CN117554605B - 一种检测adamts13的质控品及其制备方法和应用 - Google Patents
一种检测adamts13的质控品及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117554605B CN117554605B CN202410044444.9A CN202410044444A CN117554605B CN 117554605 B CN117554605 B CN 117554605B CN 202410044444 A CN202410044444 A CN 202410044444A CN 117554605 B CN117554605 B CN 117554605B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- adamts13
- quality control
- control product
- mixed solution
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108091005670 ADAMTS13 Proteins 0.000 title claims abstract description 85
- 102000043853 ADAMTS13 Human genes 0.000 title claims abstract description 85
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 title claims abstract description 54
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 39
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 16
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims abstract description 14
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 claims abstract description 4
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- UIGXGNUMMVHJKX-UHFFFAOYSA-N (4-formylphenoxy)boronic acid Chemical compound OB(O)OC1=CC=C(C=O)C=C1 UIGXGNUMMVHJKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 28
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 14
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 14
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 14
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 14
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 14
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 11
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 11
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 10
- VXWBQOJISHAKKM-UHFFFAOYSA-N (4-formylphenyl)boronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=C(C=O)C=C1 VXWBQOJISHAKKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 claims description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 2
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 claims description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 229910001422 barium ion Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract description 4
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 abstract description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 abstract description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract 1
- WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L barium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ba+2] WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- 229910001626 barium chloride Inorganic materials 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 3
