CN117887679B - 羰基还原酶突变体及其在制备(s)-玻色因中的应用 - Google Patents
羰基还原酶突变体及其在制备(s)-玻色因中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物工程领域，具体涉及羰基还原酶突变体及其在制备(S)‑玻色因中的应用。本发明以假丝酵母菌CandidaorthopsilosisCo的羰基还原酶CoCR13为来源进行酶的改造，并对其突变体进行了筛选，确定了影响初始羰基还原酶酶学性质的关键残基，同时获得了具有高活性的羰基还原酶突变体。本发明筛选得到的羰基还原酶突变体在催化1‑C‑(β‑D‑吡喃木糖基)‑丙酮在制备(S)‑玻色因的反应中，具有良好的催化效率，催化效率在1.0~1.7 mM‑1S‑1的范围内，同时，所获得的(S)‑玻色因的光学纯度高，ee值均在99.4~99.9%之间。
Description
技术领域
本发明属于生物工程领域，具体涉及羰基还原酶突变体及其在制备(S)-玻色因中的应用。
背景技术
玻色因，化学名为羟丙基四氢吡喃三醇，是一种具有抗衰老活性的木糖衍生物，具有(R)-玻色因与(S)-玻色因等两种构型，且两种构型均具有活性，其中，(S)-玻色因是对细胞刺激效果最佳的构型，研究表明，(S)-玻色因能够促进受损组织的再生，帮助维持真皮的弹性，预防皮肤老化且易于生物降解，在护肤品、彩妆、洗浴用品等行业有极高的应用价值。
随着当前世界各国对药品和化妆品使用标准的提高，通过新方法实现高收率是目前对工业生产(S)-玻色因的实际需求。
(S)-玻色因最初主要是采用化学的方法进行合成，如2014年Philippe等用重金属催化剂Ru/C对羰基进行还原；2020年王长斌等通过三乙酰氧基硼氢化钠还原羰基来制备(S)-玻色因，然而化学合成法存在除盐步骤繁琐、立体选择性差、成本高、不环保等问题。
近年来，由于生物酶法合成(S)-构型玻色因具有安全高效，成本低廉，立体选择性专一且对环境更加友好等优势，因此成为(S)-玻色因工业合成的主要研究方法。尽管生物酶法具有诸多优点，然而目前也仅有国内几篇专利报道通过生物酶法实现了此步的还原，也仍存在适用底物浓度不高（CN115747272A）、酶催化效率低（CN115896199A)、酶制剂的工业生产条件适应性不强（CN114507681A）等问题，生物酶法高效合成高浓度(S)-玻色因的方法尚有待开发。
因此，若是能开发出催化能力更强的生物酶用于生产(S)-玻色因，将极大的提高玻色因工业化制备效率，对(S)-玻色因市场的发展具有重要意义。
发明内容
为了实现以1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮为原料高效合成高纯度(S)-玻色因，本发明开发了能够高效催化1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮反应制备(S)-玻色因的羰基还原酶突变体，同时还提供了与该羰基还原酶对应的氨基酸序列、对应基因的核苷酸序列、重组表达质粒、基因工程菌株及其制备方法，以及该羰基还原酶在立体专一性合成(S)-玻色因中的应用。
本发明从实验室现有的酶库入手，得到了来自假丝酵母菌CandidaorthopsilosisCo的羰基还原酶CoCR13作为初始羰基还原酶，对该初始羰基还原酶编码基因进行定点突变，并对所获得的突变体进行筛选，确定了影响初始羰基还原酶酶学性质的关键残基，同时获得了具有高活性的羰基还原酶突变体。实验结果表明，将筛选获得的羰基还原酶突变体应用于以1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮为底物制备(S)-玻色因的催化反应中表现出良好的催化效果。
本发明所提供的羰基还原酶突变体，其蛋白质的氨基酸序列选择如下的序列之一：
（1）如SEQ ID No:3所示的氨基酸序列：将SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第135位精氨酸替换为甘氨酸，第163位丝氨酸替换为甲硫氨酸，且第192位苏氨酸替换为丙氨酸；
（2）如SEQ ID No:5所示的氨基酸序列：将SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第135位精氨酸替换为甘氨酸，第236位天冬氨酸替换为甲硫氨酸，且第211位丝氨酸替换为丙氨酸；
（3）如SEQ ID No:7所示的氨基酸序列：将SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第230位苯丙氨酸替换为甘氨酸，第163位丝氨酸替换为甲硫氨酸，且第192位苏氨酸替换为丙氨酸；
（4）如SEQ ID No:9所示的氨基酸序列：将SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第230位苯丙氨酸替换为甘氨酸，第236位天冬氨酸替换为甲硫氨酸，且第211位丝氨酸替换为丙氨酸；
（5）如SEQ ID No:11所示的氨基酸序列：将SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第231位缬氨酸替换为甘氨酸，第163位丝氨酸替换为甲硫氨酸，且第192位苏氨酸替换为丙氨酸；
