CN118056905A - 大豆e1基因增强子调控元件在提前大豆花期中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及基因表达调控领域，具体涉及一种大豆E1基因增强子调控元件的新应用。本发明公开了一个大豆E1基因增强子调控元件，通过MNase‑seq技术定位E1的增强子调控元件，利用基因编辑技术突变增强子调控元件，特异性调控E1基因的表达水平，使突变体提前开花，且不改变大豆植株与产量相关的性状，为培育早熟高产大豆品种奠定基础。

Description

大豆E1基因增强子调控元件在提前大豆花期中的用途

优先权信息

本申请请求2022年11月18日向中华人民共和国国家知识产权局提交的、专利申请号为202211449379.5的专利申请的优先权和权益，并且通过参照将其全文并入此处。

技术领域

本发明涉及基因表达调控技术领域，具体涉及一种大豆E1基因增强子调控元件的应用。

背景技术

黑龙江省是我国大豆主要产区，大豆种植面积和产量均占全国三分之一左右。黑龙江处于高纬度寒带，有效积温短，为适合生长季需要培育早熟大豆品种，目前早熟大豆品种，植株矮小产量低。

E1基因是豆科植物特有的基因，为已知的对大豆的开花期及成熟期的影响最大基因位点。E1基因位于第六染色体(Gm06的着丝点附近)，是大豆光周期响应的核心调控因子，主要功能是抑制开花和推迟生育期，阐明其介导开花途径的分子机制尤为重要。然而，目前对于E1基因调控机制很大程度上仍是未知的，且对该基因的研究，也更多是基于该基因表达区间的突变进行的，然而单纯的使大豆植株E1基因突变后，虽然使其提前了25天左右开花，但突变对植株影响较大，使得植株矮小且产量低。

近年来，玉米和水稻等作物中多个重要农艺性状数量性状位点((Quantitativetraitlocus,QTL))定位于基因组非编码区，是含有顺式作用元件(cis-regulatory elements,CREs)的增强子。增强子通过结合转录因子(Transcriptionfactor)作用于目标基因启动子，增强目标基因转录效率，可使目标基因转录水平在特异发育阶段的特定组织中提高几十倍甚至上千倍。基因编码区序列变异会完全破坏基因功能，产生无效等位基因(功能缺失或重新带有新的功能)突变体，而增强子序列变异推动目标基因表达水平或表达部位变化，从而导致数量性状变异。

因此，目前亟需一种对大豆E1基因增强子的改造技术，使E1增强子丧失部分功能，能以“低成本”方式培育高产优质的大豆品种，以期新品种大豆能更好适应生长地生长季光照及温度等环境。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。

为此，本发明第一方面提供一种载体，根据本发明的实施方案，所述载体中含有能够对E1基因的增强子序列进行改造或修饰的元件，所述改造或修饰抑制所述E1基因的表达。

本发明首次鉴定了调控大豆E1基因表达的增强子调控元件MHS2。本发明通过将MHS2增强子调控元件在大豆中敲除，确定增强子调控元件MHS2调控E1基因表达。与野生型大豆相比，MHS2增强子突变体中E1表达量降低，突变体提前开花，但突变体与野生型间的单株荚数和粒数等与产量相关的农艺性状无明显差异。因此大豆增强子MHS2通过精确调控E1表达，使大豆植株提前开花，且不影响大豆产量，在培育早熟高产中具有重要的应用前景。与现有技术相比，对E1基因增强子进行改造相比直接在E1基因表达区改造而言，不仅对植株其他性状影响较小，而且能实现真正意义上的早产，为培育早熟高产大豆品种奠定基础。

在本发明的一些实施方案中，所述增强子序列为MHS2序列，如SEQ ID NO:1所示。

在本发明的一些实施方案中，所述改造包括对所述增强子序列的至少一部分进行序列的缺失、替换、***、倒位、异位。

在本发明的一些实施方案中，所述修饰包括对所述增强子序列的至少一部分进行甲基化、乙酰化。

在本发明的一些实施方案中，所述对E1基因的增强子序列进行改造或修饰的元件包括表达基因编辑***的元件和/或能实现RNA干扰的元件。

在本发明的一些实施方案中，所述基因编辑***包括CRISPR/Cas9***，所述CRISPR/Cas9***包括Cas9蛋白及sgRNA。

在本发明的一些实施方案中，所述sgRNA具有如SEQ ID NO:2-4所示的核苷酸序列中的至少之一。

本发明第二方面提供一种试剂，根据本发明的实施方案，所述试剂中含有第一方面所述的载体。

本发明第三方面提供第一方面所述的载体在制备用于提前大豆花期的试剂中的用途。

本发明第四方面提供第一方面所述的载体、第二方面所述的试剂在提前大豆花期中的用途。

本发明第五方面提供一种提前大豆花期的方法，根据本发明的实施方案，所述方法包括对E1基因的增强子序列进行改造或修饰，以抑制所述E1基因的表达。

根据本发明的一些实施方案，所述增强子序列为MHS2序列，如SEQ ID NO:1所示。

根据本发明的一些具体实施方案，所述改造包括对所述增强子序列的至少一部分进行序列的缺失、替换、***、倒位、异位。

根据本发明的一些更具体的实施方案，所述修饰包括对所述增强子序列的至少一部分进行甲基化、乙酰化。

在本发明的一些实施方案中，所述对E1基因的增强子序列进行改造或修饰的元件包括表达基因编辑***的元件和/或能实现RNA干扰的元件。

在本发明的一些实施方案中，所述基因编辑***包括CRISPR/Cas9***，所述CRISPR/Cas9***包括Cas9蛋白及sgRNA。

在本发明的一些实施方案中，所述sgRNA具有如SEQ ID NO:2-4所示的核苷酸序列中的至少之一。

本发明第六方面提供一种提前大豆花期的方法，在一些具体实施方案中，所述方法包括：将第一方面所述的载体导入野生型大豆中，或者利用第二方面所述的试剂对野生型大豆进行处理，实现野生型大豆中的E1基因的增强子序列的改造或修饰，抑制所述E1基因的表达，以便提前大豆花期。

本发明通过将MHS2增强子调控元件在大豆中敲除，确定增强子调控元件MHS2调控E1基因表达。与野生型大豆相比，MHS2增强子突变体中E1表达量降低，突变体提前开花，但突变体与野生型间的单株荚数和粒数等农艺性状无明显差异。因此大豆增强子MHS2通过精确调控E1表达，使大豆植株提前开花，且不影响大豆产量，在培育早熟高产中具有重要的应用前景。与现有技术相比，对E1基因增强子进行改造相比直接在E1基因表达区改造而言，不仅对植株其他性状影响较小，而且能实现真正意义上的早产，为培育早熟高产大豆品种奠定基础。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施方案的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1显示了本发明实施例1中E1-MHS2的CRISPR/Cas9敲除靶位点及所在位置；

图2显示了本发明实施例2中E-MHS2-Cas9载体构建流程；

图3显示了本发明实施例3中5个突变体的突变类型；

图4显示了本发明实施例4中野生型与突变体中E1基因的表达量结果；

图5显示了本发明实施例4中野生型与突变体开花情况；

图6显示了本发明实施例4中野生型与突变体开始开花时间统计结果；

图7显示了本发明实施例4中野生型与突变体终止开花时间统计结果；

图8显示了本发明实施例4中野生型与突变体株高统计结果；

图9显示了本发明实施例4中野生型与突变体单株节数统计结果；

图10显示了本发明实施例4中野生型与突变体单株荚数统计结果；

图11显示了本发明实施例4中野生型与突变体单株粒数统计结果。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施方案。下面描述的实施方案是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。

在本发明中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除显而易见在本发明中的它处另有明确定义，否则本发明中使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义。

在本发明中，术语“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。

在本发明中，术语“任选地”、“任选的”或“任选”通常是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，并且该描述包括其中发生该事件或状况的情况，以及其中未发生该事件或状况的情况。

在本发明中，“调控元件”通常是指产于基因转录调控的DNA序列，主要包括启动子、增强子、绝缘子等。

在本发明中，“稳定遗传”是指经基因编辑后的突变体，能就将突变序列以遗传的形式，稳定传给后代。

在本发明中，“顺式作用元件”存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列。顺式作用元件包括启动子、增强子、调控序列和可诱导元件等，它们的作用是参与基因表达的调控。顺式作用元件本身不编码任何蛋白质，仅仅提供一个作用位点，要与反式作用因子相互作用而起作用。

在本发明中，“数量性状位点”就是一个性状由多个基因决定，每个基因对此性状都是微效的。

在本发明中，“转录因子”指一群能与基因5’端上游特定序列专一性结合，从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。

在本发明中，“基因编辑”又称基因组编辑(genome editing)或基因组工程(genome engineering)，是一种新兴的比较精确的能对生物体基因组特定目标基因进行修饰的一种基因工程技术。

提前大豆花期的方法

根据本发明的一些具体实施方案，本发明提供一种提前大豆花期的方法，所述方法包括对E1基因的增强子序列进行改造或修饰，以抑制所述E1基因的表达。

根据本发明的一些实施方案，所述增强子序列为MHS2序列，如SEQ ID NO:1所示。

SEQ ID NO:1如下：

AAGACAACGTTTCTTTACCACTCCTTGAATGGTCCCAAACCTGTTTGGTTACCAA GTTGTAAAGAAAACGACAGCCACACTCAACATGCACTTTCACGATAAAATGTGCTCC。

根据本发明的一些实施方案，所述MHS2序列在E1基因下游Gm06:20030007..20030128(+strand)。

根据本发明的一些实施方案，本发明提供了一种载体，所述载体中含有能够对E1基因的增强子序列进行改造或修饰的元件，所述改造或修饰抑制所述E1基因的表达。

根据本发明的一些实施方案，本发明提供了一种载体，所述载体导入植株内部后，会引起所述增强子序列的至少一部分进行序列的缺失、替换、***、倒位、异位；

根据本发明的一些实施方案，本发明提供了一种载体，所述载体导入植株内部后，会引起增强子序列的修饰，包括甲基化、乙酰化。可以采用本领域已知的进行甲基化、乙酰化修饰的任意一种方法来设计载体序列。

根据本发明的一些实施方案，所述增强子序列为MHS2序列。

根据本发明的一些实施方案，可以采用本领域已知的任意一种已知方法实现靶标MHS2序列的至少一部分序列的缺失、替换、***、倒位、异位，例如采用基因编辑技术使得MHS2序列缺失至少一部分。具体地，当采用CRISPR-Cas9技术对MHS2增强子序列进行部分序列的敲除时，涉及的载体的元件例如可以包含：表达Cas9蛋白的序列、sgRNA、筛选标记基因、启动子、酶切位点。载体中含有的启动子优选大豆内源启动子，例如pM4。为了进一步提升MHS2增强子序列敲除效率，在CRISPR-Cas9载体中可以***至少一个针对靶标位点的sgRNA序列，例如可以将敲除位点设计在MHS2两侧及中间；这样更有可能将MHS2全部敲除。例如，通过靶点在线网站CRISPR-GE(http://skl.scau.edu.cn/)在MHS2两侧及中间设计sgRNA。

根据本发明的一些实施方案，所述载体能精准作用于MHS2序列。

根据本发明的一些实施方案，本发明提供了一种试剂，所述试剂包含上述载体。

根据本发明的一些具体的实施方案，本发明提供了上述载体在提早大豆花期的用途，包括，将所述载体转入野生型大豆中后，利用CRISPR/Cas9原理，敲除植株内部E1基因的MHS2增强子序列，使得E1增强子全部或者部分失活。

根据本发明的一些实施方案，本发明提供了上述试剂在提早大豆花期的用途，包括，用所述试剂处理植株后，使得E1增强子全部或者部分失活。

根据本发明的一些更具体的实施方案，本发明提供了一种提前大豆花期的方法，包括对所述增强子序列的至少一部分进行序列的缺失、替换、***、倒位、异位，或其他能引起增强子全部或部分失活的方法。

一种早产大豆在农业中的用途

根据本发明的一些具体实施例，所获得的早产大豆能在子代中稳定遗传，且能更好适应生在地生长季光照及温度等环境，较之现有技术而言，对植物其他与产量相关的性状基本没影响。

E1基因是豆科植物特有的基因，在大豆过表达E1基因抑制大豆开花。本发明首次鉴定了调控大豆E1基因表达的增强子调控元件MHS2。本发明通过将MHS2增强子调控元件在大豆中敲除，确定增强子调控元件MHS2调控E1基因表达。与野生型大豆相比，MHS2增强子突变体中E1表达量降低突变体提前开花，且突变体与野生型间的单株荚数和粒数等农艺性状无明显差异。因此大豆增强子MHS2通过精确调控E1表达，使大豆植株提前开花，且不影响大豆产量，在培育早熟高产中具有重要的应用前景。

本发明中涉及到的序列如表1所示：

表1

下面将结合实施例对本公开的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本公开，而不应视为限定本公开的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1大豆E1基因MHS2区域CRISPR/Cas9敲除靶点的设计

本研究利用MNase-seq测序技术，在Williams82大豆叶片的全基因组范围内挖掘候选增强子。使用Bowtie软件将MNase-seq测序结果进行读段定位，将读段回填到Williams82基因组序列中(https://phytozome.)，调整允许碱基错配的参数，保留仅能回填到Williams82基因组一个区段的读段。将大豆基因组划分成为若干200bp非重叠的区域，统计该区域多次重复实验所产生的读段回填总数，将FDR<0.01长度大于50bp区域定位为MHS2位点，作为增强子候选区域。利用该方法成功在E1基因下游Gm06:20030007..20030128(+strand)处定位到候选增强子，命名为E1-MHS2。在Williams82基因组序列中找到E1-MHS2序列，通过靶点在线网站CRISPR-GE(http://skl.scau.edu.cn/)在MHS2两侧及中间设计sgRNA，启动子选用大豆内源启动子pM4，设计靶点时遵循以下原则：

(1)靶序列的形式为5'-20nt-NGG；

(2)敲除位点位于MHS2两侧及中间；这样更有可能将MHS2全部敲除，以及MHS2部分敲除，三个靶点分别命名为MHS2-sg1(如序列表中的SEQ ID NO:2所示，ATGCCCAAGCTAGTGATAAT)、MHS2-sg2(如序列表中的SEQ ID NO:3所示，TGAATGGTCCCAAACCTGTT)和MHS2-sg3(如序列表中的SEQ ID NO:4所示，TGGTAGAAGACCAAAATGCA)。E1-MHS2的CRISPR/Cas9敲除靶位点及所在位置如图1所示；

(3)根据crisp-GE网站及预测，MHS2-sg1、MHS2-sg2和MHS2-sg3在大豆基因组外显子区域可能脱靶率低于45％，对大豆毛状根转化方法获得阳性根，对预测脱靶区域进行PCR测序鉴定，3个靶点均没有发现脱靶情况；

(4)利用大豆毛状根转化方法验证靶点编辑效率，三个靶点编辑效率都较高(如表2)；

(5)序列有较为平衡的GC含量且不易形成二级结构。

表2靶点编辑效率

实施例2：E-MHS2-Cas9载体构建

以PGES401为初始载体，PGES401载体由pM4启动子驱动Cas9蛋白与sgRNA+sgRNAScaffold的表达。三靶点敲除载体构建以pGES401空载为模板，通过PCR的方式额外扩增两个tRNA-sgRNA-sgRNA Scaffold-tRNA结构，通过goldgate方法以实现三个sgRNA串联,连接体系为：PGES401 plasmid 5ul、T4 DNALigase 1ul、T4 DNALigase Buffer 2ul、BsaⅠ2ul、MHS2-sg11 ul、MHS2-sg21 ul、MHS2-sg31 ul、ddH2O 7ul。PCR反应条件：(37℃5min，16℃5min)×25循环，37℃15min,85℃5min。扩增引物为E1-MHS2-F1(保护碱基+BsaⅠ识别位点+BsaⅠ切割位点+MHS2-sg1+sgRNA Scaffold,SEQ ID NO：5，TGGTCTCgTGCAATGCCCAAGCTAGTGATAATgttttagagctagaaatagc)，E1-MHS2-R1(保护碱基+BsaⅠ识别位点+MHS2-sg2+sgRNAScaffold，SEQ ID NO：6，TGGTCTCgTGGGACCATTCAtgcaccagccgggaatcgaa)，E1-MHS2-F2(保护碱基+BsaⅠ识别位点+MHS2-sg2+sgRNA Scaffold，SEQ ID NO：7，TGGTCTCgCCCAAACCTGTTgttttagagctagaaatagc)，E1-MHS2-R2(保护碱基+BsaⅠ识别位点+BsaⅠ切割位点+MHS2-sg3+sgRNA Scaffold，SEQ ID NO：8，TGGTCTCgAAAC TGGTAGAAGACCAAAATGCAtgcaccagccgggaatcgaa)。采用购买自TOYOBO的高保真酶KOD OneTM PCR master Mix进行PCR扩增。PCR反应条件：98℃预变性3min，(98℃变性15s，58℃退火15s，68℃延伸20s)×35循环，再68℃延伸5min，获得的PCR产物进行凝胶回收。

将回收后的DNA片段和载体pGES401同时加到反应体系中，PCR反应后将得到的连接产物转化大肠感受态细胞DH5α。经过菌落PCR鉴定阳性克隆，将阳性克隆送交测序公司测序，测序引物为STU-TEST-4R(SEQ ID NO：9，TGTTGTGTGGAATTGTGAGCG)，测序结果包含tRNA、MHS2-sg1、sgRNA Scaffold、tRNA、MHS2-sg2、sgRNA Scaffold、tRNA、MHS2-sg3、sgRNAScaffold、tRNA的序列。提取测序正确的大肠杆菌质粒，转化农杆菌K599，菌落鉴定正确且测序结果正确，表明已成功构建好E1-MHS2的CRISPR/Cas9敲除载体E1-MHS2-Cas9，该敲除载体含有Bar筛选标记基因(草铵膦抗性)。进行大豆毛状根转化，已验证靶点效率。

将构建好的载体E1-MHS2-Cas9通过EHA105农杆菌介导大豆子叶节的方法转入Williams82大豆品种中，获得大豆E1增强子CRISPR/Cas9敲除突变体株系。E-MHS2-Cas9载体构建流程如图2所示。

实施例3：大豆E1基因MHS2敲除突变体CRISPR/Cas9介导的编辑情况

经过bar试纸条检测共获得30个阳性苗，以基因组DNA为模板，用TOYOBO的高保真酶KOD OneTM PCR master Mix扩增包含靶位点的基因组片段，扩增引物为E1-MHS2-F、E1-MHS2-R，PCR反应条件：98℃预变性3in，(98℃变性15s，58℃退火15s，68℃延伸30s)×32循环，再72℃延伸5min，经过PCR检测获得5个大片段敲除株系。基于Sanger测序，通过DNAman对测序序列与野生型序列比对，确定具体的突变类型。经测序分析，其中有三个为纯合且将MHS2区域全部敲除，有两个将MHS2敲除一半大小(如图3)，并且这5个突变体经T0、T1、T2、T3代检测可稳定遗传给后代。

实施例4：大豆E1基因增强子调控元件MHS2敲除突变体的表型分析

将T3代纯合且大片段缺失的MHS2敲除突变体大豆与野生型对照品种Williams82播种于盆钵中，每个株系各100株，共4个株系(WT、MHS2#15、MHS2#17、MHS2#20)，其中，WT表示野生型对照品种Williams82；MHS2#15表示敲除了MHS-sg1和MHS-sg2部分片段的株系，敲除长度约164bp；MHS2#17、MHS2#20表示敲除了MHS-sg1和MHS-sg3部分片段的株系，敲除长度分别为302bp和331bp。

将4个株系共400株植株置于长日照(16h光照/8h黑暗)培养，持续对植株的农艺性状进行调查，统计并计算每个株系100株单株的不同农艺性状的平均值(包括开花时间、终花期、株高、节数、荚数及每株植株总共收获的豆粒数)，并检测不同株系中叶片中E1基因表达量，结果发现，与野生型Williams82相比，MHS2敲除突体中叶片中E1基因表达量降低30％左右(如图4)，提前开花6-10d(如图5和图6)熟期提前2-9天(图7)。MHS2敲除突体株高比野生型Williams82矮4-12cm(图8)，但突变体单株节数(图9)、单株荚数(图10)和单株粒数等产量性状与野生型Williams82无明显差异(图11)。

因此大豆增强子调控元件MHS2在通过精确调控E1的表达来提前花期和熟期，在早熟高产大豆育种中具有重要的应用前景。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施方案”、“一些实施方案”、“示例”、“具体示例”、“一些实施方案”或“一些示例”等的描述意指结合该实施方案或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施方案或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施方案或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施方案或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施方案或示例以及不同实施方案或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施方案，可以理解的是，上述实施方案是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施方案进行变化、修改、替换和变型。

Claims (9)

1.一种载体，其特征在于，所述载体中含有能够对E1基因的增强子序列进行改造或修饰的元件，所述改造或修饰抑制所述E1基因的表达。

2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述增强子序列为MHS2序列，如SEQ IDNO:1所示；

任选地，所述改造包括对所述增强子序列的至少一部分进行序列的缺失、替换、***、倒位、异位；

任选地，所述修饰包括对所述增强子序列的至少一部分进行甲基化、乙酰化；

任选地，所述对E1基因的增强子序列进行改造或修饰的元件包括表达基因编辑***的元件和/或能实现RNA干扰的元件；

任选地，所述基因编辑***包括CRISPR/Cas9***，所述CRISPR/Cas9***包括Cas9蛋白及sgRNA；

任选地，所述sgRNA具有如SEQ ID NO:2-4所示的核苷酸序列中的至少之一。

3.一种试剂，其特征在于，所述试剂中含有权利要求1或2所述的载体。

4.权利要求1或2所述的载体在制备用于提前大豆花期的试剂中的用途。

5.权利要求1或2所述的载体、权利要求3所述的试剂在提前大豆花期中的用途。

6.一种提前大豆花期的方法，其特征在于，所述方法包括对E1基因的增强子序列进行改造或修饰，以抑制所述E1基因的表达。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述增强子序列为MHS2序列，如SEQ IDNO:1所示。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述改造包括对所述增强子序列的至少一部分进行序列的缺失、替换、***、倒位、异位；

任选地，所述修饰包括对所述增强子序列的至少一部分进行甲基化、乙酰化；

任选地，所述对E1基因的增强子序列进行改造或修饰的元件包括表达基因编辑***的元件和/或能实现RNA干扰的元件；

任选地，所述基因编辑***包括CRISPR/Cas9***，所述CRISPR/Cas9***包括Cas9蛋白及sgRNA；

任选地，所述sgRNA具有如SEQ ID NO:2-4所示的核苷酸序列中的至少之一。

9.一种提前大豆花期的方法，其特征在于，所述方法包括：

将权利要求1或2所述的载体导入野生型大豆中，或者利用权利要求3所述的试剂对野生型大豆进行处理。