CN117247915A - 一种ω-胺转氨酶、重组菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物工程技术领域,具体涉及一种ω‑胺转氨酶、重组菌及其应用。所述的ω‑胺转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,核苷酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。所述重组菌是将包含有编码ω‑胺转氨酶的编码基因的重组表达质粒转入宿主大肠杆菌中,并经筛选得到的。本发明首次从人苍白杆菌Ochrobactrum anthropic ZJB‑061中克隆、鉴定了一种新型ω‑胺转氨酶基因,经验证发现该ω‑胺转氨酶可以改善转氨反应的不利平衡常数问题,在以2‑羰基‑4‑[羟基(甲基)膦酰基]丁酸为底物转氨反应制备L‑草铵膦等类似反应中该酶具有转化酮酸等副产物来推动反应平衡的巨大潜力。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域,具体涉及一种ω-胺转氨酶、重组菌及其应用。
背景技术
草铵膦(Phosphinothricin,PPT;化学名为2-氨基-4-[羟基(甲基)膦酰基]丁酸),是世界第二大转基因作物耐受除草剂,能通过抑制植物谷氨酰胺合成酶来发挥除草作用。草铵膦与草甘膦以及百草枯并称世界三大除草剂,目前百草枯因为剧毒已停产,草甘膦也因为长期使用而使植物产生抗性而导致市场逐渐萎缩,而草铵膦具有灭生性广、低毒且对环境友好等特点,具有良好的市场前景。
草铵膦有两种光学异构体,分别为L-草铵膦和D-草铵膦。但只有L-草铵膦具有植物毒性,其除草活性为普通市售外消旋DL-草铵膦的2倍,且在土壤中易分解,对人类和动物的毒性较小,除草谱广,对环境的破坏力小。如果草铵膦产品能以L型的纯光学异构体形式使用,可使草铵膦的使用量降低50%,这对于提高原子经济性、降低使用成本、减轻环境压力都具有重要意义。
目前制备光学纯L-草铵膦的方法主要有三种:化学合成法、手性拆分法以及生物催化法。
化学合成法从手性原料出发合成光学纯L-草铵膦,该方法工艺步骤多、收率低,所用不对称合成试剂大多比较昂贵,导致生产成本偏高,不利于大规模制备L-草铵膦。
手性拆分法是通过化学合成外消旋DL-草铵膦或其衍生物,再利用手性拆分试剂,进行D型和L型异构体的分离,从而制得光学纯的L-草铵膦。此工艺存在单次拆分收率低、工艺复杂的技术问题。
相比之下,生物催化法具有立体选择性严格、反应条件温和、收率高及产物易分离纯化等优点,是生产L-草铵膦的潜在优势方法。
在研究草铵膦在土壤微生物体内的代谢途径时就已经发现,L-草铵膦在转氨酶的作用下,发生转氨反应被分解成一种2-羰基-4-[羟基(甲基)膦酰基]丁酸(简称PPO)。转氨反应是一个可逆反应,PPO可在转氨酶的催化下通过转氨反应生成L-草铵膦。但是该生成L-草铵膦的转氨反应的缺陷在于不利的平衡常数,目前研究多集中于副产物的移除和分解。丙氨酸作为典型的氨基供体,脱氨基产物为丙酮酸,不仅对酶有较强的的抑制能力,也是限制平衡的关键因素之一。目前,通常用来移除丙酮酸的酶有乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸脱氢酶(AlaDH)、丙酮酸脱羧酶(PDC)、乙醇脱氢酶(ADH)以及偶联GDH或FDH等。
发明内容
在为解决上述技术问题,本发明提供了一种ω-胺转氨酶、重组菌及其应用。
本发明通过以下技术方案实现:
本发明的第一目的在于,提供一种ω-胺转氨酶,所述ω-胺转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的ω-胺转氨酶基因来源于人苍白杆菌Ochrobactrum anthropic ZJB-061(CN101063090A专利现有菌株,具体保藏单位为中国典型培养物保藏中心,地址为中国.武汉.武汉大学,邮编430072;保藏日期为2006年4月14日;保藏编号为CCTCC NO:M206039),将该菌在NCBI中进行比对后,选择了与其相近的已经全基因组测序的同源菌种Ochrobactrumanthropic(Genbank:CP022605.1)为参照,对其基因组中所有ω-胺转氨酶基因进行分析,从中筛选获得与其同源性最高的基因序列进行克隆引物设计,并发现克隆产物与Ochrobactrumanthropi (WP_011982390.1)来源的ω-转氨酶蛋白序列的相似性仅为69.52%,验证了其ω-胺转氨酶的功能与应用价值。
作为优选,所述ω-胺转氨酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
作为优选,所述ω-胺转氨酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
由于如SEQ ID NO.2所示的ω-胺转氨酶基因可溶性表达量较低,为提高可溶性表达效率,本发明根据大肠杆菌表达***的偏好性,对ω-胺转氨酶基因原始序列进行了密码子优化,得到了如SEQ ID NO.3所示的序列。
本发明的第二目的在于,提供一种重组表达质粒,所述重组表达质粒包含有编码ω-胺转氨酶的编码基因,所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。
作为优选,所述重组表达质粒是将编码基因***pET-28a载体得到。
本发明的第三目的在于,提供一种重组基因工程菌,包含有上述任一种重组表达质粒。
作为优选,所述重组工程菌是将重组表达质粒转入宿主大肠杆菌BL21(DE3)或大肠杆菌Top10得到。
作为进一步优选,所述重组工程菌是将重组表达质粒转入宿主大肠杆菌BL21(DE3)得到。
本发明的第四目的在于,提供一种生产ω-胺转氨酶的方法,所述生产方法为:将上述任一种重组基因工程菌进行发酵培养,将培养后的重组基因工程菌破壁后进行分离纯化,得到ω-胺转氨酶。
本发明的第五目的在于,提出上述ω-胺转氨酶、重组表达质粒或者重组基因工程菌在转氨反应中进行应用。
本发明中转氨反应是指催化氨基供体(氨基酸或胺)上的氨基转移到前手性的受体醛、酮或酮酸的反应。所述转氨反应具体可以用于动力学拆分制备或不对称合成制备非天然氨基酸、用于制备脂肪族和芳香族非天然氨基酸或者用于制备手性胺和手性氨基酸。
作为进一步优选,本发明还提出上述ω-胺转氨酶、重组表达质粒或者重组基因工程菌在通过转氨反应合成L-草铵膦中应用。
ω-胺转氨酶能高效转化丙酮酸,可以用来催化丙酮酸来辅助生成L-丙氨酸,而L-丙氨酸又是以2-羰基-4-[羟基(甲基)膦酰基]丁酸为底物转氨反应制备L-草铵膦的常用氨基供体,经反应后生成丙酮酸,因此本发明的ω-胺转氨酶可以改善以2-羰基-4-[羟基(甲基)膦酰基]丁酸为底物转氨反应制备L-草铵膦的过程中,副产物丙酮酸对该转氨反应的正向抑制作用,缓解转氨反应的不利平衡常数问题。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明首次从人苍白杆菌Ochrobactrum anthropic ZJB-061中克隆、鉴定了一种新型ω-胺转氨酶基因,经验证发现该ω-胺转氨酶可以改善转氨反应的不利平衡常数问题,在以2-羰基-4-[羟基(甲基)膦酰基]丁酸为底物转氨作用制备L-草铵膦等类似可逆转氨反应中该酶具有转化酮酸等副产物来推动反应平衡的巨大潜力。
其余有益效果将在实施例中展开说明。
序列描述
SEQ ID NO.1为ω-胺转氨酶ata-Oc3氨基酸序列;
SEQ ID NO.2为ω-胺转氨酶ata-Oc核苷酸序列;
SEQ ID NO.3为ω-胺转氨酶ata-Oc优化后的ω-胺转氨酶ata-Oc3的核苷酸序列;
SEQ ID NO.4为Ochrobactrum anthropic ZJB-061中克隆基因正向引物ata-OcF;
SEQ ID NO.5为Ochrobactrum anthropic ZJB-061中克隆基因反向引物ata-OcR。
附图说明
下面将就附图进行简单介绍:
图1为ω-胺转氨酶催化反应示意图;
图2为ω-胺转氨酶的凝胶电泳图:泳道M为核酸分子量Marker,泳道1为ω-胺转氨酶pET28a-ata-Oc,泳道2为ω-胺转氨酶ata-Oc;
图3为ω-胺转氨酶的SDS-PAGE图:泳道M为蛋白质分子量Marker,泳道1ω-胺转氨酶破碎细胞上清液,泳道2为ω-胺转氨酶破碎细胞沉淀;
图4为ω-胺转氨酶催化合成L-丙氨酸的反应示意图;
图5为ω-胺转氨酶催化合成L-草铵膦的反应示意图。
具体实施方式
下面结合说明书附图以及具体实施例对本发明做进一步描述。本领域普通技术人员在基于这些说明的情况下将能够实现本发明。此外,下述说明中涉及到的本发明的实施例通常仅是本发明一部分的实施例,而不是全部的实施例。因此,基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例,都应当属于本发明保护的范围。
实施例1 :ω-胺转氨酶基因ata-Oc的获得
本发明的ω-胺转氨酶基因来源于人苍白杆菌Ochrobactrum anthropic ZJB-061,经16S rDNA测序后,基于NCBI中blastn 进行同源比对,发现其与Ochrobactrumanthropic序列一致性最高。并对已经全基因组测序的Ochrobactrumanthropic(Genbank:CP022605.1)中所有转氨酶进行分析,从中筛选获得与其同源性最高的ω-转氨酶基因序列进行克隆引物设计,并发现克隆产物与苍白杆菌属Ochrobactrum anthropi (WP_011982390.1)来源的ω-转氨酶蛋白序列(5GHF)的相似性为69.52%,并验证了其ω-转氨酶功能与应用价值。
首先使用DNA快速提取试剂盒(FastDNA™ SPIN, MP)提取Ochrobactrumanthropic ZJB-061的基因组DNA,并根据ω-转氨酶基因序列设计特异性引物。
以Ochrobactrum anthropic ZJB-061的基因组DNA为模板,ata-OcF和ata-OcR为引物进行PCR后,得到1374 bp的产物片段,将产物进行测序后于NCBI库中比对,发现其与苍白杆菌属Ochrobactrum anthropi来源的ω-转氨酶蛋白序列5GHF的相似性为69.52%。
其中,设计引物ata-OcF (序列如SEQ ID NO.4所示)和ata-OcR (序列如SEQ IDNO.5所示),利用PCR向Ochrobactrum anthropic ZJB-061 ω-转氨酶的DNA编码框5’和3’两侧分别引入NcoI和XhoI限制性酶切位点,酶切位点前为保护碱基,酶切位点后为有效序列;
ata-OcF:5'ATCCATGGATGACGAGACAGCCCAATTC3'
ata-OcR:5'TACTCGAGTTAAGAGCGACCGATTGCGGTC3'
以上述分离的Ochrobactrum anthropic ZJB-061基因组DNA为模板,采用上面设计的引物进行PCR扩增,得到ω-胺转氨酶基因ata-Oc。
其中50 μL PCR反应体系构成为:25μL10×DNA Polymerase Buffer,2μL10 mMdNTP mixture (dATP、dCTP、dGTP和dTTP各2.5 mM),1μLDNA Polymerase,1μL10 μM ata-OcF,1μL10 μM ata-OcR,1μL模板DNA,19μLdd H2O。PCR的反应条件为:95 ℃,5 min预变性;95 ℃,30 s,变性;60 ℃,30 s,退火;72 ℃,1 min,延伸,第二步到第四步进行30个循环;72 ℃, 5 min,16 ℃,彻底延伸。
使用凝胶电泳检测PCR扩增产物,获得大小为1374 bp的DNA片段(详见图2),利用DNA回收纯化试剂盒(AxyPrep PCR Cleanup Kit)对PCR产物进行纯化回收,具体步骤参照纯化试剂盒说明书。PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳验证大小以及进行胶回收纯化。具体步骤按照Trelief®DNA Gel Extraction Kit凝胶回收试剂盒说明书回收目的基因片段。
实施例2 :含有ω-胺转氨酶基因ata-Oc的重组质粒的构建
本发明的含有ω-胺转氨酶基因ata-Oc的重组质粒是通过将ω-胺转氨酶基因ata-Oc与可选的质粒pET-28a (表达载体) 连接构建而成。回收的目的基因片段和pET-28a质粒在37 ℃下,利用NcoI和XhoI限制性内切酶(TaKaRa)对扩增片段进行双酶切处理;回收酶切片段并利用T4DNA连接酶(TaKaRa)并于16 ℃连接过夜,获得将连接产物。取10 μL连接产物加入感受态细胞DH5α中,置于冰上30 min,42 ℃热激60 s后立即放在冰上,放置5 min后,加入600 μL不含抗生素的LB培养基,37 ℃摇床培养1 h,将转化的菌液涂于LB (Amp)蓝白板上,37 ℃培养过夜。在平板上分别挑取多个菌落做PCR鉴定。
质粒提取:用Trelief® Plasmid Mini Kit质粒抽提试剂盒提取菌落PCR鉴定为阳性的克隆质粒,经核酸测序获得人苍白杆菌ω-胺转氨酶蛋白编码基因的核酸序列。该蛋白的氨基酸序列及核苷酸序列见SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。
根据大肠杆菌蛋白表达的偏好性,对得到的基因序列做选择性改造,经密码子优化后的ω-胺转氨酶基因ata-Oc命名为ata-Oc3,其基因序列如SEQ ID NO.3 所示,优化后的序列由生物公司合成。
实施例3:含有ω-胺转氨酶基因ata-Oc3的重组基因工程菌株的构建与培养
将依照实施例2的方法获得的重组质粒pET28a-ata-Oc3转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞(北京擎科生物有限公司),均匀涂布在卡那霉素抗性平板上,37 ℃倒置培养16h,挑取单菌落验证为阳性克隆的为重组基因工程菌株E.coli BL21(DE3)/pET28a-ata-Oc3。挑取阳性单菌落接种至含有50μg/mL卡那霉素的10 mL LB液体培养基中,37 ℃,200rpm震荡培养12 h,获得种子液。将种子液按1%接种量转入100 mL新鲜培养基中,在37℃、180 rpm条件下震荡培养至OD600=0.4-0.6,加入0.1% 浓度为100 mM的IPTG进行诱导,在28℃,180 rpm条件下培养诱导表达12 h后收集菌体。
实施例4:ω-胺转氨酶蛋白的表达和纯化
将收集的菌体用质量分数为0.85%的生理盐水(NaCl)清洗一次,4℃、8000 rpm/min离心10 min,再次收集菌体。将收集到的菌体用含有0.1 mM PLP的20 mM PB磷酸盐缓冲液(pH为8.0)进行重悬,于低温冰浴中超声破碎(40 W,持续2 s,间歇4 s,连续破碎40min),将破碎后的细胞液12000 rpm离心10 min后,上清液即工程菌粗酶液。使用亲和镍柱(40×12.6 mm,Bio-Rad,USA)进行纯化,透析脱盐后,获得目的蛋白,即ω-胺转氨酶。该ω-胺转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,共457个氨基酸,其理论分子量为49.7 kDa。SDS-PAGE电泳图如图3所示。
实施例5:ω-胺转氨酶ata-Oc3酶活、最适温度及最适pH测定
测定ω-胺转氨酶酶活、比活力,具体测定方法如下:
标准酶活检测体系(1 mL):1 mL的50 mM Tris-HCl 9.0中,含有20 mM丙酮酸、30mM 异丙胺、0.1 mM 磷酸吡哆醛(简称为PLP),35 ℃保温10 min,然后加入适量纯酶液,于50 ℃、600 rpm反应10 min。反应结束后立即取出反应液置于冰上,加入10μL浓度为6 M的HCl终止反应,反应液经离心(12000 rpm, 1 min),取上清液检测产物L-丙氨酸浓度。
酶活单位(U)定义:在酶活测定条件下,每分钟生成1 μmol L-丙氨酸所需的酶量。
比活力定义:每毫克蛋白所具有的酶活单位数,记为U/mg。
丙氨酸检测方法:采用配备荧光检测器的赛默飞U3000液相色谱仪,色谱柱Unitary® C18柱(4.6×250mm,Acchrom,China);流动相为甲醇:50 mM乙酸铵(pH为5.7),体积比为30:70;流速1.0 mL/min;检测波长Ex=350 nm、Em=460 nm;进样量10 μL;柱温35℃。L-丙氨酸、D-丙氨酸的保留时间分别为:13.5分钟,14.6分钟。
ω-胺转氨酶ata-Oc3的最适反应pH值分析
本发明的ω-胺转氨酶ata-Oc3的最适反应pH在6.0-10范围内测定。检测的反应体系(1 mL)为:50 mM反应缓冲液中,含有20 mM丙酮酸、30 mM 异丙胺、0.1 mM PLP,35 ℃保温10 min,然后加入适量的纯酶液,于35 ℃、600 rpm反应10 min。反应结束后立即取出反应液置于冰上,加入10 μL浓度为6 M的HCl终止反应,反应液经离心后(12000 rpm,1 min),取上清液检测产物L-丙氨酸浓度。测定所使用的反应缓冲液为:磷酸钠缓冲液(pH6.0-8.0), Tris-HCl缓冲液(pH 8.0-9.0),甘氨酸-NaOH缓冲液(pH9.0-10.0),其中pH为8.0时为磷酸钠缓冲液,pH为9.0时为Tris-HCl缓冲液。测定结果如表1所示。
表1、ω-胺转氨酶ata-Oc3最适反应pH测定
通过观察上表可知,ω-胺转氨酶在pH 8.5-9.0范围内均具有较高活性,其中pH为9.的Tris-HCl缓冲溶液中ω-胺转氨酶的相对酶活最高。
ω-胺转氨酶ata-Oc3的最适反应温度分析
本发明的ω-胺转氨酶的最适反应温度在30-60 ℃范围内测定。检测的反应体系(1 mL)为:50 mM磷酸盐反应缓冲液中,含有20 mM丙酮酸、30 mM 异丙胺、0.1 mM PLP,恒温下保温10 min,然后加入适量的纯酶液,于不同温度下反应10min。反应结束后立即取出反应液置于冰上,加入10μL浓度为6 M的HCl终止反应,反应液经离心后(12000 rpm, 1 min),取上清液检测产物L-丙氨酸浓度。水浴反应温度分别为30 ℃、35 ℃、40 ℃、45 ℃、50 ℃、55 ℃、60 ℃。测定结果如表2所示。
表2、ω-胺转氨酶ata-Oc3最适反应温度测定
通过观察上表可知,ω-胺转氨酶在40-55 ℃范围内均具有较高活性,其中温度为50 ℃时ω-胺转氨酶的相对酶活最高。
在标准酶活条件下,测定了ω-胺转氨酶ata-Oc3的比活力大小为9.74 U/mg,e.e.值大于99%。
实施例6 :ω-胺转氨酶ata-Oc3的热稳定性分析
将ω-胺转氨酶纯酶液用50 mM Tris-HCl ( pH为9.0)稀释后分装于2 mLep管中,然后置于不同温度下进行保温。温度设置为:35 ℃条件下分别保温4 h、6 h、10 h、12 h;45℃条件下分别保温2 h、4 h、6 h、8 h。在保温时间达到后立即取出置于冰上待用。在标准酶活检测条件下进行反应,以加入不保温的纯酶液为对照,计算相对酶活大小。结果分别如表3、表4所示。
表3、ω-胺转氨酶ata-Oc3在35 ℃条件下的热稳定性
表4、ω-胺转氨酶ata-Oc3在45 ℃条件下的热稳定性
通过观察上表可知,ω-胺转氨酶ata-Oc3的热稳定性良好。
实施例7 :ω-胺转氨酶ata-Oc3的底物耐受性分析
测定ω-胺转氨酶对异丙胺的耐受性。在1 mL标准反应体系中:控制丙酮酸终浓度为20 mM,其他条件不变,改变异丙胺浓度分别为:5 mM、10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、150mM、200 mM、300 mM,35 ℃保温10 min后加入适量纯酶液,于35 ℃、600 rpm反应10 min。反应结束后立即取出反应液置于冰上,加入10μL浓度为6 M的HCl终止反应,反应液经离心(12000 rpm, 1 min),取上清液检测产物L-丙氨酸浓度,计算相对酶活,结果如表5所示。
表5、ω-胺转氨酶在不同浓度异丙胺条件下的耐受性
通过观察上表可知,本发明的ω-胺转氨酶ata-Oc3在不同浓度异丙胺反应条件下的耐受性较高。
实施例8:ω-胺转氨酶ata-Oc3对丙酮酸的转化分析
反应一:10 mL的反应体系中含有100 mM 丙酮酸,100 mM 异丙胺,0.1mM PLP和50mM磷酸盐缓冲液,用NaOH将反应体系的pH调节至8.0,加入10 g/L重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pET28a-ata-Oc3 湿菌体。反应条件为:设定恒温水浴锅温度为35 ℃,转速600rpm/min。反应每隔2 h取样一次(200μL),加入5μL 6 M 盐酸混匀终止反应,4 ℃, 12000rpm/min离心1 min后取上清备用。通过HPLC检测L-丙氨酸的转化情况。
反应二:10 mL的反应体系中含有500 mM 丙酮酸,500 mM 异丙胺,0.1 mM PLP和50 mM磷酸盐缓冲液,用NaOH将反应体系的pH调节至8.0,加入50 g/L重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pET28a-ata-Oc3 湿菌体。反应条件为:设定恒温水浴锅温度为35 ℃,转速600rpm/min。反应每隔2 h取样一次(200μL),加入5μL 6 M 盐酸混匀终止反应,4 ℃, 12000rpm/min离心1 min后取上清备用。通过HPLC检测L-丙氨酸的转化情况。结果表明,在反应一和反应二中L-丙氨酸产率分别为29.07%和81.13%。
实施例9 :ω-胺转氨酶ata-Oc3在合成L-草铵膦中的应用
10 mL的反应体系中含有15 mM PPO,50 mM丙酮酸,50 mM异丙胺,0.1 mM PLP和50mM磷酸盐缓冲液,用NaOH将反应体系的pH调节至8.0,分别加入10 g/L重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pET28a-ata-Oc3和E.coliBL21(DE3)/ pET28b-seTA(专利CN 114921432 A)湿菌体。水浴35 ℃ ,磁力搅拌器转速600 rpm/min,反应时间为24 h,设置取样时间为2 h、4h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h;每次取样量为200μL,并加入5μL 6 M 盐酸终止反应,4 ℃,12000 rpm/min离心1 min后取上清于4 ℃冷藏备用。目标检测物为L-丙氨酸、L-草铵膦。L-草铵膦检测方法:采用配备荧光检测器的赛默飞U3000液相色谱仪,色谱柱Unitary® C18柱(4.6×250mm,Acchrom,China);流动相为甲醇:50 mM乙酸铵(pH 5.7),体积比为10:90;流速1.0 mL/min;检测波长Ex=350 nm、Em=460 nm;进样量10μL;柱温35 ℃。L-草铵膦、D-草铵膦的保留时间分别为:10.6分钟,12.6分钟。
反应中能同时检测到L-丙氨酸和L-草铵膦,意味着丙酮酸与异丙胺在ω-胺转氨酶催化下产生的L-丙氨酸可以催化PPO合成L-草铵膦,此外该反应同时能将L-草铵膦合成中的副产物丙酮酸进行移除。反应结果如表6所示。
表6、ω-胺转氨酶以异丙胺为间接供体催化PPO合成L-草铵膦的反应进程
Claims (9)
1.一种ω-胺转氨酶,其特征在于,所述ω-胺转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的ω-胺转氨酶,其特征在于,所述ω-胺转氨酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的ω-胺转氨酶,其特征在于,所述ω-胺转氨酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.一种重组表达质粒,其特征在于,所述重组表达质粒包含有编码ω-胺转氨酶的编码基因,所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。
5.根据权利要求4所述的重组表达质粒,其特征在于,所述重组表达质粒是将编码基因*** pET-28a载体得到。
6.一种重组基因工程菌,其特征在于,包含有权利要求4或5所述的重组表达质粒。
7.根据权利要求 6所述的重组基因工程菌,其特征在于,所述重组工程菌是将重组表达质粒转入宿主大肠杆菌BL21(DE3)或大肠杆菌Top10得到。
8.一种生产ω-胺转氨酶的方法,其特征在于,将权利要求6或7所述的重组基因工程菌进行发酵培养,将培养后的重组基因工程菌破壁后进行分离纯化,得到ω-胺转氨酶。
9.权利要求1-3任一项所述的ω-胺转氨酶或者权利要求4或5所述的重组表达质粒或者权利要求6或7所述的重组基因工程菌在转氨反应中进行应用。
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