（6）如SEQ ID No:13所示的氨基酸序列：将SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第231位缬氨酸替换为甘氨酸，第236位天冬氨酸替换为甲硫氨酸，且第211位丝氨酸替换为丙氨酸。
编码上述羰基还原酶突变体的基因，所述基因的核苷酸序列选自如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQID NO:14中所示的任一种。
此外，本发明还提供了上述的羰基还原酶突变体的制备方法，包括如下步骤：以来自假丝酵母菌Candidaorthopsilosis Co的羰基还原酶CoCR13作为初始羰基还原酶，对该初始羰基还原酶编码基因进行定点突变，并对所获得的突变体进行筛选，筛选完成后构建表达载体，转化蛋白表达宿主菌，诱导蛋白表达。
进一步的，本发明利用分子克隆技术获得了突变体的编码基因，并通过构建突变体基因的6×His融合表达载体并导入基因工程菌大肠杆菌超级感受态细胞（E.coliOverExpress C43，DE3）中诱导表达，获得突变体酶蛋白，以突变体为催化剂、以1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮为底物在适当的条件下进行酶催化反应。结果表明，本发明提供的突变体合成(S)-玻色因ee值能够达到99.9%，催化效率较野生型羰基还原酶提高了35.93倍，在(S)-玻色因的工业生产中都有巨大的应用潜力和价值。
本发明以上所提及的所有突变位点及任意组合突变编码羰基还原酶突变体的基因均为本发明所要重点保护的内容。此外，包含所述基因的表达盒﹑载体或者重组菌同样落入本发明所保护的技术范围中。
同理，包含了上述羰基还原酶突变体的催化剂，同样是本发明所保护的技术内容。
更进一步地，本发明还提供了上述羰基还原酶突变体或包含了上述羰基还原酶突变体的催化剂在制备(S)-玻色因中的应用，具体是以1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮为底物进行催化反应，合成(S)-玻色因。
优选的，所述的应用具体是：使用上述的羰基还原酶突变体或包含了上述羰基还原酶突变体的催化剂以1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮为底物，在25~40℃，pH=6.0~8.0、1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮浓度为1000 mM的条件下进行催化反应，合成(S)-玻色因。
本发明的有益效果在于：
（1）本发明通过对假丝酵母菌CandidaorthopsilosisCo来源的羰基还原酶CoCR13进行改造，并对相应的突变体进行筛选，确定了影响初始羰基还原酶酶学性质的关键残基，同时获得了高活性的羰基还原酶突变体，实现了以1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮为原料生产(S)-玻色因的高效催化，显著提高了(S)-玻色因的生产效率；
（2）提供了具有如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQID NO:10、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:14中任一种所示基因核苷酸序列的羰基还原酶突变体、含有该羰基还原酶突变体的催化剂，以及包含所述基因的表达盒、载体或重组菌，在催化1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮制备(S)-玻色因的反应中的应用；
（3）本发明中筛选得到的羰基还原酶突变体催化1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮在制备(S)-玻色因的反应中，具有良好的催化效率，催化效率在1.0~1.7 mM-1S-1的范围中，同时，催化反应也表现出很高的立体选择性，所获得的(S)-玻色因的光学纯度高，ee值在99.4~99.9%之间。
附图说明
图1为本发明中采用羰基还原酶突变体催化1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮合成(S)-玻色因的反应原理示意图；
图2为本发明实施例3中采用羰基还原酶突变体（R135G/S163M/T192A）作催化剂催化获得产物的高效液相色谱图；
图3为本发明实施例4中采用羰基还原酶突变体（F230G/S163M/T192A）作催化剂催化获得产物的高效液相色谱图。
具体实施方式
为了能使本领域技术人员更好的理解本发明，现结合具体实施方式对本发明进行更进一步的阐述。需要声明的是，下述实施例仅作为解释和说明，不以任何方式限制本发明的范围。
本发明中所采用的主要试剂与耗材：
