所述)。还包含含有除L-氨基酸以外的残基，例如D-氨基酸或非天然存在或合成的氨基酸，例如β或γ氨基酸的环化肽、分子和类似物。
除了全长多肽，当前公开的主题还提供了本文公开的多肽中的任何多肽的片段。如本文所使用的，术语“片段”意指至少5个、10个、13个或15个氨基酸。在某些实施例中，片段包括至少20个连续氨基酸、至少30个连续氨基酸或至少50个连续氨基酸。在某些实施例中，片段包括至少60个至80个、100个、200个、300个或更多个连续氨基酸。片段可以通过本领域技术人员已知的方法产生或者可以由正常的蛋白质加工产生(例如，将生物活性不需要的氨基酸从新生多肽去除或者将氨基酸通过替代性mRNA剪接或替代性蛋白质加工事件去除)。
5.7.调配物和施用
当前公开的主题提供了组合物，所述组合物包括当前公开的细胞。在某些实施例中，所述组合物是进一步包括药学上可接受的载剂的药物组合物。包括当前公开的细胞的组合物可以方便地以无菌液体制剂的形式提供，所述无菌液体制剂例如等渗水溶液、悬浮液、乳液、分散体或粘性组合物，其可以被缓冲至选定的pH。液体制剂通常比凝胶、其它粘性组合物和固体组合物更容易制备。另外地，施用液体组合物(尤其通过注射)稍微更加方便。另一方面，粘性组合物可以被调配在适当的粘度范围内以提供与特定组织的较长接触时间段。液体或粘性组合物可以包括载体，所述载体可以是含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)和其适合的混合物的溶剂或分散介质。
无菌可注射溶液可以通过将基因修饰的细胞按照期望并入所需量的适当的溶剂和各种量的其它成分来制备。此类组合物可以与适合的载剂、稀释剂或赋形剂(如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等)混合。所述组合物也可以被冻干。取决于施用途径和期望的制剂，组合物可以含有辅助物质，如润湿剂、分散剂或乳化剂(例如，甲基纤维素)、pH缓冲剂、胶凝或粘度增强添加剂、防腐剂、调味剂、着色剂等。可以查询标准文本(如通过引用并入本文中的“REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCE”,第17版,1985)以在不用进行过度实验的情况下制备适合的制剂。
可以添加增强组合物的稳定性和无菌性的各种添加剂，包含抗微生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂。可以通过各种抗细菌剂以及抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等来确保防止微生物的作用。可以通过使用延迟吸收的药剂(例如，单硬脂酸铝(aluminum monostearate)和明胶)来实现可注射药物形式的延长的吸收。然而，根据当前公开的主题，所使用的任何媒剂、稀释剂或添加剂必须与基因修饰的细胞相容。
组合物可以是等渗的，即，其可以具有与血液和泪液相同的渗透压。组合物的期望的等渗性可以使用氯化钠或其它药学上可接受的药剂(如右旋糖、硼酸、酒石酸钠、丙二醇或其它无机或有机溶质)来实现。氯化钠对于含有钠离子的缓冲液可能是特别合适的。
如果期望的话，组合物的粘度可以使用药学上可接受的增稠剂维持在所选择水平处。例如，甲基纤维素易于获得且经济适用并且容易起作用。其它合适的增稠剂包含例如黄原胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆(carbomer)等。增稠剂的浓度可以取决于所选择药剂。重要的点是使用将会实现所选择粘度的量。明显地，适合的载体和其它添加剂的选择将取决于具体施用途径和具体剂型(例如，液体剂型)的性质(例如，组合物是否被调配成溶液、悬浮液、凝胶或另一种液体形式，如时间释放形式或液体填充形式)。
包括当前公开的细胞的组合物可以全身性或直接提供给受试者，用于治疗或改善疾病或疾患。在某些实施例中，将当前公开的细胞或包括其的组合物直接注射到所关注的器官(例如，受瘤形成影响的器官)中。可替代地，当前公开的细胞或包括其的组合物间接地提供给所关注器官，例如，通过施用到循环***(例如，肿瘤脉管***)中。可以在施用细胞或组合物之前、期间或之后提供扩增剂和分化剂以增加细胞(例如，T细胞或NK细胞)的体外或体内产生。
当前公开的细胞可以以任何生理学上可接受的媒剂(通常血管内)施用，尽管其也可以被引入骨骼或细胞可以找到用于进行再生和分化的适当部位的其它方便部位(例如，胸腺)中。
要施用细胞的数量可以针对所治疗的受试者而变化。在某些实施例中，向受试者施用约104与约1010之间、约104与约107之间、约105与约107之间、约105与约109之间或约106与约108之间个当前公开的细胞。更有效的细胞可以以甚至更小的数量施用。通常，将施用至少约l×l05个细胞，最终达到约l×l010或更多。在某些实施例中，向受试者施用至少约1×105个、5×105个、1×106个、约5×106、约1×107、约5×107、约1×108个或约5×108个当前公开的细胞。在某些实施例中，向受试者施用约1×106个当前公开的细胞。对将被视为有效剂量的剂量的精确测定可以基于每个受试者的个体因素，包含其大小、年龄、性别、体重和特定受试者的病状。本领域技术人员从本公开和本领域知识中可以容易地测定剂量。
当前公开的细胞可以包括经纯化的细胞群体。本领域技术人员可以使用各种熟知的方法(如荧光活化细胞分选(FACS))容易地测定群体中的当前公开的细胞的百分比。在包括当前公开的免疫应答细胞的群体中，合适的纯度范围为约50％至约55％，约5％至约60％，和约65％至约70％。在某些实施例中，纯度为约70％至约75％、约75％至约80％或约80％至约85％。在某些实施例中，纯度为约85％至约90％、约90％至约95％和约95％至约100％。剂量可以由本领域技术人员容易地调整(例如，纯度降低可能需要增加剂量)。细胞可以通过注射、导管等引入。
本领域技术人员可以容易地测定组合物中细胞和任选的添加剂、媒剂和/或载剂的量，并且在方法中施用。通常，任何添加剂(除活性细胞和/或药剂外)以约0.001％至约50％(重量)的量存在于磷酸盐缓冲盐水溶液中，并且活性成分是以微克至毫克的量级存在，如约0.0001至约5wt％、约0.0001至约1wt％、约0.0001至约0.05wt％、或约0.001至约20wt％、约0.01至约10wt％或约0.05至约5wt％。对于要施用于动物或人的任何组合物，可以确定以下各项：毒性，如通过确定适合的动物模型(例如，啮齿动物，如小鼠)中的致死剂量(LD)和LD50；组合物的剂量、其中组分的浓度和施用引发合适的应答的组合物的时序。根据本领域技术人员的知识、本公开和本文引用的文件，此类确定不需要过度的实验，并且无需过度的实验就可以确定顺序施用的时间。
在某些实施例中，所述组合物是包括当前公开的细胞和药学上可接受的载剂的药物组合物。
组合物的施用可以是自体的或异源的。例如，细胞可从一个受试者获得，并且施用于相同受试者或不同的相容受试者。可以施用外周血源性细胞或其子代(例如，体内、离体或体外源性)。当施用当前公开的组合物(例如，包括当前公开的细胞的药物组合物)时，所述组合物可以被调配成单位剂量可注射形式(溶液、悬浮液、乳液)。
当前公开的细胞和组合物可以通过本领域已知的任何方法施用，包含但不限于口服施用、静脉内施用、皮下施用、结内施用、瘤内施用、鞘内施用、玻璃体内施用、胸膜内施用、骨内施用、腹膜内施用、胸膜施用和向受试者的直接施用。
另外或可替代地，当前公开的主题还提供了包含脂质纳米颗粒(例如，第5.5.1节中描述的)的组合物，其包括本文公开的核酸或核酸组合物。包含当前公开的脂质纳米颗粒的组合物可以方便地以无菌和/或无热原的形式提供。可以制备组合物以满足美国药典(USP)、欧洲药典(EP)、英国药典和/或国际药典的标准。
包括当前公开的脂质纳米颗粒的组合物可以包括药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂的非限制性实例包括惰性稀释剂、分散剂、造粒剂、表面活性剂、乳化剂、崩解剂、粘合剂、防腐剂、缓冲剂、润滑剂和/或油。此外，赋形剂诸如可可脂和栓剂蜡、着色剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和/或芳香剂可以存在于组合物中。
在某些实施例中，包括当前公开的脂质纳米颗粒的组合物可以制备为可注射制剂。这些可注射制剂可以包括药学上可接受的媒介物和溶剂，包括但不限于水、林格氏溶液、U.S.P.、等渗氯化钠溶液和/或油(例如，油酸)。在某些实施例中，包含当前公开的脂质纳米颗粒的可注射制剂可以包括水溶性差的结晶或无定形材料的液体悬浮液。使用这些水溶性差的材料允许减缓皮下或肌内注射的吸收。可替代地或另外，包括当前公开的脂质纳米颗粒的组合物可以制备用于直肠或***施用、口服施用、局部和/或经皮施用、皮内施用、肺部施用、鼻部施用、颊施用或眼部施用。关于配制和制备包括当前公开的脂质纳米颗粒的药物组合物的各种方式的附加信息可以见于Remington:The Science and Practice ofPharmacy,第22版,A.R.Gennaro,Lippincott,Williams&Wilkins,Baltimore,Md.,2012。
在某些实施例中，包括当前公开的脂质纳米颗粒的组合物可以配制用于控释或缓释。如本文所使用的，术语“控释”是指遵守特定释放模式以实现治疗结果的药物组合物或化合物释放曲线。如本文所使用的，术语“缓释”是指遵守在特定时间段内的释放速率的药物组合物或化合物。该时间段可以包括但不限于小时、天、周、月和年。
包括当前公开的脂质纳米颗粒的组合物可以全身地或直接地提供给受试者以用于诱导和/或增强针对抗原的免疫应答，以及/或者治疗和/或预防肿瘤，例如与MUC16相关的肿瘤。在某些实施例中，当前公开的脂质纳米颗粒或包含其的组合物在体内提供给免疫应答细胞。在某些实施例中，将当前公开的脂质纳米颗粒或包含其的组合物直接注射到所关注的器官(例如，受瘤形成影响的器官)中。可替代地，当前公开的脂质纳米颗粒或包含其的组合物间接地提供给所关注的器官，例如，通过施用到循环***(例如，肿瘤血管)中。在某些实施例中，当前公开的脂质纳米颗粒或包含其的组合物离体提供给免疫应答细胞。可以在施用脂质纳米颗粒或组合物之前、期间或之后提供扩增剂和分化剂以增加细胞(例如，T细胞或NK细胞)的离体或体内产生。
当前公开的脂质纳米颗粒可以以任何生理学上可接受的媒介物(通常血管内)施用，尽管其也可以被引入骨骼或细胞可以找到用于进行再生和分化的适当部位的其它方便部位(例如，胸腺)中。
要施用细胞的数量可以针对所治疗的受试者而变化。在某些实施例中，将约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.005mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.05mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约2mg/kg至约10mg/kg、约5mg/kg至约10mg/kg、约0.0001mg/kg至约5mg/kg、约0.001mg/kg至约5mg/kg、约0.005mg/kg至约5mg/kg、约0.01mg/kg至约5mg/kg、约0.05mg/kg至约5mg/kg、约0.1mg/kg至约5mg/kg、约1mg/kg至约5mg/kg、约2mg/kg至约5mg/kg、约0.0001mg/kg至约2.5mg/kg、约0.001mg/kg至约2.5mg/kg、约0.005mg/kg至约2.5mg/kg、约0.01mg/kg至约2.5mg/kg、约0.05mg/kg至约2.5mg/kg、约0.1mg/kg至约2.5mg/kg、约1mg/kg至约2.5mg/kg、约2mg/kg至约2.5mg/kg、约0.0001mg/kg至约1mg/kg、约0.001mg/kg至约1mg/kg、约0.005mg/kg至约1mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg、约0.05mg/kg至约1mg/kg、约0.1mg/kg至约1mg/kg、约0.0001mg/kg至约0.25mg/kg、约0.001mg/kg至约0.25mg/kg、约0.005mg/kg至约0.25mg/kg、约0.01mg/kg至约0.25mg/kg、约0.05mg/kg至约0.25mg/kg或约0.1mg/kg至约0.25mg/kg的当前公开的脂质纳米颗粒施用于受试者。在某些实施例中，将约0.005mg/kg至约2.5mg/kg、约0.1mg/kg至约1mg/kg或约0.05mg/kg至约1mg/kg的当前公开的细胞施用于受试者。对将被视为有效剂量的剂量的精确测定可以基于每个受试者的个体因素，包含其大小、年龄、性别、体重和特定受试者的病状。本领域技术人员从本公开和本领域知识中可以容易地测定剂量。剂量可以由本领域技术人员容易地调整(例如，纯度降低可能需要增加剂量)。
5.8.治疗方法
当前公开的细胞和包括其的组合物可以用于治疗或改善受试者的疾病或疾患。在某些实施例中，疾病或疾患与DLL3相关。在某些实施例中，疾病或疾患与DLL3的过表达相关联。
在某些实施例中，方法包括向有需要的受试者施用当前公开的细胞或包括其的组合物。在某些实施例中，细胞是T细胞。T细胞可以是CD4+T细胞或CD8+T细胞。在某些实施例中，T细胞是CD4+T细胞。
另外或可替代地，当前公开的细胞和包含其的组合物可以用于治疗或改善受试者的疾病或疾患。在某些实施例中，疾病或疾患与DLL3相关。在某些实施例中，疾病或疾患与DLL3的过表达相关联。在某些实施例中，该方法包括向有此需要的受试者施用当前公开的脂质纳米颗粒或包含其的组合物。
为了治疗，所施用的量是有效产生期望效应的量。可以以一次施用或一系列施用提供有效量。可以以团注或通过连续灌注来提供有效量。
在某些实施例中，疾病或疾患是肿瘤。在某些实施例中，当前公开的细胞和组合物可以减少肿瘤负荷、减少肿瘤细胞的数量、减小肿瘤尺寸、和/或根除受试者体内的肿瘤和/或增加或延长受试者的存活期。在某些实施例中，肿瘤是癌症。
