CN116987761A - 生物样本处理液、生物样本真菌检测试剂盒及它们的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及真菌检测技术，公开了一种生物样本处理液、生物样本真菌检测试剂盒及它们的应用。该生物样本处理液含有还原剂、蛋白溶解剂、细胞裂解剂、密度调节剂和水，其中，所述细胞裂解剂含有十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚。生物样本真菌检测试剂盒含有上述的生物样本处理液。生物样本中真菌检测的方法包括以下步骤：将待测生物样本与上述的生物样本处理液混合进行孵育得到待测液；将所述待测液经液基薄层制片后进行荧光染色、荧光镜检。该处理液对真菌的检测灵敏度高，操作简便，能适用于多种体液样本。

Description

生物样本处理液、生物样本真菌检测试剂盒及它们的应用
技术领域
本发明涉及真菌检测技术，具体地，涉及一种生物样本处理液、生物样本真菌检测试剂盒及它们的应用。
背景技术
真菌容易引起真菌感染，包括浅表真菌病和深部真菌病。浅表真菌病是指由病原真菌所引起的人类皮肤以及粘膜、毛发和指甲等附属器官的一大类感染性疾病，如头癣、手足癣、甲癣等。深部真菌病是指致病性真菌侵犯深部组织、内脏、血液等器官和***，也成侵袭性真菌病，严重危及患者健康的疾病。
取决于致病真菌的种类，有多种检验方法可用于侵袭性真菌病的诊断，包括血培养法、涂片染色法(包括革兰氏染色、KOH压片、六胺银染色、过碘酸雪夫染色、墨汁染色、真菌荧光染色)、免疫检测法(G试验、GM试验、隐球菌荚膜抗原检测、曲霉IgG检测)和分子检测。其中，血培养法是侵袭性真菌病检测的金标准，灵敏度可达1CFU/mL，但需要至少2-3天的时间，对于部分真菌甚至需要2-3周的时间。免疫检测法仅在真菌感染较为严重，向体液中释放了较多真菌物质或引发免疫反应后才能够检测。分子检测操作较为复杂，仅能对真菌进行针对性的检测(需要匹配对应的检测引物)，且对于真菌浓度低的样本容易造成假阳性或假阴性的结果。涂片染色法是快速、直观检测样本真菌的方法，且不受真菌种类的限制，尤其真菌荧光染色法是一种高效快速、特异性高、敏感型腔且较传统染色法更为精准的一种方法。真菌荧光染色液主要由荧光增白剂28、伊文思蓝、氢氧化钾和细胞穿透成分(二甲基亚砜、甘油等)组成；氢氧化钾和细胞穿透成分可以软化、穿透样本，使荧光染料能够接触到样本内部的真菌；荧光增白剂28能够与各种真菌细胞壁上的多糖、几丁质结合，在紫外光(340-380nm)激发下发出亮蓝色荧光，从而显示出清晰的真菌结构；伊文思蓝能够抑制背景荧光和非特异性的荧光染色，增强真菌染色的对比度。
目前真菌荧光染色主要应用于浅表性真菌感染，因其样本容易获得(指甲屑、表皮、***分泌物)且真菌数量较多，容易在镜下识别。而侵袭性真菌病的样本通常含有的真菌浓度较低，甚至低于10CFU/mL，此种情况下使用常规镜检法无法有效进行检测，且镜检法使用的样本量通常不超过100μL，每份镜检样本中的真菌会低于1CFU，难以在显微镜下找到并与杂质相区分。此外，对于血液或痰液、肺泡灌洗液等样本检测，样本中的细胞、组织碎片等杂志会对真菌检测带来严重的干扰，使镜检法无法检测真菌含量较低的体液样本。
针对侵袭性真菌病的样本的荧光染色检测，虽然已开发出多种样本富集及制片方法，但是仍存在对样本中真菌的富集作用有限、适用的样本种类较少、处理及检测过程繁琐等缺陷，以致于难以实现低浓度侵袭性真菌样本的检测。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的难以实现低浓度侵袭性真菌样本检测的问题，提供一种生物样本处理液、生物样本真菌检测试剂盒及它们的应用，该处理液对真菌的检测灵敏度高，操作简便，能适用于多种体液样本。
为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种生物样本处理液，该生物样本处理液含有还原剂、蛋白溶解剂、细胞裂解剂、密度调节剂和水，其中，所述细胞裂解剂含有十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚。
优选地，所述细胞裂解剂中十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚的重量比为0.2-15:0.2-2:1，更优选为0.5-10:0.5-1:1。
优选地，该生物样本处理液中所述还原剂的含量为5-25mM，优选为8-20mM；所述蛋白溶解剂的含量为1-8重量％，优选为2-5重量％；所述细胞裂解剂的含量为0.3-3重量％，优选为1-3重量％；所述密度调节剂的含量为20-50重量％，优选为30-40重量％。
优选地，所述还原剂选自β-巯基乙醇、二硫苏糖醇、N-乙酰半胱氨酸和三(2-羧乙基)膦中的至少一种。
优选地，所述蛋白溶解剂为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
优选地，所述密度调节剂选自甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中的至少一种。
本发明第二方面提供一种生物样本真菌检测试剂盒，该试剂盒含有上述的生物样本处理液。
优选地，该试剂盒还含有吸附载玻片和真菌荧光染色液。
优选地，所述吸附载玻片为阳离子吸附载玻片，所述真菌荧光染色液为化学染色液和/或免疫染色液。
本发明第三方面提供上述的生物样本处理液和/或上述的生物样本真菌检测试剂盒在制备真菌检测产品中的应用。
本发明第四方面提供一种生物样本中真菌检测的方法，该方法包括以下步骤：
S1、将待测生物样本与上述的生物样本处理液混合进行孵育得到待测液；
S2、将所述待测液经液基薄层制片后进行荧光染色、荧光镜检。
优选地，步骤S1中，所述待测生物样本与所述生物样本处理液的体积比为1:0.5-3。
优选地，所述孵育的条件至少包括：温度为5-40℃，时间为20-40min。
优选地，步骤S2中，所述液基薄层制片的过程包括：将所述待测液经沉降至载玻片上得到玻片样本，其中，所述沉降的方式采用离心沉降、自然沉降或者膜过滤。
优选地，所述载玻片采用阳离子吸附载玻片，所述离心沉降采用离心制片机进行，所述膜过滤采用孔径为4-6μM的滤膜。
优选地，所述离心沉降或者所述自然沉降的时间为20-60min。
优选地，所述荧光染色采用化学染色液和/或免疫染色液，所述荧光镜检采用荧光显微镜和荧光摄像软件进行。
通过上述技术方案，本发明的有益效果为：
本发明提供的生物样本处理液将十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚相配伍作为细胞裂解剂，能够高效裂解样本中含有的细胞、组织碎片，释放出存在于细胞内部的真菌，并去除干扰检测制片的非真菌有形物质；该细胞裂解剂与还原剂、蛋白溶解剂、密度调节剂形成的处理液，不仅实现生物样本仅需一步处理即可制片用于真菌荧光检测，操作简便，而且对真菌的富集效果佳，能够检测低浓度的真菌样本，最低检测限可达10CFU/mL；该处理液可处理血液、痰液、支气管灌洗物、胸腹水、脓液和创伤感染组织、脑脊液、关节液、***分泌物或尿液等多种体液样本，适用的样本类型广泛。
附图说明
图1是实施例1中血液样本1的曲霉菌染色局部镜检图。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明第一方面提供一种生物样本处理液，该生物样本处理液含有还原剂、蛋白溶解剂、细胞裂解剂、密度调节剂和水，其中，所述细胞裂解剂含有十二烷基硫酸钠(SDS)、脱氧胆酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)。
本发明的发明人在针对体液中真菌检测的研究过程中，意外地发现，在将十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚三者相配伍作为细胞裂解剂时，能够高效裂解生物样本中含有的细胞、组织碎片，释放出存在于细胞内部的真菌，并去除样本中除真菌外的所有人源有形成分等非真菌有形物质，避免了低浓度真菌检测时样本杂质带来的干扰；该细胞裂解剂进一步与还原剂、蛋白溶解剂、密度调节剂混合形成处理液，利用还原剂和蛋白溶解剂打开生物样本中蛋白间的二硫键并水解蛋白质，使痰液、脓液等粘稠样本液化，密度调节剂可降低处理后样本的密度，使真菌细胞及孢子能够全部富集沉淀制片；不仅实现生物样本仅需一步处理即可制片用于真菌荧光检测，操作简便，而且对真菌的富集效果佳，能够检测低浓度的真菌样本，提高真菌检测的灵敏度；该处理液可处理血液、痰液、支气管灌洗物、胸腹水、脓液和创伤感染组织、脑脊液、关节液、***分泌物或尿液等多种体液样本，适用的样本类型广泛。
本发明中，生物样本处理液的制备方法采用常规的试剂溶液配制方法，例如，可以是将还原剂、蛋白溶解剂、细胞裂解剂、密度调节剂和水直接进行混合；也可以是先将还原剂、蛋白溶解剂、细胞裂解剂、密度调节剂和水中的一部分混合，再与另一部分进行混合。
根据本发明，优选地，所述细胞裂解剂中十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚的重量比为0.2-15:0.2-2:1，更优选为0.5-10:0.5-1:1。发明人发现，在该优选的实施方式下，对细胞的裂解效果更佳，且能够更好地去除干扰制片的非真菌有形物质。
根据本发明，优选地，该生物样本处理液中所述还原剂的含量为5-25mM，更优选为8-20mM；所述蛋白溶解剂的含量为1-8重量％，优选为2-5重量％；所述细胞裂解剂的含量为0.3-3重量％，更优选为1-3重量％；所述密度调节剂的含量为20-50重量％，更优选为30-40重量％。发明人发现，在该优选的实施方式下，生物样本处理液为低密度液体，能够在制片时为真菌细胞沉降提供有利的环境，从而提高对真菌的富集效果。
根据本发明，所述还原剂可以采用生物样本检测领域内常规的具有还原效果的物质，优选地，所述还原剂选自β-巯基乙醇、二硫苏糖醇、N-乙酰半胱氨酸和三(2-羧乙基)膦(TCEP)中的至少一种。发明人发现，在该优选的实施方式下，有利于进一步提高检测低浓度的真菌样本的灵敏率。
根据本发明，所述还原剂可以采用生物样本检测领域内常规的具有溶解蛋白效果的物质，优选地，所述蛋白溶解剂为氢氧化钠和/或氢氧化钾。发明人发现，在该优选的实施方式下，有利于提升对真菌的富集效果，提高检测低浓度的真菌样本的灵敏率。
根据本发明，所述还原剂可以采用生物样本检测领域内常规的能够调节密度的物质，优选地，所述密度调节剂选自甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中的至少一种。发明人发现，在该优选的实施方式下，有利于将生物样本处理液调节为低密度液体，在制片时为真菌细胞沉降提供有利的环境，从而提高对真菌的富集效果和检测灵敏度。
上述物质可以通过商购获得。
本发明第二方面提供一种生物样本真菌检测试剂盒，该试剂盒含有上述的生物样本处理液。
本发明中，生物样本真菌检测试剂盒可以仅含有上述的生物样本处理液，也可以根据该试剂盒所适用的真菌检测方法，配置生物样本处理液以及其它相应的检测试剂、耗材等。
根据本发明，生物样本真菌检测试剂盒用于液基薄层涂片检测时，该试剂盒还含有吸附载玻片和真菌荧光染色液；进一步地，该试剂盒还含有离心沉淀制片组合等耗材。
本发明中，所述吸附载玻片可以选用常规的试验用载玻片，并配有相应的盖玻片；优选地，所述吸附载玻片为阳离子吸附载玻片。
本发明中，所述真菌荧光染色液可以采用常规的真菌染色方法，以能够对载玻片上的真菌进行染色鉴别即可。优选地，所述真菌荧光染色液为化学染色液和/或免疫染色液。
本发明第三方面提供上述的生物样本处理液和/或上述的生物样本真菌检测试剂盒在制备真菌检测产品中的应用。
本发明中，制备的真菌检测产品可以是单独的试剂盒，也可以是与离心制片机、荧光显微镜等真菌检测所采用的设备或仪器相配套的检测产品。
本发明第四方面提供一种生物样本中真菌检测的方法，该方法包括以下步骤：
S1、将待测生物样本与上述的生物样本处理液混合进行孵育得到待测液；
S2、将所述待测液经液基薄层制片后进行荧光染色、荧光镜检。
基于本发明上述提供的生物样本处理液，实现生物样本仅需一步处理即可制片用于真菌荧光检测，操作简便，而且对真菌的富集效果佳，能够检测低浓度的真菌样本。该方法可应用于血液、痰液、支气管灌洗物、胸腹水、脓液和创伤感染组织、脑脊液、关节液、***分泌物或尿液等多种体液样本中的真菌检测，适用范围广泛。
针对生物样本的真菌检测一般以检出为标准，考虑到所用耗材及试剂非洁净生产，一般检出3个或以上为阳性。
根据本发明，步骤S1中，如待测生物样本为创伤感染组织或者***分泌物等非液态样本，可将蘸取非液态样本的拭子直接浸入到2-5mL所述生物样本处理液中，搅拌10-60s确保拭子上的生物样本充分释放到生物样本处理液中。如待测生物样本为液态样本，可将液态样本直接与所述生物样本处理液混合，优选地，所述待测生物样本与所述生物样本处理液的体积比为1:0.5-3。
根据本发明，优选地，所述孵育的条件至少包括：温度为5-40℃，具体可以为5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃，或者上述两个数值之间的任意值；时间为20-40min，具体可以为20min、25min、30min、35min、40min，或者上述两个数值之间的任意值。发明人发现，在该优选的实施方式下，有利于提高对生物样本的处理效果，去除非真菌有形物质对真菌检测的干扰。
根据本发明，所述液基薄层制片可以采用常规的方式，优选地，步骤S2中，所述液基薄层制片的过程包括：将所述待测液经沉降至载玻片上得到玻片样本，其中，所述沉降的方式采用离心沉降、自然沉降或者膜过滤。
根据本发明，优选地，所述载玻片采用阳离子吸附载玻片，所述离心沉降采用离心制片机进行。示例性地，离心沉降可以使用KRD-12离心制片机及配套离心沉降法制片仓、阳离子吸附载玻片进行制片。
根据本发明，优选地，所述膜过滤采用孔径为4-6μM的滤膜，防止直径较小的球状真菌流过滤膜，导致检测灵敏度变差，无法检测低浓度的真菌样本。
根据本发明，优选地，所述离心沉降或者所述自然沉降的时间为20-60min，具体可以为20min、30min、40min、50min、60min，或者上述两个数值之间的任意值。
根据本发明，所述荧光染色可以采用常规的真菌检测荧光染色方式，优选地，所述荧光染色采用化学染色液和/或免疫染色液。示例性地，所述荧光染色液由以下原料按照重量百分比混合而成：荧光增白剂0.001-0.005％、氢氧化钾5-15％、二甲基亚砜2-6％、氯化钠2-5％、甘油5-15％、伊文思蓝0.01-0.05％，余量为纯化水；又例如，所述荧光染色液由以下原料按照重量份混合而成：苯酚5-12份、乙二醇20-40份、PBS缓冲液100-200份、藻蓝蛋白或藻红蛋白30-50份和去离子水100-200份。
本发明中，所述荧光镜检采用荧光显微镜和荧光摄像软件进行。
根据本发明一种特别优选的实施方式，生物样本中真菌检测的方法包括以下步骤：
S1、将还原剂、蛋白溶解剂、细胞裂解剂、密度调节剂和水混合形成生物样本处理液，其中，细胞裂解剂含有十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚且三者的重量比为0.2-15:0.2-2:1，生物样本处理液中还原剂的含量为5-25mM，蛋白溶解剂的含量为1-8重量％，细胞裂解剂的含量为0.3-3重量％，密度调节剂的含量为20-50重量％；
将待测生物样本与生物样本处理液以体积比为1:0.5-3混合，在温度为5-40℃条件下进行孵育20-40min得到待测液；
S2、将所述待测液经离心沉降20-60min至载玻片上得到玻片样本，将玻片样本进行荧光染色后，使用常规荧光显微镜及荧光摄像软件进行镜检。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
以下实施例中，十二烷基硫酸钠(SDS)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司、产品编号为S108349，脱氧胆酸钠购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司、产品编号为S104198，聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司、产品编号为T109026，β-巯基乙醇购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司、产品编号为M301573，二硫苏糖醇购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司、产品编号为D265376，N-乙酰半胱氨酸购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司、产品编号为A105420，三(2-羧乙基)膦(TCEP)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司、产品编号为T107252，NP-40购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司、产品编号为N274337；在无特殊说明的情况下，其余试剂或原料均为常规的生化试剂级产品。
以下实施例中，离心制片机购自深圳康瑞德医疗科技有限公司、型号为KRD-12，荧光显微镜购自广州明美光电技术有限公司、型号为MF-31，荧光摄像软件购自广州明美光电技术有限公司、软件名称为皮肤真菌镜检测***(版本号v1.0)，阳离子吸附玻片购自江苏世泰实验器材有限公司、型号为液基载玻片(LBC系列)。
以下实施例中，真菌荧光染色液由以下原料按照重量百分比混合而成：荧光增白剂0.005％、氢氧化钾5％、二甲基亚砜5％、氯化钠2％、甘油5％、伊文思蓝0.05％，余量为纯化水。
在无特殊说明的情况下，室温为25±5℃。
实施例1
取10例经血液培养检定为阳性的血液样本，血液培养获得的真菌浓度为10-50CFU/mL，具体表1。
采用本发明提供的方法进行真菌检测的过程如下：
S1、配制生物样本处理液，其配方为：二硫苏糖醇10mM、氢氧化钠4重量％、SDS1重量％、脱氧胆酸钠1重量％、Triton X-100 1重量％、乙醇40重量％、余量为水；将1mL生物样本处理液与1mL血液样本混合，室温震荡孵育30min得到待测液；
S2、将待测液使用KRD-12离心制片机及配套离心沉降法制片仓、阳离子吸附玻片进行液基薄层制片得到玻片样本，离心制片时间为30min；将玻片样本采用真菌荧光染色液进行染色，染色后使用荧光显微镜及荧光摄像软件进行镜检，获得10例血液样本均为阳性，并确定血液样本中的真菌数量，结果见表1，其中，血液样本1的曲霉菌染色局部镜检图片如图1所示。
表1
编号 血液培养检测真菌数量CFU/mL 实施例1检测到的真菌数量CFU/mL
1 18 10
2 22 12
3 15 11
4 39 29
5 41 31
6 33 21
7 42 36
8 25 22
9 21 17
10 30 20
实施例2
取12例经痰培养检定为阳性的痰液样本，痰培养获得的真菌浓度为10-103CFU/mL，具体表2。
采用本发明提供的方法进行真菌检测的过程如下：
S1、配制生物样本处理液，其配方为：二硫苏糖醇10mM、TCEP 10mM、氢氧化钠2重量％、SDS 0.5重量％、脱氧胆酸钠0.5重量％、Triton X-100 1重量％、甲醇30重量％、余量为水；将3mL生物样本处理液与1mL痰液样本混合，室温震荡孵育20min得到待测液；
S2、将待测液使用KRD-12离心制片机及配套离心沉降法制片仓、阳离子吸附玻片进行液基薄层制片得到玻片样本，离心制片时间为20min；将玻片样本采用真菌荧光染色液进行染色，染色后使用荧光显微镜及荧光摄像软件进行镜检，获得12例痰样本均为阳性，并确定痰样本中的真菌数量，结果见表2。
表2
编号 痰培养检测真菌数量CFU/mL 实施例2检测到的真菌数量CFU/mL
1 5×10 3×10
2 1×103 5×102
3 2×102 1×102
4 5×102 2×102
5 5×102 3×102
6 1×103 6×102
7 4×102 2×102
8 8×102 5×102
9 5×102 4×102
10 1×102 6×10
11 1×103 6×102
12 5×102 4×102
实施例3
取10例经培养检定为阳性的脑脊液样本，培养获得的真菌浓度为10-30CFU/mL，具体表3。
采用本发明提供的方法进行真菌检测的过程如下：
S1、配制生物样本处理液，其配方为：β-巯基乙醇4mM、TCEP 4mM、氢氧化钾5重量％、SDS1重量％、脱氧胆酸钠0.1重量％、Triton X-100 0.1重量％、乙醇35重量％、余量为水；将1mL生物样本处理液与1mL脑脊液样本混合，室温震荡孵育40min得到待测液；
S2、将待测液使用KRD-12离心制片机及配套离心沉降法制片仓、阳离子吸附玻片进行液基薄层制片得到玻片样本，离心制片时间为60min；将玻片样本采用真菌荧光染色液进行染色，染色后使用荧光显微镜及荧光摄像软件进行镜检，获得10例脑脊液样本均为阳性，并确定脑脊液样本中的真菌数量，结果见表3。
表3
编号 培养检测真菌数量CFU/mL 实施例3检测到的真菌数量CFU/mL
1 26 18
2 12 8
3 30 20
4 28 22
5 14 9
6 11 6
7 21 15
8 10 5
9 17 12
10 24 15
实施例4-实施例16
按照实施例1的方法进行血液样本(表1中样本编号为1)的真菌检测，不同的是，生物样本处理液中各组分的含量如表4-表6所示，检测真菌的数量结果见表7。
表4
表5
表6
对比例1-对比例5
按照实施例1的方法进行血液样本(表1中编号为1)的真菌检测，不同的是，生物样本处理液中各组分的含量如表6所示，检测真菌的数量结果见表7。
表7
编号 真菌数量CFU/mL 编号 真菌数量CFU/mL 编号 真菌数量CFU/mL
实施例1 10 实施例10 2 对比例1 0
实施例4 5 实施例11 4 对比例2 0
实施例5 5 实施例12 3 对比例3 0
实施例6 3 实施例13 4 对比例4 0
实施例7 3 实施例14 2 对比例5 0
实施例8 4 实施例15 4
实施例9 5 实施例16 4
通过表7的结果可以看出，实施例采用本发明提供的生物样本处理液，将十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚三者相配伍作为细胞裂解剂，与还原剂、蛋白溶解剂、密度调节剂配合，不仅实现生物样本仅需一步处理即可制片用于真菌荧光检测，操作简便，而且对真菌的富集效果佳，能够检测低浓度的真菌样本，提高真菌检测的灵敏度，适用范围广。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种生物样本处理液，其特征在于，该生物样本处理液含有还原剂、蛋白溶解剂、细胞裂解剂、密度调节剂和水，其中，所述细胞裂解剂含有十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚。
2.根据权利要求1所述的生物样本处理液，其特征在于，所述细胞裂解剂中十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚的重量比为0.2-15:0.2-2:1，优选为0.5-10:0.5-1:1。
3.根据权利要求1或2所述的生物样本处理液，其特征在于，该生物样本处理液中所述还原剂的含量为5-25mM，优选为8-20mM；所述蛋白溶解剂的含量为1-8重量％，优选为2-5重量％；所述细胞裂解剂的含量为0.3-3重量％，优选为1-3重量％；所述密度调节剂的含量为20-50重量％，优选为30-40重量％。
4.根据权利要求1或2所述的生物样本处理液，其特征在于，所述还原剂选自β-巯基乙醇、二硫苏糖醇、N-乙酰半胱氨酸和三(2-羧乙基)膦中的至少一种；
优选地，所述蛋白溶解剂为氢氧化钠和/或氢氧化钾；
优选地，所述密度调节剂选自甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中的至少一种。
5.一种生物样本真菌检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有权利要求1至4中任意一项所述的生物样本处理液。
6.根据权利要求5所述的生物样本真菌检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还含有吸附载玻片和真菌荧光染色液；
优选地，所述吸附载玻片为阳离子吸附载玻片，所述真菌荧光染色液为化学染色液和/或免疫染色液。
7.权利要求1至4中任意一项所述的生物样本处理液和/或权利要求5或6所述的生物样本真菌检测试剂盒在制备真菌检测产品中的应用。
8.一种生物样本中真菌检测的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
S1、将待测生物样本与权利要求1至4中任意一项所述的生物样本处理液混合进行孵育得到待测液；
S2、将所述待测液经液基薄层制片后进行荧光染色、荧光镜检。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述待测生物样本与所述生物样本处理液的体积比为1:0.5-3；
优选地，所述孵育的条件至少包括：温度为5-40℃，时间为20-40min。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述液基薄层制片的过程包括：将所述待测液经沉降至载玻片上得到玻片样本，其中，所述沉降的方式采用离心沉降、自然沉降或者膜过滤；
优选地，所述载玻片采用阳离子吸附载玻片，所述离心沉降采用离心制片机进行，所述膜过滤采用孔径为4-6μM的滤膜；
优选地，所述离心沉降或者所述自然沉降的时间为20-60min；
优选地，所述荧光染色采用化学染色液和/或免疫染色液，所述荧光镜检采用荧光显微镜和荧光摄像软件进行。
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