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 102100027401 A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 3 Human genes 0.000 description 1
- 108091005661 ADAMTS3 Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 208000013544 Platelet disease Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N n-[(2s,3r,4r,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](OC=2C=C3OC(=O)C=C(C)C3=CC=2)O[C@@H]1CO UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及血液检测分析技术领域，具体涉及一种检测ADAMTS13的质控品及其制备方法和应用。所述质控品为含有ADAMTS13蛋白、HEPES或枸橼酸盐缓冲溶液、糖醇、甘油、丙二醇、4‑甲酰苯硼酸、水溶性阳离子、表面活性剂和防腐剂的缓冲液。本质控品不含动物血清或动物血清白蛋白，消除了生物安全性及伦理风险，并且其成分简单、易于配制，稳定性良好，2‑8℃保存，便于运输。本质控品适用于磁微粒化学发光平台，以及所述平台的ADAMTS13酶活性检测试剂盒、ADAMTS13蛋白定量检测试剂盒。本质控品可用于ADAMTS13检测的室内质量控制、实验室能力验证、检测***性能评价等。
Description
技术领域
本发明涉及免疫检测分析技术领域，具体涉及一种检测ADAMTS13的质控品及其制备方法和应用。
背景技术
ADAMTS13属于锌依赖性细胞外基质金属蛋白酶家族，约180kDa的分子量，初级结构由1427个氨基酸组成。ADAMTS13通过对血管性血友病因子（VWF）多聚体的切割使之具有合适的大小，防止VWF诱导的血小板过度聚集和血栓形成，从而发挥维持出凝血平衡的作用。血浆ADAMTS13蛋白浓度或者活性降低时，引起异常血小板聚集和广泛微血管血栓形成，从而诱发疾病，患者可表现为血小板减少、溶血性贫血、神经***异常、肾功能不全和发热等部分或全部症状。
在健康成年人循环ADAMTS13在血浆中的半衰期为2至3天，其血浆浓度为1μg/ml，其血浆活性水平接近50至150 IU/dl，但建议实验室根据所使用的检测方法，建立或验证符合本地人群特征的参考区间。新生儿ADAMTS13水平较低，但在6个月内恢复正常。ADAMTS13值低于其正常活性的10IU/dl提示疾病状态，而值在10至20IU/dl可能指示不同的诊断；在这些情况下，强烈建议使用新的样品进行重复活性测定。应始终检查是否存在抑制物。
实验室量化ADAMTS13的方法主要有：活性测定、抗原浓度测定和自身抗体/抑制物测定。对于临床诊断来说，测量活性与测量蛋白质的浓度同等重要。血浆ADAMTS13蛋白浓度及活性测定中，目前多采用荧光共振能量转移（FRET）-VWF荧光底物测定法测定ADAMTS13活性，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定ADAMTS13蛋白的浓度。
质控品即用于体外诊断的质量控制物质，其目的是评价或验证测量精密度和测量准确度，或由于试剂或分析仪器的变化产生的分析偏差等性能特征。在选择质控品时，应该选择有几个浓度的、浓度范围分布较宽的、最好是医学决定水平的质控品。
由于ADAMTS13蛋白稳定性较差，用于ADAMTS13的试剂盒需要高度稳定的质控品。因此，目前尚需不含动物血清或动物血清白蛋白、成分简单、易于配制、稳定性良好的ADAMTS13质控品。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明提供了一种检测ADAMTS13的质控品及其制备方法和应用。
本发明的第一个方面，提供一种检测ADAMTS13的质控品，包括以下组分：ADAMTS13蛋白、糖醇、甘油、丙二醇、4-甲酰苯硼酸、水溶性金属阳离子、表面活性剂、防腐剂。
在一种实施方式中，所述质控品中ADAMTS13蛋白终浓度可根据使用需求确定。
在一种实施方式中，所述质控品包括：按终浓度计，0.1-10000ng/ml ADAMTS13蛋白、1-1000mM水溶性金属阳离子；按重量百分比计，1%-10%海藻糖和/或蔗糖、0.1%-5%甘油、0.1%-10%丙二醇、0.01%-5%4-甲酰苯硼酸、0.1%-0.5%表面活性剂、0.1%-0.5%防腐剂；按体积计，用0.01M-0.6M HEPES或枸橼酸盐缓冲溶液定容至配制体积。
在一种实施方式中，所述防腐剂为Proclin300和叠氮钠的一种或两种。
在一种实施方式中，所述表面活性剂为吐温20和吐温80的一种或两种。
在一种实施方式中，所述水溶性金属阳离子为Mn2+、Mg2+、Ca2+、Sr2+、Ba2+的一种或两种或多种。
本发明的第二个方面，提供一种检测ADAMTS13的质控品的制备方法，包括以下步骤：
S1：将4-甲酰苯硼酸溶于丙二醇中，在避光的容器中完全溶解获得混合液；
S2：在搅拌状态下向HEPES或枸橼酸盐缓冲溶液中依次加入甘油、海藻糖和/或蔗糖、表面活性剂、防腐剂、水溶性金属阳离子试剂、S1配制试剂，并充分混匀获得混合液，再向上述混合液中加入ADAMTS13蛋白，每加入一种物料充分混匀后再加入下一种物料，完全溶解后，将混合液过滤除菌获得待检测的混合液；
