CN118139888A - 抗cldn18.2抗体及其用途 - Google Patents
抗cldn18.2抗体及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118139888A CN118139888A CN202280072576.1A CN202280072576A CN118139888A CN 118139888 A CN118139888 A CN 118139888A CN 202280072576 A CN202280072576 A CN 202280072576A CN 118139888 A CN118139888 A CN 118139888A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- acid sequence
- heavy chain
- light chain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 177
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 158
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 136
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 136
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 136
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 42
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 652
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 claims description 39
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 29
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 25
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 claims description 20
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 16
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 13
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 13
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 12
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 12
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 8
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 8
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 claims description 8
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 7
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 6
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 6
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061424 Anal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007860 Anus Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010052399 Neuroendocrine tumour Diseases 0.000 claims description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011165 anus cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000016065 neuroendocrine neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011519 neuroendocrine tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037959 spinal tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 162
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 159
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 72
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 55
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 49
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 37
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 24
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 24
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 23
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 23
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 22
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 17
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 17
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 17
- 229950007157 zolbetuximab Drugs 0.000 description 17
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 16
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 8
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 5
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 102000002029 Claudin Human genes 0.000 description 4
- 108050009302 Claudin Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 230000002121 endocytic effect Effects 0.000 description 4
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 238000003734 CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay Methods 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000012409 standard PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- LMFAFFIRCNUJJO-UHFFFAOYSA-N 5-(4-azidophenyl)-8-iodo-3-methyl-1,2,4,5-tetrahydro-3-benzazepin-7-ol Chemical compound C1N(C)CCC2=CC(I)=C(O)C=C2C1C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 LMFAFFIRCNUJJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102000002038 Claudin-18 Human genes 0.000 description 2
- 108050009324 Claudin-18 Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000819490 Homo sapiens Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 2
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 2
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 2
- -1 aromatic amino acid Chemical class 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 2
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 2
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 2
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 2
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 6S-folinic acid Natural products C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- OGSPWJRAVKPPFI-UHFFFAOYSA-N Alendronic Acid Chemical compound NCCCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O OGSPWJRAVKPPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021266 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282672 Ateles sp. Species 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 229940122361 Bisphosphonate Drugs 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102100040835 Claudin-18 Human genes 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical group [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010008177 Fd immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- MPJKWIXIYCLVCU-UHFFFAOYSA-N Folinic acid Natural products NC1=NC2=C(N(C=O)C(CNc3ccc(cc3)C(=O)NC(CCC(=O)O)CC(=O)O)CN2)C(=O)N1 MPJKWIXIYCLVCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 241000126130 Ganymedes Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101000749329 Homo sapiens Claudin-18 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- MPBVHIBUJCELCL-UHFFFAOYSA-N Ibandronate Chemical compound CCCCCN(C)CCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O MPBVHIBUJCELCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010038111 Recurrent cancer Diseases 0.000 description 1
- IIDJRNMFWXDHID-UHFFFAOYSA-N Risedronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CC1=CC=CN=C1 IIDJRNMFWXDHID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- UGEPSJNLORCRBO-UHFFFAOYSA-N [3-(dimethylamino)-1-hydroxy-1-phosphonopropyl]phosphonic acid Chemical compound CN(C)CCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O UGEPSJNLORCRBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229960004343 alendronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004663 bisphosphonates Chemical class 0.000 description 1
- 201000000053 blastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000012410 cDNA cloning technique Methods 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 229960002286 clodronic acid Drugs 0.000 description 1
- ACSIXWWBWUQEHA-UHFFFAOYSA-N clodronic acid Chemical compound OP(O)(=O)C(Cl)(Cl)P(O)(O)=O ACSIXWWBWUQEHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011960 computer-aided design Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 201000008184 embryoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 150000005699 fluoropyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N folinic acid Chemical compound C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N 0.000 description 1
- 235000008191 folinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011672 folinic acid Substances 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000012637 gene transfection Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005236 ibandronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- LWRDQHOZTAOILO-UHFFFAOYSA-N incadronic acid Chemical compound OP(O)(=O)C(P(O)(O)=O)NC1CCCCCC1 LWRDQHOZTAOILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950006971 incadronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 229960001691 leucovorin Drugs 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- VMMKGHQPQIEGSQ-UHFFFAOYSA-N minodronic acid Chemical compound C1=CC=CN2C(CC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O)=CN=C21 VMMKGHQPQIEGSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950011129 minodronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006548 oncogenic transformation Effects 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N pamidronate Chemical compound NCCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940046231 pamidronate Drugs 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 238000003030 reporter gene method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229960000759 risedronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000014723 transformation of host cell by virus Effects 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 230000004222 uncontrolled growth Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229960004276 zoledronic acid Drugs 0.000 description 1
- XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N zoledronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CN1C=CN=C1 XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
提供了特异性结合CLDN18.2的小鼠、人、嵌合或人源化的抗体或其抗原结合片段,还提供了编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸分子,以及用于表达所述抗体或抗原结合片段的表达载体和宿主细胞。进一步提供了所述抗体或其抗原结合片段使用方法,包括治疗与CLDN18.2阳性相关的疾病。
Description
相关申请的交叉引用
本申请是基于2021年11月5日提交的中国专利申请号202111307619.3的国际申请,并要求这一中国专利申请的优先权和权益。在此将所述申请的公开内容以引用的方式整体并入本文。
本申请属于生物技术领域,具体涉及结合紧密连接蛋白18.2(CLDN18.2)的抗体和其抗原结合片段,并且涉及使用这类抗体和抗原结合片段的方法。
紧密连接蛋白18(CLDN18或Claudin18)属于细胞紧密连接蛋白家族,参与形成细胞间的紧密连接,控制细胞间分子的流动,对维持细胞极性、通透性和细胞间信号转递具有重要作用。CLDN18是一个四次跨膜蛋白,N端和C端都在胞内,并在胞外形成了两个Loop区,由于RNA的选择性剪接,组织中存在2种不同的亚型:紧密连接蛋白18.1(CLDN18.1,例如人CLDN18.1的Uniprot登录号为P56856-1)和紧密连接蛋白18.2(CLDN18.2,例如人CLDN18.2的Uniprot登录号为P56856-2)。
CLDN18.1和CLDN18.2蛋白序列的相似度高,但表达分布不同,CLDN18.1选择性在正常肺组织中表达,而CLDN18.2在正常组织的表达非常有限,仅特异性表达于胃黏膜分化上皮细胞。但研究发现,CLDN18.2在70%的原发性胃癌及其转移灶中呈现出高表达,此外,还发现CLDN18.2在多种恶性肿瘤中被频繁异位激活,包括胰腺癌、食道癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌和耳鼻喉肿瘤(Niimi et al.,(2001)Mol Cell Biol 21(21):7380-7390;Sahin,U.et al..,(2008)Clin Cancer Res.14,7624–34;Tanaka et al.,(2011)J Histochem Cytochem 59(10):942-952;Micke et al.,(2014)Int J Cancer 135(9):2206-2214;Shimobaba et al.,(2016)Biochim Biophys Acta 1863(6Pt A):1170-1178;Sing h et al.,(2017)J Hema tol Oncol 10(1):105;Tokumitsu et al.,(2017)Cytopathology 28(2):116-121)。
多种CLDN18.2抗体已经被用于治疗癌症的研究中,例如,Ganymed开发的CLDN18.2嵌合IgG1抗体Claudiximab(IMAB362)(Sahin et al.,(2018)Eur J Cancer 100:17-26),以及PCT申请WO2020211792中公开的CLDN18.2人源化抗体。但临床上仍需要更多针对CLDN18.2的抗体。
发明内容
一方面,本申请提供了分离的结合CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段结合人CLDN18.2。在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段是鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体、Fab片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、dAb、分离的CDR、单链Fv分子、纳米抗体、重组多肽、融合蛋白、免疫缀合物、或其组合。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3),其中,
(1)重链CDR1包含SEQ ID NO:11中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:11中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:11中重链CDR3的氨基酸序列;
(2)重链CDR1包含SEQ ID NO:12中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:12中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:12中重链CDR3的氨基酸序列;
(3)重链CDR1包含SEQ ID NO:13中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:13中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:13中重链CDR3的氨基酸序列;
(4)重链CDR1包含SEQ ID NO:14中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:14中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:14中重链CDR3的氨基酸序列;
(5)重链CDR1包含SEQ ID NO:15中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:15中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:15中重链CDR3的氨基酸序列;
