CN117752851A - 一种灵芝多糖水凝胶的制备方法及其在糖尿病伤口修复中的应用 - Google Patents
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Abstract
一种灵芝多糖水凝胶的制备方法及其在糖尿病伤口修复中的应用，涉及一种灵芝多糖水凝胶的制备方法及应用。制备方法：制备氧化灵芝多糖、氧化灵芝多糖溶液，壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液、海藻酸钠溶液，将氧化灵芝多糖溶液与壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液混合并搅拌混匀后，加入海藻酸钠溶液，加入交联剂，静置成胶得到灵芝多糖水凝胶；本发明制得的水凝胶具有多孔结构、粘附性好，保水性强、生物相容性良好，可以调节巨噬细胞表型，对创面损伤有明显修复作用，应用于创面修复领域，以解决现有技术存在的问题。本发明提供的水凝胶制备工艺简单、原料易得，是一种新颖的慢性伤口敷料，有望运用在伤口修复领域，拓展了灵芝多糖的应用范围。
Description
技术领域
本发明涉及一种灵芝多糖水凝胶的制备方法及应用。
背景技术
术后难愈合伤口、糖尿病伤口、烧伤烫伤等都易造成皮肤伤口溃疡，其中糖尿病伤口是糖尿病常见的并发症之一，且糖尿病伤口不能经历正常伤口愈合的炎症、增殖和重塑三个阶段，导致生理过程紊乱，伤口难以愈合。在糖尿病伤口中，巨噬细胞极化失调，不能从促炎表型(M1)极化为抗炎表型(M2)，导致伤口长期处于炎症期，抑制了糖尿病伤口的愈合。此外，在糖尿病伤口愈合的过程中，高血糖或细菌感染引起微环境中活性氧(ROS)过度积累，ROS与各种细胞成分发生反应，分泌促炎因子，触发氧化应激和恶化的炎症反应以维持巨噬细胞在M1表型，进一步阻碍了伤口愈合。
在众多敷料中，水凝胶被认为是与伤口敷料一样很有前途的伤口制剂。水凝胶能够快速、稳定地封闭伤口，止血，促进组织修复，防止伤口感染。目前，市面上用于创面修复的是人表皮重组因子水凝胶，但价格较昂贵。多糖是一种天然高分子物质，来源广泛易得，具有良好的生物活性，生物相容性，低或无细胞毒性。化学交联法制备的水凝胶可减少交联剂的使用。所以多糖水凝胶是一种经济、绿色安全的产品。多糖是具有稳定性高、毒性低、亲水性强以及生物体内可降解等特点的天然高分子聚合物。它不仅可以调节免疫作用，还在抗肿瘤、抗氧化、降血糖等方面发挥着广泛的药理作用。多糖具有的羟基和氨基等官能团有助于用化学交联法制备多糖基水凝胶并在生物医学领域取得广泛应用。将其与高分子复合材料联合应用，有望提升高分子复合材料的生物活性，对促进伤口愈合至关重要。
灵芝是一种珍贵的多孔菌科大型真菌。灵芝的化学成分丰富，被认为是活性物质的生物制造工厂，多糖是灵芝生物学作用的主要功效成分之一，具有多种药理作用，如抗炎、抗氧化、免疫调节、降血糖等。目前，有关灵芝多糖的研究主要集中在提取纯化、药理活性和作用机理方面，未见利用灵芝多糖制备水凝胶并将其应用于伤口愈合的相关研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种灵芝多糖水凝胶及其制备方法和应用。制得的水凝胶具有多孔结构、粘附性好，保水性强、生物相容性良好，可以调节巨噬细胞表型，对创面损伤有明显修复作用，应用于创面修复领域，以解决现有技术存在的问题。
本发明灵芝多糖水凝胶的制备方法按照以下步骤进行：
一、制备氧化灵芝多糖：将灵芝多糖放入干燥反应容器中，加入乙醇溶液并搅拌，制备灵芝多糖溶液，再加入高碘酸钠，避光氧化10h后，向反应体系中加入与高碘酸钠等摩尔量的乙二醇，搅拌30min～50min，最后加入无水乙醇，沉淀后，抽滤并干燥，即得氧化灵芝多糖；
