CN116875477B - 一种植物乳杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于益生菌的制备领域,具体涉及一种植物乳杆菌及其应用。所述植物乳杆菌已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCC NO.25223,分类命名为Lactobacillus plantarum BHP03。本发明制得的植物乳杆菌具有降胆固醇、降血脂的作用。
Description
技术领域
本发明属于益生菌的制备领域,具体涉及一种植物乳杆菌及其应用。
背景技术
乳酸菌是一类能利用碳水化合物产生乳酸的非病原性、革兰氏阳性细细菌的通称,被认为具有抗突变和抗癌活性、增强免疫反应和抑制病原体的特性。高脂血症是指血脂水平过高,可直接引起一些严重危害人体健康的疾病,如动脉粥样硬化、冠心病、胰腺炎等。许多研究报告了乳酸菌在降低血脂胆固醇方面的作用,一些新的生物学观点也为预防和治疗心血管疾病提供新靶点,乳酸菌可能成为预防/治疗心血管疾病的天然辅助剂。植物乳杆菌作为乳酸菌的一种,已有许多植物乳杆菌降低高脂血症小鼠血清总胆固醇和甘油三酯水平的报道,多方印证了植物乳杆菌于降低心血管疾病风险中的重要作用。
乳酸菌降脂有以下几种作用方式:(1)抑制脂肪酶活性。当人体摄入的食物进入肠道后,肠道中的胰脂肪酶将脂肪分解为单酰甘油与游离的脂肪酸,导致血脂升高,一些乳酸菌通过抑制脂肪酶的活性,减少机体对脂肪的消化与吸收,可以有效改善肥胖与高血脂等症状,达到降血脂的目的。(2)降低胆固醇含量。研究表明,厌氧条件下,部分乳酸菌在胆固醇-MRS固体培养基中生长时,菌株可将胆固醇以吸入细胞内的方式降低培养基中总胆固醇含量。(3)结合胆酸盐。酸性的环境下,胆固醇可与胆盐结合成沉淀,从而起到降胆固醇的作用。同时也有研究发现,乳酸菌代谢产生的胆盐水解酶(Bilesalthydrolase,BSH)可以将结合态的胆盐转变为游离态胆酸,而胆固醇与游离态胆酸可形成复合物被沉淀下来。
然而,目前市场上的乳酸菌对胆固醇的清除能力低,在人体肠道中耐受力差,降血脂的效果差,而且使得制得的益生菌等产品后,效果更是无法达到具备好的降血脂的效果,因此,现有技术需要进一步的改进。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有降胆固醇、降血脂的作用的植物乳杆菌及其应用。
一种植物乳杆菌,所述植物乳杆菌LactobacillusplantarumBHP03已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为
CGMCCNO.25223。
进一步的,所述的植物乳杆菌的16SrDNA全序列如SEQ ID No:1所示。
一种所述的植物乳杆菌的分离纯化的方法,由以下步骤制备而成:(1)取含有植物乳杆菌的样品,加入MRS培养基中,在35-38℃恒温摇床富集培养20-25h,吸取富集液1-2ml,用PBS无菌水稀释,在10-3、10-4、10-5梯度下各吸取100μL于MRS琼脂培养基平板中涂布、编号并记录,于厌氧箱35-38℃下倒置培养24-48h;(2)使用无菌接种挑取单个特征菌落于对应液体培养基中,35-38℃厌氧培养24-26h后,再使用无菌接种环再次沾取菌液平板划线,反复划线至同一平板中的菌落颜色、大小、形状均一致为止,将菌落移接至MRS液体培养基中培养,于已灭菌的甘油管中-18—-22℃保存,得分离纯化后的植物乳杆菌。
进一步的,所述的含有植物乳杆菌的样品与MRS液体培养基的质量体积比为1-2g:
100-200mL,所述的植物乳杆菌的样品中植物乳杆菌的质量浓度为1%-2%。
进一步的,所述的MRS培养基为MRS液体培养基培养,该液体培养基是通过每1L蒸馏水中加入以下原料制得,该原料为含酵母膏4-6g、蛋白胨8-12g、牛肉膏8-12g、葡萄糖18-22g、乙酸钠4-6g、柠檬酸二铵1-3g、K2HPO4·3H2O 2.65-2.69g、MnSO4·H2O 0.03-0.08g、MgSO40.043-0.049g、吐温80 1-2mL;该液体培养基培养的pH为6.2-6.8。