(6)重链CDR1包含SEQ ID NO:29中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:29中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:29中重链CDR3的氨基酸序列;
(7)重链CDR1包含SEQ ID NO:30中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:30中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:30中重链CDR3的氨基酸序列;
(8)重链CDR1包含SEQ ID NO:31中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:31中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:31中重链CDR3的氨基酸序列;
(9)重链CDR1包含SEQ ID NO:32中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:32中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:32中重链CDR3的氨基酸序列;
(10)重链CDR1包含SEQ ID NO:33中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:33中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:33中重链CDR3的氨基酸序列;
(11)重链CDR1包含SEQ ID NO:43中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:43 中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:43中重链CDR3的氨基酸序列;
(12)重链CDR1包含SEQ ID NO:51中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:51中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:51中重链CDR3的氨基酸序列;或
(13)重链CDR1包含SEQ ID NO:59中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:59中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:59中重链CDR3的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3,其中,
(1)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、4和7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:3、4和7所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(2)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、5和7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:3、5和7所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(3)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、6和7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:3、6和7所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(4)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、20和24所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、20和24所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(5)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、21和24所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、21和24所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(6)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、22和24所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、22和24所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(7)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、23和24所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、23和24所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(8)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:37、38和39所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:37、38和39所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(9)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:45、46和47所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:45、46和47所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;或
(10)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:53、54和55所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:53、54和55所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含轻链CDR1(LCDR1)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3),其中,
(1)轻链CDR1包含SEQ ID NO:16中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:16中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:16中轻链CDR3的氨基酸序列;
(2)轻链CDR1包含SEQ ID NO:17中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:17中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:17中轻链CDR3的氨基酸序列;
(3)轻链CDR1包含SEQ ID NO:18中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:18中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:18中轻链CDR3的氨基酸序列;
(4)轻链CDR1包含SEQ ID NO:34中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:34中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:34中轻链CDR3的氨基酸序列;
(5)轻链CDR1包含SEQ ID NO:35中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:35中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:35中轻链CDR3的氨基酸序列;
(6)轻链CDR1包含SEQ ID NO:36中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:36中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:36中轻链CDR3的氨基酸序列;
(7)轻链CDR1包含SEQ ID NO:44中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:44中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:44中轻链CDR3的氨基酸序列;
(8)轻链CDR1包含SEQ ID NO:52中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:52中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:52中轻链CDR3的氨基酸序列;或
(9)轻链CDR1包含SEQ ID NO:60中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:60中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:60中轻链CDR3的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含轻链CDR1,轻链CDR2和轻链CDR3,其中,
(1)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:8、9和10所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:8、9和10所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(2)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:25、26和27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:25、26和27所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(3)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:25、26和28所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:25、26和28所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(4)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:40、41和42所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:40、41和42所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(5)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:48、49和50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:48、49和50所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;或
(6)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:56、57和58所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:56、57和58所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3,其中,
(1)重链CDR1包含SEQ ID NO:11中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:11中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:11中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:16中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:16中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:16中轻链CDR3的氨基酸序列;
(2)重链CDR1包含SEQ ID NO:12中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:12中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:12中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:17中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:17中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:17中轻链CDR3的氨基酸序列;
(3)重链CDR1包含SEQ ID NO:13中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:13中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:13中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:17中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:17中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:17中轻链CDR3的氨基酸序列;
(4)重链CDR1包含SEQ ID NO:14中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:14中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:14中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:17中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:17中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:17中轻链CDR3的氨基酸序列;
(5)重链CDR1包含SEQ ID NO:15中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:15中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:15中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:17中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:17中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:17中轻链CDR3的氨基酸序列;
(6)重链CDR1包含SEQ ID NO:12中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:12中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:12中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:18中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:18中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:18中轻链CDR3的氨基酸序列;
(7)重链CDR1包含SEQ ID NO:13中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:13中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:13中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:18中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:18中轻链CDR2的氨基 酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:18中轻链CDR3的氨基酸序列;
(8)重链CDR1包含SEQ ID NO:14中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:14中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:14中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:18中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:18中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:18中轻链CDR3的氨基酸序列;
(9)重链CDR1包含SEQ ID NO:15中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:15中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:15中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:18中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:18中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:18中轻链CDR3的氨基酸序列;
(10)重链CDR1包含SEQ ID NO:29中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:29中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:29中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:34中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:34中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:34中轻链CDR3的氨基酸序列;
(11)重链CDR1包含SEQ ID NO:30中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:30中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:30中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:35中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:35中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:35中轻链CDR3的氨基酸序列;
(12)重链CDR1包含SEQ ID NO:31中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:31中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:31中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:35中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:35中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:35中轻链CDR3的氨基酸序列;
(13)重链CDR1包含SEQ ID NO:32中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:32中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:32中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:35中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:35中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:35中轻链CDR3的氨基酸序列;
(14)重链CDR1包含SEQ ID NO:33中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:33中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:33中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:35中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:35中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:35中轻链CDR3的氨基酸序列;
(15)重链CDR1包含SEQ ID NO:30中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:30中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:30中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:36中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:36中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:36中轻链CDR3的氨基酸序列;
(16)重链CDR1包含SEQ ID NO:31中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:31中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:31中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:36中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:36中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:36中轻链CDR3的氨基酸序列;
(17)重链CDR1包含SEQ ID NO:32中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:32中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:32中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:36中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:36中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:36中轻链CDR3的氨基酸序列;
(18)重链CDR1包含SEQ ID NO:33中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:33中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:33中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:36中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:36中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:36中轻链CDR3的氨基酸序列;
