CN117949580A - 一种n-甲酰基-l-亮氨酸的检测方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于分析检测技术领域，提供一种N‑甲酰基‑L‑亮氨酸的检测方法及其应用，本发明采用液相色谱检测N‑甲酰基‑L‑亮氨酸及其杂质的含量，能够将N‑甲酰基‑L‑亮氨酸以及杂质有效分离，本发明采用苯基柱，配合磷酸盐缓冲液和乙腈作为流动相，有效改善分离效果，准确获得N‑甲酰基‑L‑亮氨酸的含量；本发明N‑甲酰基‑L‑亮氨酸的检测方法可以应用于N‑甲酰基‑L‑亮氨酸的制备，以及药物的制备过程中，以实施对N‑甲酰基‑L‑亮氨酸的质量监控。
Description
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，更具体地，涉及一种N-甲酰基-L-亮氨酸的检测方法及其 应用。
背景技术
N-甲酰基-L-亮氨酸是一种重要的奥利司他中间体，可由L-亮氨酸为原料一步制备得到。 有文献报道其可用于制备抑制素。N-甲酰基-L-亮氨酸的纯度以及已知杂质含量直接影响药物 的纯度、杂质的大小，从而直接影响奥利司他药物疗效。N-甲酰基-L-亮氨酸的分子结构如下 式(Ⅰ)所示。
目前，还未发现N-甲酰基-L-亮氨酸的纯度检测方法的相关文献及报道，为了加强N-甲 酰基-L-亮氨酸质量控制。因此，亟需开发一种N-甲酰基-L-亮氨酸的检测方法。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种N-甲 酰基-L-亮氨酸的检测方法及其应用，采用液相色谱进行检测，能够将N-甲酰基-L-亮氨酸和 杂质很好地分离，简便、准确、快速、可靠地检测N-甲酰基-L-亮氨酸以及杂质的含量，以保 留时间定性，峰面积定量。
本发明的第一方面提供一种N-甲酰基-L-亮氨酸的检测方法。
具体地，一种N-甲酰基-L-亮氨酸的检测方法，采用液相色谱进行检测，所述液相色谱的 色谱柱为苯基柱；所述液相色谱的流动相为磷酸盐缓冲液和乙腈的混合溶液。
本发明采用液相色谱进行检测N-甲酰基-L-亮氨酸及其杂质的含量，能够将N-甲酰基-L- 亮氨酸以及杂质有效分离，本发明采用苯基柱，配合磷酸盐缓冲液和乙腈作为流动相，有效 改善分离效果，准确获得N-甲酰基-L-亮氨酸的含量。
优选地，所述磷酸盐缓冲液和乙腈的体积比为(70-90)：(10-30)。
优选地，所述磷酸盐缓冲液的pH值为2.0-4.0。合适pH值的磷酸盐缓冲液有助于改善峰 型。
更优选地，所述磷酸盐缓冲液的pH值为3.0。
优选地，所述液相色谱的稀释液为磷酸盐缓冲液和乙腈的混合溶液。
优选地，所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钠缓冲液。
优选地，所述磷酸盐缓冲液的配置为：
取二水合磷酸二氢钠，加水溶解并稀释，最后用磷酸调节pH值。
优选地，所述液相色谱的柱温为20-40℃。
更优选地，所述液相色谱的柱温为30℃。
优选地，所述液相色谱的检测器为紫外检测器。
优选地，所述液相色谱的检测波长为200-220nm。
更优选地，所述液相色谱的检测波长为210nm。
优选地，所述液相色谱的流速为0.1-1.0mL/min。
更优选地，所述液相色谱的流速为0.5mL/min。
优选地，所述液相色谱的进样量为10-30μL。
更优选地，所述液相色谱的进样量为20μL。
优选地，所述液相色谱，包括如下步骤：
配制空白溶液；
取供试品配制供试品溶液；
将所述空白溶液采用液相色谱进行检测，得到色谱图A；
将所述供试品溶液采用液相色谱进行检测，得到色谱图B；
然后利用色谱图B扣除色谱图A的色谱峰后，计算N-甲酰基-L-亮氨酸的纯度和杂质含 量。
优选地，将所述供试品溶液采用液相色谱进行检测前，还包括进行***适用性试验。
优选地，所述***适用性试验，包括如下步骤：
取***适用性溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。
优选地，所述***适用性试验的理论板数按N-甲酰基-L-亮氨酸峰计算应不低于1500。
优选地，所述计算为采用面积归一化法。
本发明的第二方面提供一种N-甲酰基-L-亮氨酸的检测方法的应用。
一种N-甲酰基-L-亮氨酸的检测方法在制备N-甲酰基-L-亮氨酸或制备药物中的应用。
优选地，所述药物为奥利司他。
相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
(1)本发明采用液相色谱检测N-甲酰基-L-亮氨酸及其杂质的含量，能够将N-甲酰基-L- 亮氨酸以及杂质有效分离，本发明采用苯基柱，配合磷酸盐缓冲液和乙腈作为流动相，有效 改善分离效果，准确获得N-甲酰基-L-亮氨酸以及杂质的含量；
(2)本发明提供的N-甲酰基-L-亮氨酸的检测方法可以应用于N-甲酰基-L-亮氨酸的制 备，以及药物的制备过程中，以实施对N-甲酰基-L-亮氨酸的质量监控。
附图说明
图1为本发明实施例1的检测结果；
图2为本发明实施例2的检测结果；
图3为本发明实施例3的检测结果。
具体实施方式
为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。 需要指出的是，以下实施例对本发明要求的保护范围不构成限制作用。
以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者 可以通过现有已知方法得到。
实施例1
一种N-甲酰基-L-亮氨酸(名称为：AL7)的检测方法，包括如下步骤：
(1)空白试验：精密量取稀释液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图A，空白不得有干扰；
(2)***适用性溶液配制：分别精密称取N-甲酰基-L-亮氨酸对照品、N-甲酰基-L-丙氨 酸对照品、N-甲酰基-L-蛋氨酸对照品、N-甲酰基-L-缬氨酸对照品以及L-亮氨酰-L-亮氨酸对 照品，用稀释液溶解并稀释制成每1mL约含1mg各杂质的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
***适用性试验：精密量取***适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图；理论 板数按N-甲酰基-L-亮氨酸峰计算应不低于1500；
(3)取供试品适量加稀释液适量溶解并稀释制成每1mL约含1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图B；供试品溶液的色谱图B中扣除空白试验色谱图A的色谱峰，按面积归一化法分别计算。
上述液相色谱条件：
色谱柱：菲罗门，苯基柱(4.6*150mm，3μm)
进样量：20μL
流速：0.5mL/min
柱温：30℃
检测波长：210nm
磷酸盐缓冲液：取二水合磷酸二氢钠1.56g，加水溶解并稀释至1000mL，用磷酸调节pH 值至3.0；
流动相：体积比为80：20的磷酸盐缓冲液：乙腈
稀释液：体积比为80：20的磷酸盐缓冲液：乙腈
检测器：紫外检测器
定量方法：面积归一化法。
实施例2
本实施例与实施例1为同一生产规格指令生产的不同批次的N-甲酰基-L-亮氨酸产品，按 照上述实施例1的检测方法进行检测。
实施例3
本实施例与实施例1为同一生产规格指令生产的不同批次的N-甲酰基-L-亮氨酸产品，按 照上述实施例1的检测方法进行检测。
实施例1-3的检测结果如图1-图3所示，其中图1中的“1-4”峰的出峰时间分别为6.918、 7.705、11.125、28.040min，其中“2”峰是AL7的出峰时间。图2中的“1-2”峰的出峰时间 分别为3.257、8.120min，其中“2”峰是AL7的出峰时间。图3中的“1-2”峰的出峰时间分别为3.240、7.850min，其中“2”峰是AL7的出峰时间。最大单杂的出峰时间不同批次不一样。
具体检测数据见表1-表3。
表1实施例1的检测结果
| 杂质 | 出峰时间(min) | 峰面积 | 峰面积占比(％) | 主峰分离度 | 主峰理论塔板数 |
| AL7 | 7.705 | 253785 | 99.82 | 3.63 | 13814 |
| 最大单杂 | 28.040 | 436 | 0.17 | / | / |
| 总杂 | / | 458 | 0.18 | / | / |
表2实施例2的检测结果
| 杂质 | 出峰时间(min) | 峰面积 | 峰面积占比(％) | 主峰分离度 | 主峰理论塔板数 |
| AL7 | 8.120 | 327826 | 99.91 | 25.55 | 14968 |
| 最大单杂 | 3.257 | 290 | 0.09 | / | / |
| 总杂 | / | 290 | 0.09 | / | / |
表3实施例3的检测结果
| 杂质 | 出峰时间(min) | 峰面积 | 峰面积占比(％) | 主峰分离度 | 主峰理论塔板数 |
| AL7 | 7.850 | 334478 | 99.95 | 23.53 | 13139 |
| 最大单杂 | 3.240 | 157 | 0.05 | / | / |
| 总杂 | / | 157 | 0.05 | / | / |
根据以上表1-表3的检测结果可知，本发明采用液相色谱检测N-甲酰基-L-亮氨酸的制备 过程中的N-甲酰基-L-亮氨酸及其杂质的含量，采用苯基柱作为色谱柱，以磷酸盐缓冲液和乙 腈作为流动相，N-甲酰基-L-亮氨酸与杂质能够很好地分离，分离度不低于1.5，峰型好，实 施例1-3所制得的N-甲酰基-L-亮氨酸的纯度分别为99.82％、99.91％、99.95％。
Claims (10)
1.一种N-甲酰基-L-亮氨酸的检测方法，其特征在于，采用液相色谱进行检测，所述液相色谱的色谱柱为苯基柱；所述液相色谱的流动相为磷酸盐缓冲液和乙腈的混合溶液。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液和乙腈的体积比为(70-90)：(10-30)。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH值为2.0-4.0。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的稀释液为磷酸盐缓冲液和乙腈的混合溶液。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钠缓冲液。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的柱温为20-40℃。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的检测器为紫外检测器。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的检测波长为200-220nm。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的流速为0.1-1.0mL/min。
10.权利要求1-9任一项所述的检测方法在制备N-甲酰基-L-亮氨酸或制备药物中的应用。
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