S3：在化学发光仪上使用磁微粒化学发光试剂盒测定待检测的混合液的配制终浓度，测定结果符合要求后立即进行分装保存。
本发明的第三个方面，提供上述质控品及制备方法在磁微粒化学发光平台的应用。
在一种实施方式中，所述的检测ADAMTS13质控品在与ADAMTS13酶活性检测试剂盒、ADAMTS13蛋白定量检测试剂盒搭配使用。
相对于现有技术，本发明具有如下有益的技术效果：
1、本质控品不含动物血清或动物血清白蛋白，消除了生物安全性及伦理风险，并且其成分简单、成本低廉；
2、本质控品配制简单、稳定性良好，液态保存，便于运输；
3、本质控品适用于磁微粒化学发光平台，以及所述平台的ADAMTS13酶活性检测试剂盒、ADAMTS13蛋白定量检测试剂盒。本质控品可用于ADAMTS13检测的室内质量控制、实验室能力验证、检测***性能评价等。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
实施例1
配制由以下组分组成的ADAMTS13质控品：
ADAMTS13蛋白（可选择ADAMTS13蛋白市售品或自制品自行配制为不同浓度使用，此处仅示例性地使用R&D公司生产的货号为6156-AD-020的ADAMTS13蛋白市售品配制为20ug/ml的溶液使用）、0.1M HEPES（H3375，默克sigma）、10mM氯化钡（10004360，沪试）、2%海藻糖（PHR1344，默克sigma）、1.5%蔗糖（10021418，沪试）、1.5%甘油（G2289，默克sigma）、1.0%丙二醇（P7071，索莱宝Solarbio）、0.1% 4-甲酰苯硼酸（431966，默克sigma）、0.1%吐温20（T8220，索莱宝Solarbio）、0.1%叠氮钠（80115518，沪试）。
实施例2
改变组分配比。配制由以下组分组成的ADAMTS13质控品：
ADAMTS13蛋白（同实施例1）、0.1M HEPES、10 mM 氯化钙、2%海藻糖、1.5%蔗糖、1.5%甘油、1.0%丙二醇、0.1%4-甲酰苯硼酸、0.1%吐温20、0.1%叠氮钠。
实施例3
改变组分配比。配制由以下组分组成的ADAMTS13质控品：
ADAMTS13蛋白（同实施例1）、0.1M HEPES、10 mM 氯化钡、2%海藻糖、1.5%蔗糖、1.5%甘油、1.0%丙二醇、0.5%4-甲酰苯硼酸、0.1%吐温20、0.1%叠氮钠。
实施例4
改变组分配比。配制由以下组分组成的ADAMTS13质控品：
ADAMTS13蛋白（同实施例1）、0.1M HEPES、40 mM 氯化钡、2%海藻糖、1.5%蔗糖、1.5%甘油、1.0%丙二醇、0.1%4-甲酰苯硼酸、0.1%吐温20、0.1%叠氮钠。
以上实施例1-4和对比例1-2中所述的ADAMTS13质控品均按照以下步骤配制：
（1）将4-甲酰苯硼酸溶于丙二醇中，在避光的容器中完全溶解获得混合液；
（2）在搅拌状态下向HEPES缓冲溶液中依次加入甘油、海藻糖、蔗糖、吐温20、叠氮钠、氯化钡、4-甲酰苯硼酸与丙二醇混合液，并充分混匀获得混合液，再向上述混合液中加入ADAMTS13蛋白，每加入一种物料充分混匀后再加入下一种物料，完全溶解后，将混合液过滤除菌获得待检测的混合液；
（3）在化学发光仪上使用磁微粒化学发光试剂盒测定待检测的混合液的配制浓度，测定ADAMTS13蛋白终浓度，最终获得终浓度为100ng/ml、1000ng/ml和10000ng/ml的ADAMTS13质控品，分别对各个浓度ADAMTS13质控品进行分装保存。
对比例1
配制由以下组分组成的ADAMTS13质控品：
ADAMTS13蛋白（同实施例1）、0.1M HEPES、10 mM 氯化钡、2%海藻糖、1.5%蔗糖、1.5%甘油、0.1%吐温20、0.1%叠氮钠。
配制步骤按如下进行：
（1）在搅拌状态下向HEPES缓冲溶液中依次加入甘油、海藻糖、蔗糖、吐温20、叠氮钠、氯化钡，并充分混匀获得混合液，再向上述混合液中加入ADAMTS13蛋白，每加入一种物料充分混匀后再加入下一种物料，完全溶解后，将混合液过滤除菌获得待检测的混合液；
（2）在化学发光仪上使用磁微粒化学发光试剂盒测定待检测的混合液的配制浓度，测定ADAMTS13蛋白终浓度，最终获得终浓度为100ng/ml、1000ng/ml和10000ng/ml的ADAMTS13质控品，分别对各个浓度ADAMTS13质控品进行分装保存。
对比例2
配制由以下组分组成的ADAMTS13质控品：
ADAMTS13蛋白（同实施例1）、0.1MHEPES、2%海藻糖、1.5%蔗糖、1.5%甘油、0.1%吐温20、0.1%叠氮钠。
配制步骤按如下进行：
（1）在搅拌状态下向HEPES缓冲溶液中依次加入甘油、海藻糖、蔗糖、吐温20、叠氮钠，并充分混匀获得混合液，再向上述混合液中加入ADAMTS13蛋白，每加入一种物料充分混匀后再加入下一种物料，完全溶解后，将混合液过滤除菌获得待检测的混合液；
（2）在化学发光仪上使用磁微粒化学发光试剂盒测定待检测的混合液的配制浓度，测定ADAMTS13蛋白终浓度，最终获得终浓度为100ng/ml、1000ng/ml和10000ng/ml的ADAMTS13质控品，分别对各个浓度ADAMTS13质控品进行分装保存。
实施例5
对实施例1-4和对比例1-2制备的100ng/ml的质控品分别进行稳定性评估。37℃条件下加速热稳定性，将本发明实施例1-4和对比例1-2制备的100ng/ml的质控品于37℃条件下保存，并分别于第0天、第1天、第3天、第7天、第10天、第14天各取一瓶进行检测，采用全自动化学发光仪器及配套的ADAMTS13酶活性检测试剂盒、ADAMTS13蛋白定量检测试剂盒进行测定，每瓶重复测定3次，并计算均值与靶值的相对偏差，相对偏差= [ (平均值-靶值)/靶值]×100%，结果见表1和表2。
表1 不同质控品37℃稳定性ADAMTS13蛋白浓度测定结果
表2 不同质控品37℃稳定性ADAMTS13酶活性测定结果