Phanta Max超保真DNA聚合酶P505购买自南京诺唯赞生物科技有限公司；FastDigest DpnI DNA内切酶购买自Thermo Fisher Scientific公司；pET28(a)质粒为已知的大肠杆菌表达载体，载体大小为5369bp，T7启动子，载体标签N-6×His和C-6×His，载体抗性卡那霉素，购自Novogen公司；E.coli DH5a感受态细胞、大肠杆菌超级感受态细胞E.coli Overexpress C43 (DE3)均购买自昂羽生物公司；琼脂粉，购买自Solarbio公司；色氨酸和酵母抽提物均购买自OXOID公司。
LB培养基
每100 mL LB培养基含有：1 g胰蛋白胨、0.5 g酵母提取物和1 g NaCl，pH 7.0-7.2。
配制方法：在1 L蒸馏水中溶解10 g胰蛋白胨、5 g酵母提取物、10 g NaCl，不调节pH值，121℃高压蒸汽灭菌20 min。若配制固体培养基，则100 mL培养基中加入1.8 g琼脂粉。
若未特别说明，以下实施例中使用的试剂均为本领域常规试剂，可商购获得或按照本领域常规方法配制而得，规格为实验室纯级即可。若未特别说明，以下实施例中使用的方法均为本领域常规方法，使用的实验条件均为本领域常规实验条件，可参考相关实验手册或厂商说明书。
实施例1羰基还原酶突变体的制备
一、羰基还原酶突变体设计
通过基因挖掘，从NCBI数据库中筛选获得了羰基还原酶CoCR13基因，该基因的开放阅读框全长1005 bp，其编码的羰基还原酶由334个氨基酸组成，其氨基酸序列(334aa)如SEQ ID NO:1所示。
编码该羰基还原酶的核苷酸序列，如SEQ ID NO:2所示。
本发明通过筛选实验室现有酶库和突变体库，得到了酶活较高的突变体，即本发明所提供的突变体，展现出较好的催化性能及酶活性能。
上述具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的羰基还原酶，其R135对应的核苷酸序列为第403-405位密码子，S163对应的核苷酸序列为第487-489位密码子，T192对应的核苷酸序列为第574-576位密码子，S211对应的核苷酸序列为第631-633位密码子，F230对应的核苷酸序列为第688-690位密码子，V231对应的核苷酸序列为第691-693位密码子，D236对应的核苷酸序列为第705-708位密码子。
突变体R135G/S163M/T192A是将具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的羰基还原酶基因序列的第403-405处密码子由CGC更改为GGC，从而将氨基酸序列的第135位由原来的精氨酸(R)替换成甘氨酸(G)，第487-489位密码子由AGC更改为ATG，从而将氨基酸序列的第163位由原来丝氨酸(S)替换成甲硫氨酸(M)，第574-576位密码子由ACC更改为GCG，从而将氨基酸序列的第192位由原来的苏氨酸(T）替换成丙氨酸(A)，得到的酶突变体；其氨基酸序列如SEQID NO:3所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
突变体R135G/D236M/S211A将具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的羰基还原酶基因序列的第403-405处密码子由CGC更改为GGC，从而将氨基酸序列的第135位由原来的精氨酸(R)替换成甘氨酸(G)，第705-708位密码子由GAT更改为ATG，从而将氨基酸序列的第236位由原来天冬氨酸(D)替换成甲硫氨酸(M)，第631-633处密码子由AGC更改为GCG，从而将氨基酸序列的第211位由原来的丝氨酸(S)替换成丙氨酸(A)，得到的酶突变体；其氨基酸序列如SEQID NO:5所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
突变体F230G/S163M/T192A是将具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的羰基还原酶基因序列的第688-690处密码子由AAA更改为GGC，从而将氨基酸序列的第230位由原来的苯丙氨酸(F)替换成亮氨酸甘(G)，第487-489位密码子由AGC更改为ATG，从而将氨基酸序列的第163位由原来丝氨酸（S)替换成苯丙氨酸(M)，第574-576位密码子由ACC更改为GCG，从而将氨基酸序列的第192位由原来的苏氨酸(T）替换成丙氨酸(A)，得到的酶突变体；其氨基酸序列如SEQID NO:7所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。
突变体F230G/D236M/S211A是将具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的羰基还原酶基因序列的第688-690处密码子由AAA更改为GGC，从而将氨基酸序列的第230位由原来的苯丙氨酸(F)替换成甘氨酸(G)，第705-708位密码子由GAT更改为ATG，从而将氨基酸序列的第236位由原来天冬氨酸（D)替换成苯丙氨酸(M)，从而将氨基酸序列的第211位由原来的丝氨酸(S)替换成丙氨酸(A)，得到的酶突变体；其氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示。
