CN116855562A - 一种核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法。其步骤为，培养腺苷发酵菌株，以体积比5‑15％的接种量将腺苷种子液接入到装有腺苷发酵培养基的发酵罐中，培养温度35‑37℃，溶氧值为15‑25％，通过流加氨水控制pH，0‑12h，控制pH在6.7‑6.8；12h至结束，控制pH为6.4‑6.5；发酵总时间为40‑42h，得到腺苷发酵液；所述腺苷发酵培养基为核苷代谢因子培养基；所述核苷代谢因子培养基的组分为肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的混合物。即本发明通过优化培养基的方法来提高腺苷发酵水平。

Description

一种核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法。
背景技术
腺苷，又称“腺嘌呤核苷”。腺苷是一种杂环分子，分子量为267.25，由腺嘌呤、核糖和三个磷酸基团连接成，是生物体内最直接的能量来源。腺苷有促进冠状血管扩张及心肌代谢的机能，扩张血管，增加冠状血管血量的药理作用，因此可以用于冠状血管障、狭心症、动脉硬化症及高血压症等疾病的治疗。此外，也可以用于食品、保健品添加剂，有很好的市场前景。
目前，现有技术用于生产腺苷的方法由酶法、化学法以及发酵法。酶法和化学法成本较高，发酵法具备成本低、副产物小，对环境更加友好。文献1“有机氮源对腺苷发酵的影响，发酵科技通讯2014年”，主要研究了玉米浆、豆饼水解液和酵母粉等有机氮源对腺苷发酵产苷的影响,在5L发酵罐上通过添加不同浓度的有机氮源，考察枯草杆菌XGL在不同条件下的菌体生长与产苷情况，通过实验优化，获得最佳的有机氮源为玉米浆20mL/L、豆饼水解液30mL/L、酵母粉16g/L，在此条件下发酵50h，比初始发酵条件提高65.1％。文献2“响应面设计法优化腺苷发酵培养基，华东理工大学学报2005年”对发酵培养基进行了优化，包括酵母粉、玉米浆、硫酸铵以及硫酸镁等组分，较初始条件提高了28.6％。有机氮源，酵母粉类，大豆蛋白类混合使用，延迟菌种衰亡，减弱衰亡速度，提供菌种生长需要的营养物质提高腺苷产量，延长了发酵时间。但这些发酵基相对单一，由于菌株基因缺陷型带来的代谢因子缺失，菌体在单一的发酵基内发酵，菌体生产活力小，产腺苷效率不高。
发明内容
针对现有技术的缺陷，根据核苷发酵途径菌株的遗传特性，利用其相同发酵代谢途径HMP(磷酸戊糖途径)和EMP(糖酵解途径)进行发酵，从而弥补核苷菌株间不同基因缺陷型带来的代谢因子缺失，进行营养互补，从而提高菌体生产活力。本发明提供了一种核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：一种核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其步骤为,
培养腺苷发酵菌株，以体积比5-15％的接种量将腺苷种子液接入到装有腺苷发酵培养基的发酵罐中，培养温度35-37℃，溶氧值为15-25％，通过流加氨水控制pH，0-12h，控制pH在6.7-6.8；12h至结束，控制pH为6.4-6.5；发酵总时间为40-42h，得到腺苷发酵液；
所述腺苷发酵培养基为核苷代谢因子培养基；所述核苷代谢因子培养基的组分为肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的混合物。
进一步：在上述核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法中，培养腺苷发酵菌株，以体积比10％的接种量将腺苷种子液接入到装有腺苷发酵培养基的发酵罐中。
所述的肌苷发酵生长因子的制备步骤为，以产肌苷菌为发酵菌株，以体积比5-15％的接种量将种子液接入到装有肌苷发酵培养基的发酵罐中，培养温度35-37℃，溶氧量为15-25％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为12-13h，得到肌苷发酵生长因子。
所述的肌苷发酵生长因子的制备步骤为，以产肌苷菌为发酵菌株，以体积比10％的接种量将种子液接入到装有肌苷发酵培养基的发酵罐中。
所述肌苷发酵培养基组成为，葡萄糖含量60g-70g/L、硫酸铵10-15g/L、玉米浆干粉15-20g/L、酵母浸粉5-10g/L、大豆蛋白胨2-4g/L、谷氨酸钠3-8g/L、七水硫酸镁2-4g/L、磷酸二氢钾0.5-1.5g/L、一水硫酸锰50-200mg/L、七水硫酸亚铁30-100mg/L、pH为6.7。
所述的鸟苷发酵生长因子的制备步骤为，以产鸟苷菌为发酵菌株，以体种比5-15％的接种量将种子液接入到装有鸟苷发酵培养基的发酵罐中，培养温度35-37℃，溶氧量为15-25％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为12-13h，得到鸟苷发酵生长因子；