疾病和疾患的非限制性实例包括肺神经内分泌肿瘤、肺外神经内分泌癌、黑色素瘤、神经内分泌***癌、乳腺癌、胃肠道神经内分泌肿瘤、胰腺癌、甲状腺髓样癌、小细胞膀胱癌、卵巢小细胞癌、低级别胶质瘤、胶质母细胞瘤和神经母细胞瘤。肺神经内分泌肿瘤的非限制性实例包括肺神经内分泌癌(包括典型类癌肿瘤和非典型类癌肿瘤)、大细胞神经内分泌癌和小细胞肺癌。在某些实施例中，肿瘤是小细胞肺癌。在某些实施例中，黑色素瘤是葡萄膜黑色素瘤。在某些实施例中，乳腺癌是三阴性乳腺癌。
进一步修饰可以引入到表达DLL3特异性CAR的工程化免疫细胞(例如，T细胞)，以避免或最小化免疫并发症(被称为“恶性T细胞转化”)，例如移植物抗宿主病(GvHD)的风险。工程化免疫细胞的修饰可以包括将***基因工程化到表达DLL3特异性CAR的T细胞中。合适的***基因包含但不限于单纯疱疹病毒胸苷激酶(hsv-tk)、诱导型胱天蛋白酶9***基因(iCasp-9)和截短的人表皮生长因子受体(EGFRt)多肽。在某些实施例中，***基因是EGFRt多肽。EGFRt多肽可以通过施用抗EGFR单克隆抗体(例如，西妥昔单抗(cetuximab))来实现T细胞清除。EGFRt可以与DLL3特异性CAR的胞内结构域的C末端共价接合。***基因可以包括在包含编码当前公开的DLL3特异性CAR的核酸的载体中。将***基因整合到当前公开的DLL3特异性CAR中增加了安全性水平，能够在非常短的时间段内消除大多数CAR T细胞。当前公开的整合有***基因的工程化免疫细胞(例如，T细胞)可在CAR T细胞输注后的给定时间点被预先消除，或在最早的毒性迹象时被根除。
5.9.试剂盒
当前公开的主题提供了用于改善受试者的疾病或疾患的试剂盒。在某些实施例中，试剂盒包括当前公开的细胞或包括其的组合物。在某些实施例中，试剂盒包括无菌容器；此类容器可以是盒、安瓿、瓶、小瓶、管、袋、小袋、泡罩包装或本领域已知的其它合适的容器形式。此类容器可以由塑料、玻璃、层压纸、金属箔或适合于容纳药物的其它材料制成。在某些非限制性实施例中，试剂盒包括编码当前公开的靶向DLL3的抗原识别受体(例如，CAR)的核酸分子。
如果期望的话，将细胞和/或核酸分子与用于将细胞或核酸分子施用于患有或有风险患上疾病或疾患的受试者的说明书一起提供。说明书通常包含关于使用组合物治疗和/或预防肿瘤或赘生物的信息。在某些实施例中，说明书包含以下中的至少一项：治疗剂的描述；用于治疗或预防肿瘤或赘生物的剂量表和施用；注意事项；警告；适应症；禁忌症；过剂量信息；不良反应；动物药理学；临床研究；和/或参考文献。这些说明书可以直接打印在容器上(如果存在的话)，或者作为施加到容器上的标签或者作为与容器一起提供或提供在容器中的单独的纸页、小册子、卡片或文件夹打印。
5.10.示例性实施例
A1.在某些非限制性实施例中，当前公开的主题提供了一种抗原识别受体，其包含胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，其中所述胞外抗原结合结构域与DLL3特异性结合，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(b)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(c)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(d)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(e)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(f)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(g)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(h)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(i)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(j)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，包含SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(k)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(l)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(m)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(n)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:116中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(o)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(p)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:135中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:137中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(q)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:145中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(r)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:151中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:152中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(s)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:161中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(t)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:167中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:168中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(u)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:176中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:177中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(v)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:184中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:185中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:186中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(w)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:194中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:195中所示的氨基酸序列或其保守修饰；或者
(x)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:201中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:202中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:203中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
A2.根据A1所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域是单链可变片段(scFv)。
A3.根据A2所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域是人scFv。
A4.根据A1所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域是Fab，所述Fab任选地被交联。
A5.根据A1所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域是F(ab)2。
A6.根据A2至A5中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述scFv、Fab和F(ab)2中的一者或多者包含在具有异源序列的融合蛋白中以形成所述胞外抗原结合结构域。
A7.根据A1至A6中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(b)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列或其保守修饰；或者
(c)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
A8.根据A1至A7中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(b)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:16或其保守修饰；
(c)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(d)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(e)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(f)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(g)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，l CDR2，所述l CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(h)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(i)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(j)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(k)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:280中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(l)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(m)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(n)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:117中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(o)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(p)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:130中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(q)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:138中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:139中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:140中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(r)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:146中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(s)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(t)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:162中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(u)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:169中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:170中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:171中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(v)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:178中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:179中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(w)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:187中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:188中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:189中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(x)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:196中所示的氨基酸序列或其保守修饰；或者