二、制备氧化灵芝多糖溶液：将氧化灵芝多糖溶解于去离子水中，制得氧化灵芝多糖溶液；
所述氧化灵芝多糖溶液的浓度为2～20wt.％；
三、制备壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液：将壳聚糖或壳聚糖衍生物溶解于加热的去离子水中，制得壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液；
所述壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液的浓度为2～8wt.％；
四、制备海藻酸钠溶液：将海藻酸钠溶解于加热的去离子水中，制得海藻酸钠溶液；
所述海藻酸钠溶液的浓度为3～9wt.％；
五、制备灵芝多糖水凝胶：将氧化灵芝多糖溶液与壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液于25℃下混合并搅拌混匀后，加入海藻酸钠溶液，搅拌均匀，加入交联剂，搅拌后静置成胶，得到灵芝多糖水凝胶；
所述灵芝多糖水凝胶中氧化灵芝多糖与壳聚糖或壳聚糖衍生物的质量比为(1～5)：1；壳聚糖或壳聚糖衍生物与海藻酸钠的质量比为(1～3)：1。
本发明灵芝多糖水凝胶用于糖尿病伤口愈合与修复。
与现有技术相比，本发明通过氧化灵芝多糖，使其部分羟基氧化成醛基，与壳聚糖及壳聚糖衍生物的氨基发生席夫碱反应，再与海藻酸钠互穿制得灵芝多糖水凝胶，主要具有以下优势：
1、本发明首次以灵芝多糖作为主要基质材料和活性物质，设计合成了水凝胶伤口敷料，用于促进糖尿病伤口的愈合与修复。灵芝多糖具有抗炎、抗氧化、免疫调节、抗菌、毒副作用低、安全有效等优势。所制备的水凝胶呈三维网状结构，具有良好粘附性、保水性、机械性能与抗氧化性能，既能促进创面气体和营养物质交换，保证创面组织的呼吸，又能使伤口免受氧化应激的损伤。
2、本发明所制备的灵芝多糖水凝胶中的主要基质材料为灵芝多糖，灵芝多糖主要由甘露糖、半乳糖与葡萄糖组成，而甘露糖可与甘露糖受体(MR)特异性结合，MR能介导灵芝多糖对巨噬细胞的免疫调节作用，抑制巨噬细胞向M1表型极化而促进向M2表型极化，这种相互作用可以降低炎症因子TNF-α和活性氧(ROS)的表达，并提高伤口愈合阶段抗炎细胞因子IL-10的表达，加速伤口组织的新生和适当的胶原沉积，促进慢性伤口的愈合。
3、本发明制备的灵芝多糖对成纤维细胞具有良好的增殖作用，细胞存活率均高于对照组的细胞存活率；其中含4％灵芝多糖的水凝胶具有更好的细胞增殖作用，溶血率均低于2％；对创面损伤有明显修复作用，21天创面愈合率为98.94±0.77％，由皮肤病理切片可观察到新生上皮和血管形成，胶原纤维排列整齐，表明灵芝多糖水凝胶具有促进伤口愈合作用。
4、本发明提供的水凝胶制备工艺简单、原料易得，是一种新颖的慢性伤口敷料，有望运用在伤口修复领域，拓展了灵芝多糖的应用范围。
附图说明
图1是灵芝多糖水凝胶扫描电镜图；
图2是灵芝多糖与氧化灵芝多糖的红外光谱图；
图3是OGLP-CMC/SA与CMC/SA的红外光谱图；
图4是灵芝多糖水凝胶G′-G″曲线图；
图5是灵芝多糖水凝胶循环压缩应力-应变曲线图；
图6是灵芝多糖水凝胶失水率测试结果图；
图7是灵芝多糖水凝胶水蒸气蒸发率图；
图8是L929成纤维在灵芝多糖水凝胶浸提液中的存活率图；
图9是灵芝多糖水凝胶浸提液溶血率图；
图10是灵芝多糖水凝胶小鼠全层皮肤损伤后在3，7，14天愈合情况图；
图11是灵芝多糖水凝胶小鼠全层皮肤损伤后在3，7，14天愈合率图；
图12是灵芝多糖水凝胶小鼠3，7，14天创面皮肤病例切片H&E染色图；
