CN117899199A - 一种用于治疗感光细胞变性的药物 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及一种用于治疗感光细胞变性的药物。本公开揭示了神经肽Y(NPY)或含有NPY的组合物、编码NPY的核酸、包含编码NPY的核酸构建体或载体***、包含编码NPY的核酸的病毒、或包含编码NPY的核酸的细胞在制备用于治疗受试者中感光细胞变性诸如视网膜色素变性的药物中的用途。本公开创新性使用AAV作为载体，该AAV可在体内长期稳定表达。

Description

一种用于治疗感光细胞变性的药物
技术领域
本公开属于生物医学领域，尤其涉及到一种基于NPY的基因疗法使用rAAV作为载体用于感光细胞变性的治疗的药物组合物及其用途。
背景技术
视网膜是位于眼睛后部的感光膜，具有特殊的感官特性，能够通过感光细胞(光感受器，photoreceptor cell)捕获光，感光细胞分别根据其在明亮或昏暗的光线下更活跃的能力而分为视锥细胞(cone cell)和视杆细胞(rod cell)，在此水平上，通过光转导过程将其转换为电信号，并将电脉冲进一步整合和处理为神经元，在中枢神经***(CentralNervous System，CNS)形成图像。
视网膜色素变性(Retinitis Pigmentosa，RP)是一种慢性、进行性、遗传性、营养不良性视网膜色素病变，也称为色素性视网膜炎。其主要特征是视网膜光感受器和色素上皮功能进行性受损，其病理改变为从赤道部视杆细胞开始的进行性退行性病变，伴视网膜各层不同程度的萎缩，神经胶质和血管阻塞硬化，色素上皮细胞色素脱失并移行到视网膜内，最终导致视网膜感光细胞不可逆性、进行性死亡。其主要的临床特征为视野渐进性丧失、夜盲和明显的色素沉着等。
视网膜色素变性的发病率约为1/5000～1/3000，在我国，RP的发病率也在逐年上升，约为1/1000。该病常起于儿童或少年早期，至***加重，逐渐视力下降，严重至失明，通常为双眼发病，单眼发病极为罕见，是引起失明的重要原因之一。目前，没有可以完全治愈RP的药物或方法，已有的治疗方案多为对症处理、减缓疾病进展以达到改善视力的目标。针对RP原发病治疗的报道较多，包括药物、激光、手术治疗以及基因治疗和细胞治疗等。但是既往的治疗方法大多疗效不明确。
视网膜营养不良(Retinal Dystrophies，又称遗传性视网膜变性)是一大类遗传性眼疾，导致不可逆的视力丧失和失明，是由于一种或多种基因的突变导致视网膜感光细胞死亡而引起的。目前人们正在积极探寻治疗视网膜营养不良的多种治疗方案。
视锥视杆细胞营养不良(Cone-rod Dystrophy)是遗传性黄斑变性疾病之一，主要损害视锥细胞，也伴有不同程度的视杆细胞损害。此病主要累及黄斑区，以后也可发生周边部的视网膜色素变性。视锥细胞损害发生较早,因此主要症状为视力减退,后天性色觉异常,当视杆细胞受损时发生夜盲。因此又称中央型视网膜色素变性。目前，虽然各类研究在遗传性视网膜疾病的治疗干预方面有不错的结果，但尚未有明确的治疗方法。
腺相关病毒(Adeno-Associated Virus，AAV)由于安全性好、宿主范围广、免疫原性低和能长期高效表达外源基因等特点，很快就成为最受欢迎的基因递送的重要工具。迄今为止，全球共有七款以重组AAV为递送工具的基因治疗药物获批上市，分别为诺华(Novartis)公司的Zolgensma、Uniqure公司的Glybera、Spark Therapeutics公司的Luxtura、CSL Behring公司的Hemgenix、Sarepta Therapeutics公司的Elevidys、Biomarin公司的Roctavian和PTC Therapeutics公司的Upstaza，此外还有数百个以重组AAV为递送工具的基因治疗药物进入临床试验阶段。2017年美国FDA批准的Luxturna是首个RP基因治疗药物，基因治疗是目前治疗视网膜疾病尤其是感光细胞变性最有潜力的治疗手段之一。
发明内容
本公开提供了神经肽Y(NPY)或含有神经肽Y(NPY)的药物组合物在制备用于治疗受试者中感光细胞变性诸如视网膜色素变性(RP)、视网膜营养不良或变性、视杆锥营养不良等的药物中的用途。
本公开提供了编码神经肽Y(NPY)的核酸、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的构建体或载体***、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的病毒、或包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的细胞、或包含上述物质的药物组合物在制备用于治疗受试者中感光细胞变性诸如视网膜色素变性(RP)、视网膜营养不良或变性、视杆锥营养不良等的药物中的用途。
另一方面，本公开提供了一种治疗受试者中感光细胞变性诸如视网膜色素变性(RP)、视网膜营养不良或变性、视杆锥营养不良等的方法，包括向受试者施用治疗有效量的神经肽Y(NPY)或含有神经肽Y(NPY)的组合物、编码神经肽Y(NPY)的核酸、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的构建体、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的病毒、或包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的细胞。
另一方面，本公开提供了神经肽Y(NPY)或含有神经肽Y(NPY)的组合物、编码神经肽Y(NPY)的核酸、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的构建体、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的病毒、或包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的细胞在治疗受试者中感光细胞变性诸如视网膜色素变性(RP)、视网膜营养不良或变性、视杆锥营养不良等的方法中的用途。
在一些实施方式中，本公开中所述神经肽Y为哺乳动物来源的NPY或其变体，优选为人源神经肽Y(hNPY)、人源神经肽Y成熟体(human mature NPY，hmNPY)、大鼠源NPY(rNPY)、小鼠源NPY(musNPY)或其变体。
在一些实施方式中，所述hNPY包含选自SEQ ID NO:1、与SEQ ID NO:1具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，编码hNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:2、与SEQ ID NO:2具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列。