(y)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:204中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
A9.根据A1至A8中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述
(a)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(b)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:16或其保守修饰；
(c)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
A10.根据A1至A9中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:3中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:13中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列；
(c)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:22中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列；
(d)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:30中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列；
(e)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:39中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列；
(f)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:48中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列；
(g)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:56中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列；
(h)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:64中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列；
(i)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:72中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列；
(j)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:81中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及区域CDR3，所述区域CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；
(k)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:89中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:280中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列；
(l)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:98中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列；
(m)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:107中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；
(n)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:107中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列；
(o)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:116中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:117中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列；
(p)重链可变区，其包含：CDR1，该CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:123中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列；
(p)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:123中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及区域CDR3，所述区域CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列；
(q)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:56中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:130中所示的氨基酸序列；
(r)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:135中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQID NO:137中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:138中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:139中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:140中所示的氨基酸序列；
(s)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:145中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:146中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列；
(t)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:151中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:152中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ IDNO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；
(u)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:123中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列；
(v)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:161中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:162中所示的氨基酸序列；
(w)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:167中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:168中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:169中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:170中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:171中所示的氨基酸序列；
(x)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:176中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:177中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:178中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:79中所示的氨基酸序列；
(y)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:184中所示的氨基酸序列，重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:185中所示的氨基酸序列，以及重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:186中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:187中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:188中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:189中所示的氨基酸序列；
(z)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:194中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:195中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，li CDR2，所述li CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:196中所示的氨基酸序列；或者
(aa)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:201中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:202中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQID NO:203中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:204中所示的氨基酸序列。
A11.根据A1至A10中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:3中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:13中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列；或者
(c)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:22中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列。
A12.根据A1至A11中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQID NO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:197或SEQ ID NO:205。
A13.根据A1至A12中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含重链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:108、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190、SEQ IDNO:197或SEQ ID NO:205。