所述的鸟苷发酵生长因子的制备步骤为，以产鸟苷菌为发酵菌株，以体种比10％的接种量将种子液接入到装有鸟苷发酵培养基的发酵罐中。
所述鸟苷发酵培养基的组成为葡萄糖含量60g-70g/L，硫酸铵10-15g/L，玉米浆干粉15-20g/L，酵母浸粉5-10g/L,大豆蛋白胨2-4g/L,谷氨酸钠3-8g/L，七水硫酸镁2-4g/L，磷酸二氢钾0.5-1.5g/L，一水硫酸锰50-200mg/L，七水硫酸亚铁30-100mg/L，pH为6.7。
所述核苷代谢因子培养基是需要将肌苷发酵生长因子和肌苷发酵生长因子通过超滤膜过滤除菌后再混合，所述的混合体积比的比例为1:1；0.5:1.5；1.5:0.5；0.8:1.2；1.2:0.8。优选的混合比例为1:1。
与现有技术相比，上述核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其步骤为，培养腺苷发酵菌株，以体积比5-15％的接种量将腺苷种子液接入到装有腺苷发酵培养基的发酵罐中，培养温度35-37℃，溶氧值为15-25％，通过流加氨水控制pH，0-12h，控制pH在6.7-6.8；12h至结束，控制pH为6.4-6.5；发酵总时间为40-42h，得到腺苷发酵液；所述腺苷发酵培养基为核苷代谢因子培养基；所述核苷代谢因子培养基的组分为肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的混合物。由于肌苷、鸟苷、腺苷同为一条核苷合成代谢途径的三个分支，拥有共同代谢前体。其最终目标产物的差异取决于基因缺陷型带来的发酵过程代谢因子的变化。本发明根据腺苷的生物代谢调控途径对发酵方法的改进，发酵培养基为核苷代谢因子培养基。本发明根据腺苷的生物代谢调控途径对发酵方法的改进，发酵培养基为核苷代谢因子培养基。其同源代谢途径有利于营养互补，提高腺苷菌体活力和代谢能力，进一步提高腺苷的产量。即本发明通过优化培养基的方法来提高腺苷发酵水平。本发明腺苷发酵的产苷和转化率分别提高11.74％和10.12％；发酵周期缩短了15％以上。
附图说明
图1为原腺苷发酵方法发酵数据的平均值曲线图；
图2为本发明实施例发酵数据的平均值曲线图；
具体实施方式
本发明的主旨是通过核苷菌株代谢途径的特点，克服了基因缺陷型带来的发酵过程代谢因子的变化，使新发明的发酵培养基(核苷代谢因子培养基)对腺苷菌株进行营养补充，提高腺苷菌体活力和代谢能力，进一步提高腺苷的产量。下面将通过本发明的实施例进行更加详细的说明。
实施例1
以腺苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.977为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为10)接入到装有30L核苷代谢因子培养基的50L发酵罐中；培养温度36℃，溶氧值为20％，通过流加氨水控制pH：0-12h，控制pH在6.7-6.8，12h至发酵结束，控制pH为6.4-6.5；发酵总时间为40h，得到腺苷发酵液。
补糖控制残糖1.0-1.2％至发酵结束。
发酵水平：发酵周期40h，产苷4.11％，转化率22.37％。
所述腺苷发酵培养基为核苷代谢因子培养基；所述核苷代谢因子培养基的组分为肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的混合物。所述肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的比例是1:1；
以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.976为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为10)接入到装有30L发酵培养基的50L发酵罐中，培养温度37℃，溶氧量为15-20％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为12h，得到肌苷发酵生长因子。所述肌苷发酵生长因子培养基的组成为，其发酵培养基组分为：葡萄糖含量60g/L、硫酸铵10g/L、玉米浆干粉15g/L、酵母浸粉5g/L、大豆蛋白胨4g/L、谷氨酸钠8g/L、七水硫酸镁4g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、一水硫酸锰200mg/L、七水硫酸亚铁100mg/L；pH为6.7；
