CN117106578A - 一种电化学检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种电化学检测试剂盒及检测方法，其中电化学检测试剂盒包括试剂盒主体、反应区和检测部件，反应区包括具有检测区和扩增区的反应腔，检测区设置感应电极，感应电极上设置捕获探针，与信号探针特异性配对后的待测样本进入反应腔后，待测样本剩余区段与捕获探针特异性配对，并触发信号探针，使信号探针改变感应电极的电流或电压，并将信号传递至外部检测部件，从而能够同时对待测样本的进行定性检测，提高检测结果的准确性；同时通过扩增区的设置对待测样本进行扩增，避免待测样本流入检测区出现漏检的情况，能够进一步地提高了检测结果的准确性。

Description

一种电化学检测试剂盒及检测方法

技术领域

本发明涉及分子诊断技术领域，具体为一种电化学检测试剂盒及检测方法。

背景技术

分子诊断技术是指以DNA和RNA为诊断材料，用分子生物学技术通过检测基因的存在、缺陷或表达异常，从而对人体状态和疾病作出诊断的技术。其基本原理是检测DNA或RNA的结构是否变化、量的多少及表达功能是否异常，以确定受检者有无基因水平的异常变化，对疾病的预防、预测、诊断、治疗和预后具有重要意义。通俗简单的讲所有基于分子生物学水平的方法学技术都属于分子诊断技术，比如聚合酶链式反应技术、基因测序技术等等。

聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction, PCR）是一种用于扩增特定DNA片段（目标靶基因）的分子生物学技术，即目标靶基因的特异性体外扩增过程。 PCR基本原理为双链DNA在高温下发生变性解链成为单链DNA，当温度降低后又可以复性成双链，通过温度变化可以控制DNA的变性和复性；在待测样本中加入引物、DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）及相应缓冲液（整体称作PCR反应体系），PCR反应体系配合温度控制（也就是升温-降温循环处理）则可以完成目标靶基因的体外复制扩增。

待测样本的目标靶基因完成复制后，还需对复制后的产物进行检测，现有的检测方法为荧光检测法，也就是利用光学检测***对复制产物进行光学照射处理并检测照射后复制产物所传递的荧光信号，最终根据荧光信号对待测样本完成定性检测，定性是指判断待测样本是否携带目标靶基因。

在使用荧光检测法对复制产物进行荧光检测时，容易因为荧光串扰问题导致检测结果不准确，荧光串扰问题是荧光检测法无法避免的缺陷问题。

因此如何提高待测样本的检测结果准确性是一个亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种电化学检测试剂盒及检测方法，能够提高待测样本的检测结果的准确性。

为实现上述目的，本发明提供了一种技术方案：

一种电化学检测试剂盒，包括：

试剂盒主体，用于盛放待测样本；

反应区，与所述试剂盒主体连接，所述反应区包括反应腔，所述反应腔与所述试剂盒主体连通，所述反应腔包括检测区和扩增区，所述检测区设置有感应电极，所述感应电极上设置有捕获探针；所述扩增区包括用于加热的第一温控区和用于降温的第二温控区，且所述扩增区内部具有温控流道，所述温控流道一部分位于所述第一温控区，另一部分位于所述第二温控区，所述待测样本沿所述温控流道在所述第一温控区和所述第二温控区之间交替流动；