A14.根据A1至A13中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含重链可变区，所述重链可变区包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQID NO:17或SEQ ID NO:24。
A15.根据A1至A14中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。
A16.根据A1至A15中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含轻链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:109、SEQ IDNO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ IDNO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。
A17.根据A1至A16中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含轻链可变区，所述轻链可变区包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQID NO:18或SEQ ID NO:25。
A18.根据A1至A17中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：(a)重链可变区，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:102、SEQID NO:108、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:180、SEQID NO:190、SEQ ID NO:197或SEQ ID NO:205；以及(b)轻链可变区，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:77、SEQ IDNO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQ IDNO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。
A19.根据A1至A18中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：(a)重链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:60、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:108、SEQID NO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190、SEQID NO:197或SEQ ID NO:205；以及(b)轻链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQID NO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQID NO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQ IDNO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。
A20.根据A1至A19中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：(a)重链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:24；以及(b)轻链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:25。
A21.根据A1至A20中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列；
(c)重链可变区，其包含SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列；
(d)重链可变区，其包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列；
(e)重链可变区，其包含SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列；
(f)重链可变区，其包含SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列；
(g)重链可变区，其包含SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列；
(h)重链可变区，其包含SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:67中所示的氨基酸序列；
(i)重链可变区，其包含SEQ ID NO:76中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:77中所示的氨基酸序列；
(j)重链可变区，其包含SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列；
(k)重链可变区，其包含SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列；以及
(l)重链可变区，其包含SEQ ID NO:102中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列；
(m)重链可变区，其包含SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列；
(n)重链可变区，其包含SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:113中所示的氨基酸序列；
(o)重链可变区，其包含SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列；
(p)重链可变区，其包含SEQ ID NO:126中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:127中所示的氨基酸序列；
(q)重链可变区，其包含SEQ ID NO:131中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:132中所示的氨基酸序列；
(r)重链可变区，其包含SEQ ID NO:141中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:142中所示的氨基酸序列；
(s)重链可变区，其包含SEQ ID NO:147中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:148中所示的氨基酸序列；
(t)重链可变区，其包含SEQ ID NO:153中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:154中所示的氨基酸序列；
(u)重链可变区，其包含SEQ ID NO:157中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:158中所示的氨基酸序列；
(v)重链可变区，其包含SEQ ID NO:163中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:164中所示的氨基酸序列；
(w)重链可变区，其包含SEQ ID NO:172中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:173中所示的氨基酸序列；
(x)重链可变区，其包含SEQ ID NO:180中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:181中所示的氨基酸序列；
(y)重链可变区，其包含SEQ ID NO:190中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:191中所示的氨基酸序列；
(z)重链可变区，其包含SEQ ID NO:197中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:198中所示的氨基酸序列；或者
(aa)重链可变区，其包含SEQ ID NO:205中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:206中所示的氨基酸序列。
A22.根据A1至A21中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列；或者
(c)重链可变区，其包含SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列。
A23.根据A1至A22中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含所述胞外抗原结合结构域的重链可变区与轻链可变区之间的接头。
A24.根据A23所述的前述抗原识别受体，其中所述接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213或SEQ ID NO:214。
A25.根据A1至A24中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含与所述胞外抗原结合结构域的5'末端共价接合的信号肽。
A26.根据A1至A25中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述跨膜结构域包含CD8多肽、CD28多肽、CD3ζ多肽、CD4多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、CTLA-4多肽、PD-1多肽、LAG-3多肽、2B4多肽、BTLA多肽或其组合。
A27.根据A1至A26中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞内信号传导结构域包含CD3ζ多肽。
A28.前述A27所述的前述抗原识别受体，其中所述CD3ζ多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:221。
A29.根据A1至A27中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述胞内信号传导结构域进一步包含至少一个共刺激信号传导区。
A30.根据A28所述的前述抗原识别受体，其中所述至少一个共刺激信号传导区包含CD28多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、DAP-10多肽或其组合。
A31.根据A30所述的前述抗原识别受体，其中所述至少一个共刺激信号传导区包含CD28多肽。
A32.根据A31所述的前述抗原识别受体，其中所述CD28多肽包含以下项的氨基酸180至220或由其组成：SEQ ID NO:7。
A33.根据A31所述的前述抗原识别受体，其中所述CD28多肽包含突变的YMNM基序。
A34.根据A31或A33所述的前述抗原识别受体，其中所述CD28多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:278或SEQ ID NO:279。
A35.根据A1至A34中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述抗原识别受体是嵌合抗原受体(CAR)或T细胞样融合蛋白。
A36.根据A1至A35中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述抗原识别受体是CAR。
A37.根据A1至A36中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述抗原识别受体是重组表达的。
A38.根据A1至A37中任一项所述的前述抗原识别受体，其中所述抗原识别受体由载体表达。
A39.根据A38所述的前述抗原识别受体，其中所述载体是γ逆转录病毒载体。
B1.在某些非限制性实施例中，当前公开的主题提供了一种细胞，所述细胞包含根据权利要求1至39中任一项所述的抗原识别受体。
B2.根据B1所述的前述细胞，其中所述细胞用所述抗原识别受体转导。
B3.根据B1或B2所述的前述细胞，其中所述抗原识别受体在所述细胞的表面上组成性地表达。
B4.根据B1至B3中任一项所述的前述细胞，其进一步包含外源IL-18多肽。
B5.根据B4所述的前述细胞，其中所述外源IL-18多肽是人IL-18多肽。
B6.根据B1至B5中任一项所述的前述细胞，其中所述细胞是免疫应答细胞。
B7.根据B1至B6中任一项所述的前述细胞，其中所述细胞是淋系的细胞或髓系的细胞。
B8.根据B1至B7中任一项所述的前述细胞，其中所述细胞选自由以下项组成的组：T细胞、自然杀伤(NK)细胞以及可从其分化淋巴样细胞的干细胞。
B9.根据B1至B8中任一项所述的前述细胞，其中所述细胞是T细胞。
B10.根据B8或B9所述的前述细胞，其中所述T细胞是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)或调节性T细胞。
B11.根据B8所述的前述细胞，其中所述干细胞是多能干细胞。
B12.根据B11所述的前述细胞，其中所述多能干细胞是胚胎干细胞或诱导多能干细胞。
C.在某些实施例中，当前公开的主题提供了一种核酸，所述核酸编码根据A1至A39中任一项所述的抗原识别受体。
D1.在某些实施例中，当前公开的主题提供了一种载体，所述载体包含根据C中任一项所述的核酸。