在一些实施方式中，所述hmNPY包含选自SEQ ID NO:3、与SEQ ID NO:3具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，编码hmNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:4、与SEQ ID NO:4具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列。
在一些实施方式中，所述rNPY包含选自SEQ ID NO:5、与SEQ ID NO:5具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，编码rNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:6、与SEQ ID NO:6具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列。
在一些实施方式中，所述musNPY包含选自SEQ ID NO:7、与SEQ ID NO:7具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，编码musNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:8、与SEQ ID NO:8具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列。
在一些实施方式中，所述包含编码NPY的载体还包含以下功能元件中的至少一种：倒置末端重复序列(ITR)、启动子、调控元件和polyA序列。
在一些实施方式中，所述包含编码NPY的载体选自AAV载体、腺病毒载体、慢病毒载体、RNA病毒载体或牛痘病毒载体中的至少一种。
在一些实施方式中，所述包含编码NPY的核酸的病毒为AAV病毒，优先地，所述AAV病毒中AAV衣壳蛋白的血清型选自AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10、AAVrh10、或AAVDJ。
在一些实施方式中，所述组合物中进一步包括药学上可接受的载体。
在一些实施方式中，所述组合物中进一步包括可治疗感光细胞变性诸如视网膜色素变性(RP)、视网膜营养不良或变性、视杆锥营养不良等的第二药物。
在一些实施方式中，所述受试者是哺乳动物受试者，优选为人受试者。
在一些实施方式中，所述药物适于眼内、静脉内、动脉内、皮下、肌肉、气管内或吸入给药。
有益效果
本公开创新性地使用基于神经肽Y(NPY)的基因疗法，用于感光细胞变性的治疗。本公开创新性使用rAAV作为载体，可在体内长期稳定表达。
附图说明
参考下述附图，本公开可以被更完全地理解。
图1示出了ssAAV-XMRN01载体的结构示意图。
图2示出了ssAAV-XMRN02载体的结构示意图。
图3示出了注射AAV-XMRN01、AAV-XMRN02后H&E染色结果。其中，图3A示出了注射后第6周的结果，图3B示出了注射后第8周的结果。
图4示出了注射AAV-XMRN01、AAV-XMRN02后的视网膜外核层厚度测定结果的统计图。其中，图4A示出了注射后第6周的结果，图4B示出了注射后第8周的结果。
图5示出了注射AAV-XMRN01、AAV-XMRN02后的核密度测定结果的统计图。其中，图5A示出了注射后第6周的结果，图5B示出了注射后第8周的结果。
图6示出了注射AAV-XMRN01、AAV-XMRN02后的视锥细胞免疫荧光染色结果。其中，图6A示出了注射后第6周的结果，图6B示出了注射后第8周的结果。
图7示出了注射AAV-XMRN01、AAV-XMRN02后的视杆细胞免疫荧光染色结果。其中，图7A示出了注射后第6周的结果，图7B示出了注射后第8周的结果。
图8示出了注射AAV-XMRN01、AAV-XMRN02后的视锥细胞数量的统计图。其中，图8A示出了注射后第6周的结果，图8B示出了注射后第8周的结果。
图9示出了注射AAV-XMRN01、AAV-XMRN02后的视杆细胞外节段厚度的统计图。其中，图9A示出了注射后第6周的结果，图9B示出了注射后第8周的结果。
图10示出了注射AAV-XMRN03后的视锥细胞免疫荧光染色结果。其中，图10A出了注射后第8周的视锥细胞免疫荧光染色图，图10B示出了注射后第8周视锥细胞数量的统计图。
图11示出了注射AAV-XMRN03后的视杆细胞免疫荧光染色结果。其中，图11A出了注射后第8周的视杆细胞免疫荧光染色图，图11B示出了注射后第8周视杆细胞外节段厚度的统计图。
图12示出了注射XMRN01后的明暗箱实验统计结果。其中，图12A示出了注射后第5周的明暗箱统计结果，图12B注射后第7周的明暗箱统计结果。
图13示出了注射XMRN03后第7周的明暗箱实验统计结果。
具体实施方式
下面关于本公开的描述仅仅旨在说明本公开的各种不同的实施方式。因此，所讨论的特定修改不应被解释为对本公开范围的限制。对本领域技术人员来说，显然可以在不脱离本公开范围的情况下做出各种不同的等效、改变和修改方案，并且应当理解这些等效实施方式将被包含在本文中。本文引用的包含出版物、专利和专利申请在内的所有参考文献均通过引用整体并入本文。
本文陈述的数值极限或范围包括端点，具体包括在数值极限或范围内的所有值和子范围。
本公开提供了神经肽Y(NPY)或含有神经肽Y(NPY)的组合物在制备用于治疗受试者中感光细胞变性诸如视网膜色素变性(RP)、视网膜营养不良或变性、视杆锥营养不良等的药物中的用途。
本公开提供了编码神经肽Y(NPY)的核酸、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的构建体或载体***、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的病毒、或包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的细胞、或包含上述物质的组合物在制备用于治疗受试者中感光细胞变性诸如视网膜色素变性(RP)、视网膜营养不良或变性、视杆锥营养不良等的药物中的用途。
另一方面，本公开提供了一种治疗受试者中感光细胞变性诸如视网膜色素变性(RP)、视网膜营养不良或变性、视杆锥营养不良等的方法，向受试者施用治疗有效量的神经肽Y(NPY)或含有神经肽Y(NPY)的组合物、编码神经肽Y(NPY)的核酸、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的构建体、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的病毒、或包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的细胞。