检测部件，与所述感应电极电连接。

可选的，还包括电极板，所述电极板可拆卸地连接在所述反应腔内，所述感应电极设置在所述电极板上。

可选的，所述温控流道沿所述试剂盒主体的高度方向Z呈盘管型设置，所述温控流道的上半部分位于所述第一温控区，所述温控流道的下半部分位于所述第二温控区。

可选的，所述第一温控区和所述第二温控区之间设置有隔热层。

可选的，所述反应区还包括反应板，所述反应板与所述试剂盒主体连接，且所述反应板上开设有进样通道和出样通道；

所述反应腔设置在所述反应板上，所述反应腔一侧连通所述进样通道，另一侧连通所述出样通道，所述试剂盒主体在同一时刻与所述进样通道和所述出样通道择一连通。

可选的，所述温控流道包括入口和出口，所述入口与所述进样通道连通，所述出口与所述检测区连通，且所述出口的高度高于所述感应电极的高度。

可选的，所述反应区还包括封膜，所述封膜覆盖在所述反应板表面，以使所述反应腔、所述进样通道和所述出样通道形成密闭空间。

可选的，所述试剂盒主体包括盒体和切换阀，所述盒体包括中心通孔，所述中心通孔的外周构造有多个相互隔离的容纳腔，一个所述容纳腔用于盛放所述待测样本；

所述切换阀包括插装于所述中心通孔中的筒体以及位于所述筒体一端的阀座，所述筒体的筒腔内嵌装有柱塞，所述阀座上设有与所述筒腔连通的进出口，所述进出口与盛放所述待测样本的所述容纳腔对准连通时，推动所述柱塞，使所述待测样本出入所述筒腔内；所述进出口与所述进样通道或出样通道对准连通时，推动所述柱塞，使所述待测样本出入所述反应区。

可选的，所述温控流道的入口处设置引流板，所述引流板一端与所述温控流道的入口连通，另一端与所述进样通道连通；

所述引流板的高度高于所述温控流道的高度。

本发明还提供了一种技术方案：

一种检测方法，包括：

柱塞控制待测样本进入进样通道；

进样通道中的待测样本再通过柱塞控制并流入温控流道中的一根流道，且待测样本至少填满部分流道并停留4s-6s；

柱塞控制待测样本再次流动，往复循环直至待测样本全部通过温控流道进入检测区；

检测区中的捕获探针与待测样本剩余区段特异性配对，并触发信号探针，使信号探针改变感应电极的电流或电压，并将电流信号或电压信号传递至外部检测部件。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1.本发明的电化学检测试剂盒包括试剂盒主体、反应区和检测部件，反应区包括反应腔，反应腔包括检测区和扩增区，检测区设置有感应电极，感应电极上设置有捕获探针，且感应电极还与检测部件电连接，由于待测样本在进入反应腔前待测样本的部分区段已与信号探针进行特异性配对，当与信号探针特异性配对后的待测样本进入反应腔后，待测样本剩余区段与捕获探针特异性配对，并触发信号探针，使信号探针改变感应电极的电流或电压，并将电流信号或电压信号传递至外部检测部件，从而能够对待测样本进行定性检测，通过上述检测方法避免了荧光串扰问题，提高了检测结果的准确性；扩增区包括用于加热的第一温控区和用于降温的第二温控区，且扩增区内部具有温控流道，温控流道一部分位于第一温控区，另一部分位于第二温控区，以使待测样本沿温控流道在第一温控区和第二温控区之间交替流动，当待测样本流向检测区时，待测样本已经完成了扩增，扩增后的待测样本与捕获探针特异性配对，从而完成检测，由于采集到的待测样本内部的目标靶基因浓度未知，避免待测样本流入检测区出现漏检的情况，从而先进行扩增后再进入检测区进行检测，更进一步地提高了检测结果的准确性。

2.本发明的电化学检测试剂盒的温控流道呈盘管型设置，沿试剂盒主体高度方向Z，盘管的上半部分位于第一温控区，在该区域DNA在高温下发生变性解链成为单链DNA，盘管的下半部分位于第二温控区，在该区域又可以复性成双链，通过温度变化可以控制DNA的变性和复性，从而完成扩增；由于温控流道呈盘管型设置，因此待测样本可在盘管的一根流道中即可扩增一次，同理在多根流道中则可扩增数次，从而使流入检测区的待测样本中的目标靶基因数量变多，能够使捕获探针更好的捕获目标靶基因，避免出现漏检的情况，提高检测结果的准确性。

3.本发明的电化学检测试剂盒的第一温控区和第二温控区之间设置有隔热层，通过隔热层的设置能够避免第一温控区和第二温控区之间温度的传递，使第一温控区一直为高温恒温状态，第二温控区一直为低温恒温状态，通过温度变化控制DNA的变性和复性，从而完成扩增。

4.本发明的电化学检测试剂盒的温控流道包括入口和出口，入口与进样通道连通，出口与检测区连通，且出口的高度高于感应电极的高度，能够方便待测样本流向检测区，且更容易被感应电极上的捕获探针捕获。

5.本发明的电化学检测试剂盒的温控流道包括多根流道，通过控制部件控制柱塞运动，以使柱塞控制待测样本流入温控流道，此时柱塞先控制待测样本流入一根流道，且待测样本至少填满这根流道的一部分，并停留4s-6s，控制DNA的变性和复性，然后柱塞再次运动，往复循环直至待测样本全部通过温控流道进入检测区进行检测，由于停留时间较短，都是以秒为单位进行停留，因此待测样本在整个扩增区停留的时间也比较短，以至于整个试剂盒的检测时间也比较短，同时待测样本在每根流道均能够控制DNA的变性和复性，因此能够对目标靶基因多次扩增，从而能够在较短的时间内能够快速的提高目标靶基因的浓度，从而提高检测结果的准确性。

本发明附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

图1为本发明的电化学检测试剂盒的结构示意图；

图2为本发明的电化学检测试剂盒隐去封膜的结构示意图；

图3为本发明的电化学检测试剂盒的反应区的第一视角的局部放大图；

图4为本发明的电化学检测试剂盒的反应区的第二视角的局部放大图；

图5为图4的主视图；

图6为本发明的电化学检测试剂盒的盒体的局部结构示意图；

图7为图6的仰视图；

图8为本发明的电化学检测试剂盒的切换阀的内部结构示意图。

图中：

1、试剂盒主体；11、盒体；111、过液孔；112、中心通孔；12、顶盖；13、底座；14、切换阀；141、筒体；142、阀座；143、柱塞；144、筒腔；145、第一进出口；146、第二进出口；147、处理区；101、样品腔；102、裂解液腔；103、清洗液腔；104、缓冲液腔；105、废液腔；106、引物探针混合液腔；107、第一预留腔；108、第二预留腔；2、反应区；21、反应腔；211、检测区；2111、电极板；2112、感应电极；212、扩增区； 2121、第一温控区；2122、第二温控区；2123、温控流道；2124、入口；2125、出口；2126、引流板；22、反应板；23、进样通道；24、出样通道；25、封膜。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

现有的检测方法为荧光检测法，也就是利用光学检测***对复制扩增产物进行光学照射处理并检测照射后复制扩增产物所传递的荧光信号，最终根据荧光信号对待测样本完成定性检测。定性是指判断待测样本是否携带目标靶基因。这种检测方式被称为实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction，qPCR）。qPCR反应是在PCR反应体系中针对一种目标靶基因加入一种报告基团，当目标靶基因每经历一个反应循环（也就是经历一次复制后）报告基团发出的荧光信号强度就会增强一次，PCR仪器的光学检测***可以通过检测待测样本每个反应循环后的荧光信号强度变化，实现对反应产物量变化的监测。使用该检测方法对待测样本进行定性判断时不仅会出现荧光串扰的问题，导致检测结果出现错误，而且还需要将待测样本进行大量扩增，致使完成检测所需的时间也比较长。

本公司之前申请过关于试剂盒的专利，专利号为“CN202110518972.X”，由于该专利无法解决多指标检测时的荧光串扰问题、检测上限问题，因此本申请在上述专利的基础之上进行了改进，改进后本申请能够解决上述问题。

