CN117941700B - 一种防治三七黑斑病的植物源杀菌剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物农药领域,具体涉及一种防治三七黑斑病的植物源杀菌剂,具体的本发明提出方案,吴茱萸碱或藜芦托素在防治由链格孢菌(Alternaria alternata)引起的三七黑斑病中的应用,本发明通过室内杀菌剂毒力测定结果表明,吴茱萸碱和藜芦托素两种植物源杀菌剂对链格孢菌(Alternaria alternata)具有较强的抑制作用;且通过室内盆栽试验观察,两种植物源杀菌剂在不同梯度浓度下均未对三七产生药害,三七正常生长。
Description
技术领域
本发明涉及生物农药领域,具体涉及一种防治三七黑斑病的植物源杀菌剂。
背景技术
三七(Panax notoginseng)为五加科人参属植物,对生长环境的要求比较特殊,自然分布地区主要在云南。三七的干燥根及根茎作为中药材,始载于《本草纲目》,是我国广泛使用的大宗中药材之一。现代医学对三七皂苷类成分、药理作用、临床应用进行了大量的研究,其茎叶的开发也越来越多,三七的需求快速增加,三七种植业得以迅速发展。规模化种植伴随而来的是三七日益严重的病虫害问题,造成了三七的产量和质量的下滑,阻碍了三七产业的健康发展。目前已发现三七病害种类达20 多种,以根腐病、黑斑病、圆斑病等发生较普遍而严重,每年都会造成三七种植业巨量损失。三七黑斑病常年的发病率在5%-20%之间,严重时达到60%以上。病菌能侵染三七植株各个部位,以茎秆、叶柄和花轴受害较重。叶柄感染,多数在叶尖和叶片中间开始产生近圆形或不规则的水浸状褐色病斑,后逐渐展,形成烂三七,造成全株死亡。三七黑斑病的侵染源主要是链格孢属真菌,王朝梁等研究表明三七黑斑病病原为细链格孢(Alternaria alternata Keissl),王淑琴等认为三七黑斑病由人参链格孢(Altemaria panax Whetzel)感染所致,包升的研究表明云南地区的三七黑斑病病原菌为Alternaria alternata,病菌孢子能在病残茎叶中越冬,成为第二年主要初次侵染来源。
生产上对三七黑斑病的防治手段很多,但目前还是以化学防治为主,迄今为止,登记用于三七黑斑病的药物不到10个,以化学药物为主,苯醚甲环唑登记数量最多,是最常使用的药物。长期使用化学杀菌剂导致病菌的抗药性逐渐增强,且化学试剂的持续使用也会造成环境污染,化学药剂在药用植物上的残留也将通过食物链威胁到人们的身体健康。基于以上种种,筛选出生物防治活性高、对环境安全的新型药剂已成为迫在眉睫的现实需求,植物源杀菌剂作为一种从植物中提取的物质,含有抗菌、抑菌、杀虫作用的成分,具有高效、低毒、在自然中易降解等特点,是目前筛选研发的主要方向,针对三七黑斑病相关的植物源杀菌剂还鲜有报道。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种防治三七黑斑病的植物源杀菌剂,以解决背景技术中存在的问题。
为实现以上目的,本发明提供以下技术方案。
本发明通过筛选,提出方案:吴茱萸碱或藜芦托素在防治由链格孢菌(Alternariaalternata)引起的三七黑斑病中的应用
进一步的,所述吴茱萸碱的抑菌浓度不小于34.70 mg/L。
进一步的,所述藜芦托素的抑菌浓度不小于42.99mg/L。
进一步的,本发明提供一种三七黑斑病防治方法,使用含吴茱萸碱或藜芦托素的杀菌剂,喷施于发病初期的三七植株。
本发明达到的技术效果为:
本发明通过室内杀菌剂毒力测定结果表明,吴茱萸碱和藜芦托素两种植物源杀菌剂对Alternaria alternata病菌具有较强的抑制作用,其中吴茱萸碱的EC50为34.70 mg/L,藜芦托素EC50为42.99mg/L,室内盆栽药效试验显示, 100 mg/L浓度下吴茱萸碱的防效优于藜芦托素的防效,300mg/L浓度下吴茱萸碱和藜芦托素的防治效果接近,且通过室内盆栽试验观察,两种植物源杀菌剂在不同梯度浓度下均未对三七产生药害,三七正常生长。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明,这些实施例仅作为说明本发明的例子,不限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
供试药物及相关信息见表1,供试药剂根据厂家说明采用有机溶剂或水溶解后,用0.1%吐温-80水溶液稀释。
表1 供试药剂
实施例1 不同植物源杀菌剂的抑菌活性
1.供试菌株:三七黑斑病病原菌Alternaria alternata,由本课题组分离鉴定保存(分离方法参考:包升. 三七黑斑病病原菌Alternaria alternata的次生代谢产物及其致病性研究[D]. 云南大学, 2020.),供试培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA:马铃薯200g,葡萄糖 20 g,琼脂粉18 g,加水定容至1L,121℃,20min高压灭菌冷却后备用)。
2.Alternaria alternata活化培养
应用 PDA 培养基,将分离纯化的病菌于25℃恒温培养箱中,光周期L/D =12h/12h交替培养5天,用直径5 mm的灭菌打孔器在菌龄相近、长势一致的菌落部位打取菌饼备用。
3.对三七黑斑病的室内毒力测定