另一方面，本公开提供了神经肽Y(NPY)或含有神经肽Y(NPY)的组合物、编码神经肽Y(NPY)的核酸、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的构建体、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的病毒、或包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的细胞在治疗受试者中感光细胞变性诸如视网膜色素变性(RP)、视网膜营养不良或变性、视杆锥营养不良等的方法中的用途。
在一些实施方式中，所述构建体含有编码神经肽Y(NPY)的核酸。所述构建体通常可以通过将编码神经肽Y(NPY)的核酸***合适的表达载体中构建获得，本领域技术人员可选择合适的表达载体。
在一些实施方式中，所述包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的细胞可以为宿主细胞，所述宿主细胞包含上述的构建体或基因组中整合有外源的上述核酸，或所述宿主细胞包含如上任一项所述的病毒诸如腺相关病毒。作为适当宿主细胞的代表性示例，可举例哺乳动物细胞(如CHO或COS)、植物细胞、人细胞(人胚胎肾细胞如HEK293FT)、细菌细胞(如大肠杆菌、链霉菌属、鼠伤寒沙门氏菌)、真菌细胞(如酵母)、昆虫细胞(如Sf9)等。本领域技术人员根据本文教导能够选择合适的宿主。优选地，所述宿主细胞是动物细胞，且更优选是人细胞。宿主细胞可以是培养的细胞或原代细胞，即直接从生物体(如人)中分离。该宿主细胞可以是粘附性细胞或悬浮的细胞，即悬液形式生长的细胞。进一步地，所述腺相关病毒还包括编码目的产物的异源核酸序列，所述编码目的产物的异源核酸序列可以是各种衣壳蛋白能包裹携带的。上述编码目的产物的异源核酸序列通常可以是构建体，所述构建体通常可以含有编码目的产物的核酸。所述构建体通常可以通过将编码目的产物的核酸***合适的表达载体中构建获得，本领域技术人员可选择合适的表达载体，诸如，上述表达载体可以是包括但不限于pAAV-CAG、pAAV-TRE、pAAV-EF1a、pAAV-GFAP promoter、pAAV-Lgr5 promoter、pAAV-Sox2 promoter表达载体等。在本公开中，当所述腺相关病毒编码目的产物的异源核酸序列时，所述腺相关病毒含有衣壳，所述病毒载体携有编码基因产物的转基因，所述转基因受指导其在宿主细胞内表达的调控序列的调控。
在一些实施方式中，本公开还提供了一种使用如上所述的腺相关病毒转化获得的工程化宿主细胞。所述工程化宿主细胞包含上述腺相关病毒。所述宿主细胞可以是真核细胞和/或原核细胞。
在一些实施方式中，所述包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的细胞也可以为治疗性的细胞，将该细胞引入受试者体内，进而在受试者体内表达出神经肽Y(NPY)，以达到治疗的效果。
在一些实施方式中，所述编码神经肽Y(NPY)的核酸的病毒可以为腺相关病毒。所述腺相关病毒包括衣壳，所述衣壳的血清型选自AAV2、AAV5或AAV9。在一些实施方式中，所述AAV的血清型是AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10或AAVrh10。在一些实施方案中，所述AAV载体包含侧翼为一个或多个AAV反向末端重复(ITR)序列。在一些实施方案中，所述异源核酸侧翼为两个AAV ITR。在一些实施方案中，所述AAVITR为AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10、AAVrh10血清型的ITR。在一些实施方案中，所述AAV ITR为AAV2 ITR。在一些实施方案中，所述AAV颗粒的ITR和衣壳源自相同的AAV血清型。在一些实施方案中，所述ITR和所述衣壳源自AAV2。在其他实施方案中，所述AAV病毒颗粒的ITR和衣壳源自不同的AAV血清型。在本发明中，术语“AAV”是腺相关病毒的缩写，可用于指病毒自身或其衍生物。术语“AAV病毒”或“AAV病毒颗粒”或“AAV载体颗粒”指至少含有一种AAV衣壳蛋白和一种包裹的多核苷酸的AAV载体的病毒颗粒。
在一些实施方式中，所述包含编码NPY的载体可以使用现有的任意可以用于NPY的表达和/或递送载体，诸如选自AAV载体、腺病毒载体、慢病毒载体、RNA病毒载体或牛痘病毒载体中的至少一种。
在一些实施方式中，所述包含编码NPY的载体还包含以下功能元件中的至少一种：倒置末端重复序列(ITR)、启动子、调控元件和polyA序列。所述调控元件诸如可以为巨细胞病毒增强子、内部核糖体进入位点(IRES)、土拨鼠肝炎翻译后调控元件(WPRE)等。所述启动子诸如可以为氨苄抗性基因的启动子、卡那霉素抗性基因的启动子、巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)启动子、巨细胞病毒(CMV)增强子-鸡β-肌动蛋白(CAG)启动子、巨细胞病毒增强/β肌动蛋白(CMV enhancer/β-actin，CB)启动子、神经元特异性的人synapsin1(SYN)启动子和星形细胞特异性的GfaABC1D/GFAP启动子。所述polyA序列诸如可以为牛生长激素多腺苷酸化(bGH-polyA)信号序列。
在一些具体实施方式中，所述AAV载体包含一个或多个启动子、和/或增强子、和/或多聚腺苷酸化信号。
在一些优选的实施方式中，所述载体为腺相关病毒载体，其包含：
1)启动子；
2)编码神经肽Y(NPY)的核酸；
3)一个或两个ITR序列，优选为AAV2病毒的ITR序列。
在一些实施方式中，本公开的载体***可以为腺相关病毒载体***，所述载体***包含包装质粒，所述包装质粒中还包含腺相关病毒的rep基因片段。其中所述rep基因片段包含内含子，所述内含子包含转录终止序列。将所述的包装质粒、表达质粒、辅助病毒质粒转入宿主细胞，其中的核酸序列全部整合于宿主细胞中，以生产所述腺相关病毒。在一些实施方式中，所述核酸序列全部一起整合在所述宿主细胞的细胞基因组内的单一基因座处。在一些实施方式中，编码各种基因的核酸序列作为单独的表达盒存在；编码rep和cap基因的核酸序列存在于同一或者不同表达盒中。
在一些具体实施方式中，如图1和2所示，腺相关病毒载体包括ITR序列、编码NPY的核酸、启动子、卡那霉素抗性基因(KanR)基因、ori基因和f1 ori基因。
术语“神经肽Y”
神经肽Y(Neuropeptide Y，NPY)属于神经内分泌肽NPY家族，该家族还包括肽YY(peptide YY，PYY)和胰多肽(pancreatic polypeptide)。NPY广泛存在于全身。神经肽Y(NPY)和NPY受体广泛表达于中枢神经***，包括视网膜。视网膜细胞，特别是神经元、星形胶质细胞和穆勒细胞、小胶质细胞和内皮细胞表达这种肽及其受体(Y1、Y2、Y4和/或Y5)。