图13是小鼠皮肤组织-免疫荧光图。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意合理组合。
具体实施方式一：本实施方式灵芝多糖水凝胶的制备方法按照以下步骤进行：
一、制备氧化灵芝多糖：将灵芝多糖放入干燥反应容器中，加入乙醇溶液并搅拌，制备灵芝多糖溶液，再加入高碘酸钠，避光氧化10h后，向反应体系中加入与高碘酸钠等摩尔量的乙二醇，搅拌30min～50min，最后加入无水乙醇，沉淀后，抽滤并干燥，即得氧化灵芝多糖；
二、制备氧化灵芝多糖溶液：将氧化灵芝多糖溶解于去离子水中，制得氧化灵芝多糖溶液；
所述氧化灵芝多糖溶液的浓度为2～20wt.％；
三、制备壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液：将壳聚糖或壳聚糖衍生物溶解于加热的去离子水中，制得壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液；
所述壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液的浓度为2～8wt.％；
四、制备海藻酸钠溶液：将海藻酸钠溶解于加热的去离子水中，制得海藻酸钠溶液；
所述海藻酸钠溶液的浓度为3～9wt.％；
五、制备灵芝多糖水凝胶：将氧化灵芝多糖溶液与壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液于25℃下混合并搅拌混匀后，加入海藻酸钠溶液，搅拌均匀，加入交联剂，搅拌后静置成胶，得到灵芝多糖水凝胶；
所述灵芝多糖水凝胶中氧化灵芝多糖与壳聚糖或壳聚糖衍生物的质量比为(1～5)：1；壳聚糖或壳聚糖衍生物与海藻酸钠的质量比为(1～3)：1。
本实施方式具备以下有益效果：
与现有技术相比，本实施方式通过氧化灵芝多糖，使其部分羟基氧化成醛基，与壳聚糖及壳聚糖衍生物的氨基发生席夫碱反应，再与海藻酸钠互穿制得灵芝多糖水凝胶，主要具有以下优势：
1、本实施方式首次以灵芝多糖作为主要基质材料和活性物质，设计合成了水凝胶伤口敷料，用于促进糖尿病伤口的愈合与修复。灵芝多糖具有抗炎、抗氧化、免疫调节、抗菌、毒副作用低、安全有效等优势。所制备的水凝胶呈三维网状结构，具有良好粘附性、保水性、机械性能与抗氧化性能，既能促进创面气体和营养物质交换，保证创面组织的呼吸，又能使伤口免受氧化应激的损伤。
2、本实施方式所制备的灵芝多糖水凝胶中的主要基质材料为灵芝多糖，灵芝多糖主要由甘露糖、半乳糖与葡萄糖组成，而甘露糖可与甘露糖受体(MR)特异性结合，MR能介导灵芝多糖对巨噬细胞的免疫调节作用，抑制巨噬细胞向M1表型极化而促进向M2表型极化，这种相互作用可以降低炎症因子TNF-α和活性氧(ROS)的表达，并提高伤口愈合阶段抗炎细胞因子IL-10的表达，加速伤口组织的新生和适当的胶原沉积，促进慢性伤口的愈合。
3、本实施方式制备的灵芝多糖对成纤维细胞具有良好的增殖作用，细胞存活率均高于对照组的细胞存活率；其中含4％灵芝多糖的水凝胶具有更好的细胞增殖作用，溶血率均低于2％；对创面损伤有明显修复作用，21天创面愈合率为98.94±0.77％，由皮肤病理切片可观察到新生上皮和血管形成，胶原纤维排列整齐，表明灵芝多糖水凝胶具有促进伤口愈合作用。