一种所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法,由以下步骤制备而成:
(1)将甘油管中分离纯化后保存的上述植物乳杆菌菌株在MRS琼脂平板上划线,挑取单菌落于MRS液体培养基中扩大培养18-20h,然后以2-3%接种量接种到液体MRS液体培养基中,于36-38℃培养16-20h,传2-3代后在3500-4500r/min,4-5℃条件下离心10-15min,离心后上清液过0.22-0.24μL滤膜除杂,得植物乳杆菌发酵上清液;(2)取离心后的沉淀用质量分数为0.8%-0.9%的无菌生理盐水清洗3-4次后进行重悬,统一调整菌悬液密度在0.8×108-1.2×108CFU/mL,所得即为植物乳杆菌的菌悬液。
一种由所述的植物乳杆菌制得的益生菌压片糖果,由以下原料重量份数制备而成:木糖醇50-80份、麦芽糊精10-15份、纳豆粉50-75份、低聚异麦糖10-20份、长双歧杆菌3-5份、嗜酸乳杆菌2-5份、植物乳杆菌8-15份、嗜热链球菌3-6份、柠檬酸0.5-1份、硬脂酸镁0.1-0.5份。
所述的益生菌压片糖果制备方法,由以下步骤制备而成:将长双歧杆菌粉、嗜酸乳杆菌粉、植物乳杆菌粉、嗜热链球菌菌粉与木糖醇、麦芽糊精、纳豆粉、低聚异麦糖、柠檬酸、硬脂酸镁混合后进入压片机压制成片。该益生菌压片糖果的质量为1g-1.5g。
本发明的植物乳杆菌具有降胆固醇、降血脂的作用,并且本发明的植物乳杆菌BHP03的菌悬液及发酵液均对牛磺胆酸纳和甘氨胆酸纳具有较强的结合能力,对胰脂肪酶有较好的抑制能力。此外,本发明的植物乳杆菌BHP03对于人体肠道具有良好的耐受性。使用本发明的植物乳杆菌BHP03制得的益生菌压片糖果具有有效改善脂肪肝,动脉硬化,高血脂症,还可以脑梗术后具有帮助患者恢复健康的作用。
附图说明
图1为本发明的SEQ ID No:1序列图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例1:
一种植物乳杆菌,所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)BHP03已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCC NO.25223。
所述的植物乳杆菌的16SrDNA全序列如SEQ ID No:1所示。
一种所述的植物乳杆菌的分离纯化的方法,由以下步骤制备而成:(1)取含有植物乳杆菌的样品,加入MRS培养基中,在35℃恒温摇床富集培养20h,吸取富集液1ml,用PBS无菌水稀释,在10-3、10-4、10-5梯度下各吸取100μL于MRS琼脂培养基平板中涂布、编号并记录,于厌氧箱35℃下倒置培养24h;(2)使用无菌接种挑取单个特征菌落于对应液体培养基中,35℃厌氧培养24h后,再使用无菌接种环再次沾取菌液平板划线,反复划线至同一平板中的菌落颜色、大小、形状均一致为止,将菌落移接至MRS液体培养基中培养,于已灭菌的甘油管中-18℃保存,得分离纯化后的植物乳杆菌。
所述的含有植物乳杆菌的样品与MRS液体培养基的质量体积比为1g:100mL,所述的植物乳杆菌的样品中植物乳杆菌的质量浓度为1%。
所述的MRS培养基为MRS液体培养基培养,该液体培养基是通过每1L蒸馏水中加入以下原料制得,该原料为含酵母膏4g、蛋白胨8g、牛肉膏8g、葡萄糖18g、乙酸钠4g、柠檬酸二铵1g、K2HPO4·3H2O 2.65g、MnSO4·H2O 0.03g、MgSO40.043 g、吐温80 1mL;该液体培养基培养的pH为6.2。
一种所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法,由以下步骤制备而成:
(2)将甘油管中分离纯化后保存的上述植物乳杆菌菌株在MRS琼脂平板上划线,挑取单菌落于MRS液体培养基中扩大培养18h,然后以2%接种量接种到液体MRS液体培养基中,于36℃培养16h,传2代后在3500r/min,4℃条件下离心10min,离心后上清液过0.22μL滤膜除杂,得植物乳杆菌发酵上清液;(2)取离心后的沉淀用质量分数为0.8%的无菌生理盐水清洗3次后进行重悬,统一调整菌悬液密度在0.8×108CFU/mL,所得即为植物乳杆菌的菌悬液。
一种由所述的植物乳杆菌制得的益生菌压片糖果,由以下原料重量份数制备而成:木糖醇50份、麦芽糊精10份、纳豆粉50份、低聚异麦糖10份、长双歧杆菌3份、嗜酸乳杆菌2份、植物乳杆菌8份、嗜热链球菌3份、柠檬酸0.5份、硬脂酸镁0.1份。
所述的益生菌压片糖果制备方法,由以下步骤制备而成:将长双歧杆菌粉、嗜酸乳杆菌粉、植物乳杆菌粉、嗜热链球菌菌粉与木糖醇、麦芽糊精、纳豆粉、低聚异麦糖、柠檬酸、硬脂酸镁混合后进入压片机压制成片。该益生菌压片糖果的质量为1g。
实施例2:
一种植物乳杆菌,所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)BHP03已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCC NO.25223。
所述的植物乳杆菌的16SrDNA全序列如SEQ ID No:1所示。
一种所述的植物乳杆菌的分离纯化的方法,由以下步骤制备而成:(1)取含有植物乳杆菌的样品,加入MRS培养基中,在36℃恒温摇床富集培养22h,吸取富集液1-2ml,用PBS无菌水稀释,在10-3、10-4、10-5梯度下各吸取100μL于MRS琼脂培养基平板中涂布、编号并记录,于厌氧箱37℃下倒置培养30h;(2)使用无菌接种挑取单个特征菌落于对应液体培养基中,36℃厌氧培养25h后,再使用无菌接种环再次沾取菌液平板划线,反复划线至同一平板中的菌落颜色、大小、形状均一致为止,将菌落移接至MRS液体培养基中培养,于已灭菌的甘油管中-20℃保存,得分离纯化后的植物乳杆菌。
所述的含有植物乳杆菌的样品与MRS液体培养基的质量体积比为1.5g:150mL,所述的植物乳杆菌的样品中植物乳杆菌的质量浓度为1.5%。
所述的MRS培养基为MRS液体培养基培养,该液体培养基是通过每1L蒸馏水中加入以下原料制得,该原料为含酵母膏5g、蛋白胨10g、牛肉膏10g、葡萄糖20g、乙酸钠5g、柠檬酸二铵2g、K2HPO4·3H2O 2.63g、MnSO4·H2O 0.05g、MgSO40.043-0.049g、吐温80 1.5mL;该液体培养基培养的pH为6.5。
一种所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法,由以下步骤制备而成:
(3)将甘油管中分离纯化后保存的上述植物乳杆菌菌株在MRS琼脂平板上划线,挑取单菌落于MRS液体培养基中扩大培养19h,然后以2-3%接种量接种到液体MRS液体培养基中,于36-38℃培养18h,传2代后在4000r/min,4℃条件下离心12min,离心后上清液过0.23μL滤膜除杂,得植物乳杆菌发酵上清液;(2)取离心后的沉淀用质量分数为0.85%的无菌生理盐水清洗3次后进行重悬,统一调整菌悬液密度在1×108CFU/mL,所得即为植物乳杆菌的菌悬液。
一种由所述的植物乳杆菌制得的益生菌压片糖果,由以下原料重量份数制备而成:木糖醇70份、麦芽糊精12份、纳豆粉70份、低聚异麦糖15份、长双歧杆菌4份、嗜酸乳杆菌3份、植物乳杆菌10份、嗜热链球菌5份、柠檬酸0.8份、硬脂酸镁0.4份。
所述的益生菌压片糖果制备方法,由以下步骤制备而成:将长双歧杆菌粉、嗜酸乳杆菌粉、植物乳杆菌粉、嗜热链球菌菌粉与木糖醇、麦芽糊精、纳豆粉、低聚异麦糖、柠檬酸、硬脂酸镁混合后进入压片机压制成片。该益生菌压片糖果的质量为1.2g。
实施例3:
一种植物乳杆菌,所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)BHP03已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCC NO.25223。
所述的植物乳杆菌的16SrDNA全序列如SEQ ID No:1所示。
一种所述的植物乳杆菌的分离纯化的方法,由以下步骤制备而成:(1)取含有植物乳杆菌的样品,加入MRS培养基中,在38℃恒温摇床富集培养25h,吸取富集液2ml,用PBS无菌水稀释,在10-3、10-4、10-5梯度下各吸取100μL于MRS琼脂培养基平板中涂布、编号并记录,于厌氧箱38℃下倒置培养48h;(2)使用无菌接种挑取单个特征菌落于对应液体培养基中,38℃厌氧培养26h后,再使用无菌接种环再次沾取菌液平板划线,反复划线至同一平板中的菌落颜色、大小、形状均一致为止,将菌落移接至MRS液体培养基中培养,于已灭菌的甘油管中-22℃保存,得分离纯化后的植物乳杆菌。
所述的含有植物乳杆菌的样品与MRS液体培养基的质量体积比为2g:200mL,所述的植物乳杆菌的样品中植物乳杆菌的质量浓度为2%。
所述的MRS培养基为MRS液体培养基培养,该液体培养基是通过每1L蒸馏水中加入以下原料制得,该原料为含酵母膏6g、蛋白胨12g、牛肉膏12g、葡萄糖22g、乙酸钠6g、柠檬酸二铵3g、K2HPO4·3H2O 2.69g、MnSO4·H2O 0.08g、MgSO40.049 g、吐温80 2mL;该液体培养基培养的pH为6.8。
一种所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法,由以下步骤制备而成:
(4)将甘油管中分离纯化后保存的上述植物乳杆菌菌株在MRS琼脂平板上划线,挑取单菌落于MRS液体培养基中扩大培养20h,然后以3%接种量接种到液体MRS液体培养基中,于38℃培养20h,传3代后在4500r/min,5℃条件下离心15min,离心后上清液过0.24μL滤膜除杂,得植物乳杆菌发酵上清液;(2)取离心后的沉淀用质量分数为0.9%的无菌生理盐水清洗4次后进行重悬,统一调整菌悬液密度在1.2×108CFU/mL,所得即为植物乳杆菌的菌悬液。
一种由所述的植物乳杆菌制得的益生菌压片糖果,由以下原料重量份数制备而成:木糖醇80份、麦芽糊精15份、纳豆粉75份、低聚异麦糖20份、长双歧杆菌5份、嗜酸乳杆菌5份、植物乳杆菌15份、嗜热链球菌6份、柠檬酸1份、硬脂酸镁0.5份。
所述的益生菌压片糖果制备方法,由以下步骤制备而成:将长双歧杆菌粉、嗜酸乳杆菌粉、植物乳杆菌粉、嗜热链球菌菌粉与木糖醇、麦芽糊精、纳豆粉、低聚异麦糖、柠檬酸、硬脂酸镁混合后进入压片机压制成片。该益生菌压片糖果的质量为1.5g。
本发明的植物乳杆菌还可以被用于制作益生菌混合粉、降血脂、降胆固醇类口服液、口服颗粒等其他产品。
试验例1:
植物乳杆菌BHP03耐模拟人工胃、肠液能力的测定:
人工胃液:将0.1mol/L磷酸钾缓冲液pH调至2.5,灭菌后加入胃蛋白酶10g使其充分溶解,使用前进行37℃预热。
人工肠液:将0.1mol/L磷酸钾缓冲液pH调至8.0后灭菌,加入胰蛋白酶(10g/L),猪胆盐(3g/L),混合使其充分溶解,得到模拟肠液。使用前进行37℃预热。
将本发明实施例1分离纯化后得到的BHP03植物乳杆菌活化2-3代后,以2%接种量接种至MRS液体培养基中,在37℃恒温摇床中培养18h,分别吸取1mL菌悬液接种到9mL人工胃液和人工肠液中,37℃分别孵育3h、4h后用平板计数法测定菌株的活菌数。按如下公式计算耐受率:
表1模拟胃液和肠液耐受能力
如表1所示,植物乳杆菌在pH2.5的模拟胃液中及含胆盐的pH8.0模拟肠液中,均表现出良好的耐受能力,且其在模拟肠液中耐受率显著高于阳性对照乳杆菌鼠李糖乳杆菌ATCC53103。实验表明,本发明中的植物乳杆菌具有良好的耐胃肠道逆环境性能。
试验例2:
胰脂肪酶抑制率的测定
在100mL锥形瓶中加入4mL聚乙烯醇三油酸甘油酯乳化液和5mLPBS,37℃水浴10min,预热后加入1mL样品于37℃放置10min,之后加入1mL2mg/mL胰脂肪酶(使用pH=7.4,0.025mol/LPBS溶液配制),放入37℃水浴锅中反应15min,反应结束后立刻加入15mL95%无水乙醇,终止酶反应,样品空白组先不加酶液,待反应15min结束立即加入95%乙醇
后再加入1mL胰脂肪酶液。加酚酞指示剂2滴,用0.05mol/L氢氧化钠滴定,直至微红色并保持30s不褪色为滴定终点,记录消耗氢氧化钠溶液的体积。使用如下公式计算剩余酶活:
式中:U-每克胰脂肪酶中所含酶活,IU;V样-样品组消耗NaOH溶液的体积,mL;V0-样品空白组消耗NaOH溶液的体积,mL;c-NaOH标准溶液的浓度,mol/L;w-胰脂肪酶的添加量,g;t-加入胰脂肪酶后的反应时间,min。
分别使用本发明中实施例1中所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法制得的植物乳杆菌菌悬液为样品1,菌悬液的浓度为1×108CFU/mL,另外,取鼠李糖乳杆菌ATCC53103菌悬液为样品2,该菌悬液的浓度1×108CFU/mL,使用以上方法测定并计算胰脂肪酶抑制率,结果如下表2所示:
表2胰脂肪酶抑制率
菌株 | 菌悬液抑制率(%) | 发酵上清液抑制率(%) |
植物乳杆菌BHP03 | 64.39±2.73%A | 67.5±2.50%a |
鼠李糖乳杆菌ATCC53103 | 56.82±1.31%A | 62.50±2.50%a |
胰脂肪酶是水解膳食脂肪最重要的酶,通过抑制胰脂肪酶活性,可使胰脂肪酶丧失部分分解能力,从源头上控制脂肪进入血液,从而降低脂肪的消化和吸收,起到降脂作用。如表2所示,与鼠李糖乳杆菌ATCC53103相比,植物乳杆菌BHP03对胰脂肪酶有更优的抑制作用,其中菌悬液的抑制率由56.82%提高到64.39%,发酵上清液抑制率提高了5%。因此,本发明中的植物乳杆菌具有优异的降脂功效。
试验例3:
结合胆酸盐能力的测定
将甘氨胆酸钠分别配制为0.03、0.06、0.09、0.12、0.18、0.24、0.3mmol/L的标准溶液;将牛磺胆酸钠分别配制为0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3mmol/L的标准溶液,现配现用。分别取2mL胆酸盐标准溶液于试管中,加入60%H2SO4于70℃水浴40min,取出冰浴5min,387nm处测定其吸光度。以溶液浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,分别绘制甘氨胆酸钠与牛磺胆酸钠的标准曲线图。
取3mL不同样品放入三角瓶中,加入3mL10g/L胃蛋白酶与1mL0.01mol/L盐酸,在37℃恒温振荡箱中振荡1h,模拟胃部消化;用0.1mol/LNaOH调节pH至6.3,加入4mL10g/L胰蛋白酶,在37℃恒温振荡箱中振荡1h,模拟肠消化。一份三角瓶加入4mL0.4mmol/L甘氨胆酸钠,另一份加入4mL0.5mmol/L牛磺胆酸钠,于37℃下恒温振荡1h,之后4000r/min离心20min,取上清液2mL,用硫酸比色法测定胆酸盐含量,计算如公式(2)和公式(3)所示:
式中:R1-甘氨胆酸钠结合能力,mmol/mL;N1-甘氨胆酸钠加入量,mmol;N2-甘氨胆酸钠剩余量,mmol;V1-样品加入体积,mL;A-样品稀释倍数;R2-牛磺胆酸钠结合能力,mmol/mL;N3-牛磺胆酸钠加入量,mmol;N4-牛磺胆酸钠剩余量,mmol;V2-样品加入体积,mL。(甘氨胆酸钠标准曲线:y=2.645x+0.0462,R2=0.9995;牛磺胆酸钠标准曲线:y=2.488x+0.0328,R2=0.9967。)
胆酸盐结合能力
分别使用本发明中实施例1中所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法制得的植物乳杆菌菌悬液为样品1,菌悬液的浓度为1×108CFU/mL,另外,取鼠李糖乳杆菌ATCC53103菌悬液为样品2,该菌悬液的浓度1×108CFU/mL,使用以上方法测定并计算甘氨胆酸钠结合力和牛磺胆酸钠结合力,结果如下表3所示:
表3
胆酸盐在肠道中水解脂肪以及脂溶性物质,降低肠道中胆酸盐含量,可作为表征降血脂的一项直观指标。植物乳杆菌BHP03菌悬液结合甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠的能力分别为0.4842mmol/L和0.6061mmol/L,发酵上清液分别为0.4028mmol/mL及0.5149±0.0008mmol/L,与阳性对照鼠李糖乳杆菌ATCC53103相比无显著性差异,结合能力较好。
胆固醇清除率的测定
于具塞试管中各加入9mLMRS胆固醇培养基,按2%比例接种活化的植物乳杆菌BHP03,未接种的作为样品对照组,置于37℃厌氧培养箱18h,培养结束后,4℃,4000rpm离心10min。使用胆固醇试剂盒测定发酵上清液中胆固醇含量,并计算出植物乳杆菌BHP03对胆固醇的清除率。胆固醇清除率计算公式如下所示:
式中:A-样品组胆固醇含量,μmol/L;B-样品对照组胆固醇含量,μmol/L。
表4胆固醇清除率
由表4可知,在培养18h后,植物乳杆菌BHP03胆固醇清除率为30.55±0.85%,阳性对照益生菌鼠李糖乳杆菌ATCC53103的胆固醇清除率为22.15±1.17%,且菌株之间胆固醇清除率呈显著性差异(p<0.05),说明本发明中植物乳杆菌BHP03具有优良的清除胆固醇的能力。
以上实验结果表明,植物乳杆菌BHP03的胃肠道耐受能力、抑制胰脂肪酶能力及清除胆固醇能力均优于阳性对照益生菌鼠李糖乳杆菌ATCC 53103,可用于降脂产品的开发。
本发明所有实验重复次数≥2次,数据用平均值±标准x差(±s)表示,采用SPSS25软件进行组间比较,并采用单因素方差分析,组内用配对t检验分析,不同字母代表两者之间差异显著(p<0.05)。
Claims (5)
1.一种植物乳杆菌,其特征在于,所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) BHP03已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号, 保藏编号为CGMCC NO.25223。
2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌,其特征在于,所述的植物乳杆菌的16SrDNA全序列如SEQ ID No:1所示。
3.一种权利要求1或2所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法,其特征在于,由以下步骤制备而成:
将甘油管中分离纯化后保存的上述植物乳杆菌菌株在MRS琼脂平板上划线,挑取单菌落于MRS液体培养基中扩大培养18-20h,然后以2-3%接种量接种到液体MRS液体培养基中,于36-38℃培养16-20h,传2-3代后在3500-4500r/min,4-5℃条件下离心10-15min,离心后上清液过0 .22-0 .24μL滤膜除杂,得植物乳杆菌发酵上清液;(2)取离心后的沉淀用质量分 数为0 .8%-0 .9%的无菌生理盐水清洗3-4次后进行重悬,统一调整菌悬液密度在0.8×108-1.2×108CFU/mL,所得即为植物乳杆菌的菌悬液。
4.一种由权利要求1或2所述的植物乳杆菌制得的益生菌压片糖果,其特征在于,由 以下原料重量份数制备而成:木糖醇50-80份、麦芽糊精10-15份、纳豆粉50-75份、低聚异麦糖10-20份、长双歧杆菌3-5份、嗜酸乳杆菌2-5份、植物乳杆菌8-15份、嗜热链球菌3-6份、柠檬酸0.5-1份、硬脂酸镁0.1-0.5份。
5.根据权利要求4所述的益生菌压片糖果制备方法,其特征在于,由以下步骤制备而成:将长双歧杆菌粉、嗜酸乳杆菌粉、植物乳杆菌粉、嗜热链球菌菌粉与木糖醇、麦芽糊精、纳豆粉、低聚异麦糖、柠檬酸、硬脂酸镁混合后进入压片机压制成片。
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