在一些实施方式中，本公开中所述神经肽Y为哺乳动物来源的NPY或其变体，优选为人源NPY(hNPY)、人源mature NPY(hmNPY)、大鼠源NPY(rNPY)、小鼠源NPY(musNPY)或其变体。
具体的，NPY的变体是指NPY的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或多个(具体可以是1-50、1-30个、1-20个、1-10个、1-5个、1-3个、1个、2个、或3个)氨基酸而得到的，或者在N-末端和/或C-末端添加一个或多个(具体可以是1-50个、1-30个、1-20个、1-10个、1-5个、1-3个、1个、2个、或3个)氨基酸而得到的，但仍具有NPY功能的多肽片段。所述变体可与NPY诸如SEQ ID NO:1或3中任意序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列一致性。
在一些实施方式中，所述hNPY包含选自SEQ ID NO:1、与SEQ ID NO:1具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，编码所述hNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:2、与SEQ ID NO:2具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列。
在一些实施方式中，所述hmNPY包含选自SEQ ID NO:3、与SEQ ID NO:3具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，编码所述hmNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:4、与SEQ ID NO:4具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列。
在一些实施方式中，所述rNPY包含选自SEQ ID NO:5、与SEQ ID NO:5具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，编码rNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:6、与SEQ ID NO:6具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列。
在一些实施方式中，所述musNPY包含选自SEQ ID NO:7、与SEQ ID NO:7具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，编码musNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:8、与SEQ ID NO:8具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列。
在一些实施方式中，含有神经肽Y(NPY)的组合物中进一步包括药学上可接受的载体。所述药学上可接受的载体可以包括各种载体、赋形剂和稀释剂等，这些载体本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体对于本领域技术人员来说应该是熟知的。所述药学上可接受的载体诸如无菌水或生理盐水、稳定剂、赋形剂、抗氧化剂(抗坏血酸等)、缓冲剂(磷酸、枸橼酸、其它的有机酸等)、防腐剂、表面活性剂(PEG、Tween等)、螯合剂(EDTA等)、粘合剂等。而且，也可含有其它低分子量的多肽；血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白等蛋白质；甘氨酸、谷酰胺、天冬酰胺、精氨酸和赖氨酸等氨基酸；多糖和单糖等糖类或碳水化物；甘露糖醇或山梨糖醇等糖醇。当制备用于注射的水溶液时，诸如生理盐水、含有葡萄糖或其它的辅助药物的等渗溶液，如D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露糖醇、氯化钠，可并用适当的增溶剂诸如醇(乙醇等)、多元醇(丙二醇，PEG等)、非离子表面活性剂(吐温80，HCO-50)等。
在一些实施方式中，所述组合物中进一步包括可治疗感光细胞变性的第二药物。所述第二药物与神经肽Y(NPY)包装在相同或者不同的介质或药盒中。在一些实施方式中，第二药物可以在神经肽Y(NPY)、编码神经肽Y(NPY)的核酸、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的载体、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的病毒、或包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的细胞施用前或者施用后或者同时施用。
在一些实施方式中，本公开所提供的腺相关病毒或药物组合物等可以适应于合适的给药方式，通过皮下、肌肉、关节***、神经***、或循环***诸如血液或体液中施用。诸如所述组合物适于静脉或眼内给药。本领域技术人员可根据给药方式，选择合适的剂量。在一些实施方式中，所述药物是通过玻璃体腔注射施用。
腺相关病毒或药物组合物的活性成分的施用量通常依赖于患者的体重、应用的类型、疾病的病情和严重程度，诸如，作为活性成分的所述的病毒或药物组合物施用量通常可以为1～1000mg/kg/天、1～3mg/kg/天、3～5mg/kg/天、5～10mg/kg/天、10～20mg/kg/天、20～30mg/kg/天、30～40mg/kg/天、40～60mg/kg/天、60～80mg/kg/天、80～100mg/kg/天、100～200mg/kg/天、200～500mg/kg/天、或大于500mg/kg/天。
定义
在进一步描述本发明之前，下面的章节中收集了说明书、实施例、和附加的权利要求中使用的某些术语。本文所列定义应被本领域技术人员根据本发明的其余部分来阅读并理解。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语均具有本发明所属领域普通技术人员通常理解相同的含义。
本文中所使用的单数形式包括复数指称，除非上下文另有明确规定。关于本文中实质上任何复数和/或单数术语的使用，本领域技术人员可以根据上下文和/或应用将复数转变成单数和/或将单数转变成复数。为了清楚起见，在本文中各种单数/复数排列可能被明确地阐述。
本文中使用的“任选的”或“任选地”，意为随后描述的事件或情况能或不能发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的实例以及所述事件或情况没有发生的实例。
术语“包含”、“含有”等应理解为是包括性的意思，而没有排他性或穷尽的意思；即“包括但不限于”的意思。