4、本实施方式提供的水凝胶制备工艺简单、原料易得，是一种新颖的慢性伤口敷料，有望运用在伤口修复领域，拓展了灵芝多糖的应用范围。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一所述乙醇溶液中蒸馏水和无水乙醇的体积比为(1～4)：1。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤一所述无水乙醇的加入量为反应容器中溶液总体积1/5。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：步骤三所述加热的去离子水的温度为30-60℃。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：步骤三所述壳聚糖衍生物为羧甲基壳聚糖、丙烯酰胺壳聚糖中的一种或两种。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是：步骤四所述加热的去离子水的温度为30-60℃。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是：步骤五所述交联剂为戊二醛、甲醛、京尼平或氯化钙。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一至七之一不同的是：步骤五所述灵芝多糖水凝胶中氧化灵芝多糖与壳聚糖或壳聚糖衍生物的质量比为4：1。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一至八之一不同的是：步骤五所述壳聚糖或壳聚糖衍生物与海藻酸钠的质量比为2：1。
具体实施方式十：本实施方式灵芝多糖水凝胶用于糖尿病伤口愈合与修复。
1、本实施方式灵芝多糖水凝胶以灵芝多糖作为主要基质材料和活性物质，设计合成了水凝胶伤口敷料，用于促进糖尿病伤口的愈合与修复。灵芝多糖具有抗炎、抗氧化、免疫调节、抗菌、毒副作用低、安全有效等优势。所制备的水凝胶呈三维网状结构，具有良好粘附性、保水性、机械性能与抗氧化性能，既能促进创面气体和营养物质交换，保证创面组织的呼吸，又能使伤口免受氧化应激的损伤。
2、本实施方式所制备的灵芝多糖水凝胶中的主要基质材料为灵芝多糖，灵芝多糖主要由甘露糖、半乳糖与葡萄糖组成，而甘露糖可与甘露糖受体(MR)特异性结合，MR能介导灵芝多糖对巨噬细胞的免疫调节作用，抑制巨噬细胞向M1表型极化而促进向M2表型极化，这种相互作用可以降低炎症因子TNF-α和活性氧(ROS)的表达，并提高伤口愈合阶段抗炎细胞因子IL-10的表达，加速伤口组织的新生和适当的胶原沉积，促进慢性伤口的愈合。
3、本实施方式制备的灵芝多糖对成纤维细胞具有良好的增殖作用，细胞存活率均高于对照组的细胞存活率；其中含4％灵芝多糖的水凝胶具有更好的细胞增殖作用，溶血率均低于2％；对创面损伤有明显修复作用，21天创面愈合率为98.94±0.77％，由皮肤病理切片可观察到新生上皮和血管形成，胶原纤维排列整齐，表明灵芝多糖水凝胶具有促进伤口愈合作用。
4、本实施方式提供的水凝胶的制备工艺简单、原料易得，是一种新颖的慢性伤口敷料，有望运用在伤口修复领域，拓展了灵芝多糖的应用范围。
实施例1：
本实施例灵芝多糖水凝胶的制备方法按照以下步骤进行：
一、制备氧化灵芝多糖：将灵芝多糖放入干燥反应容器中，加入乙醇溶液制备灵芝多糖溶液，搅拌2h后再加入高碘酸钠，避光氧化10h后，向反应体系中加入与高碘酸钠等摩尔量的乙二醇，搅拌50min，最后加入20mL无水乙醇，沉淀后，抽滤并干燥，即得氧化灵芝多糖；所述乙醇溶液中蒸馏水和无水乙醇的体积比为1：1；
二、制备氧化灵芝多糖溶液：将0.24g氧化灵芝多糖溶解于去离子水中，制得浓度为6wt.％的氧化灵芝多糖溶液；
三、制备羧甲基壳聚糖溶液：将0.16g羧甲基壳聚糖溶解于45℃的去离子水中，制得浓度为4wt.％的羧甲基壳聚糖溶液；
四、制备海藻酸钠溶液：将0.16g海藻酸钠溶解于45℃的去离子水中，制得浓度为4wt.％海藻酸钠溶液；