表1和表2的实验结果表明，本发明实施例1-4制备的ADAMTS3质控品在37℃条件下能够稳定14天。其中，实施例3和实施例4在37℃条件下稳定性最好，本发明实施例2中ADAMTS13质控品37℃条件下保存一段时间后，ADAMTS13质控品活性超出±5%范围，表明氯化钡比氯化钙有更好的稳定ADAMTS13活性的作用。
本发明对比例1-2制备的ADAMTS13质控品37℃条件下保存一段时间后，测量结果与靶值的相对偏差超出±10%范围，甚至超出±20%范围。表明，本发明质控品中4-甲酰苯硼酸的配比及金属阳离子的选择具有重要作用，运用本专利中的制备方法可使本发明配制的质控品在37℃条件下加速热稳定性良好。
进一步对1000ng/ml和10000ng/ml的ADAMTS13质控品和对比例1-2中1000ng/ml和10000ng/ml的ADAMTS13质控品进行稳定性评估对比，结果与100ng/ml的质控品的结果相似，实施例3和实施例4在37℃条件下稳定性最好。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种检测ADAMTS13的质控品，其特征在于，包括以下组分：ADAMTS13蛋白、HEPES、糖醇、甘油、丙二醇、4-甲酰苯硼酸、水溶性金属阳离子、表面活性剂、防腐剂缓冲液，其中，所述糖醇为海藻糖和/或蔗糖，所述水溶性金属阳离子为钡离子和/或钙离子。
2. 根据权利要求1所述的检测ADAMTS13的质控品，其特征在于，所述质控品包括：按终浓度计，0.1-10000ng/mlADAMTS13蛋白、1-1000mM水溶性金属阳离子；按重量百分比计，1%-10%海藻糖和/或蔗糖、0.1%-5%甘油、0.1%-10%丙二醇、0.01%-5% 4-甲酰苯硼酸、0.1%-0.5%表面活性剂、0.1%-0.5%防腐剂；按体积计，用0.01M-0.6M HEPES定容至配制体积。
3.根据权利要求1或2所述的检测ADAMTS13的质控品，其特征在于，所述防腐剂为Proclin300和叠氮钠的一种或两种。
4.根据权利要求1或2所述的检测ADAMTS13的质控品，其特征在于，所述ADAMTS13蛋白为重组蛋白或天然提取蛋白。
5.根据权利要求1或2所述的检测ADAMTS13的质控品，其特征在于，所述表面活性剂为吐温20和吐温80的一种或两种。
6. 根据权利要求1-5中任一项所述的检测 ADAMTS13 的质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将4-甲酰苯硼酸溶于丙二醇中，在避光的容器中完全溶解获得混合液；
S2：在搅拌状态下向HEPES或枸橼酸盐缓冲溶液中依次加入甘油、海藻糖和/或蔗糖、表面活性剂、防腐剂、水溶性金属阳离子试剂、S1配制试剂，并充分混匀获得混合液，再向上述混合液中加入ADAMTS13蛋白，每加入一种物料充分混匀后再加入下一种物料，完全溶解后，将混合液过滤除菌获得待检测的混合液；
S3：在化学发光仪上使用磁微粒化学发光试剂盒测定待检测的混合液的配制终浓度，测定结果符合要求后立即进行分装保存。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中质控品的配制终浓度为0.1-10000ng/ml范围中的一种或两种或多种。
8.根据权利要求1-5中任一项所述的检测ADAMTS13质控品或根据权利要求6-7中任一项所述的制备方法在磁微粒化学发光平台的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的检测ADAMTS13质控品在与ADAMTS13酶活性检测试剂盒、ADAMTS13蛋白定量检测试剂盒搭配使用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410044444.9A CN117554605B (zh) | 2024-01-12 | 2024-01-12 | 一种检测adamts13的质控品及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410044444.9A CN117554605B (zh) | 2024-01-12 | 2024-01-12 | 一种检测adamts13的质控品及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117554605A CN117554605A (zh) | 2024-02-13 |
| CN117554605B true CN117554605B (zh) | 2024-04-02 |
Family
ID=89820895
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410044444.9A Active CN117554605B (zh) | 2024-01-12 | 2024-01-12 | 一种检测adamts13的质控品及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117554605B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104515859A (zh) * | 2014-12-17 | 2015-04-15 | 杭州慧缘泰医疗器械有限公司 | 血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试剂盒及其制备方法、检测方法 |
| CN110275022A (zh) * | 2018-03-16 | 2019-09-24 | 北京协和洛克生物技术有限责任公司 | 传染病筛查及乙肝表面抗原定量的试剂盒及应用 |
| CN114106943A (zh) * | 2021-11-08 | 2022-03-01 | 山东消博士消毒科技股份有限公司 | 一种多酶清洗剂以及其加工设备 |