突变体V231G/S163M/T192A是将具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的羰基还原酶基因序列的第691-693处密码子由GTG更改为GGC，从而将氨基酸序列的第231位由原来的缬氨酸(V)替换成甘氨酸(G)，第487-489位密码子由AGC更改为ATG，从而将氨基酸序列的第163位由原来丝氨酸(S)替换成苯丙氨酸(M)，第574-576位密码子由ACC更改为GCG，从而将氨基酸序列的第192位由原来的苏氨酸(T）替换成丙氨酸(A)，得到的酶突变体；其氨基酸序列如SEQID NO:11所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。
突变体V231G/D210M/S211A是将具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的羰基还原酶基因序列的第691-693处密码子由GTG更改为GGC，从而将氨基酸序列的第231位由原来的缬氨酸(V)替换成甘氨酸(G)，第628-630位密码子由GAT更改为ATG，从而将氨基酸序列的第210位由原来天冬氨酸(D)替换成苯丙氨酸(M)，从而将氨基酸序列的第211位由原来的丝氨酸(S)替换成丙氨酸(A)，得到的酶突变体；其氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示。
二、羰基还原酶突变体基因的获得
上述所获得的羰基还原酶突变体，其基因可以通过全基因合成方法或分子克隆方法获得。
本实验采用本实验室通过全基因合成的方法已获得羰基还原酶CoCR13基因，采用PCR法获得羰基还原酶突变体基因，具体步骤如下：
1.初始羰基还原酶全基因的获得
本实验室已合成羰基还原酶CoCR13，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成上述基因并连入质粒pET28a(+)。
2.羰基还原酶定点突变
(1)定点突变引物的设计
表1突变体引物设计
（2)羰基还原酶定点突变
以含有初始羰基还原酶基因的pET28a(+)质粒为模板，采用上述的上游引物和下游引物，按照下列PCR体系和程序扩增羰基还原酶突变体基因。
PCR体系：Phanta Max超保真DNA聚合酶P505 20 μL，模板质粒1 μL，上游引物-F(10 μM) 1 μL，下游引物-R(10 μM) 1 μL，ddH2O 2 μL。
PCR程序如下：a.98℃预变性30 s；b.98℃变性10 s，55℃退火5 s，72℃延伸40s，35个循环；c.72℃延伸5 min，降温至4℃，使用DpnI酶消化含有初始羰基还原酶基因的模板质粒，37℃消化30 min。
(3)DH5a感受态细胞的转化
将（2）中获得的含有羰基还原酶突变体的pET28a(+)质粒的消化产物转化到DH5α感受态细胞中。
将DH5α感受态细胞置于冰上，待细胞融化后加入15 μL质粒溶液,冰上放置30min，42℃热激45 s，然后于冰上静置2 min，加入700 μL无菌LB液体培养基，于37℃、200rpm的条件下摇床中培养1 h，4000 rpm离心1 min，弃600 μL上清，用剩余上清将沉淀的菌体重悬并全部涂布于含有Kana抗性(50 μg/mL)的LB平板培养基上，37℃倒置培养过夜。
(4)阳性克隆筛选
挑取LB平板上的单菌落，接种于含有Kana抗性(50 μg/mL)LB液体培养基中，37℃，200 rpm摇床过夜培养，保菌(无菌甘油终浓度15%)后送金唯智(中国，苏州)公司测序，鉴定初始羰基还原酶是否突变成功。
3.羰基还原酶突变体6×His融合蛋白的异源表达
(1)蛋白表达感受态细胞转化
从-80℃超低温冰箱中分别取出大肠杆菌超级感受态细胞，冰上放置，待细胞融化后，分别向每种感受态细胞中加入1 μL含有羰基还原酶突变体的pET28a(+)质粒，冰上放置30 min，42℃热激45 s，然后冰上放置2 min，加入700 μL无菌LB液体培养基，37℃、200 rpm摇床培养1 h，吸取200 μL培养菌液，涂布于含有抗性卡那霉素50 μg/mL的LB平板培养基上，37℃倒置培养过夜。
(2)羰基还原酶突变体表达菌株保存
挑取LB平板上的单菌落，接种于含有抗性卡那霉素50 μg/mL的LB液体培养基的试管中，37℃、200 rpm摇床过夜培养，用作羰基还原酶突变体的表达菌株，向菌液中加入终体积浓度为15%的无菌丙三醇，-80℃超低温冰箱中长期保存。
(3)蛋白表达
将过夜培养的试管菌液接入50 mL无菌LB液体培养基中，接种量为1%，卡那霉素终浓度为50 μg/mL，37℃、200 rpm下培养2.5 h左右，待OD600=0.6-0.8时，加入终浓度为0.1mM的无菌IPTG，于28℃、200 rpm下诱导培养6 h，然后8000 rpm离心10 min收集菌体。
实施例2
本实施例主要是采用羰基还原酶突变体（R135G/S163M/T192A）合成(S)-玻色因。
本实施例中采用羰基还原酶突变体（NADPH）催化1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮合成(S)-玻色因的反应原理示意图如附图1所示。
(1)酶活测定
