CN117320700A - 含有抗muc16 x抗cd3双特异性抗体的稳定制剂 - Google Patents

含有抗muc16 x抗cd3双特异性抗体的稳定制剂 Download PDF

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CN117320700A CN202280035628.8A CN202280035628A CN117320700A CN 117320700 A CN117320700 A CN 117320700A CN 202280035628 A CN202280035628 A CN 202280035628A CN 117320700 A CN117320700 A CN 117320700A
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D·卡门
T-C·杨
徐晓滨
邱海波
K·格雷厄姆
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Abstract

本发明提供了稳定的液体药物制剂，其包含特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体。在某些实施方案中，除了双特异性抗体之外，制剂还含有缓冲液、表面活性剂和糖。本发明的药物制剂在应激和储存时表现出相当程度的抗体稳定性。

Description

含有抗MUC16 X抗CD3双特异性抗体的稳定制剂
对序列表的提及
本申请通过引用并入以计算机可读形式提交的序列表，该序列表于2022年4月1日创建，文件名为10820WO01-Sequence.txt，含有25,436字节。
技术领域
本公开涉及治疗性抗体制剂领域。更具体地，本发明涉及包含特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体的药物制剂领域。
背景技术
治疗用大分子(例如抗体)必须以这样的方式配制，即不仅使分子适于向患者施用，而且在储存和随后的使用中保持其稳定性。例如，除非溶液被适当配制，否则液体溶液中的治疗性抗体易于降解、聚集和/或发生不期望的化学修饰。抗体在液体制剂中的稳定性不仅取决于制剂中所用赋形剂的种类，而且还取决于赋形剂相对于彼此的量和比例。此外，当制备液体抗体制剂时，除了稳定性之外，还必须考虑其他因素。此类额外考虑因素的实例包括给定制剂可容许的抗体浓度，以及制剂的视觉质量或吸引力。因此，当配制治疗性抗体时，必须非常小心以获得保持稳定、含有足够浓度的抗体并具有其他性质的制剂，使得所述制剂能够方便地向患者施用。
粘蛋白16(MUC16)，也称为癌抗原125、癌症抗原125、碳水化合物抗原125或CA-125，是一种在卵巢癌中高度表达的单跨膜结构域高度糖基化的整合膜糖蛋白。CD3是与T细胞受体复合物(TCR)相关的在T细胞上表达的同源二聚体或异源二聚体抗原，是T细胞活化所必需的。
人MUC16和人CD3的双特异性抗体是需要适当制剂的治疗相关大分子的一个实例。此类抗体在临床上可用于例如，治疗癌症(例如表达MUC16的癌症、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和非小细胞肺癌)。
尽管抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体在本领域中是已知的(参见例如WO 2018/067331)，但仍然需要包含足够稳定并适于施用于患者的抗MUC16x抗CD3双特异性抗体的药物制剂。
发明内容
提供了包含双特异性抗MUC16 x抗CD3抗体和一种或多种赋形剂的稳定的液体药物制剂，以及包含这种制剂的试剂盒、单位剂型和容器及其用途。
在一方面，本发明提供了稳定的液体药物制剂，其包含：(a)双特异性抗体，其包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，并且第二抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链CDR(A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3分别包含SEQ ID NO:7、8和9的氨基酸序列，A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3分别包含SEQ ID NO:10、11和12的氨基酸序列，并且LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含SEQ ID NO:13、14和15的氨基酸序列；(b)包含乙酸钠的缓冲液；(c)包含聚山梨醇酯的有机助溶剂；和(d)包含糖的稳定剂；其中该制剂的pH为5.0±0.5。
在一些情况下，抗体浓度为1mg/ml±0.1mg/ml至200mg/ml±20mg/ml。在一些情况下，抗体浓度为5mg/ml±0.5mg/ml至50mg/ml±5mg/ml。在一些情况下，抗体浓度为5mg/ml±0.5mg/ml。在一些情况下，抗体浓度为50mg/ml±5mg/ml。在一些情况下，抗体浓度为150mg/ml±15mg/ml。
在一些情况下，乙酸盐缓冲液浓度为10mM±1mM至50mM±5mM。在一些情况下，乙酸盐缓冲液浓度为25mM±2.5mM至35mM±3.5mM。在一些情况下，乙酸盐缓冲液浓度为30mM±3mM。
在一些情况下，聚山梨醇酯浓度为0.01％±0.005％至0.5％±0.05％w/v。在一些情况下，聚山梨醇酯浓度为0.1％±0.05％至0.3％±0.03％w/v。在一些情况下，聚山梨醇酯浓度为0.2％±0.02％w/v。在一些情况下，聚山梨醇酯浓度为0.05％±0.01％w/v。在一些情况下，聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20。
在一些实施方案中，糖是蔗糖。在一些情况下，蔗糖浓度为5％±1％至20％±4％w/v。在一些情况下，蔗糖浓度为7％±0.5％至12％±0.5％w/v。在一些情况下，蔗糖浓度为10％±1％w/v。在一些情况下，蔗糖浓度为7％±0.7％w/v。在一些情况下，蔗糖浓度为8％±0.8％w/v。
在一些实施方案中，药物制剂包含：(a)5mg/ml±0.5mg/ml的抗体，(b)25mM±2mM至35mM±2mM的乙酸盐缓冲液，(c)0.1％±0.05％至0.3％±0.05％w/v的聚山梨醇酯，和(d)5％±1％至15％±3％w/v的蔗糖，pH为5.0±0.5。
在一些实施方案中，药物制剂包含：(a)5mg/ml±0.5mg/ml的抗体，(b)30mM±1mM的乙酸盐缓冲液，(c)0.2％±0.02％w/v的聚山梨醇酯，和(d)10％±1％w/v的蔗糖，pH为5.0±0.3。
在一些实施方案中，药物制剂包含：(a)50mg/ml±5mg/ml的抗体，(b)25mM±2mM至35mM±2mM的乙酸盐缓冲液，(c)0.1％±0.05％至0.3％±0.05％w/v的聚山梨醇酯，和(d)5％±1％至15％±3％w/v的蔗糖，pH为5.0±0.5。
在一些实施方案中，药物制剂包含：(a)50mg/ml±0.5mg/ml的抗体，(b)30mM±1mM的乙酸盐缓冲液，(c)0.2％±0.02％w/v的聚山梨醇酯，和(d)10％±1％w/v的蔗糖，pH为5.0±0.3。
在任何这些实施方案中，聚山梨醇酯可以是聚山梨醇酯20。
在以上讨论的各种实施方案的任一个中，如通过尺寸排阻超高效液相色谱法(SE-UPLC)确定，在5℃下储存12个月或24个月后，制剂含有不超过2.5％的高分子量(HMW)物质。在一些情况下，通过SE-UPLC确定，在25℃和60％相对湿度下储存6个月后，制剂含有不超过3.5％的高分子量(HMW)物质。在一些情况下，通过SE-UPLC确定，在-30℃下储存12个月后，制剂含有不超过1.5％的高分子量(HMW)物质，或在-30℃下储存24个月后，制剂含有不超过2.0％的HMW物质。在一些情况下，通过SE-UPLC确定，在-80℃下储存12个月后，制剂含有不超过1.5％的高分子量(HMW)物质，或在-30℃下储存24个月后，制剂含有不超过2.0％的HMW物质。
在一方面，本发明提供了由冻干物重构的稳定的液体药物制剂，其包含：(a)浓度为1mg/ml至30mg/ml的双特异性抗体，其中双特异性抗体包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，第二抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链CDR(A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3分别包含SEQ ID NO:7、8和9的氨基酸序列，A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3分别包含SEQ ID NO:10、11和12的氨基酸序列，LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含SEQ ID NO:13、14和15的氨基酸序列；(b)包含组氨酸的缓冲液；(c)包含聚山梨醇酯的有机助溶剂；和(d)包含糖的稳定剂；其中制剂的pH为6.0±0.5。
在一些情况下，抗体浓度为2mg/ml±0.5mg/ml。在一些情况下，抗体浓度为20mg/ml±2mg/ml。在一些情况下，组氨酸缓冲液浓度为5mM±1mM至15mM±1mM。在一些情况下，组氨酸缓冲液浓度为10mM±1mM。在一些情况下，聚山梨醇酯浓度为0.01％至0.1％w/v。在一些情况下，聚山梨醇酯浓度为0.05％±0.01％w/v。在一些情况下，聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，糖是蔗糖。在一些情况下，蔗糖浓度为8％±0.5％至12％±0.5％w/v。在一些情况下，蔗糖浓度为10％±1％w/v。
在本发明该方面的任何实施方案中，通过SE-UPLC确定：(a)在5℃下储存12个月后、18个月后、24个月后或36个月后，至少95％的抗体具有天然构象；(b)在25℃和60％相对湿度下储存6个月后，至少95％的抗体具有天然构象；(c)在37℃下储存3个月后，至少95％的抗体具有天然构象；(d)在5℃下储存12个月后、18个月后、24个月后或36个月后，制剂含有不超过1％的高分子量(HMW)物质；(e)在25℃和60％相对湿度下储存6个月后，制剂含有不超过1％的HMW物质；或(f)在37℃下储存3个月后，制剂含有不超过1％的HMW物质。
在一方面，本发明提供了稳定的液体药物制剂，其包含：(a)浓度为100mg/ml至200mg/ml的双特异性抗体，其中双特异性抗体包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，第二抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链CDR(A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3分别包含SEQ ID NO:7、8和9的氨基酸序列，A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3分别包含SEQID NO:10、11和12的氨基酸序列，LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含SEQ ID NO:13、14和15的氨基酸序列；(b)包含乙酸盐的缓冲液；(c)包含糖的稳定剂；和(d)包含聚山梨醇酯的表面活性剂，其中制剂的pH为5.0±0.5。
在一些情况下，抗体浓度为125mg/ml至175mg/ml。在一些情况下，抗体浓度为150mg/ml±10mg/ml。在一些实施方案中，糖是蔗糖。在一些情况下，蔗糖浓度为4％至12％w/v。在一些情况下，蔗糖浓度为8％w/v±1％w/v。在一些情况下，乙酸盐缓冲液浓度为25mM至35mM。在一些情况下，乙酸盐缓冲液浓度为30mM±1mM。在一些情况下，聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20。在一些情况下，聚山梨醇酯20浓度为0.01％w/v至0.1％w/v。聚山梨醇酯20浓度为0.05％w/v±0.01％w/v。
在本发明该方面的任何实施方案中，通过SE-UPLC确定：(a)在-30℃或-80℃下储存12个月后或24个月后，制剂含有不超过2.5％的高分子量(HMW)物质；(b)在5℃下储存6个月后，制剂含有不超过4％的HMW物质；或(c)在25℃和60％相对湿度下储存6个月后，制剂含有不超过6％的HMW物质。
在上文或本文讨论的各种实施方案的任一个中，制剂含有不超过40％、不超过39％、不超过38％、不超过37％、不超过36％或不超过35％的糖基化物质变体，其中糖基化物质变体包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:4的残基98或SEQ ID NO:9的残基2处的糖基化。
在上文或本文讨论的各种实施方案的任一个中，第一抗原结合结构域包含与SEQID NO:4的氨基酸序列具有至少90％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少90％同一性的LCVR，第二抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少90％同一性的LCVR。
在上文或本文讨论的各种实施方案的任一个中，第一抗原结合结构域包含与SEQID NO:4的氨基酸序列具有至少95％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少95％同一性的LCVR，第二抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少95％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少95％同一性的LCVR。
在上文或本文讨论的各种实施方案的任一个中，第一抗原结合结构域包含与SEQID NO:4的氨基酸序列具有至少99％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少99％同一性的LCVR，第二抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少99％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少99％同一性的LCVR。
在上文或本文讨论的各种实施方案的任一个中，第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR。
在一方面，本发明提供了稳定的药物制剂，其包含：(a)5mg/ml±0.5mg/ml的双特异性抗体，其包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(b)30mM±1mM乙酸钠缓冲液，pH为5.0±0.2，(c)0.2％±0.02％w/v聚山梨醇酯20，和(d)10％±1％w/v蔗糖。
在一方面，本发明提供了稳定的药物制剂，其包含：(a)50mg/ml±5mg/ml的双特异性抗体，其包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(b)30mM±1mM乙酸钠缓冲液，pH为5.0±0.2，(c)0.2％±0.02％w/v聚山梨醇酯20，和(d)10％±1％w/v蔗糖。
在一方面，本发明提供了稳定的药物制剂，其包含：(a)150mg/ml±15mg/ml的双特异性抗体，其包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(b)30mM±1mM乙酸钠缓冲液，pH为5.0±0.2，(c)0.05％±0.01％w/v聚山梨醇酯20，和(d)8％±1％w/v蔗糖。
在上文或本文讨论的各种实施方案的任一个中，抗体包含分别附接到第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域中每一个的HCVR的人IgG重链恒定区。在一些情况下，重链恒定区属于同种型IgG1。在一些情况下，重链恒定区属于同种型IgG4。
在一些实施方案中，与第一抗原结合结构域的HCVR附接的重链恒定区或与第二抗原结合结构域的HCVR附接的重链恒定区，但不是两者，含有氨基酸修饰，该修饰相对于未经修饰的相同同种型的重链降低了蛋白A的结合。在一些情况下，修饰包括同种型IgG1或IgG4重链中的H435R取代(EU编号)。在一些情况下，修饰包括同种型IgG1或IgG4重链中的H435R取代和Y436F取代(EU编号)。
在上文或本文讨论的各种实施方案的任一个中，抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含选自由SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的重链恒定区和含有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链恒定区。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQID NO:18的氨基酸序列的重链恒定区和含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链恒定区。
在上文或本文讨论的各种实施方案的任一个中，抗体包含含有第一抗原结合结构域的HCVR的第一重链和含有第二抗原结合结构域的HCVR的第二重链，其中第一重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的残基1-442，第二重链包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的残基1-449。在一些实施方案中，抗体包含含有第一和第二抗原结合结构域的LCVR的共同轻链，其中共同轻链包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
在上文或本文讨论的各种实施方案的任一个中，通过阳离子交换超高效液相色谱法(CEX-UPLC)和/或液相色谱-质谱法(LC-MS)确定，通过测量“糖基化物质”的百分比变化，可以认为药物制剂是稳定的，其中糖基化物质的百分比变化：(i)在5℃下储存6个月后不超过1.5％；(ii)在5℃下储存12个月后不超过3％；(iii)在-30℃下储存12个月后、18个月后或24个月后不超过1.5％；或在-80℃下储存12个月后、18个月后或24个月后不超过1％。
在一个方面，本发明提供了药物组合物，其中组合物包含上文或本文讨论的药物制剂，并且组合物包含在容器中。
在一些实施方案中，容器是小瓶。在一些情况下，小瓶是2ml、5ml或10ml的1型透明玻璃小瓶。在一些实施方案中，容器是注射器。在一些情况下，注射器是低钨玻璃。在一些实施方案中，容器是预灌装注射器。在一些实施方案中，药物组合物包含在自动注射器中。
在一个方面，本发明提供了试剂盒，其包含(i)含有组合物的容器，组合物包含上文或本文讨论的药物制剂，以及组合物的使用说明书。
在一些实施方案中，容器是玻璃小瓶。在一些实施方案中，容器是预灌装注射器。在一些实施方案中，容器是自动注射器。
在一些实施方案中，说明书叙述组合物的皮下施用。在一些实施方案中，说明书叙述组合物的静脉施用。
在一方面，本发明提供了包含上文或本文讨论的药物制剂的单位剂型，其中抗体以0.1mg至500mg的量存在。在一些情况下，抗体以5±1mg至50±5mg的量存在。在一些情况下，抗体以10±1mg至200±20mg的量存在。在一些实施方案中，抗体以4mg、5mg、10mg、12.5mg、40mg、50mg、150mg或180mg的量存在。
在一些实施方案中，单位剂型是玻璃小瓶、预灌装注射器或自动注射器。
在一个方面，本发明提供了含有组合物的容器，该组合物包含上文或本文讨论的药物制剂。在各种实施方案中，容器是玻璃小瓶、预灌装注射器或自动注射器。
在各种实施方案中，上文或本文讨论的实施方案的任何特征或组件可以组合，并且此类组合涵盖在本公开的范围内。上文或本文讨论的任何指定值可以与上文或本文中讨论的另一相关值组合，以列举一个范围，所述值代表该范围的上限和下限，并且此类范围和落入此类范围内的所有值都涵盖在本公开的范围内。上文或本文讨论的每个值可以用1％、5％、10％或20％的变化来表示。例如，10mM的浓度可以表示为10mM±0.1mM(1％变化)、10mM±0.5mM(5％变化)、10mM±1mM(10％变化)或10mM±2mM(20％变化)。
通过阅读随后的详细描述，其他实施方案将变得显而易见。
附图说明
图1说明了mAb1的相对效力与HCDR3-Lys98的糖基化水平之间的关系。通过制备型阳离子交换色谱法纯化糖基化和非糖基化mAb1，并以不同比例混合两种物质，产生糖基化水平。效力数据表明效力取决于糖基化水平。
图2A、2B、2C和2D说明了pH对在组氨酸缓冲液中配制的mAb1的糖基化和高分子量(HMW)物质水平的影响。制剂包括在10mM组氨酸、10％w/v蔗糖和0.05％w/v聚山梨醇酯20中的2mg/ml mAb1，具有不同的pH值，并在5℃下孵育最多36个月或在25℃下孵育最多2个月。在5℃(图2A)或25℃(图2B)下通过阳离子交换色谱法(CEX-UPLC)监测糖基化水平，在5℃(图2C)或25℃(图2D)下通过尺寸排阻色谱法(SE-UPLC)监测HMW水平。
图3A和3B说明了pH对在乙酸盐缓冲液中配制的mAb1的糖基化和HMW物质水平的影响。制剂包括在10mM乙酸盐和5％w/v蔗糖中的50mg/ml mAb1，具有不同的pH值，并在40℃下孵育28天。糖基化水平由CEX-UPLC监测(图3A)，HMW水平由SE-UPLC监测(图3B)。