采用生长速率法。将待测药剂分别配制成5个不同质量浓度梯度,将每种供试药剂加入冷却至50℃左右的PDA平板培养基中制成含药平板,接种单个直径为5mm的菌饼,设无菌水为对照,每个处理设3次重复。28℃恒温培养箱中培养,5 d后采用十字交叉法测量菌落直径,并计算不同杀菌剂及杀菌剂的不同质量浓度对病菌菌丝生长的抑制率,并计算供试杀菌剂处理下Alternaria alternata的相关性系数以及EC50,计算公式为:
菌丝生长抑制率=[(对照组菌落直径-处理组菌落直径)/对照组菌落直径] ×100%。
4.试验结果
5种植物源杀菌剂对Alternaria alternata生长的抑制效果结果如表2所示,5种植物源杀菌剂均随着使用浓度的升高,抑制率随之升高,其中,吴茱萸碱对Alternaria alternata生长抑制作用最强,当吴茱萸碱的质量浓度为80mg/L时,抑制作用最高达62.54%;藜芦托素效果次之,当藜芦托素的质量浓度为80mg/L时,对Alternaria alternata最高抑制作用为58.42%;茶皂素的抑制效果最差,当其质量浓度为80 mg/L时,对Alternaria alternata的生长抑制率仅为38.20%。
通过标准曲线计算5种植物源杀菌剂对Alternaria alternata的毒力回归方程、相关性系数和EC50,结果如表3所示,5种植物源杀菌剂的毒力回归方程的相关性系数均高于0.97,说明杀菌剂浓度与Alternaria alternata的抑制效果呈正相关,其中,吴茱萸碱的EC50为34.70mg/L,相对于其它杀菌剂,数值最小,表明吴茱萸碱对Alternaria alternata生长的抑制效果最好;藜芦托素的抑菌效果次之,其 EC50为42.99mg/L。参考5种植物源杀菌剂对Alternaria alternata的 EC50,可知5种植物源杀菌剂的有效成分对Alternaria alternata的抑制作用由强到弱依次为吴茱萸碱>藜芦托素>银杏酸> 棉籽酚>茶皂素。
表2 5种植物源杀菌剂对Alternaria alternata生长的抑制效果
注:同一列数据中的不同小写字母表示不同处理组在0.05水平上差异的显著性,下同。
表3 5种植物源杀菌剂对Alternaria alternata的毒力分析
实施例2 盆栽试验
1.试验方法
盆栽试验在温室进行,采用盆栽方法测定杀菌剂对三七黑斑病的防效。收集Alternaria alternata在PDA培养基上培养7 d 的分生孢子于1.5 mL 无菌离心管中,加入无菌水配成孢悬液(1.0×105个/mL)。选择移栽至盆(直径33 cm×高20 cm)内,三年生的长势一致三七苗,每株吸取10μL孢子悬液注射于三七茎基部。三七黑斑病发生初期(出现椭圆形褐色病斑),使用常量喷雾器将不同浓度的杀菌剂喷洒于三七根部、茎基部和叶面,药量以叶片两面湿润、药液不下滴为准,每株喷药约10 mL,对照组使用无菌水处理,并以防治三七黑斑病的苯醚甲环唑作为商品杀菌剂对照。每个处理10盆,每盆3株,完全随机排列,3次重复,处理后的三七植株置于温室中培养(室温在24±1℃,相对湿度 80%,L/D=12 h/12 h,培养 10 d 后调查试验结果。
2.调查方法
调查三七的全部叶片,按病斑面积占整片叶面积的百分率分级,记录总叶片数,各级病叶数,依照施药前、后各处理病情指数,计算防治效果。
病症分级标准:
0 级:全株无病;
1 级:病斑面积占叶面积的1%以下;
3 级:1/4 叶片受侵染,病斑面积占整片叶面积的2%~5%;
5 级:1/3 叶片受侵染,病斑面积占整片叶面积的6%~10%;
7 级:半数叶片受侵染,病斑开始合并,病斑面积占整片叶面积的11%~20%;
9 级:半数叶片受侵染,病斑开始合并,病斑面积占整片叶面积的21%以上。
根据分级标准计算病情指数和防效。计算公式如下:
3.试验结果
由表4,盆栽试验显示,吴茱萸碱在50 mg/L、100 mg/L、300 mg/L的浓度下,防效分别为40.27%、65.39%、84.35%,藜芦托素在50 mg/L、100 mg/L、300 mg/L的浓度下,防效分别为34.28%、53.83%、82.45%,两种植物源杀菌剂防效随着活性成分浓度增高而增效,低浓度下吴茱萸碱的防效略优于藜芦托素的防效,当两种植物源杀菌剂的浓度达到300 mg/L时,防效无显著(P<0.05)区别,且防效高于10 mg/L的苯醚甲环唑防效。
表4 供试药剂对三七黑斑病的防治效果
综上,室内杀菌剂毒力测定结果表明,吴茱萸碱和藜芦托素两种植物源杀菌剂对Alternaria alternata菌具有较强的抑制作用;室内盆栽药效试验显示,100 mg/L浓度下吴茱萸碱的防效优于藜芦托素的防效,300 mg/L浓度下吴茱萸碱和藜芦托素的防治效果趋同,且通过室内盆栽试验观察,两种植物源杀菌剂在不同梯度浓度下均未对三七产生药害,三七正常生长,本研究通过室内筛选获得两种对云南地区三七黑斑病防治有效的植物源杀菌剂,并进一步通过盆栽实验测试其使用的安全性,为后期的大田实验提供了基础数据。
Claims (4)
1.吴茱萸碱或藜芦托素在防治由链格孢菌(Alternaria alternata)引起的三七黑斑病中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述吴茱萸碱的抑菌浓度不小于34.70mg/L。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述藜芦托素的抑菌浓度不小于42.99mg/L。
4.一种三七黑斑病防治方法,其特征在于,使用含吴茱萸碱或藜芦托素的杀菌剂,喷施于发病初期的三七植株。
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