CN117106705B - 一种胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物及应用，培养组合物为间充质干细胞经诱导培养基培养后获得的培养上清液；诱导培养基包含沙棘黄酮、棕榈酰三肽‑1、转铁蛋白、亚油酸、基础培养基。本发明的培养组合物通过含有沙棘黄酮、棕榈酰三肽‑1的诱导培养基与间充质干细胞培养，促进了干细胞中某些具有抗衰和抑制络氨酸酶活力功效的活性细胞因子的产生或分泌，这些活性细胞因子与沙棘黄酮、棕榈酰三肽‑1一起协同作用，其在降低酪氨酸酶的活性、提高衰老人皮肤成纤维细胞的活力、降低衰老人皮肤成纤维细胞活性氧荧光强度、促进衰老人皮肤成纤维细胞生成胶原蛋白上均具有很好的协同作用，具有抗衰、美白或亮肤作用。
Description
技术领域
本发明涉及干细胞技术领域，特别是一种胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物及其应用。
背景技术
间充质干细胞(MSCs)来源于中胚层组织，属于多能干细胞，其特点是来源广泛、免疫原性低、一定的分化潜能、具有自我更新能力和具有调节免疫的能力，根据其来源主要分为人脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、牙髓间充质干细胞和胎盘间充质干细胞等。相比之下，胎儿组织来源的脐带和胎盘间充质干细胞具有采集无害性，提取方便，获取量大等优点更加受到人们的青睐。
体外培养的MSCs所分泌的这些具有组织损伤修复功能的生物活性分子，会释放到培养上清中，这种培养上清收集后被称为MSC条件培养基。MSCs的条件培养基是指MSCs在体外培养一段时间以后收集的细胞培养上清，其中含有MSCs在生长过程中通过旁分泌的作用方式分泌大量活性细胞因子，从而产生抗组织老化的作用，MSCs的条件培养基有望应用于皮肤抗衰老中，但其整体的皮肤抗衰效果有限，且较少报道有MSCs在生长过程中通过旁分泌的作用方式分泌具有降低酪氨酸酶活性的活性细胞因子。
基于以上原因，本发明提供了一种条件培养基，通过设计一种诱导培养基培养胎盘或脐带间充质干细胞，使其分泌的活性细胞因子与诱导培养基成分协同作用具有更好的抗衰老效果，且还具有显著的美白作用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物及其应用，以解决上述技术背景中提出的问题。
为实现上述目的，本发明通过以下技术方案来实现：
第一方面的，本发明提供了一种胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物，其为间充质干细胞经诱导培养基培养后获得的培养上清液；
所述诱导培养基包含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1、转铁蛋白、亚油酸、基础培养基。
进一步的，所述诱导培养基含有0.1～5g/L沙棘黄酮、0.5～10mg/L棕榈酰三肽-1、15～25ug/L转铁蛋白、10～40ug/L亚油酸。
进一步的，所述诱导培养基含有1.5g/L沙棘黄酮、5mg/L棕榈酰三肽-1、20ug/L转铁蛋白、25ug/L亚油酸。
进一步的，所述基础培养基为DMEM/F12、DMEM或α-MEM。
进一步的，间充质干细胞源自人胎盘或脐带。
进一步的，所述间充质干细胞培养组合物的制备方法为：所述间充质干细胞培养组合物的制备方法为：取间充质干细胞，并将其按1×106个/mL密度接种于培养皿中，当细胞融合度达到80％左右时更换为诱导培养基，继续培养48h后收集细胞培养基上清液，对上清液离心过滤后获得所述培养组合物，4℃保存备用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本申请通过诱导培养基中含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1进行间充质干细胞培养所得培养组合物，其具有更佳的抑制酪氨酸酶活性能力，更强的抑制酪氨酸酶抑制率提示其可能具有更强的抑制体内黑色素沉积的作用，具有美白或者亮肤作用；经过性能试验证实了，通过含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1的诱导培养基进行间充质干细胞培养，其在降低酪氨酸酶的活性并减少酪氨酸酶的合成上具有很好的协同作用，这是因为沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1与间充质干细胞培养，能促进了间充质干细胞中某些活性细胞因子的产生或分泌，这些活性细胞因子能够大大抑制络氨酸酶；而单独使用沙棘黄酮或棕榈酰三肽-1的诱导培养基培养干细胞得到的培养组合物、或者联合使用沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1的诱导培养液，其抑制络氨酸酶远不如本申请提供的联合使用沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1进行间充质干细胞培养所得的培养组合物。