图4说明了mAb1浓度、蔗糖浓度和精氨酸浓度对mAb1制剂粘度的影响。这些图代表了实验数据的统计模型。
图5说明了mAb1浓度、蔗糖浓度和精氨酸浓度对mAb1制剂渗透压的影响。这些图代表了实验数据的统计模型。
图6说明了mAb1浓度、蔗糖浓度和精氨酸浓度对mAb1制剂稳定性的影响。这些图代表了实验数据的统计模型。
图7A和7B说明了用于皮下施用的两种mAb1制剂的稳定性。当在测试条件下孵育时，两种制剂表现出相当的稳定性：在40℃/75％相对湿度(RH)下3个月；在25℃/60％RH下6个月；以及在2℃-8℃下6个月。如图所示，F1含有150mg/ml mAb1、30mM pH 5.0的乙酸盐、8％w/v蔗糖和0.05％w/v聚山梨醇酯80，F2含有150mg/ml mAb1、30mM pH 5.0的乙酸盐、7％w/v蔗糖、50mM精氨酸和0.05％w/v聚山梨醇酯80。
具体实施方式
在描述本发明前，应当理解，本发明不限于所述的特定方法和实验条件，因为这类方法和条件可以变化。还应当理解，本文所用的术语仅用于描述具体实施方案的目的，而无意进行限制，因为本发明的范围将仅由所附权利要求书限制。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。如本文所用，术语“约”，当用于提及特定列举的数值或数值范围时，意指所述值可以与列举的值相差不超过1％。举例来说，如本文所用，表述“约100”包括99和101以及它们之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
尽管与本文中描述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料均可用于本发明的实践或检验，但现在描述示例性方法和材料。本说明书中提及的所有专利、申请和非专利出版物全文以引用的方式并入本文中。
药物制剂
如本文所用，表述“药物制剂”意指至少一种活性成分(例如双特异性抗MUC16 x抗CD3抗体等，其能够在人或非人动物中发挥生物效应)和至少一种非活性成分的组合，所述非活性成分当与活性成分和/或一种或多种另外的非活性成分组合时，适用于对人或非人动物进行治疗性施用。除非另有明确说明，否则如本文所用，术语“制剂”是指“药物制剂”。本发明提供了包含至少一种治疗性多肽的药物制剂。根据本发明的某些实施方案，治疗性多肽是特异性结合人MUC16和人CD3或其抗原结合片段的双特异性抗体。更具体地，本发明尤其是包括药物制剂，其包含：(i)特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体；(ii)包含乙酸盐的缓冲液；(iii)包含聚山梨醇酯的有机助溶剂；和(iv)包含糖的稳定剂。本发明的制剂中可以包括另外的组分，如果此类组分不会显著干扰制剂的稳定性。下文详细描述了包含在本发明中的具体示例性组分和制剂。
在某些实施方案中，本发明的药物制剂可以是流体制剂。本文所用的表述“流体制剂”意指至少两种组分的混合物，其在约2℃至约45℃下主要以流体状态存在。流体制剂尤其包括液体制剂。根据其特定成分，流体制剂可以具有低、中或高粘度。
特异性结合人MUC16和人CD3的双特异性抗体
本发明的药物制剂可包含特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“抗体”，包括“双特异性抗体”通常旨在指包含四条多肽链即通过二硫键相互连接的两条重链(H链)和两条轻链(L链)的免疫球蛋白分子，以及其多聚体(例如IgM)；然而，仅由重链(即没有轻链)组成的免疫球蛋白分子也涵盖在术语“抗体”的定义中。每条重链包含重链可变区(本文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域：CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(在本文中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。VH和VL区还可以细分为高变区(称为互补决定区(CDR))，所述高变区之间散布有更保守的区域(称为构架区(FR))。每个VH和VL由从氨基末端到羧基末端按照下述次序排列的三个CDR和四个FR组成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
在本发明的某些实施方案中，本发明的抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体是人抗体。如本文所用，术语“人抗体”旨在包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明的人抗体可以包括不由人生殖系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机或定点诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在CDR特别是CDR3中。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括已经将衍生自另一个哺乳动物物种(诸如小鼠)的种系的CDR序列植入到人框架序列上的抗体。在各种实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体是人IgG抗体。在各种实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体是同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或混合同种型的人抗体。在一些实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体是人IgG1抗体(即，该抗体包含分别附接到第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域中每一个的HCVR的人IgG1重链恒定区)。在一些实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体是人IgG4抗体(即，该抗体包含分别附接到第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域中每一个的HCVR的人IgG4重链恒定区。在上文或本文讨论的任何实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体可以包含人κ轻链。在上文或本文讨论的任何实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体可以包含人λ轻链。
在任何实施方案中，双特异性抗体可以在一条或两条重链中包括修饰，以促进双特异性抗体(即，异二聚体)从同二聚体杂质中纯化。在一些实施方案中，双特异性抗体包括第一和第二重链(即抗MUC16结合臂的重链和抗CD3结合臂的重链)，它们除了一个或另一个重链的CH3结构域中的修饰之外是相同的(例如均属于同种型IgG1或IgG4)，与缺乏该修饰的抗体相比，该修饰减少了双特异性抗体与蛋白质A的结合。在一些情况下，第一重链的CH3结构域(例如抗MUC16结合臂的第一重链)结合蛋白A，第二重链的CH3结构域(的例如抗CD3结合臂的第二重链)含有减少或消除蛋白A结合的突变。在一些情况下，突变是H435R修饰(通过EU编号；H95R通过IMGT外显子编号)。在一些情况下，突变是H435R修饰(通过EU编号；H95R通过IMGT外显子编号)和Y436F修饰(通过EU编号；Y96F通过IMGT编号)。在第二CH3结构域内可能发现的另外的修饰包括：在IgG1 CH3结构域的情况下，通过EU编号的D356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I(通过IMGT编号的D16E、L18M、N44S、K52N、V57M和V82I)；以及在IgG4CH3结构域的情况下，通过EU编号的Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q和V422I(通过IMGT编号的Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q和V82I)。
在任何实施方案中，双特异性抗体可以包括嵌合铰链。术语“嵌合铰链”旨在包括嵌合蛋白，其包含衍生自一种Ig分子铰链区的第一氨基酸序列和衍生自不同类别或亚类Ig分子铰链区的第二氨基酸序列。例如，在实施方案中，嵌合铰链包含衍生自人IgG1铰链区或人IgG4铰链区的第一氨基酸序列或“上铰链”序列，以及衍生自人IgG2铰链区的第二氨基酸序列或“下铰链”序列。在某些实施方案中，第一或“上铰链”序列包含216至227位的氨基酸残基(根据EU编号)。在一些实施方案中，第二或“下铰链”序列包含228至236位的氨基酸残基(根据EU编号)。
在一些实施方案中，本发明的抗体可以是重组人抗体。如本文所用，术语“重组人抗体”意在包括通过重组手段所制备、表达、产生或分离的全部人抗体，如使用转染至宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体、从重组人抗体组合文库分离的抗体、从相对于人免疫球蛋白基因而言转基因的动物(例如，小鼠)分离的抗体(参见例如，Taylor等人，(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他手段所制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，此类重组人抗体经历体外诱变(或，使用就人Ig序列而言为转基因的动物时，经历体内体细胞诱变)并且因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是尽管源自人种系VH和VL序列并且与之相关，但可能在体内人抗体种系库内部不天然存在的序列。
如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合片段”(或简称“抗体部分”或“抗体片段”)是指保留特异性结合人MUC16或人CD3的能力的抗体的一个或多个片段。
本文所用的“分离的抗体”旨在是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合人MUC16和人CD3的分离的双特异性抗体基本上不含特异性结合除人MUC16和人CD3以外的抗原的抗体)。
术语“特异性结合”等意指抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理条件下相对较稳定的复合物。特异性结合的特征在于至少约1x10-6 M或更大的解离常数。用于确定两个分子是否特异性结合的方法是本领域众所周知的，并且包括例如平衡透析、表面等离子共振等。然而，特异性结合人MUC16和人CD3的分离的抗体可能与其他抗原，诸如来自其他物种(直向同源物)的MUC16或CD3分子具有交叉反应性。在本发明的上下文中，结合人MUC16和人CD3以及一种或多种另外的抗原的多特异性(例如双特异性)抗体被认为“特异性结合”人MUC16和人CD3。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
WO 2018/067331中列出了可包括在本发明药物制剂中的示例性抗MUC16x抗CD3双特异性抗体，其公开内容通过引用以其整体并入。
根据本发明的某些实施方案，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体或其抗原结合片段包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域包含分别包含SEQ ID NO:7、8和9的氨基酸序列的重链互补决定区(CDR)A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3，第二抗原结合结构域包含分别包含SEQ ID NO:10、11和12的氨基酸序列的重链CDR A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3。根据本发明的某些实施方案，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体或其抗原结合片段包含共同的(第一和第二抗原结合结构域)轻链互补决定区LCDR1-LCDR2-LCDR3，其分别包含SEQ ID NO:13、14和15的氨基酸序列。
在某些实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体或其抗原结合片段包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR。在某些实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的共同轻链可变区(LCVR)。在某些实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体或其抗原结合片段包含第一抗原结合结构域，其包含含有SEQ ID NO:4/6的氨基酸序列的HCVR/LCVR氨基酸序列对，和第二抗原结合结构域，其包含含有SEQ ID NO:5/6的氨基酸序列的HCVR/LCVR氨基酸序列对。在一些实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体包含上述HCVR/LCVR序列对和人IgG1重链恒定区。在一些实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体包含上述HCVR/LCVR序列对和人IgG4重链恒定区。在一些实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体包含上述HCVR/LCVR序列对和人IgG重链恒定区。在一些实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体包含上述HCVR/LCVR序列对和人IgG1或IgG4重链恒定区。在一些实施方案中，抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第一重链、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的第二重链和含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的共同轻链。抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体具有特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域(其包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR)和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域(其包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR)，在本文中称为mAb1。该抗体具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第一重链(包括特异性结合人MUC16的HCVR)、包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的第二重链(包括特异性结合人CD3的HCVR)以及包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的共同轻链。在某些情况下，抗体的成熟形式可能不包括SEQ ID NO:1和2的C-末端赖氨酸残基。因此，在一些情况下，mAb1的抗MUC16结合臂包含含有SEQ ID NO:1的残基1-442的重链，mAb1的抗CD3结合臂包含含有SEQ ID NO:2的残基1-449的重链。
本发明的药物制剂中含有的抗体或其抗原结合片段的量可以根据制剂所需的具体性质以及制剂预期使用的具体情况和目的而变化。在某些实施方案中，药物制剂可以含有约0.1mg/mL至约500mg/mL的抗体；约0.5mg/mL至约400mg/mL的抗体；约1mg/mL至约200mg/mL的抗体；约2mg/mL至约100mg/mL；约1mg/mL至约5mg/mL的抗体；约10mg/mL至约30mg/mL的抗体；约75mg/mL至约125mg/mL；约5mg/mL至约50mg/mL；约4mg/ml至约60mg/ml；或约2mg/mL至约55mg/mL的抗体。例如，本发明的制剂可以是液体制剂，其包含约0.5mg/mL；约1mg/mL；约2mg/mL；约3mg/mL；约4mg/mL；约5mg/mL；约6mg/mL；约7mg/mL；约8mg/mL；约9mg/mL；约10mg/mL；约11mg/mL；约12mg/mL；约13mg/mL；约14mg/mL；约15mg/mL；约16mg/mL；约17mg/mL；约18mg/mL；约19mg/mL；约20mg/mL；约21mg/mL；约22mg/mL；约23mg/mL；约24mg/mL；约25mg/mL；约26mg/mL；约27mg/mL；约28mg/mL；约29mg/mL；约30mg/mL；约35mg/mL；约40mg/mL；约45mg/mL；约50mg/mL；约55mg/mL；约60mg/mL；约65mg/mL；约70mg/mL；约75mg/mL；约80mg/mL；约85mg/mL；约90mg/mL；约95mg/mL；约96mg/mL；约97mg/mL；约98mg/mL；约99mg/mL；约100mg/mL；约101mg/mL；约102mg/mL；约103mg/mL；约104mg/mL；约105mg/mL；约110mg/mL；约115mg/mL；约120mg/mL；约125mg/mL；约130mg/mL；约135mg/mL；约140mg/mL；约145mg/mL；约150mg/mL；约155mg/mL；约160mg/mL；约165mg/mL；约170mg/mL；约175mg/mL；约180mg/mL；约185mg/mL；约190mg/mL；约195mg/mL；或约200mg/mL的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人MUC16和人CD3。在某些实施方案中，药物制剂是液体制剂，其可以含有1±0.1mg/mL至200±20mg/mL的抗体；2±0.2mg/mL至10±1mg/mL的抗体；1±0.5mg/mL至30±5mg/mL的抗体；40±4mg/mL至60±6mg/mL的抗体；1±0.1mg/mL至3±0.3mg/mL的抗体；3±0.5mg/mL至7±0.5mg/mL的抗体；45±1mg/mL至55±1mg/mL的抗体；140±5mg/ml至160±5mg/ml的抗体；或175±5mg/mL至185±5mg/mL的抗体。在一些实施方案中，药物制剂含有5±0.5mg/mL的抗体。在一些实施方案中，药物制剂含有50±5mg/mL的抗体。在一些实施方案中，药物制剂含有150±15mg/ml的抗体。在一些实施方案中，药物制剂含有2±0.2mg/ml的抗体。在一些实施方案中，药物制剂含有20±2mg/ml的抗体。在一些实施方案中，药物制剂含有180±10mg/ml的抗体。
生物等效物
本发明涵盖具有与本文公开的示例性分子不同的氨基酸序列的抗体，但保留了结合人MUC16和人CD3的能力。当与亲本序列相比时，此类变体分子可以包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换，但是表现出基本上相当于本文讨论的抗体的生物学活性。
本发明包括与本文阐述的任何示例性抗体生物等效的抗原结合分子。例如，如果两种抗体是药物等效物或药物替代物，即，当在相似的实验条件下以相同的摩尔剂量(单剂量或多剂量)施用时，其吸收速率和吸收程度没有显示显著差异，则认为它们是生物等效的。如果某些抗体在吸收程度上是等效的，但是在吸收速率上不是等效的，则将其视为等效物或药物替代物，但因为吸收速率的此类差异是有意的并且反映在标记中，所以可以被视为生物等效的，这些抗体对于例如在长期使用中达到有效体内药物浓度不是必需的，并且被认为对于所研究的特定药品不具有临床意义。
在一个实施方案中，如果两种抗体的安全性、纯度和效力没有临床意义上的差异，则它们是生物等效的。
在一个实施方案中，与不进行参考产品和生物产品之间的切换的连续疗法相比，如果患者可以进行此类切换一次或多次，而没有预期的不良反应风险的增加，包括免疫原性的临床上显著的变化、或减少的有效性，则两种抗体是生物等效的。
生物等效性可以通过体内和体外方法来展示。生物等效性度量包括，例如，(a)在人或其他哺乳动物中的体内试验，其中测量了随时间推移的血液、血浆、血清或其他生物流体中的抗体或其代谢物的浓度；(b)与人体内生物利用率数据相关联并且可以合理地预测人体内生物利用率数据的体外试验；(c)在人或其他哺乳动物中的体内试验，其中测量了随时间推移的抗体(或其靶标)的适当急性药理作用；以及(d)建立抗原结合蛋白的安全性、功效、或者生物利用率或生物等效性的良好对照的临床试验。
制剂赋形剂和pH值
本发明的药物制剂包含一种或多种赋形剂。如本文所用，术语“赋形剂”是指添加到制剂中以提供所需稠度、粘度或稳定效果的任何非治疗剂。
在某些实施方案中，本发明的药物制剂包含一种或多种碳水化合物，例如一种或多种糖。糖可以是还原糖或非还原糖。“还原糖”包括,例如具有酮或醛基的糖，并且含有反应性半缩醛基团，这使得糖可以作为还原剂。还原糖的具体例子包括果糖、葡萄糖、甘油醛、乳糖、***糖、甘露糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖和麦芽糖。非还原糖可以包含异头碳，该异头碳是缩醛，并且基本上不与氨基酸或多肽反应来引发美拉德反应。非还原糖的具体实例包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、三氯蔗糖、松三糖和棉子糖。糖酸包括例如糖酸、葡萄糖酸盐和其他多羟基糖及其盐。在一些实施方案中，糖是蔗糖。在一些情况下，糖(例如蔗糖)作为抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体的热稳定剂。
