CN116836271B

CN116836271B - 抗b型链球菌的抗体、检测b型链球菌的试剂和试剂盒

Info

Publication number: CN116836271B
Application number: CN202210289992.9A
Authority: CN
Inventors: 孟媛; 钟冬梅; 唐丽娜; 曹慧方
Original assignee: Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2022-03-23
Filing date: 2022-03-23
Publication date: 2024-04-05
Anticipated expiration: 2042-03-23
Also published as: CN116836271A

Abstract

本发明公开了一种抗B型链球菌的抗体、检测B型链球菌的试剂和试剂盒，涉及抗体技术领域。本发明公开的抗B型链球菌抗体包括重链互补决定区和轻链互补决定区。该抗体为B型链球菌的检测提供了重要的原料来源。

Description

抗B型链球菌的抗体、检测B型链球菌的试剂和试剂盒

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，具体而言，涉及一种抗B型链球菌的抗体、检测B型链球菌的试剂和试剂盒。

背景技术

B型(乙型)链球菌(group B streptococci，GBS)也称为无乳链球菌，是***，通常定植在胃肠道、***和***，大约有10-35％健康妇女的肠道或是***里面可发现此菌的踪迹。在大多数的情况下它是无害的，但是当怀孕的妇女感染GBS时会在分娩的时候传染给新生儿，这是造成新生儿感染和死亡的重要原因之一，受感染的新生儿有高达4-6％的致死率。GBS会引起严重的肺部感染，又因新生儿免疫力尚未成熟而容易造成全身性的败血症，一般早产、低体重、早期破水皆与其有关，在新生儿出生后一周内发作，并且在48小时之内症状急速恶化以致死亡。如果感染至脑部会引起细菌性脑膜炎，即使治愈也会有神经方面的后遗症，如脑性麻痹，癫痫和智能障碍等。根据美国妇产科医学会建议最好在35到37周作一次乙型链球菌检查。同时GBS也会引发老年人和有易感因素的成人(如妊娠、糖尿病和免疫力低下)的侵袭性感染。

免疫学检测方法是基于抗体和抗原的特异性反应进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对被检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测微生物、蛋白质，激素等微量生物活性物质。目前，GBS的检测方法主要有胶体金免疫层析法，其是利用胶体金对被检测信号进行放大和显示的一种免疫学检测方法。类似的免疫学检测方法还有放射免疫法、酶联免疫分析法、化学发光法等。上述免疫学检测方法都需要针对于GBS的抗体。因此，本领域对于有效且结合GBS并对其进行检测的抗体存在着强烈需求。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

针对现有抗B型链球菌的抗体来源少的问题，本申请提供一种活性改善的抗B型链球菌抗体，为B型链球菌的检测提供重要的原料来源。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、SEQ ID NO:2或15所示的HCDR2、SEQ ID NO:3所示的HCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。

为了实现上述目的，根据本发明的第二个方面，提供了一种抗B型链球菌抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区含有HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4的序列结构，所述轻链可变区区含有LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4的序列结构，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR 1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列为上述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列。

为了实现上述目的，根据本发明的第三个方面，提供了一种抗B型链球菌抗体，包括重链和/或轻链，所述重链包括上述的重链可变区，所述轻链包括上述的轻链可变区。

为了实现上述目的，根据本发明的第四个方面，提供了一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包括上述的抗体或其功能性片段。

为了实现上述目的，根据本发明的第五个方面，提供了一种检测B型链球菌的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述的抗体或其功能性片段或上述的抗体偶联物。

为了实现上述目的，根据本发明的第六个方面，提供了上述的抗体或其功能性片段、上述的抗体偶联物或上述的试剂或试剂盒在B型链球菌检测中的用途。

为了实现上述目的，本发明还提供了一种载体、一种细胞及一种制备上述抗体或其功能性片段的方法。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为Anti-GBS-4G7mut1至Anti-GBS-4G7mut4的还原性SDS-PAGE的结果。

具体实施方式

本发明提供了一种抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、SEQ ID NO:2或15所示的HCDR2、SEQ ID NO:3所示的HCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。上述抗体具有改善的亲和力和活性。