(19)重链CDR1包含SEQ ID NO:43中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:43中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:43中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:44中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:44中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:44中轻链CDR3的氨基酸序列;
(20)重链CDR1包含SEQ ID NO:51中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:51中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:51中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:52中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:52中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:52中轻链CDR3的氨基酸序列;或
(21)重链CDR1包含SEQ ID NO:59中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:59中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:59中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:60中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:60中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:60中轻链CDR3的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3,其中,
(1)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、4、7、8、9和10所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:3、4、7、8、9和10所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(2)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、5、7、8、9和10所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:3、5、7、8、9和10所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(3)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、6、7、8、9和10所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:3、6、7、8、9和10所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(4)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、20、24、25、26和27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、20、24、25、26和27所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(5)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、21、24、25、26和27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、21、24、25、26和27所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(6)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、22、24、25、26和27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、22、24、25、26和27所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(7)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、23、24、25、26和27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、23、24、25、26和27所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(8)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、20、24、25、26和28所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、20、24、25、26和28所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(9)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、21、24、25、26和28所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、21、24、25、26和28所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(10)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、22、24、25、26和28所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、22、24、25、26和28所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(11)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、23、24、25、26和28所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、23、24、25、26和28所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(12)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:37、38、39、40、41和42所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:37、38、39、40、41和42所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(13)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:45、46、47、48、49和50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:45、46、47、48、49和50所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;或
(14)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:53、54、55、56、57和58所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:53、54、55、56、57和58所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3,其中,
所述重链CDR1包含SEQ ID NO:3、19、37、45或53所示的氨基酸序列;
所述重链CDR2包含SEQ ID NO:4、5、6、20、21、22、23、38、46或54所示的氨基酸序列;并且
所述重链CDR3包含SEQ ID NO:7、24、39、47或55所示的氨基酸序列;
所述轻链CDR1包含SEQ ID NO:8、25、40、48或56所示的氨基酸序列;
所述轻链CDR2包含SEQ ID NO:9、26、41、49或57所示的氨基酸序列;并且
所述轻链CDR3包含SEQ ID NO:10、27、28、42、50或58所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3,其中,
所述重链CDR1包含SEQ ID NO:3、19或53所示的氨基酸序列;
所述重链CDR2包含SEQ ID NO:4、5、6、20、21、22、23或54所示的氨基酸序列;
所述重链CDR3包含SEQ ID NO:7、24或55所示的氨基酸序列;
所述轻链CDR1包含SEQ ID NO:8、25或56所示的氨基酸序列;
所述轻链CDR2包含SEQ ID NO:9、26或57所示的氨基酸序列;并且
所述轻链CDR3包含SEQ ID NO:10、27、28或58所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含重链可变区,所述重链可变区包含SEQ ID NOs:11、12、13、14、15、29、30、31、32、33、43、51或59所示的氨基酸序列,或与SEQ ID NOs:11、12、13、14、15、29、30、31、32、33、43、51或59所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区,所述轻链可变区包含SEQ ID NOs:16、17、18、34、35、36、44、52或60所示的氨基酸序列,或与SEQ ID NOs:16、17、18、34、35、36、44、52或60所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段结包含重链可变区和轻链可变区,其中,
(1)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:11和16所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:11和16所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(2)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:12和17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:12和17所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(3)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:13和17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:13和17所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(4)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:14和17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:14和17所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(5)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:15和17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:15和17所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(6)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:12和18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:12和18所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(7)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:13和18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:13和18所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(8)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:14和18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:14和18所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(9)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:15和18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:15和18所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(10)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:29和34所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:29和34所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(11)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:30和35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:30和35所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(12)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:31和35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:31和35所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(13)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:32和35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:32和35所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(14)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:33和35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:33和35所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(15)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:30和36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:30和36所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(16)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:31和36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:31和36所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(17)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:32和36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:32和36所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(18)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:33和36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:33和36所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(19)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:43和44所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:43和44所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;
(20)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:51和52所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:51和52所所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列;或
(21)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:59和60所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:59和60所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区,其中,所述重链可变区包含SEQ ID NOs:11、12、13、14、15、29、30、31、32、33、43、51或59所示的氨基酸序列;并且,所述轻链可变区包含SEQ ID NOs:16、17、18、34、35、36、44、52或60所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区, 其中,所述重链可变区包含SEQ ID NOs:11、12、13、14、15、29、30、31、32、33或59所示的氨基酸序列;并且,所述轻链可变区包含SEQ ID NOs:16、17、18、34、35、36或60所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链,所述重链包含重链可变区和重链恒定区,所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区,其中重链可变区和轻链可变区分别包含上述的重链可变区和轻链可变区,重链恒定区包含人IgG1、IgG2、IgG4恒定区或其变体,优选人IgG1恒定区或其变体,轻链恒定区包含人κ恒定区、人λ恒定区或其变体,优选人κ恒定区或其变体。示例性变体包括对重链恒定区进行定点改造和氨基酸替换的IgGl、IgG2或IgG4重链恒定区变体,例如现有技术已知的AAA突变、DLE突变(Shields et al.,2002;Lazar et al.,2006)、YTE突变和LS突变(Ghetie et al.,1997;Zalevsky et al.,2010)。
在一些具体的实施方案中,所述重链恒定区包含SEQ ID NO:61所示氨基酸序列或与SEQ ID NO:61所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除和添加的氨基酸序列,所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:62所示氨基酸序列或者与SEQ ID NO:62所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除和添加的氨基酸序列。
在本文中,所述氨基酸取代可以是保守氨基酸取代,即,采用同类(具有类似的化学性质或者功能)的另一种氨基酸进行取代。作为示例,可根据氨基酸的侧链性质将其分为:(1)非极性氨基酸:Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M);(2)不带电荷的极性氨基酸:Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q);(3)酸性氨基酸:Asp(D)、Glu(E);(4)碱性氨基酸:Lys(K)、Arg(R)、His(H)。或者,可基于共同的侧链特性将氨基酸分为:(1)疏水氨基酸:Met、Ala、Val、Leu、Ile;(2)中性亲水氨基酸:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;(3)酸性氨基酸:Asp、Glu;(4)碱性氨基酸:His、Lys、Arg;(5)影响链取向的氨基酸:Gly、Pro;(6)芳香族氨基酸:Trp、Tyr、Phe。
在本文中,上述抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段的各种变体保留了与抗原CLDN18.2特异性结合的能力。
在一些实施方案中,本申请提供的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含两条重链(H)和两条轻链(L),或由两条重链和两条轻链组成,重链和轻链通过二硫键相互连接,其中每条重链包含上述的重链可变区(VH)和重链恒定区,其中重链可变区(VH)包含骨架区(FR)和上述的重链互补决定区(HCDR),每条轻链包含上述的轻链可变区(VL)和轻链恒定区,其中轻链可变区(VL)包含FR和上述的轻链互补决定区(LCDR),其中重链可变区的C末端连接至重链恒定区的N末端,轻链可变区的C末端连接至轻链恒定区的N末端。
在一些实施方案中,本申请的抗体可以是全长抗体,例如IgG1同种型的全长抗体。在另一个实施方案中,本申请的抗体可以是单链抗体(scFv)、纳米抗体、或抗体片段(例如Fab、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、dAb或分离的CDR)。
本申请提供的抗体或其抗原结合片段结合CLDN18.2,从而诱导针对表达CLDN18.2的细胞的抗体依赖细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖细胞毒性(CDC)。在一些实施方案中,本申请提供的抗体或其抗原结合片段结合人CLDN18.2,从而诱导针对表达人CLDN18.2的细胞的ADCC和/或CDC。
在一些实施方案中,本申请提供的抗体或其抗原结合片段基本上不结合CLDN18.1。在一些实施方案中,本申请提供的抗体或其抗原结合片段基本上不结合人CLDN18.1。术语“基本上不结合”蛋白质或细胞是指不与蛋白质或细胞结合,或非特异性结合蛋白质或细胞。
在一些实施方案中,本申请提供的抗体或其抗原结合片段不会诱导针对表达CLDN18.1的细胞的ADCC和/或CDC。在一些实施方案中,本申请提供的抗体或其抗原结合片段不会诱导针对表达人CLDN18.1的细胞的ADCC和/或CDC。
一方面,本申请提供一种结合CLDN18.2的分离的抗体或其抗原结合片段,所述的抗体或其抗原结合片段由杂交瘤产生,所述的杂交瘤选自于由本文称为28G3、40F6、22F12、34G6和10D8的杂交瘤组成的组。因此,本申请还包括杂交瘤28G3、40F6、22F12、34G6和10D8以及产生本文公开的抗体的任何杂交瘤产生的抗体或其抗原结合片段。
一方面,本申请提供与本申请任何示例性抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段结合人CLDN18.2上相同表位的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中,本申请提供与本申请任何示例性抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段竞争结合人CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段。
另一方面,本申请还提供一种多特异性抗体,其包含一种或多种本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段与至少一个与本申请的抗体或抗原结合片段具有不同特异性的抗体或其抗原结合片段,所述多特异性抗体能够与至少两个不同结合位点或靶点结合。本文所用的“多特异性抗体”涵盖具有两种(即双特异性抗体)、三种(即三特异性抗体)、四种(即四特异性抗体)或更多种的特异性的抗体。这些多特异性抗体可以通过本领域熟知的方法进行制备。
另一方面,本申请还提供重组多肽或融合蛋白,其包含一种或多种本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段,其中本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段与至少一种其他功能片段相连接,所述其他功能片段包括但不限于另一种肽、蛋白质、细胞因子或受体配体。这些重组多肽和融合蛋白可以通过本领域熟知的方法进行制备。