包含在本发明药物制剂中的糖(例如蔗糖)的量将根据具体情况和制剂使用的预期目的而变化。在某些实施方案中，制剂可以含有约0.1％至约20％的糖；约0.5％至约20％的糖；约1％至约20％的糖；约2％至约15％的糖；约5％至约15％的糖；约7.5％至约12.5％的糖；或约9％至约11％的糖。例如，本发明的药物制剂可以包含约0.5％；约1.0％；约1.5％；约2.0％；约2.5％；约3.0％；约3.5％；约4.0％；约4.5％；约5.0％；约5.5％；约6.0％；约6.5％；约7.0％；约7.5％；约8.0％；约8.5％；约9.0％；约9.5％；约10.0％；约10.5％；约11.0％；约11.5％；约12.0％；约12.5％；约13.0％；约13.5％；约14.0％；约14.5％；约15％；或约20％的糖(例如蔗糖)。在一些实施方案中，制剂含有约10％的糖(例如蔗糖)。在一些实施方案中，制剂含有约5％的糖(例如蔗糖)。上面提到的每个百分比对应于重量/体积百分比(w/v)。在一些情况下，制剂含有5％±1％至20％±4％w/v的蔗糖。在一些情况下，制剂含有5％至10％w/v的蔗糖。在一些情况下，制剂含有8％±0.5％至12％±0.5％w/v的蔗糖。在一些情况下，制剂含有10％±1％w/v的蔗糖。
本发明的药物制剂还可包含一种或多种有机助溶剂(或界面稳定剂)，其类型和用量可在粗暴处理或搅拌(诸如例如回转式振荡)的条件下稳定抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体。在一些实施方案中，有机助溶剂是表面活性剂。如本文所用，术语“表面活性剂”意指减少溶解于其中的流体的表面张力和/或减少油和水之间的界面张力的物质。表面活性剂可以是离子型或非离子型的。可包括在本发明制剂中的示例性非离子表面活性剂包括，例如烷基聚(环氧乙烷)、烷基多苷(例如辛基葡糖苷和癸基麦芽糖苷)、脂肪醇(诸如鲸蜡醇和油醇)、椰油酰胺MEA、椰油酰胺DEA和椰油酰胺TEA。可包括在本发明制剂中的特定非离子表面活性剂包括，例如，聚山梨醇酯(诸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯28、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81和聚山梨醇酯85)；泊洛沙姆(诸如泊洛沙姆188(也称为普朗尼克F68)、泊洛沙姆407)；聚乙二醇-聚丙二醇；或聚乙二醇(PEG)。聚山梨醇酯20也称为TWEEN 20、脱水山梨醇单月桂酸酯和聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯。在一些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20。
本发明的药物制剂中包含的表面活性剂的量可以根据制剂所需的具体性质以及制剂预期使用的具体情况和目的而变化。在某些实施方案中，制剂可以含有约0.01％至约1％的表面活性剂；约0.01％至约0.5％的表面活性剂；约0.1％至约0.3％；约0.15％至约0.25％的表面活性剂；或约0.19％至约0.21％的表面活性剂。例如，本发明的制剂可以包含约0.01％；约0.02％；约0.03％；约0.04％；约0.05％；约0.06％；约0.07％；约0.08％；约0.09％；约0.10％；约0.11％；约0.12％；约0.13％；约0.14％；约0.15％；约0.16％；约0.17％；约0.18％；约0.19％；约0.20％；约0.21％；约0.22％；约0.23％；约0.24％；约0.25％；约0.26％；约0.27％；约0.28％；约0.29％；或约0.30％的表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)。在一些实施方案中，制剂含有约0.2％的表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)。在一些实施方案中，制剂含有约0.05％的表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)。上面提到的每个百分比对应于重量/体积百分比(w/v)。在一些情况下，制剂含有0.01％±0.005％至0.5％±0.25％w/v的聚山梨醇酯20。在一些情况下，制剂含有0.2％±0.05％w/v的聚山梨醇酯20。在一些情况下，制剂含有0.2％±0.01％w/v的聚山梨醇酯20。
本发明的药物制剂还可包含缓冲液或缓冲***，其用于维持稳定的pH并帮助稳定抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体。在一些实施方案中，缓冲剂或缓冲***包含缓冲范围与pH4.5至5.5的范围完全或部分重叠的至少一种缓冲剂。在某些实施方案中，缓冲液包括乙酸盐缓冲液(例如乙酸钠)。在某些实施方案中，缓冲液(例如乙酸盐)以约1mM至约50mM、约20mM至约40mM、约25mM至约35mM；约28mM至约32mM；或约29mM至约31mM的浓度存在。在一些实施方案中，缓冲液(例如乙酸盐)以约20mM；约21mM；约22mM；约23mM；约24mM；约25mM；约26mM；约27mM；约28mM；约29mM；约30mM；约31mM；约32mM；约33mM；约34mM；约35mM；约36mM；约37mM；约38mM；约39mM；或约40mM的浓度存在。在某些情况下，缓冲液是组氨酸，以约1mM；约2mM；约3mM；约4mM；约5mM；约6mM；约7mM；约8mM；约9mM；约10mM；约11mM；约12mM；约13mM；约14mM；约15mM；约16mM；约17mM；约18mM；约19mM；或约20mM的浓度存在。在一些情况下，制剂含有浓度为5mM±1mM至15mM±3mM的组氨酸缓冲液。在一些情况下，制剂含有浓度为10mM±1mM的组氨酸缓冲液。在一些实施方案中，制剂含有乙酸盐缓冲液(例如以上文或本文讨论的任何浓度)。在一些实施方案中，制剂含有磷酸盐缓冲液(例如以上文或本文讨论的任何浓度)。
在一些实施方案中，本发明的药物制剂还可以包含精氨酸。在一些情况下，精氨酸以1至100mM的浓度存在。在一些实施方案中，精氨酸以25至75mM的浓度存在。在一些情况下，精氨酸以50mM±5mM的浓度存在。在一个实施方案中，药物制剂包含pH 5.0±0.1的30mM±3mM乙酸盐、7％±0.7％w/v蔗糖、0.05％±0.01％w/v聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)和50mM±5mM精氨酸。在一些情况下，抗体以1mg/ml至200mg/ml或150mg/ml±10mg/ml的浓度存在。
在抗体纯化过程期间，可能需要或有必要将一种缓冲液更换成另一种，以获得合适的赋形剂浓度、抗体浓度、pH等。缓冲液交换可以例如通过使用例如半渗透切向流过滤膜进行超滤/渗滤(UF/DF)来完成。然而，使用此类技术有可能导致Gibbs-Donnan效应(Bolton等人，2011，Biotechnol.Prog.27(1):140-152)。在蛋白质浓缩期间，正电荷在膜产品侧的积累被阳离子向膜相反侧的优先移动所抵消。这种现象的潜在后果是某些组分(例如，乙酸盐等)的最终浓度可能低于这些组分的预期目标浓度，这是由于在UF/DF步骤期间带正电荷的渗滤缓冲液赋形剂对带正电荷的抗体蛋白质的静电排斥。因此，本发明包括如下制剂，其中由于Gibbs-Donnan效应，例如乙酸盐的浓度不同于本文所述的量或范围。
体积排阻描述了高度浓缩样品的行为，其中溶液总体积的很大部分被溶质占据，尤其是诸如蛋白质的大分子，不包括该空间中的溶剂。这就减少了可用于溶解其他溶质的溶剂的总体积，从而可能导致超滤膜上分配不均。因此，本发明包括如下制剂，其中由于体积排阻效应，例如乙酸盐的浓度可以不同于本文所述的量或范围。
在本发明的制剂的制造过程中，制剂的组成可能会发生变化。这些变化可以包括活性成分的浓度、赋形剂的浓度和/或制剂的pH。本发明包括包含抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体的制剂，所述抗体是稳定的，并且在赋形剂浓度变化高达至少10％的情况下仍保持效力。例如，本文包括抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体制剂，其中制剂的稳定性和效力不受抗体、蔗糖、乙酸盐缓冲液和/或聚山梨醇酯浓度±10％或±20％变化的影响。
药物制剂的稳定性
本发明的药物制剂表现出高水平的稳定性。如本文中参考药物制剂所用的术语“稳定”意指药物制剂中的抗体在储存限定时间量后保持可接受程度的结构和/或功能和/或生物活性。制剂可以是稳定的，即使其中包含的抗体在储存限定时间量后不能保持100％的结构和/或功能和/或生物活性。在某些情况下，储存限定时间量之后抗体结构和/或功能和/或生物活性保持约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％可被视为“稳定”。
稳定性尤其可以通过确定在给定温度下储存限定时间量后制剂中保留的天然抗体的百分比来测量。天然抗体的百分比尤其可以通过尺寸排阻色谱法(例如尺寸排阻高效液相色谱法[SE-HPLC])来确定。如本文所用的短语“可接受的稳定性程度”意指在给定温度下储存给定时间量后，制剂中可检测到至少90％的天然形式的抗体。在某些实施方案中，在给定温度下储存限定时间量后，制剂中可检测到至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的天然形式的抗体。测量稳定性后的限定时间量可以是至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月或更长时间。当评估稳定性时，药物制剂可以储存的温度可以是约-80℃至约45℃的任何温度，例如储存在约-80℃、约-30℃、约-20℃、约0℃、约4℃-8°℃、约5℃、约25℃、约35℃、约37℃、或约45℃。例如，如果在5℃下储存3个月后通过SE-HPLC检测到大于约90％、95％、96％或97％的天然抗体，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在5℃下储存6个月后通过SE-HPLC检测到大于约90％、95％、96％或97％的天然抗体，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在5℃下储存9个月后通过SE-HPLC检测到大于约90％、95％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％或99.5％的天然抗体，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在5℃下储存12个月后通过SE-HPLC检测到大于约90％、95％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％或99.5％的天然抗体，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在5℃下储存24个月后通过SE-HPLC检测到大于约90％、95％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％或99.5％的天然抗体，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在5℃下储存36个月后通过SE-HPLC检测到大于约90％、95％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％或99.5％的天然抗体，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在25℃(和任选的60％相对湿度)下储存3个月后通过SE-HPLC检测到大于约90％、95％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％或99.5％的天然抗体，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在25℃(和任选的60％相对湿度)下储存6个月后通过SE-HPLC检测到大于约90％、95％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％或99.5％的天然抗体，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在25℃(和任选的60％相对湿度)下储存9个月后通过SE-HPLC检测到大于约90％、95％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％或99.5％的天然抗体，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在37℃下储存3个月后通过SE-HPLC检测到大于约90％、95％、96％或97％的天然抗体，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在45℃(和任选的75％相对湿度)下储存1个月后通过SE-HPLC检测到大于约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、或98％的天然抗体，则药物制剂也被认为是稳定的。
可以使用其他方法来评估本发明的制剂的稳定性，例如使用差示扫描量热法(DSC)来确定热稳定性，使用受控搅拌来确定机械稳定性，以及使用在约350nm或约405nm处的吸光度来确定溶液浊度。例如，如果在约5℃至约25℃下储存6个月或更长时间后制剂的OD405的变化小于在t＝0时制剂的OD405的约0.05(例如0.04、0.03、0.02、0.01或更小)，则本发明的制剂可以被认为是稳定的。
测量抗体与其靶标的结合亲和力也可用于评估稳定性。例如，如果在例如-80℃、-30℃、-20℃、5℃、25℃、37℃、45℃等储存限定时间量(例如14天至9个月)后，本发明的制剂可以被认为是稳定的，包含在制剂中的抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体与人MUC16和人CD3的结合亲和力为所述储存前抗体结合亲和力的至少80％、85％、90％、95％或更多。结合亲和力可以通过任何方法确定，诸如例如ELISA或等离子共振。生物活性可以通过MUC16或CD3活性测定来确定，诸如通过将表达MUC16或CD3的细胞与包含抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体的制剂接触。抗体与这种细胞的结合可以直接测量，诸如通过FACS分析。
稳定性尤其可通过确定制剂在限定温度下储存限定时间量后形成聚集体(高分子量(HMW)物质)的抗体的百分比来测定，其中稳定性与形成的聚集体的百分比成反比。聚集抗体的百分比可以尤其通过尺寸排阻色谱法(例如尺寸排阻高效液相色谱法[SE-HPLC]或尺寸排阻超高效液相色谱法[SE-UPLC])来确定。如本文所用的短语“可接受的稳定性程度”意指在给定温度(高达25℃)下储存限定时间量后，在制剂中检测到至多6％呈聚集形式的抗体。在某些实施方案中，可接受的稳定性程度意指在给定温度下储存限定时间量后，在制剂中最多可检测到约6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％呈聚集体形式的抗体。测量稳定性后的限定时间量可以是至少2周、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月或更长时间。当评估稳定性时，药物制剂可储存的温度可以是约-80℃至约45℃的任何温度，例如，储存在约-80℃、约-30℃、约-20℃、约0℃、约4℃-8°℃、约5℃、约25℃、约35℃、约37℃或约45℃。例如，如果在5℃下储存十二个月后，检测到聚集形式的抗体少于约3％、2.75％、2.5％、2.25％、2％、1.75％、1.5％、1.25％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或0.1％，则药物制剂被认为是稳定的。在一些情况下，如果在5℃下储存六个月后，检测到聚集形式的抗体少于约5％、4.75％、4.5％、4.25％、4％、3.75％、3.5％、3.25％、2％或1％，则药物制剂被认为是稳定的。如果在25℃和60％相对湿度下储存六个月后，检测到聚集形式的抗体少于约6％、5.75％、5.5％、5.25％、5％、4.5％、4％、3.5％、3％、2.5％、2％、1.75％、1.5％、1.25％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或0.1％，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在37℃下储存三个月后，检测到聚集形式的抗体少于约6％、5.75％、5.5％、5.25％、5％、4.5％、4％、3.5％、3％、2.5％、2％、1.75％、1.5％、1.25％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或0.1％，则药物制剂也被认为是稳定的。如果在-30℃或-80℃储存十二个月后，检测到聚集形式的抗体少于约3％、2.75％、2.5％、2.25％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1％、0.5％或0.1％，则药物制剂也被认为是稳定的。
稳定性尤其可以通过确定保持糖基化物质形式的抗体的百分比来测量。抗体的“糖基化物质”的百分比可以通过离子交换色谱法(例如阳离子交换高效液相色谱法[CEX-HPLC]或阳离子交换超高效液相色谱法[CEX-UPLC])和/或通过LC-MS来确定。本文所用的短语“可接受的稳定性程度”意指在限定温度下储存限定时间量后，“糖基化物质”形式的抗体的百分比变化不超过指定量。在某些实施方案中，可接受的稳定性程度意指在给定温度下储存限定时间量后，“糖基化物质”的百分比变化不超过25％、不超过20％、不超过15％、不超过10％、不超过9％、不超过8％、不超过7％、不超过6％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2.5％、不超过2％、不超过1.5％或不超过1％。测量稳定性后的限定时间量可以是至少2周、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月或更长时间。当评估稳定性时，药物制剂可储存的温度可以是约-80℃至约45℃的任何温度，例如，储存在约-80℃、约-30℃、约-20℃、约0℃、约4℃-8°℃、约5℃、约25℃或约45℃。例如，如果在-80℃或-30℃下储存十二个月后,“糖基化物质”的百分比变化不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1.5％，则药物制剂被认为是稳定的。在另一个实例中，如果在5℃下储存六个月后,“糖基化物质”的百分比变化不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1.5％，则药物制剂被认为是稳定的。在另一个实例中，如果在5℃下储存十二个月后,“糖基化物质”的百分比变化不超过5％、不超过4％或不超过3％，则药物制剂被认为是稳定的。在每种情况下，可以使用阳离子交换超高效液相色谱法(CEX-UPLC)和/或通过LC-MS进行测量。
提及药物制剂在指定时间段“后”的稳定性旨在意指指定时间段结束时或大约结束时测量稳定性参数(例如％天然形式、％HMW物质或％酸性形式)，并不旨在意指药物制剂此后必须保持相同程度的稳定性。例如，提及12个月后的特定稳定性意指在研究开始时或约12个月后进行稳定性测量。用于评估制剂中的抗体稳定性的其他方法在以下实施例中进行了说明。
如以下实施例所示，本发明部分基于以下发现，即所要求保护的赋形剂与双特异性抗MUC16 x抗CD3抗体的组合产生稳定的制剂。
示例性制剂