在本发明中，术语“抗体”在最广义上使用，其可以包括全长单克隆抗体，双特异性或多特异性抗体，以及嵌合抗体，只要它们展示所需的生物学活性。

在本发明中，术语“互补性决定区”、“CDR”或“CDRs”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区，指包含一种或多种或者甚至全部的对抗体或抗原结合片段与其识别的抗原或表位的结合起作用的主要氨基酸残基的区域。在本发明具体实施方式中，CDRs是指所述抗体的重链和轻链的高度可变区。

在本发明中，重链互补决定区用HCDR表示，其包括HCDR1、HCDR2和HCDR3；轻链互补决定区用LCDR表示，其包括LCDR1、LCDR2和LCDR3。本领域常用的CDR标示方法包括：Kabat编号方案、IMGT编号方案、Chothia和Lesk编号方案以及1997年Lefranc等人为免疫球蛋白超家族的所有蛋白质序列引入的新的标准化编号***。Kabat等人是第一个为免疫球蛋白可变区提出标准化编号方案的人。在过去的几十年中，序列的积累导致了KABATMAN数据库的创建，Kabat编号方案通常被认为是编号抗体残基广泛采用的标准。本发明采用Kabat注释标准标示CDR区，但其他方法标示的CDR区也属于本发明的保护范围。

在本发明中，“框架区”或“FR”区包括重链框架区和轻链框架区，是指抗体重链可变区和轻链可变区中除CDR之外的区域；其中，重链框架区可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含HFR1、HFR2、HFR3和HFR4框架区；轻链框架区可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含LFR1、LFR2、LFR3和LFR4框架区。

在本发明中，重链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4；轻链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4。

在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段还包括氨基酸序列如SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10所示的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4和氨基酸序列如SEQ ID NO:11至SEQ IDNO:14所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4。

需要说明的是，在其他的实施例中，本发明提供的抗体或其功能性片段的各骨架区氨基酸序列可以与上述对应框架区(SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13或14)具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。

在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段的HFR3如SEQ ID NO:16所示。

在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段的LFR3如SEQ ID NO:17所示。

另一方面，本发明实施例提供一种抗B型链球菌的抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区含有HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4的序列结构，所述轻链可变区区含有LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4的序列结构，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR 1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列为上述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列，所述HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列为上述的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列。

在可选的实施方式中，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:18至21任一所示。

在可选的实施方式中，所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:22至23任一所示。

在可选的实施方式中，所述抗体还包含恒定区。

在可选的实施方式中，所述恒定区包括重链恒定区和/或轻链恒定区。

在可选的实施方式中，所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的重链恒定区，所述轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区。

在可选的实施方式中，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。

在可选的实施方式中，所述恒定区的种属来源为兔。

在可选的实施方式中，所述重链恒定区序列(CH)如SEQ ID NO:24所示，所述轻链恒定区(CL)序列如SEQ ID NO:25所示。

需要说明的是，在其他的实施例中，所述恒定区序列可以与上述恒定区(SEQ IDNO:24或25)具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。

在可选的实施方式中，所述功能性片段选自所述抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。

上述抗体的功能性片段通常具有与其来源抗体相同的结合特异性。本领域技术人员根据本发明记载的内容容易理解到，上述抗体的功能性片段可以通过比如酶消化的方法(包括胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)和/或通过化学还原***二硫键的方法获得。在本发明公开了完整抗体的结构基础上，本领域技术人员容易获得上述的功能性片段。

上述抗体的功能性片段还可以通过也是本领域技术人员所知的重组遗传学技术或通过例如自动肽合成仪，比如Applied BioSystems等销售的自动肽合成仪合成获得。

另一方面，本发明提供一种抗B型链球菌的抗体，包括重链和/或轻链，所述重链包括上述的重链可变区和上述的重链恒定区；所述轻链包括上述的轻链可变区和上述的轻链恒定区。

在可选的实施方式中，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:26至29任一所示。

在可选的实施方式中，所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:30至31任一所示。

另一方面，本发明提供一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包括上述的抗体或其功能性片段。

在可选的实施方式中，上述抗体偶联物中所述抗体或其功能性片段标记有标记物。

在可选的实施方式中，上述标记物是指具有能够被肉眼直接观察或被仪器检测或探测到的特性例如发光、显色、放射性等特性的一类物质，通过该特性可以实现对相应目标物的定性或定量检测。

在可选的实施方式中，所述标记物包括但不限于荧光染料、酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物。