本发明的核酸或多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。本发明的核酸或多核苷酸还可以是上述核酸或多核苷酸的变体，其编码与本发明所需的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此核酸或多核苷酸的变体可以是天然发生的等位变体或非天然发生的变体。这些核酸或多核苷酸变体包括取代变体、缺失变体和***变体。如本领域所知的，等位变体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或***，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。
术语“氨基酸”包括任何天然存在的氨基酸、其修饰形式和合成氨基酸。上述修饰形式包括修饰氨基酸残基或者通过翻译后修饰(诸如乙酰化、酰胺化、甲酰化、羟基化、甲基化、磷酸化或硫酸酯化)进行修饰的氨基酸。
术语“核酸构建体”在本文中指DNA或RNA分子，这类分子含有编码NPY的核苷酸序列。该编码序列包括操作性连接于调节元件的起始和终止信号，还可以包括能指导接受该核酸分子的个体的细胞中的表达的启动子和聚腺苷酸化信号。
腺相关病毒(AAV)是小的、自然形成的、非致病性的病毒，属于细小病毒科的依赖病毒属。尽管没有造成疾病，已知AAV能够感染人类和其他灵长类动物，并且在人类群体中流行。已经识别出AAV的多种血清型(诸如，AAV2、AAV5、AAV6等)，其表现出不同的组织感染能力。AAV是单链DNA病毒，由大约4,800个核苷酸组成。AAV基因组包括rep基因、衣壳(cap)基因、AAP基因等。rep基因通过使用多种阅读框架、交错的启动子(P5、P19和P40)和可变剪接编码四种非结构Rep蛋白(Rep40、Rep52、Rep68和Rep78)，这是病毒转录控制和复制和将病毒包装到病毒衣壳所需的。衣壳基因编码三种衣壳蛋白(VP)：VP1、VP2和VP3。这三种衣壳蛋白从由单个启动子(在AAV2的情况下，P40)控制的单个mRNA转录物翻译而来。AAP基因编码AAV组装活化蛋白(AAP)。六十个VP单体(包括约VP1的5个副本、VP2的5个副本和VP3的50个副本)在AAV基因组周围自组装以形成成熟病毒颗粒的二十面体蛋白壳(衣壳)。上述AAV基因编码序列的两侧是145个核苷酸的两个AAV特异性的回文反向重复序列(ITR)。AAV是一种天生有缺陷的病毒，缺乏执行以下至少两种至关重要的功能的能力：启动病毒特异性产物合成的能力和组装这种产物以形成成熟的感染性病毒颗粒衣壳的能力。因此，AAV需要共感染辅助(helper)病毒，诸如腺病毒(Ad)、单纯疱疹病毒(HSV)、巨细胞病毒(CMV)、牛痘病毒或人***瘤病毒以提供病毒相关(VA)RNA，该RNA不是由AAV基因组的基因编码的。这种VARNA没有进行翻译，但在调节其他病毒基因的翻译方面发挥作用。此外，AVV病毒的衣壳或基因组元件可含有其他修饰，包括***、缺失和/或取代。
通常使用环形质粒(“rAAV质粒载体”)产生rAAV。通常从这种构建体中删除AAVrep和cap基因并替换成启动子、β球蛋白内含子、***所选治疗基因(转基因)的克隆位点和多聚腺苷酸化(“polyA”)位点。然而，仍然保留AAV的末端反向重复序列(ITR)，使得rAAV质粒载体的转基因表达盒的两侧是ITR序列。因此，在5’至3’方向，rAAV包括5’ITR、rAAV的转基因表达盒和3’ITR。
术语“反向末端重复序列”或“ITR”包括形成发夹结构并用作反向末端重复序列(即，介导所需功能，例如复制、病毒包装、整合和/或原病毒解救等)的任何病毒末端重复或合成序列。ITR可为AAV ITR或非AAV ITR。例如，非AAV ITR序列，例如其他小病毒(例如犬小病毒(CPV)、小鼠小病毒(MVM)、人类小病毒B-19)的那些序列或任何其他合适的病毒序列(例如充当SV40复制的起点的SV40发夹)可用作ITR，其可进一步通过截短、取代、缺失、***和/或添加进行修饰。此外，ITR可为部分或完全合成的。
“AAV反向末端重复序列”或“AAV ITR”可来自任何AAV，包括但不限于血清型1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或目前已知或后续发现的任何其他AAV。AAV反向末端重复序列不一定具有原生末端重复序列(例如可通过***、缺失、截短和/或错义突变改变原生AAVITR序列)，只要末端重复介导所需功能，例如复制、病毒包装、整合和/或原病毒解救等即可。
本文所使用的术语“疾病”通常与术语“障碍”、“综合征”和“病症”同义，并可互换使用，因为它们都反映了人类或动物身体或其部分之一的异常状况，所述异常状况损害了正常功能，通常表现为鉴别性体征和症状，并导致人或动物的寿命或生活质量降低。
术语“治疗”应理解为其最宽的意义，包括治疗性措施和预防性措施两者，其中目的是预防或减缓(减轻)不期望的生理病症、障碍或疾病，或获得有益或所需的临床结果。出于本发明的目的，有益或所需的临床结果包括但不限于症状的缓和，病症、障碍或疾病的程度的减轻，病症、障碍或疾病的状态的稳定(即不恶化)，病症、障碍或疾病的发作延迟或进展减缓，病症、障碍或疾病的状态的改善，以及病症、障碍或疾病的无论是可检测还是不可检测的缓解(无论是部分还是全部)或促进或改善。治疗包括在没有过高水平副作用的情况下引起临床显著的响应。治疗还包括与未接受治疗情况下的预期生存期相比延长生存期。治疗也可能在本质上是预先的，即它可能包括预防疾病。疾病的预防可能涉及完全保护以免于疾病，例如在预防病原体感染的情况下，或者可能涉及预防疾病进展。例如，疾病的预防可能并不意味着在任何水平上与疾病相关的任何效应的完全丧失，而是可能意味着预防疾病症状达到临床显著或可检测的水平。疾病的预防也可能意味着预防疾病发展到疾病的后期。本文使用的“治疗”涵盖哺乳动物、特别是人的疾病(主要指神经退行性疾病)的治疗，包括：(a)在容易患病但是尚未确诊得病的个体中预防疾病(例如预防神经退行性疾病)或病症发生；(b)抑制疾病，例如阻滞疾病发展；或(c)缓解疾病，例如减轻与疾病相关的症状。本文使用的“治疗”涵盖将药物或化合物给予个体以治疗、治愈、缓解、改善、减轻或抑制个体的疾病的任何用药，包括但不限于将含本文所述硫辛酸和印加果油的药物给予有需要的个体。
术语“治疗有效量”通常指一用量在经过适当的给药期间后，能够达到治疗如上所列出的疾病的效果。包含“有效量”的实际量将根据多种情况而变化，包括但不限于疾病的严重程度、患者的体型和健康、成像方式、诊断方式、监测方式和给药途径。熟练医学从业人员可以使用医学领域中已知的方法容易地确定所述适合的量。
术语“患者”和“受试者”可互换，并且可以意味着可以用本公开的药物组合物治疗的任何活生物体。在本公开中，进行治疗性或预防性治疗的对象或个体优选哺乳动物，例如但不限于人、非人类的灵长类、牲畜(如绵羊、牛、马、驴、猪)、宠物(如狗、猫)、实验室试验动物(如小鼠、家兔、大鼠、豚鼠、仓鼠)或被捕获的野生动物(如狐狸、鹿)。所述对象优选灵长类。在某些实施方式中，受试者是哺乳动物，优选受试者是人。在某些实施方式中，受试者是成年人、儿童或婴儿。
本文所使用的术语“给药(施用)”是指由医师或卫生保健提供者直接向所述受试者给药药物组合物。
具体的给药方式将取决于适应症或目的。具体给药途径和剂量方案的选择将由医学从业人员根据医学领域中已知的方法进行调整或滴定，以获得最佳临床响应。待给药的化合物的量是有效的量。待给药的剂量将取决于所治疗的受试者的特征，例如所治疗的特定动物、年龄、体重、健康、同时的治疗(如果有的话)的类型和治疗频率，并且可以由本领域的技术人员(例如由临床医生)容易地确定。
在进一步描述本公开具体实施方式之前，应理解，本公开的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本公开实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本公开的保护范围；在本公开说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本公开另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本公开中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本公开的记载，还可以使用与本公开实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本公开。
除非另外说明，本公开中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明。
统计分析
采用GraphPad Prism 8.0软件进行数据处理和统计分析。统计学水平设在5％或p≤0.05，计算各项分析指标的平均数和标准误(Mean±SEM)，p≤0.05即为差异具有统计学意义。
为了使本技术领域的人员更好地理解本公开方案，下面将对本公开实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本公开一部分的实施例，而不是全部的实施例。
实施例
实施例1.质粒载体的构建
表达人源NPY(hNPY)、人源mature NPY(hmNPY)和大鼠源NPY(rNPY)基因的AAV载体质粒的构建
根据UniProt上公布的hNPY(P01303)的氨基酸序列(SEQ NO：1，参见表1)，根据人密码子偏好设计核苷酸序列(SEQ NO：2)，在5’端引入BamH I酶切位点，在3’端引入EcoR V酶切位点，获得的核酸构建体命名为XMRN01。其中，目的基因由北京擎科生物科技有限公司合成，采用BamH I和EcoR V消化XMRN01和ssAAV质粒后，通过T4连接酶(T4DNAligase)连接、转化和单克隆筛选等常规分子生物学技术构建了ssAAV-XMRN01载体，其结构示意图见图1。阳性克隆经PCR、测序双重验证后，用无内毒素的质粒提取试剂盒(MACHEREY-NAGEL GmbH&Co.KG，货号740420.50)获得质粒DNA备用。
根据UniProt上公布的hNPY的氨基酸序列(SEQ NO：1，参见表1)和Ana Santos-Carvalho等报道的hmNPY的氨基酸序列(SEQ NO：3，参见表1)，根据人密码子偏好设计核苷酸序列(SEQ NO：4，参见表1)，在5’端引入BamH I酶切位点，在3’端引入EcoR V酶切位点，获得的核酸构建体命名为XMRN02。其中，目的基因由北京擎科生物科技有限公司合成，采用BamH I和EcoR V消化XMRN02和ssAAV质粒(同上)后，通过T4连接酶(T4 DNA ligase)连接、转化和单克隆筛选等常规分子生物学技术构建了ssAAV-XMRN02载体，其结构示意图见图2。阳性克隆经PCR、测序双重验证后，用无内毒素的质粒提取试剂盒(同上)获得高质量的质粒DNA备用。
根据UniProt上公布的rNPY(P07808)的氨基酸(SEQ ID NO:5，参见表1)和核酸(SEQ ID NO:6，参见表1)序列，采用同上的方法构建了ssAAV-XMRN03载体。阳性克隆经PCR、测序双重验证后，用无内毒素的质粒提取试剂盒(同上)获得高质量的质粒DNA备用。
根据UniProt数据库上公布的eGFP(A0A076FL24)的氨基酸序列(SEQ ID NO:9，参见表1)，根据人密码子偏好设计核酸序列(SEQ ID NO:10，参见表1)，并在5’端引物BamH I酶切位点，在3’端引入EcoR V酶切位点，命名为NC。基因由北京擎科生物科技有限公司合成，用BamH I和EcoR V消化NC和ssAAV质粒后，通过T4连接酶(T4 DNA ligase)连接、转化和单克隆筛选等常规分子生物学技术构建了ssAAV-NC载体。阳性克隆经PCR、测序双重验证后，用无内毒素的质粒提取试剂盒(同上)获得高质量的质粒DNA备用。
表1.序列信息
实施例2.重组AAV病毒的制备和鉴定
使用三质粒包装***制备重组AAV病毒，具体方法如下：辅助质粒、AAV Rep和Cap蛋白表达质粒和实施例1构建得到的ITR表达质粒(ssAAV-XMRN01、ssAAV-XMRN02、ssAAV-XMRN03、ssAAV-NC)用无内毒素的质粒提取试剂盒(同实施例1)获得质粒DNA备用。HEK293T细胞在10cm培养皿中传代培养，汇合度达到约90％时，换成4mL低血清培养基(DMEM培养基、4％ FBS、1％青霉素-链霉素，其中DMEM培养基购自Gibco公司，FBS购自Natocor公司，青霉素-链霉素购自Gibco公司)培养2小时。
转染试剂配制：在各培养皿中分别加入转染试剂(1mL Opti-MEM、40μg促转剂、10μg pHelper、5μg AAV、5μg XMRN01/XMRN02/XMRN03/NC)，其中Opti-MEM培养基购自Gibco公司，促转剂使用聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine，PEI，购自Polysciences公司)。转染约6小时后，将培养皿里面的液体更换成10mL低血清培养基(DMEM培养基、4％ FBS、1％青霉素-链霉素)，继续放回培养箱培养。上清中病毒分两次收取：第一次收取在培养3天后，收取细胞培养上清液后继续加入新鲜的上述低血清培养基，放回培养箱继续培养，细胞上清液3000rpm离心10分钟去除细胞碎片；第二次收取在培养7天后，收取细胞培养上清液，3000rpm离心10分钟去除细胞碎片。
重组AAV病毒的纯化：首先通过采用离心过滤装置(Millipore，Cat No.910024)将细胞培养上清液浓缩至约10mL，然后通过碘克沙醇梯度离心的方法获取纯净的重组AAV，PBS洗脱后分装，储存于-80℃冰箱备用。
重组AAV病毒的滴度测定：获得的纯化的重组AAV病毒，先通过qPCR的方法检测其病毒滴度，然后通过透射电子显微镜再次鉴定重组AAV病毒的形态、滴度和纯净度等。由此获得滴度和纯净度均合格的重组AAV病毒。
实施例3.AAV-XMRN01、AAV-XMRN02、AAV-XMRN03在视网膜感光细胞变性动物模型中的药效
P23H(+/-)小鼠的视杆细胞显示出区域变性和视杆外细胞节段(rod outersegment，ROS)长度的减少，感光细胞退行性病变，视网膜厚度减少，作为与人P23H视紫红质突变相关的常染色体视网膜色素变性(adRP)模型(参见Sanae,Sakami,Tadao,etal.Probing Mechanisms of Photoreceptor Degeneration in a New Mouse Model ofthe Common Form of Autosomal Dominant Retinitis Pigmentosa due to P23H OpsinMutations[J].Journal of Biological Chemistry,2011.DOI:10.1074/jbc.m110.209759.)。这些小鼠视杆光感受器变性大约需要4到5个月，导致外核层(outernuclear layer，ONL)和视觉功能的明显丧失。这种进行性变性具备2周到4个月的治疗窗口时间。
P23H(+/-)小鼠繁殖的具体方法如下：将成年的C57BL/6J雌鼠和P23H(+/-)雄鼠合笼繁殖，对子代进行基因型鉴定，筛选出P23H(+/-)小鼠。
SPF级10日龄(P10)及28日龄(P28)P23H(+/-)小鼠(饲养于合肥综合性国家科学中心人工智能研究院SPF级实验动物平台，实验动物使用许可证号：SYXK(皖)2020-006)，按照小鼠节律在12小时光照与黑暗交替环境下饲养，28日龄小鼠体重14g左右，注射前进行一般检查，对毛发无异常、眼球正常、体重合格的动物进行注射。
各组于第1天(D1)进行眼内注射给药，在10日龄P23H(+/-)小鼠注射后第7周(D49)、28日龄P23H(+/-)小鼠注射后第5周(D35)分别进行行为学实验(参见Berry M,HoltA,Salari A,et al.Restoration of high-sensitivity and adapting vision with acone opsin[J].Investigative ophthalmology&visual science,2019.)，分析给药后对小鼠视力的影响。然后在10日龄P23H(+/-)小鼠注射后第8周(D56)、28日龄P23H(+/-)小鼠注射后第6周(D42)进行取材，每组分别安乐死3只小鼠，取眼球进行冷冻切片，免疫荧光染色和H&E染色观察分析视网膜结构。给药方案参见表2。
表2.第1天对小鼠进行双眼眼内注射给药
具体操作步骤如下：
玻璃体腔注射给药：10日龄小鼠置于冰上3分钟左右达到麻醉效果，使用针头划开小鼠眼皮，使眼球暴露；28日龄小鼠双眼各滴5％扩瞳液进行扩瞳，腹腔注射阿弗丁240mg/kg麻醉。然后将麻醉后的动物侧卧于操作台上，选择眼睛颞上或鼻上角巩膜缘后1-2mm为注射进针处(注射器：Hamilton针，7632-01)，注意避免损伤晶体后囊和其它视网膜部位。针头进入玻璃体腔，推注注射液，结束后停顿10秒缓慢拔针，涂红霉素眼膏，放回笼中。
视网膜下腔注射给药：10日龄小鼠置于冰上3分钟左右达到麻醉效果，使用针头划开小鼠眼皮，暴露出眼球，然后将动物侧卧于操作台上，选择眼睛颞上或鼻上角巩膜缘后1-2mm为注射进针处(注射器：Hamilton针，7632-01)，注意避免损伤晶体后囊和其它视网膜部位。针头进入视网膜下腔，推注注射液，结束后缓慢拔针，涂红霉素眼膏，放回笼中。
实施例4：苏木素伊红(H&E)染色评估AAV-XMRN01、AAV-XMRN02对P23H(+/-)模型小鼠视网膜外核层厚度及核密度的影响
将实施例3中的小鼠摘除眼球，取单侧眼于4％多聚甲醛(Biosharp)4℃固定过夜，PBS(Biosharp)清洗4次后将角膜与晶状体剥离，保留视网膜、脉络膜、巩膜等眼杯进行30％蔗糖(生工)脱水，直至沉底后进行10μm厚度冷冻切片，对切片进行H&E染色，染色完成后拍照并用Image J对视网膜切片进行外核层(ONL)厚度及核密度进行测量并分析差异。
28日龄P23H(+/-)小鼠注射后第6周的H&E染色、视网膜外核层厚度及核密度结果分别见图3A、4A和5A；10日龄P23H(+/-)小鼠注射后第8周的H&E染色、视网膜外核层厚度及核密度结果分别见图3B、4B和5B。2种不同日龄注射的小鼠，与各自对照组相比，模型小鼠视网膜外核层厚度及核密度均显著减少；与模型组相比，注射AAV-XMRN01均能显著增加外核层的厚度及核密度，改善了视网膜的结构退化，注射AAV-XMRN02有增加外核层的厚度及核密度的趋势；AAV-XMRN01对视网膜厚度及核密度的改善作用均优于AAV-XMRN02。
实施例5：免疫荧光染色评估AAV-XMRN01、AAV-XMRN02、AAV-XMRN03对P23H(+/-)模型小鼠视网膜感光细胞的影响
将实施例4中冷冻切片于载片盒内室温晾干，用免疫组化笔(Vectorlabs)将载玻片上的组织圈起；将多聚赖氨酸载玻片(世泰)放入湿盒内，用PBS清洗载玻片上的组织，室温孵育5分钟，倒掉玻片上的PBS，如此洗涤5次，每次10分钟；加封闭液(5％山羊血清(碧云天)+0.5％ Triton 100(生工))500μL/张，于湿盒内室温孵育45分钟；倒掉载玻片上的封闭液，滴加一抗混合液：视锥细胞感光物质Cone Arresting-1(EMD Millipore Corp)、视杆细胞感光物质Rodopsin-1(Santa Cruz)，稀释比例均为1：500，200μL/张，放置于湿盒内4℃过夜孵育；次日，室温下以PBS冲洗5次，每次5分钟；加二抗混合液：Anti-rabbit IgG AlexaFluor 555(Cell Signaling)和Donkey anti-Mouse IgG(H+L)Highly Cross-AdsorbedAlexa Fluor 488(Invitrogen)1:500稀释进行复染，于湿盒内避光室温孵育2.5小时；此步后均需避光；去除二抗，室温下PBS冲洗5次，每次5分钟；加DAPI染色液(Sigma)，50μL/张，室温孵育10分钟后，PBS冲洗3次，每次5分钟；封片，在荧光显微镜下观察拍照。
28日龄P23H(+/-)小鼠玻璃体腔注射XMRN01和XMRN02后第6周的视锥细胞免疫荧光染色、视杆细胞免疫荧光染色、视锥细胞数量的统计及视杆细胞外节段厚度的统计结果分别见图6A、7A、8A和9A；10日龄P23H(+/-)小鼠玻璃体腔注射XMRN01和XMRN02后第8周的视锥细胞免疫荧光染色、视杆细胞免疫荧光染色、视锥细胞数量的统计及视杆细胞外节段厚度的统计结果分别见图6B、7B、8B和9B。与对照组相比，模型组视网膜视锥细胞数量减少，视杆细胞外节段厚度变窄，感光细胞明显退化；与模型组相比，注射AAV-XMRN01、AAV-XMRN02均能显著改善视锥细胞与视杆细胞退化。