五、制备灵芝多糖水凝胶：将氧化灵芝多糖溶液与羧甲基壳聚糖溶液于25℃下混合并搅拌混匀后，加入海藻酸钠溶液，搅拌均匀，加入京尼平，搅拌后静置成胶，得到灵芝多糖水凝胶，(图中灵芝多糖水凝胶标记为OGLP-CMC/SA，不含灵芝多糖的羧甲基壳聚糖/海藻酸钠水凝胶标记为CMC/SA)。
分别制备灵芝多糖含量为4wt.％、6wt.％、8wt.％的灵芝多糖水凝胶用于表征：
1、结构表征测定
扫描电镜检测：将灵芝多糖水凝胶-20℃冷冻24h后，真空干燥48h。冷冻干燥后的样品贴在导电胶上，真空环境下喷金20min。通过10KV电压下的扫描电镜观察其截面微观结构。
傅里叶红外光谱检测：分别将灵芝多糖、氧化灵芝多糖、灵芝多糖水凝胶与少量KBr混合研磨均匀，压成薄片。通过傅里叶红外光谱在波长500～4000cm-1范围进行扫描。
灵芝多糖水凝胶的结果表征如图1～3所示，其中，图1所示水凝胶内部为多孔三维网络结构，孔径较大，随着灵芝多糖浓度的增加，孔径逐渐减小且更加均匀。图2是灵芝多糖与氧化灵芝多糖的红外光谱图；图3是OGLP-CMC/SA与CMC/SA的红外光谱图；3400cm-1左右的吸收峰代表多糖结构中-OH的伸缩振动吸收峰：2931.42cm-1的吸收峰代表多糖醛基的C-H吸收峰；2927.26cm-1的吸收峰代表氧化灵芝多糖中醛基的C-H伸缩振动吸收峰，1616cm-1左右的吸收峰代表C＝O的伸缩振动吸收峰，1750cm-1左右出现了新的特征峰，该峰的出现表明了氧化灵芝多糖的成功制备。1639cm-1(1628cm-1)附近可以看到C＝N亚胺特征吸收峰，该吸收峰证明了氧化灵芝多糖的醛基和羧甲基壳聚糖的氨基反应生成了席夫碱结构，表明两者成功交联并制备了水凝胶。
2、理化性能测定指标评定
流变学性能测试：用安东帕流变仪对水凝胶进行储存模量(G`)、损耗模量(G``)测试。参数：温度20℃，频率0.01-10HZ。
压缩性能测试：用英斯特朗万能试验机对水凝胶进行压缩性能测试。
失水实验：将一定质量的水凝胶称重，得到初始重量M0，于37℃条件下进行干燥，水凝胶样品达到恒重之后，取出样品并称重，记录水凝胶的质量为M1，通过以下公式来计算水凝胶的失水率，每个水凝胶的失水率测定重复三次，失水率的计算公式如下：
水蒸气蒸发实验：将一定质量的水凝胶浸在含5mL去离子水的西林瓶中。测量并记录总西林瓶的重量。然后将西林瓶置于37℃、79％相对湿度下的培养箱中24h。测定并记录总西林瓶的最终重量。一个只含有5mL去离子水的西林瓶作为空白对照组。水蒸气蒸发率(WVTR)的计算公式如下：
灵芝多糖水凝胶的理化性能表征如图4～7所示，图4所示为水凝胶的流变性能(G′-G″曲线)表征图，应变扫描试验结果表明，在低应变范围内G′>G″，多糖水凝胶的储能模量G′均大于损耗模量G″，表明该阶段所有样品均处于稳定的凝胶状态。图5所示为水凝胶的压缩性能(循环压缩应力-应变曲线)图，随着氧化灵芝多糖加入，多糖水凝胶承受的压缩应力最大可达到1.0MPa左右，且随着氧化灵芝多糖浓度增大，多糖水凝胶的的压缩性能变化趋势为先减小后增大。图6为灵芝多糖水凝胶失水率测试结果图，37℃时，水凝胶12h内失水率在80％～90％之间，24h后基本达到稳定，且水凝胶仍然保有一定的水分，可能与水凝胶的三维空间结构有关。图7为灵芝多糖水凝胶水蒸气蒸发率图，各组水凝胶的水蒸气蒸发率维持在4000g/m2/day至5000g/m2/day，对照组的水蒸气蒸发率维持在7905.44g/m2/day。因此本发明所制备的灵芝多糖水凝胶敷料可在伤口处保持湿润环境，同时为创口提供良好的透气性，有利于伤口与外界环境进行氧气的交换，促进创伤愈合。
3、生物相容性测定指标评定