在实际的使用过程中，本领域技术人员可以根据检测条件或实际需要选择合适的标记物，无论使用何种标记物，其均属于本发明的保护范围。

在可选的实施方式中，所述荧光染料包括但不限于荧光素类染料及其衍生物(例如包括但不限于异硫氰酸荧光素(FITC)羟基光素(FAM)、四氯光素(TET)等或其类似物)、罗丹明类染料及其衍生物(例如包括但不限于红色罗丹明(RBITC)、四甲基罗丹明(TAMRA)、罗丹明B(TRITC)等或其类似物)、Cy系列染料及其衍生物(例如包括但不限于Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy3等或其类似物)、Alexa系列染料及其衍生物(例如包括但不限于AlexaFluor350、405、430、488、532、546、555、568、594、610、33、647、680、700、750等或其类似物)和蛋白类染料及其衍生物(例如包括但不限于藻红蛋白(PE)、藻蓝蛋白(PC)、别藻蓝蛋白(APC)、多甲藻黄素-叶绿素蛋白(preCP)等)。

在可选的实施方式中，所述酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6-磷酸葡萄糖脱氧酶。

在可选的实施方式中，所述放射性同位素包括但不限于²¹²Bi、¹³¹I、¹¹¹In、⁹⁰Y、¹⁸⁶Re、²¹¹At、¹²⁵I、¹⁸⁸Re、¹⁵³Sm、²¹³Bi、³²P、⁹⁴mTc、⁹⁹mTc、²⁰³Pb、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁴³Sc、⁴⁷Sc、¹¹⁰mIn、⁹⁷Ru、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁶⁸Cu、⁸⁶Y、⁸⁸Y、¹²¹Sn、¹⁶¹Tb、¹⁶⁶Ho、¹⁰⁵Rh、¹⁷⁷Lu、¹⁷²Lu和¹⁸F。

在可选的实施方式中，所述化学发光试剂包括但不限于鲁米诺及其衍生物、光泽精、甲壳动物荧光素及其衍生物、联吡啶钌及其衍生物、吖啶酯及其衍生物、二氧环乙烷及其衍生物、洛粉碱及其衍生物和过氧草酸盐及其衍生物。

在可选的实施方式中，所述纳米颗粒类标记物包括但不限于纳米颗粒、胶体、有机纳米颗粒、磁性纳米颗粒、量子点纳米颗粒和稀土络合物纳米颗粒。

在可选的实施方式中，所述胶体包括但不限于胶体金属、分散型染料、染料标记的微球和乳胶。

在可选的实施方式中，所述胶体金属包括但不限于胶体金、胶体银和胶体硒。

在可选的实施方式中，上述抗体偶联物中所述抗体或其功能性片段包被至固相。

在可选的实施方式中，所述固相选自微球、板和膜。

在可选的实施方式中，所述固相包括但不限于磁性微球、塑料微球、塑胶微粒、微孔板、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜。

在可选的实施方式中，所述固相为硝酸纤维素膜。

另一方面，本发明提供一种检测B型链球菌的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述的抗体或其功能性片段或上述的抗体偶联物。

另一方面，本发明提供上述抗体或其功能性片段、抗体偶联物或上述的试剂或试剂盒在B型链球菌检测中的用途。

另一方面，本发明提供一种编码上述抗体或其功能性片段的核酸分子。

另一方面，本发明提供含有上述核酸分子的载体。

另一方面，本发明提供含有上述载体的细胞。

另一方面，本发明提供一种制备抗体或其功能性片段的方法，其包括：培养如上所述的细胞。

在本发明公开了抗体或其功能性片段的氨基酸序列的基础上，本领域技术人员容易想到采用基因工程技术或其他技术(化学合成、重组表达)制备得到该抗体或其功能性片段，例如从能够重组表达如上任一项所述的抗体或其功能性片段的重组细胞的培养产物中分离纯化得到该抗体或其功能性片段，这对本领域技术人员来说是容易实现的，基于此，无论采用何种技术制备本发明的抗体或其功能性片段，其均属于本发明的保护范围。

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管与本文描述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料都可用于本文的制剂或单位剂量的实践或测试，但现在描述一些方法和材料。除非另有说明，否则本文采用或考虑的技术是标准方法。材料、方法和实例仅是说明性而非限制性的。