羰基还原酶酶活力测定体系如下：
150 μL磷酸缓冲液(100 mM，pH 7.0)，10 μL羰基还原酶(0.25 g/L)，20 μL 1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮(100 mM)，20 μL纯化的突变体酶液，混合体系加入96孔板，在30℃用酶标仪检测6 min内在340 nm处吸光值的下降，根据标曲计算反应消耗羰基还原酶的量。
本发明中所涉及的一个酶活单位U定义为：1分钟内消耗1 μmol 羰基还原酶所需要的酶量。
对本发明中所采用的初始羰基还原酶以及经突变之后获得的其中的两种羰基还原酶突变体（R135G/S163M/T192A与F230G/S163M/T192A）的酶活以及催化活性进行验证，实验结果见下表2。
表2初始羰基还原酶及突变体的酶活
表2中的结果显示，本发明中所采用的初始的羰基还原酶应用于催化1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮合成(S)-玻色因的反应中，催化效率较低，酶的比活力较弱，经过改造后获得的两种酶表现出了显著优异的催化活性。
实施例3
采用本发明提供的羰基还原酶突变体（R135G/S163M/T192A）合成(S)-玻色因。
底物溶液采用pH 6.0的水溶液配制，反应底物1-C-(β-吡喃木糖基)-丙酮的终浓度为1000 mM，反应温度35℃，羰基还原酶突变体的用量为9.5 g/L，反应5 h后于4000 rpm下离心5 min获得样品。
利用高效液相色谱法(HPLC)检测所获得产品中(S)-玻色因的纯度，根据峰面积确定样品中(S)-玻色因的纯度，HPLC的结果如附图2所示，图2中可以看出，(S)-玻色因的保留时间为9.73 min，(S)-玻色因的纯度为99.9%。
实施例4
与实施例3不同的是，本实施例中所采用的羰基还原酶突变体的种类为：F230G/S163M/T192A。将该种羰基还原酶突变体应用于1-C-(β-吡喃木糖基)-丙酮制备(S)-玻色因的反应中，所获得产品的HPLC的结果如附图3所示，附图3中可以看出，(S)-玻色因的保留时间为9.725 min，(S)-玻色因的纯度为99.9%。
除了上述的两种突变体酶之外，本发明对于采用本发明的方法所获得的具有其他氨基酸序列的羰基还原酶突变体的催化效率均进行了验证，实验的结果表明，其余突变体酶的催化效率均在1.0~1.7 mM-1S-1的范围中，所获得的(S)-玻色因的纯度均在99.4~99.9%之间，具体的表征在此不再一一的赘述，但上述的实验结论足见本发明所提供的具有上述氨基酸序列/核苷酸序列的突变体酶在催化1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮合成(S)-玻色因的反应中具有良好的催化效果。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.羰基还原酶突变体，其特征在于，所述的羰基还原酶突变体，其蛋白质的氨基酸序列选择如下序列之一：
（1）如SEQ ID No:3所示的氨基酸序列：将SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第135位精氨酸替换为甘氨酸，第163位丝氨酸替换为甲硫氨酸，且第192位苏氨酸替换为丙氨酸；
（2）如SEQ ID No:5所示的氨基酸序列：将SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第135位精氨酸替换为甘氨酸，第236位天冬氨酸替换为甲硫氨酸，且第211位丝氨酸替换为丙氨酸。
2.编码权利要求1所述的羰基还原酶突变体的基因。
3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列选自如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6中所示的任一种。
4.包含权利要求2所述基因的表达盒、载体或重组菌。
5.权利要求1所述的羰基还原酶突变体在制备(S)-玻色因中的应用，其特征在于，以1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮为底物进行催化反应，合成(S)-玻色因。
6.如权利要求5所述的羰基还原酶突变体在制备(S)-玻色因中的应用，其特征在于，所述催化反应在25~40℃、pH=6.0~8.0、1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮浓度为1000 mM的条件下进行。
7.一种催化剂，其特征在于，其有效成分包含权利要求1所述的羰基还原酶突变体。
8. 权利要求7所述的催化剂在制备(S)-玻色因中的应用，其特征在于，以1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮为底物，在25~40℃、pH=6.0~8.0、1-C-(β-D-吡喃木糖基)-丙酮浓度为1000mM的条件下进行催化反应，合成(S)-玻色因。
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