根据本发明的一个方面，药物制剂包含：(i)特异性结合人MUC16和人CD3的人抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体；(ii)包含乙酸盐(例如乙酸钠)的缓冲液；(iii)包含聚山梨醇酯的有机助溶剂；和(iv)包含糖的稳定剂。根据另一方面，药物制剂包含：(i)特异性结合人MUC16和人CD3的人抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体；(ii)包含乙酸盐的缓冲液；和(iii)包含糖的稳定剂。根据另一方面，药物制剂包含：(i)特异性结合人MUC16和人CD3的人抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体；(ii)包含组氨酸的缓冲液；(iii)包含聚山梨醇酯的有机助溶剂；和(iv)包含糖的稳定剂。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(ii)浓度为约25mM至约35mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.1％w/v至约0.3％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约5％w/v至约15％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，其中抗体具有同种型IgG1的重链恒定区(任选地，其中两条重链中的一条相对于相同同种型的未修饰重链具有减少蛋白A结合的修饰，并且任选地其中两条重链中的一条或两条具有嵌合铰链)；(ii)浓度为约25mM至约35mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.1％w/v至约0.3％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约5％w/v至约15％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，其中抗体具有同种型IgG4的重链恒定区(任选地，其中两条重链中的一条相对于相同同种型的未修饰重链具有减少蛋白A结合的修饰，并且任选地其中两条重链中的一条或两条具有嵌合铰链)；(ii)浓度为约25mM至约35mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.1％w/v至约0.3％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约5％w/v至约15％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第一重链、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的第二重链和含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的共同轻链；(ii)浓度为约25mM至约35mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.1％w/v至约0.3％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约5％w/v至约15％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，其中抗体具有同种型IgG1的重链恒定区(任选地，其中两条重链中的一条相对于相同同种型的未修饰重链具有减少蛋白A结合的修饰，并且任选地其中两条重链中的一条或两条具有嵌合铰链)；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，其中抗体具有同种型IgG4的重链恒定区(任选地，其中两条重链中的一条相对于相同同种型的未修饰重链具有减少蛋白A结合的修饰，并且任选地其中两条重链中的一条或两条具有嵌合铰链)；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第一重链、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的第二重链和含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的共同轻链；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(ii)浓度为约30mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.1。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，其中抗体具有同种型IgG1的重链恒定区(任选地，其中两条重链中的一条相对于相同同种型的未修饰重链具有减少蛋白A结合的修饰，并且任选地其中两条重链中的一条或两条具有嵌合铰链)；(ii)浓度为约30mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.1。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，其中抗体具有同种型IgG4的重链恒定区(任选地，其中两条重链中的一条相对于相同同种型的未修饰重链具有减少蛋白A结合的修饰，并且任选地其中两条重链中的一条或两条具有嵌合铰链)；(ii)浓度为约30mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.1。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第一重链、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的第二重链和含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的共同轻链；(ii)浓度为约10mM的组氨酸；(ii)浓度为约30mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.1。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为3mg/ml±1mg/ml至7mg/ml±1mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为5mg/ml±0.5mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为40mg/ml±2mg/ml至60mg/ml±2mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为50mg/ml±5mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为5mg/ml±0.5mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ IDNO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，其中抗体具有同种型IgG4的重链恒定区(任选地，其中两条重链中的一条相对于相同同种型的未修饰重链具有减少蛋白A结合的修饰，并且任选地其中两条重链中的一条或两条具有嵌合铰链)；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为50mg/ml±5mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，其中抗体具有同种型IgG4的重链恒定区(任选地，其中两条重链中的一条相对于相同同种型的未修饰重链具有减少蛋白A结合的修饰，并且任选地其中两条重链中的一条或两条具有嵌合铰链)；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为5mg/ml±0.5mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，其中抗体具有同种型IgG4的重链恒定区，并且其中两条重链中的一条在CH3结构域中具有修饰(例如H435R和Y436F，通过EU编号)，其相对于未修饰的IgG4 CH3结构域减少了与蛋白A结合；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为50mg/ml±0.5mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，其中抗体具有同种型IgG4的重链恒定区，并且其中两条重链中的一条在CH3结构域中具有修饰(例如H435R和Y436F，通过EU编号)，其相对于未修饰的IgG4 CH3结构域减少了与蛋白A结合；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约5mg/ml±0.5mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第一重链、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的第二重链和含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的共同轻链；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约50mg/ml±5mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第一重链、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的第二重链和含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的共同轻链；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；(iii)浓度为约0.2％w/v±0.02％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约1mg/ml至约3mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(ii)浓度为约10mM±1mM的组氨酸；(iii)浓度为约0.05％w/v±0.01％w/v的聚山梨醇酯20；和(iv)浓度为约10％w/v±1％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为6.0±0.3。
在一些情况下，稳定的液体药物制剂包含(i)浓度为约150mg/ml至约200mg/ml的特异性结合人MUC16和人CD3的人双特异性抗体，并且包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，第一抗原结合结构域包含含有SEQID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；(ii)浓度为约30mM±1mM的乙酸盐；和(iii)浓度为约5％w/v±0.5％w/v的蔗糖，其中制剂的pH为5.0±0.3。
在任何这些示例性制剂中，“稳定的”可以定义为：(a)通过SE-UPLC确定，制剂在5℃下储存12个月后含有不超过2.5％的高分子量(HMW)物质；(b)通过SE-UPLC确定，制剂在25℃和60％相对湿度下储存6个月后含有不超过3.5％的高分子量(HMW)物质；(c)通过SE-UPLC确定，制剂在-30℃下储存12个月后含有不超过1.5％的高分子量(HMW)物质；(d)通过SE-UPLC确定，制剂在-80℃下储存12个月后含有不超过1.5％的高分子量(HMW)物质；(e)通过SE-UPLC确定，在5℃储存12个月后，至少95％的抗体具有天然构象；(f)通过SE-UPLC确定，在25℃和60％相对湿度下储存6个月后，至少95％的抗体具有天然构象；(g)通过SE-UPLC确定，在37℃储存3个月后，至少95％的抗体具有天然构象；(h)通过SE-UPLC确定，制剂在5℃下储存12个月后含有不超过1％的高分子量(HMW)物质；(i)通过SE-UPLC确定，制剂在25℃和60％相对湿度下储存6个月后含有不超过1％的HMW物质；(j)通过SE-UPLC确定，制剂在37℃下储存3个月后含有不超过1％的HMW物质；(k)通过SE-UPLC确定，制剂在-30℃或-80℃下储存12个月后含有不超过2％的高分子量(HMW)物质；(l)通过SE-UPLC确定，制剂在5℃下储存6个月后含有不超过4％的HMW物质；或(m)通过SE-UPLC确定，制剂在25℃和60％相对湿度下储存6个月后含有不超过6％的HMW物质。
在任何这些示例性制剂中，双特异性抗体可以在一条或两条重链中包括修饰，以促进双特异性抗体(即，异二聚体)从同二聚体杂质中纯化。在一些实施方案中，双特异性抗体包括第一和第二重链(即抗MUC16结合臂的重链和抗CD3结合臂的重链)，它们除了一个或另一个重链的CH3结构域中的修饰之外是相同的(例如均属于同种型IgG1或IgG4)，与缺乏该修饰的抗体相比，该修饰减少了双特异性抗体与蛋白质A的结合。在一些情况下，第一重链的CH3结构域(例如抗MUC16结合臂的第一重链)结合蛋白A，第二重链的CH3结构域(的例如抗CD3结合臂的第二重链)含有减少或消除蛋白A结合的突变。在一些情况下，突变是H435R修饰(通过EU编号；H95R通过IMGT外显子编号)。在一些情况下，突变是H435R修饰(通过EU编号；H95R通过IMGT外显子编号)和Y436F修饰(通过EU编号；Y96F通过IMGT编号)。在第二CH3结构域内可能发现的另外的修饰包括：在IgG1CH3结构域的情况下，通过EU编号的D356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I(通过IMGT编号的D16E、L18M、N44S、K52N、V57M和V82I)；以及在IgG4 CH3结构域的情况下，通过EU编号的Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q和V422I(通过IMGT编号的Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q和V82I)。
本发明所包括的药物制剂的另外的非限制性实例在本文的其他地方给出，包括下面给出的工作实施例。
容器和施用方法
本发明的药物制剂可以包含在任何适于储存药物和其他治疗组合物的容器中。例如，药物制剂可以包含在具有限定体积的密封和灭菌的塑料或玻璃容器中，例如小瓶、安瓿、注射器、药筒、瓶子或IV袋。不同类型的小瓶可用于容纳本发明的制剂，包括例如透明和不透明(例如琥珀色)的玻璃或塑料小瓶。同样，可以使用任何类型的注射器来容纳和/或施用本发明的药物制剂。在一些实施方案中，药物制剂包含在预灌装注射器中。在一些实施方案中，药物制剂包含在预灌装的带针注射器中。
本发明的药物制剂可以包含在“标准钨”注射器或“低钨”注射器中。如本领域普通技术人员将会理解的，制造玻璃注射器的方法通常包括使用用于刺穿玻璃的热钨棒，从而产生孔，液体可以从该孔中抽取并排出注射器。该方法导致痕量钨沉积在注射器的内表面上。随后的清洗和其它处理步骤可用于减少注射器中的钨量。如本文所用，术语“标准钨”是指注射器包含大于十亿分之(ppb)500的钨。术语“低钨”是指注射器含有少于500ppb的钨。例如，根据本发明，低钨注射器可含有少于约490、480、470、460、450、440、430、420、410、390、350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10ppb或更少的钨。
注射器中使用的橡胶柱塞和用于封闭药瓶开口的橡胶塞可以被涂覆，以防止注射器或小瓶的药物内容物被污染，并且/或者保持它们的稳定性。因此，根据某些实施方案，本发明的药物制剂可以包含在包括涂覆的柱塞的注射器内，或者包含在用涂覆的橡胶塞密封的小瓶内。例如，柱塞或塞子可以涂覆有碳氟化合物膜。适于与包含本发明的药物制剂的小瓶和注射器一起使用的涂覆塞子和/或柱塞的实例在例如美国专利4,997,423；5,908,686；6,286,699；6,645,635；和7,226,554中提及，所述专利的内容以引用的方式整体并入本文。可以在本发明的上下文中使用的特定示例性涂覆橡胶塞和柱塞可以商品名商购获得，可从West Pharmaceutical Services,Inc.(Lionville,PA)获得。/>是用于最小化或防止药物产品粘附到橡胶表面的氟碳涂层的实例。根据本发明的某些实施方案，药物制剂可以包含在包括碳氟化合物涂覆的柱塞的低钨注射器中。在一些实施方案中，容器是注射器，诸如Ompi EZ-FillTM注射器或BD NeopakTM注射器。在一些情况下，注射器是1mL长的玻璃注射器，带有1mL iWest活塞、27G薄壁针头和FM30针头护罩或BD260针头护罩。在一些情况下，注射器是2.25mL玻璃注射器，带有West NovaPureTM 1-3mL活塞、27G薄壁针头和FM30针头护罩或BD260针头护罩。在各种实施方案中，注射器是0.5mL、0.6mL、0.7mL、0.8mL、0.9mL、1.0mL、1.1mL、1.2mL、1.3mL、1.4mL、1.5mL、1.6mL、1.7mL、1.8mL、1.9mL、2.0mL、2.1mL、2.2mL、2.3mL、2.4mL、2.5mL、2.6mL、2.7mL、2.8mL、2.9mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL、4.5mL、5.0mL、5.5mL、6.0mL、6.5mL、7.0mL、7.5mL、8.0mL、8.5mL、9.0mL、9.5mL或10mL注射器(例如玻璃注射器)。
药物制剂可以通过肠胃外途径诸如注射(例如皮下、静脉内、肌内、腹膜内等)或经皮、粘膜、鼻、肺和/或口服施用来向患者施用。许多可重复使用的笔和/或自动注射器递送装置可用于皮下递送本发明的药物制剂。实例包括但不限于AUTOPENTM(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)、DISETRONICTM笔(Disetronic Medical Systems,Bergdorf,Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25TM笔、HUMALOGTM笔、HUMALIN 70/30TM笔(Eli Lilly andCo.,Indianapolis,IN)、NOVOPENTMI、II和III(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、NOVOPEN JUNIORTM(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、BDTM笔(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ)、OPTIPENTM、OPTIPEN PROTM、OPTIPEN STARLETTM和OPTICLIKTM(sanofi-aventis,Frankfurt,Germany)等等。可用于本发明的药物组合物的皮下递送的一次性笔和/或自动注射器递送装置的实例包括但不限于SOLOSTARTM笔(sanofi-aventis)、FLEXPENTM(Novo Nordisk)、和KWIKPENTM(Eli Lilly)、SURECLICKTM自动注射器(Amgen,Thousand Oaks,CA)、PENLETTM(Haselmeier,Stuttgart,Germany)、EPIPEN(Dey,L.P.)、和HUMIRATM笔(Abbott Labs,Abbott Park IL)等等。在一些情况下，药物制剂包含在专门适用于自动注射器的注射器中。可以使用20-30号针或25-30号针施用皮下注射。在一些情况下，可以使用25号针施用皮下注射。在一些情况下，可以使用27号针施用皮下注射。在一些情况下，可以使用29号针施用皮下注射。
另一种类型的递送装置可包括安全***。此类装置可以相对便宜，并且一旦注射完成，可以手动或自动地将安全套筒延伸到针头上。安全***的实例可以包括WestPharmaceutical的ERIS装置，或Becton Dickinson的UltraSafe装置。此外，本文也考虑使用大容量装置(“LVD”)或弹丸式注射器来递送本发明的药物制剂。在一些情况下，LVD或弹丸式注射器可以被配置为将药物注射到患者体内。例如，LVD或弹丸式注射器可以被配置为递送“大”体积的药物(通常约2ml至约10ml)。
在某些实施方案中，药物制剂经由IV滴注施用，使得制剂在含有生理可接受溶液的IV袋中稀释。在一个实施方案中，药物组合物是静脉输注袋中的复合无菌制剂，使得单剂量的药品被稀释到100mL、250mL(或其它类似的适于静脉滴注递送的量)的生理缓冲液(例如0.9％盐水)中。
本发明的药物制剂也可以包含在单位剂型中。本文所用的术语“单位剂型”是指适合作为待治疗患者的单一剂量的物理上离散的单位，每个单位含有预定量的活性化合物，该活性化合物与所需的药物载体、稀释剂或赋形剂结合，经计算可产生所需的治疗效果。在各种实施方案中，单位剂型包含在本文所述的容器中。本发明制剂中活性成分(例如抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体)的实际剂量水平可以变化，以便获得对特定患者、组合物和施用方式有效实现所需治疗反应的活性成分而对患者没有副作用的量。所选择的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所用本发明特定组合物的活性，施用途径，施用时间，所用特定化合物的***速率，治疗持续时间，与所用特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或材料，所治疗患者的年龄、性别、体重、状况、总体健康状况和既往病史，以及医学领域中众所周知的类似因素。本文所用术语“稀释剂”是指适于改变或达到示例性或适当浓度或者本文所述的浓度的溶液。
在各种实施方案中，单位剂型含有一定量的活性成分(例如抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体)，旨在用于单次使用。在各种实施方案中，单位剂型中活性成分的量为约0.1mg至约5000mg、约100mg至约1000mg、和约100mg至约500mg、约100mg至约400mg、约100mg至约200mg、约40mg至约60mg、约125mg至约175mg、约160mg至约200mg、约1mg至约250mg、约1mg至约100mg、约1mg至约50mg、约1mg至约25mg、约1mg至约20mg、约5mg至约15mg，或其范围或区间。上述量的中间范围，例如约2mg至约100mg或2mg至20mg，也是本发明的一部分。例如，使用任何上述值的组合(或包含在上述范围内的值)作为上限和/或下限的值的范围旨在被包括在内。在一些实施方案中，单位剂型含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200mg的抗体。在一些实施方案中，单位剂型含有5mg抗体。在一些实施方案中，单位剂型含有12.5mg抗体。在具体的实施方案中，制剂通常作为单位剂型中的液体提供。在一些实施方案中，单位剂型含有3至7mg、或8至12mg、10至15mg、35至45mg、45至55mg、140至160mg、或170至190mg。在一些实施方案中，根据本发明的单位剂型适于对患者进行皮下施用(例如含有浓度为约100mg/ml或约200mg/ml或150mg/ml±5mg/ml的抗体的单位剂型)。