除非另外指明，否则实践本发明将采用细胞生物学、分子生物学(包含重组技术)、微生物学、生物化学和免疫学的常规技术，所述常规技术在本领域技术人员的能力范围内。文献中充分解释了这种技术，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:ALaboratory Manual)》，第二版(Sambrook等人，1989)；《寡核苷酸合成(OligonucleotideSynthesis)》(M.J.Gait编，1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》(R.I.Freshney编，1987)；《酶学方法(Methods in Enzymology)》(学术出版社有限公司(Academic Press，Inc.)；《实验免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology)》(D.M.Weir和C.C.Blackwell编)；《哺乳动物细胞用基因转移载体(Gene Transfer Vectors forMammalian Cells)》(J.M.Miller和M.P.Calos编，1987)；《当代分子生物学方法(CurrentProtocols in Molecular Biology)》(F.M.Ausubel等人编，1987)；《PCR:聚合酶链反应(PCR:The Polymerase Chain Reaction)》(Mullis等人编，1994)；以及《当代免疫学方法(Current Protocols in Immunology)》(J.E.Coligan等人编，1991)，所述文献中的每个文献均通过引用明确并入本文中。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1Anti-GBS-4G7单克隆抗体的制备

本实施例中限制性内切酶、Prime Star DNA聚合酶购自Takara公司。MagExtractor-RNA提取试剂盒购自TOYOBO公司。BD SMARTTMRACE cDNA AmplificationKit试剂盒购自Takara公司。pMD-18T载体购自Takara公司。质粒提取试剂盒购自天根公司。引物合成和基因测序由Invitrogen公司完成。

1重组质粒的构建

(1)抗体基因制备

从分泌抗B型链球菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株中提取mRNA，通过RT-PCR方法获得DNA产物，该产物用rTaq DNA聚合酶进行加A反应后***到pMD-18T载体中，转化到DH5α感受态细胞中，长出菌落后分别取Heavy Chain及Light Chain基因克隆，各4个克隆送基因测序公司进行测序。

(2)Anti-GBS-4G7抗体可变区基因的序列分析

将上述测序得到的基因序列放在Kabat抗体数据库中进行分析，并利用VNTI11.5软件进行分析确定重链和轻链引物对扩增出的基因都是正确的，其中Light Chain扩增出的基因片段中，VL基因序列为336bp，其前方有57bp的前导肽序列；Heavy Chain引物对扩增出的基因片段中，VH基因序列为342bp，属于VH1基因家族，其前方有57bp的前导肽序列。

(3)重组抗体表达质粒的构建

pcDNATM3.4vector为构建的重组抗体真核表达载体，该表达载体已经引入HindIII、BamHI、EcoRI等多克隆酶切位点，并命名为pcDNA3.4A表达载体，后续简称3.4A表达载体；根据上述pMD-18T中抗体可变区基因测序结果，设计该抗体的VL和VH基因特异性引物，两端分别带有HindIII、EcoRI酶切位点和保护碱基，通过PCR扩增方法扩出0.72kb的Light Chain基因片段和1.39kb的Heavy Chain基因片段。

Heavy Chain和Light Chain基因片段分别采用HindIII/EcoRI双酶切，3.4A载体采用HindIII/EcoRI双酶切，将片段和载体纯化回收后Heavy Chain基因和Light Chain基因分别连接3.4A表达载体中，分别得到Heavy Chain和Light Chain的重组表达质粒。

2稳定细胞株筛选

(1)重组抗体表达质粒瞬时转染CHO细胞，确定表达质粒活性

质粒用超纯水稀释至40ug/100ul，调节CHO细胞1.43×10⁷cells/ml于离心管中，100μL质粒与700μL细胞混合，转入电转杯，电转，第3、5、7天取样计数，第7天收样检测。

包被液(主要成分NaHCO3)稀释GBS培养物1000倍，每孔100uL，4℃过夜；次日，洗涤液清洗2次，拍干；加入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120μL，37℃，1h，拍干；加入稀释后的细胞上清，100μL/孔，37℃，30min(部分上清1h)；洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗兔IgG-HRP，每孔100μL，37℃，30min；洗涤液清洗5次，拍干；加入显色液A液(50μL/孔，含柠檬酸+醋酸钠+乙酰苯胺+过氧化脲)，加入显色液B液(50μL/孔，含柠檬酸+EDTA·2Na+TMB+浓HCL)，10min；加入终止液(50μL/孔，含EDTA·2Na+浓H₂SO₄)；酶标仪上450nm(参考630nm)处读OD值。结果显示细胞上清稀释1000倍后反应OD仍大于1.0，未加细胞上清孔反应OD小于0.1，表明质粒瞬转后产生的抗体对GBS培养物有活性。

(2)重组抗体表达质粒线性化

准备下述试剂：Buffer 50μL、DNA 100μg/管、PuvⅠ酶10μL、无菌水补至500μL，37℃水浴酶切过夜；先用等体积酚/氯仿/异戊醇(下层)25:24:1，再用氯仿(水相)依次进行抽提；0.1倍体积(水相)3M醋酸钠和2倍体积乙醇冰上沉淀，70％乙醇漂洗沉淀，去除有机溶剂，待乙醇挥发完全用适量的灭菌水进行复融，最后进行浓度的测定。

(3)重组抗体表达质粒稳定转染，加压筛选稳定细胞株

质粒用超纯水稀释至40ug/100ul，调节CHO细胞1.43×10⁷cells/ml于离心管中，100μL质粒与700μL细胞混合，转入电转杯，电转，次日计数；25umol/L MSX 96孔加压培养约25天。

显微镜下观察标记长有细胞的克隆孔,并记录汇合度；取培养上清，送样检测；挑选抗体浓度、相对浓度高的细胞株转24孔，3天左右转6孔；3天后保种批培，调整细胞密度0.5×10⁶cells/ml，2.2ml进行批培养，细胞密度0.3×10⁶cells/ml，2ml进行保种；7天6孔批培上清送样检测，挑选抗体浓度及细胞直径较小的细胞株转TPP保种传代。

3重组抗体生产

(1)细胞扩培

细胞复苏之后先在125ml规格的摇瓶中培养，接种体积为30ml，培养基为100％Dynamis培养基，放置于转速120r/min，温度为37℃，二氧化碳为8％的摇床中。培养72h，以50万cells/ml接种密度接种扩培，扩培体积根据生产需求进行计算，培养基为100％Dynamis培养基。之后每72h扩培一次。当细胞量满足生产需求时，严格控制接种密度为50万cells/ml左右进行生产。

(2)摇瓶生产及纯化

摇瓶参数：转速120r/min，温度为37℃，二氧化碳为8％。流加补料：在摇瓶中培养至72h时开始每天补料，HyCloneTM Cell BoostTM Feed 7a每天流加初始培养体积的3％，Feed 7b每天流加量为初始培养体积的千分之一，一直补到第12天(第12天补料)。葡萄糖在第六天补加3g/L。第13天收样。用proteinA亲和层析柱进行亲和纯化。取3μg纯化的抗体进行还原性SDS-PAGE，电泳图如图所示，在还原性SDS-PAGE后显示两条带，1条Mr为50KD，另一条Mr为28KD。

实施例2活性优化

实施例1得到的Anti-GBS-4G7单克隆抗体虽然对GBS培养物有活性，但抗体活性不够理想，因而申请人通过对该抗体的轻链CDR及重链CDR进行定向突变。即利用计算机进行抗体可变区结构模拟、抗原与抗体可变区作用复合物结构模拟、抗体关键氨基酸分析及突变设计，根据突变方案设计合成覆盖突变位点的双向引物，合成目的DNA两端引物，进行高保真PCR反应，将PCR产物克隆至载体，再按照实施例1所述的方法进行突变抗体的制备。经筛选，得到抗体活性显著提升的单克隆抗体，并命名为：Anti-GBS-4G7mut1至Anti-GBS-4G7mut4。各单克隆抗体的氨基酸序列如下表所示：

表1抗体序列

样品名称	重链序号	轻链序号
			Anti-GBS-4G7mut1	SEQ ID NO:26	SEQ ID NO:30
Anti-GBS-4G7mut2	SEQ ID NO:27	SEQ ID NO:31
			Anti-GBS-4G7mut3	SEQ ID NO:28	SEQ ID NO:31
Anti-GBS-4G7mut4	SEQ ID NO:29	SEQ ID NO:31