D2.根据权利要求D1所述的前述载体，其中所述载体是γ逆转录病毒载体。
E1.在某些实施例中，当前公开的主题提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞表达根据C所述的核酸。
E2.根据权利要求55所述的前述宿主细胞，其中所述宿主细胞是T细胞。
F1.在某些实施例中，当前公开的主题提供了一种组合物，所述组合物包含根据B1至B12中任一项所述的细胞。
F2.根据F1所述的前述组合物，其是进一步包含药学上可接受的载剂的药物组合物。
G.在某些实施例中，当前公开的主题提供了一种脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒包含根据C所述的核酸。
H1.在某些实施例中，当前公开的主题提供了一种组合物，所述组合物包含根据G所述的脂质纳米颗粒。
H2.根据H1所述的前述组合物，其是进一步包含药学上可接受的载剂的药物组合物。
I1.在某些实施例中，当前公开的主题提供了一种治疗或改善受试者的疾病或疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用当前公开的根据B1至B12中任一项所述的细胞或根据权利要求F1、F2、H1或H2中任一项所述的组合物。
I2.根据I1所述的前述方法，其中所述疾病或疾患是肿瘤。
I3.根据I2所述的前述方法，其中所述肿瘤是癌症。
I4.根据I1至I3中任一项所述的前述方法，其中所述疾病或疾患选自由以下项组成的组：肺神经内分泌肿瘤、肺外神经内分泌癌、黑色素瘤、神经内分泌***癌、乳腺癌、胃肠道神经内分泌肿瘤、胰腺癌、甲状腺髓样癌、小细胞膀胱癌、卵巢小细胞癌、低级别胶质瘤、胶质母细胞瘤和神经母细胞瘤。
I5.根据I4所述的前述方法，其中所述肺神经内分泌肿瘤选自由以下项组成的组：肺神经内分泌癌、大细胞神经内分泌癌和小细胞肺癌。
I6.根据I5所述的前述方法，其中所述肿瘤是小细胞肺癌。
I7.根据I1至I6中任一项所述的前述方法，其中所述受试者是人。
J1.在某些实施例中，当前公开的主题提供了一种用于治疗或改善受试者的疾病或疾患的试剂盒，所述试剂盒包括根据B1至B12中任一项所述的细胞、根据C所述的核酸、根据F所述的脂质纳米颗粒或者根据F1、F2、H1或H2中任一项所述的组合物。
J2.根据J1所述的前述试剂盒，其中所述试剂盒进一步包括用于使用所述细胞或组合物来治疗或改善受试者的疾病或疾患的书面说明书。
K.在某些实施例中，当前公开的主题提供了一种用于产生根据A1至A39中任一项所述的靶向DLL3的抗原识别受体的方法，所述方法包括将编码所述抗原识别受体的核酸引入到细胞中。
L1.在某些实施例中，当前公开的主题提供了根据B1至B12中任一项所述的细胞或者根据F1、F2、H1或H2中任一项所述的组合物，其用于治疗或改善受试者的疾病或疾患。
L2.根据L1所述使用的前述细胞或前述组合物，其中所述疾病或疾患是肿瘤。
L3.根据L2所述使用的前述细胞或前述组合物，其中所述肿瘤是癌症。
L4.根据L1至L3中任一项所述使用的前述细胞或前述组合物，其中所述疾病或疾患选自由以下项组成的组：肺神经内分泌肿瘤、肺外神经内分泌癌、黑色素瘤、神经内分泌***癌、乳腺癌、胃肠道神经内分泌肿瘤、胰腺癌、甲状腺髓样癌、小细胞膀胱癌、卵巢小细胞癌、低级别胶质瘤、胶质母细胞瘤和神经母细胞瘤。
L5.根据L4所述使用的前述细胞或前述组合物，其中所述肺神经内分泌肿瘤选自由以下项组成的组：肺神经内分泌癌、大细胞神经内分泌癌和小细胞肺癌。
L6.根据L5所述使用的前述细胞或前述组合物，其中所述肿瘤是小细胞肺癌。
L7.根据L1至L6中任一项所述使用的前述细胞或前述组合物，其中所述受试者是人。
6.实例
除非另有指示，否则当前公开的实践采用在本领域技术范围内的常规分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学技术。此类技术在文献中有完整的解释，诸如，“Molecular Cloning:A Laboratory Manual”,第二版(Sambrook,1989)；“Oligonucleotide Synthesis”(Gait,1984)；“Animal Cell Culture”(Freshney,1987)；“Methods in Enzymology”“Handbook of Experimental Immunology”(Weir,1996)；”GeneTransfer Vectors for Mammalian Cells”(Miller and Calos,1987)；“CurrentProtocols in Molecular Biology”(Ausubel,1987)；“PCR:The Polymerase ChainReaction”,(Mullis,1994)；“Current Protocols in Immunology”(Coligan,1991)。这些技术适用于本文公开的多核苷酸和多肽的生产，并且因此可以在制备和实践当前公开的主题时考虑。对于特定实施例特别有用的技术将在下面的章节中讨论。
提出以下实例，以向本领域普通技术人员提供如何制备和使用当前公开的主题的抗体、多特异性抗体、包括其的组合物、筛选和治疗方法的完整公开和描述，并且不旨在限制发明人认为的当前公开的主题的范围。应当理解，鉴于上文提供的一般描述，可以实践各个其它实施例。
实例1-当前公开的靶向DLL3的CAR的生成
生成了本文公开的以下三种靶向DLL3的CAR：J8 CAR、B2 CAR和L22 CAR。为了确定它们的亲和力、结合结构域和特异性，对包括J8 CAR、B2 CAR和L22 CAR的scFv在内的抗体进行了分析。新型人抗DLL3抗体的亲和力、结合结构域和特异性描绘于下表28中。
表28
这些CAR的结构描绘于图1A和1B中。如图1A所示，某些CAR包括包含CD3ζ多肽的胞内信号传导结构域和包含4-1BB多肽的共刺激信号传导区(例如人4-1BB的胞内结构域或其片段)(称为“BBz”CAR)；并且某些CAR包括包含CD3ζ多肽的胞内信号传导结构域和包含CD28多肽的共刺激信号传导区(例如，人CD28的胞内结构域或其片段)(称为“28z”CAR)。此外，如图1C所示，这些CAR在转导的T细胞表面上良好表达。下图2A和2B所示的CAR为BBz CAR，并且下图3A和3B所示的CAR为28z CAR。B2也称为“3-B2”。J8也称为“2-J8”。L22也称为“9-L22”。
实例2–靶向DLL3的CAR T细胞的细胞毒性
开发了包含当前公开的靶向DLL3的28z CAR(J8、B2和L22)的T细胞(图1A至1C)。测试了这些BBz CAR T细胞的细胞毒性和增殖。如图2A所示，包含J8-BBzCAR的人T细胞、包含B2-BBzCAR的人T细胞和包含L22-BBzCAR的人T细胞显示出针对DLL3+小细胞肺癌(SCLC)细胞系(H82和H69)的特异性体外细胞毒性并且对DLL3敲除SCLC细胞系(H82-KO)没有显示出任何效果。此外，J8-BBzCAR T细胞、B2-BBzCAR T细胞和L22-BBzCAR T细胞在用DLL3+293细胞刺激后增殖(参见图2B)并分泌炎症性细胞因子(参见图2C)。不靶向DLL3的4H11-CAR用作阴性对照。
此外，还确定了J8-28zCAR T细胞、B2-28zCAR T细胞和L22-28zCAR T细胞的体内活性。NSG小鼠在肿瘤细胞接种后7天接受3×106个静脉内28zCAR T细胞。如图3A所示，J8-28zCAR T细胞、B2-28zCAR T细胞和L22-28zCAR T细胞减少了转移性H82-GFP-荧光素酶的肿瘤生长。此外，如图3B所示，所有J8-28zCAR T细胞、B2-28zCAR T细胞和L22-28zCAR T细胞均延长了患有全身性H82肿瘤的NSG小鼠的存活率。实例3–包含外源IL-18的靶向DLL3的CAR T细胞的细胞毒性
开发了包含当前公开的靶向DLL3的28z CAR(J8，也称为“2-J8”)并表达外源IL-18多肽(图4A，也称为“2J8-28z_IL18”)的T细胞。测试了这些2J8-28z_IL18 CAR T细胞的细胞毒性和增殖。如图4B所示，包含2J8-28z_IL18的T细胞在用H82肿瘤细胞和H69 SCLC肿瘤细胞刺激(E:T比率为1:5，后者的特征是与对照相比具有低DLL3表达)后增殖(参见图2B)。
此外，还确定了2J8-28z_IL18 T细胞的体内活性。患有全身性H82或H69肿瘤的小鼠在肿瘤细胞移植后4天(H82肿瘤)或7天(H69肿瘤)接受1×106个静脉内2J8-28z_IL18 T细胞。如图4C所示，2J8-28z_IL18显示出增加的抗肿瘤功效。总体而言，这些数据表明IL-18的CAR T细胞分泌大大增加了抗DLL3 CAR T细胞疗法的抗肿瘤功效。
接下来，确定CD28共刺激结构域的突变是否可以提高这些CAR T细胞的功效。开发了包含当前公开的靶向DLL3的28z CAR(J8，也称为“2-J8”)的T细胞。如图5A所示，CD28共刺激结构域中的YMNM基序突变为YSNV(28YSNV)增加了2J8 CAR T细胞在患有转移性H82肿瘤的小鼠中的抗肿瘤功效。值得注意的是，用2J8-28YSNVz CAR T细胞治疗的小鼠的存活率得到了延长。
最后，确定外源IL-18多肽的表达是否可以增加CAR靶向DLL3的28z CAR(J8，也称为“2J8-28YSNVz”)的抗肿瘤功效。因此，开发了表达2J8-28YSNVz CAR和外源IL-18多肽(也称为“2J8-28YSNVz_IL18”)的T细胞。如图5B所示。具有28YSNV共刺激并分泌IL-18细胞因子(2J8-28YSNVz_IL18)的CAR T细胞在患有转移性SHP-77SCLC肿瘤的小鼠中展示出与野生型CD28共刺激(2J8-28z_IL18)一样强效的抗肿瘤功效。值得注意的是，2J8-28YSNVz_IL18诱导的移植物抗宿主病(GvhD)较少。
当前公开的主题的实施例
根据前面的描述，显而易见的是，可以对当前公开的主题进行变化和修改，以使其适用于各种用途和条件。此类实施例也在以下权利要求的范围内。
在本文中的变量的任何定义中对要素的列表的详述包含作为任何单个要素或所列要素的组合(或子组合)的变量的定义。针对本文的实施例的详述包含作为任何单个实施例或与任何其它实施例或其部分的组合的实施例。
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Claims (78)
1.一种抗原识别受体，其包含胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，其中所述胞外抗原结合结构域与DLL3特异性结合，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(b)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(c)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(d)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(e)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(f)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(g)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(h)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(i)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(j)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，包含SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(k)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(l)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(m)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(n)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:116中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(o)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:123中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(p)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:135中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:137中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(q)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:145中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(r)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:151中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:152中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(s)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:161中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(t)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:167中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:168中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(u)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:176中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:177中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(v)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:184中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:185中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:186中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(w)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:194中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:195中所示的氨基酸序列或其保守修饰；或者