以鸟苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.978为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为10)接入到装有30L发酵培养基的50L发酵罐中，培养温度37℃，溶氧量为20％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为12h，得到鸟苷发酵生长因子。鸟苷发酵生长因子培养基的组成为，其发酵培养基组分为：葡萄糖含量60g/L、硫酸铵10g/L、玉米浆干粉15g/L、酵母浸粉5g/L、大豆蛋白胨4g/L、谷氨酸钠8g/L、七水硫酸镁4g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、一水硫酸锰200mg/L、七水硫酸亚铁100mg/L；pH为6.7；
实施例2
以腺苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.977为菌种，以5％的接种量将种子液(OD600值为10)接入到装有30L核苷代谢因子培养基的50L发酵罐中；培养温度37℃，溶氧值为15-20％，通过流加氨水控制pH：0-12h，控制pH在6.7-6.8，12h至发酵结束，控制pH为6.4-6.5；发酵总时间为42h，得到腺苷发酵液。
补糖控制残糖1.0-1.2％至发酵结束。
发酵水平：发酵周期42h，产苷4.03％，转化率22.05％。
所述发酵培养基为核苷代谢因子培养基；所述核苷代谢因子培养基的组分为肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的混合物。所述肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的比例是0.8:1.2；
以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.976为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为10)接入到装有30L发酵培养基的50L发酵罐中，培养温度35℃，溶氧量为15-20％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为13h，得到肌苷发酵生长因子。所述肌苷发酵生长因子培养基的组成为，其发酵培养基组分为：葡萄糖含量70g/L、硫酸铵15g/L、玉米浆干粉20g/L、酵母浸粉10g/L、大豆蛋白胨2g/L、谷氨酸钠3g/L、七水硫酸镁2g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、一水硫酸锰50mg/L、七水硫酸亚铁30mg/L；pH为6.7；
以鸟苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.978为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为8)接入到装有30L发酵培养基的50L发酵罐中，培养温度35℃，溶氧量为15-20％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为13h，得到鸟苷发酵生长因子。鸟苷发酵生长因子培养基的组成为，其发酵培养基组分为：葡萄糖含量70g/L、硫酸铵15g/L、玉米浆干粉20g/L、酵母浸粉10g/L、大豆蛋白胨2g/L、谷氨酸钠3g/L、七水硫酸镁2g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、一水硫酸锰50mg/L、七水硫酸亚铁30mg/L；pH为6.7；
实施例3
以腺苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.977为菌种，以8％的接种量将种子液(OD600值为10)接入到装有30L核苷代谢因子培养基的50L发酵罐中；培养温度35℃，溶氧值为20-25％，通过流加氨水控制pH：0-12h，控制pH在6.7-6.8，12h至发酵结束，控制pH为6.4-6.5；发酵总时间为41h，得到腺苷发酵液。
补糖控制残糖1.0-1.2％至发酵结束。
发酵水平：发酵周期41h，产苷4.08％，转化率22.13％。
所述发酵培养基为核苷代谢因子培养基；所述核苷代谢因子培养基的组分为肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的混合物。所述肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的比例是1.2:0.8；
以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.976为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为8)接入到装有30L发酵培养基的50L发酵罐中，培养温度36℃，溶氧量为20-25％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为12h，得到肌苷发酵生长因子。所述肌苷发酵生长因子培养基的组成为，其发酵培养基组分为：葡萄糖含量65g/L、硫酸铵12g/L、玉米浆干粉18g/L、酵母浸粉8g/L、大豆蛋白胨3g/L、谷氨酸钠5g/L、七水硫酸镁3g/L、磷酸二氢钾1g/L、一水硫酸锰100mg/L、七水硫酸亚铁50mg/L；pH为6.7；
以鸟苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.978为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为8)接入到装有30L发酵培养基的50L发酵罐中，培养温度36℃，溶氧量为20-25％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为12h，得到鸟苷发酵生长因子。鸟苷发酵生长因子培养基的组成为，其发酵培养基组分为：葡萄糖含量65g/L、硫酸铵12g/L、玉米浆干粉18g/L、酵母浸粉8g/L、大豆蛋白胨3g/L、谷氨酸钠5g/L、七水硫酸镁3g/L、磷酸二氢钾1g/L、一水硫酸锰100mg/L、七水硫酸亚铁50mg/L；pH为6.7；
实施例4
以腺苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.977为菌种，以12％的接种量将种子液(OD600值为10)接入到装有30L核苷代谢因子培养基的50L发酵罐中；培养温度37℃，溶氧值为15-20％，通过流加氨水控制pH：0-12h，控制pH在6.7-6.8，12h至发酵结束，控制pH为6.4-6.5；发酵总时间为42h，得到腺苷发酵液。
补糖控制残糖1.0-1.2％至发酵结束。
发酵水平：发酵周期42h，产苷4.01％，转化率22％。
所述发酵培养基为核苷代谢因子培养基；所述核苷代谢因子培养基的组分为肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的混合物。所述肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的比例是0.5:1.5；
以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.976为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为8)接入到装有30L发酵培养基的50L发酵罐中，培养温度37℃，溶氧量为15-20％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为12h，得到肌苷发酵生长因子。所述肌苷发酵生长因子培养基的组成为，其发酵培养基组分为：葡萄糖含量70g/L、硫酸铵10g/L、玉米浆干粉15g/L、酵母浸粉5g/L、大豆蛋白胨4g/L、谷氨酸钠8g/L、七水硫酸镁3g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、一水硫酸锰150mg/L、七水硫酸亚铁100mg/L；pH为6.7；
以鸟苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.978为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为8)接入到装有30L发酵培养基的50L发酵罐中，培养温度37℃，溶氧量为15-20％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为12h，得到鸟苷发酵生长因子。鸟苷发酵生长因子培养基的组成为，其发酵培养基组分为：葡萄糖含量70g/L、硫酸铵10g/L、玉米浆干粉15g/L、酵母浸粉5g/L、大豆蛋白胨4g/L、谷氨酸钠8g/L、七水硫酸镁3g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、一水硫酸锰150mg/L、七水硫酸亚铁100mg/L；pH为6.7；
实施例5
以腺苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.977为菌种，以15％的接种量将种子液(OD600值为8)接入到装有30L核苷代谢因子培养基的50L发酵罐中；培养温度36℃，溶氧值为20-25％，通过流加氨水控制pH：0-12h，控制pH在6.7-6.8，12h至发酵结束，控制pH为6.4-6.5；发酵总时间为41h，得到腺苷发酵液。
补糖控制残糖1.0-1.2％至发酵结束。
发酵水平：发酵周期41h，产苷4.05％，转化率22.07％。
所述核苷代谢因子培养基的组分为肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的混合物。所述肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的比例是1.5:0.5；
以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.976为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为8)接入到装有30L发酵培养基的50L发酵罐中，培养温度35℃，溶氧量为20-25％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为13h，得到肌苷发酵生长因子。所述肌苷发酵生长因子培养基的组成为，其发酵培养基组分为：葡萄糖含量65g/L、硫酸铵14g/L、玉米浆干粉18g/L、酵母浸粉9g/L、大豆蛋白胨3g/L、谷氨酸钠5g/L、七水硫酸镁2g/L、磷酸二氢钾1.2g/L、一水硫酸锰150mg/L、七水硫酸亚铁80mg/L；pH为6.7；
以鸟苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.978为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为8)接入到装有30L发酵培养基的50L发酵罐中，培养温度35℃，溶氧量为20-25％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为13h，得到鸟苷发酵生长因子。鸟苷发酵生长因子培养基的组成为，其发酵培养基组分为：葡萄糖含量65g/L、硫酸铵14g/L、玉米浆干粉18g/L、酵母浸粉9g/L、大豆蛋白胨3g/L、谷氨酸钠5g/L、七水硫酸镁2g/L、磷酸二氢钾1.2g/L、一水硫酸锰150mg/L、七水硫酸亚铁80mg/L；pH为6.7；
对比例1
以腺苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.977为菌种，以10％的接种量将种子液(OD600值为8)接入到装有30L原发酵培养基的50L发酵罐中，通过流加氨水控制pH：0-12h，控制pH在6.7-6.8，12h至发酵结束，控制pH为6.4-6.5；发酵总时间为48h，补糖控制残糖1.0-1.2％至发酵结束，得到腺苷发酵液。
发酵培养基的组分为：葡萄糖含量60g/L、硫酸铵10g/L、玉米浆干粉15g/L、酵母浸粉5g/L、大豆蛋白胨2g/L、谷氨酸钠3g/L、七水硫酸镁2g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、一水硫酸锰50mg/L、七水硫酸亚铁100mg/L，pH为6.7；
发酵水平：发酵周期48h，产苷3.73％，转化率20.09％。
对比例2
以腺苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.977为菌种，以5％的接种量将种子液(OD600值为10)接入到装有30L原发酵培养基的50L发酵罐中，通过流加氨水控制pH：0-12h，控制pH在6.7-6.8，12h至发酵结束，控制pH为6.4-6.5；发酵总时间为50h，补糖控制残糖1.0-1.2％至发酵结束，得到腺苷发酵液。
发酵培养基的组分为：葡萄糖含量70g/L、硫酸铵15g/L、玉米浆干粉20g/L、酵母浸粉10g/L、大豆蛋白胨4g/L、谷氨酸钠8g/L、七水硫酸镁4g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、一水硫酸锰200mg/L、七水硫酸亚铁50mg/L，pH为6.7；
发酵水平：发酵周期50h，产苷3.6％，转化率20.11％。
对比例3
以腺苷产生菌枯草芽孢杆菌GDMCC1.977为菌种，以15％的接种量将种子液(OD600值为10)接入到装有30L原发酵培养基的50L发酵罐中，通过流加氨水控制pH：0-12h，控制pH在6.7-6.8，12h至发酵结束，控制pH为6.4-6.5；发酵总时间为49h，补糖控制残糖1.0-1.2％至发酵结束，得到腺苷发酵液。
发酵培养基的组分为：葡萄糖含量65g/L、硫酸铵12g/L、玉米浆干粉18g/L、酵母浸粉9g/L、大豆蛋白胨3g/L、谷氨酸钠5g/L、七水硫酸镁3g/L、磷酸二氢钾1g/L、一水硫酸锰50mg/L、七水硫酸亚铁30mg/L，pH为6.7；
发酵水平：发酵周期49h，产苷3.56％，转化率20.07％。
对比例为常规发酵方式；实施例为核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，对比分析如下表1所示。
通过数据对比，实施例平均水平高于对比例，以实施例1的1:1混合方法的产苷和转化率发酵结果最优。
附图1为原腺苷发酵方法发酵数据的平均值曲线图；即对原发酵方法进行了产苷速率、耗糖速率和转化率进行统计分析；附图2是本发明实施例发酵方法发酵数据的平均值曲线图；从两者方法对比中，核苷代谢因子培养基发酵方法表现出：发酵的阶段转化率较平稳，保持较稳定速率产苷，过程耗糖速度也比较均匀，体现了本发明发酵水平优势。
通过上述表1数据分析，两种方法发酵水平的对比，表明核苷代谢因子培养基发酵方法提高了腺苷发酵水平，产苷率和转化率优于对比例。本发明核苷代谢因子培养基发酵方法比原发酵方法在产苷水平、转化率分别提高了11.74％和10.12％；发酵周期缩短了15％以上。
上述虽然结合实施例对本发明的具体实施方式进行了介绍，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，这对本领域技术人员而言应该很明确，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明保护的范围。

Claims (10)

1.一种核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其步骤为，
培养腺苷发酵菌株，以体积比5-15％的接种量将腺苷种子液接入到装有腺苷发酵培养基的发酵罐中，培养温度35-37℃，溶氧值为15-25％，通过流加氨水控制pH，0-12h，控制pH在6.7-6.8；12h至结束，控制pH为6.4-6.5；发酵总时间为40-42h，得到腺苷发酵液；
所述腺苷发酵培养基为核苷代谢因子培养基；所述核苷代谢因子培养基的组分为肌苷发酵生长因子和鸟苷发酵生长因子的混合物。
2.根据权利要求1所述的核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其特征在于：培养腺苷发酵菌株，以体积比10％的接种量将腺苷种子液接入到装有腺苷发酵培养基的发酵罐中。
3.根据权利要求2所述的核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其特征在于：所述的肌苷发酵生长因子的制备步骤为，以产肌苷菌为发酵菌株，以体积比5-15％的接种量将种子液接入到装有肌苷发酵培养基的发酵罐中，培养温度35-37℃，溶氧量为15-25％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为12-13h，得到肌苷发酵生长因子。
4.根据权利要求3所述的核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其特征在于：所述的肌苷发酵生长因子的制备步骤为，以产肌苷菌为发酵菌株，以体积比10％的接种量将种子液接入到装有肌苷发酵培养基的发酵罐中。
5.根据权利要求4所述的核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其特征在于：所述肌苷发酵培养基组成为，葡萄糖含量60g-70g/L、硫酸铵10-15g/L、玉米浆干粉15-20g/L、酵母浸粉5-10g/L、大豆蛋白胨2-4g/L、谷氨酸钠3-8g/L、七水硫酸镁2-4g/L、磷酸二氢钾0.5-1.5g/L、一水硫酸锰50-200mg/L、七水硫酸亚铁30-100mg/L、pH为6.7。
6.根据权利要求5所述的核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其特征在于：所述的鸟苷发酵生长因子的制备步骤为，以产鸟苷菌为发酵菌株，以体种比5-15％的接种量将种子液接入到装有鸟苷发酵培养基的发酵罐中，培养温度35-37℃，溶氧量为15-25％，通过流加氨水控制pH在6.7-6.8；发酵总时间为12-13h，得到鸟苷发酵生长因子。
7.根据权利要求6所述的核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其特征在于：所述的鸟苷发酵生长因子的制备步骤为，以产鸟苷菌为发酵菌株，以体种比10％的接种量将种子液接入到装有鸟苷发酵培养基的发酵罐中。
8.根据权利要求7所述的核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其特征在于：所述鸟苷发酵培养基的组成为葡萄糖含量60g-70g/L，硫酸铵10-15g/L，玉米浆干粉15-20g/L，酵母浸粉5-10g/L,大豆蛋白胨2-4g/L,谷氨酸钠3-8g/L，七水硫酸镁2-4g/L，磷酸二氢钾0.5-1.5g/L，一水硫酸锰50-200mg/L，七水硫酸亚铁30-100mg/L，pH为6.7。
9.根据权利要求8所述的核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其特征在于：所述核苷代谢因子培养基是需要将肌苷发酵生长因子和肌苷发酵生长因子通过超滤膜过滤除菌后再混合，所述的混合体积比的比例为1:1；0.5:1.5；1.5:0.5；0.8:1.2；1.2:0.8。
10.根据权利要求9所述的核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法，其特征在于：所述混合比例为1:1。
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