10日龄P23H(+/-)小鼠视网膜下腔注射XMRN03后第8周的视锥细胞免疫荧光染色、视杆细胞免疫荧光染色、视锥细胞数量的统计及视杆细胞外节段厚度的统计结果分别见图10和11。与模型组相比，注射AAV-XMRN03能显著改善视锥细胞与视杆细胞退化。
实施例6：行为学评估AAV-XMRN01、AAV-XMRN02、AAV-XMRN03对P23H(+/-)模型小鼠视力的影响
如实施例3中所述，在10日龄P23H(+/-)小鼠注射后第7周(D49)、28日龄P23H(+/-)小鼠注射后第5周(D35)分别进行明暗箱实验。明暗箱为一个箱体，明区为透明区域，暗区为黑色区域，暗区的体积为明区的二分之一，且光照强度远低于明区，一个小门连接明暗区，使动物能够自由穿行。这种测试依赖于小鼠对光照环境的天然偏好和视力情况，视力正常的小鼠倾向于在暗区停留更长时间。将小鼠提前在行为学间暗适应2h，然后放入明暗箱适应10分钟，之后拍摄记录小鼠10分钟内分别在明区和暗区的行动，统计在每个区域停留的时长，计算小鼠在明箱中的时长占比(Berry M,Holt A,Salari A,et al.Restoration ofhigh-sensitivity and adapting vision with a cone opsin[J].Investigativeophthalmology&visual science,2019.)，分析给药后对小鼠视力的影响。
28日龄P23H(+/-)小鼠玻璃体腔注射XMRN01后第5周的明暗箱统计结果见图12A；10日龄P23H(+/-)小鼠玻璃体腔注射XMRN01后第7周的明暗箱统计结果见图12B。与对照组相比，模型组在明箱中停留的时长较久，对光照相对不敏感，说明视力的退化；与模型组相比，注射AAV-XMRN01能改善视力退化。
10日龄P23H(+/-)小鼠视网膜下腔注射XMRN03后第7周的明暗箱统计结果见图13。与模型组相比，注射AAV-XMRN03能改善视力退化。
通过引用并入
本文中提到的每个专利和科学文献的全部内容为所有目的通过引用并入本文。
等同性
本公开可以以其他特定方式体现，而不背离其精神或本质特征。因此，上述实施方式在所有情况下应该被当作是说明性的，而不是对本文描述的发明的限制。因此，本公开的范围由随附的权利要求书而不是由上述描述指明，并打算将在权利要求书的等同性意义和范围之内的所有变化涵盖在其中。

Claims (10)

1.神经肽Y(NPY)、含有神经肽Y(NPY)的药物组合物、编码神经肽Y(NPY)的核酸、包含编码神经肽Y(NPY)的载体、包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的病毒、或包含编码神经肽Y(NPY)的核酸的细胞、或包含上述物质的药物组合物在制备用于治疗受试者中感光细胞变性的药物中的用途，优选地，所述感光细胞变性包括视网膜色素变性(RP)、视网膜营养不良或变性、视杆锥营养不良的至少一种。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述神经肽Y为哺乳动物来源的NPY，优选为人源神经肽Y(hNPY)或人源神经肽Y成熟体(hmNPY)、大鼠源神经肽Y(rNPY)、小鼠源神经肽Y(musNPY)。
3.如权利要求2所述的用途，其中所述hNPY包含选自SEQ ID NO:1、与SEQ ID NO:1具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列；
编码所述hNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:2、与SEQ ID NO:2具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列；
所述hmNPY包含选自SEQ ID NO:3、与SEQ ID NO:3具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列；
编码所述hmNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:4、与SEQ ID NO:4具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列；
所述rNPY包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:5具有90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列；
编码所述rNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:6、与SEQ ID NO:6具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列；
所述musNPY包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:7具有90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的氨基酸序列；
编码所述rNPY的核酸包含选自SEQ ID NO:8、与SEQ ID NO:8具有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列一致性的核酸序列。
4.如权利要求2或3所述的用途，其中所述包含编码NPY的载体还包含以下功能元件中的至少一种：倒置末端重复序列(ITR)、启动子、调控元件和polyA序列。
5.如权利要求2至4中任一项所述的用途，其中所述包含编码NPY的载体选自腺相关病毒AAV载体、腺病毒载体、慢病毒载体、RNA病毒载体或牛痘病毒载体中的至少一种。
6.如权利要求2至5中任一项所述的用途，其中所述包含编码NPY的核酸的病毒为AAV病毒，优先地，所述AAV病毒中AAV衣壳蛋白的血清型选自AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10、AAVrh10、或AAVDJ。
7.如权利要求1至6中任一项所述的用途，其中所述药物组合物中进一步包括药学上可接受的载体或赋形剂。
8.如权利要求1至7中任一项所述的用途，其中所述药物组合物中进一步包括可治疗感光细胞变性的第二药物。
9.如权利要求1至8中任一项所述的用途，其中所述受试者是哺乳动物受试者，优选为人受试者。
10.如权利要求1至9中任一项所述的用途，其中所述药物适于眼内、静脉内、动脉内、皮下、肌肉、气管内或吸入给药。
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