实施例3抗体的性能检测

1活性鉴定

包被液(主要成分NaHCO3)稀释GBS培养物1000倍，每孔100uL，4℃过夜；次日，洗涤液清洗2次，拍干；加入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120μl，37℃，1h，拍干；加入稀释后的上述单克隆抗体，100μl/孔，37℃，30min-60min；洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗兔IgG-HRP，每孔100μl，37℃，30min；洗涤液(PBS)清洗5次，拍干；加入显色液A液(50μl/孔，含2.1g/L柠檬酸、12.25g/L柠檬酸、0.07g/L乙酰苯胺和0.5g/L过氧化脲)，加入显色液B液(50μl/孔，含1.05g/L柠檬酸、0.186g/LEDTA·2Na、0.45g/L TMB和0.2ml/L浓HCl)，10min；加入终止液(50μl/孔，含0.75g/EDTA·2Na和10.2ml/L浓H₂SO₄)；酶标仪上450nm(参考630nm)处读OD值。结果见下表。

表2活性数据

样品浓度(ng/ml)	60	30	15	7.5	3.75	0
							对照	1.332	0.791	0.462	0.285	0.182	0.031
Anti-GBS-4G7mut1	1.564	1.015	0.755	0.431	0.209	0.043
							Anti-GBS-4G7mut2	1.868	1.488	0.982	0.517	0.302	0.021
Anti-GBS-4G7mut3	1.669	1.175	0.767	0.443	0.217	0.052
							Anti-GBS-4G7mut4	1.96	1.549	0.976	0.602	0.347	0.057

2性能评价

将上述抗体作为包被抗体，分别与另一株Anti-GBS标记端单克隆抗体进行配对使用，在胶体金平台上比较上述抗体与对照(市场主流抗体)的性能差异，制备得到的上述抗体能做到比对照更优的性能水平。具体性能见下表：

表3性能评价数据

3稳定性考核

将上述抗体置于4℃(冰箱)、-80℃(冰箱)、37℃(恒温箱)放置21天，取7天、14天、21天样品进行状态观察，并对21天样品进行活性检测，结果显示三种考核条件下抗体放置21天均未见明显蛋白状态变化，活性也未随考核温度的升高呈下降趋势，说明上述抗体稳定。下表为抗体考核21天的酶免活性检测OD结果。

表4稳定性数据

样品浓度(ng/ml)	30	7.5	0
				4℃，21天样品	1.616	0.705	0.009
-80℃，21天样品	1.623	0.698	0.011
				37℃，21天样品	1.661	0.701	0.016

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

本申请涉及的部分氨基酸序列如下所示：

序列编号	序列片段
		SEQ ID NO:1	RNAMS
SEQ ID NO:2	LIAIGGATFYPNWAKG
		SEQ ID NO:3	EMAGSF
SEQ ID NO:4	QSSQSVLDNKNLA
		SEQ ID NO:5	KASSPAS
SEQ ID NO:6	AGEYYSSGYY
		SEQ ID NO:15	IIAIGGATFYPNWAKG

SEQUENCE LISTING

<110> 东莞市朋志生物科技有限公司

<120> 抗B型链球菌的抗体、检测B型链球菌的试剂和试剂盒

<130> P2022031CN01

<160> 31

<170> PatentIn version 3.5

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<213> Artificial

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<213> Artificial

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<223> 人工序列

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<213> Artificial

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<213> Artificial

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<223> 人工序列

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<213> Artificial

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<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

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Arg Phe Thr Ile Ser Gly Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Leu Thr

1 5 10 15

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg

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<220>

<223> 人工序列

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Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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<213> Artificial

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<223> 人工序列

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Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

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Thr Val Thr Ile Asn Cys

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<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

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Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu Ile Tyr

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<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

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Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Asn Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr

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Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

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<212> PRT

<213> Artificial

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Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

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<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

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Ile Ile Ala Ile Gly Gly Ala Thr Phe Tyr Pro Asn Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

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<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

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Arg Phe Thr Ile Ser Gly Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Ile Thr

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Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg

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<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

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Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Asp Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

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<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工序列

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Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Arg Asn Ala

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Ser Ile Gly

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Leu Ile Ala Ile Gly Gly Ala Thr Phe Tyr Pro Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

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65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Met

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100 105 110

Ser

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<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

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Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Arg Asn Ala

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Ser Ile Gly

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Ile Ile Ala Ile Gly Gly Ala Thr Phe Tyr Pro Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

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65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Met

85 90 95

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100 105 110

Ser

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<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

<400> 20

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Arg Asn Ala

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Ser Ile Gly

35 40 45

Leu Ile Ala Ile Gly Gly Ala Thr Phe Tyr Pro Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Gly Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Ile Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Met

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100 105 110

Ser

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<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

<400> 21

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Arg Asn Ala

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Ser Ile Gly

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Ile Ile Ala Ile Gly Gly Ala Thr Phe Tyr Pro Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

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Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Met

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Ser

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<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

<400> 22

Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Asn Lys

20 25 30

Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu

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Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Glu Tyr Tyr Ser Ser

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<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

<400> 23

Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Asn Lys

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Gly Asp Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Glu Tyr Tyr Ser Ser

85 90 95

Gly Tyr Tyr Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

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<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

<400> 24

Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly

1 5 10 15

Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr

20 25 30

Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn

35 40 45

Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys

65 70 75 80

Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala

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Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Thr Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly

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Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

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145 150 155 160

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Pro Gly Lys

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<211> 104

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

<400> 25

Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp

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Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr

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Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr

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Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys

100

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<211> 436

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

<400> 26

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Arg Asn Ala

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Ser Ile Gly

35 40 45

Leu Ile Ala Ile Gly Gly Ala Thr Phe Tyr Pro Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

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65 70 75 80

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Ser Pro Gly Lys

435

<210> 27

<211> 436

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

<400> 27

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

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20 25 30

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Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Met

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130 135 140

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Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

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Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

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Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

245 250 255

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Ser Pro Gly Lys

435

<210> 28

<211> 436

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

<400> 28

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Arg Asn Ala

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210 215 220

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Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln

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Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr

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Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Thr His Gln Asp Trp Leu Arg

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Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

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Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys

325 330 335

Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val

340 345 350

Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val

355 360 365

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Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Asn Lys Leu Ser

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Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val

405 410 415

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg

420 425 430

Ser Pro Gly Lys

435

<210> 29

<211> 436

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

<400> 29

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Arg Asn Ala

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Ser Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Ala Ile Gly Gly Ala Thr Phe Tyr Pro Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Gly Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Leu Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Met

85 90 95

Ala Gly Ser Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

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Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys

115 120 125

Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly

130 135 140

Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr

145 150 155 160

Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr

180 185 190

Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val

195 200 205

Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Thr Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu

210 215 220

Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

225 230 235 240

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

245 250 255

Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln

260 265 270

Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr

275 280 285

Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Thr His Gln Asp Trp Leu Arg

290 295 300

Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

305 310 315 320

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys

325 330 335

Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val

340 345 350

Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val

355 360 365

Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

370 375 380

Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Asn Lys Leu Ser

385 390 395 400

Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val

405 410 415

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg

420 425 430

Ser Pro Gly Lys

435

<210> 30

<211> 215

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 人工序列

<400> 30

Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Asn Lys

20 25 30

Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu

35 40 45

Ile Tyr Lys Ala Ser Ser Pro Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Asn Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Glu Tyr Tyr Ser Ser

85 90 95

Gly Tyr Tyr Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Gly

100 105 110

Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln

115 120 125

Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe

130 135 140

Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr

145 150 155 160

Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr

165 170 175

Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His

180 185 190

Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys

210 215

<210> 31

<211> 215

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工序列

<400> 31

Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Asn Lys

20 25 30

Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu

35 40 45

Ile Tyr Lys Ala Ser Ser Pro Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Asp Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Glu Tyr Tyr Ser Ser

85 90 95

Gly Tyr Tyr Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Gly

100 105 110

Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln

115 120 125

Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe

130 135 140

Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr

145 150 155 160

Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr

165 170 175

Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His

180 185 190

Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys

210 215

Claims

1.一种抗B型链球菌的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的HCDR1、SEQIDNO:2或15所示的HCDR2、SEQIDNO:3所示的HCDR3，所述轻链可变区包括氨基酸序列依次如SEQIDNO:4至SEQIDNO:6所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段还包括氨基酸序列依次如SEQIDNO:7至SEQIDNO:10所示的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4和氨基酸序列依次如SEQIDNO:11至SEQIDNO:14所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4；或与上述各序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段的HFR3的氨基酸序列如SEQIDNO:16所示。

4.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段的LFR3的氨基酸序列如SEQIDNO:17所示。

5.一种抗B型链球菌抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区含有HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4的序列结构，所述轻链可变区含有LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4的序列结构，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列依次为权利要求1中所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列，所述HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列依次为权利要求2中所述的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列。

6.一种抗B型链球菌抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区选自如下任意一种：

（1）所述重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:18；所述轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:22；

（2）所述重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:19；所述轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:23；

（3）所述重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:20；所述轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:23；

（4）所述重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:21；所述轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:23。

7.根据权利要求1至6任一所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段还包含恒定区。

8.根据权利要求7所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述恒定区包括重链恒定区和轻链恒定区。

9.根据权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的重链恒定区；所述轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区。

10.根据权利要求7所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述恒定区的种属来源为牛、马、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅或人。

11.根据权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述恒定区的种属来源为兔。

12.根据权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链恒定区序列如SEQIDNO:24所示或与其具有至少80％同源性，所述轻链恒定区序列如SEQIDNO:25所示或与其具有至少80％同源性。

13.根据权利要求1至6任一所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段选自所述抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。

14.一种抗B型链球菌抗体，包括重链和轻链，其特征在于，所述重链包括权利要求1-6任一项中所述的重链可变区和权利要求7-12任一项所述的重链恒定区；所述轻链包括权利要求1-6任一项中所述的轻链可变区和权利要求7-12任一项所述的轻链恒定区。

15.一种抗B型链球菌抗体，包括重链和轻链，其特征在于，所述抗B型链球菌抗体选自如下任意一种：

（1）所述重链的氨基酸序列为SEQIDNO:26，所述轻链的氨基酸序列为SEQIDNO:30；

（2）所述重链的氨基酸序列为SEQIDNO:27，所述轻链的氨基酸序列为SEQIDNO:31；

（3）所述重链的氨基酸序列为SEQIDNO:28，所述轻链的氨基酸序列为SEQIDNO:31；

（4）所述重链的氨基酸序列为SEQIDNO:29，所述轻链的氨基酸序列为SEQIDNO:31。

16.一种抗体偶联物，其特征在于，所述抗体偶联物包括权利要求1至15任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

17.根据权利要求16所述的抗体偶联物，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段标记有标记物。

18.根据权利要求17所述的抗体偶联物，其特征在于，所述标记物选自荧光染料、酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物。

19.根据权利要求18所述的抗体偶联物，其特征在于，所述荧光染料选自荧光素类染料、罗丹明类染料、Cy系列染料、Alexa系列染料和蛋白类染料。

20.根据权利要求18所述的抗体偶联物，其特征在于，所述酶选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6-磷酸葡萄糖脱氧酶。

21.根据权利要求18所述的抗体偶联物，其特征在于，所述放射性同位素选自²¹²Bi、¹³¹I、¹¹¹In、⁹⁰Y、¹⁸⁶Re、²¹¹At、¹²⁵I、¹⁸⁸Re、¹⁵³Sm、²¹³Bi、³²P、⁹⁴mTc、⁹⁹mTc、²⁰³Pb、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁴³Sc、⁴⁷Sc、¹¹⁰mIn、⁹⁷Ru、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁶⁸Cu、⁸⁶Y、⁸⁸Y、¹²¹Sn、¹⁶¹Tb、¹⁶⁶Ho、¹⁰⁵Rh、¹⁷⁷Lu、¹⁷²Lu和¹⁸F。

22.根据权利要求18所述的抗体偶联物，其特征在于，所述化学发光试剂选自鲁米诺、光泽精、甲壳动物荧光素、联吡啶钌、吖啶酯、二氧环乙烷、洛粉碱和过氧草酸盐。

23.根据权利要求18所述的抗体偶联物，其特征在于，所述纳米颗粒类标记物选自纳米颗粒和胶体。

24.根据权利要求23所述的抗体偶联物，其特征在于，所述纳米颗粒选自有机纳米颗粒、磁性纳米颗粒、量子点纳米颗粒和稀土络合物纳米颗粒。

25.根据权利要求23所述的抗体偶联物，其特征在于，所述胶体选自胶体金属、分散型染料、染料标记的微球和乳胶。

26.根据权利要求25所述的抗体偶联物，其特征在于，所述胶体金属选自胶体金、胶体银和胶体硒。

27.根据权利要求16所述的抗体偶联物，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包被至固相。

28.根据权利要求27所述的抗体偶联物，其特征在于，所述固相选自微球、板和膜。

29.根据权利要求28所述的抗体偶联物，其特征在于，所述固相选自磁性微球、塑料微球、塑胶微粒、微孔板、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜。

30.一种检测B型链球菌的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1至15任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求16至29任一项所述的抗体偶联物。

31.一种核酸，其特征在于，其编码权利要求1至15任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

32.一种载体，其特征在于，其含有权利要求31所述的核酸。

33.一种细胞，其特征在于，其含有权利要求31所述的核酸或权利要求32所述的载体。

34.一种制备权利要求1至15任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，其特征在于，其包括：培养权利要求33所述的细胞。