本发明还包括制备单位剂型的方法。在示例性实施方案中，制备药物单位剂型的方法包括在合适的容器(例如本文讨论的那些容器)中组合前述实施方案中任何制剂。
药物制剂的治疗用途
本发明的药物制剂尤其可用于治疗、预防和/或改善与表达人MUC16的细胞相关的任何疾病或障碍。可通过施用本发明的药物制剂来治疗的示例性、非限制性疾病和障碍包括卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和非小细胞肺癌。
本发明的治疗方法包括向受试者施用包含本文公开的抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体的任何制剂。施用药物制剂的受试者可以是例如任何需要这种治疗的人或非人动物。例如，受试者可以是被诊断患有任何上述疾病或障碍的个体，或者被认为有患上述疾病或障碍的风险的个体。本发明进一步包括本文公开的任何药物制剂在制备用于治疗与表达人MUC16的细胞相关的任何疾病或障碍的药物中的用途，包括任何上述示例性疾病、障碍和病症。
在一些实施方案中，本发明提供了试剂盒，其包含本文讨论的药物制剂(例如含有制剂或单位剂型的容器)，以及包装或标签(例如包装插页)，其具有使用药物制剂治疗本文讨论的疾病或障碍的说明书。在一些情况下，说明书提供了如本文所讨论的用于治疗疾病或障碍的单位剂型的用途。
本文引用的序列和相应的SEQ ID NO的汇总显示在下表1中。
表1：序列概述
实施例
提供以下实施例是为了向本领域普通技术人员提供关于如何制备和使用本发明的方法和组合物的完整公开和描述，而非旨在限制发明人认为是其发明的范围。已努力确保有关所用的数字(例如，量、温度等)的准确性，但应考虑某些实验误差和偏差。除非另外指明，否则份数是重量份，分子量是平均分子量，温度是按摄氏度计并且压力是大气压或接近大气压。
实施例1：开发稳定的液体和冻干抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体制剂
制剂的物理稳定性是指诸如颜色、外观、pH、浊度和蛋白质浓度的性质。化学稳定性是指高分子量(HMW)物质、低分子量(LMW)物质、电荷变体和蛋白质的其他化学修饰的形成。使用以下测定评估mAb1药品的物理和化学稳定性：目测颜色和外观；pH；通过在405nm处增加光密度(OD)来测量浊度；通过微流成像TM(MFI)进行亚可视颗粒分析；通过反相超高效液相色谱法(RP-UPLC)浓缩蛋白质；使用尺寸排阻超高效液相色谱法(SE-UPLC)和还原和非还原微芯片毛细管电泳-十二烷基硫酸钠(MCESDS)评估每种药品的纯度；使用阳离子交换UPLC(CEX-UPLC)(通过CEX-UPLC检测糖基化mAb1)和成像毛细管等电聚焦(iCIEF)确定电荷变体分析；并生物测定确定效力(通过生物测定确定每种样品的相对效力并定义为：(IC50参考样品/IC50样品)×100％；储存稳定性样品的测量的效力必须在参考标准品的测量的效力的50％–150％范围内。
开发了用于静脉内(IV)或皮下(SC)施用的mAb1冻干制剂。冻干的mAb1药品可以用无菌注射用水(WFI)重构至2mg/mL mAb1或20mg/ml mAb1的浓度，用于IV输注或SC注射。制剂开发活动包括评估缓冲液、pH值、有机助溶剂、表面活性剂和蔗糖(作为热稳定剂)，以确定增强蛋白质稳定性的赋形剂。这些研究产生的结果用于开发稳定的冻干制剂，制剂适合于重构为液体形式。
缓冲液和pH值选择
通过在一系列不同pH的缓冲***中在45°℃下将2mg/mL mAb1孵育28天，最初在液体制剂中检查缓冲液和pH对mAb1热稳定性的影响。研究了以下pH和缓冲***：乙酸盐(pH4.5至5.5)、组氨酸(pH 5.5至6.5)和磷酸盐(pH 6.5至7.5)。这些分析表明，HMW物质和电荷变体的形成是主要的降解途径。基于SE-UPLC的结果，如表2所示，当在组氨酸缓冲液中pH5.5至6.5之间或在乙酸盐缓冲液中pH 4.5至5.5之间配制mAb1时，观察到最低的HMW物质形成率和最低的单体损失率。CEX-UPLC分析还表明，如表2所示，当在组氨酸缓冲液中pH 5.5和6.5之间或在乙酸盐缓冲液中pH 4.5和5.5之间配制mAb1时，电荷变体谱最稳定。相对于起始材料，在45℃下孵育mAb128天后，通过CEX-UPLC分析观察到总酸性物质的相对量减少，同时主要电荷变体峰增加。
分离出一个单独的峰，其包含在CEX-UPLC色谱法图中观察到的大约50％的总酸性电荷变体。进一步的分析鉴定了该峰中的主要组分为mAb1蛋白，其含有双特异性抗体的MUC16结合臂的CDR3内的重链(HC)Lys98的糖基化(糖基化在下一段中详细讨论)。在与mAb1制剂开发相关的初始活动中，主要电荷变体的稳定性、总酸性物质、总碱性物质和分子的糖基化形式均受到监控。组氨酸缓冲液(pH 6.0)被选择用于临床上可行的制剂，因为在该缓冲液和pH中HMW物质形成率、单体损失率和电荷变体形成率最小。
通过CEX-UPLC分析观察到具体的mAb1衍生的酸性峰，包含大约50％的总mAb1衍生的酸性电荷变体。通过CEX-UPLC检测到的该峰面积在45℃下孵育28天后降低。该峰被鉴定为在双特异性抗体的MUC16结合臂的CDR3内的HC Lys98处含有糖基化的mAb1变体。随着mAb1的糖基化形式的水平的降低，通过生物测定观察到效力的增加(见图1)。尽管Lys98脱糖基反应在溶液中容易发生，但当制剂在5°℃下储存至少12个月时，冻干状态下的糖基化水平保持不变。此外，当冻干制剂在5℃下储存长达12个月时，效力保持不变。因此，选择冻干制剂作为mAb1的制剂。
表面活性剂/有机助溶剂选择
在液体制剂中检测表面活性剂聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80对5mg/mL mAb1的搅拌应激稳定性和热稳定性的影响(在含有表面活性剂的制剂中存在10％蔗糖)。测试了浓度为0–0.1％(w/v)的聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80稳定mAb1的能力(参见下表3和4)。如表3所示，当聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80以0.01％或更高的水平存在时，它们都能够稳定mAb1以对抗搅拌应激。当制剂中不包括表面活性剂时，观察到HMW物质增加了1.9％。当制剂中包括的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80≥0.01％时，未观察到HMW物质的增加。
选择浓度为0.05％的聚山梨醇酯20和0.05％的聚山梨醇酯80来检测热应激对mAb1稳定性的影响。在45℃下孵育28天后，与含有0.05％聚山梨醇酯80的制剂相比，观察到含有0.05％聚山梨醇酯20的制剂的HMW物质少约0.5％，而mAb1单体多1.6％，如表4所示。此外，在0.05％聚山梨醇酯20的存在下，mAb1表现出改善的稳定性谱，如在45℃下孵育28天后通过CEX-UPLC分析所确定的。相对于在0.05％聚山梨醇酯80存在下配制的mAb1(见表4)，在0.05％聚山梨醇酯20存在下的mAb1显示出(1)酸性物质的形成降低了约5％，(2)主要电荷变体形式的损失降低了约6％，以及(3)糖基化物质水平的变化大致相当。选择0.05％聚山梨醇酯20作为mAb1药品制剂的表面活性剂，因为它能充分稳定蛋白质以抵抗搅拌应激。
热稳定剂/防冻剂
稳定剂(诸如蔗糖)有时可以添加到液体和冻干的抗体制剂中，以增加热稳定性和蛋白质对冷冻/解冻应激的稳定性。要求在mAb1制剂中包含蔗糖，以稳定mAb1对冷冻/解冻应激的反应。在没有蔗糖的情况下，在mAb1经历四次冷冻和解冻循环后，HMW物质的水平增加了0.4％(见表5)。向制剂中添加10％蔗糖可将mAb1原料药稳定至四次冷冻/解冻循环(见表5)。
蔗糖也是冻干过程中稳定mAb1所必需的防冻剂。冻干的mAb1制剂重构后，在没有蔗糖的情况下，HMW物质的相对量增加了0.2％，但是当制剂含有10％蔗糖时，没有表现出明显的变化，如表6所示。
当冻干的mAb1在不存在蔗糖的情况下在50℃下孵育28天时，通过SE-UPLC确定，HMW物质的水平增加了5.9％，单体的水平降低了7.1％(见表7)。此外，在没有蔗糖的情况下，在50℃下孵育mAb1后，如通过CEX-UPLC确定的，酸性物质的水平下降了13.8％，碱性物质的水平上升了14.3％，糖基化物质的水平下降了14.7％(见表7)。然而，在10％蔗糖存在下，没有观察到分子量变体或电荷变体水平的明显变化，如表7所示。
10％的蔗糖对冻干过程中的mAb1的冷冻/解冻稳定性、热稳定性和稳定性具有积极影响。在冻干过程中，10％的蔗糖也用作填充剂。因此，选择10％蔗糖作为开发冻干mAb1制剂的稳定剂。
所选制剂组分的汇总
mAb1在pH 6.0的10mM组氨酸、0.050％聚山梨醇酯20和10％蔗糖存在下配制时表现出最大的稳定性。在mAb1液体制剂的开发过程中鉴定的主要降解途径是HMW物质和电荷变体的形成。特别感兴趣的电荷变体是HC-CDR3-Lys98的糖基化。已经证明，在应激条件和实时储存条件下孵育冻干的mAb1后，糖基化mAb1的水平没有变化。在液体制剂开发和冻干可行性研究中获得的信息构成了开发适用于临床应用的冻干药品制剂的基础。为了能够将冻干药品重构为用于IV施用的2mg/mL mAb1的浓度，开发了含有2mg/mL mAB1、10mM组氨酸pH 6.0、10％(w/v)蔗糖和0.05％(w/v)聚山梨醇酯20的调配原料药。
表2：缓冲液和pH值对2mg/mL mAb1在45℃下孵育28天的稳定性的影响
a报告为相对于起始原料的纯度变化。在所有制剂中，起始材料(未孵育)含有≥97.8％的天然峰(通过SE-UPLC)和≥42.6％的主峰(通过CEX-UPLC)。
b样品是混浊的，没有可见的颗粒。
c由于广泛降解而未确定CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；LMW，低分子量；ND，未确定；OD，光密度；RP，反相；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表3：搅拌(120分钟涡旋)后表面活性剂浓度对5mg/mL mAb1稳定性的影响
a报告为相对于起始材料的纯度变化；在所有制剂中，起始材料(未孵育)含有≥97.7％的天然峰(通过SE-UPLC)和≥46.8％的主峰(通过CEX-UPLC)。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；HMW，高分子量；LMW，低分子量；OD，光密度；RP，反相；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表4：聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80浓度的评估：当在45℃下孵育28天时，表面活性剂浓度对5mg/mL mAb1稳定性的影响
a报告为相对于起始材料的纯度变化；在所有制剂中，起始材料(未孵育)含有≥97.6％的天然峰(通过SE-UPLC)和≥46.0％的主峰(通过CEX-UPLC)。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；HMW，高分子量；LMW，低分子量；OD，光密度；RP，反相；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表5：10％蔗糖在四次冷冻和解冻循环后对5mg/mL mAb1稳定性的影响
a在最初的制剂开发中，使用的pH值为5.5。直到选择了初始表面活性剂后，pH才被优化。
b报告为相对于起始材料的纯度变化；在所有制剂中，起始材料(未孵育)含有≥97.4％的天然峰(通过SE-UPLC)和≥42.8％的主峰(通过CEX-UPLC)。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；HMW，高分子量；LMW，低分子量；OD，光密度；RP，反相；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表6：通过添加10％蔗糖在冻干过程中稳定mAb1
(冻干完成后，立即重构和分析mAb1)
c报告为相对于起始材料的纯度变化；在两种制剂中，起始材料(无冻干)含有≥98.7％的天然峰(通过SE-UPLC)和≥45.1％的主峰(通过CEX-UPLC)。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；HMW，高分子量；LMW，低分子量；OD，光密度；RP，反相；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表7：10％蔗糖的存在对在50℃孵育28天的冻干mAb1 DP的稳定性的影响
a报告为相对于起始材料的纯度变化；在两种制剂中，起始材料(无冻干)含有≥98.7％的天然峰(通过SE-UPLC)和≥45.1％的主峰(通过CEX-UPLC)。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；HMW，高分子量；LMW，低分子量；OD，光密度；RP，反相；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
实施例2：制剂的储存和应激稳定性
对mAb1药品的液体、冻干和重构制剂的储存、加速稳定性和应激稳定性(搅动)进行了评估研究。
对mAb1冻干药品的分析结果表明，当在5℃下储存至少36个月时，mAb1药品在物理和化学上是稳定的(参见表8、10和12)。在任何监测的属性中，没有检测到物理或化学稳定性的明显变化。表9、11和13提供了在加速条件下孵育后mAb1冻干药品的分析结果。在37℃下孵育3个月后，在任何监测的属性中，没有检测到mAb1的物理或化学稳定性的明显变化。类似地，在25℃/60％相对湿度(RH)下孵育6个月后，在任何监测的属性中，没有检测到物理或化学稳定性的明显变化。在50℃下孵育3个月后，观察到HMW物质(0.3％)和碱性物质(通过CEX-UPLC得到7.6％和通过icIEF得到4.0％)略有增加。mAb1保持效力，如在加速条件下孵育后通过生物测定分析确定的。
表8：研究储存在5°℃下的mAb1冻干药品的稳定性
aCEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MFI，微流成像TM；NR，不需要；OD，光密度；RP，反相；SDS，十二烷基硫酸钠；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
b这些样品的实际储存时间为4个月
c样品用无菌WFI重构至2mg/mL mAb1
表9：研究储存在加速条件下的mAb1冻干药品的稳定性
a实际储存时间为4个月
b样品用无菌WFI重构至2mg/mL mAb1
CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MFI，微流成像；NR，不需要；OD，光密度；RP，反相；SDS，十二烷基硫酸钠；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表10：研究储存在5℃下的mAb1冻干药品的稳定性
aCEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MFI，微流成像TM；NR，不需要；OD，光密度；RP，反相；SDS，十二烷基硫酸钠；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
b样品用无菌WFI重构至2mg/mL mAb1
表11：研究储存在加速条件下的mAb1冻干药品的稳定性
a样品用无菌WFI重构至2mg/mL mAb1
CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MFI，微流成像TM；NR，不需要；OD，光密度；RP，反相；SDS，十二烷基硫酸钠；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表12：研究储存在5°℃下的mAb1 50mg冻干药品的稳定性
aCEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MFI，微流成像TM；NA，不可用；NR，不需要；OD，光密度；RP，反相；SDS，十二烷基硫酸钠；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
b由于仪器故障和备份样品不足，36个月的MFI数据不可用。
c样品用无菌WFI重构至20mg/mL mAb1
表13：研究储存在加速条件下的mAb1 50mg冻干药品的稳定性
aCEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MFI，微流成像；NR，不需要；OD，光密度；RP，反相；SDS，十二烷基硫酸钠；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
b样品用无菌WFI重构至20mg/mL mAb1
还对重构的mAb1药品进行了另外的稳定性研究，以评估重构药品在25℃下孵育24小时以及在应激(搅动)条件下的稳定性。用2.3mL WFI将冻干药品(5mL 1型玻璃瓶中的2.5mL调配原料药)重构至2mg/mL mAb1或20mg/ml mAb1(最终体积为2.5mL)。这些稳定性研究的结果显示在下表14和15中。当在25℃下孵育24小时时，发现2mg/mL mAb1和20mg/mlmAb1的重构mAb1药品溶液在物理和化学上是稳定的。在任何监测的属性中，没有检测到物理或化学稳定性的明显变化。这些数据表明，重构药品在室温下稳定。当搅拌(在环境温度下涡旋)60分钟时，还发现2mg/mL mAb1和20mg/ml mAb1的重构mAb1药品溶液在物理和化学上是稳定的。在任何监测的属性中，没有检测到物理或化学稳定性的明显变化。
表14：研究用于IV施用的mAb1重构药品的稳定性
CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MFI，微流成像TM；NR，不需要；OD，光密度；RP，反相；SDS，十二烷基硫酸钠；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表15：研究用于IV施用的mAb1重构的20mg/mL药品的稳定性
CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MFI，微流成像TM；NR，不需要；OD，光密度；RP，反相；SDS，十二烷基硫酸钠；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
mAb1药品储存和应激稳定性研究的结果表明，mAb1是稳定的。mAb1制剂可以承受室温下的短时间暴露，而不会损害物理或化学稳定性。当重构到2mg/mL或20mg/ml的浓度时，mAb1制剂也是稳定的。将重构的mAb1药品在25℃下暴露长达24小时不会损害蛋白质的完整性，也不会影响重构药品的搅拌。
下表16和17显示了mAb1药品的重构体积。
表16：用于IV施用而重构的5mg/ml mAb1药品的重构体积、过量灌装体积和可抽取体积
制剂组分 用于IV施用的重构
FDS中的mAb1浓度(预冻干) 2mg/mL
每瓶蛋白质含量 5mg
重构DP中的mAb1浓度 2mg/mL
灌装体积 2.5mL
用于重构的WFI体积 2.3mL
最终重构体积 2.5mL
过量灌装体积 0.5mL
可抽取体积 2.0mL
DP，药品；FDS，调配原料药；IV，静脉；WFI，注射用水
表17：用于IV施用而重构的50mg/mL mAb1 DP的重构体积、过量灌装体积和可抽取体积
制剂组分 用于IV施用的重构
FDS中的mAb1浓度(预冻干) 20mg/mL
每瓶蛋白质含量 50mg
重构DP中的mAb1浓度 20mg/mL
目标灌装体积 2.5mL
用于重构的WFI体积 2.3mL
最终重构体积 2.5mL
过量灌装体积 0.5mL
可抽取体积 2.0mL
DP，药品；FDS，调配原料药；IV，静脉；WFI，注射用水
进行了稳定性研究，以确定mAb1原料药(≥180mg/ml mAb1、30mM乙酸盐、5％w/v蔗糖pH 5.0)和调配原料药(50mg/ml mAb1、30mM乙酸盐、10％w/v蔗糖、0.2％w/v聚山梨醇酯20pH 5.0)的长期储存、加速稳定性(储存条件以上的温度)和应激稳定性(40℃/75％RH，搅拌、冷冻和解冻)，如以下更全面的讨论。
在-80℃和-30℃下储存长达24个月时，未检测到mAb1原料药的物理或化学稳定性发生明显变化(见表18和19)。这些结果表明，当在储存条件下冷冻储存时，mAb1原料药至少稳定24个月。加速稳定性研究的结果如表20至22所示。在-20℃温度下孵育长达6个月后，在任何监测的属性中，未观察到明显变化。在5℃和25℃/60％RH下孵育长达6个月后，通过SoloVPE观察到蛋白质浓度增加，这可能是由于样品蒸发。在5℃和25℃/60％RH下孵育长达6个月后，通过SE-UPLC和非还原型MCE观察到HMW物质的增加。在5℃和25℃/60％RH下孵育6个月后，通过CEX-UPLC观察到区域1(酸性物质)降低，同时区域2(主峰)增加，这是因为MUC16臂的HC-CDR3-Lys98发生了去糖基化。在25℃/60％RH下孵育6个月后，通过iCIEF观察到区域1(酸性物质)增加，同时区域2(主峰)降低，这可能是由于脱酰胺作用。这些结果表明，mAb1原料药可以在-20℃下孵育至少6个月，而不会损害蛋白质的物理或化学稳定性。应激稳定性研究的结果呈现于表23、24和17中。当搅拌(涡旋)10分钟或暴露于4次冷冻/解冻循环时，mAb1原料药在物理和化学上是稳定的。在40℃/75％RH下孵育长达3个月后，通过SoloVPE观察到蛋白质浓度增加，这可能是由于样品蒸发。在40℃/75％RH下孵育3个月后，观察到颜色强度增加。在40℃/75％RH下孵育长达3个月后，通过SE-UPLC和MCE观察到HMW和LMW物质的增加。在40℃/75％RH下孵育后，通过CEX-UPLC观察到区域1降低，同时区域2增加，这是因为MUC16臂的HC-CDR3-Lys98发生了去糖基化。在40℃/75％RH下孵育3个月后，通过CEX-UPLC观察到区域3增加，同时区域2降低。区域3的增加是由于CEX-UPLC所需的高盐洗脱步骤中碱性峰的增加。加速和应激条件下的结果表明，HMW、LMW和电荷变体是mAb1原料药的主要降解途径。
表18：mAb1原料药在-80℃下的稳定性
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY2，颜色强度不大于参考溶液BY2；Not>BY3，颜色强度不大于参考溶液BY3；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；NR，不需要；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表19：mAb1原料药在-30℃下的稳定性
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY2，颜色强度不大于参考溶液BY2；Not>BY3，颜色强度不大于参考溶液BY3；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；NR，不需要；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表20：mAb1原料药储存于-20°℃下的稳定性
/>
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY3，颜色强度不大于参考溶液BY3；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表21：储存在5°℃的mAb1原料药的稳定性
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY3，颜色强度不大于参考溶液BY3；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表22：储存在25℃/60％RH下的mAb1原料药的稳定性
/>
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY2，颜色强度不大于参考溶液BY2；Not>BY3，颜色强度不大于参考溶液BY3；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；RH，相对湿度；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表23：储存在40℃/75％RH下的mAb1原料药的稳定性
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY1，颜色强度不大于参考溶液BY1；Not>BY2，颜色强度不大于参考溶液BY2；Not>BY3，颜色强度不大于参考溶液BY3；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；RH，相对湿度；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表24：mAb1原料药的稳定性——搅拌和冷冻/融化的影响
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY2，颜色强度不大于参考溶液BY2；Not>BY3，颜色强度不大于参考溶液BY3；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；NR，不需要；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
在-80℃和-30℃下储存长达24个月时，未检测到mAb1调配原料药的物理或化学稳定性发生明显变化(见表25和26)。这些结果表明，当在储存条件下冷冻储存时，mAb1调配原料药至少稳定24个月。加速稳定性研究的结果见表27至29。在-20℃或5℃下孵育mAb1调配原料药长达6个月后，在监测的属性中，未观察到明显变化。在25℃/60％RH下孵育长达6个月后，通过SoloVPE观察到蛋白质浓度增加，这可能是由于样品蒸发。在5℃和25℃/60％RH下孵育长达6个月后，通过SE-UPLC和非还原型MCE观察到HMW物质的增加。在25℃/60％RH下孵育6个月后，通过CEX-UPLC观察到区域1(酸性物质)降低，同时区域2(主峰)增加，这是因为MUC16臂的HC-CDR3-Lys98发生了去糖基化。在25℃/60％RH下孵育6个月后，通过iCIEF观察到区域1(酸性物质)增加，同时区域2(主峰)减少，这可能是由于脱酰胺作用。这些结果表明，mAb1调配原料药可以在-20℃下孵育至少6个月，在5℃下孵育3个月，而不会损害蛋白质的物理或化学稳定性。mAb1调配原料药还可以承受温度25℃/60％RH的短时间暴露。应激稳定性研究的结果呈现于表30和31中。当搅拌(涡旋)长达120分钟或经历多达四次冷冻和解冻循环时(在经历4次冷冻/解冻循环后，MFI观察到颗粒有少量增加)，mAb1调配原料药在物理和化学上是稳定的。在40℃/75％RH下孵育长达3个月后，通过SoloVPE观察到蛋白质浓度增加，这可能是由于样品蒸发。在40℃/75％RH下孵育长达3个月后，通过SE-UPLC和MCE观察到HMW和LMW物质的增加。在40℃/75％RH下孵育后，通过CEX-UPLC观察到区域1降低，同时区域2增加，这是因为MUC16臂的HC-CDR3-Lys98发生了去糖基化。在40℃/75％RH下孵育2个月后，区域1降低，同时区域2增加。然而，在三个月的时间点之后，趋势逆转，在区域1和区域3有明显的增加，同时在区域2有降低。区域1的增加可能是由于天冬酰胺或谷氨酰胺的竞争脱酰胺作用，而区域3的增加是由于在高盐洗脱步骤中洗脱的碱性峰增加。加速和应激条件下的结果表明，HMW、LMW和电荷变体是mAb1调配原料药的主要降解途径。经过4次冷冻和解冻循环后，通过MFI观察到2-10μm颗粒少量增加。
表25：mAb1调配原料药在-80℃下的稳定性
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY4，颜色强度不大于参考溶液BY4；Not>BY5，颜色强度不大于参考溶液BY5；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；NR，不需要；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表26：mAb1调配原料药在-30℃下的稳定性
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY4，颜色强度不大于参考溶液BY4；Not>BY5，颜色强度不大于参考溶液BY5；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；NR，不需要；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表27：储存在-20°℃的mAb1调配原料药的稳定性
/>
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY4，颜色强度不大于参考溶液BY4；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表28：储存在5°℃的mAb1调配原料药的稳定性
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY4，颜色强度不大于参考溶液BY4；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表29：储存在25°℃/60％RH下的mAb1调配原料药的稳定性
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY4，颜色强度不大于参考溶液BY4；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；RH，相对湿度；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表30：储存在40°℃/75％RH下的mAb1调配原料药的稳定性
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY4，颜色强度不大于参考溶液BY4；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；Not>II，浊度不大于参考悬浮液II；RH，相对湿度；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
表31：mAb1调配原料药的稳定性
搅拌和冷冻/解冻的影响
CEX，阳离子交换；HDPE，高密度聚乙烯；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；Not>BY4，颜色强度不大于参考溶液BY4；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；NR，不需要；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法
已经进行了稳定性研究，以评估液体mAb1药品的储存和加速稳定性。用于储存和加速稳定性研究的液体药品是通过在6R ISO 1型玻璃小瓶中灌装2.5mL调配原料药制成的。液体药物产品在储存、加速和应激条件下孵育。当在5℃下储存长达12或24个月时，未检测到mAb1液体药品的物理或化学稳定性发生明显变化(见表32和33)。这些结果表明，mAb1液体药品在储存条件下稳定持续至少12或24个月。加速稳定性研究的结果如表34和表35所示。在25℃/60％RH下储存长达6个月时，通过CEX-UPLC观察到区域1降低，同时区域2增加，这是因为MUC16臂在HC-CDR3-Lys98发生了去糖基化。在25℃/60％RH下孵育长达6个月之后，通过iCIEF观察到区域1增加，同时区域2减少。在其他监测属性中，未观察到明显变化。应激稳定性研究的结果如表34至表37所示。当搅拌(涡旋)120分钟时，mAb1液体药品在物理和化学上是稳定的。在40℃/75％RH下孵育3个月后，通过SE-UPLC观察到HMW和LMW物质增加。在40℃/75％RH下孵育3个月后，通过还原和非还原型MCE观察到LMW物质的增加。由于每种测定的不同灵敏度，通过CEX-UPLC和iCIEF观察到电荷变化的不同趋势。在40℃/75％RH下孵育长达3个月后，通过iCIEF观察到区域1增加，同时区域2降低，这可能是由于天冬酰胺或谷氨酰胺的脱酰胺作用。在40℃/75％RH下孵育长达2个月后，通过CEX-UPLC观察到区域1降低，同时区域2增加。通过CEX-UPLC在3个月的时间点观察到，区域1明显增加，同时区域2降低，可能是由于竞争性脱酰胺反应。在40℃/75％RH下孵育时，通过iCIEF在3个月的时间点观察到区域3降低。经过4次冷冻和解冻循环后，通过MFI观察到2-10um颗粒的增加。加速和应激条件下的结果表明，HMW、LMW和电荷变体是mAb1液体药品的主要降解途径。
表32：5.0mg/ml mAb1液体药品在5℃下的稳定性
CEX，阳离子交换；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MP，主峰；Not>BY7，颜色强度不大于参考溶液BY7；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；NR，不需要；Ph.Eur.，欧洲药典；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法；USP，美国药典
表33：50.0mg/ml mAb1液体药品在5℃下的稳定性
CEX，阳离子交换；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MP，主峰；Not>BY5，颜色强度不大于参考溶液BY5；Not>III，浊度不大于参考悬浮液III；NR，不需要；Ph.Eur.，欧洲药典；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法；USP，美国药典
表34：储存在25℃/60％RH和40°℃/75％RH的5.0mg/ml mAb1液体药品的稳定性
CEX，阳离子交换；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MP，主峰；Not>BY7，颜色强度不大于参考溶液BY7；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；Not>II，浊度不大于参考悬浮液II；NR，不需要；Ph.Eur.，欧洲药典；RH，相对湿度；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法；USP，美国药典
表35：在25°℃/60％RH和40°℃/75％RH下储存的50.0mg/ml mAb1液体药品的稳定性
/>
CEX，阳离子交换；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MP，主峰；Not>BY4，颜色强度不大于参考溶液BY4；Not>BY5，颜色强度不大于参考溶液BY5；Not>III，浊度不大于参考悬浮液III；NR，不需要；Ph.Eur.，欧洲药典；RH，相对湿度；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法；USP，美国药典
表36：5.0mg/nl mAb1液体药品的稳定性搅拌和冷冻/解冻的影响
/>
CEX，阳离子交换；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MP，主峰；Not>BY7，颜色强度不大于参考溶液BY7；Not>I，浊度不大于参考悬浮液I；NR，不需要；Ph.Eur.，欧洲药典；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法；USP，美国药典
表37：50.0mg/nl mAb1液体药品的稳定性搅拌和冷冻/解冻的影响
CEX，阳离子交换；HMW，高分子量；LEFVP，基本上不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MCE，微芯片毛细管电泳；MP，主峰；Not>BY5，颜色强度不大于参考溶液BY5；Not>II，浊度不大于参考悬浮液II；Not>III，浊度不大于参考悬浮液III；NR，不需要；Ph.Eur.，欧洲药典；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法；USP，美国药典
实施例3：冻干周期开发
为临床生产开发的冻干工艺由以下组成：冷冻、一次干燥和二次干燥。冻干工艺是使用FTS LyoStarTMIII冻干机开发的，基于-31.2℃的部分冻干块坍塌温度，使用冻干显微镜对冷冻调配原料药进行测定。在初步干燥过程中，产品温度不超过部分冻干块坍塌温度，从而在冻干周期中保持冻干块的完整性。开发二次干燥工艺是为了确保药品具有低残留水分含量。
冻干周期大约需要63小时，以生产5ml 1型玻璃小瓶中的冻干mAb1药品，该玻璃小瓶含有2.5mL 2mg/mL mAb1调配原料药。冻干循环含有下表38所示的步骤。
表38：冻干循环
NA，不适用
实施例4：开发用于静脉施用和制剂稳定性的稳定液体抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体制剂
进行静脉内(IV)制剂的开发，包括包含5mg/ml的mAb1和50mg/ml的mAb1的制剂，以确定使MUC16结合臂中HCDR3-Lys98的糖基化变化最小化的pH，维持pH并克服制造过程中观察到的Donnan效应的合适的缓冲液和浓度，维持所需粘度和张力的浓度的合适的热稳定剂，以及在IV施用期间足以稀释同时维持稳定的液体制剂的浓度的合适的表面活性剂。
如本文讨论，MUC16结合臂的HC-CDR3-Lys98处的糖基化对效力具有直接影响。如通过生物测定测量的，去糖基化导致效力增加。影响mAb1脱糖率的主要制剂因素是pH。通过在三种不同的pH值：5.0、5.5和6.0下，在10mM组氨酸、10％(w/v)蔗糖和0.05％(w/v)聚山梨醇酯20中，将2mg/mL mAb1在5℃下孵育36个月或25℃下孵育2个月，研究了液体制剂中pH值对糖基化和高分子量(HMW)物质水平的影响(图2A-2D)。在这些条件下观察到的主要降解途径是通过CEX-UPLC检测到的HMW物质的形成和HC-CDR3-Lys98的去糖基化。随着mAb1制剂的pH值降低，形成HMW物质的水平和去糖基化速率降低。
由于组氨酸在pH 5.0时不是良好的缓冲液，所以选择乙酸钠作为mAb1液体制剂的缓冲液。通过在热应激下，在含有5％(w/v)蔗糖和五种不同pH值(4.8、5.0、5.2、5.5和5.7)的10mM乙酸盐中孵育50mg/mL mAb1来研究pH值的影响。在40°℃下孵育28天后，主要降解途径是HMW物质的形成和HC-CDR3-Lys98的去糖基化。与在组氨酸缓冲液中观察到的一致，在较低的pH值下，形成HMW物质的水平和去糖基化的速率降低(图3A-3B)。pH 5.0被选作生产稳定制剂的目标，该制剂的正常生产变化将保持在稳定mAb1所需的范围内。
在液体制剂中检测了乙酸盐浓度对pH 5.0的150mg/mL mAb1制剂稳定性的影响。在45°℃下将含有21至40mM范围的乙酸盐缓冲液的制剂孵育14天。较高的温度允许快速检测蛋白质降解。分析表明，HMW物质和电荷变体的形成是主要的降解途径。乙酸盐浓度的增加导致HMW物质的增加，基于该数据选择30mM。浓度为30mM的乙酸盐能够解决制造过程中观察到的Donnan效应。作为Donnan效应的结果，需要30mM乙酸盐来维持制剂pH在5.0。与具有更高浓度的乙酸盐的制剂相比，该乙酸盐浓度提供了在该应激条件下HMW物质形成方面的改善的稳定性(表39)。因此，选择30mM作为用于IV施用的mAb1液体制剂的乙酸盐浓度。
表39：150mg/mL mAb1在乙酸盐缓冲液pH 5.0中在45℃下孵育14天的稳定性
at＝0报告的结果代表本研究中所有样品的起始值的平均值
b如果样品清澈到略带乳白色，基本上不含可见颗粒，并且无色到淡黄色，则通过颜色和外观评估。
c与每种制剂的t＝0相比
CEX，阳离子交换；DS，原料药；HMW，高分子量；LMW，低分子量；OD，光密度；Ph.Eur，欧洲药典；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法；USP，美国药典
在冷冻/解冻和热应激下，在液体制剂(150mg/mL mAb1、30mM乙酸盐pH 5.0，含0％至13％[w/v]蔗糖)中检测蔗糖对mAb1稳定性的影响。较高的温度允许在这些应激下快速检测蛋白质降解。在冷冻/解冻应激下，HMW物质的形成是主要的降解途径(表40)。在45°℃热应激下，HMW和LMW物质的形成以及电荷变体的变化是主要的降解途径。具有较高蔗糖浓度(≥10％)的制剂通过降低HMW和LMW物质的水平以及HC-CDR3-Lys98的去糖基化速率提供了改善的稳定性(表41)。为了保持mAb1的所需粘度和张力，选择10％(w/v)的蔗糖作为用于IV施用的液体制剂的热稳定剂。
表40：在冷冻/解冻应激条件下，150mg/mL mAb1在具有不同浓度蔗糖(pH 5.0)的30mM乙酸盐缓冲液中的稳定性
at＝0报告的结果代表本研究中所有样品的起始值的平均值
b如果样品清澈到略带乳白色，基本上不含可见颗粒，并且无色到淡黄色，则通过颜色和外观评估。
c与每种制剂的t＝0相比
CEX，阳离子交换；DS，原料药；HMW，高分子量；LMW，低分子量；OD，光密度；Ph.Eur，欧洲药典；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法；USP，美国药典
表41：150mg/mL mAb1在含有不同浓度的蔗糖pH 5.0的30mM乙酸盐缓冲液中在45℃孵育14天的稳定性
a t＝0报告的结果代表本研究中所有样品的起始值的平均值
b如果样品清澈到略带乳白色，基本上不含可见颗粒，并且无色到淡黄色，则通过颜色和外观评估。
c与每种制剂的t＝0相比
CEX，阳离子交换；DS，原料药；HMW，高分子量；LMW，低分子量；OD，光密度；Ph.Eur，欧洲药典；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法；USP，美国药典
在mAb1制剂的初始开发过程中，证明了对表面活性剂的需求。当不存在表面活性剂时，当通过涡旋搅拌制剂时，观察到mAb1 HMW物质的增加。向搅拌应激中添加表面活性剂稳定的mAb1。在最初的开发中，选择聚山梨醇酯20作为表面活性剂，因为与聚山梨醇酯80相比，聚山梨醇酯20具有改善的热稳定性。旨在用于IV施用的mAb1制剂也需要制剂中的聚山梨醇酯20，以在稀释于0.9％氯化钠中用于IV施用时稳定mAb1。