(x)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:201中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:202中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:203中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
2.根据权利要求1所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域是单链可变片段(scFv)。
3.根据权利要求2所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域是人scFv。
4.根据权利要求1所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域是Fab，所述Fab任选地被交联。
5.根据权利要求1所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域是F(ab)2。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的抗原识别受体，其中所述scFv、Fab和F(ab)2中的一者或多者包含在具有异源序列的融合蛋白中以形成所述胞外抗原结合结构域。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(b)(b)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列或其保守修饰；或者
(c)重链可变区，其包含：CDRl，所述CDRl包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(b)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:16或其保守修饰；
(c)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(d)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:32或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(e)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(f)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(g)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，lCDR2，所述lCDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(h)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(i)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(j)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(k)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:280中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(l)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(m)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(n)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:117中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(o)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(p)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:130中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(q)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:138中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:139中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:140中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(r)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:146中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(s)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(t)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:162中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(u)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:169中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:170中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:171中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(v)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:178中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:179中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(w)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:187中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:188中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:189中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(x)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:196中所示的氨基酸序列或其保守修饰；或者
(y)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:204中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗原识别受体，其中
(a)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列或其保守修饰；
(b)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:16或其保守修饰；
(c)轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列或其保守修饰，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列或其保守修饰，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列或其保守修饰。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：
CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ IDNO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:13中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列；
(c)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:22中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列；
(d)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:30中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列；
(e)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:39中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列；
(f)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:48中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列；
(g)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:56中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列；
(h)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:64中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列；
(i)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:72中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列；
(j)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:81中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及区域CDR3，所述区域CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；
(k)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:89中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:280中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列；
(l)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:98中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列；
(m)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:107中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；
(n)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:107中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列；