细胞毒性实验：将L929细胞接种于96孔板中，接种密度1×105cells/well，用200μL含10％胎牛血清的DMEM培养基在5％CO2，37℃条件下培养24h。水凝胶浸入DMEM培养基中，37℃浸泡24h，制成系列浓度的水凝胶提取液。24h后去除96孔板中的培养基，加入200μL不同水凝胶提取液，继续培养24h，然后加入10μLCCK-8溶液，培养3h后去除凝胶提取液，摇晃96孔板5min，450nm处测OD值。用不含凝胶的DMEM培养基做空白组。
溶血实验：取0.05g水凝胶于2ml生理盐水中，37℃浸泡24h，向凝胶提取液中加入200μL2％红细胞悬液37℃继续培养1h。向2ml生理盐水中加入200μL2％红细胞悬液做负对照，2ml去离子水中加入200μL2％红细胞悬液做正对照。1h后8000r/min离心5min，取上清，545nm处测OD值。做三组平行实验，取其平均值，计算溶血率，计算公式如下：
灵芝多糖水凝胶有良好的生物相容性，图8是L929成纤维细胞在灵芝多糖水凝胶浸提液中的存活率图，所示水凝胶提取液培养72h后L929细胞存活率均高于空白对照组；图9是灵芝多糖水凝胶浸提液溶血率图，所示灵芝多糖水凝胶溶血率分别为0.21％，0.81％，1.21％，1.35％，均低于2％，在国际标准的范围内，表明四组水凝胶均具有良好的血液相容性。
4、药理活性测定指标评定
小鼠全层皮肤损伤实验：
(1)糖尿病小鼠模型建立：选取雄性C57BL/6小鼠40只，分笼单独饲养，严格按照标准饲料进行喂养。适应一周后，连续3天腹腔注射100mg/kg链脲佐菌素建立糖尿病小鼠模型，一周后测量血糖水平，血糖值≥16.7mmol/L视为造模成功。
(2)建立伤口模型：将小鼠背部皮肤剔除后，在背部脱毛区域用直径为10mm的打孔器按压出一个圆形痕迹，然后用眼科剪按照压痕剪出一个直径为10mm的全皮层伤口。
(3)将小鼠随机分为生理盐水组、CMC/SA水凝胶组、OGLP-CMC/SA水凝胶组。所有组每3天换一次敷料。分别0、3、7、14、21天，观察记录各伤口感染和愈合情况并拍摄皮肤创面照片，并通过ImageJ软件测量皮肤创面面积，计算愈合百分率。第21天，处决小鼠，用光学显微镜观察受伤的皮肤组织，并用H&E法对皮肤伤口样本进行染色，观察小鼠皮肤新生组织形成情况。
如图10～13所示，灵芝多糖水凝胶有良好的创面修复作用。如图10所示，第21天时，与生理盐水组和CMC/SA水凝胶组相比，4％OGLP-CMC/SA水凝胶组创面明显收缩，创面愈合良好，长出新生皮肤和大量绒毛。如图11所示，灵芝多糖水凝胶组的愈合率在21天创面愈合率达到98.94±0.77％，高于CMC/SA组和生理盐水组。如图12所示，由皮肤病理切片可观察到各组均有新生上皮和血管形成，但4％OGLP-CMC/SA水凝胶组胶原纤维排列更加整齐，而且出现了明显的皮肤附属器。如图13所示，在治疗后第7天，对照组的CD206(绿色荧光)的表达水平低于水凝胶组，CD86(绿色荧光)的表达水平高于水凝胶组。与对照组和CMC/SA水凝胶组相比，CD206在4％OGLP-CMC/SA中的表达量最高，CD86的表达明显降低。结果表明，灵芝多糖水凝胶可以通过促进M2巨噬细胞极化，调节伤口处的炎症反应，促进糖尿病伤口的愈合。
Claims (10)
1.一种灵芝多糖水凝胶的制备方法，其特征在于：灵芝多糖水凝胶的制备方法按照以下步骤进行：
一、制备氧化灵芝多糖：将灵芝多糖放入干燥反应容器中，加入乙醇溶液并搅拌，制备灵芝多糖溶液，再加入高碘酸钠，避光氧化10h后，向反应体系中加入与高碘酸钠等摩尔量的乙二醇，搅拌30min～50min，最后加入无水乙醇，沉淀后，抽滤并干燥，即得氧化灵芝多糖；
二、制备氧化灵芝多糖溶液：将氧化灵芝多糖溶解于去离子水中，制得氧化灵芝多糖溶液；
所述氧化灵芝多糖溶液的浓度为2～20wt.％；