本申请还通过细胞实验发现，通过诱导培养基中含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1进行间充质干细胞培养所得培养组合物，所得培养组合物通过含有沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1的诱导培养基与间充质干细胞培养，促进了间充质干细胞中某些活性细胞因子(具有抗衰功效)的产生或分泌，这些活性细胞因子与沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1一起协同作用，能够大大提高衰老人皮肤成纤维细胞的活力、降低衰老人皮肤成纤维细胞活性氧荧光强度、能促进衰老人皮肤成纤维细胞生成胶原蛋白，具有抗衰作用。
附图说明
图1为本发明培养组合物对酪氨酸酶抑制率的影响的柱状图；
图2为本发明培养组合物对衰老人皮肤成纤维细胞的细胞活力的影响的柱状图；
图3为本发明培养组合物对衰老人皮肤成纤维细胞的活性氧荧光强度的影响的柱状图；
图4为本发明培养组合物对衰老人皮肤成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白含量的影响的柱状图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。需说明的是，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。
以下实施例中所涉及的组分、试剂均为常规市售产品。如DMEM/F12培养基(液体，货号21041025)、DMEM培养基(液体，低糖，货号11885092/11054001)、α-MEM培养基(液体，货号41061037)购自Gibco公司；沙棘黄酮，规格95％，购自陕西斯诺特生物技术有限公司；棕榈酰三肽-1，CAS：147732-56-7，纯度98％，购自成都科成精细化工有限公司。
本申请实施例中，人胎盘间充质干细胞(hPMSCs)(货号CP-H204)、人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)(货号CP-CL11)购于购自武汉普诺赛生命科技有限公司；或者分别从胎盘、脐带中分离培养得到。其中，人胎盘间充质干细胞(hPMSCs)分离培养：将胎盘去除绒毛膜、羊膜和蜕膜组织，PBS缓冲液反复冲洗，洗净残留血液。将胎盘组织剪碎后加入0.1％Ⅳ型胶原酶，37℃消化30min，100目筛网研磨，收集细胞，1500rpm离心10min，PBS缓冲液洗涤2次，加入完全培养基(含低糖DMEM培养基，10％胎牛血清，1％双抗)重悬细胞，细胞计数后，接种于6孔板，于37℃、5％CO2条件下培养。3d半量换液，去除未贴壁的悬浮细胞。之后每3～4d更换培养基，7-8d传代1次，3代以后的细胞用于实验。
人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)分离培养：取脐带组织，经D-Hank’s液冲洗残留血液后，纵行剪开脐带外膜，剥离血管，取血管之间以及血管与外膜之间的华通胶组织，D-Hank’s液冲洗后，将脐带华通胶组织剪碎成约1mm3的小块，浸于0.075％Ⅱ型胶原酶溶液中，37℃恒温消化18h，2500rpm离心弃上清。剩余液体用0.25％胰酶于37℃恒温消化30min，2500rpm离心弃上清后，加入完全培养基(含低糖DMEM培养基，10％胎牛血清，1％双抗)，调整细胞密度至1×105/mL，移入25cm2培养瓶中，置于37℃、5％CO2培养箱中培养48h。半量换液除去未贴壁细胞，每3天换液1次。之后每3～4d更换培养基，细胞长至80％融合时，用0.125％胰酶消化，按1∶3的比例传代培养，3代以后的细胞用于实验。
实施例1
一种胎盘间充质干细胞培养组合物，其为人胎盘间充质干细胞经诱导培养基培养后获得的培养上清液；
所述诱导培养基包含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1、转铁蛋白、亚油酸、基础培养基，所述基础培养基为DMEM/F12。所述诱导培养基以DMEM/F12液体培养基作为溶剂溶解以下组分的物质：0.1g/L沙棘黄酮、10mg/L棕榈酰三肽-1、25ug/L转铁蛋白、10ug/L亚油酸。
实施例2
一种胎盘间充质干细胞培养组合物，其为人胎盘间充质干细胞经诱导培养基培养后获得的培养上清液；
所述诱导培养基包含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1、转铁蛋白、亚油酸、基础培养基，所述基础培养基为DMEM。所述诱导培养基以DMEM液体培养基作为溶剂溶解以下组分的物质：1.5g/L沙棘黄酮、5mg/L棕榈酰三肽-1、20ug/L转铁蛋白、25ug/L亚油酸。
实施例3
一种胎盘间充质干细胞培养组合物，其为人胎盘间充质干细胞经诱导培养基培养后获得的培养上清液；
所述诱导培养基包含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1、转铁蛋白、亚油酸、基础培养基，所述基础培养基为α-MEM。所述诱导培养基以α-MEM液体培养基作为溶剂溶解以下组分的物质：5g/L沙棘黄酮、0.5mg/L棕榈酰三肽-1、15ug/L转铁蛋白、40ug/L亚油酸。
实施例4
一种脐带间充质干细胞培养组合物，其为人脐带间充质干细胞经诱导培养基培养后获得的培养上清液；
所述诱导培养基包含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1、转铁蛋白、亚油酸、基础培养基，所述基础培养基为DMEM。所述诱导培养基以DMEM液体培养基作为溶剂溶解以下组分的物质：1.5g/L沙棘黄酮、5mg/L棕榈酰三肽-1、20ug/mL转铁蛋白、25ug/mL亚油酸。
对比例1
本实施例与实施例2相似，区别在于，诱导培养基不含沙棘黄酮；具体为：胎盘间充质干细胞培养组合物，其为人胎盘间充质干细胞经诱导培养基培养后获得的培养上清液；
所述诱导培养基包含棕榈酰三肽-1、转铁蛋白、亚油酸、基础培养基，所述基础培养基为DMEM。所述诱导培养基以DMEM液体培养基作为溶剂溶解以下组分的物质：5mg/L棕榈酰三肽-1、20ug/L转铁蛋白、25ug/L亚油酸。
对比例2
本实施例与实施例2相似，区别在于，诱导培养基不含棕榈酰三肽-1；具体为：胎盘间充质干细胞培养组合物，其为人胎盘间充质干细胞经诱导培养基培养后获得的培养上清液；
所述诱导培养基包含沙棘黄酮、转铁蛋白、亚油酸、基础培养基，所述基础培养基为DMEM。所述诱导培养基以DMEM液体培养基作为溶剂溶解以下组分的物质：1.5g/L沙棘黄酮、20ug/L转铁蛋白、25ug/L亚油酸。
对比例3
本实施例与实施例2相似，区别在于，诱导培养基不含沙棘黄酮和棕榈酰三肽-1；具体为：胎盘间充质干细胞培养组合物，其为人胎盘间充质干细胞经诱导培养基培养后获得的培养上清液；
所述诱导培养基包含转铁蛋白、亚油酸、基础培养基，所述基础培养基为DMEM。所述诱导培养基以DMEM液体培养基作为溶剂溶解以下组分的物质：20ug/L转铁蛋白、25ug/L亚油酸。
对比例4
一种诱导培养基，所述诱导培养基包含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1、转铁蛋白、亚油酸、基础培养基，所述基础培养基为DMEM。所述诱导培养基以DMEM液体培养基作为溶剂溶解以下组分的物质：1.5g/L沙棘黄酮、5mg/L棕榈酰三肽-1、20ug/L转铁蛋白、25ug/L亚油酸。
对比例5
一种诱导培养基，所述诱导培养基包含转铁蛋白、亚油酸、基础培养基，所述基础培养基为DMEM。所述诱导培养基以DMEM液体培养基作为溶剂溶解以下组分的物质：20ug/L转铁蛋白、25ug/L亚油酸。
按实施例1-4、对比例1-5的配方(见表1)制备间充质干细胞培养组合物或诱导培养基，其中，间充质干细胞培养组合物的制备方法为：取传代培养中的第3代人间充质干细胞(3代以上也可以)，并将其按1×106个/mL密度接种于培养皿中，当细胞融合度达到80％左右时更换为诱导培养基，继续培养48h后收集细胞培养基上清液，对上清液进行4000rpm离心20min，用0.22μm滤器过滤后获得条件培养基即为所述间充质干细胞培养组合物，4℃保存备用。
表1
一、生化实验
1、抑制酪氨酸酶试验
皮肤中黑色素的形成过程中酪氨酸酶最为关键，抑制酪氨酸酶活性可以起到美白的作用。因此构建酪氨酸酶催化反应体系，来评价实施例1～4和对比例1～5分别提供的培养组合物或诱导培养基对酪氨酸酶的抑制效果。
待测样品及分组：设置11组，其中第1-9组分别对应为实施例1～4和对比例1～5分别提供的培养组合物或诱导培养基，第10-11组为1.5g/L沙棘黄酮(pH＝6.80的PBS缓冲溶液溶解)、5mg/L棕榈酰三肽-1(pH＝6.80的PBS缓冲溶液溶解)。
试验方法：每个组别按酪氨酸酶催化反应体系进行实验，每组4个重复；酪氨酸酶催化反应体系参照表2分为A1、A2、A3、A4四个小组进行加液，加样结束后，37℃水浴下恒温反应10min，在475nm处测定各小组A1、A2、A3、A4吸光值。
酪氨酸酶抑制率(％)＝[(A2-A1)-(A4-A3)]/(A2-A1)×100％，计算各实验组的酪氨酸酶抑制率，试验结果见表3和图1所示。
表2
| 反应体系 | A1 | A2 | A3 | A4 |
| 待测样品(ul) | 0 | 0 | 200 | 200 |
| 0.2M、pH＝6.80的PBS(ul) | 1600 | 1100 | 1400 | 900 |
| 100U/mL酪氨酸酶溶液(ul) | 0 | 500 | 0 | 500 |
| 0.5wt％酪氨酸溶液(ul) | 400 | 400 | 400 | 400 |
表3
| 组别 | 酪氨酸酶抑制率(％) |
| 实施例1 | 88.94±0.89a |
| 实施例2 | 92.56±0.56a |
| 实施例3 | 90.49±1.68a |
| 实施例4 | 90.19±1.25a |
| 对比例1 | 41.13±1.61ab |
| 对比例2 | 44.20±0.96ab |
| 对比例3 | 39.66±1.20ab |
| 对比例4 | 36.24±0.62ab |
| 对比例5 | 34.76±0.93ab |
| 沙棘黄酮 | 16.79±0.54b |
| 棕榈酰三肽-1 | 15.63±0.58b |
从表3和图1可以看出，实施例1-4提供的培养组合物的酪氨酸酶抑制率均显著高于对比例1～5提供的培养组合物或诱导培养基、沙棘黄酮以及棕榈酰三肽-1，说明本申请实施例1-4提供的培养组合物具有更佳的抗氧化能力，更强的抑制酪氨酸酶抑制率提示其可能具有更强的抑制体内黑色素沉积的作用，具有美白或者亮肤作用；且对比例1-3相较于对比例4-5不具备显著差异，而实施例1-4相较于对比例1-3，实施例1-4提供的培养组合物抑制酪氨酸酶活性能力显著增强，说明诱导培养基通过含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1进行间充质干细胞培养，其在降低酪氨酸酶的活性并减少酪氨酸酶的合成上具有很好的协同作用，这是因为沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1与间充质干细胞培养时，能促进了间充质干细胞中某些活性细胞因子的产生或分泌，这些活性细胞因子能够大大抑制络氨酸酶；而单独使用沙棘黄酮或棕榈酰三肽-1的诱导培养基培养干细胞得到的培养组合物、或者联合使用沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1的诱导培养液，其抑制络氨酸酶活力的效果远不如本申请提供的联合使用沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1的诱导培养基进行间充质干细胞培养所得的培养组合物。
二、细胞实验
人皮肤成纤维细胞的培养：人皮肤成纤维细胞，货号YX-HC099，购自齐一生物科技(上海)有限公司；培养基由1％双抗、体积分数为10％胎牛血清、89％DMEM/F12组成，将其传代至自然衰老细胞后进行下述实验。
1、CCK-8法检测细胞增殖活性
2.1受试样品及分组：设置6个试验组和1个空白对照组，试验组分别对应采用本申请实施例2的培养组合物、对比例1-3的培养组合物、对比例4-5的诱导培养基。空白对照组采用DMEM培养基。
2.2试验方法：取传代至自然衰老的人皮肤成纤维细胞，将细胞配成悬液，按每孔100ul、1000个细胞/孔接种于96孔板，每种处理4个重复，于37℃、5％CO2条件下培养，细胞贴壁后，弃去培养基，PBS清洗，分别加入含体积分数为10％胎牛血清的实施例2的培养组合物、对比例1-3的培养组合物、以及对比例4-5的诱导培养基(即分别为含10％胎牛血清的实施例2的培养组合物、含10％胎牛血清的对比例1的培养组合物、含10％胎牛血清的对比例2的培养组合物、含10％胎牛血清的对比例3的培养组合物、含10％胎牛血清的对比例4的的诱导培养基、含10％胎牛血清的对比例5的的诱导培养基)，加入含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基作为阴性对照组，培养36h时弃去孔内培养基，每孔加入10μL CCK-8和90μL无血清DMEM的混合液，同时在96孔板中设置只加入10μL CCK-8和90μL无血清DMEM作为空白对照；在细胞培养箱中孵育2h后，酶标仪检测波长450nm处试验组、阴性对照组和空白对照组的吸光度值，计算细胞增殖率，以阴性对照组的细胞增殖率为100％计数，细胞增殖率见表4和图2所示；
试验组：试验组细胞、DMEM和CCK-8溶液的吸光度值
阴性对照组：对照组细胞、DMEM和CCK-8溶液的吸光度值
空白对照组：DMEM和CCK-8溶液的吸光度值
细胞增殖率(细胞活力)＝(试验组-空白对照组)/(阴性对照组-空白对照组)×100％，
表4
从表4和图2可以看出，实施例2提供的培养组合物培养的衰老人皮肤成纤维细胞的细胞活性显著高于对比例1-5，说明实施例2提供的培养组合物能提高衰老人皮肤成纤维细胞的活力，具有抗衰老作用。且对比例1-3提高衰老人皮肤成纤维细胞的活力能力显著高于对比例4-5，实施例2提供的培养组合物提高衰老人皮肤成纤维细胞的活力能力显著高于对比例1-3，说明诱导培养基中含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1进行间充质干细胞培养，在提高衰老人皮肤成纤维细胞的活力能力上具有很好的协同作用，这是由于沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1与间充质干细胞培养时，促进了间充质干细胞中某些活性细胞因子的产生或分泌，这些活性细胞因子与沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1一起协同作用，能够大大提高衰老人皮肤成纤维细胞的活力能力。
2、细胞内活性氧水平
2.1受试样品及分组：设置6个试验组和1个空白对照组，试验组分别对应采用本申请实施例2的培养组合物、对比例1-3的培养组合物、对比例4-5的诱导培养基。空白对照组采用DMEM培养基。
2.2试验方法：取传代至自然衰老的人皮肤成纤维细胞，将细胞按1×105个/每孔接种于6孔板，每种处理4个重复，于37℃、5％CO2条件下培养，细胞贴壁后，弃去培养基，PBS清洗，分别加入含体积分数为10％胎牛血清的实施例2的培养组合物、对比例1-3的培养组合物、以及对比例4-5的诱导培养基，加入含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基为阴性对照组，培养72h时用活性氧检测试剂盒(碧云天生物)检测细胞内活性氧水平。将细胞用胰酶消化后离心，弃上清，加入PBS清洗，离心弃上清，每管加入5μM DCFH-DA溶液1000μL，37℃孵育20min，1200rpm离心5min后去除上清液，用无血清DMEM洗涤细胞两三次，加入PBS重悬通过荧光酶标仪(激发波长488nm，发射波长525nm)检测，结果以荧光强度值表示，见表5和图3所示。
表5
从表5和图3可以看出，实施例2提供的培养组合物细胞活性氧荧光强度显著低于对比例1-5，说明实施例2提供的培养组合物降低衰老人皮肤成纤维细胞活性氧荧光强度的效果最好，具有抗衰老作用。且对比例1-3细胞活性氧荧光强度显著低于对比例4-5，实施例2提供的培养组合物细胞活性氧荧光强度显著低于对比例1-3，说明诱导培养基中含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1进行间充质干细胞培养，在降低衰老人皮肤成纤维细胞活性氧的效果上具有很好的协同作用，这是由于沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1与间充质干细胞培养时，促进了间充质干细胞中某些活性细胞因子的产生或分泌，这些活性细胞因子与沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1一起协同作用，能够大大降低衰老人皮肤成纤维细胞活性氧荧光强度。
3、细胞分泌胶原蛋白Ⅰ含量
3.1受试样品及分组：设置6个试验组和1个空白对照组，试验组分别对应采用本申请实施例2的培养组合物、对比例1-3的培养组合物、对比例4-5的诱导培养基。空白对照组采用无血清DMEM培养基。
3.2试验方法：取传代至自然衰老的人皮肤成纤维细胞，将细胞按1000个/每孔、每孔100ul接种于96孔板，每种处理4个重复，于37℃、5％CO2条件下培养24h，弃去培养基，PBS清洗，分别加入含体积分数为10％胎牛血清的实施例2的培养组合物、对比例1-3的培养组合物、对比例4-5的诱导培养基，加入含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基作为空白对照组，37℃培养箱孵育36小时后，取细胞上清样本，用人I型胶原蛋白(COL-I)ELISA试剂盒(上海西唐生物科技有限公司)测定胶原蛋白的含量，评估对人成纤维细胞的I型胶原合成促进作用。I型胶原蛋白含量测试结果如表6和图4所示。
表6
从表6和图4可以看出，实施例2提供的培养组合物细胞促进Ⅰ型胶原蛋白的分泌含量显著高于对比例1-5，说明实施例2提供的培养组合物能促进衰老人皮肤成纤维细胞生成胶原蛋白，具有抗衰老作用。且对比例1-3Ⅰ型胶原蛋白的分泌含量显著高于对比例4-5，实施例2提供的培养组合物Ⅰ型胶原蛋白的分泌含量显著高于对比例1-3，说明诱导培养基中含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1进行间充质干细胞培养，在促进衰老人皮肤成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白的效果上具有很好的协同作用，这是由于沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1与间充质干细胞培养时，促进了间充质干细胞中某些活性细胞因子的产生或分泌，这些活性细胞因子与沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1一起协同作用，能够大大增大衰老人皮肤成纤维细胞活力和促进胶原蛋白再生。
本申请提供的胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物具有抗衰、美白功效。
以上所述实施例仅表达了本发明的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物，其特征在于，其为间充质干细胞经诱导培养基培养后获得的培养上清液；
所述诱导培养基包含沙棘黄酮、棕榈酰三肽-1、转铁蛋白、亚油酸、基础培养基。
2.根据权利要求1所述的一种胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物，其特征在于，所述诱导培养基含有0.1～5g/L沙棘黄酮、0.5～10mg/L棕榈酰三肽-1、15～25ug/L转铁蛋白、10～40ug/L亚油酸。
3.根据权利要求2所述的一种胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物，其特征在于，所述诱导培养基含有1.5g/L沙棘黄酮、5mg/L棕榈酰三肽-1、20ug/L转铁蛋白、25ug/L亚油酸。
4.根据权利要求1所述的一种胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12、DMEM或α-MEM。
5.根据权利要求1所述的一种胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物，其特征在于，间充质干细胞源自人胎盘或脐带。
6.根据权利要求1所述的一种胎盘/脐带间充质干细胞培养组合物，其特征在于，所述间充质干细胞培养组合物的制备方法为：取间充质干细胞，并将其按1×106个/mL密度接种于培养皿中，当细胞融合度达到80％左右时更换为诱导培养基，继续培养48h后收集细胞培养基上清液，对上清液离心过滤后获得所述培养组合物，4℃保存备用。
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2023
- 2023-05-04 CN CN202310490262.XA patent/CN117106705B/zh active Active
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| Publication number | Publication date |
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