在搅拌和热应激下，在液体制剂(50mg/mL mAb1、30mM乙酸盐、10％[w/v]蔗糖pH5.0，含有0至0.25％[w/v]聚山梨醇酯20)中检测聚山梨醇酯20对mAb1稳定性的影响。
在搅拌应激下，mAb1在所有测试的液体制剂中均稳定(表42)。在45℃热应激下，HMW物质和电荷变体的形成是主要的降解途径(表43)。增加聚山梨醇酯20的浓度对电荷变体的形成没有有意义的影响，然而，随着聚山梨醇酯20浓度的增加，观察到形成HMW物质的水平有所增加。由于这些mAb1制剂通过在0.9％氯化钠中稀释旨在用于IV递送，因此制剂将含有0.2％(w/v)的聚山梨醇酯20。0.2％聚山梨醇酯20稳定mAb1，并在稀释用于IV施用时提供足够的mAb1稳定性。
表42：50mg/mL mAb1在30mM乙酸盐缓冲液、10％(w/v)蔗糖pH 5.0和聚山梨醇酯20中的稳定性，通过涡旋搅拌
a t＝0报告的结果代表本研究中所有样品的起始值的平均值
b如果样品清澈到略带乳白色，基本上不含可见颗粒，并且无色到淡黄色，则通过颜色和外观评估。
c与每种制剂的t＝0相比
CEX，阳离子交换；DS，原料药；HMW，高分子量；LMW，低分子量；OD，光密度；Ph.Eur，欧洲药典；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法；USP，美国药典
表43：50mg/mL mAb1在30mM乙酸盐缓冲液、10％(w/v)蔗糖pH 5.0和聚山梨醇酯20中在45℃孵育14天的稳定性
at＝0报告的结果代表本研究中所有样品的起始值的平均值
b如果样品清澈到略带乳白色，基本上不含可见颗粒，并且无色到淡黄色，则通过颜色和外观评估。
c与每种制剂的t＝0相比
CEX，阳离子交换；DS，原料药；HMW，高分子量；LMW，低分子量；OD，光密度；Ph.Eur，欧洲药典；SE，尺寸排阻；UPLC，超高效液相色谱法；USP，美国药典
进行了长期、加速和应激稳定性研究，以验证液体制剂的稳定性。结果表明这些制剂提供了足够的稳定性。
实施例5：开发用于皮下施用和制剂稳定性的稳定液体抗MUC16 x抗CD3双特异性抗体制剂
开发皮下(SC)制剂，包括包含150mg/ml mAb1的制剂，以确定用于SC施用和稳定性的赋形剂和最大浓度。
确定了IV制剂(实施例4)的缓冲液、pH和表面活性剂参数，并将这些参数应用于皮下制剂。表面活性剂(聚山梨醇酯20)的浓度也在IV制剂开发过程中进行了表征，该数据用于选择适用于皮下制剂的表面活性剂浓度。在mAb1的皮下制剂开发过程中，缓冲液、pH和表面活性剂类型和浓度在以下水平保持恒定：
pH：5.0。为了最小化去糖基化率和HMW物质的形成
缓冲液：30mM乙酸钠。保持pH 5.0，即使在加工过程中观察到Donnan效应
表面活性剂：0.05％(w/v)聚山梨醇酯20。以平衡对搅拌应激的稳定性，同时最小化对热稳定性的影响
针对mAb1 SC制剂评估的其他因素包括：
mAb1浓度：评估范围为50-150mg/mL
o当在2℃-8℃下储存时，mAb1浓度达到所需的临床剂量，同时保持至少24个月的稳定性，并在20℃下保持低于20cP的粘度，目标渗透压为290-400mOsm/kg。
蔗糖浓度：评估范围为2％-10％
o蔗糖浓度提供足够的热稳定性，同时最小化对渗透压和粘度的影响
o需要至少2％(w/v)的蔗糖来稳定mAb1以抵抗冷冻/解冻应激
精氨酸浓度：评估范围为0-100mM
o评估精氨酸降低粘度的能力，并评估对稳定性和渗透压的影响
经评估用于SC施用的制剂如下表44所示。
表44：测试mAb1SC施用的制剂
粘度分析-图4显示了mAb1粘度与mAb1浓度、蔗糖浓度和精氨酸浓度的关系。从该研究中得到以下观察结果：(i)对粘度有贡献的主要因素是mAb1浓度。在50-150mg/mL的范围内，粘度从约2cP指数增加到约11cP(20℃时)；(ii)粘度对蔗糖的依赖性很小。在150mg/mL的mAb1浓度下，当蔗糖从2％(w/v)变化到10％(w/v)时，粘度从约11cP增加到13cP(在20℃下)；和(iii)精氨酸浓度对粘度的影响在数量级上类似于蔗糖，但是增加精氨酸会将粘度从约11cP降低到9cP(在20℃下)。
渗透压分析-图5显示了mAb1渗透压与mAb1浓度、蔗糖浓度和精氨酸浓度的关系。从该研究中得到以下观察结果：(i)在50-150mg/mL的范围内，mAb1浓度对渗透压的贡献可以忽略不计；(ii)造成渗透压的主要因素是蔗糖。在150mg/mL mAb1浓度下，当蔗糖从2％(w/v)变化到10％(w/v)时，渗透压从约90mOsm/kg增加到约410mOsm/kg；和(iii)增加精氨酸浓度也导致渗透压增加。在150mg/mL mAb1时，将精氨酸从0mM增加到100mM会将渗透压从约90mOsm/kg增加到约300mOsm/kg。
稳定性分析-图6显示了mAb1的稳定性与mAb1浓度、蔗糖浓度和精氨酸浓度的关系。在这项研究中，评估了25℃/60％RH和40℃/75％RH下的HMW物质形成。此外，在相同条件下评估酸性物质的损失和糖基化物质的损失。观察到以下结果：(i)在25℃/60％RH和40℃/75％RH下，蔗糖浓度的增加导致HMW形成速率的降低；(ii)增加精氨酸浓度导致在25℃/60％RH下HMW形成速率降低，但是在40℃/75％RH下HMW形成速率增加；(iii)在25℃/60％RH下，增加蔗糖浓度导致酸性物质和糖基化物质形成的速率降低。(酸性物质和糖基化物质会随着时间的推移而降低，因此负速率越小意味着随着时间的推移降解越少)；和(iv)在25℃/60％RH下，增加精氨酸浓度导致糖基化物质形成速率降低。
基于先前的开发研究(例如实施例1和2)和本研究，选择了两种先导制剂进行进一步的稳定性、粘度和渗透压评估。下面的表45显示了两种先导制剂和各自的粘度和渗透压。两种制剂在150mg/mL的mAb1浓度下都满足粘度和渗透压目标。当在40℃/75％RH下孵育3个月、在25℃/60％RH下孵育6个月或在2℃-8℃下孵育6个月时，两种制剂显示出相当的稳定性(图7A和7B)。这两种制剂在HMW物质和糖基化物质方面显示出相当的变化。
表45：示例性mAb1 SC制剂
基于这些数据，两种制剂具有可比性。没有选择精氨酸作为皮下制剂中的赋形剂，因为它对稳定性或粘度的改善很小，但会导致渗透压的增加。因此，优选的示例性皮下制剂是：150mg/mL的mAb1；30mM乙酸盐pH 5.0；8％w/v蔗糖；和0.05％w/v聚山梨醇酯20。
还启动了稳定性研究，以评估mAb1制剂的储存、应激和加速稳定性。稳定性研究包括储存在Schott 6R硼硅酸盐玻璃小瓶中的皮下(SC)制剂(在30mM乙酸钠、8％(w/v)蔗糖、0.05％(w/v)聚山梨醇酯20中的150mg/mL mAb1，pH 5.0)。液体制剂在储存、应激和加速条件下孵育。选择应激和加速条件是为了模拟药品在生产和处理过程中超出的条件，并阐明mAb1的降解途径。还评估了在包括搅拌和冷冻/解冻的另外的应激下的稳定性。
当在5℃下储存至少6个月时，评估制剂中的抗体(mAb1)在物理和化学上是稳定的(表46)。在6R小瓶中，在5℃下，在任何监测的属性中，没有检测到稳定性的明显变化。表47提供了在加速和应激条件下孵育后mAb1制剂的分析结果。在25℃/60％RH下孵育6个月后，通过SE-UPLC观察到HMW物质增加了1.7％。由于每种测定的不同灵敏度，通过CEX-UPLC和iCIEF观察到电荷变化的不同趋势。通过iCIEF观察到区域1增加，同时区域2降低。在25℃/60％RH下储存长达6个月时，通过CEX-UPLC观察到区域1降低，同时区域2增加，这是因为MUC16臂的HC-CDR3-Lys98发生了去糖基化(去糖基化也发生在热应激条件下)。加速条件下的结果表明，液体制剂在6R小瓶中的热应激下是稳定的。
在40℃/75％RH下孵育3个月后，通过SE-UPLC观察到HMW和LMW物质分别增加了15.9％和1.1％。由于每种测定的不同灵敏度，通过CEX-UPLC和iCIEF观察到电荷变化的不同趋势。在40℃/75％RH下孵育长达3个月后，通过iCIEF观察到区域1增加，同时区域2和3降低，这可能是由于天冬酰胺或谷氨酰胺的脱酰胺作用。在40℃/75％RH下孵育长达2个月后，由于MUC16臂的HC-CDR3-Lys98处的去糖基化(去糖基化也发生在加速应激条件下)，通过CEX-UPLC观察到区域1降低，同时区域2增加。通过CEX-UPLC在3个月的时间点观察到，区域1明显增加，同时区域2降低，可能是由于竞争性脱酰胺反应。通过CEX-UPLC在40℃/75％RH下3个月后观察到区域3中也有16.3％的增加。这种增加被确定为由mAb1的寡聚物质组成，主要包括四聚体、五聚体、六聚体和七聚体物质。在40℃/75％RH下孵育mAb1制剂的结果表明，HMW和LMW物质的形成以及电荷变体分布的变化是mAb1药品的主要降解途径。
当涡旋60或120分钟时，mAb1制剂在物理和化学上是稳定的(表48)。在任何监测的属性中，没有检测到物理或化学稳定性的明显变化。当经历4次冷冻和解冻循环时，mAb1制剂在物理和化学上也是稳定的(表48)。在任何监测的属性中，没有检测到物理或化学稳定性的明显变化。
表46：mAb1药品储存于5℃的稳定性
a.采用了FBP-015-FD FDG平台质量目标的标准，并对项目进行了具体调整。NR表示未在设定时间点进行测试。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LMW，低分子量；MFI，微流成像TM；MP，主峰；SE-UPLC，尺寸排阻超高效液相色谱法；NR，不需要；LEFVP，基本不含可见颗粒的液体。
表47：在25°℃/60％RH和40°℃下孵育的mAb1药品的稳定性
/>
NR表示未在设定时间点进行测试。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LMW，低分子量；MFI，微流成像TM；MP，主峰；SE-UPLC，尺寸排阻超高效液相色谱法；NR，不需要
表48：mAb1药品的稳定性—搅拌和冷冻/解冻的影响
/>
NR表示未在设定时间点进行测试。
DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；LMW，低分子量；MFI，微流成像TM；MP，主峰；SE-UPLC，尺寸排阻超高效液相色谱法；NR，不需要
启动了另外的稳定性研究，以确定150mg/ml抗体的mAb1制剂的长期储存、加速稳定性(储存条件以上的温度)和应激稳定性(40℃/75％RH，搅拌、冷冻和解冻)。将具有150mg/mL抗体的mAb1制剂灌装到5mL聚碳酸酯小瓶中，用于搅拌、冷冻/解冻、冷冻储存以及加速和应激储存条件。聚碳酸酯小瓶是GMP工厂生产的mAb1制剂(调配原料药)的代表性储存容器。测试的制剂在含有30mM乙酸钠pH 5.0、8％(w/v)蔗糖和0.05％(w/v)PS20的水性缓冲溶液中含有150mg/mL纯化的mAb1。
在-80℃和-30℃下储存长达6个月时，未检测到mAb1制剂的物理或化学稳定性发生明显变化(表49和表50)。这些结果表明，当在储存条件下冷冻储存时，mAb1(150mg/mL)至少稳定6个月。
加速稳定性研究的结果见表51A和51B。在-20℃下孵育mAb1制剂(150mg/mL抗体)长达6个月后，未观察到监测属性的明显变化。在25℃/60％RH下孵育6个月后，通过SoloVPE观察到蛋白质浓度增加，这可能是由于样品蒸发。在5℃和25℃/60％RH下孵育6个月后，通过SE-UPLC观察到HMW物质的增加。在25℃/60％RH下孵育6个月后，通过CEX-UPLC观察到区域1(酸性物质)降低，同时区域2(主峰)增加，这是因为MUC16臂的HC-CDR3-Lys98发生了去糖基化。在25℃/60％RH下孵育6个月后，通过iCIEF观察到区域1(酸性物质)增加，同时区域2(主峰)减少，这可能是由于脱酰胺作用。这些结果表明，mAb1(150mg/mL)制剂可以在-20℃下孵育至少6个月，在5℃下孵育3个月，而不会损害蛋白质的物理或化学稳定性。mAb1制剂还可以承受温度25℃/60％RH的短时间暴露。
应激稳定性研究的结果呈现于表51A和51B以及表52。在搅拌(涡旋)长达120分钟或经受多达四次冷冻和解冻循环时，mAb1(150mg/mL)制剂在物理和化学上是稳定的。在40℃/75％RH下孵育长达3个月后，通过SoloVPE观察到蛋白质浓度增加，这可能是由于样品蒸发。在40℃/75％RH下孵育长达3个月后，通过SE-UPLC观察到HMW和LMW物质增加。在40℃/75％RH下孵育后，通过CEX-UPLC观察到区域1降低，同时区域2增加，这是因为MUC16臂的HC-CDR3-Lys98发生了去糖基化。在40℃/75％RH下孵育2个月后，区域1降低，同时区域2增加。然而，在三个月的时间点之后，趋势逆转，在区域1和区域3有明显的增加，同时在区域2有降低。区域1的增加可能是由于天冬酰胺或谷氨酰胺的竞争脱酰胺作用，而区域3的增加被确定为由mAb1的寡聚物质组成，主要包括四聚体、五聚体、六聚体和七聚体物质。加速和应激条件下的结果表明，HMW、LMW和电荷变体是mAb1(150mg/mL)的主要降解途径。
表49：mAb1调配原料药在-80℃下的稳定性
a.采用了FBP-015-FD FDG平台质量目标的标准，并对项目进行了具体调整。无质量目标的测定结果报告的百分比仅供参考。灰色方框表示未在设定时间点进行测试。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LEFVP，基本不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MFI，微流成像TM；MP，主峰；SE-UPLC，尺寸排阻超高效液相色谱法。
表50：mAb1调配原料药在-30℃下的稳定性
a.采用了FBP-015-FD FDG平台质量目标的标准，并对项目进行了具体调整。无质量目标的测定结果报告的百分比仅供参考。灰色方框表示未在设定时间点进行测试。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LEFVP，基本不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MFI，微流成像TM；MP，主峰；SE-UPLC，尺寸排阻超高效液相色谱法。
表51A：在-20°℃、5°℃下孵育的mAb1调配原料药的稳定性
a采用了FBP-015-FD FDG平台质量目标的标准，并对项目进行了具体调整。无质量目标的测定结果报告的百分比仅供参考。灰色方框表示未在设定时间点进行测试。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LEFVP，基本不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MFI，微流成像TM；MP，主峰；SE-UPLC，尺寸排阻超高效液相色谱法。
表51B：在25°℃/60％RH和40°℃/75％RH下孵育的mAb1调配原料药的稳定性
a采用了FBP-015-FD FDG平台质量目标的标准，并对项目进行了具体调整。无质量目标的测定结果报告的百分比仅供参考。灰色方框表示未在设定时间点进行测试。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LEFVP，基本不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；MFI，微流成像TM；MP，主峰；SE-UPLC，尺寸排阻超高效液相色谱法。
表52：mAb1调配原料药的稳定性-搅拌和冷冻/解冻的影响
a采用了FBP-015-FD FDG平台质量目标的标准，并对项目进行了具体调整。无质量目标的测定结果报告的百分比仅供参考。灰色方框表示未在设定时间点进行测试。
CEX，阳离子交换；DS，原料药；FDG，制剂开发组；HMW，高分子量；iCIEF，成像毛细管等电聚焦；LEFVP，基本不含可见颗粒的液体；LMW，低分子量；微流成像TM；MP，主峰；SE-UPLC，尺寸排阻超高效液相色谱法。
本发明的范围不受本文所述的具体实施方案限制。事实上，除本文所述的那些之外，本发明的各种修改根据前文描述书对于本领域技术人员将变得显而易见。此类修改旨在落在所附权利要求书的范围内。
*******
序列表
<110> 瑞泽恩制药公司
<120> 含有抗MUC16 x 抗CD3双特异性抗体的稳定制剂
<130> 10820WO01
<150> 63/170,320
<151> 2021-04-02
<150> 63/313,927
<151> 2022-02-25
<160> 19
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Gly Arg Gly Ser Thr Ile Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Lys Asp Arg Gly Gly Tyr Ser Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 2
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Lys Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Tyr Gly Ser Gly Tyr Gly Lys Phe Tyr His Tyr Gly Leu Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 3
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 3
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 4
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 4
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Gly Arg Gly Ser Thr Ile Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Lys Asp Arg Gly Gly Tyr Ser Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 5
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 5
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Lys Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Tyr Gly Ser Gly Tyr Gly Lys Phe Tyr His Tyr Gly Leu Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 7
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 8
Ile Ser Gly Arg Gly Ser Thr Ile
1 5
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 9
Val Lys Asp Arg Gly Gly Tyr Ser Pro Tyr
1 5 10
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 10
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ser
1 5
<210> 11
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 11
Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Lys
1 5
<210> 12
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 12
Ala Lys Tyr Gly Ser Gly Tyr Gly Lys Phe Tyr His Tyr Gly Leu Asp
1 5 10 15
Val
<210> 13
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 13
Gln Ser Ile Ser Thr Tyr
1 5
<210> 14
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 14
Thr Ala Ser
1
<210> 15
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 15
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 16
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 16
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 17
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 17
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 18
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 18
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 19