另一方面,本申请还提供一种免疫缀合物,其包含一种或多种本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段,其中本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段与至少一种其他治疗剂(例如,细胞毒性剂、放射性同位素、免疫粘附分子或成像剂等)相连接,例如抗体-药物偶联物(ADC)。这些免疫缀合物可以通过本领域熟知的方法进行制备。
在一些实施方案中,所述连接是共价连接。在一些实施方案中,所述连接是非共价连接。在一些实施方案中,所述连接是直接连接。在一些实施方案中,所述连接是通过接头连接。合适的接头包括但不限于氨基酸和多肽接头。
另一方面,本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段可以是嵌合抗原受体(CAR)的一部分。本申请还提供了包含所述嵌合抗原受体的免疫细胞,例如T细胞(即,CAR-T细胞)。
此外,本申请还提供了基因载体,所述基因载体包含编码本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段的基因,并且能使所述基因进入哺乳动物细胞(优选人细胞),并在其中表达。这些基因载体包括但不限于,裸质粒载体、酵母运载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体、痘病毒载体、棒状病毒载体或杆状病毒载体。
一方面,本申请还提供编码本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段的分离的核酸分子。本申请还提供包括所述核酸分子的表达载体,以及包含所述的核酸分子或所述表达载体的宿主细胞。
一方面,本申请还提供一种制备抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段的方法,其包括以下步骤:(i)在宿主细胞中表达抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段,和(ii)从宿主细胞或其细胞培养物中分离抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段。
一方面,本申请提供了药物组合物,其包含本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段,和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。在另一个实施方案中,本申请还提供了包含本申请的重组多肽、融合蛋白、多特异性抗体、免疫缀合物、嵌合抗原受体、核酸分子或基因载体,以及药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。
另一方面,本申请提供了在受试者中预防、缓解或治疗与CLDN18.2阳性相关的疾病的方法,所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段、或其药物组合物。另一方面,本申请提供了本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段、或其药物组合物在制备用于预防、缓解或治疗与CLDN18.2阳性相关的疾病的药物中的用途。或者,本申请提供了用于预防、缓解或治疗与CLDN18.2阳性相关的疾病的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中,所述与CLDN18.2阳性相关的疾病为癌症。在某些实施方式中,受试者是人。
因此,在一些实施方案中,本申请提供了在受试者中预防、缓解或治疗癌症的方法,所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段、或其药物组合物。在某些实施方式中,受试者是人。
本申请所使用的术语“癌症”是指一群广泛的各种疾病,其特征在于身体中异常细胞不受控制的生长。“癌症”或“癌症组织”可包括肿瘤。可以通过本申请的方法治疗的癌症包括但不限于:癌(carcinomas)、肉瘤、淋巴瘤、母细胞瘤及白血病。术语“癌症”包括但不限于源于体内特定部位的原发癌、已从其起始位置扩散到身体其它部位的转移癌、原始原发癌在缓解后的复发癌、和第二原发癌(之前有不同类型的癌症史的人的新发原发癌)。
在一些实施方案中,所述癌症包括血液瘤和实体瘤。血液瘤包括例如白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。在一些实施方案中,所述癌症为CLDN18.2阳性癌症。在一些实施方案中,所述癌症包括但不限于胃癌、食道癌、胃肠道癌(包括结肠癌和直肠癌)、胰腺癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、支气管癌、间皮瘤、肾癌、卵巢癌(包括库肯勃氏瘤)、乳腺癌、膀胱癌、子宫癌(包括子宫内膜癌)、***癌、睾丸癌、***癌、***癌、胆管癌、胆囊癌、头颈癌、脊柱肿瘤、耳鼻咽喉肿瘤、甲状腺癌、间皮瘤、骨癌、皮肤癌、黑色素瘤、腺癌、肉瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、脑癌、中枢神经***癌、神经内分泌肿瘤、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。所述癌症可以是原位的、转移性的、复发性的、和/或难治性的。
本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段可以单独施用,或者与一种或多种其他治疗剂联合施用。当与其他治疗剂联合施用时,其他治疗剂可以在本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段施用之前或之后施用,或同时施用。
在一些实施方案中,所述其他治疗剂是与本申请的抗体或抗原结合片段具有不同特异性的抗体或其抗原结合片段,例如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、CTLA-4抗体、或其抗原结合片段。在一些实施方案中,所述其他治疗剂是细胞因子,例如白介素2。在一些实施方案中,所述其他治疗剂是刺激γδT细胞的药剂, 所述γδT细胞可以是Vγ9Vδ2T细胞,所述刺激γδT细胞的药剂包括但不限于双膦酸、或其盐、或其酯,例如唑来膦酸、氯膦酸、伊班膦酸、帕米膦酸、利塞膦酸、米诺膦酸、奥帕膦酸、阿仑膦酸、英卡膦酸、及其盐。在一些实施方案中,所述其他治疗剂是化疗剂,所述化疗剂包括但不限于烷化剂、鬼臼类、喜树碱类、紫杉类、抗代谢类和抗生素类,例如铂类药物(顺铂、卡铂、奥沙利铂)、蒽环类(例如阿霉素或表阿霉素)、紫杉烷类(例如紫杉醇)、氟嘧啶衍生物(例如5-氟尿嘧啶或吉西他滨)、及其前药。在一些实施方案中,所述其他治疗剂是稳定或增加CLDN18.2表达的药剂,例如表柔比星、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、伊立替康、多西他赛、顺铂、吉西他滨、及其前药。
“治疗”是指减轻症状、病症、病况或疾病的进展或严重程度的方法。本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段、核酸分子、药物组合物、重组多肽、融合蛋白、多特异性抗体、免疫缀合物、嵌合抗原受体或基因载体可以施用至受试者,以治疗所述受试者的癌症。在一些实施方式中,所述受试者为人。
基于以下具体描述和实施例,当前公开内容的其他特征和优势之处将会更加明晰,具体描述和实施例不应解读为限制性的。在本申请中引用的所有文献、Genbank记录、专利和已公开专利申请的内容通过引用的方式明确地包含在本文中。
图1嵌合抗体xi40F6、xi34G6、xi10D8、xi22F12和xi28G3与U2OS-CLDN18.2细胞(A-C)、NUGC-4细胞(D-F)和KATOIII细胞(G-I)的结合活性。
图2嵌合抗体xi22F12、xi28G3、xi40F6和xi34G6的ADCC活性,其中Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase为效应细胞,KATOIII(A)、NUGC-4(B)和U2OS-CLDN18.2(C)为靶细胞。
图3嵌合抗体xi22F12、xi28G3、xi40F6和xi34G6的ADCC活性,其中PBMC为效应细胞,KATOIII(A)和NUGC-4(B)为靶细胞。
图4嵌合抗体xi22F12、xi28G3、xi40F6、xi34G6和xi10D8的CDC活性,其中KATOIII(A)和U2OS-CLDN18.2(B)为靶细胞。
图5嵌合抗体xi28G3和xi40F6的内吞活性,其中NUGC-4(A)和NIH-3T3-CLDN18.2(B)为靶细胞。
图6嵌合抗体xi22F12、xi28G3、xi40F6、xi34G6和xi10D8的非特异性ADCC活性,其中Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase为效应细胞,NIH-3T3-CLDN18.1为靶细胞。
图7嵌合抗体xi28G3以及人源化抗体hz28G3-1.1、hz28G3-1.2、hz28G3-1.3、hz28G3-1.4、hz28G3-2.1、hz28G3-2.2、hz28G3-2.3和hz28G3-2.4与NUGC-4细胞(A)和KATOIII细胞(B)的结合活性。
图8嵌合抗体xi40F6以及人源化抗体hz40F6-1.1、hz40F6-1.2、hz40F6-1.3、hz40F6-1.4、hz40F6-2.1、hz40F6-2.2、hz40F6-2.3和hz40F6-2.4与NUGC-4细胞(A)和KATOIII细胞(B)的结合活性。
图9嵌合抗体xi28G3以及人源化抗体hz28G3-1.1、hz28G3-1.2、hz28G3-1.3、hz28G3-1.4、hz28G3-2.1、hz28G3-2.2、hz28G3-2.3和hz28G3-2.4的ADCC活性,其中Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase为效应细胞,U2OS-CLDN18.2(A)和KATOIII(B)为靶细胞。
图10嵌合抗体xi40F6以及人源化抗体hz40F6-1.1、hz40F6-1.2、hz40F6-1.3、hz40F6-1.4、hz40F6-2.1、hz40F6-2.2、hz40F6-2.3和hz40F6-2.4的ADCC活性,其中Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase为效应细胞,NIH-3T3-CLDN18.2(A)和NUGC-4(B)为靶细胞。
图11嵌合抗体xi28G3以及人源化抗体hz28G3-1.1、hz28G3-1.3和hz40F6-1.4的ADCC活性,其中PBMC为效应细胞,NIH-3T3-CLDN18.2(A)、KATOIII(B)和NUGC-4(C)为靶细胞。
图12嵌合抗体xi28G3以及人源化抗体hz28G3-1.1、hz28G3-1.3、hz40F6-1.1、hz40F6-1.2、hz40F6-1.3、hz40F6-1.4、hz40F6-2.1、hz40F6-2.2、hz40F6-2.3和hz40F6-2.4的CDC活性,其中NIH-3T3-CLDN18.2为靶细胞。
图13嵌合抗体xi28G3以及人源化抗体hz28G3-1.1和hz28G3-1.3的内吞活性,其中U2OS-CLDN18.2(A)和NUGC-4(B)为靶细胞。
图14嵌合抗体xi28G3以及人源化抗体hz28G3-1.1和hz28G3-1.3的非特异ADCC活性,其中PBMC为效应细胞,NIH-3T3-CLDN18.1为靶细胞。
应当理解,本文所用的术语只是为了描述具体实施例,并非旨在进行限制。除非另有定义,否则本文使用的所有技术和科学术语的含义与本申请所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。
术语“抗体”是指具有至少一个抗原(例如CLDN18.2)结合结构域的结合蛋白。本申请的抗体或其抗原结合片段可以是整个抗体或其任何片段,包括单克隆抗体或其片段和抗体变体或其片段。抗体或其抗原结合片段的实例包括单克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体、Fab片段、F(ab’)2片段、Fd片段、Fv片段、dAb、分离的CDR区、单链Fv(scFv)、纳米抗体和本领域任何已知的抗体片段。本文公开的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。术语“同种型”是指由重链 恒定区基因编码的抗体种类。在一些实施方案中,本文公开的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段是IgG1同种型。本申请公开的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段可以衍生自任何物种,包括但不限于小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物(如黑猩猩、食蟹猴、蜘蛛猴、猕猴)、美洲驼和人。本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段可以是鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。除非另有说明,否则本申请的“抗体”包括全长抗体及其任何抗原结合部分(或“抗原结合片段”)或单链。
典型的“全长抗体”是包含两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白,其中重链和轻链通过二硫键连接,每条重链由重链可变区(VH)和重链恒定区组成,重链恒定区由三个结构域组成,即CH1、CH2和CH3,每条轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区组成,轻链恒定区由一个结构域CL组成,VH和VL区还可以划分为高变区(即,互补决定区(CDR))和序列较为保守的骨架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成,从氨基端到羧基端以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排布。抗体的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合,所述宿主组织或因子包括多种免疫***细胞(例如,效应细胞)和经典补体***的第一成分(C1q)。
抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”是指抗体的一个或多个片段,其保留特异性结合抗原(例如,CLDN18.2蛋白)的功能。已证实,抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来实施。涵盖在术语抗体的“抗原结合部分/片段”中的实例包括:(i)Fab片段:由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段;(ii)F(ab')2片段,包含在铰链区通过二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段;(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段;(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段;(v)由VH结构域组成的dAb片段(参见Ward et al.,Nature.341:544-546(1989));(vi)分离的互补决定区(CDR);以及(vii)纳米抗体,一种包含单个重链可变结构域和两个恒定结构域而无轻链的抗体。此外,尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由不同基因编码,但可以采用重组的方法通过接头将VH和VL连接成单蛋白链,其中VL和VH配对形成单价分子称单链Fv(scFv);参见Bird et al.,Science.242:423-426(1988);Huston et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883(1988),这些单链抗体也涵盖在术语“抗原结合部分/片段”中。此外,包含该抗原结合部分/片段的重组多肽、融合蛋白和免疫缀合物也涵盖在术语“抗原结合部分/片段”中。这些抗体片段可以由本领域技术人员通过已知的常规技术获得,且片段可以通过与全长抗体相同的方法进行功能筛选。
“小鼠抗体”或“鼠源抗体”是指可变区中骨架区和CDR区均来自小鼠种系免疫球蛋白序列的抗体。此外,如果抗体包含恒定区,则恒定区也来自小鼠种系免疫球蛋白序列。本申请的鼠源抗体可包括不由小鼠种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如,通过体外随机突变或点突变或通过体内体细胞突变引入的突变),但“小鼠抗体”或“鼠源抗体”不包括在小鼠骨架序列中***源自其他哺乳动物种系CDR序列的抗体。
“嵌合抗体”是将鼠源抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体,可以减轻鼠源抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体,首先要建立分泌鼠源特异性单抗的杂交瘤,然后从杂交瘤细胞中克隆可变区基因,再根据需要克隆人抗体的恒定区基因,将鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后***表达载体中,最后在真核***或原核***中表达嵌合抗体。在本申请中,嵌合抗体也被表示为“xi”。
“人源化抗体”是下述抗体:所述抗体含有衍生自非人抗体的互补决定区(CDR)和衍生自人抗体的骨架区以及恒定区。例如,本文提供的结合CLDN18.2的人源化抗体可以包含衍生自一种或多种鼠源抗体的CDR以及人骨架区和人恒定区。因此,在一些实施方案中,本文提供的人源化抗体与所述抗体的CDR所衍生自的鼠源抗体结合CLDN18.2上的相同表位。本文提供了示例性人源化抗体。包含本文提供的重链CDR和轻链CDR的另外的结合CLDN18.2的人源化抗体或其变体可以使用任何人骨架序列产生,并且也包括在本申请中。在一些实施方案中,适用于在本申请中使用的骨架序列包括在结构上与本文提供的骨架序列类似的那些骨架序列。可以在骨架区中进行另外修饰以改变本文提供的抗体的特性。此类另外的骨架修饰可以包括化学修饰,点突变以降低免疫原性或去除T细胞表位,或回复突变为原始种系序列中的残基。在一些实施方案中,此类另外的修饰包括对应于本文示例的突变的那些修饰,包括对种系序列的回复突变。例如,在一些实施方案中,本文提供的人源化抗体的VH和/或VL的人骨架区中的一个或多个氨基酸被回复突变为亲本鼠源抗体中对应的氨基酸。在本申请中,人源化抗体也被表示为“hz”。
本文所述的“衍生的”,在用于指相对于参考抗体或其他结合蛋白的分子或多肽时,意指能够与参考抗体或其他结合蛋白特异性地结合相同表位的分子或多肽。
“分离的”是指已经从其天然环境中分离的目标化合物(例如,抗体、抗原结合片段或核酸分子)。
“同一性”是指两个或多个核酸序列之间或两个或多个多肽序列之间的相似性。本申请的序列同一性可至少为85%、90%或95%,优选为至少95%。非限制性实施例包括:85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。两个序列之间的序列比较和同一性百分比测定可以通过National Center For Biotechnology Institute网站上的BLASTN/BLASTP算法的默认设置来进行。
“竞争结合”的抗体指部分或完全阻断其他抗体与靶标结合的抗体。两种抗体是否彼此竞争结合靶 标,即一种抗体是否阻断另一抗体结合靶标且至何种程度,可以使用本领域已知的竞争实验来确定,例如固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心式竞争测定等。在某些实施方案中,抗体与另一抗体竞争结合靶标并使另一抗体与靶标的结合阻断至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。
两种或多种抗体“结合相同表位”意指抗体结合氨基酸残基的相同区段,如通过给定方法测定。用于确定抗体是否与本文所述抗体结合“CLDN18.2上相同的表位”的技术包括例如表位作图方法,诸如,酵母表面展示表位绘制法、抗原:抗体复合物的晶体的x射线分析和氢/氘交换质谱法(HDX-MS)。
术语“EC50”,又称半数有效浓度,是指在特定暴露时间后,能达到50%最大效应的抗体浓度。术语“IC50”,又称半数抑制浓度,是指相对于不存在抗体的情况,将特异性生物学或生化功能抑制50%的抗体浓度。EC50和IC50两者均可以通过ELISA或FACS分析或本领域已知的任何其他方法进行测量。
“患者”或“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物,例如哺乳动物及非哺乳动物,优选哺乳动物,例如非人的灵长类动物、绵羊、狗、猫、牛和马。
“有效剂量”或“有效量”是指足以实现或至少部分实现期望效果的量。药物或治疗剂的治疗“有效量”或“有效剂量”是指当单独或与另一治疗剂组合使用时,足以防止或改善疾病或病症相关症状的量,优选引起疾病症状的严重程度降低、无症状期频率和持续时间增加、或防止由疾病引起的损伤或无能的量。治疗有效量与被治疗的疾病相关,其中本领域技术人员可以方便地判别出实际的有效量。
如本文所用,“约”表示在本领域普通技术人员判定的对特定值可以接受的误差范围内,其部分取决于如何测量或测定该值,即测量***的限制。例如,“约”按照本领域实践可表示1倍或超过1倍标准偏差以内。或者,“约”可以表示多至±5%的范围,例如在所给定的具体数值范围±2%范围内、±1%范围内或±0.5%范围内波动。当本申请或权利要求中给出特定值时,除非另有说明,“约”的含义应认为是在该特定值的可接受的误差范围内。在本文中,除非另有说明,步骤参数或条件的值默认均由“约”修饰。
除非另外特别说明,否则词语“一个”或“一种”意指“至少一个”或“至少一种”,短语“至少一个”的含义等同于“一个或多个”的含义,“和/或”的使用意指“和”或者“或”。
如本文中所述,任何百分比范围、比率范围或整数范围应当理解为包括在列举的范围内的任意整数的值,除非另外指出。
在本文中,除非上下文另有规定,词语“包含”、“包括”和“含有”将被理解为表示包括所述的步骤或要素或一组步骤或要素,但不排除任何其他步骤或要素或一组步骤或要素。“由……组成”所表示的是包括并且限于短语“由……组成”定义的内容。因此,短语“由……组成”表示所列出的要素是需要的或必需的,并且没有其他要素可存在。“基本由……组成”所表示的是包括此短语定义的任意要素,并且限于不妨碍或有助于所列的要素的如在本申请详述的活性或作用的其他要素。因此,短语“基本由……组成”表示所列出的要素是需要的或必需的,但其他要素是可选的并可取决于其是否影响所列出的要素的活性或作用而存在或不存在。
在本文中,除非另有说明,术语“核酸”、“核酸序列”和“基因”可互换使用,表示两个以上的核苷酸之间借助磷酸二酯键连接成的产物。
除非上下文另有明确指示,单数术语涵盖复数的指示对象,反之亦然。
本申请的多个方面在以下更加具体地加以描述。
本申请的示例性抗体或其抗原结合片段的重链可变区、轻链可变区和CDR的氨基酸序列ID(SEQ ID NO.)提供于下表1中。一些抗体具有相同的CDR,一些抗体具有相同的VH或VL。抗体的重链恒定区可以是人IgG1、IgG2、IgG4恒定区或其变体,优选人IgG1恒定区或其变体,例如包含SEQ ID NO:61所示氨基酸序列或与SEQ ID NO:61所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除和添加的氨基酸序列。抗体的轻链恒定区可以是人κ恒定区、人λ恒定区或其变体,优选人κ恒定区或其变体,例如包含SEQ ID NO:62所示氨基酸序列或者与SEQ ID NO:62所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除和添加的氨基酸序列。这些抗体也可以包含小鼠IgG1重链恒定区和/或小鼠κ恒定区。
表1 可变区和CDR的氨基酸序列ID(SEQ ID NO.)
术语“互补决定区”、“CDR”或“高变区”是指抗体的可变区内主要促成抗原结合的6个高变区之一。鉴于抗体可变区的氨基酸序列,本领域技术人员可以使用各种公知的方案来确定CDR的氨基酸序列边界,包括“Kabat”编号规则(参见Kabat等(1991),“Sequences of Proteins of Immunological Interest”,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD)、“Chothia”编号规则(参见Al-Lazikani等人,(1997)JMB273:927-948)、ImMunoGenTics(IMGT)编号规则(Lefranc M.P.,Immunologist,7,132-136(1999);Lefranc,M.P.等,Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003))、AbM编号规则(Oxford Molecular的AbM抗体建模软件定义)和Contact编号规则(基于对可用复杂晶体结构的分析)等,以及Kabat、Chothia、IMGT、AbM和Contact等编号规则中的二种或多种组合。例如,对于经典格式,遵循Kabat规则,所述重链可变区(VH)中CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3);轻链可变区(VL)中CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。例如,遵循Chothia规则,VH中CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3);并且VL中CDR氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。通过组合Kabat和Chothia两者的规则,CDR由人VH中氨基酸残基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)和人VL中氨基酸残基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)构成。遵循IMGT规则,VH中CDR氨基酸残基编号大致为26-35(CDR1)、51-57(CDR2)和93-102(CDR3),VL中CDR氨基酸残基编号大致为27-32(CDR1)、50-52(CDR2)和89-97(CDR3)。遵循IMGT规则,抗体的CDR可以使用程序IMGT/DomainGapAlign确定。
在不同的编号***中,CDR的氨基酸序列边界有所不同。本领域技术人员应当理解的是,除非另有规定,否则术语给定抗体或其区(例如可变区)的“CDR”及“互补决定区”涵盖通过任何已知方案界定的互补决定区。虽然表1和表11中示出的CDR序列是根据上述编号规则中的一种进行定义的,但根据其它CDR编号规则所对应的氨基酸序列也应当落在本申请的保护范围中。
与人CLDN18.2结合的其他抗体的VH和/或VL序列(或CDR序列)可以与本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段的VH和/或VL序列(或CDR序列)“混合并配对”。优选地,当VH和VL链(或其CDR)混合并配对时,特定VH/VL对中的VH序列可以由结构相似的VH序列取代。同样,优选地将特定VH/VL对中的VL序列取代为结构相似的VL序列。
因此,在一个实施方案中,本申请的抗体或其抗原结合片段包括:
(a)重链可变区,其包含列于表1中的氨基酸序列;和
(b)轻链可变区,其包含列于表1中的氨基酸序列,或另一种抗CLDN18.2抗体的VL,其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人CLDN18.2。
在另一个实施方案中,本申请的抗体或其抗原结合片段包括:
(a)列于表1的HCDR1、HCDR2和HCDR3;和
(b)列于表1的LCDR1、LCDR2和LCDR3,或另一种抗CLDN18.2抗体的轻链可变区CDR,其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人CLDN18.2。
在另一个实施方案中,本申请的抗体或其抗原结合片段包括列于表1的HCDR2以及其他抗CLDN18.2抗体的CDR(s),例如其他抗CLDN18.2抗体的HCDR1和/或HCDR3,和/或其他抗CLDN18.2抗体LCDR1、LCDR2和/或LCDR3。
此外,本领域内公知,CDR3结构域独立于CDR1和/或CDR2结构域,可以单独确定抗体对同种抗原的结合特异性,并且可以预测到基于该CDR3序列可产生具有相同结合特异性的多种抗体。
在另一个实施方案中,本申请的抗体或其抗原结合片段包含列于表1的HCDR2,以及列于表1的 HCDR3和/或列于表1的LCDR3,以及其他抗CLDN18.2抗体的CDR(s),其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人CLDN18.2。在另一个实施方案中,本申请的抗体或其抗原结合片段还包含列于表1的LCDR2,以及其他抗CLDN18.2抗体的CDR(s),其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人CLDN18.2。在另一个实施方案中,本申请的抗体或其抗原结合片段还包括列于表1的HCDR1或列于表1的LCDR1,以及其他抗CLDN18.2抗体的CDR(s),其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人CLDN18.2。这些抗体优选与本申请的抗CLDN18.2抗体(a)竞争结合人CLDN18.2;(b)保留相同的功能特征;(c)结合相同的表位;和/或(d)具有相似的结合亲和力。
在另一个实施方案中,本申请的抗体或其抗原结合片段的重链可变区和/或轻链可变区可以包含一个或多个保守修饰。本领域应理解,一些保守修饰不会使抗体的抗原结合性消失。
因此,在一个实施方式中,本申请的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和/或轻链可变区,重链可变区和轻链可变区分别包含CDR1、CDR2和CDR3,其中:
(a)HCDR1序列包含表1列出的序列,和/或其保守修饰;和/或
(b)HCDR2序列包含表1列出的序列,和/或其保守修饰;和/或
(c)HCDR3序列包含表1列出的序列,和/或其保守修饰;和/或
(d)LCDR1和/或LCDR2和/或LCDR3序列包含表1列出的序列;和/或其保守修改;且
(e)抗体或其抗原结合片段特异性结合人CLDN18.2。
本文所用的术语“保守修饰”是指不显著影响或改变抗体结合特性的氨基酸修饰。这样的保守修饰包括氨基酸取代、添加和删除。可以通过本领域已知的标准技术将修饰引入本申请的抗体中,例如点突变和PCR介导的突变。保守氨基酸取代是指氨基酸残基被具有类似结构或化学特性(例如,相似侧链)的氨基酸残基取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族在本领域中已知。这些氨基酸残基家族包括具有碱性侧链(例如,赖氨酸、精氨酸、组氨酸),酸性侧链(例如,天冬氨酸、谷氨酸),不带电极性侧链(例如,甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸),非极性侧链(例如,丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸),β支链侧链(例如,苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如,酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此,本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段的CDR区中一个或多个氨基酸残基可以被同一侧链家族的其他氨基酸残基取代,且得到的抗体可以使用本文所述的功能检测对其进行功能测试。
本申请的抗体或其抗原结合片段包含可变区(包括CDR区和/或骨架区)的修饰,或者,本申请的抗体或其抗原结合片段还可以包含Fc修饰,例如改善抗体的效应功能。
因此,本申请的一个实施方案提供分离的抗CLDN18.2单克隆抗体或其抗原结合片段,其包含重链可变区和/或轻链可变区,重链可变区包含本申请上述序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3,轻链可变区包含本申请上述序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3,但包含不同于本申请上述序列中骨架序列的骨架。这样的骨架序列可以从包括种系抗体基因序列的公开DNA数据库或公开参考文献中获得。这样的骨架序列优选地是与本申请的抗CLDN18.2抗体所用的骨架序列在结构上相似的那些。例如,在一些情况下,对骨架区中的残基进行突变是有益的,可以维持或增强抗体的抗原结合能力(参见,例如,U.S.Pat.Nos.5,530,101;5,585,089;5,693,762和6,180,370)。
另一种类型的可变区修饰是将CDR1、CDR2和/或CDR3区内的氨基酸残基进行突变,从而改善目标抗体的一种或多种特性(例如,亲和力、理化性质)。可以通过点突变或PCR介导的突变引入突变,并可通过本领域已知的体外或体内测定评估突变对抗体结合或其他功能特性的影响。可以是对氨基酸进行取代、添加或删除,优选为取代。此外,通常改变每个CDR区内不多于一个、两个、三个、四个或五个的残基。
在一个实施方案中,本申请提供的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区,所述重链可变区和轻链可变区包含:(a)HCDR1,包含本申请的HCDR1序列,或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列;(b)HCDR2,其包含本申请的HCDR2序列,或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列;(c)HCDR3,其包含本申请的HCDR3序列,或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列;(d)LCDR1,其包含本申请的LCDR1序列,或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列;(e)LCDR2,其包含本申请的LCDR2序列,或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列;和(f)LCDR3,其包含本申请的LCDR3序列,或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列。
本申请的抗体或其抗原结合片段包括VH和/或VL的骨架区修饰,以改善抗体特性。通常,此类骨架区修饰可以降低抗体的免疫原性。例如,将一个或多个骨架残基“回复突变”为相应的种系序列。这些残基可以通过将抗体骨架序列与得到抗体的种系序列相比较而识别出来。
另一种类型的骨架修饰包括对骨架区、或者甚至一个或多个CDR区的一个或多个残基进行突变,以去除T细胞表位,从而减少抗体可能导致的免疫原性。该方法也称为“去免疫原性”,在美国专利公开号 20030153043中有更详细描述。
此外,本申请的抗体或其抗原结合片段包括Fc修饰,Fc修饰可以是氨基酸***、缺失或取代,通常用来改变抗体一种或多种功能特性,例如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。
此外,本申请的抗体或其抗原结合片段还可以进行化学修饰(例如,连接一个或多个化学功能基团),或修饰以改变其糖基化,来改变抗体的一种或多种功能特性。在其他实施方案中,通过聚乙二醇化(例如,通过使抗体或其片段与聚乙二醇(PEG)反应来修饰Fc区)。在其他实施方案中,改变抗体的糖基化。
本申请还提供编码本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段的重链可变区和/或轻链可变区或CDR的分离的核酸分子。本申请的核酸分子可以为DNA或RNA,且可能包含或可能不包含内含子序列。本申请的核酸分子可以为单链或双链。在优选实施方式中,核酸分子是cDNA分子。
本申请的核酸可以通过标准的分子生物学技术获得。对于由杂交瘤表达的抗体,可以通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得编码杂交瘤制备的抗体的轻链和重链的cDNA。对于从免疫球蛋白基因文库(例如使用噬菌体展示技术)中获得的抗体,可以从基因文库中回收编码这类抗体的核酸。
一旦获得了编码VH和VL的DNA片段,可以通过标准重组DNA技术对这些DNA片段进行进一步操作,例如将可变区基因转变为全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中,将编码VH或VL的DNA片段与编码另一蛋白(例如抗体恒定区或柔性接头)的DNA片段可操作地连接。这种情况下所使用的术语“可操作地连接”是指两个DNA片段连接在一起,从而使两个DNA片段编码的氨基酸序列都在阅读框内。
将编码VH的DNA与编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一DNA分子可操作地连接,可以将编码VH的分离的DNA转变成全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的,且可以通过标准PCR扩增获得包括人重链恒定区基因的DNA片段。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区,但优选为IgG1恒定区。
将编码VL的DNA与编码轻链恒定区CL的另一DNA分子可操作地连接,可以将编码VL的分离的DNA转变成全长轻链基因。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的,且可以通过标准PCR扩增获得包括人轻链恒定区基因的DNA片段。在优选的实施方案中,轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。
本申请的单克隆抗体(mAbs)可以使用本领域熟知的Kohler and Milstein(1975)Nature 256:495的体细胞杂交(杂交瘤)技术进行制备。制备单克隆抗体的其他实施方案包括B淋巴细胞的病毒或致癌性转化以及噬菌体展示技术。嵌合或人源化抗体也是本领域熟知的。参见,例如美国专利4,816,567;5,225,539;5,530,101;5,585,089;5,693,762和6,180,370,其全部内容通过引用的方式明确地并入本文。
本申请的抗体还可以使用例如重组DNA技术结合基因转染的方法,在宿主细胞转染瘤中制备(例如Morrison,S.(1985)Science 229:1202)。在一个实施方案中,将通过标准分子生物技术得到的编码部分或全长轻链和重链的DNA***一个或多个表达载体中,使得基因可操作地连接至转录和翻译调控序列。在这种情况下术语“可操作地连接”是指抗体基因连接到载体中,使得载体内的转录和翻译调控序列行使它们既定的调控抗体基因转录和翻译的功能。术语“调控序列”包括控制抗体基因转录或翻译的启动子、增强子和其他表达控制元件(例如,多腺苷酸化信号)。
抗体轻链基因和抗体重链基因可以***到同一或不同的表达载体中。在优选的实施方案中,将可变区***到已经编码所需同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中构建全长抗体基因,使VH与载体中的CH可操作地连接,VL与载体中的CL可操作地连接。此外,或者,重组表达载体可以编码促进抗体链从宿主细胞分泌的信号肽。抗体链基因可以克隆到载体中,使得信号肽在阅读框内连接到抗体链基因的氨基端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即,来自非免疫球蛋白的信号肽)。
为了表达轻链和重链,通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染到宿主细胞中。术语“转染”包括多种将外源DNA引入原核或真核宿主细胞中的技术,例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。尽管在原核或真核宿主细胞中表达本申请的抗体在理论上是可行的,但抗体优选在真核细胞中表达,最优选在哺乳动物宿主细胞中表达,因为真核细胞、特别是哺乳动物细胞比原核细胞更可能组装抗体并分泌适当折叠且有免疫活性的抗体。优选的用于表达本申请的重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括与DHFR可选择标记物一起使用的dhfr-CHO细胞,在Urlaub and Chasin,(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220中有过描述,DHFR可选择标记物在例如R.J.Kaufman and P.A.Sharp(1982)J.Mol.Biol.159:601-621中描述)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。当编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞后,通过将宿主细胞培养足以使得宿主细胞中抗体表达、或优选足以使得使抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中的一段时间来制备抗体。抗体可以使用标准蛋白纯化方法从宿主细胞或其细胞培养物中回收。
另一方面,本申请提供了药物组合物,其包含本申请的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段、核酸分子、重组多肽、融合蛋白、多特异性抗体、免疫缀合物、嵌合抗原受体或基因载体,以及药学上可接受的载体或赋形剂。术语“药学上可接受的载体或赋形剂”表示可用于制备药用组合物的载体或赋形剂,它们 通常是安全、无毒和无生物活性及无害,包括兽医用和人药用的载体或赋形剂。
本申请的药物组合物适合于静脉内、肌内、皮下、肠道外、脊柱或表皮施用(例如通过注射或输注)。基于给药途径,可以将活性成分包被在材料中,以保护其不受酸和可能使其失活的其他自然条件的影响。本文所用的短语“肠道外施用”是指除肠内和局部施用以外的施用方式,通常采用注射,并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。或者,本申请的药物组合物可以通过非肠道外途径施用,例如局部、表皮或粘膜途径施用,如鼻内、口服、***、直肠、舌下或局部施用。
本申请的药物组合物可以为无菌水溶液或分散液的形式。它们也可以配制在微乳剂、脂质体或其他适于高浓度药物的有序结构中。
给药方案经调整提供最佳的所需反应(例如,治疗反应)。例如,可以施用单次大剂量,可以随时间推移施用多个分剂量,或者可以随治疗情况的危急程度成比例降低或提高剂量。或者,抗体可以作为缓释剂施用,这种情况下所需的施用频率降低。
对于抗体的施用,剂量可以为约0.0001至100mg/kg宿主体重的范围内。
尽管为了清楚理解的目的,已经通过举例说明和实施例相当详细地描述了前述发明,但是根据本申请的教义,本领域的普通技术人员将显而易见的是,可另外对本申请进行某些改变和修改而不背离所附权利要求的精神和范围。本申请通过以下实施例进一步说明,并非旨在进行限制。本领域的技术人员将容易地识别多种非关键性参数,所述参数可发生改变或修改以产生基本上类似的结果。
除非另外指出,否则本申请的实践将采用本领域技术范围内的蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学的常规方法。如下实施例中涉及的各试剂、材料和仪器,除非另有说明,可采用本领域可商购的那些。
实施例
实施例1抗CLDN18.2杂交瘤单克隆抗体的产生
稳定细胞系的构建
将编码人CLDN18.2(SEQ ID NO:1)的cDNA通过基因合成获得,然后亚克隆到表达载体pcDNA3.1中。按照Lipofectamine 2000转染试剂(Thermo,目录号11668019)的说明书,将表达载体分别转染到U2OS细胞和NIH-3T3细胞中,获得稳定细胞系U2OS-CLDN18.2和NIH-3T3-CLDN18.2。
将编码人CLDN18.1(SEQ ID NO:2)的cDNA通过基因合成获得,然后亚克隆到表达载体pcDNA3.1中。按照Lipofectamine 2000转染试剂(Thermo,目录号11668019)的说明书,将表达载体分别转染到U2OS细胞和NIH-3T3细胞中,获得稳定细胞系U2OS-CLDN18.1和NIH-3T3-CLDN18.1。
小鼠免疫
用免疫原NIH-3T3-CLDN18.2细胞免疫BALB/c小鼠,每只小鼠腹腔注射5×10
6-10×10
6个NIH-3T3-CLDN18.2细胞,每2周免疫一次,免疫5次。融合前3天,每只小鼠腹腔注射1×10
7个NIH-3T3-CLDN18.2细胞来冲刺免疫。免疫结束后,采集每只小鼠的血清进行抗CLDN18.2特异性抗体滴度检测。选取抗体滴度较高的小鼠进行后续的脾细胞融合。
细胞融合
采用电融合技术,使用电融合仪(BTX,ECM2001)将来自免疫小鼠的脾细胞(1×10
8个)与SP2/0骨髓瘤细胞(5×10
7个)进行融合得到杂交瘤细胞。融合后,将细胞用HAT完全培养基重悬,以0.2mL/孔分配到96孔板中,并在37℃、含5%CO
2的培养箱中进行培养,7-10天后,取杂交瘤细胞培养上清进行检测。
杂交瘤的筛选
通过ELISA检测抗体与CLDN18.2的结合活性。将U2OS-CLDN18.2细胞以10000个/孔分配到96孔板中,于37℃、含5%CO
2的培养箱中过夜培养。弃去细胞培养上清,用PBS缓冲液洗涤96孔板3次,加入2%多聚甲醛于室温固定30分钟。用PBS缓冲液洗涤96孔板3次,每孔加入100μL杂交瘤细胞培养上清,于室温孵育1小时。用PBS缓冲液洗涤96孔板3次,每孔加入100μL HRP-Goat Anti-Mouse IgG Fcγ(Jackson immunoresearch,目录号115-035-071),于室温孵育1小时。用PBS缓冲液洗涤96孔板3次,每孔加入100μL TMB(Thermo,目录号00-4201-56),孵育10分钟,然后每孔加入50μL终止溶液(2N H
2SO4)以停止反应。使用酶标仪(Thermo,Varioskan Flash)在450nm波长下读取OD值。
选取经ELISA检测呈阳性的杂交瘤细胞,通过FACS方法检测所述杂交瘤细胞培养上清中的抗体与天然表达CLDN18.2的细胞系KATOIII和NUGC-4的结合活性(方法参见实施例3)。
实施例2抗CLDN18.2嵌合抗体的产生
cDNA的获取
选取经ELISA和FACS检测呈阳性的杂交瘤细胞(28G3、40F6、22F12、34G6和10D8),使用总RNA提取试剂盒(Takara,目录号9767)从细胞中分离出总RNA作为模板,按照试剂盒(Thermo,目录号 18080051)说明书使用superscript III逆转录酶合成第一链cDNA。以第一链cDNA作为模板,然后使用小鼠IgG引物和Kappa引物通过PCR反应扩增抗体的重链可变区和轻链可变区序列。将PCR混合物在含有0.5μg/mL溴化乙锭的1%琼脂糖/Tris-硼酸盐凝胶中进行电泳分离。从凝胶上切下具有预期大小的DNA片段并且对其进行纯化。将纯化的PCR产物克隆到pMD-19T载体(Takara,目录号6013)中,并转入到DH5α感受态大肠杆菌细胞(Takara,目录号9057)中在LB固体培养平板上进行培养。从LB固体培养平板上挑取单菌落进行DNA测序。得到抗体(鼠源抗体28G3、40F6、22F12、34G6和10D8)的重链可变区序列和轻链可变区序列。
嵌合抗体的构建和表达
通过敲除岩藻糖表达相关基因FUT8可以提高IgG1与FcgRIIIa的相互作用,进而增强抗体的ADCC活性(Shields et al.,2002;Yamane-Ohnuki et al.,2004)。在本实施例中,采用FUT8敲除的CHO-S细胞(命名为CHO-S Fut8-/-细胞)制备去岩藻糖基化的抗体。
将小鼠VL区基因片段连接到人κ链恒定区来构建嵌合轻链,将小鼠VH区基因片段连接到人IgG1恒定区来构建嵌合重链。将对应于每个抗体的嵌合重链表达质粒和嵌合轻链表达质粒共转染至CHO-S Fut8-/-细胞中进行蛋白表达。转染后的细胞在37℃、含8%CO
2条件下培养。培养7-10天后,离心得到细胞培养上清,用Protein A柱(GE healthcare)纯化细胞培养上清中的嵌合抗体。其中,所述人κ轻链恒定区具有SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列,所述人IgG1恒定区具有SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。
实施例3抗CLDN18.2抗体结合活性的测定
基于FACS的方法,分析抗CLDN18.2抗体与过表达CLDN18.2的细胞系U2OS-CLDN18.2、天然表达CLDN18.2的细胞系KATOIII(中科院细胞库)和NUGC-4(中科院细胞库)的结合活性。IMAB362(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:63和64所示)作为阳性对照,IgG1同型对照抗体(在本申请的实施例中又表示为IgG1,内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:67和68所示)作为阴性对照。
用PBS调整细胞浓度,将细胞(U2OS-CLDN18.2、KATOIII或NUGC-4细胞)按3×10
5个/孔分配到96孔培养板中,然后将不同浓度的待测抗体加入到96孔培养板的各孔中,于4℃孵育60分钟。针对KATOIII和NUGC-4细胞:使xi40F6和xi34G6抗体的终浓度为300nM、100nM、33.33nM、11.11nM、3.7nM、1.23nM、0.41nM和0.14nM,使xi10D8、xi22F12和xi28G3抗体的终浓度为300nM、60nM、12nM、2.4nM、0.48nM、0.096nM、0.0192nM和0.00384nM;针对U2OS-CLDN18.2细胞:使待测抗体的终浓度为150nM、50nM、16.67nM、5.56nM、1.85nM、0.62nM、0.21nM和0.07nM。弃上清,用预冷PBS缓冲液洗涤细胞3次,每孔加入100μL按照1:200稀释的PE-Goat Anti-Human IgG Fcγ(Jackson immunoresearch,目录号109-116-170),于4℃孵育30分钟。用预冷PBS缓冲液洗涤细胞3次,用100uL PBS缓冲液重悬细胞,然后使用流式细胞仪(Sartorius,iQUE3)检测荧光信号。通过染色的平均荧光强度(MFI)来测量抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2的结合能力。
抗CLDN18.2嵌合抗体与U2OS-CLDN18.2、KATOIII和NUGC-4细胞的结合活性如图1所示,结合EC50数据如表2.1、表2.2和表2.3所示,xi28G3、xi40F6、xi22F12和xi34G6在三种不同细胞上的结合活性均优于IMAB362,xi10D8与IMAB362的结合活性相当。
表2.1 抗CLDN18.2嵌合抗体在细胞水平上结合的EC50
表2.2 抗CLDN18.2嵌合抗体在细胞水平上结合的EC50
表2.3 抗CLDN18.2嵌合抗体在细胞水平上结合的EC50
实施例4抗CLDN18.2抗体的非特异性结合
基于FACS的方法,分析抗CLDN18.2抗体与过表达CLDN18.1(SEQ ID NO:2)的细胞系U2OS-CLDN18.1的结合活性。用PBS调整细胞浓度,将U2OS-CLDN18.1细胞按3×10
5个/孔加入到96孔培养板中,然后将待测抗体加入到96孔培养板的各孔中,使抗体的终浓度为200nM,于4℃孵育60分钟。弃上清,用预冷PBS缓冲液洗涤细胞3次,每孔加入100μL按照1:200稀释的PE-Goat Anti-Human IgG Fcγ(Jackson immunoresearch,目录号109-116-170),于4℃孵育30分钟。用预冷PBS缓冲液洗涤细胞3次,用100uL PBS缓冲液重悬细胞,然后使用流式细胞仪(Sartorius,iQUE3)检测荧光信号。通过染色的平均荧光强度(MFI)来测量抗CLDN18.2抗体与U2OS-CLDN18.1细胞的非特异性结合,IgG1同型对照抗体(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:67和68所示)作为对照,以IgG1同型对照抗体的2倍作为基准,判断是否存在非特异性结合。
结果如表3所示,抗CLDN18.2嵌合抗体与对照组IgG1同型对照抗体的MFI值相近,说明抗CLDN18.2嵌合抗体与U2OS-CLDN18.1细胞都无非特异性结合。
表3 抗CLDN18.2嵌合抗体与U2OS-CLDN18.1细胞的非特异性结合
抗体 | MFI |
xi10D8 | 8031 |
xi22F12 | 8943 |
xi28G3 | 7556 |
xi40F6 | 7071 |
xi34G6 | 7633 |
IMAB362 | 6221 |
IgG1 | 6035 |
实施例5抗CLDN18.2抗体的ADCC活性
基于报告基因的方法,分别以KATOIII、NUGC-4和U2OS-CLDN18.2为靶细胞,以稳定转染CD16a v158和NFAT-luciferase的Jurkat细胞(Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase)(BPS Bioscience,目录号60541)为效应细胞,测定抗CLDN18.2抗体的抗体依赖细胞毒性(ADCC)活性。IMAB362(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:63和64所示)作为阳性对照,IgG1同型对照抗体(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:67和68所示)作为阴性对照。
用培养基将KATOIII、NUGC-4和U2OS-CLDN18.2细胞分别稀释至2.4×10
5个/mL,每种细胞悬液以100μL/孔分配到96孔板中,在37℃、含5%CO
2的培养箱中培养过夜。第二天,弃去培养上清,用PBS缓冲液洗涤96孔板1-3次。然后将不同浓度的待测抗体以60μL/孔加到96孔板中,针对KATOIII细胞:使本申请的抗CLDN18.2抗体的终浓度为20nM、2nM、0.2nM、0.02nM、0.002nM、0.0002nM、0.00002nM和0.000002nM,使IMAB362的终浓度为2000nM、200nM、20nM、2nM、0.2nM、0.02nM、0.002nM和0.0002nM;针对NUGC-4细胞:使本申请的抗CLDN18.2抗体和IMAB362的终浓度为1333.33nM、133.33nM、13.33nM、1.33nM、0.133nM、0.0133nM、0.00133nM和0.000133nM;针对U2OS-CLDN18.2细胞:使本申请的抗CLDN18.2抗体与IMAB362的终浓度为1.334nM、0.267nM、0.053nM、0.011nM、0.002nM、0.0004nM和0.00009nM。然后取出Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase细胞,按照效应细胞数目:靶细胞数目=5:1的比例,向96孔板的每孔加入40μL Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase细胞悬液。低速离心使效应细胞和靶细胞充分混匀接触,于37℃、含5%CO
2的培养箱孵育5-6小时,然后按照萤火虫荧光素酶检测试剂盒(诺唯赞,目录号DD1203-03)说明书,每孔加入100μL检测试剂,静置15-30分钟,并使用酶标仪(Thermo,Varioskan Flash)检测荧光信号。
在报告基因实验中,抗CLDN18.2嵌合抗体的ADCC活性如图2所示,EC50数据如表4所示,在三个不同的细胞上,嵌合抗体xi28G3、xi40F6、xi34G6和xi22F12能显著诱导Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase细胞NFAT信号的激活,并且优于IMAB362。
表4 抗CLDN18.2嵌合抗体的ADCC活性(效应细胞为Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase)
基于PBMC杀伤的作用,分别以KATOIII和NUGC-4为靶细胞,以PBMC为效应细胞,检测抗CLDN18.2抗体的ADCC活性。IMAB362(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:63和64所示)和15F9(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:65和66所示)作为阳性对照,IgG1同型对照抗体(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:67和68所示)作为阴性对照。
用培养基将KATOIII和NUGC-4细胞分别稀释至2×10
5个/mL,每种细胞悬液以50μL/孔分配到96孔板中。然后将不同浓度的待测抗体加到96孔板的各孔中,针对KATOIII细胞:使待测抗体的终浓度为66.7nM、8.34nM、1.04nM、0.13nM、0.016nM、0.002nM、0.00025nM和0.00003nM,针对NUGC-4细胞:使待测抗体的终浓度为600nM、100nM、16.67nM、2.78nM、0.46nM、0.077nM、0.013nM和0.002nM。复苏PBMC细胞,按照效应细胞数目:靶细胞数目=20:1的比例向96孔板的每孔加入50μL PBMC细胞悬液(细胞密度为4×10
6个/mL)。低速离心使效应细胞和靶细胞充分混匀接触,于37℃、含5%CO
2的培养箱孵育18小时。然后将96孔板置于板式离心机中以250g/分钟离心5分钟,每孔取50μL上清液置于96孔检测板中。按照CytoTox96Non-Radio试剂盒(Promega,目录号PR-G1780)说明书配制LDH工作液,96孔检测板中每孔加入50μL LDH工作液,混匀后避光室温孵育25-35分钟。每孔加入50μL终止液,混匀,使用酶标仪(Thermo,Varioskan Flash)在490nm波长下读OD值。
如图3和表5所示,在PBMC杀伤实验中,抗CLDN18.2嵌合抗体xi22F12、xi28G3、xi40F6和xi34G6的ADCC活性优于IMAB362和15F9。
表5 抗CLDN18.2嵌合抗体的ADCC活性(效应细胞为PBMC)
“NA”表示不适用,“/”表示未检测
实施例6抗CLDN18.2抗体的CDC活性
基于CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay的方法,分别以KATOIII和U2OS-CLDN18.2为靶细胞,检测抗体的补体依赖细胞毒性(CDC)活性。IMAB362(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:63和64所示)作为阳性对照,IgG1同型对照抗体(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:67和68)作为阴性对照。
用培养基将KATOIII和U2OS-CLDN18.2分别稀释至8×10
5个/mL,每种细胞悬液以50μL/孔分配到96孔板中。然后将不同浓度的待测抗体以50μL/孔加到96孔板中,针对KATOIII细胞:使待测抗体的终浓度为50nM、10nM、2nM、0.4nM、0.08nM、0.016nM、0.0032nM和0.00064nM,针对U2OS-CLDN18.2细胞:使待测抗体的终浓度为333.33nM、66.67nM、13.33nM、2.67nM、0.53nM、0.11nM、0.02nM和0.004nM。然后将补体(Quidel,目录号A113)以50μL/孔加到96孔板中,使补体的终浓度为10%。低速离心,然后将96孔板于37℃震荡孵育30分钟,使补体和靶细胞充分混匀接触。然后于37℃、含5%CO
2的培养箱孵育2小时。孵育结束后,每孔加入110μL CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega,目录号G7572),避光室温孵育5-15分钟,最后在酶标仪(Thermo,Varioskan Flash)上测定荧光值。
结果如图4和表6所示,抗CLDN18.2嵌合抗体xi22F12、xi28G3、xi40F6、xi34G6和xi10D8均能诱导强CDC效应,且xi22F12、xi28G3、xi40F6和xi34G6的活性较IMAB362更强。
表6 抗CLDN18.2嵌合抗体的CDC活性
“/”表示未测
实施例7抗CLDN18.2抗体的内吞活性
按照Antibody Internalization Human Reagent(Sartorius,目录号90564)的说明书,分别以NUGC-4和NIH-3T3-CLDN18.2为靶细胞,检测抗CLDN18.2抗体的内吞活性。
用培养基将NUGC-4和NIH-3T3-CLDN18.2细胞分别稀释至2×10
6个/mL,每种细胞悬液以20μL/孔分配于96孔板中。将待测抗体和内化试剂混合均匀,于37℃避光孵育15分钟,然后将待测抗体和内化试剂的混合物以20μL/孔加入到96孔板,于37℃、5%CO
2培养箱孵育2小时,使待测抗体的终浓度为20nM、6.67nM、2.22nM、0.74nM、0.25nM、0.08nM、0.027nM和0.009nM。孵育结束后,使用流式细胞仪(Sartorius,iQUE3)检测荧光信号(MFI)。通过荧光数值的大小来评价抗体的内吞活性,结果如图5所示。
实施例8抗CLDN18.2抗体的非特异性ADCC活性
基于报告基因的方法,以NIH-3T3-CLDN18.1细胞为靶细胞,以Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase为效应细胞,来分析抗CLDN18.2抗体对NIH-3T3CLAN18.1细胞的非特异性ADCC活性,使待测抗体的终浓度为333.33nM、66.67nM、13.33nM、2.67nM、0.53nM、0.107nM、0.021nM和0.004nM,具体方法参见实施例5。
结果如图6所示,抗CLDN18.2嵌合抗体xi22F12、xi28G3、xi40F6和xi34G6均对NIH-3T3-CLDN18.1细胞无ADCC效应,而xi10D8和IMAB362对NIH-3T3-CLDN18.1细胞有微弱的ADCC活性。
实施例9抗CLDN18.2单克隆抗体的人源化
选取鼠源抗体28G3(重链可变区序列SEQ ID NO:11,轻链可变区序列SEQ ID NO:16)和40F6(重链可变区序列SEQ ID NO:29,轻链可变区序列SEQ ID NO:34)进行人源化设计。
采用CDR-graft方法结合计算机辅助设计对鼠源抗体28G3和40F6进行人源化设计,对鼠源抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列经蛋白质数据库比对分析,筛选出具有最高序列同源性的人胚系抗体序列。将鼠源抗体28G3和40F6的互补决定区(CDR)嫁接到筛选出的人胚系抗体序列的骨架中,并进一步突变CDR和/或骨架中的氨基酸残基以获得更多候选的可变区序列。
将人源化VL区基因片段连接到人κ链恒定区来构建人源化轻链,将人源化VH区基因片段连接到人IgG1恒定区来构建人源化重链。按照实施例2中的方法进行转染和表达,然后用Protein A柱纯化细胞培养上清中的人源化抗体。其中,所述人κ轻链恒定区具有SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列,所述人IgG1恒定区具有SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。
实施例10抗CLDN18.2人源化抗体的表征
结合活性
基于FACS的方法,分析抗CLDN18.2人源化抗体与天然表达CLDN18.2的细胞系KATOIII(中科院细胞库)和NUGC-4(中科院细胞库)的结合活性。使hz28G3-1.1、hz28G3-1.2、hz28G3-1.3、hz28G3-1.4、hz28G3-2.1、hz28G3-2.2、hz28G3-2.3、hz28G3-2.4和xi28G3的终浓度为150nM、50nM、16.67nM、5.56nM、1.85nM、0.62nM、0.21nM和0.07nM,使hz40F61.1、hz40F6-1.2、hz40F6-1.3、hz40F6-1.4、hz40F6-2.1、hz40F6-2.2、hz40F6-2.3、hz40F6-2.4和xi40F6的终浓度为300nM、100nM、33.33nM、11.11nM、3.7nM、1.23nM、0.41nM和0.14nM,具体方法参见实施例3。
抗CLDN18.2人源化抗体的结合活性如图7-8所示,结合EC50数据如表7.1和表7.2所示,除hz40F6-1.1和hz40F6-2.1的结合活性弱于嵌合抗体xi40F6外,其余人源化抗体的结合活性与其嵌合抗体相当或更好,并且所有人源化抗体的结合活性都优于IMAB362。
表7.1 抗CLDN18.2人源化抗体的结合活性
表7.2 抗CLDN18.2人源化抗体的结合活性
ADCC活性
基于报告基因的方法,分别以KATOIII、NUGC-4、NIH-3T3-CLDN18.2和U2OS-CLDN18.2为靶细胞,以Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase为效应细胞,分析抗CLDN18.2人源化抗体的ADCC活性。针对NIH-3T3-CLDN18.2和U2OS-CLDN18.2细胞:使待测抗体的终浓度为13.33nM、2.22nM、0.37nM、0.062nM、0.01nM、0.0017nM、0.00029nM和0.000048nM;针对NUGC-4细胞:使待测抗体的终浓度为1333.33nM、133.33nM、13.33nM、1.33nM、0.133nM、0.0133nM、0.00133nM和0.000133nM;针对KATOIII细胞:本申请的抗CLDN18.2抗体的终浓度为20nM、2nM、0.2nM、0.02nM、0.002nM、0.0002nM、0.00002nM和0.000002nM,IMAB362的终浓度为2000nM、200nM、20nM、2nM、0.2nM、0.02nM、0.002nM和0.0002nM;具体方法参见实施例5。
在报告基因实验中,抗CLDN18.2人源化抗体的ADCC活性如图9和图10所示,EC50数据如表8.1和表8.2所示,在2个不同的细胞上,抗CLDN18.2人源化抗体均能显著诱导Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase细胞NFAT信号的激活,人源化抗体的ADCC活性与其嵌合抗体相当,并且优于IMAB362。
表8.1 抗CLDN18.2人源化抗体ADCC活性(效应细胞为Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase)
表8.2 抗CLDN18.2人源化抗体ADCC活性(效应细胞为Jurkat-CD16a v158-NFAT-luciferase)
通过PBMC杀伤的方法,分别以KATOIII、NUGC-4和NIH-3T3-CLDN18.2为靶细胞,以PBMC为效应细胞,分析抗CLDN18.2人源化抗体的ADCC活性。使待测抗体的终浓度为66.7nM、8.34nM、1.04nM、0.13nM、0.016nM、0.002nM、0.00025nM和0.000032nM,具体方法参见实施例5。
结果如图11和表9所示,在PBMC杀伤的实验中,抗CLDN18.2人源化抗体hz28G3-1.3的ADCC活性与xi28G3相当,并且显著优于15F9。
表9 抗CLDN18.2人源化抗体ADCC活性(效应细胞为PBMC)
CDC活性
基于CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay的方法,以NIH-3T3-CLDN18.2为靶细胞,检测抗体的CDC活性。IMAB362(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:63和64所示)和15F9(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:65和66所示)作为阳性对照,IgG1同型对照抗体(内部制备,重链和轻链氨基酸序列如本申请SEQ ID NOs:67和68)作为阴性对照。用含0.1%BSA的培养基将NIH-3T3-CLDN18.2细胞分别稀释至8×10
5个/mL,每种细胞悬液以50μL/孔分配到96孔板中。然后将不同浓度的待测抗体以50μL/孔加到96孔板中。使hz28G3-1.1、hz28G3-1.3和xi28G3的终浓度为100nM、25nM、6.25nM、1.56nM、0.39nM、0.098nM、0.024nM和0.006nM,使hz40F6-1.1、hz40F6-1.2、hz40F6-1.3、hz40F6-1.4、hz40F6-2.1、hz40F6-2.2、hz40F6-2.3、hz40F6-2.4和xi40F6的终浓度为333.33nM、66.67nM、13.33nM、2.67nM、0.53nM、0.11nM、0.02nM和0.004nM,具体方法参见实施例6。
结果如图12以及表10.1和表10.2所示,抗CLDN18.2人源化抗体均能诱导强CDC效应,除个别抗体外,其他人源化抗体的CDC活性与其嵌合抗体相当。
表10.1 抗CLDN18.2人源化抗体CDC活性
抗体 | EC50(nM) |
xi28G3 | 0.27 |
hz28G3-1.1 | 0.29 |
hz28G3-1.3 | 0.31 |
15F9 | 0.25 |
表10.2 抗CLDN18.2人源化抗体CDC活性
抗体 | EC50(nM) |
xi40F6 | 0.29 |
hz40F6-1.1 | 1.47 |
hz40F6-1.2 | 0.54 |
hz40F6-1.3 | 0.84 |
hz40F6-1.4 | 0.55 |
hz40F6-2.1 | 3.8 |
hz40F6-2.2 | 0.53 |
hz40F6-2.3 | 0.9 |
hz40F6-2.4 | 0.89 |
IMAB362 | 24.43 |
内吞活性
按照Antibody Internalization Human Reagent(Sartorius,目录号90564)的说明书,分别以NUGC-4和U2OS-CLDN18.2为靶细胞,检测抗CLDN18.2人源化抗体的内吞活性。在NUGC-4细胞中待测抗体的终浓度为111.11nM、37.04nM、12.35nM、4.12nM、1.37nM、0.46nM和0.15nM,在U2OS-CLDN18.2细胞中使待测抗体的终浓度为33.33nM、11.11nM、3.7nM、1.23nM、0.41nM、0.14nM、0.046nM和0.015nM,具体方法参见实施例7。通过荧光数值的大小来评价抗体的内吞活性强弱,结果如图13所示。
非特异性ADCC活性
基于PBMC杀伤的方法,以NIH-3T3-CLDN18.1为靶细胞,以PBMC为效应细胞,来分析抗CLDN18.2人源化抗体对NIH-3T3-CLDN18.1细胞的非特异性ADCC活性。使待测抗体的终浓度为66.7nM、8.34nM、1.04nM、0.13nM、0.016nM、0.002nM和0.00025nM,具体方法参见实施例5。
结果如图14所示,抗CLDN18.2人源化抗体hz28G3-1.1和hz28G3-1.3对NIH-3T3-CLDN18.1细胞无ADCC效应。
本申请的序列信息总结于表11中。
表11 序列信息
为了描述和公开的目的,以引用的方式将所有的专利、专利申请和其它已确定的出版物在此明确地并入本文。这些出版物仅因为它们的公开早于本申请的申请日而提供。所有关于这些文件的日期的声明或这些文件的内容的表述是基于申请者可得的信息,并且不构成任何关于这些文件的日期或这些文件的内容的正确性的承认。而且,在任何国家,在本文中对这些出版物的任何引用并不构成关于该出版物成为本领域的公知常识的一部分的认可。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本申请作了详尽的描述,但在本申请基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本申请精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本申请要求保护的范围。
Claims (20)
- 一种分离的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:(i)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3,其中,(1)重链CDR1包含SEQ ID NO:11中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:11中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:11中重链CDR3的氨基酸序列;(2)重链CDR1包含SEQ ID NO:12中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:12中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:12中重链CDR3的氨基酸序列;(3)重链CDR1包含SEQ ID NO:13中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:13中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:13中重链CDR3的氨基酸序列;(4)重链CDR1包含SEQ ID NO:14中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:14中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:14中重链CDR3的氨基酸序列;(5)重链CDR1包含SEQ ID NO:15中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:15中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:15中重链CDR3的氨基酸序列;(6)重链CDR1包含SEQ ID NO:29中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:29中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:29中重链CDR3的氨基酸序列;(7)重链CDR1包含SEQ ID NO:30中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:30中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:30中重链CDR3的氨基酸序列;(8)重链CDR1包含SEQ ID NO:31中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:31中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:31中重链CDR3的氨基酸序列;(9)重链CDR1包含SEQ ID NO:32中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:32中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:32中重链CDR3的氨基酸序列;(10)重链CDR1包含SEQ ID NO:33中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:33中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:33中重链CDR3的氨基酸序列;(11)重链CDR1包含SEQ ID NO:43中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:43中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:43中重链CDR3的氨基酸序列;(12)重链CDR1包含SEQ ID NO:51中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:51中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:51中重链CDR3的氨基酸序列;或(13)重链CDR1包含SEQ ID NO:59中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:59中重链CDR2的氨基酸序列和重链CDR3包含SEQ ID NO:59中重链CDR3的氨基酸序列;和/或(ii)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3,其中,(1)轻链CDR1包含SEQ ID NO:16中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:16中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:16中轻链CDR3的氨基酸序列;(2)轻链CDR1包含SEQ ID NO:17中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:17中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:17中轻链CDR3的氨基酸序列;(3)轻链CDR1包含SEQ ID NO:18中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:18中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:18中轻链CDR3的氨基酸序列;(4)轻链CDR1包含SEQ ID NO:34中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:34中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:34中轻链CDR3的氨基酸序列;(5)轻链CDR1包含SEQ ID NO:35中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:35中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:35中轻链CDR3的氨基酸序列;(6)轻链CDR1包含SEQ ID NO:36中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:36中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:36中轻链CDR3的氨基酸序列;(7)轻链CDR1包含SEQ ID NO:44中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:44中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:44中轻链CDR3的氨基酸序列;(8)轻链CDR1包含SEQ ID NO:52中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:52中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:52中轻链CDR3的氨基酸序列;或(9)轻链CDR1包含SEQ ID NO:60中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:60中轻链CDR2的氨基酸序列和轻链CDR3包含SEQ ID NO:60中轻链CDR3的氨基酸序列。
- 根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:(i)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3,其中,(1)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、4和7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:3、4和7所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(2)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、5和7所示的氨基酸序列或与 SEQ ID NOs:3、5和7所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(3)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、6和7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:3、6和7所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(4)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、20和24所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、20和24所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(5)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、21和24所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、21和24所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(6)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、22和24所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、22和24所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(7)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、23和24所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、23和24所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(8)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:37、38和39所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:37、38和39所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(9)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:45、46和47所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:45、46和47所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;或(10)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs:53、54和55所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:53、54和55所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;和/或(ii)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3,其中,(1)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:8、9和10所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:8、9和10所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(2)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:25、26和27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:25、26和27所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(3)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:25、26和28所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:25、26和28所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(4)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:40、41和42所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:40、41和42所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(5)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:48、49和50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:48、49和50所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;或(6)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:56、57和58所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:56、57和58所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列。
- 根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3,其中,(1)重链CDR1包含SEQ ID NO:11中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:11中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:11中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:16中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:16中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:16中轻链CDR3的氨基酸序列;(2)重链CDR1包含SEQ ID NO:12中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:12中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:12中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:17中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:17中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:17中轻链CDR3的氨基酸序列;(3)重链CDR1包含SEQ ID NO:13中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:13中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:13中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:17中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:17中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:17中轻链CDR3的氨基酸序列;(4)重链CDR1包含SEQ ID NO:14中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:14中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:14中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:17中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:17中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:17中轻链CDR3的氨基酸序列;(5)重链CDR1包含SEQ ID NO:15中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:15中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:15中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:17中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:17中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:17中轻链CDR3的氨基酸序列;(6)重链CDR1包含SEQ ID NO:12中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:12 中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:12中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:18中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:18中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:18中轻链CDR3的氨基酸序列;(7)重链CDR1包含SEQ ID NO:13中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:13中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:13中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:18中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:18中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:18中轻链CDR3的氨基酸序列;(8)重链CDR1包含SEQ ID NO:14中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:14中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:14中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:18中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:18中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:18中轻链CDR3的氨基酸序列;(9)重链CDR1包含SEQ ID NO:15中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:15中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:15中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:18中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:18中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:18中轻链CDR3的氨基酸序列;(10)重链CDR1包含SEQ ID NO:29中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:29中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:29中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:34中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:34中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:34中轻链CDR3的氨基酸序列;(11)重链CDR1包含SEQ ID NO:30中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:30中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:30中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:35中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:35中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:35中轻链CDR3的氨基酸序列;(12)重链CDR1包含SEQ ID NO:31中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:31中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:31中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:35中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:35中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:35中轻链CDR3的氨基酸序列;(13)重链CDR1包含SEQ ID NO:32中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:32中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:32中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:35中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:35中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:35中轻链CDR3的氨基酸序列;(14)重链CDR1包含SEQ ID NO:33中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:33中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:33中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:35中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:35中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:35中轻链CDR3的氨基酸序列;(15)重链CDR1包含SEQ ID NO:30中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:30中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:30中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:36中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:36中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:36中轻链CDR3的氨基酸序列;(16)重链CDR1包含SEQ ID NO:31中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:31中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:31中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:36中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:36中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:36中轻链CDR3的氨基酸序列;(17)重链CDR1包含SEQ ID NO:32中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:32中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:32中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:36中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:36中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:36中轻链CDR3的氨基酸序列;(18)重链CDR1包含SEQ ID NO:33中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:33中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:33中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:36中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:36中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:36中轻链CDR3的氨基酸序列;(19)重链CDR1包含SEQ ID NO:43中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:43中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:43中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1 包含SEQ ID NO:44中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:44中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:44中轻链CDR3的氨基酸序列;(20)重链CDR1包含SEQ ID NO:51中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:51中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:51中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:52中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:52中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:52中轻链CDR3的氨基酸序列;或(21)重链CDR1包含SEQ ID NO:59中重链CDR1的氨基酸序列,重链CDR2包含SEQ ID NO:59中重链CDR2的氨基酸序列,重链CDR3包含SEQ ID NO:59中重链CDR3的氨基酸序列,轻链CDR1包含SEQ ID NO:60中轻链CDR1的氨基酸序列,轻链CDR2包含SEQ ID NO:60中轻链CDR2的氨基酸序列,和轻链CDR3包含SEQ ID NO:60中轻链CDR3的氨基酸序列;或者,所述抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3,其中,(1)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、4、7、8、9和10所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:3、4、7、8、9和10所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(2)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、5、7、8、9和10所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:3、5、7、8、9和10所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(3)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:3、6、7、8、9和10所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:3、6、7、8、9和10所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(4)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、20、24、25、26和27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、20、24、25、26和27所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(5)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、21、24、25、26和27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、21、24、25、26和27所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(6)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、22、24、25、26和27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、22、24、25、26和27所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(7)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、23、24、25、26和27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、23、24、25、26和27所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(8)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、20、24、25、26和28所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、20、24、25、26和28所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(9)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、21、24、25、26和28所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、21、24、25、26和28所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(10)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、22、24、25、26和28所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、22、24、25、26和28所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(11)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:19、23、24、25、26和28所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:19、23、24、25、26和28所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(12)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:37、38、39、40、41和42所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:37、38、39、40、41和42所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(13)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:45、46、47、48、49和50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:45、46、47、48、49和50所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;或(14)重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs:53、54、55、56、57和58所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:53、54、55、56、57和58所示的 氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合或人源化的。
- 根据权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:(i)重链可变区,所述重链可变区包含SEQ ID NOs:11、12、13、14、15、29、30、31、32、33、43、51或59所示的氨基酸序列,或与SEQ ID NOs:11、12、13、14、15、29、30、31、32、33、43、51或59所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;和/或(ii)轻链可变区,所述轻链可变区包含SEQ ID NOs:16、17、18、34、35、36、44、52或60所示的氨基酸序列,或与SEQ ID NOs:16、17、18、34、35、36、44、52或60所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区,其中,(1)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:11和16所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:11和16所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(2)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:12和17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:12和17所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(3)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:13和17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:13和17所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(4)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:14和17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:14和17所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(5)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:15和17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:15和17所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(6)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:12和18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:12和18所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(7)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:13和18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:13和18所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(8)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:14和18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:14和18所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(9)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:15和18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:15和18所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(10)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:29和34所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:29和34所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(11)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:30和35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:30和35所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(12)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:31和35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:31和35所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(13)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:32和35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:32和35所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(14)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:33和35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:33和35所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(15)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:30和36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:30和36所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(16)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:31和36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:31和36所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(17)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:32和36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:32和36所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(18)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:33和36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:33和36所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(19)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:43和44所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:43和44所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;(20)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:51和52所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:51和52所所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列;或(21)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:59和60所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs: 59和60所示的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段是IgG1、IgG2或IgG4同种型。
- 根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段还包含重链恒定区和轻链恒定区,所述重链恒定区包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除和添加的氨基酸序列,所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除和添加的氨基酸序列。
- 根据权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段:(a)结合人CLDN18.2;(b)诱导针对表达CLDN18.2的细胞的抗体依赖细胞毒性(ADCC);和/或(c)诱导针对表达CLDN18.2的细胞的补体依赖细胞毒性(CDC)。
- 根据权利要求1-9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段选自单克隆抗体、单特异性抗体、纳米抗体、Fab片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、dAb片段、分离的CDR区、单链Fv分子或其组合。
- 一种分离的核酸分子,其编码权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
- 一种表达载体,其包含权利要求11所述的核酸分子。
- 一种宿主细胞,其包含权利要求11所述的核酸分子或权利要求12所述的表达载体。
- 一种多特异性抗体,其包含权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
- 一种重组多肽或融合蛋白,其包含权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及与其连接的功能片段。
- 一种免疫缀合物,其包含权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及与其连接的治疗剂。
- 一种药物组合物,其包含权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
- 一种在有需要的受试者中预防、缓解或治疗与CLDN18.2阳性相关的疾病的方法,所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,或者权利要求17所述的药物组合物。
- 根据权利要求18所述的方法,其中所述CLDN18.2阳性相关的疾病包括癌症。
- 根据权利要求19所述的方法,其中所述癌症包括胃癌、食道癌、胃肠道癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、支气管癌、间皮瘤、肾癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、子宫癌、***癌、睾丸癌、***癌、***癌、胆管癌、胆囊癌、头颈癌、脊柱肿瘤、耳鼻咽喉肿瘤、甲状腺癌、间皮瘤、骨癌、皮肤癌、黑色素瘤、腺癌、肉瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、脑癌、中枢神经***癌、神经内分泌肿瘤、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2021113076193 | 2021-11-05 | ||
CN202111307619 | 2021-11-05 | ||
PCT/CN2022/129834 WO2023078386A1 (zh) | 2021-11-05 | 2022-11-04 | 抗cldn18.2抗体及其用途 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN118139888A true CN118139888A (zh) | 2024-06-04 |
Family
ID=86240666
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202280072576.1A Pending CN118139888A (zh) | 2021-11-05 | 2022-11-04 | 抗cldn18.2抗体及其用途 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR20240099289A (zh) |
CN (1) | CN118139888A (zh) |
TW (1) | TW202323285A (zh) |
WO (1) | WO2023078386A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2024114667A1 (zh) * | 2022-11-30 | 2024-06-06 | 正大天晴药业集团股份有限公司 | 抗cldn18.2抗体药物偶联物及其药物组合物和用途 |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DD120303A1 (zh) | 1975-05-15 | 1976-06-05 | ||
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
JP2002512624A (ja) | 1997-05-21 | 2002-04-23 | バイオベーション リミテッド | 非免疫原性タンパク質の製造方法 |
EP3483182B1 (en) * | 2016-07-08 | 2024-05-08 | CRAGE medical Co., Limited | Antibody for anti-claudin 18a2 and use thereof |
US20220110973A1 (en) * | 2018-03-09 | 2022-04-14 | Cafa Therapeutics Limited | Method and composition for treating tumors |
US11912763B2 (en) * | 2018-06-17 | 2024-02-27 | L & L Biopharma Co., Ltd. | Antibody targeting CLDN18.2, bispecific antibody, ADC, and CAR, and applications thereof |
WO2020043044A1 (zh) * | 2018-08-27 | 2020-03-05 | 南京圣和药业股份有限公司 | 一种抗Claudin18.2抗体及其应用 |
CN112888458A (zh) * | 2018-09-30 | 2021-06-01 | 佧珐药业有限公司 | Cldn18的抗体和化疗药物的联合治疗 |
AU2019391204A1 (en) * | 2018-12-07 | 2021-06-24 | Zlip Holding Limited | Anti-Claudin antibodies and uses thereof |
CN109762067B (zh) * | 2019-01-17 | 2020-02-28 | 北京天广实生物技术股份有限公司 | 结合人Claudin 18.2的抗体及其用途 |
CN113748133B (zh) | 2019-04-19 | 2024-07-02 | 康诺亚生物医药科技(成都)有限公司 | 肿瘤治疗剂及其应用 |
CN112480248B (zh) * | 2020-11-24 | 2023-05-05 | 三优生物医药(上海)有限公司 | 与cld18a2特异性结合的分子 |
CN113416260B (zh) * | 2021-04-14 | 2022-02-01 | 南京凯地医疗技术有限公司 | 靶向Claudin18.2的特异性嵌合抗原受体细胞及其制备方法和应用 |
-
2022
- 2022-11-04 CN CN202280072576.1A patent/CN118139888A/zh active Pending
- 2022-11-04 WO PCT/CN2022/129834 patent/WO2023078386A1/zh active Application Filing
- 2022-11-04 TW TW111142259A patent/TW202323285A/zh unknown
- 2022-11-04 KR KR1020247016174A patent/KR20240099289A/ko unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20240099289A (ko) | 2024-06-28 |
TW202323285A (zh) | 2023-06-16 |
WO2023078386A8 (zh) | 2024-02-01 |
WO2023078386A1 (zh) | 2023-05-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11136413B2 (en) | PDL-1 antibody, pharmaceutical composition thereof, and uses thereof | |
US20210355218A1 (en) | Novel anti-pd-1 antibodies | |
US20210015860A1 (en) | Compositions and methods of use for augmented immune response and cancer therapy | |
CN106029696B (zh) | 抗cd3抗体及使用方法 | |
WO2018113258A1 (zh) | 抗pd-1抗体及其用途 | |
CN111196852A (zh) | 抗tigit抗体及其用途 | |
KR20160006168A (ko) | 인간화 항-cd134(ox40) 항체 및 이의 용도 | |
CN118126180A (zh) | 抗cd3抗体和包含所述抗体的分子 | |
KR20220057558A (ko) | 항-cd73 항체 | |
CA3128104A1 (en) | Anti-pd-1 antibody, antigen-binding fragment thereof and pharmaceutical use thereof | |
WO2023151693A1 (zh) | 包含抗tigit抗体和抗pd-1-抗vegfa双特异性抗体的药物组合物及用途 | |
JP2023515223A (ja) | Il4rに結合する抗体とその使用 | |
WO2022089392A1 (zh) | 抗tigit抗体、其药物组合物及用途 | |
WO2023078386A1 (zh) | 抗cldn18.2抗体及其用途 | |
WO2021143914A1 (zh) | 一种激活型抗ox40抗体、生产方法及应用 | |
JP2023513059A (ja) | 抗ミューラー管ホルモン受容体2抗体及び使用方法 | |
JP7430137B2 (ja) | 抗体および使用方法 | |
CN111788229A (zh) | Csf1r结合剂 | |
WO2021164701A1 (en) | Fusion proteins and uses thereof | |
CN116135884A (zh) | 抗tigit-抗pd-l1双特异性抗体、其药物组合物及用途 | |
WO2023241629A1 (zh) | 抗cldn18.2抗体、其药物组合物及用途 | |
WO2023001303A1 (zh) | 药物组合物及用途 | |
WO2022222992A1 (en) | Antibodies binding trop2 and uses thereof | |
WO2023186063A1 (zh) | 抗pvrig抗体、其药物组合物及用途 | |
CN116925233A (zh) | 抗tigit-抗pvrig双特异性抗体、其药物组合物及用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication |