CN117089504B

CN117089504B - 一种发酵植物乳植杆菌的方法

Info

Publication number: CN117089504B
Application number: CN202311362680.7A
Authority: CN
Inventors: 马新; 喻扬; 郁雪平
Original assignee: Thankcome Biotechnology Suzhou Co ltd
Current assignee: Thankcome Biotechnology Suzhou Co ltd
Priority date: 2023-10-20
Filing date: 2023-10-20
Publication date: 2023-12-26
Anticipated expiration: 2043-10-20
Also published as: CN117089504A

Abstract

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种发酵植物乳植杆菌的方法。本发明提供了一种发酵植物乳植杆菌的方法，所述方法包括以下步骤：将植物乳植杆菌或其培养物接种到优化培养基中培养，以获得种子液；将种子液接种到装有优化培养基的发酵罐中进行灌流浓缩培养；所述培养基的氮源为马铃薯蛋白胨。本发明提供的方法不仅显著提升了发酵液中的活菌数，最高可达10¹¹CFU/mL，而且缩短了浓缩灌流培养的时间，相对于现有技术缩短了5 h培养时间，节约了时间和成本，在工业化生产中具有广阔前景。

Description

一种发酵植物乳植杆菌的方法

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种发酵植物乳植杆菌的方法。

背景技术

发酵是一种古老、传统的食品储存与加工的方法，凡利用微生物的作用而制得的食品都可以称为发酵食品。发酵食品是人类巧妙地利用有益微生物加工制造的一类食品，具有独特的风味和营养价值，丰富了人类的饮食生活。发酵食品因在食品加工过程中有微生物参与作用，进而可以形成一些特异性风味物质和营养因子，如乳酸菌参与牛乳发酵，产生乙醛、丁二酮、丙酮、3-羟基丁酮、挥发性酸等芳香物质，以及胞外多糖、乳酸菌素、γ-氨基丁酸等营养因子。乳酸菌发酵产品主要有酸奶、奶酪、风味泡菜及近年来研究较多的植物发酵饮料等，因其都具有一定的保健功能而受到越来越多消费者的重视和喜爱。

植物乳植杆菌（Lactobacillus plantarum）为乳杆菌科乳杆菌属，同型发酵，最适生长温度为30-35℃，最适pH在6.5左右，兼性厌氧，耐盐、耐酸，是一种重要益生菌（ROSS RP, MORGAN S, HILL C. Preservation and fermentation: Past, present and future[J].International Journal of Food Microbiology, 2002, 79(1): 3-16）。植物乳植杆菌具有调节胃肠道菌群平衡、改善肠道内环境、增强免疫力等多种功能，在食品、饲料及医药保健等领域有着广泛应用。因此，如何实现高密度发酵植物乳植杆菌，以获得其高密度培养物至关重要。

中国专利申请202310702014.7公开了一种增加植物乳杆菌生长速率的培养基及利用该培养基发酵植物乳杆菌的方法，培养基配方如下：浓缩黄豆清900 mL，葡萄糖添加量5.4 g，酵母浸粉添加量4.5 g，醋酸钠添加量4.5 g，柠檬酸铵添加量1.8 g，磷酸氢二钾添加量1.8 g，硫酸锰添加量0.045 g，吐温添加量72 g。

中国专利申请202210449830.7公开了一种植物乳杆菌的发酵方法，包括将活化的植物乳杆菌SL1接种到以葡萄糖和乳糖为碳源，蛋白胨、酵母提取物和胰蛋白胨为氮源的发酵培养基中，在pH为5-6和温度为37℃条件下发酵36 h获得其发酵液的步骤。

目前本领域需要更多的高密度发酵植物乳植杆菌/植物乳杆菌的方法。

发明内容

灌注法是一种细胞培养方法，其将细胞保留在生物反应器内，同时通过不断更换培养基废液补充营养。灌注法最初用于生产不稳定的和有细胞毒性的蛋白质，以保持产品质量和工艺生产率，能够通过实施连续的、集中的或高密度的流加培养工艺，实现显著高于传统流加培养操作的活细胞密度。灌流浓缩培养在哺乳动物培养中已广泛应用，相对于传统细胞培养优势显著。

但是本领域目前未能实现灌流浓缩培养植物乳植杆菌，因此发明人尝试将灌流浓缩培养应用于植物乳植杆菌，以实现植物乳植杆菌的高密度发酵。

不同发酵工艺对益生菌生长有不同的影响，通过培养基成分的优化获得高密度益生菌是最为经济、有效的途径。因此，发明人选择试验探究培养基成分对植物乳杆菌生长的影响，确定优化培养基配方，以在获得植物乳植杆菌的最佳发酵培养基，提高菌体生物量，为植物乳植杆菌高密度发酵提供依据。

为了实现上述技术目的，本发明提出的技术方案如下所示：

在一个方面，本发明提供了一种发酵植物乳植杆菌的方法，所述方法包括以下步骤：

（1）将植物乳植杆菌或其培养物接种到优化培养基中培养，以获得种子液；

（2）将种子液接种到装有优化培养基的发酵罐中进行灌流浓缩培养；

所述优化培养基的氮源为马铃薯蛋白胨。

在一些实例中，所述培养物包括，但不限于培养液、培养液提取物、全菌、全菌提取物、发酵液、发酵液提取物、菌粉或冻干粉。

在一些实例中，所述优化培养基的组分包括：

马铃薯蛋白胨20-30 g/L、柠檬酸钠1.0-3.0 g/L、葡萄糖18.0-22.0 g/L、KH₂PO₄1.0-3.0 g/L、乙酸钠4.0-6.0 g/L、吐温-80 0.5-1.5 mL/L、七水硫酸镁0.20-0.60g/L、硫酸锰0.10-0.30 g/L。

在一些优选的实例中，所述培养基的组分可以包括马铃薯蛋白胨20 g/L、21 g/L、22 g/L、23 g/L、24 g/L、25 g/L、26 g/L、27 g/L、28 g/L、29 g/L、30 g/L。

在一些实例中，步骤（1）中所述种子液的培养包括：

1）将植物乳植杆菌或其培养物接种到优化培养基中进行一级培养，得到一级培养物；

2）将所述一级培养物转接到优化培养基中进行二级培养，得到种子液。

在一些实例中，所述二级培养为扩大培养，优选摇瓶扩大培养。

在一些实例中，所述一级培养的条件包括：

36-37℃、静置培养20-22 h。

在一些实例中，所述二级培养的条件包括：

36-37℃、50-100 rpm培养10 h-12 h。

在一些实例中，步骤（2）中所述种子液的接种量为5%-7%。

在一些实例中，步骤（2）中所述优化培养基的pH为6.0-6.5。

在一些实例中，所述浓缩灌流培养的条件包括：

（ⅰ）恒温36-37℃；

（ⅱ）搅拌转速50-100 rpm；

（ⅲ）加入中和剂以维持恒定pH为6.0-6.5。

在一些实例中，所述中和剂包括，但不限于Na₂CO₃、氨水、NaOH。

在一些实例中，所述浓缩灌流培养还包括浓缩补料培养，其包括以下条件：

ⅰ）灌流流速20-30 mL/min；

ⅱ）循环流速为灌流流速的10倍；

ⅲ）补料培养基的组分包括350-400 g/L葡萄糖和300-350 g/L马铃薯蛋白胨。

在另一个方面，本发明提供了一种优化培养基，所述培养基包括以下组分：

在一些实例中，所述培养基的组分可以包括马铃薯蛋白胨20 g/L、21 g/L、22 g/L、23 g/L、24 g/L、25 g/L、26 g/L、27 g/L、28 g/L、29 g/L、30 g/L。

本发明提供了一种前述任一方法所得的植物乳植杆菌发酵物、或植物乳植杆菌或其培养物经前述任一优化培养基培养所得的植物乳植杆菌发酵物在制备益生菌制品中的应用。

在一些实例中，所述益生菌还包含食品上可接受的辅料，所述辅料包括，但不限于赤藓糖醇、D-甘露糖醇、富马酸、甘油、果胶、海藻酸钾、海藻酸钠、滑石粉、焦磷酸钠、聚葡萄糖、卡拉胶、抗坏血酸钠、抗坏血酸棕榈酸酯、L-苹果酸、L(+)-酒石酸、麦芽糖醇、明胶、木糖醇、柠檬酸、柠檬酸钾、柠檬酸钠、柠檬酸脂肪酸甘油酯、琼脂、乳酸、乳酸钠、山梨酸及其钾盐、山梨糖醇、酸性红、碳酸钙、碳酸钠、碳酸氢钠、甜菜红、维生素C、维生素E、氧化淀粉、乙醇、乙酸钠、硬脂酸、硬脂酸钙、硬脂酸镁、α-环状糊精、γ-环状糊精或糊精。

在一些实例中，所述益生菌制剂的剂型包括液态制剂、固态制剂、半固态制剂或气态制剂。

在一些实例中，所述益生菌制剂包括，但不限于巴氏杀菌乳、高温杀菌乳、调制乳、灭菌乳、发酵乳、炼乳、奶油、稀奶油、无水奶油、特色乳制品、浓缩乳、植物蛋白饮料、复合蛋白饮料、咖啡饮料、植物饮料、风味饮料、运动饮料、营养素饮料、能量饮料、电解质饮料、全脂乳粉、脱脂乳粉、部分脱脂乳粉、调制乳粉、乳清粉、干酪、再制干酪、雪糕、雪泥、冰棍、食用冰、甜味冰、冰淇淋等。

本发明创造性地将灌流浓缩培养应用到植物乳植杆菌发酵中，并筛选出适合用于植物乳植杆菌灌流浓缩培养的氮源。发明人将马铃薯蛋白胨作为浓缩灌流培养氮源，取得了预料不到的技术效果，不仅显著提升了发酵液中的活菌数，最高可达10¹¹CFU/mL，而且缩短了浓缩灌流培养的时间，相对于现有技术缩短了5 h培养时间，节约了时间和成本，在工业化生产中具有广阔前景。

植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）CQPC02，保藏编号为CGMCC No.14491，保藏时间为2017年8月4日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株公开于CN116042490A。

植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）H6，保藏编号为CGMCC No.18205，保藏时间为2019年07月10日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株公开于CN114869916A。

植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）SG5，保藏编号为GDMCC No.60020，保藏时间为2016年03月16日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院实验大楼5楼。该菌株公开于CN106939288A。

附图说明

图1示出了不同氮源发酵植物乳植杆菌的所得发酵液中的活菌数。

图2示出了不同氮源发酵植物乳植杆菌的所得发酵液中活菌的OD₆₀₀值。

具体实施方式

除非另有定义，否则本发明使用的所有技术术语和科技术语都具有如在本发明所属领域中通常使用的相同含义。出于解释本说明书的目的，将应用以下定义，并且在适当时，以单数形式使用的术语也将包括复数形式，反之亦然。

除非上下文另有明确说明，否则本文所用的表述“一种”和“一个”包括复数指代。例如，提及“一个细胞”包括多个这样的细胞及本领域技术人员可知晓的等同物等等。

本文所使用的数值范围应被理解为已经列举了对该范围内的所有数字。例如，1至20的范围应当理解为包括来自下组的任何数字、数字组合或子范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。

本文所用的术语“包括（comprises）”或“包含（comprising）”是指“包括但不限于”。该术语旨在是开放式的，以指定任何所述特征、要素、整数、步骤或组件的存在，但不排除一个或多个其他特征、要素，整数、步骤、组件或其组的存在或添加。因此，术语“包含”包括更具限制性的术语“由……组成”和“基本上由……组成”。在一个实施方式中，在整个申请中特别是在权利要求书中使用的术语“包含”可以被术语“由……组成”代替。

本文所用的术语“任选”、“任一”、“任意”或“任一项”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。本发明所用，“一个”和“一种”在本发明中用来指的一个或多于一个的语法对象。

本文所用的术语“和/或”应理解为意指可选项中的任一项或可选项中的任意两项或更多项的组合。

本文所用的术语“植物乳植杆菌”或“植物乳杆菌”，均是指Lactiplantibacillus plantarum。

本文所用的术语“培养物”，是指一定时间一定空间内微生物的细胞群或生长物。如微生物的斜面培养物、摇瓶培养物等。

本发明涉及的试剂或材料：

MRS培养基：胰蛋白胨15.0 g、牛肉膏7.0 g、酵母膏3.0 g、柠檬酸钠2.0 g、葡萄糖20.0 g、KH₂PO₄2.0 g、乙酸钠5 g、吐温-80 1.0 mL、七水硫酸镁0.40 g、硫酸锰0.20 g。使用蒸馏水定容至1000 mL。

本发明采用菌落平板计数法测定菌落数，计算发酵液中的菌浓度（张艳, 刘均娥,张晶, 等. 平板活菌计数法检测粪便中的肠道菌群[J].首都医科大学学报, 2008, 29(1): 85-86）。

自动发酵罐，购自上海保兴生物设备工程有限公司；

中空纤维柱，购自德国赛多利斯（SARTORIUS）公司。

为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步的详细说明。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所有试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购的常规产品。为了更好地说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于构成对本发明的任何限制。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。这样的结构和技术在许多出版物，例如《分子克隆实验指南（第四版）》（冷泉港实验室科学出版社）、Ausubel，F.M等人，Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc.和Wiley-lnterscience的出版中也进行了描述。

实施例1 马铃薯蛋白胨对植物乳植杆菌CQPC02生长的影响

1.1 菌株活化

将从-80℃取出预先冻存的植物乳植杆菌CQPC02，用接种环挑取少量菌液于MRS固体培养基中划线，将平板置于37℃恒温培养箱中培养24 h，挑取单菌落，接种于5 mL MRS液体培养基中，在恒温37℃培养箱中静置厌氧活化培养20 h，按照5%接种量将活化后的植物乳植物杆菌的菌液接种于摇瓶中，在恒温37℃摇床中扩大培养10 h，用于灌流培养的种子液。

1.2 马铃薯蛋白胨替换MRS培养基中不同氮源对植物乳植杆菌生长的影响

发明人采用马铃薯蛋白胨替换替换MRS培养基中不同氮源：

胰蛋白胨15.0 g/L+牛肉膏7.0 g/L+酵母膏3.0 g/L；

马铃薯蛋白胨15 g/L+牛肉膏7.0 g/L+酵母膏3.0 g/L；

马铃薯蛋白胨18 g/L+牛肉膏7.0 g/L；

马铃薯蛋白胨22 g/L+酵母膏3.0 g/L；

马铃薯蛋白胨25 g/L。

将种子液以5%的接种量分别接种到装有15 L不同替换氮源的液体培养基的发酵罐中，培养基初始pH为6.5。发酵温度恒温37℃，搅拌转速80 rpm，通过NaOH保持发酵液恒定pH。当菌株发酵达对数生长期间（发酵培养6-9小时）时，启动中空纤维柱截流***进行浓缩补料培养，灌流流速20 mL/min，循环流速为灌流流速的10倍，每隔2 h取样检测。本实施例的补料培养基为普通MRS培养基。

发酵液中的活菌数测定结果如表1所示。

表1 不同氮源对植物乳植杆菌生长的影响

表中的小写字母，相同字母表示差异不显著，不同则差异显著。

结果显示，马铃薯蛋白胨替换MRS培养基中不同氮源后对发酵液活菌数有显著影响（p<0.05）。其中采用25 g/L马铃薯蛋白胨作为氮源对发酵液活菌数提升明显，可达约10¹¹CFU/mL，相对于MRS培养基原氮源（胰蛋白胨+牛肉膏+酵母膏）发酵液活菌数提升了约12.2倍。

因此，本发明选择将马铃薯蛋白胨作为优化培养基中的氮源。优化培养基组分：马铃薯蛋白胨20-30 g/L、柠檬酸钠1.0-3.0 g/L、葡萄糖18.0-22.0 g/L、KH₂PO₄1.0-3.0 g/L、乙酸钠4.0-6.0 g/L、吐温-80 0.5-1.5 mL/L、七水硫酸镁0.20-0.60 g/L、硫酸锰0.10-0.30 g/L。

实施例2 采用优化培养基灌流浓缩培养植物乳杆菌H6

2.1 菌株活化

将从-80℃取出预先冻存的植物乳植杆菌H6，用接种环挑取少量菌液于MRS固体培养基中划线，将平板置于37℃恒温培养箱中培养24 h，挑取单菌落，接种于5 mL MRS液体培养基中，在恒温37℃静置厌氧活化培养16 h，按照5%接种量将活化后的植物乳植物杆菌的菌液接种于摇瓶中，在恒温37℃中扩大培养10 h，用于灌流培养的种子液。

本实施例的优化培养基的组分：

马铃薯蛋白胨28 g/L、柠檬酸钠2.5 g/L、葡萄糖22.0 g/L、KH₂PO₄3.0 g/L、乙酸钠5.5 g/L、吐温-80 1.5 mL/L、七水硫酸镁0.60 g/L、硫酸锰0.30 g/L。

2.2 灌流浓缩发酵

种子液以5%的接种量分别接种到装有15 L优化培养基的发酵罐中，培养基初始pH为6.5。将溶氧与通气关联，发酵温度恒温37℃，溶氧15%，搅拌转速200 rpm，通过NaOH保持发酵液恒定pH。当菌株发酵达对数生长期间（发酵培养6-9小时）时，启动中空纤维柱截流***进行浓缩补料培养，灌流流速20 mL/min，循环流速为灌流流速的10倍，每隔2 h取样检测。补料培养基成分：400 g/L葡萄糖，300 g/L马铃薯蛋白胨。

活菌数测定结果显示，发酵液中的活菌数可达9.4×10¹⁰CFU/mL。

实施例3 采用优化培养基灌流浓缩培养植物乳杆菌SG5

本实施例的菌株活化同实施例2。

本实施例的优化培养基组分：

马铃薯蛋白胨20 g/L、柠檬酸钠1.0-3.0 g/L、葡萄糖18.0-22.0 g/L、KH₂PO₄1.0-3.0 g/L、乙酸钠4.0-6.0 g/L、吐温-80 0.5-1.5 mL/L、七水硫酸镁0.20-0.60 g/L、硫酸锰0.10-0.30 g/L。

将种子液以5%的接种量接种到装有15 L优化培养基的发酵罐中，培养基初始pH为6.5。发酵温度恒温37℃，搅拌转速80 rpm，通过NaOH保持发酵液恒定pH。当菌株发酵达对数生长期间（发酵培养6-9小时）时，启动中空纤维柱截流***进行浓缩补料培养，灌流流速20mL/min，循环流速为灌流流速的10倍，每隔2 h取样检测。

补料培养基成分：350 g/L葡萄糖，350 g/L马铃薯蛋白胨。

活菌数测定结果显示，发酵液中的活菌数可达9.2×10¹⁰CFU/mL。

对比例1

发明人创造性地选择马铃薯蛋白胨作为发酵培养基的氮源，显著促进了发酵液活菌数的提升。为了体现本发明氮源的优越性，本对比例选择了其他非动物来源的蛋白胨进行对比试验。

本对比例采用不同植物来源蛋白胨替代MRS培养基中的氮源：

25 g/L马铃薯蛋白胨；

25 g/L大豆蛋白胨；

25 g/L花生粕蛋白胨；

25 g/L油菜籽蛋白胨。

菌株活化和灌流浓缩培养同实施例2。

结果显示，采用马铃薯蛋白胨作为氮源明显优于其他植物来源蛋白胨和MRS培养基中的普通氮源，发酵液中活菌数最高可达10¹¹CFU/mL（图1和图2）。发明人还意外地发现，采用马铃薯蛋白胨作为氮源显著缩短了发酵时间。现有技术中采用浓缩灌流培养往往需要发酵25-30 h才能达到最高活菌数，而本发明采用马铃薯蛋白胨作为氮源进行发酵，将发酵时间缩短至20 h左右，在20 h左右即可达到发酵液的最高活菌数。

最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.一种发酵植物乳植杆菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（2）将所述种子液接种到装有优化培养基的发酵罐中进行灌流浓缩培养；

所述优化培养基的氮源为马铃薯蛋白胨；

所述优化培养基的组分包括：

马铃薯蛋白胨20-30 g/L、柠檬酸钠1.0-3.0 g/L、葡萄糖18.0-22.0 g/L、KH₂PO₄ 1.0-3.0 g/L、乙酸钠4.0-6.0 g/L、吐温-80 0.5-1.5 mL/L、七水硫酸镁0.20-0.60 g/L、硫酸锰0.10-0.30 g/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述种子液的培养包括：

2）将所述一级培养物转接到优化培养基中进行二级培养，得到种子液；

其中，步骤（2）中所述种子液的接种量为5%-7%；

步骤（2）中所述优化培养基的pH为6.0-6.5。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述灌流浓缩培养的条件包括：

（ⅰ）恒温36-37℃；

（ⅱ）搅拌转速50-100 rpm；

（ⅲ）加入中和剂以维持恒定pH为6.0-6.5。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述中和剂包括Na₂CO₃、氨水或NaOH。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述灌流浓缩培养还包括浓缩补料培养，其包括以下条件：

ⅰ）灌流流速20-30 mL/min；

ⅱ）循环流速为灌流流速的10倍；

6.一种优化培养基，其特征在于，所述优化培养基包括以下组分：

马铃薯蛋白胨20-30 g/L、柠檬酸钠1.0-3.0 g/L、葡萄糖18.0-22.0 g/L、KH₂PO₄1.0-3.0 g/L、乙酸钠4.0-6.0 g/L、吐温-80 0.5-1.5 mL/L、七水硫酸镁0.20-0.60 g/L、硫酸锰0.10-0.30 g/L。

7.根据权利要求1-5中任一所述的方法所得的植物乳植杆菌发酵物、或植物乳植杆菌或其培养物经权利要求6所述的优化培养基培养所得的植物乳植杆菌发酵物在制备益生菌制品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述益生菌制品还包含食品上可接受的辅料，所述辅料包括赤藓糖醇、D-甘露糖醇、富马酸、甘油、果胶、海藻酸钾、海藻酸钠、滑石粉、焦磷酸钠、聚葡萄糖、卡拉胶、抗坏血酸钠、抗坏血酸棕榈酸酯、L-苹果酸、L(+)-酒石酸、麦芽糖醇、明胶、木糖醇、柠檬酸、柠檬酸钾、柠檬酸钠、柠檬酸脂肪酸甘油酯、琼脂、乳酸、乳酸钠、山梨酸及其钾盐、山梨糖醇、酸性红、碳酸钙、碳酸钠、碳酸氢钠、甜菜红、维生素C、维生素E、氧化淀粉、乙醇、乙酸钠、硬脂酸、硬脂酸钙、硬脂酸镁或糊精；

和/或，所述益生菌制剂的剂型包括液态制剂、固态制剂、半固态制剂或气态制剂；

和/或，所述益生菌制剂包括调制乳、灭菌乳、发酵乳、炼乳、奶油、稀奶油、无水奶油、浓缩乳、复合蛋白饮料、咖啡饮料、植物饮料、风味饮料、运动饮料、营养素饮料、能量饮料、电解质饮料、全脂乳粉、脱脂乳粉、部分脱脂乳粉、调制乳粉、乳清粉、干酪、再制干酪、雪糕、雪泥、冰棍、食用冰、甜味冰或冰淇淋。