参照图1-图8所示，本公开实施例提供了一种电化学检测试剂盒，其包括试剂盒主体1、反应区2和检测部件，反应区2包括反应腔21，反应腔21包括检测区211和扩增区212，检测区211设置有电极板2111，电极板2111上设置有感应电极2112，感应电极2112上设置有捕获探针，且感应电极2112还与检测部件电连接，由于待测样本在进入反应腔21前待测样本的部分区段已与信号探针进行特异性配对，当与信号探针特异性配对后的待测样本进入反应腔21后，待测样本剩余区段与捕获探针特异性配对，并触发信号探针，使信号探针改变感应电极2112的电流或电压，并将电流信号或电压信号传递至外部检测部件，从而能够对待测样本进行定性检测，通过上述检测方法避免了荧光串扰问题，提高了检测结果的准确性；扩增区212包括用于加热的第一温控区2121和用于降温的第二温控区2122，且扩增区212内部具有温控流道2123，温控流道2123一部分位于第一温控区2121，另一部分位于第二温控区2122，以使待测样本沿温控流道2123在第一温控区2121和第二温控区2122之间交替流动，当待测样本流向检测区211时，待测样本已经完成了扩增，扩增后的待测样本与捕获探针特异性配对，从而完成检测，由于采集到的待测样本内部的目标靶基因浓度未知，避免待测样本流入检测区211出现漏检的情况，从而先进行扩增后再进入检测区211进行检测，更进一步地提高了检测结果的准确性。

其中，捕获探针固定在感应电极2112表面，由于待测样本在进入反应腔21前待测样本的部分区段已与信号探针进行特异性配对，当与信号探针特异性配对后的待测样本进入反应腔21后，待测样本剩余区段与捕获探针特异性结合，使得信号探针靠近感应电极2112表面，由于信号探针标记有二茂铁分子，通过二茂铁分子与感应电极2112靠近，发生氧化还原反应进而导致电子转移产生电流或电压变化，检测部件检测出电流或电压值，从而进行目标靶基因的识别判定，因为不通过光照的方法进行识别，从而避免了荧光串扰问题，提高了检测结果的准确性。同时本申请的检测方法无需提前通过专有的控温装置进行大量的复制扩增，不仅加快了检测速度，也省去了温控装置，节省了仪器生产成本。

上述的电极板2111可以与反应腔21可拆卸地连接，由于感应电极2112设置在电极板2111上，从而能够便于更换感应电极2112。

上述的电极板2111连接有显示屏，由于每个感应电极2112均与电极板2111电连接，当感应电极2112上结合有目标靶基因时，感应电极2112会发生电流或电压的变化，这种变化会在电极板2111上反应并通过显示屏展示出来，便于用户观测。

上述的捕获探针可以设置一种或多种，当捕获探针设置一种时可以只检测一种目标靶基因，当捕获探针设置多种时，可以通过一次检测实验，便可检测出多种目标靶基因，实现多指标检测，提高检测效率。

在一些实施例中，温控流道2123沿试剂盒主体1高度方向Z呈盘管型设置，盘管的上半部分位于第一温控区2121，在该区域DNA在高温下发生变性解链成为单链DNA，盘管的下半部分位于第二温控区2122，在该区域又可以复性成双链，通过温度变化可以控制DNA的变性和复性，从而完成扩增；由于温控流道2123呈盘管型设置，因此待测样本可在盘管的一根流道中即可扩增一次，同理在多根流道中则可扩增数次，扩增至一定数量级，从而使流入检测区211的待测样本中的目标靶基因数量变多，能够使捕获探针更好的捕获目标靶基因，避免出现漏检的情况，提高检测结果的准确性。当然扩增的数量级也可以进行控制，可以通过控制待测样本在温控流道2123内部的停留时间来控制扩增数量。

其中，第一温控区2121和第二温控区2122之间设置有隔热层，通过隔热层的设置能够避免第一温控区2121和第二温控区2122之间温度的传递，使第一温控区2121一直为高温恒温区，第二温控区2122一直为低温恒温区，通过温度变化控制DNA的变性和复性，从而完成扩增。

这里的隔热层可以在加工温控流道2123时设置的，即温控流道2123分为两部分加工或者一体加工之后再进行分割，然后在两部分的温控流道2123连接处涂抹隔热层。

上述的温控流道2123通过控制部件控制温度，可以控制处于第一温控区2122内的温控流道2123一直处于高温恒温状态，使DNA在高温下发生变性解链成为单链DNA，还可以控制第二温控区2122内的温控流道2123一直处于低温恒温状态，使DNA在低温下复性成双链，通过温度的变化控制DNA的变性和复性，从而完成扩增。

在一些实施例中，感应电极2112设置为圆柱形结构，并均匀的分布在电极板2111表面，此时每个感应电极2112的尺寸可以相同或不同，每个感应电极2112上固定的捕获探针的数量可以相同或不相同，且捕获探针的类型也可以相同或不同，具体情况可因使用需求而定。

或者，感应电极2112设置为长方体结构，长方体结构的感应电极2112上设置多个捕获探针，便于捕获探针捕获目标靶基因；这里的感应电极2112可以设置多个，每个感应电极2112上设置一种类型的捕获探针，因此多个感应电极2112可以具有多种捕获探针，可以通过一次检测实验，便可检测出多种目标靶基因，实现多指标检测，提高检测效率。

这里的长方体结构的感应电极2112的设置方向可以与待测样本进入检测区211的方向垂直，且感应电极2112可以设置多个，多根长方体结构的感应电极2112沿试剂盒主体1高度方向Z排列在电极板2111表面，当然这只是其中一种设置方式，也可以设置为其他方式。

应理解的是，感应电极2112还可以是其他任意形状，例如椭圆形、三角形、四边形、五边形等，且每个感应电极2112上设置的捕获探针的数量及类型不作限制，可以根据使用需求进行设定。

在一些实施例中，反应区2还包括反应板22，反应板22与试剂盒主体1连接，且反应板22上开设有进样通道23和出样通道24；反应腔21设置在反应板22上，且反应腔21一侧连接进样通道23，另一侧连接出样通道24，进样通道23和出样通道24在同一时刻，择一与试剂盒主体1内部连通。即当需要进液时，进样通道23与试剂盒主体1连通，出样通道24被封堵，待测样本通过进样通道23流入反应腔21，当检测完成后，待测样本通过出样通道24流回试剂盒主体1。

其中，温控流道2123包括入口2124和出口2125，入口2124与进样通道23连通，出口2125与检测区211连通，且出口2125的高度高于感应电极2112的高度，能够方便待测样本流向检测区211，且更容易被感应电极2112上的捕获探针捕获。

上述的反应区2还包括封膜25，封膜25覆盖在反应板22表面，以使反应腔21、进样通道23和出样通道24形成密闭空间，能够便于待测样本的流入与流出。此处的封膜25也能够覆盖住温控流道2123。

上述的反应区2与试剂盒主体1一体成型或焊接连接。

在一些实施例中，试剂盒主体1包括盒体11和切换阀14，盒体11包括中心通孔112，中心通孔112的外周构造有多个相互隔离的容纳腔，一个容纳腔用于盛放待测样本；切换阀14包括插装于中心通孔112中的筒体141以及位于筒体141一端的阀座142，筒体141的筒腔144内嵌装有柱塞143，阀座142上设有与筒腔144连通的进出口，进出口与盛放待测样本的容纳腔对准连通时，推动柱塞143，使待测样本出入筒腔144内，进出口与进样通道23或出样通道24对准连通时，推动柱塞143，使待测样本出入反应区2，从而通过柱塞143的运动能够控制待测样本进入或流出反应区2，操作比较方便。这里的柱塞143连接有控制部件，控制部件控制柱塞143在筒腔内运动。

其中，温控流道2123包括多根流道，通过控制部件控制柱塞143运动，以使柱塞143控制待测样本流入温控流道2123，此时柱塞143先控制待测样本流入一根流道，且待测样本至少填满这根流道的一部分，并停留4s-6s，控制DNA的变性和复性，然后柱塞143再次运动，往复循环直至待测样本全部通过温控流道2123进入检测区211进行检测，由于停留时间较短，都是以秒为单位进行停留，因此待测样本在整个扩增区212停留的时间也比较短，以至于整个试剂盒的检测时间也比较短，同时待测样本在每根流道均能够控制DNA的变性和复性，因此能够对目标靶基因多次扩增，从而能够在较短的时间内能够快速的提高目标靶基因的浓度，从而提高检测结果的准确性。

这里的温控流道2123为提前设置的，因此温控流道2123中的流道数量和体积也是已知的，而待测样本的体积也是已知的，试剂盒主体1内部的结构也是已知的，因此控制部件则可通过控制柱塞143的移动距离来控制待测样本流入反应区2。当然待测样本的体积可以填满半根流道、一根流道、两根流道或者多根流道，具体可根据注入容纳腔内部的待测样本的体积来定。

例如，待测样本的体积能填满半根流道，通过推动柱塞143向下移动，能够将容纳腔内的待测样本推向进样通道23，然后流向温控流道2123中的一根流道，并将第一根流道的高温恒温区填满，填满后，待测样本停留4s-6s后，控制部件再控制柱塞143向下移动，再给待测样本一个脉冲，使其进入第一根流管的低温恒温区，待测样本停留4s-6s后，控制部件再控制柱塞143向下移动，使其进入第二根流道的高温恒温区，待测样本停留4s-6s后，控制部件再控制柱塞143向下移动，使其进入第二根流道的低温恒温区，待测样本停留4s-6s后，依次类推，待测样本经过多次扩增后流入检测区211，并在检测区211进行检测。

或者，待测样本的体积能填满一根流道，通过推动柱塞143向下移动，能够将容纳腔内的待测样本推向进样通道23，然后一部分待测样本流向温控流道2123中的一根流道，并将第一根流道的高温恒温区填满，该部分待测样本停留4s-6s后，控制部件再控制柱塞143向下移动，然后再给待测样本一个脉冲，使该部分待测样本进入第一根流道的低温恒温区，同时另一部分待测样本进入第一根流道的高温恒温区将其填满，并停留4s-6s后，控制部件再控制柱塞143向下移动，使待测样本进入下一根流道，依次类推，待测样本经过多次扩增后流入检测区211，并在检测区211进行检测。

或者，待测样本的体积能填满多根流道，其扩增方式与待测样本的体积能填满一根流道时的扩增方式相同，只是当第一根流道中的待测样本进入第二根流道后，第一根流道又被进样通道23中的待测样本填满，依次类推，待测样本经过多次扩增后流入检测区211，并在检测区211进行检测。

上述的流道被高温恒温区和低温恒温区一分为二，且高温恒温区内的流道长度与低温恒温区内的流道长度相同（二者基本相同，即使有小部分的变差，也不会影响最终结果），且待测样本一次的移动距离为半根流道的长度。

由于流道尺寸较小，因此待测样本在流道表面存在附着力，在附着力的作用下待测样本很难自行流动，主要依靠柱塞143的运动才能移动。

同时，这里的柱塞143可全自动控制，由于参数均为已知的，因此可由控制部件完全控制；或者，这里的柱塞143也可以半自动控制，由于封膜25是透明的，可通过人工观察流道中的填充情况，再操控控制部件控制柱塞143运动。

在一些实施例中，当温控流道2123和封膜25没有完全贴合时，温控流道2123的入口2124处可以设置有引流板2126，引流板2126的第一端与温控流道2123的入口2124连通，第二端与进样通道23连通，引流板2126主要起到引流和过渡的作用，且引流板2126的高度可以略微高于温控流道2123的高度，通过引流板2126的设置，能够使待测样本被引入温控流道2123的入口2124，进而再沿温控流道2123的流道流动，防止待测样本直接流向扩增区212的其他位置，以进一步保证待测样本可以按照温控流道2123的预设路径进行移动，避免待测样本的扩增失去控制。

或者，当温控流道2123和封膜25贴合时，则可以不设置引流板2126，待测样本可以通过进样通道23直接进入温控流道2123，此时待测样本会先通过第一根流道的低温恒温区流入第一根流道的高温恒温区，然后停留4s-6s，之后的扩增方法与上述一致，因此这里不再赘述。

如图2、图6-图8所示，在一些实施例中，试剂盒主体1包括盒体11和切换阀14；其中，盒体11包括中心通孔112，中心通孔112的外周构造有多个相互隔离的容纳腔，其中一个容纳腔被配置为样品腔101，样品腔101用于盛放待测样本，其余容纳腔可被配置为存放对待测样本进行预处理时所需各种试剂的试剂腔，例如裂解液腔102、清洗液腔103、缓冲液腔104、废液腔105、引物探针混合液腔106、第一预留腔107和第二预留腔108，其中第一预留腔107和第二预留腔108作为备用容纳腔，用于盛放任何可能的试剂或用作其他功能，每个容纳腔的底部均设有过液孔111；切换阀14包括插装于中心通孔112中的筒体141以及位于筒体141一端的阀座142，筒体141的筒腔144内嵌装有柱塞143，阀座142内设有处理区147，阀座142上还设有与处理区147连通的进出口，进出口包括在同一圆周半径上呈角度设置的第一进出口145和第二进出口146，该角度范围为60°～180°，优先为180°，其中第一进出口145的一端可以与容纳腔底部的过液孔111对准连通，另一端与处理区147连通，第二进出口146的一端可以与容纳腔底部的过液孔111对准连通，另一端与处理区147和筒腔144连通，切换阀14能够被驱动围绕中心通孔112的轴线旋转，以实现第一进出口145、第二进出口146中的任意一个与多个容纳腔中的一个对准连通，当第一进出口145和第二进出口146中的一个与一个容纳腔连通时，另一个与剩余所有容纳腔均不连通；进样通道23和出样通道24分别连通至对应的容纳腔的过液孔111。

以下介绍待测样本从样品腔101进入进样通道23并最终流向反应腔21的过程：切换阀14转动，使样品腔101的过液孔111与第二进出口146对准连通，柱塞143在筒腔144内上移，筒腔144中压强减小，待测样本从样品腔101依次流向过液孔111、第一进出口146，最终流向处理区147和筒腔144，随后切换阀14再次转动，使进样通道23的过液孔111与第一进出口145对准连通，柱塞143在筒腔144内下降，筒腔144中压强增大，待测样本从处理区147和筒腔144流向第一进出口145、进样通道23的过液孔111，最终通过进样通道23进入反应腔21，同理，当待测样本完成检测后，切换阀14再次转动，使出样通道24的过液孔111与第一进出口145或第二进出口146中的一者对准连通，柱塞143在筒腔144内上移，筒腔144中压强减小，待测样本通过出样通道24流向处理区147和筒腔144。

如图2所示，试剂盒主体1还包括顶盖12和底座13，顶盖12与盒体11之间的连接方式，可以是焊接、粘接或其他可以密封连接的方式；底座13与盒体11之间可以是可拆卸连接，也可以是固定连接，当底座13与盒体11之间为可拆卸连接时，在底座13上设有至少一个卡扣，在盒体11上对应卡扣设有卡槽，卡扣通过卡设于卡槽内从而使底座13与盒体11连接，不仅可以保证盒体11与底座13连接稳固，连接方便，而且还可以通过拆卸底座13来检查盒体11和切换阀14的情况，便于更换损坏的切换阀14或盒体11。

综上，本实施例提供的电化学检测试剂盒由于待测样本在进入反应腔21前待测样本的部分区段已与信号探针进行特异性配对，当与信号探针特异性配对后的待测样本进入反应腔21后，待测样本剩余区段与捕获探针特异性配对，并触发信号探针，使信号探针改变感应电极2112的电流或电压，并将电流信号或电压信号传递至外部检测部件，从而能够对待测样本进行定性检测，通过上述检测方法避免了荧光串扰问题，提高了检测结果的准确性；而扩增区212内部具有温控流道2123，温控流道2123一部分位于高温恒温区，另一部分位于低温恒温区，以使待测样本沿温控流道2123在高温恒温区和低温恒温区之间交替流动，当待测样本流向检测区211时，待测样本已经完成了扩增，扩增后的待测样本与捕获探针特异性配对，从而完成检测，由于采集到的待测样本内部的目标靶基因浓度未知，避免待测样本流入检测区211出现漏检的情况，从而先进行扩增后再进入检测区211进行检测，更进一步地提高了检测结果的准确性。

本公开实施例还提供了一种检测方法，包括：

柱塞143控制待测样本进入进样通道23；

进样通道23中的待测样本再通过柱塞143控制并流入温控流道2123中的一根流道，且待测样本至少填满部分流道并停留4s-6s；

柱塞143控制待测样本再次流动，往复循环直至待测样本全部通过温控流道2123进入检测区211；

检测区211中的捕获探针与待测样本剩余区段特异性配对，并触发信号探针，使信号探针改变感应电极2112的电流或电压，并将电流信号或电压信号传递至外部检测部件。

由于该检测方法是在上述的电化学检测试剂盒中进行检测，也具有如上的相同或者类似的技术效果，以及检测方法也如上述，因此不再一一赘述，具体可参照上述的电化学检测试剂盒的描述。

在本发明的描述中，需要理解的是，指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、 “示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种电化学检测试剂盒，其特征在于，包括：

试剂盒主体，用于盛放待测样本；

反应区，与所述试剂盒主体连接，所述反应区包括反应腔，所述反应腔与所述试剂盒主体连通，所述反应腔包括检测区和扩增区，所述检测区设置有感应电极，所述感应电极上设置有捕获探针；所述扩增区包括用于加热的第一温控区和用于降温的第二温控区，且所述扩增区内部具有温控流道，所述温控流道一部分位于所述第一温控区，另一部分位于所述第二温控区，所述待测样本沿所述温控流道在所述第一温控区和所述第二温控区之间交替流动；

检测部件，与所述感应电极电连接。

2.根据权利要求1所述的电化学检测试剂盒，其特征在于，还包括电极板，所述电极板可拆卸地连接在所述反应腔内，所述感应电极设置在所述电极板上。

3.根据权利要求1所述的电化学检测试剂盒，其特征在于，所述温控流道沿所述试剂盒主体的高度方向（Z）呈盘管型设置，所述温控流道的上半部分位于所述第一温控区，所述温控流道的下半部分位于所述第二温控区。

4.根据权利要求1所述的电化学检测试剂盒，其特征在于，所述第一温控区和所述第二温控区之间设置有隔热层。

5.根据权利要求1-4任一项所述的电化学检测试剂盒，其特征在于，所述反应区还包括反应板，所述反应板与所述试剂盒主体连接，且所述反应板上开设有进样通道和出样通道；

所述反应腔设置在所述反应板上，所述反应腔一侧连通所述进样通道，另一侧连通所述出样通道，所述试剂盒主体在同一时刻与所述进样通道和所述出样通道择一连通。

6.根据权利要求5所述的电化学检测试剂盒，其特征在于，所述温控流道包括入口和出口，所述入口与所述进样通道连通，所述出口与所述检测区连通，且所述出口的高度高于所述感应电极的高度。

7.根据权利要求5所述的电化学检测试剂盒，其特征在于，所述反应区还包括封膜，所述封膜覆盖在所述反应板表面，以使所述反应腔、所述进样通道和所述出样通道形成密闭空间。

8.根据权利要求5所述的电化学检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒主体包括盒体和切换阀，所述盒体包括中心通孔，所述中心通孔的外周构造有多个相互隔离的容纳腔，一个所述容纳腔用于盛放所述待测样本；

所述切换阀包括插装于所述中心通孔中的筒体以及位于所述筒体一端的阀座，所述筒体的筒腔内嵌装有柱塞，所述阀座上设有与所述筒腔连通的进出口，所述进出口与盛放所述待测样本的所述容纳腔对准连通时，推动所述柱塞，使所述待测样本出入所述筒腔内；所述进出口与所述进样通道或出样通道对准连通时，推动所述柱塞，使所述待测样本出入所述反应区。

9.根据权利要求8所述的电化学检测试剂盒，其特征在于，所述温控流道的入口处设置引流板，所述引流板一端与所述温控流道的入口连通，另一端与所述进样通道连通；

所述引流板的高度高于所述温控流道的高度。

10.一种检测方法，其特征在于，包括：

柱塞控制待测样本进入进样通道；

进样通道中的待测样本再通过柱塞控制并流入温控流道中的一根流道，且待测样本至少填满部分流道并停留4s-6s；

柱塞控制待测样本再次流动，往复循环直至待测样本全部通过温控流道进入检测区；

检测区中的捕获探针与待测样本剩余区段特异性配对，并触发信号探针，使信号探针改变感应电极的电流或电压，并将电流信号或电压信号传递至外部检测部件。