三、制备壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液：将壳聚糖或壳聚糖衍生物溶解于加热的去离子水中，制得壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液；
所述壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液的浓度为2～8wt.％；
四、制备海藻酸钠溶液：将海藻酸钠溶解于加热的去离子水中，制得海藻酸钠溶液；
所述海藻酸钠溶液的浓度为3～9wt.％；
五、制备灵芝多糖水凝胶：将氧化灵芝多糖溶液与壳聚糖溶液或壳聚糖衍生物溶液于25℃下混合并搅拌混匀后，加入海藻酸钠溶液，搅拌均匀，加入交联剂，搅拌后静置成胶，得到灵芝多糖水凝胶；
所述灵芝多糖水凝胶中氧化灵芝多糖与壳聚糖或壳聚糖衍生物的质量比为(1～5)：1；壳聚糖或壳聚糖衍生物与海藻酸钠的质量比为(1～3)：1。
2.根据权利要求1所述的灵芝多糖水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤一所述乙醇溶液中蒸馏水和无水乙醇的体积比为(1～4)：1。
3.根据权利要求1所述的灵芝多糖水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤一所述无水乙醇的加入量为反应容器中溶液总体积1/5。
4.根据权利要求1所述的灵芝多糖水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤三所述加热的去离子水的温度为30-60℃。
5.根据权利要求1所述的灵芝多糖水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤三所述壳聚糖衍生物为羧甲基壳聚糖、丙烯酰胺壳聚糖中的一种或两种。
6.根据权利要求1所述的灵芝多糖水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤四所述加热的去离子水的温度为30-60℃。
7.根据权利要求1所述的灵芝多糖水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤五所述交联剂为戊二醛、甲醛、京尼平或氯化钙。
8.根据权利要求1所述的灵芝多糖水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤五所述灵芝多糖水凝胶中氧化灵芝多糖与壳聚糖或壳聚糖衍生物的质量比为4：1。
9.根据权利要求1所述的灵芝多糖水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤五所述壳聚糖或壳聚糖衍生物与海藻酸钠的质量比为2：1。
10.权利要求1所述的灵芝多糖水凝胶用于糖尿病伤口愈合与修复。
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| CN202311772829.9A Pending CN117752851A (zh) | 2023-12-21 | 2023-12-21 | 一种灵芝多糖水凝胶的制备方法及其在糖尿病伤口修复中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117752851A (zh) |
-
2023
- 2023-12-21 CN CN202311772829.9A patent/CN117752851A/zh active Pending
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