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 19
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325

Claims (91)

1.一种稳定的液体药物制剂，其包含：
(a)双特异性抗体，其包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中所述第一抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，并且所述第二抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链CDR(A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3分别包含SEQ ID NO:7、8和9的氨基酸序列，A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3分别包含SEQ ID NO:10、11和12的氨基酸序列，并且LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含SEQ ID NO:13、14和15的氨基酸序列；
(b)包含乙酸钠的缓冲液；
(c)包含聚山梨醇酯的有机助溶剂；和
(d)包含糖的稳定剂；
其中所述制剂的pH为5.0±0.5。
2.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述抗体浓度为1mg/ml±0.1mg/ml至200mg/ml±20mg/ml。
3.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体浓度为5mg/ml±0.5mg/ml至50mg/ml±5mg/ml。
4.如权利要求3所述的药物制剂，其中所述抗体浓度为5mg/ml±0.5mg/ml。
5.如权利要求3所述的药物制剂，其中所述抗体浓度为50mg/ml±5mg/ml。
6.如权利要求1至5中任一项所述的药物制剂，其中所述组氨酸缓冲液浓度为10mM±1mM至50mM±5mM。
7.如权利要求6所述的药物制剂，其中所述乙酸盐缓冲液浓度为25mM±2.5mM至35mM±3.5mM。
8.如权利要求7所述的药物制剂，其中所述乙酸盐缓冲液浓度为30mM±3mM。
9.如权利要求1至8中任一项所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯浓度为0.01％±0.005％至0.5％±0.05％w/v。
10.如权利要求9所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯浓度为0.1％±0.05％至0.3％±0.03％w/v。
11.如权利要求9所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯浓度为0.2％±0.02％w/v。
12.如权利要求1至11中任一项所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。
13.如权利要求1到12中任一项所述的药物制剂，其中所述糖为蔗糖。
14.如权利要求13所述的药物制剂，其中所述蔗糖浓度为5％±1％至20％±4％w/v。
15.如权利要求14所述的药物制剂，其中所述蔗糖浓度为7％±0.5％至12％±0.5％w/v。
16.如权利要求15所述的药物制剂，其中所述蔗糖浓度为10％±1％w/v。
17.如权利要求1所述的药物制剂，其包含：
(a)5mg/ml±0.5mg/ml的抗体，
(b)25mM±2mM至35mM±2mM的乙酸盐缓冲液，
(c)0.1％±0.05％至0.3％±0.05％w/v的聚山梨醇酯，和
(d)5％±1％至15％±3％w/v的蔗糖，
pH为5.0±0.5。
18.如权利要求17所述的药物制剂，其包含：
(a)5mg/ml±0.5mg/ml的抗体，
(b)30mM±1mM的乙酸盐缓冲液，
(c)0.2％±0.02％w/v的聚山梨醇酯，和
(d)10％±1％w/v的蔗糖，
pH为5.0±0.3。
19.如权利要求1所述的药物制剂，其包含：
(a)50mg/ml±5mg/ml的抗体，
(b)25mM±2mM至35mM±2mM的乙酸盐缓冲液，
(c)0.1％±0.05％至0.3％±0.05％w/v的聚山梨醇酯，和
(d)5％±1％至15％±3％w/v的蔗糖，
pH为5.0±0.5。
20.如权利要求19所述的药物制剂，其包含：
(a)50mg/ml±0.5mg/ml的抗体，
(b)30mM±1mM的乙酸盐缓冲液，
(c)0.2％±0.02％w/v的聚山梨醇酯，和
(d)10％±1％w/v的蔗糖，
pH为5.0±0.3。
21.如权利要求17至20中任一项所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。
22.如权利要求1至21中任一项所述的药物制剂，其中通过SE-UPLC确定，在5℃下储存12个月或24个月后，所述制剂含有不超过2.5％的高分子量(HMW)物质。
23.如权利要求1至21中任一项所述的药物制剂，其中通过SE-UPLC确定，在25℃和60％相对湿度下储存6个月后，所述制剂含有不超过3.5％的高分子量(HMW)物质。
24.如权利要求1至21中任一项所述的药物制剂，其中通过SE-UPLC确定，在-30℃下储存12个月后，所述制剂含有不超过1.5％的高分子量(HMW)物质，或在-30℃下储存24个月后，所述制剂含有不超过2.0％的HMW物质。
25.如权利要求1至21中任一项所述的药物制剂，其中通过SE-UPLC确定，在-80℃下储存12个月后，所述制剂含有不超过1.5％的高分子量(HMW)物质，或在-30℃下储存24个月后，所述制剂含有不超过2.0％的HMW物质。
26.一种由冻干物重构的稳定的液体药物制剂，其包含：
(a)浓度为1mg/ml至30mg/ml的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中所述第一抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，所述第二抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链CDR(A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3分别包含SEQ ID NO:7、8和9的氨基酸序列，A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3分别包含SEQ ID NO:10、11和12的氨基酸序列，LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含SEQ ID NO:13、14和15的氨基酸序列；
(b)包含组氨酸的缓冲液；
(c)包含聚山梨醇酯的有机助溶剂；和
(d)包含糖的稳定剂；
其中所述制剂的pH为6.0±0.5。
27.如权利要求26所述的药物制剂，其中所述抗体浓度为2mg/ml±0.5mg/ml或20mg/ml±2mg/ml。
28.如权利要求27所述的药物制剂，其中所述组氨酸缓冲液浓度为5mM±1mM至15mM±1mM。
29.如权利要求28所述的药物制剂，其中所述组氨酸缓冲液浓度为10mM±1mM。
30.如权利要求26至29中任一项所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯浓度为0.01％至0.1％w/v。
31.如权利要求30所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯浓度为0.05％±0.01％w/v。
32.如权利要求26至31中任一项所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。
33.如权利要求26至32中任一项所述的药物制剂，其中所述糖为蔗糖。
34.如权利要求33所述的药物制剂，其中所述蔗糖浓度为8％±0.5％至12％±0.5％w/v。
35.如权利要求34所述的药物制剂，其中所述蔗糖浓度为10％±1％w/v。
36.如权利要求26至35中任一项所述的药物制剂，其中：通过SE-UPLC确定，(a)在5℃下储存12个月后、18个月后、24个月后或36个月后，至少95％的所述抗体具有天然构象；(b)在25℃和60％相对湿度下储存6个月后，至少95％的所述抗体具有天然构象；(c)在37℃下储存3个月后，至少95％的所述抗体具有天然构象；(d)在5℃下储存12个月后、18个月后、24个月后或36个月后，所述制剂含有不超过1％的高分子量(HMW)物质；(e)在25℃和60％相对湿度下储存6个月后，所述制剂含有不超过1％的HMW物质；或(f)在37℃下储存3个月后，所述制剂含有不超过1％的HMW物质。
37.一种稳定的液体药物制剂，其包含：
(a)浓度为100mg/ml至200mg/ml的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中所述第一抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补决定区(CDR)(A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，所述第二抗原结合结构域包含重链可变区(HCVR)中含有的三个重链CDR(A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3)和轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中A1-HCDR1、A1-HCDR2和A1-HCDR3分别包含SEQ ID NO:7、8和9的氨基酸序列，A2-HCDR1、A2-HCDR2和A2-HCDR3分别包含SEQ ID NO:10、11和12的氨基酸序列，LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含SEQ ID NO:13、14和15的氨基酸序列；
(b)包含乙酸盐的缓冲液；
(c)包含糖的稳定剂；和
(d)包含聚山梨醇酯的表面活性剂；
其中所述制剂的pH为5.0±0.5。
38.如权利要求37所述的药物制剂，其中所述抗体浓度为125mg/ml至175mg/ml。
39.如权利要求38所述的药物制剂，其中所述抗体浓度为150mg/ml±10mg/ml。
40.如权利要求37到39中任一项所述的药物制剂，其中所述糖为蔗糖。
41.如权利要求40所述的药物制剂，其中所述蔗糖浓度为4％至12％w/v。
42.如权利要求41所述的药物制剂，其中所述蔗糖浓度为8％w/v±1％w/v。
43.如权利要求37至42中任一项所述的药物制剂，其中所述乙酸盐缓冲液浓度为25mM到35mM。
44.如权利要求43所述的药物制剂，其中所述乙酸盐缓冲液浓度为30mM±1mM。
45.如权利要求37至44中任一项所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。
46.如权利要求45所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯20浓度为0.01％w/v至0.1％w/v。
47.如权利要求46所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯20浓度为0.05％w/v±0.01％w/v。
48.如权利要求37至47中任一项所述的药物制剂，其中：通过SE-UPLC确定，(a)在-30℃或-80℃下储存12个月后或24个月后，所述制剂含有不超过2.5％的高分子量(HMW)物质；(b)在5℃下储存6个月后，所述制剂含有不超过4％的HMW物质；或(c)在25℃和60％相对湿度下储存6个月后，所述制剂含有不超过6％的HMW物质。
49.如权利要求1至48中任一项所述的药物制剂，其中所述制剂含有不超过40％的糖基化物质变体，其中所述糖基化物质变体包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:4的残基98或SEQ IDNO:9的残基2处的糖基化。
50.如权利要求1到49中任一项所述的药物制剂，其中所述第一抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少90％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少90％同一性的LCVR，所述第二抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少90％同一性的LCVR。
51.如权利要求50所述的药物制剂，其中所述第一抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少95％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少95％同一性的LCVR，所述第二抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少95％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少95％同一性的LCVR。
52.如权利要求51所述的药物制剂，其中所述第一抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少99％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少99％同一性的LCVR，并且所述第二抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少99％同一性的HCVR和与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少99％同一性的LCVR。
53.如权利要求1至52中任一项所述的药物制剂，其中所述第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，所述第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR。
54.一种稳定的药物制剂，其包含：
(a)5mg/ml±0.5mg/ml的双特异性抗体，其包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中所述第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，所述第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；
(b)30mM±1mM乙酸钠缓冲液，pH 5.0±0.2，
(c)0.2％±0.02％w/v的聚山梨醇酯20，和
(d)10％±1％w/v蔗糖。
55.一种稳定的药物制剂，其包含：
(a)50mg/ml±5mg/ml的双特异性抗体，其包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中所述第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，所述第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；
(b)30mM±1mM乙酸钠缓冲液，pH 5.0±0.2，
(c)0.2％±0.02％w/v的聚山梨醇酯20，和
(d)10％±1％w/v蔗糖。
56.一种稳定的药物制剂，其包含：
(a)150mg/ml±15mg/ml的双特异性抗体，其包含特异性结合人MUC16的第一抗原结合结构域和特异性结合人CD3的第二抗原结合结构域，其中所述第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR，所述第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HCVR和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCVR；
(b)30mM±1mM乙酸钠缓冲液，pH 5.0±0.2，
(c)0.05％±0.01％w/v的聚山梨醇酯20，和
(d)8％±1％w/v蔗糖。
57.如权利要求50到56中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体包含分别附接到所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域中的每一个的HCVR的人IgG重链恒定区。
58.如权利要求57所述的药物制剂，其中所述重链恒定区属于同种型IgG1。
59.如权利要求57所述的药物制剂，其中所述重链恒定区属于同种型IgG4。
60.如权利要求57至59中任一项所述的药物制剂，其中附接于所述第一抗原结合结构域的HCVR的重链恒定区或附接于所述第二抗原结合结构域的HCVR的重链恒定区，但不是两者，含有氨基酸修饰，所述氨基酸修饰相对于未经所述修饰的相同同种型的重链而言降低了蛋白A的结合。
61.如权利要求60所述的药物制剂，其中所述修饰包括同种型IgG1或IgG4的重链中的H435R取代(EU编号)。
62.如权利要求60所述的药物制剂，其中所述修饰包括同种型IgG1或IgG4的重链中的H435R取代和Y436F取代(EU编号)。
63.如权利要求57至59中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO:18和SEQ ID NO:19。
64.如权利要求63所述的药物制剂，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的重链恒定区和含有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链恒定区。
65.如权利要求63所述的药物制剂，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链恒定区和含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链恒定区。
66.如权利要求50至56中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体包含含有所述第一抗原结合结构域的HCVR的第一重链和含有所述第二抗原结合结构域的HCVR的第二重链，其中所述第一重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的残基1-442，所述第二重链包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的残基1-449。
67.如权利要求66所述的药物制剂，其中所述抗体包含含有所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域的LCVR的共同轻链，其中所述共同轻链包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
68.如权利要求1到67中任一项所述的药物制剂，其中通过阳离子交换超高效液相色谱法(CEX-UPLC)和/或液相色谱-质谱法(LC-MS)确定，所述糖基化物质的百分比变化：(i)在5℃下储存6个月后不超过1.5％；(ii)在5℃下储存12个月后不超过3％；(iii)在-30℃下储存12个月后、18个月后或24个月后不超过1.5％；或在-80℃下储存12个月后、18个月后或24个月后不超过1％。
69.一种药物组合物，其中所述组合物包含如权利要求1至68中任一项所述的药物制剂，并且所述组合物包含在容器中。
70.如权利要求69所述的药物组合物，其中所述容器为小瓶。
71.如权利要求70所述的药物组合物，其中所述小瓶是2ml、5ml或10ml1型透明玻璃小瓶。
72.如权利要求69所述的药物组合物，其中所述容器是注射器。
73.如权利要求72所述的药物组合物，其中所述注射器是低钨玻璃。
74.如权利要求69所述的药物组合物，其中所述容器是预灌装注射器。
75.如权利要求69所述的药物组合物，其包含在自动注射器中。
76.一种试剂盒，其包含(i)含有包含权利要求1至68中任一项所述的药物制剂的组合物的容器，以及所述组合物的使用说明。
77.如权利要求76所述的试剂盒，其中所述容器是玻璃小瓶。
78.如权利要求76所述的试剂盒，其中所述容器是预灌装注射器。
79.如权利要求76所述的试剂盒，其中所述容器是自动注射器。
80.如权利要求76所述的试剂盒，其中所述说明书叙述所述组合物的皮下施用。
81.如权利要求76所述的试剂盒，其中所述说明书叙述所述组合物的静脉内施用。
82.一种包含如权利要求1至68中任一项所述的药物制剂的单位剂型，其中所述抗体以0.1mg至500mg的量存在。
83.如权利要求82所述的单位剂型，其中所述抗体以1mg至20mg的量存在。
84.如权利要求82所述的单位剂型，其中所述抗体以100mg至200mg的量存在。
85.如权利要求82所述的单位剂型，其为玻璃小瓶。
86.如权利要求82所述的单位剂型，其为预灌装注射器。
87.如权利要求82所述的单位剂型，其为自动注射器。
88.一种容器，其含有包含如权利要求1至68中任一项所述的药物制剂的组合物。
89.如权利要求88所述的容器，其为玻璃小瓶。
90.如权利要求88所述的容器，其为预灌装注射器。
91.如权利要求88所述的容器，其为自动注射器。
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