(o)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:116中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:117中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列；
(p)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:123中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列；
(p)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:123中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及区域CDR3，所述区域CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列；
(q)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:56中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:130中所示的氨基酸序列；
(r)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:135中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:137中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:138中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:139中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:140中所示的氨基酸序列；
(s)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:145中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:146中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:125中所示的氨基酸序列；
(t)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:151中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:152中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:82中所示的氨基酸序列；
(u)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:123中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列；
(v)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:161中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:74中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:162中所示的氨基酸序列；
(w)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:167中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:168中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:169中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:170中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:171中所示的氨基酸序列；
(x)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:176中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:177中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:178中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:79中所示的氨基酸序列；
(y)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:184中所示的氨基酸序列，重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:185中所示的氨基酸序列，以及重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:186中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:187中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:188中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:189中所示的氨基酸序列；
(z)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:194中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:195中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：
CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，liCDR2，所述liCDR2包含SEQID NO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:
196中所示的氨基酸序列；或者
(aa)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:201中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:202中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:203中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：
CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ IDNO:58中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:
204中所示的氨基酸序列。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：
CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ IDNO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:13中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：
CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ IDNO:15中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:
16中所示的氨基酸序列；或者
(c)重链可变区，其包含：CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ IDNO:22中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含：
CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ IDNO:5中所示的氨基酸序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含重链可变区，所述重链可变区包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQID NO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ IDNO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:197或SEQ ID NO:205。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含重链可变区，所述重链可变区包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:17、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:60、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:108、SEQID NO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190、SEQID NO:197或SEQ ID NO:205。
14.根据权利要求1至10中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含重链可变区，所述重链可变区包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:17或SEQ ID NO:24。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQID NO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQID NO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQ IDNO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含轻链可变区，所述轻链可变区包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61、SEQ IDNO:67、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:109、SEQID NO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQID NO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含轻链可变区，所述轻链可变区包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:18或SEQ ID NO:25。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：(a)重链可变区，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:102、SEQ IDNO:108、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:180、SEQ IDNO:190、SEQ ID NO:197或SEQ ID NO:205；以及(b)轻链可变区，其包含与以下项中所示的氨基酸序列至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同源或相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:35、SEQID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:84、SEQID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ IDNO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:158、SEQID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：(a)重链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:108、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190、SEQ IDNO:197或SEQ ID NO:205；以及(b)轻链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQID NO:109、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:173、SEQID NO:181、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:198或SEQ ID NO:206。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：(a)重链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:24；以及(b)轻链可变区，其包含以下项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:8、SEQID NO:18或SEQ ID NO:25。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，
其包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列；
(c)重链可变区，其包含SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列；
(d)重链可变区，其包含SEQ ID NO:34中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列；
(e)重链可变区，其包含SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列；
(f)重链可变区，其包含SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列；
(g)重链可变区，其包含SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列；
(h)重链可变区，其包含SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:67中所示的氨基酸序列；
(i)重链可变区，其包含SEQ ID NO:76中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:77中所示的氨基酸序列；
(j)重链可变区，其包含SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列；
(k)重链可变区，其包含SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列；以及
(l)重链可变区，其包含SEQ ID NO:102中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列；
(m)重链可变区，其包含SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列；
(n)重链可变区，其包含SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:113中所示的氨基酸序列；
(o)重链可变区，其包含SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列；
(p)重链可变区，其包含SEQ ID NO:126中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:127中所示的氨基酸序列；
(q)重链可变区，其包含SEQ ID NO:131中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:132中所示的氨基酸序列；
(r)重链可变区，其包含SEQ ID NO:141中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:142中所示的氨基酸序列；
(s)重链可变区，其包含SEQ ID NO:147中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:148中所示的氨基酸序列；
(t)重链可变区，其包含SEQ ID NO:153中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:154中所示的氨基酸序列；
(u)重链可变区，其包含SEQ ID NO:157中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:158中所示的氨基酸序列；
(v)重链可变区，其包含SEQ ID NO:163中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:164中所示的氨基酸序列；
(w)重链可变区，其包含SEQ ID NO:172中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:173中所示的氨基酸序列；
(x)重链可变区，其包含SEQ ID NO:180中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:181中所示的氨基酸序列；
(y)重链可变区，其包含SEQ ID NO:190中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:191中所示的氨基酸序列；
(z)重链可变区，其包含SEQ ID NO:197中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:198中所示的氨基酸序列；或者
(aa)重链可变区，其包含SEQ ID NO:205中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:206中所示的氨基酸序列。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，其包含SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，
其包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；
(b)重链可变区，其包含SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列；或者
(c)重链可变区，其包含SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，其包含SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含所述胞外抗原结合结构域的重链可变区与轻链可变区之间的接头。
24.根据权利要求23所述的抗原识别受体，其中所述接头包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213或SEQ ID NO:214。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞外抗原结合结构域包含与所述胞外抗原结合结构域的5'末端共价接合的信号肽。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的抗原识别受体，其中所述跨膜结构域包含CD8多肽、CD28多肽、CD3ζ多肽、CD4多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、CTLA-4多肽、PD-1多肽、LAG-3多肽、2B4多肽、BTLA多肽或其组合。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞内信号传导结构域包含CD3ζ多肽。
28.根据权利要求27所述的抗原识别受体，其中所述CD3ζ多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:221。
29.根据权利要求1至27中任一项所述的抗原识别受体，其中所述胞内信号传导结构域进一步包含至少一个共刺激信号传导区。
30.根据权利要求28所述的抗原识别受体，其中所述至少一个共刺激信号传导区包含CD28多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、DAP-10多肽或其组合。
31.根据权利要求30所述的抗原识别受体，其中所述至少一个共刺激信号传导区包含CD28多肽。
32.根据权利要求31所述的抗原识别受体，其中所述CD28多肽包含以下项的氨基酸180至220或由其组成：SEQ ID NO:7。
33.根据权利要求31所述的抗原识别受体，其中所述CD28多肽包含突变的YMNM基序。
34.根据权利要求31或33所述的抗原识别受体，其中所述CD28多肽包含以下项中所示的氨基酸序列或由以下项中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:276、SEQID NO:277、SEQ ID NO:278或SEQ ID NO:279。
35.根据权利要求1至34中任一项所述的抗原识别受体，其中所述抗原识别受体是嵌合抗原受体(CAR)或T细胞样融合蛋白。
36.根据权利要求1至35中任一项所述的抗原识别受体，其中所述抗原识别受体是CAR。
37.根据权利要求1至36中任一项所述的抗原识别受体，其中所述抗原识别受体是重组表达的。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的抗原识别受体，其中所述抗原识别受体由载体表达。
39.根据权利要求38所述的抗原识别受体，其中所述载体是γ逆转录病毒载体。
40.一种细胞，其包含根据权利要求1至39中任一项所述的抗原识别受体。
41.根据权利要求40所述的细胞，其中所述细胞用所述抗原识别受体转导。
42.根据权利要求40或41所述的细胞，其中所述抗原识别受体在所述细胞的表面上组成性地表达。
43.根据权利要求40至42中任一项所述的细胞，其进一步包含外源IL-18多肽。
44.根据权利要求43所述的细胞，其中所述外源IL-18多肽是人IL-18多肽。
45.根据权利要求40至44中任一项所述的细胞，其中所述细胞是免疫应答细胞。
46.根据权利要求40至45中任一项所述的细胞，其中所述细胞是淋系的细胞或髓系的细胞。
47.根据权利要求40至46中任一项所述的细胞，其中所述细胞选自由以下项组成的组：T细胞、自然杀伤(NK)细胞以及可从其分化淋巴样细胞的干细胞。
48.根据权利要求40至47中任一项所述的细胞，其中所述细胞是T细胞。
49.根据权利要求47或48所述的细胞，其中所述T细胞是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)或调节性T细胞。
50.根据权利要求47所述的细胞，其中所述干细胞是多能干细胞。
51.根据权利要求50所述的细胞，其中所述多能干细胞是胚胎干细胞或诱导多能干细胞。
52.一种核酸，其编码根据权利要求1至39中任一项所述的抗原识别受体。
53.一种载体，其包含根据权利要求52中任一项所述的核酸。
54.根据权利要求53所述的载体，其中所述载体是γ逆转录病毒载体。
55.一种宿主细胞，其表达根据权利要求52所述的核酸。
56.根据权利要求55所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是T细胞。
57.一种组合物，其包含根据权利要求40至51中任一项所述的细胞。
58.根据权利要求57所述的组合物，其是进一步包含药学上可接受的载剂的药物组合物。
59.一种脂质纳米颗粒，其包含根据权利要求52所述的核酸。
60.一种组合物，其包含根据权利要求59所述的脂质纳米颗粒。
61.根据权利要求60所述的组合物，其是进一步包含药学上可接受的载剂的药物组合物。
62.一种治疗或改善受试者的疾病或疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用当前公开的根据权利要求40至51中任一项所述的细胞或者根据权利要求57、58、60或61中任一项所述的组合物。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述疾病或疾患是肿瘤。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述肿瘤是癌症。
65.根据权利要求62至64中任一项所述的方法，其中所述疾病或疾患选自由以下项组成的组：肺神经内分泌肿瘤、肺外神经内分泌癌、黑色素瘤、神经内分泌***癌、乳腺癌、胃肠道神经内分泌肿瘤、胰腺癌、甲状腺髓样癌、小细胞膀胱癌、卵巢小细胞癌、低级别胶质瘤、胶质母细胞瘤和神经母细胞瘤。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述肺神经内分泌肿瘤选自由以下项组成的组：肺神经内分泌癌、大细胞神经内分泌癌和小细胞肺癌。
67.根据权利要求59所述的方法，其中肿瘤是小细胞肺癌。
68.根据权利要求62至67中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
69.一种用于治疗或改善受试者的疾病或疾患的试剂盒，所述试剂盒包括根据权利要求40至51中任一项所述的细胞、根据权利要求52所述的核酸、根据权利要求59所述的脂质纳米颗粒或者根据权利要求57、58、60或61中任一项所述的组合物。
70.根据权利要求69所述的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包括用于使用所述细胞或组合物来治疗或改善受试者的疾病或疾患的书面说明书。
71.一种用于产生根据权利要求1至39中任一项所述的靶向DLL3的抗原识别受体的方法，所述方法包括将编码所述抗原识别受体的核酸引入到细胞中。
72.根据权利要求40至51中任一项所述的细胞或者根据权利要求57、58、60或61中任一项所述的组合物，其用于治疗或改善受试者的疾病或疾患。
73.根据权利要求72所述使用的细胞或组合物，其中所述疾病或疾患是肿瘤。
74.根据权利要求73所述使用的细胞或组合物，其中所述肿瘤是癌症。
75.根据权利要求72至74中任一项所述使用的细胞或组合物，其中所述疾病或疾患选自由以下项组成的组：肺神经内分泌肿瘤、肺外神经内分泌癌、黑色素瘤、神经内分泌***癌、乳腺癌、胃肠道神经内分泌肿瘤、胰腺癌、甲状腺髓样癌、小细胞膀胱癌、卵巢小细胞癌、低级别胶质瘤、胶质母细胞瘤和神经母细胞瘤。
76.根据权利要求75所述使用的细胞或组合物，其中所述肺神经内分泌肿瘤选自由以下项组成的组：肺神经内分泌癌、大细胞神经内分泌癌和小细胞肺癌。
77.根据权利要求76所述使用的细胞或组合物，其中所述肿瘤是小细胞肺癌。
78.根据权利要求72至77中任一项所述使用的细胞或组合物，其中所述受试者是人。
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