| CN115976154A (zh) * | 2022-09-29 | 2023-04-18 | 武汉尚宾知微生物科技有限责任公司 | 一种金属蛋白酶adamts13活性检测方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2012255027B2 (en) * | 2011-05-19 | 2015-09-24 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Detection of circulating ADAMTS13-antibody complexes |
-
2024
- 2024-01-12 CN CN202410044444.9A patent/CN117554605B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104515859A (zh) * | 2014-12-17 | 2015-04-15 | 杭州慧缘泰医疗器械有限公司 | 血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试剂盒及其制备方法、检测方法 |
| CN110275022A (zh) * | 2018-03-16 | 2019-09-24 | 北京协和洛克生物技术有限责任公司 | 传染病筛查及乙肝表面抗原定量的试剂盒及应用 |
| CN114106943A (zh) * | 2021-11-08 | 2022-03-01 | 山东消博士消毒科技股份有限公司 | 一种多酶清洗剂以及其加工设备 |
| CN115976154A (zh) * | 2022-09-29 | 2023-04-18 | 武汉尚宾知微生物科技有限责任公司 | 一种金属蛋白酶adamts13活性检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 乙型肝炎肝硬化初级止血阶段相关因素的变化;邓永东;赵荣荣;姚立琼;蒋妮;谭榜云;邢乐康;;临床消化病杂志;20200620(第03期);5-8 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117554605A (zh) | 2024-02-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3421999B1 (en) | Customized quality controls for analytical assays | |
| JP2006349684A (ja) | 血液凝固試験の標準化のための方法 | |
| CN107748267A (zh) | 一种测定活化部分凝血活酶时间（aptt）的试剂盒 | |
| CN107807240A (zh) | 一种降钙素原的化学发光检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN114277089B (zh) | 一种达比加群的检测试剂及试剂盒 | |
| CN110108890A (zh) | 活化部分凝血活酶时间测定试剂及其应用 | |
| CN108287245A (zh) | 测定糖化血红蛋白的试剂盒及其制备方法 | |
| US6905886B2 (en) | Preservative solutions | |
| CN113804896A (zh) | 测定人体血清中白介素-8含量的磁微粒化学发光试剂盒 | |
| Soloway et al. | Comparison of various activated partial thromboplastin reagents in the laboratory control of heparin therapy | |
| CN112014572A (zh) | 一种用于检测kl-6的乳胶颗粒制备方法及其应用 | |
| CN117554605B (zh) | 一种检测adamts13的质控品及其制备方法和应用 | |
| CN116410258A (zh) | 因子xi缺乏血浆保护剂及其应用 | |
| KR900002840B1 (ko) | 안정화된 효소 결합체 조성물 | |
| CN112485418A (zh) | 一种用于人体维生素b12含量检测的释放剂及其应用 | |
| CN111175515B (zh) | 一种血清淀粉样蛋白a和c反应蛋白的二合一质控物及其制备方法 | |
| CN110714051A (zh) | 蛋白c活性测定试剂盒 | |
| JPWO2020059563A1 (ja) | 擬似便、およびこれを用いた便潜血検査の精度管理方法 | |
| EP2434290A1 (en) | Blood coagulation time prolonging agent | |
| US6387711B1 (en) | Liquid intact parathyroid hormone (PTH) standards | |
| CN114875114A (zh) | 一种可溶性fms样酪氨酸激酶-1质控品及其制备方法 | |
| CN113834942A (zh) | 一种胎盘生长因子质控品及其制备方法 | |
| CN111983239A (zh) | 一种t-PAI-C标志物检测试剂盒及其配制方法 | |
| Lantz et al. | Evaluation of serum gentamicin assay procedures for a clinical microbiology laboratory | |
| CN108181245B (zh) | 酶法定量测定乳中乳过氧化物酶活性的方法及其试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |