CN116802500A - 用于治疗肾损伤和肾衰竭的方法和组合物 - Google Patents

用于治疗肾损伤和肾衰竭的方法和组合物 Download PDF

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Abstract

一种为肾脏替代疗法(RRT)设计治疗计划的方法，包括检测从受试者获得的体液样品中一种或多种生物标志物的水平。可以将一种或多种水平与持续RRT治疗的预期获益和/或成功终止RRT的预期能力相关联。该方法可以包括将受试者分配到预定的个体亚群的步骤，所述个体亚群表现出关于符合继续或停止RRT的标准的已知状态。在一些实施方案中，通过将体液导入测定仪器并使体液与结合试剂，例如抗体进行接触来检测生物标志物水平。

Description

用于治疗肾损伤和肾衰竭的方法和组合物
交叉引用的申请
本申请要求于2020年11月18日提交的第63/115,407号美国临时申请的权益，该临时申请的全部内容通过引用方式并入本文。
序列表
本申请包含序列表，该序列表已经通过EFS-Web以ASCII格式提交，并且在此通过引用方式完整并入。所述ASCII副本创建于2021年11月17日，名为A105893_1600WO_SL_ST25.txt，并且其大小为4,714字节。
背景技术
肾脏负责从体内排出水和溶质。其功能包括维持酸碱平衡、调节电解质浓度、控制血容量和调节血压。因此，由于损伤和/或疾病而导致肾功能丧失会导致相当高的发病率和死亡率。在以下文献中提供了对肾损伤的详细论述，即Harrison’s Principles ofInternal Medicine,第17版,McGraw Hill,New York,第1741-1830页，其全文通过引用方式并入本文。肾脏疾病和/或损伤可能是急性的或慢性的。急性和慢性肾脏疾病描述如下(摘自Current Medical Diagnosis&Treatment 2008,第47版,McGraw Hill,New York,第785-815页，其全文通过引用方式并入本文)：“急性肾衰竭是指肾功能在数小时至数天内恶化，导致含氮废物(如尿素氮)和肌酸酐潴留在血液中。这些物质的潴留称为氮质血症。慢性肾衰竭(慢性肾脏疾病)是由数月至数年的肾功能异常丧失导致的”。
急性肾损伤(AKI，也称为急性肾衰竭或ARF)是指肾小球滤过功能的突然降低(通常在约48小时至1周内检测到)。这种滤过能力的丧失导致通常由肾脏***的含氮(尿素和肌酸酐)和非含氮废物产物的潴留、尿排量减少，或两者兼有。据报道，超过10％的住院患者、4-15％的心肺转流术以及近高达三分之二的重症监护入院患者都会并发AKI，其生存率不仅与肾功能障碍的严重程度有关，还与肾功能障碍的持续时间有关。参见Hoste EA,Bagshaw SM,Bellomo R,Cely CM,Colman R,Cruz DN等人,Intensive Care Med2015；41(8):1411-23；Mehta S,Chauhan K,Patel A,Patel S,Pinotti R,Nadkarni GN等人,BMCNephrology.2018；19(1):91，其中每篇文献的全部内容都通过引用方式并入本文。AKI是全球发病率和死亡率的一个主要原因。据估计，至少一半的AKI病例在72小时内消退。与持续至少72小时的AKI病例相比，在72小时内消退的AKI病例倾向于具有明显更好的结局，尤其是对于严重AKI病例。已将持续至少72小时的少尿确定为启动肾脏替代疗法(RRT)的标准。参见Gaudry S,Hajage D,Schortgen F,Martin-Lefevre L,Pons B,Boulet E等人,TheNew England Journal of Medicine.2016；375(2):122-33，其全部内容都通过引用方式并入本文。最近的证据表明，三分之二AKI患者的肾功能障碍在3-7天内得以消退，而那些持续存在的患者在接下来的一年中生存率显著降低。参见Kellum JA,Sileanu FE,Bihorac A,Hoste EA,Chawla LS.Am J Respir Crit Care Med.2017；195(6):784-91，其全部内容都通过引用方式并入本文。AKI持续一周或更长时间称为急性肾脏疾病(AKD)，这事关重大，因为它会增加个体患慢性肾脏疾病及其后果的风险。在过去的十年里，已经建立了这种与慢性肾脏疾病(CKD)的联系，并且已经提出了对AKD患者管理的具体建议，以试图影响这种转变。参见Chawla LS,Bellomo R,Bihorac A,Goldstein SL,Siew ED,Bagshaw SM等人,NatRev Nephrol.2017；13(4):241-57；Chawla LS,Eggers PW,Star RA,Kimmel PL,The NewEngland Journal of Medicine2014；371(1):58-66，其中每篇文献的全部内容都通过引用方式并入本文。由此可见，早期鉴定处于AKD风险的个体将使这些所提议的干预措施能够适当实施，而且还可以鉴定哪些个体可以成为减轻AKI的更新的疗法的目标患者。
AKI的持续存在不仅与较长期结局相关，而且临床决策也受到医师对肾脏恢复的预期和何时启动RRT的决定的严重影响。目前，这几乎完全取决于对恢复可能性的临床预期，而没有市售的诊断试剂来协助这一决策过程。因此，关于RRT的时机存在重大争议，有研究表明，一些患者可以从较早启动的RRT中获益，而其他研究证明，一些接受RRT的个体可能不需要这种治疗，因为他们很快就会恢复肾功能。参见Bagshaw SM,Lamontagne F,Joannidis M,Wald R.Critical care 2016；20(1):245；Forni LG,Joannidis M.Nat RevNephrol2019；15(1):5-6，其中每篇文献的全部内容都通过引用方式并入本文。由此可见，早期且可靠地鉴定那些将恢复肾功能的个体能够使治疗分层，并避免身体外疗法的现有风险。这些风险包括血管到达、血流动力学不稳定、感染，以及微量元素、水溶性维生素和药物的清除。参见Ostermann M,Joannidis M,Pani A,Floris M,De Rosa S,Kellum JA和RoncoC.Blood Purif.2016；42(3):224-37，其全部内容都通过引用方式并入本文。其他考虑因素包括机器和临床医务人员的可获性、医疗保健费用以及患者不动性(同上)。
此外，关于启动后终止RRT的最佳条件知之甚少。提前和延迟终止RRT都可能对患者结果和资源利用产生负面影响。参见Katulka RJ,Al Saadon A,Sebastianski M,Featherstone R,Vandermeer B,Silver SA等人,Crit Care 2020；24(1):50；Kelly YP,Waikar SS,Mendu ML.Semin Dial 2019,32(3):205-209，其中每篇文献的全部内容都通过引用方式并入本文。
这些挑战强调了需要更好的方法来检测和评估哪些AKI患者将从持续RRT治疗中获益，并将他们与那些无需持续RRT治疗即可改善的患者或者尽管接受持续RRT治疗仍无法改善的患者区分开来。
发明内容
提供了用于评估受试者将从持续肾脏替代疗法(RRT)治疗中获益的可能性的方法和组合物。如本文所述，C-C基序趋化因子14(CCL14)的测量可用作一种生物标志物，以指示受试者是否会从持续RRT治疗中获益。备选地或与CCL14组合地，可将激肽释放酶-14(KLK14)用作生物标志物，以指示受试者是否会从持续RRT治疗中获益。此外，以下生物标志物，无论单独或组合使用时，都可以用作一种或多种生物标志物以指示受试者是否会从持续RRT治疗中获益：C-C基序趋化因子14、激肽释放酶-14、抗白细胞蛋白酶(antileukoproteinase)、组织蛋白酶B、C-C基序趋化因子1、C-C基序趋化因子16、C-C基序趋化因子23、C-C基序趋化因子24、C-C基序趋化因子28、几丁质酶-3样蛋白1、C-X-C基序趋化因子2、C-X-C基序趋化因子9、dickkopf相关蛋白1、弹性蛋白酶抑制因子(elafin)、脂肪酸结合蛋白脂肪细胞、卵泡抑素相关蛋白3、肝细胞生长因子样蛋白、***结合蛋白2、***结合蛋白4、***结合蛋白7、金属蛋白酶抑制因子1、金属蛋白酶抑制因子2、金属蛋白酶抑制因子4、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、巢蛋白-1(nidogen-1)、OX-2膜糖蛋白、白介素-16前体蛋白、促乳素、肾素、组织因子途径抑制因子、肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、肿瘤坏死因子受体超家族成员18、肿瘤坏死因子受体超家族成员6B和WNT1诱导型信号传导通路蛋白1。
持续RRT治疗对受试者的益处可包括下列中的一种或多种，即肾功能提高、肾小球滤过率(GFR)增加、血清肌酸酐减少、尿排量增加、血流动力学优化、血压调节、电解质和维生素水平调节、预期寿命延长以及生活标准提高。该列表并非限制性的。
在本公开的一个方面，用于评估受试者将从持续RRT治疗中获益的可能性的方法包括通过分析物结合测定法检测至少一种体液样品中一种或多种前述生物标志物的水平，以产生一个或多个测定结果。所述一个或多个测定结果可以单独使用或相互组合使用(例如，可以将两个或更多个测定结果组合成单个综合测定结果)。在一些实施方案中，一种或多种生物标志物可以包含CCL14或可以由CCL14组成。在一些实施方案中，一种或多种生物标志物可以包含KLK14或可以由KLK14组成。在一些实施方案中，一种或多种生物标志物可包含CCL14和KLK14或可由CCL14和KLK14组成。该方法进一步包括将一个或多个测定结果与受试者将从持续RRT治疗中获益的可能性或受试者不会从持续RRT治疗中获益的可能性相关联。在获得样品时，受试者可能正在接受RRT。该方法可以包括确定预期RRT治疗的持续时间的步骤。该方法可以包括根据关联步骤的结果来治疗受试者的步骤。例如，受试者可以通过继续或终止RRT进行治疗。治疗可以基于受试者从持续RRT治疗中获益的可能性。如果受试者从持续RRT中获益的可能性上升，则治疗可包括施用持续的RRT。如果受试者从持续RRT治疗中获益的可能性未上升(即，受试者不会从施用持续RRT中获益的可能性上升)，则治疗可以包括终止RRT治疗。在其中治疗包括持续RRT的一些实施方案中，可以在收集一种或多种体液样品后施用RRT至少约6、8、12、24、48或72小时。在其中治疗包括终止RRT的一些实施方案中，可以立即终止RRT(基本上与收到测试结果同时进行)和/或在收集一种或多种体液样品时的约6、8、12、24、48或72小时内终止。
有多种类型的RRT可供使用，其可以包括不同的透析管路***部位和关于定时透析过程的不同方案。用持续RRT治疗受试者的步骤可以包括以下透析类型中的一种或多种：连续性肾脏替代疗法、间歇性肾脏替代疗法、延时间歇性肾脏替代疗法、连续性血液透析、连续性血液滤过、连续性血液透析滤过、间歇性血液透析、间歇性血液滤过、间歇性血液透析滤过、紧急血液透析、腹膜透析、缓慢连续性超滤和持续性低效透析。参见，例如Gemmel L等人,BJA Education 2017,17(3):88–93；Claure-Del Granado R,“Role of AcuteDialysis(CRRT,SLED,Intermittent hemodialysis,other),”Renal&Urology News 2017，其中每篇文献的全部内容都通过引用方式并入本文。除了透析之外，RRT还可以包括肾移植。终止RRT可以包括终止前述透析类型中的一种。
关联步骤可以包括将受试者分配到预定的个体亚群的步骤，所述个体亚群表现出关于从施用持续RRT中获益的已知状态。可以通过将一个或多个测定结果中的每一个与在群体研究中选定的特定生物标志物的单个阈值进行比较来进行分配。在使用多个测定结果的情况下，可以通过将两个或更多个测定结果的单一综合结果与相应的综合阈值进行比较来进行分配。所用的阈值可将群体分成高于阈值的第一亚群，相对于等于或低于阈值的第二亚群，该第一亚群具有从持续RRT治疗中获益的增加倾向。在某些情况下，这种倾向可能是从超过1天、超过2天或超过3天的预期RRT治疗(例如，至少2天、至少3天或至少4天)中获益。该阈值可以将群体分成等于或低于阈值的第二亚群，相对于高于阈值的第一亚群，该第二亚群从持续RRT治疗中获益的倾向降低。在某些情况下，这种倾向可能是从超过1天、超过2天或超过3天的预期RRT治疗(例如，至少2天、至少3天或至少4天)中获益。
关联步骤可以包括将受试者分配到预定的个体亚群的步骤，所述个体亚群表现出关于已成功终止或未成功终止RRT的已知状态。可以通过将一个或多个测定结果中的每一个与在群体研究中选定的单个阈值进行比较来进行分配。在使用多个测定结果的情况下，可以通过将两个或更多个测定结果的单一综合结果与相应的综合阈值进行比较来进行分配。所用的阈值可将群体分成测量值高于阈值的第一亚群和测量值等于或低于阈值的第二群体，该第一亚群未成功终止RRT，该第二群体已成功终止RRT。在某些情况下，成功终止RRT可能发生在自进行测量之时起的1、2或3天内。
关联步骤可以包括将测定结果(例如，单个测定结果或综合测定结果)与先前在受试者中测量的基线进行比较。基线可能是在受试者未接受RRT期间测量的。
在一些实施方式中，可以将受试者分配到上述第一亚群之一和/或测定结果可以高于上述基线。这种受试者可以通过施用持续RRT(例如，继续RRT)进行治疗。可以在采样后施用RRT超过1天、超过2天或超过3天(例如，至少2天、至少3天或至少4天)。
在一些实施方式中，可以将受试者分配到上述第二亚群之一和/或测定结果可以不高于上述基线。这种受试者可以通过终止RRT治疗来进行治疗。在某些情况下，可以立即终止RRT(基本上与收到测试结果同时进行)。在某些情况下，可以在获得样品时的1天、2天或3天内终止RRT。备选地，在某些情况下，可以将RRT维持1、2或3天，之后再终止RRT。
在一些实施方案中，分析物结合测定可以包括抗体。至少一种体液样品可包括尿液样品、全血样品、血浆样品或血清样品。在一些实施方案中，至少一种体液样品包括尿液样品和血浆样品。
在一些实施方案中，除了AKI或受试者对此正在接受RRT治疗的其他肾脏疾病/功能障碍之外，受试者还可能出现其他病变。例如，受试者可能患有(例如，已被诊断为或怀疑可能患有)以下病变中的一种或多种：充血性心力衰竭、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肝硬化、慢性肾脏疾病、癌症、慢性阻塞性肺病、贫血、脓毒症、休克和低血压。在获得样品之前约12、24、36、48、72、96或120小时内，受试者可能经历过手术或外伤。可以在RRT启动后约6、8、12、24、36、48或72小时内收集样品。在获得样品时，受试者可能患有急性肾损伤(AKI)。在获得样品时，受试者可能处于KDIGO 2期或3期急性肾损伤。可以在受试者符合KDIGO 2期急性肾损伤标准的约6、8、12、24、36、48或72小时内启动RRT。可以在受试者符合KDIGO 3期急性肾损伤标准的约6、8、12、24、36、48或72小时内启动RRT。
可以测量从受试者获得的一种或多种体液样品中的生物标志物水平。在一些实施方案中，这是通过将选自一种或多种所收集的体液样品中的单个体液样品导入测定仪器来实现的。该测量可以通过由分析物测定仪器执行的分析物结合测定来产生。测定仪器可以使体液样品的全部或一部分与一种或多种结合试剂进行接触。所述一种或多种结合试剂中的每一种可以结合体液样品中的单个特定生物标志物，以检测该生物标志物。例如，结合剂可以结合C-C基序趋化因子14、激肽释放酶-14或上文列出的任何其他生物标志物。然后，测定仪器可以为每种特定生物标志物生成一个或多个测定结果，其指示该特定生物标志物与结合试剂的结合。
在一些实施方案中，在测定仪器内或与测定仪器相关联的结合试剂可以包括抗体。在一些实施方案中，抗体可以是单克隆抗体。在一些实施方案中，结合试剂可以包括抗体的片段。在一些实施方案中，对于测定仪器为其生成测定结果的每种特定生物标志物，可以通过将结合的生物标志物与也结合该生物标志物的第二结合试剂进行接触来生成测定结果。第二结合试剂可以与可检测标记物缀合以产生可检测信号。对于每种特定生物标志物，可检测标记物可以是不同的。在一些实施方案中，第二结合试剂可以包括抗体。在一些实施方案中，抗体可以是单克隆抗体。在一些实施方案中，第二结合试剂可以包括抗体的片段。所述一种或多种结合试剂可以是多种结合试剂，其中每种结合试剂对不同的生物标志物而言具有特异性。多种结合试剂中的每一种结合试剂可以结合到测定仪器的不同区域。
在一些实施方案中，在进行前述一种或多种测定时，受试者可能出现以下一种或多种临床指征：(i)少尿或无尿超过72小时，(ii)血尿素氮超过40mmol/L，(iii)血清钾浓度大于6mmol/L，(iv)尽管使用碳酸氢盐、葡萄糖-胰岛素输注或两者联合，但血清钾浓度仍大于5.5mmol/L，(v)在单纯代谢性酸中毒或混合性酸中毒的背景下，pH值低于7.15，以及(vi)急性肺水肿。在一些实施方案中，受试者可能出现以下一种或多种RRT指征：容量超负荷、酸碱异常(例如，严重代谢性酸中毒)、电解质紊乱(例如，严重高钾血、严重低钠血、严重高钠血、严重高磷酸盐血等)，以及明显的***症状(例如，脑病、心包炎、血小板功能障碍、营养不良、心力衰竭、肺水肿等)。在高钾血的情况下，受试者的血清钾水平可为至少约6.0-6.5mmol/L。受试者可能具有Tandukar等人,Chest.2019年3月；155(3):626-638(doi:10.1016/j.chest.2018.09.004)中概述的连续性RRT的任何指征，该文献全部内容都通过引用方式并入本文。
在本公开的另一方面，检测受试者中一种或多种肾损伤标志物的方法包括检测从受试者获得的体液样品中一种或多种前述生物标志物的水平。在一些实施方案中，一种或多种生物标志物包含C-C基序趋化因子14或由C-C基序趋化因子14组成。在一些实施方案中，一种或多种生物标志物包含激肽释放酶-14或由激肽释放酶-14组成。在一些实施方案中，一种或多种生物标志物包含C-C基序趋化因子14和激肽释放酶-14或由其组成。受试者可能患有(例如，已被诊断为或怀疑可能患有)肾功能损伤、肾功能减退、急性肾损伤、持续性急性肾损伤、急性肾脏疾病或慢性肾脏疾病。在获得样品时，受试者可能正在接受肾脏替代疗法(RRT)。该方法可以包括从受试者获得样品。体液样品可以是尿、全血、血清或血浆。样品可以从上文或本文别处描述的方法中描述的受试者中获得。
本公开包括一种试剂盒，该试剂盒包含可用于实施一种或多种所公开方法的组分。该试剂盒可包含一种或多种结合试剂，其中每种结合试剂可结合C-C基序趋化因子14、激肽释放酶-14和/或本文公开的任何生物标志物。该试剂盒可包含至少两种结合试剂(以结合一种或多种生物标志物中的至少两种)。试剂盒中的一种或多种结合试剂可以包含抗体。在一个示例中，抗体是单克隆抗体。在另一示例中，抗体是抗体的片段。
在本公开的另一方面，本文公开了一种***，其可以包含前述试剂盒中的一种。该***进一步包含测定仪器，该测定仪器配置为接收一种或多种体液样品，并为由试剂盒的试剂所检测的每种标志物生成对应于体液样品中生物标志物水平的测定结果。
发明详述
本文公开了用于确定接受RRT的受试者中适当治疗方案和/或用于确定受试者中预期用RRT治疗的持续时间的方法和组合物。受试者可能患有急性肾损伤(AKI)、急性肾脏疾病(AKD)、慢性肾脏疾病(CKD)或其他肾脏疾病或肾功能障碍。这些治疗方案可以包括肾脏替代疗法(RRT)。在各个方面，将一种或多种生物标志物，例如C-C基序趋化因子14(CCL14)、激肽释放酶-14(KLK14)和/或本文公开的或本领域已知的一种或多种其他肾损伤标志物的测量浓度或水平与受试者是或不是持续的RRT治疗的合适候选者的指定相关联。该相关性可用于指导受试者在施用持续的RRT方面(例如，继续或停止RRT)的疗法。
如本文所用的，“持续的”RRT指的是一段延长的持续时间的RRT(例如，预期RRT持续超过1天、2天、3天等)，并且“继续RRT”指的是保持让受试者接受RRT达至少一段延长的持续时间。“停止RRT”指的是将受试者从RRT中移出至少一段延长的持续时间(例如，至少1天、2天、3天等)。如本领域所理解的，RRT的停止也可称为从RRT中脱离、RRT的中断或RRT撤除。参见，例如Katulka RJ,Al Saadon A,Sebastianski M,Featherstone R,Vandermeer B,Silver SA等人,Crit Care 2020；24(1):50，其全部内容都通过引用方式并入本文。正如本文所理解的那样，如果受试者用持续RRT治疗，那么该受试者尚未接受停止RRT治疗，并且如果受试者接受了停止RRT治疗，那么该受试者尚未接受持续RRT治疗。当进行测试(即，当测量根据本公开的一种或多种生物标志物水平时)以确定受试者是否可能从持续RRT中获益时(例如，会从停止RRT中获益)，受试者可能目前正在接受RRT。
如本文所用的，“肾功能损伤”是指肾功能的量度突然出现(14天内，优选7天内，更优选72小时内，还更优选48小时内)可测量的下降。这种损伤可以通过例如肾小球滤过率(GFR)或估算的GFR降低、尿排量减少、血清肌酸酐增加、血清胱抑素C增加、对肾脏替代疗法的需求等来确定。“肾功能改善”是指肾功能的量度突然出现(14天内，优选7天内，更优选72小时内，还更优选48小时内)可测量的增加。
如本文所用的，“肾功能减退”是指肾功能突然出现(14天内，优选7天内，更优选72小时内，还更优选48小时内)下降，由血清肌酸酐的绝对升高大于或等于0.1mg/dL(≥8.8μmol/L)，血清肌酸酐升高百分比大于或等于20％(从基线起的1.2倍)或尿排量减少(已记录的少尿，每小时少于0.5ml/kg)鉴定。
如本文所用的，“急性肾损伤”或“AKI”是指肾功能突然出现(14天内，优选7天内，更优选72小时内，还更优选48小时内)下降，由血清肌酸酐绝对升高大于或等于0.3mg/dl(≥26.4μmol/l)，血清肌酸酐升高百分比大于或等于50％(从基线起的1.5倍)或尿排量减少(已记录的少尿，每小时少于0.5ml/kg达至少6小时)鉴定。该术语与“急性肾衰竭”或“ARF”同义。
AKI在病因上可分为肾前性、肾因性或肾后性。肾因性肾脏疾病可进一步分为肾小球、肾小管、肾间质和血管异常。下表描述了AKI的主要原因，该表改编自Merck Manual,第17版,第222章，并且其全部内容在此通过引用方式并入。
在缺血性AKI的情况下，病程可分为四个阶段。在持续数小时至数天的起始阶段，肾脏的灌注减少正在演变为损伤。肾小球超滤下降，滤液流量因肾小管内的碎屑而减少，并且发生滤液通过受损上皮的反向漏。在这个阶段之中，肾损伤可通过肾脏的再灌注来介导。起始之后是扩展阶段，该阶段的特征是持续的缺血性损伤和炎症，并且可能涉及内皮损伤和血管充血。在持续1至2周的维持阶段中，出现肾细胞损伤，并且肾小球滤过和尿排量达到最低。随后可进入恢复阶段，其中肾上皮得到修复并且GFR逐渐恢复。尽管如此，但患有AKI的受试者的生存率可能还是低至约60％。
AKI可能是由以下物质造成的：放射性造影剂(也称为对比介质)以及其他肾毒素，诸如环孢菌素、抗生素(包括氨基糖苷类)和抗癌药物(如顺铂)，通常会在几天至约一周的时间内显现出来。认为造影剂诱导的肾病(CIN，这是由放射性造影剂造成的AKI)是由肾内血管收缩(导致缺血性损伤)且因产生对肾小管上皮细胞具有直接毒性的活性氧种类而造成的。CIN通常表现为血尿素氮和血清肌酸酐的急剧(24-48小时内发作)但可逆(3-5天达到峰值，1周内消退)的升高。
通常报道的用于定义和检测AKI的标准是血清肌酸酐的突然(一般在约2-7天内或在住院期间内)升高。虽然已经确立了使用血清肌酸酐升高来定义和检测AKI，但在不同的出版物之间，血清肌酸酐升高的幅度和测量它以定义AKI的时间却差异很大。从传统上说，血清肌酸酐相对较大的增加，诸如100％、200％、增加至少100％至超过2mg/dL的值以及其他定义用于定义AKI。然而，最近的趋势是使用较小的血清肌酸酐升高来定义AKI。在以下文献中综述了血清肌酸酐升高、AKI与相关健康风险之间的关系，即Praught和Shlipak,CurrOpin Nephrol Hypertens 14:265-270,2005和Chertow等人,J Am Soc Nephrol 16:3365-3370,2005，这两篇文献以及其中所列参考文献的全部内容在此通过引用方式并入。正如这些出版物中所描述的，现在已知肾功能急剧恶化(AKI)以及死亡和其他有害结局的风险升高都与血清肌酸酐的非常小的增加有关。可以将这些增加测定为相对(百分比)值或标称值。据报道，血清肌酸酐比损伤前的值相对增加小至20％即指示肾功能急剧恶化(AKI)且健康风险增加，但更常见的定义AKI且健康风险增加的报道值是相对增加至少25％。据报道，低至0.3mg/dL、0.2mg/dL甚至0.1mg/dL的标称增加即指示肾功能恶化和死亡风险升高。血清肌酸酐升高至这些阈值的不同时间段已被用于定义AKI，例如，范围从2天、3天至7天，或者界定为患者在医院或重症监护室时间的可变时间段。这些研究表明，对于肾功能恶化或AKI，并不存在特定的血清肌酸酐升高阈值(或升高所用的时间段)，而是随着血清肌酸酐升高幅度的不断增加，风险持续上升。
一项研究(Lassnigg等人,J Am Soc Nephrol 15:1597-1605,2004)对血清肌酸酐的升高和降低进行了研究。心脏手术后血清肌酸酐轻度下降-0.1至-0.3mg/dL的患者死亡率最低。血清肌酸酐下降幅度较大(大于或等于-0.4mg/dL)或血清肌酸酐有任何升高的患者死亡率较高。这些发现使作者得出结论，即使肾功能发生非常细微的变化(如在手术后48小时内通过肌酸酐的微小变化所检测的)也会严重影响患者的结果。为了在临床试验和临床实践中就使用血清肌酸酐来定义AKI的统一分类***达成共识，Bellomo等人,CritCare.8(4):R204-12,2004(对于RIFLE标准，将该文献的全部内容在此通过引用方式并入)提出了以下分类方法来对AKI患者进行分层：
“风险”：血清肌酸酐比基线增加1.5倍或者尿产生<0.5ml/kg体重/小时达6小时；
“损伤”：血清肌酸酐比基线增加2.0倍或者尿产生<0.5ml/kg/小时达12小时；
“衰竭”：血清肌酸酐比基线增加3.0倍或者肌酸酐≥4.0mg/dL(355μmol/l)，伴有急剧升高≥0.5mg/dl(44μmol/l)或者尿排量低于0.3ml/kg/小时达24小时或者无尿达至少12小时；
并且包括两种临床结果：
“丧失”：对肾脏替代疗法的持续需求超过四周。
“ESRD”：终末肾脏疾病—对透析的需求超过3个月。
这些标准称为RIFLE标准，它提供了一种有用的临床工具来对肾脏状态进行分类。正如Kellum,Crit Care Med.36:S141-45,2008和Ricci等人,Kidney Int.73,538-546,2008(每篇文献的全部内容在此均通过引用方式并入)所论述的，RIFLE标准提供了AKI的统一定义，该定义已在许多研究中得到验证。正如本领域所理解的那样，RIFLE 0期可用于划分不符合AKI的RIFLE R期或任何更严重RIFLE阶段的标准的受试者(即，未患有肾损伤的受试者或者患有肾损伤但尚未进展至符合AKI的RIFLE R期或更严重RIFLE阶段的任何阈值标准的受试者)。
最近，Mehta等人,Crit Care 11:R31(doi:10.1186.cc5713),2007(该文献的全部内容在此通过引用方式并入)提出了由RIFLE修改而来的以下类似分类方法来对AKI患者(AKIN)进行分层：
“I期”：血清肌酸酐的增加大于或等于0.3mg/dL(≥26.4μmol/L)或增加至大于或等于基线的150％(1.5倍)或者尿排量少于每小时0.5mL/kg达超过6小时；
“II期”：血清肌酸酐增加至大于基线的200％(>2倍)或者尿排量少于每小时0.5mL/kg达超过12小时；
“III期”：血清肌酸酐增加至大于基线的300％(>3倍)或者血清肌酸酐≥4.0mg/dL(≥354μmol/L)伴有急剧升高至少0.5mg/dL(44μmol/L)或者尿排量少于每小时0.3mL/kg达24小时或无尿达12小时。
正如本领域所理解的那样，AKIN 0期可用于划分不符合AKI的AKIN I期或任何更严重AKIN阶段的标准的受试者(即，未患有肾损伤的受试者或者患有肾损伤但尚未进展至符合AKI的AKIN I期或更严重AKIN阶段的任何阈值标准的受试者)。
同样，肾脏疾病：改善全球结果(KDIGO)急性肾损伤工作小组。KDIGO急性肾损伤临床实践指南,Kidney inter.,增刊2012；2:1–138，提及RIFLE和AKIN两者，并提供以下AKI分期指南：
正如本领域所理解的那样，KDIGO 0期可用于划分不符合AKI的KDIGO 1期或任何更严重KDIGO阶段的标准的受试者(即，未患有肾损伤的受试者或者患有肾损伤但尚未进展至符合AKI的KDIGO 1期或更严重KDIGO阶段的任何阈值标准的受试者)。
CIN共识工作小组(McCollough等人,Rev Cardiovasc Med.2006；7(4):177-197，其全部内容在此通过引用方式并入)使用血清肌酸酐升高25％来定义造影剂诱导的肾病(这是AKI的一种类型)。尽管不同的小组提出的使用血清肌酸酐检测AKI的标准略有不同，但达成共识的是，血清肌酸酐的微小变化，诸如0.3mg/dL或25％，足以检测AKI(肾功能恶化)，并且血清肌酸酐变化的幅度是AKI严重程度和死亡风险的指标。
AKI的这些分类***通常包括每个分期/阶段的血清肌酸酐标准和尿排量标准。无论在本文中何处规定，可以将AKI的任何分期视为等同于(即，替换为)使受试者符合处于该AKI特定分期的任何单个标准。在一些实施方案中，本文公开的方法也可用于与经特定AKI分期定义的肾脏状态相关联(例如，达到特定AKI分期的可能性或在特定分期出现持续性AKI的可能性)，其中该特定AKI分期可以通过同时满足使受试者符合该特定分期的血清肌酸酐标准和使受试者符合该特定分期的尿排量标准来定义。在一些实施方案中，特定AKI分期可以通过满足所有标准(即，所有的血清肌酸酐标准和所有的尿排量标准两者)来定义。除非另有说明，否则本文公开的所有方法都可以根据这些实施方案中的任何一个来定义AKI的分期。在本领域中可以理解的是，除非上下文另有规定，否则在涉及使用本文公开的生物标志物时，类似定义的AKI分期通常可以彼此互换。也就是说，RIFLE R期、AKIN I期和KDIGO 1期通常可以互换；RIFLE I期、AKIN II期和KDIGO 2期通常可以互换；并且RIFLE F期、AKIN III期和KDIGO 3期通常可以互换。
尽管在几天时间内连续测量血清肌酸酐是一种公认的检测和诊断AKI的方法，并被视为评估AKI患者最重要的工具之一，但通常认为血清肌酸酐在诊断、评估和监测AKI患者方面存在一些局限性。血清肌酸酐升高至被认为可以诊断为AKI的值(例如，升高0.3mg/dL或25％)的时间段可以是48小时或更长时间，这取决于所使用的定义。由于AKI中的细胞损伤可在数小时内出现，因此在48小时或更长时间检测到的血清肌酸酐升高可能是损伤的晚期指标，如此一来，依赖血清肌酸酐可能会延迟AKI的诊断。此外，在肾功能快速变化的AKI最急性的阶段，血清肌酸酐并不是准确反映肾脏状态和治疗需求的良好指标。一些AKI患者将完全恢复，一些患者将需要透析(短期或长期)，还有一些患者将出现其他有害结局，包括死亡、重大不良心血管事件和慢性肾脏疾病。因为血清肌酸酐是滤过率的标志物，所以它并不区分AKI的病因(肾前性、肾因性、肾后性梗阻、动脉粥样硬化栓塞性等)或者肾因性肾脏疾病中损伤的类别或位置(例如，起源于肾小管、肾小球或肾间质)。尿排量同样受到限制。了解这些情况对于管理和治疗AKI患者可能至关重要。
如本文所用的，“持续性AKI”指的是在持久逆转之前持续至少48-72小时的AKI发作。AKI的逆转通常必须延续至少48小时，才能将AKI的任何后续发作视为不同的发作，而不是最初发作的持续存在。肾损伤的不同阶段，包括持续性AKI的定义，以及评估和治疗方法可在以下文献中找到，即Nat Rev Nephrol.2017年4月；13(4):241-257(doi:10.1038/nrneph.2017.2)，其全部内容通过引用方式并入本文。AKI特定阶段(例如，KDIGO 3期AKI)的持续存在可以以类似的方式来定义，其中最低的AKI分期必须在从该分期持久恢复之前维持48-72小时。
如本文所用的，术语“C-C基序趋化因子14”指的是存在于生物样品中的一种或多种多肽，这些多肽源自C-C基序趋化因子14前体(人类序列：Swiss-Prot Q16627(SEQ IDNO:1))：
MKISVAAIPF FLLITIALGT KTESSSRGPY HPSECCFTYT TYKIPRQRIM 50
DYYETNSQCS KPGIVFITKR GHSVCTNPSD KWVQDYIKDM KEN 93
已经在C-C基序趋化因子14中鉴定了以下结构域：
27在同等型2(SEQ ID NO:2)中R→QTGGKPKVVKIQLKLVG
如本文所用的，术语“激肽释放酶-14”指的是存在于生物样品中的一种或多种多肽，这些多肽源自激肽释放酶-14肽(人类序列：Swiss-Prot Q9P0G3(SEQ ID NO:3))：
已经在激肽释放酶-14中鉴定了以下结构域：
如本文所用的，术语“使信号与分析物的存在或量相关”反映了这种理解。通常经过使用标准曲线，使测定信号与分析物的存在或量(例如，浓度)相关，其中使用已知浓度的目标分析物计算出该标准曲线。正如该术语在本文中使用的那样，如果一种测定法可以生成可检测信号，该信号指示生物样品诸如体液样品中以生理相关浓度存在的分析物的存在或水平/量，则该测定法“被配置为检测”分析物。因为抗体表位在8个氨基酸的级别上，所以配置为检测目标标志物的免疫测定法也会检测与该标志物序列相关的多肽，只要这些多肽包含与测定中使用的一种或多种抗体结合所必需的一个或多个表位。
本文中关于生物标志物诸如本文所述的肾损伤标志物之一时所用的术语“相关标志物”，指的是特定标志物或其生物合成母体的一种或多种片段、变体等，它们可以作为标志物本身的替代物或作为独立的生物标志物进行检测。该术语还指存在于生物样品中的一种或多种多肽，这些多肽衍生自与其他组分(诸如结合蛋白、受体、肝素、脂质、糖类等)复合的生物标志物前体。
术语“正向”标志物，正如该术语在本文中使用的那样，指的是在罹患某种疾病或病况的受试者中，相对于未罹患该疾病或病况的受试者而言，经确定为升高的标志物。术语“负向”标志物，正如该术语在本文中使用的那样，指的是在罹患某种疾病或病况的受试者中，相对于未罹患该疾病或病况的受试者而言，经确定为降低的标志物。
如本文所用的术语“受试者”指的是人类或非人类生物体。因此，本文所述的方法和组合物适用于人类和兽类疾病。而且，虽然受试者优选为活生物体，但本文所述的发明也可用于死后分析。优选的受试者是人类，最优选的是“患者”，如本文所用的受试者指的是正在接受疾病或病况医疗护理的活人。这包括没有明确病痛但正在接受病变体征调查的人。
优选地，测量样品中的分析物。此类样品可获自受试者，或者可获自旨在提供给受试者的生物材料。例如，可以从正在评估是否可能移植到受试者中的肾脏上获得样品，并使用分析物测量来评估肾脏先前存在的损伤。优选的样品是体液样品。
如本文所用的术语“体液样品”指的是出于对目标受试者(例如患者或移植供体)进行诊断、预后、分类或评估的目的而获得的体液样品。在某些方面，可以为了确定现有病况的结局或治疗方案(例如RRT)对病况的影响而获得此类样品。优选的体液样品包括血液(包括全血、血清和血浆)、脑脊髓液、尿液、唾液、痰、胸腔积液、血滤液和超滤液。另外，本领域技术人员将认识到，某些体液样品在分级分离或纯化程序之后将更易于分析，例如，将全血分离成血清或血浆成分。
预后风险表示给定过程或结局出现的概率(“可能性”)。预后指标的水平或水平变化继而与发病(例如，肾功能恶化、日后AKI或死亡)概率增加有关的话，将其称为患者中出现不良结果的“可能性上升的指示”。
标志物测定
一般来说，免疫测定涉及使含有或怀疑含有所关注生物标志物的样品与至少一种特异性结合该生物标志物的抗体进行接触。然后生成信号，该信号指示由样品中的多肽与抗体结合形成的复合物的存在或量(例如，浓度)。然后使该信号与样品中生物标志物的存在或量相关。用于检测和分析生物标志物的许多方法和装置是本领域技术人员所熟知的。参见，例如美国专利6,143,576；6,113,855；6,019,944；5,985,579；5,947,124；5,939,272；5,922,615；5,885,527；5,851,776；5,824,799；5,679,526；5,525,524；和5,480,792，以及The Immunoassay Handbook,David Wild编著Stockton Press,New York,1994，其中每一项的全部内容在此均通过引用方式并入，包括所有表格、附图和权利要求。
本领域已知的测定装置和方法可以以各种夹心、竞争性或非竞争性测定形式利用标记分子，以生成与所关注生物标志物的存在或水平/量相关的信号。合适的测定形式还包括色谱法、质谱法和蛋白质“印迹”法。另外，某些方法和装置，诸如生物传感器和光学免疫测定法，可以用于在无需标记分子的情况下确定分析物的存在或量。参见，例如美国专利5,631,171；和5,955,377，其中每一项的全部内容在此均通过引用方式并入，包括所有表格、附图和权利要求。本领域技术人员还认识到，自动操作仪器，包括但不限于BeckmanAbbott/>Roche/>Dade Behring/>***，属于能够进行免疫测定的免疫测定分析仪。然而，可以利用任何合适的免疫测定法，例如酶联免疫测定法(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)、竞争性结合测定法等。
可以将抗体或其他多肽固定在多种固体支持物上以用于测定。可用于固定特异性结合成员的固相包括在固相结合测定中开发为和/或用作固相的那些。合适固相的实例包括过滤膜、纤维素基纸、微珠(包括聚合物、乳胶和顺磁性颗粒)、玻璃、硅晶片、微粒、纳米颗粒、TentaGel、AgroGel、PEGA凝胶、SPOCC凝胶和多孔板。可以通过将抗体或多种抗体以阵列形式涂覆在固体支持物上来制备测定条。然后可以将该条浸入测试样品中，再通过洗涤和检测步骤进行快速处理，以产生可测量信号，例如显色点。抗体或其他多肽可通过直接缀合至测定装置表面或通过间接结合而结合至测定装置的特定区域。在后一种情况的实例中，可以将抗体或其他多肽固定在颗粒或其他固体支持物上，并且将该固体支持物固定在装置表面。
生物测定需要用于检测的方法，并且最常用的对结果进行定量的方法之一是将可检测标记物与蛋白质或核酸缀合，该蛋白质或核酸对所研究的生物***中的一种成分具有亲和力。可检测标记物可以包括本身可检测的分子(例如，荧光部分、电化学标记物、金属螯合物等)，以及可以通过产生可检测反应产物(例如，酶类，诸如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)或通过本身可检测到的特异性结合分子(例如，生物素、地高辛、麦芽糖、寡聚组氨酸、2,4-二硝基苯、苯基砷酸盐、ssDNA、dsDNA等)而间接检测的分子。
固相和可检测标记缀合物的制备通常包括使用化学交联剂。交联试剂含有至少两个反应性基团，并且通常分为同官能交联剂(含有相同的反应性基团)和异官能交联剂(含有不同的反应性基团)。通过胺、巯基偶联或进行非特异性反应的同双官能交联剂可从许多商业来源获得。马来酰亚胺、烷基和芳基卤化物、α-卤代酰基和吡啶基二硫化物是硫醇反应性基团。马来酰亚胺、烷基和芳基卤化物以及α-卤代酰基与巯基反应形成硫醚键，而吡啶基二硫化物与巯基反应产生混合二硫化物。吡啶基二硫化物产物是可裂解的。酰亚胺酯对于蛋白质-蛋白质交联也非常有用。可以商购多种异双官能交联剂，每一种都兼有不同的属性以实现成功缀合。
本领域技术人员将会理解，从免疫测定中获得的信号是一种或多种抗体与靶生物分子(即，分析物)和多肽之间形成的复合物的直接结果，该靶生物分子和多肽含有抗体结合的一个或多个必要表位。虽然此类测定可以检测全长生物标志物并且可以将测定结果表示为所关注的生物标志物的浓度，但来自测定的信号实际上是样品中存在的所有此类“免疫反应性”多肽的结果。生物标志物的表达也可以通过免疫测定以外的方式来确定，包括蛋白质测量(诸如斑点印迹、western印迹、色谱法、质谱法等)和核酸测量(mRNA定量)。该列表并非意在限制。
在某些方面，本发明提供了用于分析所描述的生物标志物的试剂盒。该试剂盒包含用于分析至少一种测试样品的试剂，这些试剂包含至少一种与本文公开的生物标志物之一特异性结合的抗体。该试剂盒还可以包括用于执行本文所述的一种或多种预后相关的装置和说明书。优选的试剂盒会包含用于对分析物进行夹心测定的抗体对或对分析物进行竞争性测定的标记组分。优选地，抗体对包含与固相缀合的第一抗体和与可检测标记物缀合的第二抗体，其中第一和第二抗体各自结合肾损伤标志物。最优选地，每种抗体都是单克隆抗体。使用试剂盒和执行相关性的说明书可以采用标签的形式，该标签指的是在试剂盒的生产、运输、销售或使用过程中的任一时刻附着于或以其他方式伴随试剂盒的任何书面或录制材料。例如，术语标签包括广告传单和小册子、包装材料、说明书、录音带或录像带、计算机光盘、闪存盘以及直接印在试剂盒上的文字。
抗体
如本文所用的术语“抗体”指的是来源于、塑造自或基本上编码自一种免疫球蛋白基因或多种免疫球蛋白基因的肽或多肽或者其片段，能够特异性结合抗原或表位。参见，例如Fundamental Immunology,第3版,W.E.Paul编著,Raven Press,N.Y.(1993)；Wilson(1994；J.Immunol.Methods 175:267-273；Yarmush(1992)J.Biochem.Biophys.Methods25:85-97。术语抗体包括抗原结合部分，即保留结合抗原能力的“抗原结合位点”(例如，片段、子序列、互补决定区(CDR))，包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，由VH和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，由抗体单臂的VL和VH结构域组成；(v)dAb片段(Ward等人,(1989)Nature 341:544-546)，其由VH结构域组成；以及(vi)分离的互补决定区(CDR)。单链抗体也通过引用方式包括在术语“抗体”中。
本文所述的免疫测定中使用的抗体优选特异性结合本发明的生物标志物。术语“特异性结合”并非意在表示抗体仅与其预期靶标结合，因为如上所述，抗体与展示该抗体结合的一个或多个表位的任何多肽结合。相反，如果抗体对其预期靶标的亲和力比其对未展示一个或多个适当表位的非靶分子的亲和力高约5倍，则抗体“特异性结合”。优选地，抗体对靶分子的亲和力比其对非靶分子的亲和力高至少约5倍，优选10倍，更优选25倍，还更优选50倍，最优选100倍或更多。在优选的方面，优选的抗体的结合亲和力为至少约107M-1，优选为约108M-1至约109M-1、约109M-1至约1010M-1或约1010M-1至约1012M-1。
按照Kd＝koff/kon计算亲和力(koff为解离速率常数，Kon为结合速率常数，并且Kd为平衡常数)。可通过在平衡时测量不同浓度(c)下标记配体的结合分数(r)来确定亲和力。利用Scatchard方程：r/c＝K(n-r)为数据作图：其中r＝平衡时每摩尔受体的结合配体的摩尔数；c＝平衡时游离配体浓度；K＝平衡结合常数；并且n＝每个受体分子的配体结合位点数。通过作图分析，将r/c绘制在Y轴上，并将r绘制在X轴上，从而产生Scatchard图。通过Scatchard分析进行抗体亲和力测量在本领域是众所周知的。参见，例如van Erp等人,J.Immunoassay 12:425-43,1991；Nelson和Griswold,Comput.Methods ProgramsBiomed.27:65-8,1988。
术语“表位”指的是能够特异性结合抗体的抗原决定簇。表位通常由分子的化学活性表面基团组成，诸如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象表位和非构象表位的区别在于，在变性溶剂存在的情况下，与前者而非后者的结合会消失。
测定关联
在本文中提及使用生物标志物时使用的术语“关联/相关”可以指的是将受试者中一种或多种生物标志物的存在或水平/量(例如，浓度)与其在已知从持续RRT治疗中获益的人、或者已知在无需持续RRT的治疗下改善的人中的存在或水平/量进行比较。通常，这采取的形式是将生物标志物水平(例如，浓度)形式的测定结果与预定阈值进行比较，该预定阈值被选定作为指示发生某些日后结局的可能性，例如，在有或者没有施用持续RRT的情况下肾功能的改善。
选择一个阈值，除其他事项外，涉及在不同测试阈值下真假预测/相关性的分布，以及对治疗后果(或治疗失败)的估计。例如，当考虑施用一种疗效高且风险水平低的特定疗法时，几乎不需要进行测试，因为临床医师可以接受相当高的诊断不确定性。另一方面，在治疗方案效果不那么高且风险更高的情况下，临床医师往往需要更高程度的诊断确定性。因此，在选择阈值时涉及成本/获益分析。
可以通过多种方式来确定合适的阈值。例如，使用心脏肌钙蛋白诊断急性心肌梗塞的一个推荐阈值是正常群体中所见浓度的第97.5百分位。在某些情况下，阈值可以选自可能不会从持续RRT治疗中获益的受试者群体，如此一来，例如，该阈值排除了一定比例(例如，大部分)的这些受试者(例如，将阈值设定在第70、75、80、85、90、95、97.5、98、99、99.5或99.9百分位数)，使他们避免划分为从持续RRT治疗中获益的可能性上升。在某些情况下，阈值可以选自可能会从持续RRT治疗中获益的受试者群体，如此一来，例如，该阈值包括一定比例(例如，大部分)的这些受试者(例如，将阈值设定在第0.1、0.5、1、2、2.5、5、10、15、20、25或30个百分位数)，使他们划分为从持续RRT治疗中获益的可能性上升。
另一种方法可以是查看来自同一患者的系列样品(例如，2、3、4、5个或更多个时间间隔的样品)，其中使用先前的“基线”结果来监测生物标志物水平的时间变化。例如，生物标志物的基线水平可以根据受试者在接受RRT之前来自该受试者的一次或多次(例如，平均)测量值和/或根据受试者已经接受RRT之后来自该受试者的一次或多次(例如，平均)测量值来建立。在某些情况下，基线水平可以根据特定时间范围内(例如，启动RRT前1、2、3、4或5天内和/或启动RRT后1、2、3、4或5天内)的一次或多次测量值来建立。在RRT期间测得的正向生物标志物水平超过基线水平的增加可能表明从持续RRT治疗中获益的可能性上升和/或在RRT期间测得的正向生物标志物水平超过基线水平的降低可能表明从持续RRT治疗中获益的可能性下降。在某些情况下，只要一种或多种生物标志物水平相对于基线水平保持稳定、持续增加或以一定速率持续增加，就可以继续RRT。在某些情况下，如果一种或多种生物标志物水平相对于基线水平保持稳定、持续降低或以一定速率持续降低，则可以停止RRT。备选地，相反的关系可以适用于负向标志物。相对于基线的趋势可以根据RRT期间的一次或多次测量值或者在接受RRT的持续时间内(例如，1天、2天或3天内)的所有测量值来确定或评估。
群体研究也可用于选择决策阈值。接收者操作特征(“ROC”)起源于第二次世界大战期间为分析雷达图像而发展起来的信号检测理论领域，并且ROC分析通常用于选择能够最好地区分“患病”亚群和“未患病”亚群的阈值。当一个人测试呈阳性但实际上并未患病时，在这种情况下就会出现假阳性。另一方面，当一个人测试呈阴性时，表明他们很健康，而实际上他们却患有疾病，这时候出现的是假阴性。为了绘制ROC曲线，随着决策阈值的不断变化，确定真阳性率(TPR)和假阳性率(FPR)。由于TPR等同于灵敏度而FPR等于1-特异度，因此有时称ROC图为灵敏度相对于(1-特异度)的关系图。完美测试的ROC曲线下面积为1.0；随机测试的面积为0.5。选择一个阈值以提供可接受的特异度和灵敏度水平。
在此上下文中，“患病”意指具有一种特征(存在某种疾病或病况或出现某些结局)的群体，而“未患病”意指缺乏该特征的群体。虽然单个决策阈值是这种方法的最简单的应用，但是也可以使用多个决策阈值。例如，低于第一阈值，可以以相对高的置信度确定不存在疾病，而高于第二阈值，也可以以相对高的置信度确定存在疾病。在两个阈值之间可以视为不确定。这在本质上仅仅是示例性的。
根据本公开的某些方面，一个或多个阈值可用于确定受试者是否可能从RRT中获益。在单个决策阈值的示例中，高于正向标志物的阈值可能表明将受试者分配到会从RRT中获益的组，而等于或低于该阈值可能表明将受试者分配到不会从RRT中获益的组。备选地，相反的关系可以适用于负向标志物。具体而言，等于或低于阈值可能表明将受试者分配到会从RRT中获益的组，而高于该阈值可能表明将受试者分配到不会从RRT中获益的组。此外，就像患病与未患病相比的实例，可以使用多个决策阈值来评估受试者是否可能从RRT中获益。例如，低于第一阈值，可以以相对高的置信度确定受试者不会从RRT中获益的可能性，而高于第二阈值，也可以以相对高的置信度确定受试者会从RRT中获益的可能性。在两个阈值之间可以视为不确定。这在本质上仅仅是示例性的。
根据不同的方面，使用了本文公开的一种或多种生物标志物(例如，CCL14和/或KLK14)，单独使用或以包含多种生物标志物的组的方式，用于将测定结果与受试者分类(例如，响应于RRT的结局的可能性)相关联。可以通过如本文别处所述的阈值比较进行分类。除了阈值比较之外，用于关联测定结果的其他方法在本领域中也是已知的。这些方法可以将两个或更多个变量组合在一起(例如，两种或更多种本文公开的生物标志物和/或一种或多种生物标志物与本文别处公开的一种或多种其他临床指标)使用，以关联一个或多个测定结果。这些方法包括，例如决策树分析、随机森林分析、m中的n个(阳性数)分析、神经网络、Bayesian模型和规则集。根据一些特定方面，通过将这些生物标志物和/或临床指标中的一种或多种组合成单个综合值而将它们组合在一起使用。用于将一种或多种生物标志物和/或临床指标组合成单个综合值的方法包括，例如乘法/除法(例如，生物标志物的乘积或比率)、加法/减法、逻辑回归、对数线性建模和使用线性判别。在这些方法中，可以将综合结果视为其本身就是一种标志物；也就是说，可以针对各个生物标志物为如本文所述的综合结果确定一个阈值，并将个体受试者的综合结果与该阈值进行比较。一些关联测定结果的方法，例如逻辑回归、决策树、规则集、Bayesian方法和神经网络方法，可以产生表示受试者属于多个类别中的一个分类的程度的概率值。
可以按照下列文献中所述获得测试准确性的量度，即Fischer等人,IntensiveCare Med.29:1043-51,2003，并用于确定给定的生物标志物的有效性。这些量度包括灵敏度和特异度、预测值、似然比、诊断优势比和ROC曲线面积。ROC图的曲线下面积(“AUC”)等于分类器将随机选择的阳性实例的排名高于随机选择的阴性实例的概率。可以认为ROC曲线下的面积等同于Mann-Whitney U检验或Wilcoxon秩检验，其中Mann-Whitney U检验检验在所考虑的两个组中获得的分数之间的中位数差异，如果这些组是连续数据组的话。
如上文所述，合适的测试可能会表现出有关这些不同量度的一个或多个以下结果：特异度大于0.5，优选为至少0.6，更优选为至少0.7，还更优选为至少0.8，甚至更优选为至少0.9，最优选为至少0.95，相应的灵敏度大于0.2，优选为大于0.3，更优选为大于0.4，还更优选为至少0.5，甚至更优选为0.6，再更优选为大于0.7，还更优选为大于0.8，更优选为大于0.9，最优选为大于0.95；灵敏度大于0.5，优选为至少0.6，更优选为至少0.7，还更优选为至少0.8，甚至更优选为至少0.9，最优选为至少0.95，相应的特异度大于0.2，优选为大于0.3，更优选为大于0.4，还更优选为至少0.5，甚至更优选为0.6，再更优选为大于0.7，还更优选为大于0.8，更优选为大于0.9，最优选为大于0.95；至少75％的灵敏度，结合至少75％的特异度；ROC曲线面积(AUC)大于0.5，优选为至少0.6，更优选为0.7，还更优选为至少0.75，甚至更优选为至少0.8，再甚至更优选为至少0.9，最优选为至少0.95；优势比不同于1，优选为至少约2或更大或者约0.5或更小，更优选为至少约3或更大或者约0.33或更小，还更优选为至少约4或更大或者约0.25或更小，甚至更优选为至少约5或更大或者约0.2或更小，最优选为至少约10或更大或者约0.1或更小；阳性似然比(按照灵敏度/(1-特异度)计算)大于1，至少为2，更优选为至少3，还更优选为至少5，最优选为至少10；和/或阴性似然比(按照(1-灵敏度)/特异度计算)小于1，小于或等于0.5，更优选为小于或等于0.3，最优选为小于或等于0.1。
C-C基序趋化因子14(CCL14)可作为一种生物标志物发挥作用，这种生物标志物与患有AKI或持续性AKI的受试者响应于持续的RRT治疗而改善的可能性相关。CCL14是小分子趋化因子家族的一员，最初认为其在白细胞趋化性中发挥作用，并与组织损伤和修复过程有关。CCL14以高亲和力结合趋化因子受体CCR1和CCR5，而以更低的亲和力结合CCR3。(Detheux M,Standker L,Vakili J,Munch J,Forssmann U,Adermann K等人,J ExpMed.2000；192(10):1501-8)。CCL14是单核细胞/巨噬细胞募集的一种重要趋化因子，并与多种疾病(包括类风湿性关节炎、多发性硬化和狼疮)中的促炎趋化性相关(Rump L,MatteyDL,Kehoe O,Middleton J.Cytokine.2017；97:133-40；Vyshkina T,Sylvester A,SadiqS,Bonilla E,Perl A,Kalman B.J Neuroimmunol.2008；200(1-2):145-52)。
激肽释放酶14(KLK14)可作为一种生物标志物发挥作用，这种生物标志物与患有AKI或持续性AKI的受试者响应于持续的RRT治疗而改善的可能性相关。激肽释放酶14是丝氨酸蛋白酶亚家族的一员，具有多种生理功能。(CA,Michael IP和DiamandisEEP.Mol Cancer Res.2004；2(5):257-80)。它可以通过激活或失活蛋白酶激活的受体来执行这些功能。(Oikonomopoulou K,Hansen KK,Saifeddine M,Tea I,Blaber M,Blaber SI,Scarisbrick I,Andrade-Gordon P,Cottrell GS,Bunnett NW,Diamandis EP和Hollenberg MD.J.Biol.Chem.(2006)281:32095–112)。研究认为激肽释放酶14参与疾病过程，包括乳腺癌。(Fritzsche F,Gansukh T,/>CA,Burkhardt M,Pahl S,MayordomoE,Winzer K-J,Weichert W,Denkert C,Jung K,Stephan C,Dietel,M,Diamandis EP,DahlE和Kristiansen G.Br.J.Cancer2006；94(4):540-7)。
可以与本发明的一种或多种生物标志物测定结果组合的其他临床指标包括人口统计信息(例如，体重、性别、年龄、种族)、病史(例如，家族病史、手术类型、既有疾病诸如动脉瘤、充血性心力衰竭、先兆子痫、子痫、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全或脓毒症)、毒素暴露类型(诸如NSAID、环孢菌素、他克莫司、氨基糖苷类、膦甲酸盐、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线造影剂或链脲霉素)、临床变量(例如，血压、体温、呼吸速率)、风险评分(APACHE评分、PREDICT评分、UA/NSTEMI的TIMI风险评分、Framingham风险评分)、尿总蛋白测量值、肾小球滤过率、估算的肾小球滤过率、产尿率、血清或血浆肌酸酐浓度、肾***抗原1(RPA1)测量值；肾***抗原2(RPA2)测量值；尿肌酸酐浓度、钠***分数、尿钠浓度、尿肌酸酐与血清或血浆肌酸酐比值、尿比重、尿渗透压、尿中尿素氮与血浆尿素氮比值、血浆BUN与肌酸酐比值和/或按照尿钠/(尿肌酸酐/血浆肌酸酐)计算的肾衰竭指数。可与本发明的一种或多种生物标志物测定结果组合的其他临床指标包括可能对RRT而言具有特异性的临床指标，诸如测量血清钾、血清碳酸氢盐、血清钠、血清磷酸盐、血液pH、动脉血气(PaO2、PaCO2)、出入液量(液体平衡)和尿排量，以及与肺水肿、脑病、心包炎和接受血管活性剂相关的临床状态。可与一种或多种肾损伤标志物测定结果组合的肾功能的其他量度描述于下文和Harrison’s Principles of InternalMedicine,第17版,McGraw Hill,New York,第1741-1830页和Current MedicalDiagnosis&Treatment 2008,第47版,McGraw Hill,New York,第785-815页，其中每篇文献的全部内容都在此通过引用方式并入。
治疗
肾脏替代疗法(RRT)是管理患有肾功能障碍(包括AKI、AKD或CKD)的患者的一种选择。RRT包括肾移植以及各种类型的透析。透析从体内过滤并去除废产物、电解质和水，类似于肾脏的功能。目前正在使用多种透析方案。不同类型的透析通常属于血液透析和腹膜透析的范畴。血液透析通过利用浓度梯度扩散穿过人工膜来从血液中清除溶质。腹膜透析利用腹膜作为半透膜来去除溶剂，也在临床上应用。与直接过滤血液的血液透析不同，腹膜透析包括将液体注入腹腔。腹膜作为过滤器发挥作用，然后将液体与伴随的废产物、电解质和多余的水一起去除。已经证明透析的时机与患者结果相关。以下文献对此进行了综述，即Pannu N和Noel Gibney RT.Ther Clin Risk Manag.2005；1(2):141-50，其全部内容在此通过引用方式并入。更具体的透析程序包括间歇性肾脏替代疗法(IRRT)和连续性肾脏替代疗法(CRRT)。IRRT包括间歇性血液透析、间歇性血液滤过和间歇性血液透析滤过。CRRT包括连续性血液滤过和连续性血液透析滤过。还有混合透析方案，称为延时间歇性肾脏替代疗法(PIRRT)。这些包括持续性低效透析(SLED)和延长持续时间的透析(EDD)。有些类型可以在受试者家中或旅行期间进行，而有些则需要在医护专业人士的协助下于临床环境中进行。本文描述的方法可以用于确定应该改变的RRT类型。例如，在一些实施方式中，如果确定受试者可能不会从持续的RRT治疗中获益，那么从业人员可以决定将受试者转换为较为温和的RRT形式，而不是完全停止RRT。
根据所公开的方法，基于本文别处描述的一种或多种生物标志物的一个或多个测定结果，可以将正在进行评估以接受持续RRT治疗或停止RRT治疗的受试者分配为从持续RRT治疗中获益的可能性相对上升或相对下降(例如，从测量一种或多种生物标志物开始，RRT治疗持续超过1、2、3天或更多天)。相应地，受试者可以接受持续的RRT治疗或停止RRT治疗。更具体而言，根据受试者的一种或多种生物标志物水平(例如，CCL14、KLK14和/或本文公开的其他生物标志物)是高于阈值生物标志物水平还是等于或低于阈值生物标志物水平，可以使受试者分别接受持续的RRT治疗或停止RRT治疗。继续进行RRT可能是预期延长RRT会使受试者获益，包括但不限于肾功能改善(例如，血清肌酸酐水平降低、尿排量增加和/或AKI恢复到不那么严重的阶段)。在进行停止RRT治疗时，可能是预期受试者不会从持续RRT治疗中获益。不会从持续RRT治疗中获益的受试者可能是其健康状况会改善而无需持续RRT的受试者。这种改善可以包括肾功能改善，以及其他健康状况的改善。备选地，不会从持续RRT治疗中获益的受试者可能是在接受或不接受持续RRT治疗的情况下都不会经历健康状况改善的受试者。在后一种情况下，与持续RRT治疗相关的风险和资源利用可能超过对受试者的益处。在一些实施方案中，可以将已经成功接受停止RRT治疗的受试者视为不会从持续RRT治疗中获益的受试者。如果受试者不接受RRT，例如持续超过1、2、3、4或5天而无需重新进行RRT，并且如果在此期间受试者未出现死亡和/或其他重大不良肾脏事件，则可以认为RRT的停止是成功的。
停止RRT可以包括一个或多个步骤，诸如断开或移除一条或多条管路、针头、端口、透析器、透析袋、废液袋和/或泵，使它们相互之间断开或移除和/或与受试者分离。停止RRT可以包括向医疗卫生从业人员或接受透析的受试者发出医嘱以停止RRT。停止RRT可以包括将医嘱输入到电子患者管理***中，以停止RRT或修改患者透析时间表，从而解除或取消预定的透析治疗。在一些实施方案中，可以向停止透析的受试者施用替代性(例如，更保守的/较为温和的)治疗。例如，可以通过调节已知对肾脏有害的化合物的量或选择来调整该化合物的施用(例如，停用或减少已知对肾脏有害的化合物的递送)、推迟或避免已知会损害肾脏的手术、调整利尿剂施用、启动目标导向疗法等来治疗受试者。本领域技术人员知道与本文所述诊断方法相关而论述的许多疾病的合适治疗方法。参见，例如Merck Manual ofDiagnosis and Therapy,第17th版Merck Research Laboratories,Whitehouse Station,NJ,1999，其全部内容在此通过引用方式并入。在急性肾损伤(AKI)的情况下使用利尿剂，以优化液体管理并协助管理电解质紊乱。然而，利尿剂治疗也可能产生不良反应，包括容量耗竭、低血压、心输出量减少和肾功能恶化。与利尿剂的施用、给药或停用相关的决定不仅取决于肾脏状态，还取决于患者状态的其他方面，例如液体平衡。本领域技术人员理解决定在患有或处于发生AKI风险的患者中适当使用利尿剂的这些因素，如在以下文献中所述，例如Cerda,J.“Loop Diuretics in Acute Kidney Injury”Encyclopedia of Intensive CareMedicine,2012版,第1337-1341页，其全部内容通过引用方式并入本文。
施用持续的RRT可以包括一个或多个步骤，诸如连接或安装一条或多条管路、针头、端口、透析器、透析袋、废液袋和/或泵，使它们相互之间和/或与受试者连接。施用持续的RRT可以包括操作和/或监测透析***。施用持续的RRT可以包括在透析期间监测受试者(例如，受试者的生命体征)。施用持续的RRT可包括向医疗卫生从业人员或接受透析的受试者发出医嘱以继续进行RRT。施用持续的RRT可包括将医嘱输入到电子患者管理***中，以继续RRT或修改患者透析时间表，从而安排或增加透析治疗。经确定为可能从持续RRT治疗中获益的受试者可以根据本文所述的方法(例如，使用相同的一种或多种生物标志物和/或不同的生物标志物)在初次或前次测试后约12、24、36、48、60、72、84、96小时或更长时间内重新测试，以确定是否应进一步继续RRT。对于接受持续透析的受试者，可以规定卧床休息或者开具适合持续透析受试者的饮食或药物处方。除了持续RRT之外，还可以向接受持续RRT治疗的受试者施用上述停止RRT的替代性治疗选项。
本领域技术人员很容易理解，本发明非常适应于实现所提及的目标并获得所提及结果和优点，以及其中所固有的那些。本文提供的实施例代表优选实施方案，它们是示例性的，并且并非意在限制本发明的范围。
以下实施例中提及的体液样品是按照下列文献中的描述进行收集的，即Hoste E,Bihorac A,Al-Khafaji A,Ortega LM,Ostermann M,Haase M,Zacharowski K等人,"Identification and Validation of Biomarkers of Persistent Acute KidneyInjury:The Ruby Study."Intensive Care Med.2020；46:943-53，其全部内容在此通过引用方式并入。虽然目前正在接受RRT的受试者被排除在Ruby研究之外，但以下实施例中的受试者是那些后来开始RRT的受试者，并且在启动RRT之后首先收集了这些受试者的样品。
实施例
实施例1.急性患病受试者的样品收集
本研究的目的是收集入组时已知患有中度或重度AKI(KDIGO AKI 2或3期)的患者的血液和尿液样品。该研究入选了约300名达到KDIGO AKI 2期标准36小时内的危重住院成年受试者。
要加入该研究，每名受试者必须满足以下所有纳入标准，并且不符合以下任何排除标准：
纳入标准
21岁或超过21岁的男性和女性；入组后在医院或医疗机构接受护理至少48小时；在入组时使用留置导尿管作为标准护理；在第一次样品收集时受试者必须患有急性肾损伤(KDIGO 2期或3期)；第一次样品必须在满足KDIGO 2期标准的36小时内收集；由患者或合法授权代表提供的书面知情同意书。所有受试者均因以下适应症列表中的至少一项而住院：充血性心力衰竭、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、肾功能不全、肾小球滤过低于正常范围、肝硬化、血清肌酸酐高于正常范围、脓毒症、肾功能损伤、肾功能减退、急性肾损伤(KDIGO 1期、2期或3期)、呼吸***疾病、手术、心血管疾病和神经***疾病。合并症包括慢性肾脏疾病、糖尿病、充血性心力衰竭、冠状动脉疾病、高血压、慢性阻塞性肺病和癌症。在收集有关手术或外伤的数据时，受试者在入组后3天内经历过手术或外伤。第一次样品是在入组后12小时内收集的。因此，经历过手术或外伤的受试者在第一次样品收集前3.5天(84小时)内经历过手术或创伤。
排除标准
既往肾移植；仅舒适措施状态；在入组时已经接受透析(急性或慢性)或者急需透析；人类免疫缺陷病毒(HIV)或肝炎病毒(根据现有病历)感染史；特殊人群，诸如孕妇、囚犯或失去自理能力的个体；患者符合以下任何一项：(i)活动性出血，预计一天需要>4个单位的PRBC，(ii)血红蛋白<7g/dL，(iii)医师认为的禁止为临床研究目的而抽取连续血样的任何其他情况。
一旦获得知情同意书且资格得到确认，为每名患者都收集了血样以处理成血浆和血清，并为每名患者都收集了尿液标本，在患者住院期间，前3天每天收集两次，然后每天一次直至第7天，如下所示：(i)抽取经EDTA抗凝处理的静脉或动脉血样(10mL)，以处理成血浆；(ii)抽取不含抗凝剂的静脉或动脉血样(3mL)，以处理成血清；(iii)获得并处理尿液样品(50mL)。
实施例2.使用分析物评估正在接受肾脏替代疗法(RRT)的患者是否停止治疗
将来自实施例1的在入选到实施例1的研究后7天内开始接受肾脏替代疗法(RRT)的患者纳入以下分析中。在实施例1的研究入组时，从每名患者中收集血样和尿液样品，并且在受试者住院期间每12小时收集一次直至第3天，然后此后每24小时收集一次直至第7天。通过使用市售测定试剂或以侧流测定形式的标准免疫测定法测量患者接受RRT期间的日子所收集的尿液和/或血浆样品中的分析物浓度。
根据患者的医学记录确定肾脏替代治疗状态。从实施例1的研究入组到此后6天，以及此后7天到90天进行治疗时，每天记录状态。将两个队列定义为代表“停止”和“未停止”人群。“停止”表示那些在样品收集时间后1、2或3天内结束其RRT治疗的患者，并且他们在RRT治疗结束后存活下来而未接受额外的RRT治疗达至少2天。以下文献记录了成功停止RRT的这一时间范围，即Yoshida T,Matsuura,R,Komaru Y等人,Nephrol.2019:24(3)；287-93，其全部内容在此通过引用方式并入。“未停止”表示那些在样品收集时间后其RRT治疗持续超过1、2或3天的患者，或者他们在RRT治疗结束后2天内死亡，或者他们在RRT治疗结束后2天内接受了额外的RRT。
通过对来自不同样品收集的分析物浓度进行接收者操作特征(ROC)分析来确定区分“停止”和“未停止”队列的能力。通过ROC曲线下面积(AUC)来评估分析物的性能。本文公开的所有标志物均为正向标志物(AUC>0.5与RRT的持续(即“未停止”)相关)。下文表1a、2a和3a分别报告了在样品收集后1天、2天或3天内停止RRT的情况下每种标志物的AUC以及停止、未停止和总样品数。
分析物区分“停止”和“未停止”队列的能力通过灵敏度(真阳性率)、特异度(真阴性率)和诊断优势比(相对于假阳性数与真阴性数的比值，真阳性数与假阴性数的比值)来进一步表征。真阳性指的是“未停止”人群中患者的分析物测试呈阳性，而真阴性指的是“未停止”人群中患者的分析物测试呈阴性。将观察到的浓度范围的第25、50(中位数)和75个百分位数的分析物浓度用作决策阈值，其中高于该阈值的值被视为阳性测试结果，而等于或低于该阈值的值被视为阴性测试结果。表1b、2b和3b分别报告了在样品收集后1天、2天或3天内停止RRT的情况下每种标志物的第25个百分位数定义的阈值、灵敏度、特异度和优势比；表1c、2c和3c分别报告了在样品收集后1天、2天或3天内停止RRT的情况下每种标志物的第50个百分位数(中位数)定义的阈值、灵敏度、特异度和优势比；表1d、2d和3d分别报告了在样品收集后1天、2天或3天内停止RRT的情况下每种标志物的第75个百分位数定义的阈值、灵敏度、特异度和优势比。通过自助法(bootstrap method)计算置信区间。“Inf”代表正无穷大。在特异度的点估计值为100％的情况下，通过将假阳性病例数加1来计算优势比的下界(报告为“>下限”)。
表1a：在样品收集后1天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)的情况下的AUC以及“停止”、“未停止”和总样品数。
表1b：由分析物浓度范围的第25个百分位数的阈值确定的灵敏度、特异度和优势比。在样品收集后1天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)。
/>
表1c：由分析物浓度范围的中位数的阈值确定的灵敏度、特异度和优势比。
在样品收集后1天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)。
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表1d：由分析物浓度范围的第75个百分位数的阈值确定的灵敏度、特异度和优势比。在样品收集后1天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)。
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表2a：在样品收集后2天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)的情况下的AUC以及“停止”、“未停止”和总样品数。
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表2b：由分析物浓度范围的第25个百分位数的阈值确定的灵敏度、特异度和优势比。在样品收集后2天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)。
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表2c：由分析物浓度范围的中位数的阈值确定的灵敏度、特异度和优势比。
在样品收集后2天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)。
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表2d：由分析物浓度范围的第75个百分位数的阈值确定的灵敏度、特异度和优势比。在样品收集后2天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)。
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表3a：在样品收集后3天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)的情况下的AUC以及“停止”、“未停止”和总样品数。
表3b：由分析物浓度范围的第25个百分位数的阈值确定的灵敏度、特异度和优势比。在样品收集后3天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)。
/>
表3c：由分析物浓度范围的中位数的阈值确定的灵敏度、特异度和优势比。
在样品收集后3天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)。
/>
表3d：由分析物浓度范围的第75个百分位数的阈值确定的灵敏度、特异度和优势比。在样品收集后3天内启动RRT治疗停止(如果出现的话)。
/>
虽然已经对本发明进行了足够详细的描述和举例说明，以供本领域技术人员制备和使用本发明，但是在不脱离本发明的精神和范围的情况下，各种替代方案、修改和改进应该是显而易见的。本文提供的实施例代表优选方面，它们是示例性的，并且并非意在限制本发明的范围。本领域技术人员将会想到其中的修改和其他用途。这些修改包含在本发明的精神内，并由权利要求的范围来限定。
对本领域技术人员来说易于显而易见的是，在不脱离本发明的范围和精神的情况下，可以对本文公开的发明进行不同的替换和修改。
本说明书中提及的所有专利和出版物都表明了本发明所属领域普通技术人员的水平。所有专利和出版物都通过引用方式并入本文，其程度如同具体且各自地指出每个单独的出版物均通过引用方式并入一样。
本文说明性描述的发明可以在不存在本文未明确公开的任何一个或多个要素、一个或多个限制的情况下适当实施。因此，例如，在本文的每个实例中，术语“包含”、“基本上由......组成”和“由......组成”中的任何一个均可以替换为其他两个术语中的任一个。已经使用的术语和表达用作描述性而非限制性术语，并且在使用这些术语和表达时，无意排除所示出和所描述的特征或其部分的任何等同形式，而是应当认识到，在所要求保护的本发明范围内可能进行各种修改。因此，应当理解的是，尽管已经通过优选方面和任选特征明确公开了本发明，但是本领域技术人员可以对本文公开的概念进行修改和变更，并且认为这些修改和变更处于由所附权利要求限定的本发明的范围内。
其他方面在以下权利要求中阐述。
序列表
<110> Astute Medical, Inc.
<120> 用于治疗肾损伤和肾衰竭的方法和组合物
<130> A105893 1600WO
<150> 63/115,407
<151> 2020-11-18
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 93
<212> PRT
<213> 人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> C-C基序趋化因子14 Swiss-Prot Q16627
<400> 1
Met Lys Ile Ser Val Ala Ala Ile Pro Phe Phe Leu Leu Ile Thr Ile
1 5 10 15
Ala Leu Gly Thr Lys Thr Glu Ser Ser Ser Arg Gly Pro Tyr His Pro
20 25 30
Ser Glu Cys Cys Phe Thr Tyr Thr Thr Tyr Lys Ile Pro Arg Gln Arg
35 40 45
Ile Met Asp Tyr Tyr Glu Thr Asn Ser Gln Cys Ser Lys Pro Gly Ile
50 55 60
Val Phe Ile Thr Lys Arg Gly His Ser Val Cys Thr Asn Pro Ser Asp
65 70 75 80
Lys Trp Val Gln Asp Tyr Ile Lys Asp Met Lys Glu Asn
85 90
<210> 2
<211> 109
<212> PRT
<213> 人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> C-C基序趋化因子14同等型2
<400> 2
Met Lys Ile Ser Val Ala Ala Ile Pro Phe Phe Leu Leu Ile Thr Ile
1 5 10 15
Ala Leu Gly Thr Lys Thr Glu Ser Ser Ser Gln Thr Gly Gly Lys Pro
20 25 30
Lys Val Val Lys Ile Gln Leu Lys Leu Val Gly Gly Pro Tyr His Pro
35 40 45
Ser Glu Cys Cys Phe Thr Tyr Thr Thr Tyr Lys Ile Pro Arg Gln Arg
50 55 60
Ile Met Asp Tyr Tyr Glu Thr Asn Ser Gln Cys Ser Lys Pro Gly Ile
65 70 75 80
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Lys Trp Val Gln Asp Tyr Ile Lys Asp Met Lys Glu Asn
100 105
<210> 3
<211> 267
<212> PRT
<213> 人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 激肽释放酶-14肽Swiss-Prot Q9P0G3
<400> 3
Met Ser Leu Arg Val Leu Gly Ser Gly Thr Trp Pro Ser Ala Pro Lys
1 5 10 15
Met Phe Leu Leu Leu Thr Ala Leu Gln Val Leu Ala Ile Ala Met Thr
20 25 30
Gln Ser Gln Glu Asp Glu Asn Lys Ile Ile Gly Gly His Thr Cys Thr
35 40 45
Arg Ser Ser Gln Pro Trp Gln Ala Ala Leu Leu Ala Gly Pro Arg Arg
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Arg Phe Leu Cys Gly Gly Ala Leu Leu Ser Gly Gln Trp Val Ile Thr
65 70 75 80
Ala Ala His Cys Gly Arg Pro Ile Leu Gln Val Ala Leu Gly Lys His
85 90 95
Asn Leu Arg Arg Trp Glu Ala Thr Gln Gln Val Leu Arg Val Val Arg
100 105 110
Gln Val Thr His Pro Asn Tyr Asn Ser Arg Thr His Asp Asn Asp Leu
115 120 125
Met Leu Leu Gln Leu Gln Gln Pro Ala Arg Ile Gly Arg Ala Val Arg
130 135 140
Pro Ile Glu Val Thr Gln Ala Cys Ala Ser Pro Gly Thr Ser Cys Arg
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210 215 220
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225 230 235 240
Cys Ala Leu Pro Gly Tyr Pro Gly Val Tyr Thr Asn Leu Cys Lys Tyr
245 250 255
Arg Ser Trp Ile Glu Glu Thr Met Arg Asp Lys
260 265

Claims (125)

1.一种用于评估受试者将从使用持续的肾脏替代疗法(RRT)的治疗中获益的可能性的方法，包括：
检测从所述受试者获得的至少一种体液样品中一种或多种生物标志物的水平以产生由分析物结合测定产生的一种或多种测定结果，所述一种或多种生物标志物包括C-C基序趋化因子14以及任选地下列标志物中的一种或多种：激肽释放酶-14、抗白细胞蛋白酶、组织蛋白酶B、C-C基序趋化因子1、C-C基序趋化因子16、C-C基序趋化因子23、C-C基序趋化因子24、C-C基序趋化因子28、几丁质酶-3样蛋白1、C-X-C基序趋化因子2、C-X-C基序趋化因子9、dickkopf相关蛋白1、弹性蛋白酶抑制因子、脂肪酸结合蛋白脂肪细胞、卵泡抑素相关蛋白3、肝细胞生长因子样蛋白、***结合蛋白2、***结合蛋白4、***结合蛋白7、金属蛋白酶抑制因子1、金属蛋白酶抑制因子2、金属蛋白酶抑制因子4、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、巢蛋白-1、OX-2膜糖蛋白、白介素-16前体蛋白、促乳素、肾素、组织因子途径抑制因子、肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、肿瘤坏死因子受体超家族成员18、肿瘤坏死因子受体超家族成员6B和WNT1诱导型信号传导通路蛋白1；并且
将所述一种或多种测定结果与所述受试者将从持续的RRT中获益的可能性或所述受试者不会从持续的RRT中获益的可能性相关联，任选地其中所述关联步骤包括确定预期RRT治疗的持续时间。
2.权利要求1所述的方法，其进一步包括基于所述受试者从持续的RRT中获益的可能性来治疗所述受试者的步骤。
3.权利要求2所述的方法，其中如果所述受试者从持续的RRT中获益的可能性上升，则治疗所述受试者的步骤包括施用持续的RRT。
4.权利要求2或3所述的方法，其中如果所述受试者从持续的RRT中获益的可能性未上升，则治疗所述受试者的步骤包括停止RRT。
5.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述RRT包括连续性肾脏替代疗法、间歇性肾脏替代疗法、延时间歇性肾脏替代疗法、连续性血液透析、连续性血液滤过、连续性血液透析滤过、间歇性血液透析、间歇性血液滤过、间歇性血液透析滤过、紧急血液透析、腹膜透析、缓慢连续性超滤或持续性低效透析。
6.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物由C-C基序趋化因子14组成。
7.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述关联包括将受试者分配到预定的个体亚群中，所述个体亚群表现出关于从施用持续的RRT中获益的已知状态，其中分配包括将测定结果与在群体研究中选定的阈值进行比较，其中所述阈值将群体分成具有高于阈值的测量值的第一亚群，相对于具有等于或低于阈值的测量值的第二亚群，所述第一亚群具有从持续的RRT治疗中获益的增加的倾向，任选地其中所述倾向是对于从自测量之时起的超过1天、超过2天或超过3天的预期RRT治疗中获益。
8.权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述关联包括将受试者分配到预定的个体亚群中，所述个体亚群表现出关于已成功停止或未成功停止RRT的已知状态，其中分配包括将测定结果与在群体研究中选定的阈值进行比较，其中所述阈值将群体分成具有高于阈值的测量值的第一亚群和具有等于或低于阈值的测量值的第二群体，所述第一亚群未成功停止RRT，所述第二群体已成功停止RRT，任选地其中成功停止RRT可能发生在自进行测量之时起的1、2或3天内。
9.权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述关联包括将测定结果与先前在受试者中测量的基线进行比较，任选地其中所述基线是在受试者未接受RRT期间测量的。
10.权利要求7或8所述的方法，其中将所述受试者分配到所述第一亚群。
11.权利要求9所述的方法，其中所述测定结果高于所述基线。
12.权利要求10或11所述的方法，其进一步包括通过施用持续的RRT来治疗所述受试者。
13.权利要求12所述的方法，其中在获得样品后施用RRT超过1天、超过2天或超过3天。
14.权利要求7或8所述的方法，其中将所述受试者分配到所述第二亚群。
15.权利要求9所述的方法，其中所述测定结果不高于所述基线。
16.权利要求14或15所述的方法，其进一步包括通过停止RRT来治疗所述受试者。
17.权利要求16所述的方法，其中在获得样品之时的1天内停止RRT。
18.权利要求16所述的方法，其中在停止RRT前将RRT维持1、2或3天。
19.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分析物结合测定包括抗体。
20.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种体液样品包括尿液样品。
21.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种体液样品包括全血、血浆样品或血清样品。
22.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种体液样品包括尿液样品和血浆样品。
23.前述权利要求中任一项所述的方法，其中在获得样品之时所述受试者患有充血性心力衰竭、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肝硬化、慢性肾脏疾病、癌症、慢性阻塞性肺病、贫血、脓毒症、休克或低血压中的一种或多种。
24.前述权利要求中任一项所述的方法，其中在获得样品之前约12、24、36、48、72、96或120小时内，所述受试者经历过手术或外伤。
25.前述权利要求中任一项所述的方法，其中在RRT启动后约6、8、12、24、36、48或72小时内收集所述至少一种体液样品。
26.权利要求25所述的方法，其中在所述受试者符合KDIGO 2期急性肾损伤标准的约6、8、12、24、36、48或72小时内或者在所述受试者符合KDIGO 3期急性肾损伤标准的约6、8、12、24、36、48或72小时内启动RRT。
27.前述权利要求中任一项所述的方法，其中在获得样品之时，所述受试者患有急性肾损伤(AKI)。
28.权利要求27所述的方法，其中在获得样品之时，所述受试者处于KDIGO 2期或3期急性肾损伤(AKI)。
29.前述权利要求中任一项所述的方法，其中检测一种或多种生物标志物的水平的步骤包括将选自所述至少一种体液样品中的单个体液样品导入测定仪器的步骤，所述测定仪器(i)使所述单个体液样品的全部或一部分与一种或多种结合试剂进行接触，每种结合试剂结合选自所述一种或多种生物标志物中的单个特定生物标志物，以检测所述特定生物标志物，并且(ii)对于每种所述特定生物标志物生成所述一种或多种测定结果之一，其指示所述特定生物标志物与所述结合试剂的结合。
30.权利要求29所述的方法，其中所述结合试剂包括抗体。
31.权利要求30所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
32.权利要求29所述的方法，其中所述结合试剂包括抗体的片段。
33.权利要求29-32中任一项所述的方法，其中对于每种所述特定生物标志物，所述测定仪器通过使结合的生物标志物与结合所述生物标志物的第二结合试剂进行接触来生成所述一种或多种测定结果之一，所述第二结合试剂与可检测的标记物缀合，任选地其中对于每种特定生物标志物，所述可检测的标记物是不同的。
34.权利要求33所述的方法，其中所述第二结合试剂包括抗体。
35.权利要求34所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
36.权利要求33所述的方法，其中所述第二结合试剂包括抗体的片段。
37.权利要求29-36中任一项所述的方法，其中所述一种或多种结合试剂包括多种结合试剂，每种结合试剂对选自所述一种或多种生物标志物中的不同生物标志物而言具有特异性。
38.权利要求37所述的方法，其中所述多种结合试剂中的每一种结合试剂结合到所述测定仪器的不同区域。
39.一种检测受试者中一种或多种肾损伤标志物的方法，所述方法包括检测从所述受试者获得的至少一种体液样品中一种或多种生物标志物的水平，所述一种或多种生物标志物包括下列标志物中的一种或多种：C-C基序趋化因子14、激肽释放酶-14、抗白细胞蛋白酶、组织蛋白酶B、C-C基序趋化因子1、C-C基序趋化因子16、C-C基序趋化因子23、C-C基序趋化因子24、C-C基序趋化因子28、几丁质酶-3样蛋白1、C-X-C基序趋化因子2、C-X-C基序趋化因子9、dickkopf相关蛋白1、弹性蛋白酶抑制因子、脂肪酸结合蛋白脂肪细胞、卵泡抑素相关蛋白3、肝细胞生长因子样蛋白、***结合蛋白2、***结合蛋白4、***结合蛋白7、金属蛋白酶抑制因子1、金属蛋白酶抑制因子2、金属蛋白酶抑制因子4、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、巢蛋白-1、OX-2膜糖蛋白、白介素-16前体蛋白、促乳素、肾素、组织因子途径抑制因子、肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、肿瘤坏死因子受体超家族成员18、肿瘤坏死因子受体超家族成员6B和WNT1诱导型信号传导通路蛋白1，其中所述受试者患有肾功能损伤、肾功能减退、急性肾损伤、持续性急性肾损伤、急性肾脏疾病、慢性肾脏疾病或者其中所述受试者正在接受肾脏替代治疗(RRT)。
40.权利要求39所述的方法，其中所述受试者已被诊断患有持续性急性肾损伤、急性肾脏疾病或慢性肾脏疾病。
41.权利要求40所述的方法，其中所述受试者已被诊断患有持续性急性肾损伤。
42.权利要求39-41中任一项所述的方法，其中所述受试者正在接受RRT。
43.权利要求39-42中任一项所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物包括C-C基序趋化因子14。
44.权利要求39-43中任一项所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物包括激肽释放酶-14。
45.权利要求39-44中任一项所述的方法，其中所述体液样品是尿液、全血、血清或血浆样品。
46.一种试剂盒，其包含一种或多种结合试剂，每种结合试剂结合权利要求1所述的一种或多种生物标志物中的一种，任选地其中所述试剂盒包含至少两种生物标志物。
47.权利要求46所述的试剂盒，其中所述一种或多种结合试剂之一结合C-C基序趋化因子14。
48.权利要求46或47所述的试剂盒，其中所述一种或多种结合试剂之一结合激肽释放酶-14。
49.权利要求46-48中任一项所述的试剂盒，其中所述一种或多种结合试剂各自包括抗体。
50.一种用于评估受试者将从使用持续的肾脏替代疗法(RRT)的治疗中获益的可能性的方法，包括：
检测从所述受试者获得的至少一种体液样品中一种或多种生物标志物的水平以产生由分析物结合测定产生的一种或多种测定结果，所述一种或多种生物标志物包括激肽释放酶-14以及任选地下列标志物中的一种或多种：C-C基序趋化因子14、抗白细胞蛋白酶、组织蛋白酶B、C-C基序趋化因子1、C-C基序趋化因子16、C-C基序趋化因子23、C-C基序趋化因子24、C-C基序趋化因子28、几丁质酶-3样蛋白1、C-X-C基序趋化因子2、C-X-C基序趋化因子9、dickkopf相关蛋白1、弹性蛋白酶抑制因子、脂肪酸结合蛋白脂肪细胞、卵泡抑素相关蛋白3、肝细胞生长因子样蛋白、***结合蛋白2、***结合蛋白4、***结合蛋白7、金属蛋白酶抑制因子1、金属蛋白酶抑制因子2、金属蛋白酶抑制因子4、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、巢蛋白-1、OX-2膜糖蛋白、白介素-16前体蛋白、促乳素、肾素、组织因子途径抑制因子、肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、肿瘤坏死因子受体超家族成员18、肿瘤坏死因子受体超家族成员6B和WNT1诱导型信号传导通路蛋白1；并且
将所述一种或多种测定结果与所述受试者将从持续的RRT中获益的可能性或所述受试者不会从持续的RRT中获益的可能性相关联，任选地其中所述关联步骤包括确定预期RRT治疗的持续时间。
51.权利要求50所述的方法，其进一步包括基于所述受试者从持续的RRT中获益的可能性来治疗所述受试者的步骤。
52.权利要求51所述的方法，其中如果所述受试者从持续的RRT中获益的可能性上升，则治疗所述受试者的步骤包括施用持续的RRT。
53.权利要求51或52所述的方法，其中如果所述受试者从持续的RRT中获益的可能性未上升，则治疗所述受试者的步骤包括停止RRT。
54.权利要求50-53中任一项所述的方法，其中所述RRT包括连续性肾脏替代疗法、间歇性肾脏替代疗法、延时间歇性肾脏替代疗法、连续性血液透析、连续性血液滤过、连续性血液透析滤过、间歇性血液透析、间歇性血液滤过、间歇性血液透析滤过、紧急血液透析、腹膜透析、缓慢连续性超滤或持续性低效透析。
55.权利要求50-54中任一项所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物由激肽释放酶-14组成。
56.权利要求50-55中任一项所述的方法，其中所述关联包括将受试者分配到预定的个体亚群中，所述个体亚群表现出关于从施用持续的RRT中获益的已知状态，其中分配包括将测定结果与在群体研究中选定的阈值进行比较，其中所述阈值将群体分成具有高于阈值的测量值的第一亚群，相对于具有等于或低于阈值的测量值的第二亚群，所述第一亚群具有从持续的RRT中获益的增加的倾向，任选地其中所述倾向是对于从自测量之时起的超过1天、超过2天或超过3天的预期RRT治疗中获益。
57.权利要求50-55中任一项所述的方法，其中所述关联包括将受试者分配到预定的个体亚群中，所述个体亚群表现出关于已成功停止或未成功停止RRT的已知状态，其中分配包括将测定结果与在群体研究中选定的阈值进行比较，其中所述阈值将群体分成具有高于阈值的测量值的第一亚群和具有等于或低于阈值的测量值的第二群体，所述第一亚群未成功停止RRT，所述第二群体已成功停止RRT，任选地其中成功停止RRT可能发生在自进行测量之时起的1、2或3天内。
58.权利要求50-55中任一项所述的方法，其中所述关联包括将测定结果与先前在受试者中测量的基线进行比较，任选地其中所述基线是在受试者未接受RRT期间测量的。
59.权利要求56或57所述的方法，其中将所述受试者分配到所述第一亚群。
60.权利要求58所述的方法，其中所述测定结果高于所述基线。
61.权利要求59或60所述的方法，其进一步包括通过施用持续的RRT来治疗所述受试者。
62.权利要求61所述的方法，其中在获得样品后施用RRT超过1天、超过2天或超过3天。
63.权利要求56或57所述的方法，其中将所述受试者分配到所述第二亚群。
64.权利要求58所述的方法，其中所述测定结果不高于所述基线。
65.权利要求63或64所述的方法，其进一步包括通过停止RRT来治疗所述受试者。
66.权利要求65所述的方法，其中在获得样品时的1天内停止RRT。
67.权利要求65所述的方法，其中在停止RRT前将RRT维持1、2或3天。
68.权利要求50-67中任一项所述的方法，其中所述分析物结合测定包括抗体。
69.权利要求50-68中任一项所述的方法，其中所述至少一种体液样品包括尿液样品。
70.权利要求50-69中任一项所述的方法，其中所述至少一种体液样品包括全血、血浆样品或血清样品。
71.权利要求50-70中任一项所述的方法，其中所述至少一种体液样品包括尿液样品和血浆样品。
72.权利要求50-71中任一项所述的方法，其中在获得样品之时所述受试者患有充血性心力衰竭、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肝硬化、慢性肾脏疾病、癌症、慢性阻塞性肺病、贫血、脓毒症、休克或低血压中的一种或多种。
73.权利要求50-72中任一项所述的方法，其中在获得样品之前约12、24、36、48、72、96或120小时内，所述受试者经历过手术或外伤。
74.权利要求50-73中任一项所述的方法，其中在RRT启动后约6、8、12、24、36、48或72小时内收集所述至少一种体液样品。
75.权利要求74所述的方法，其中在所述受试者符合KDIGO 2期急性肾损伤标准的约6、8、12、24、36、48或72小时内或者在所述受试者符合KDIGO 3期急性肾损伤标准的约6、8、12、24、36、48或72小时内启动RRT。
76.权利要求50-75中任一项所述的方法，其中在获得样品之时，所述受试者患有急性肾损伤(AKI)。
77.权利要求76中任一项所述的方法，其中在获得样品之时，所述受试者处于KDIGO 2期或3期急性肾损伤(AKI)。
78.权利要求50-77中任一项所述的方法，其中检测一种或多种生物标志物的水平的步骤包括将选自所述至少一种体液样品中的单个体液样品导入测定仪器的步骤，所述测定仪器(i)使所述单个体液样品的全部或一部分与一种或多种结合试剂进行接触，每种结合试剂结合选自所述一种或多种生物标志物中的单个特定生物标志物，以检测所述特定生物标志物，并且(ii)对于每种所述特定生物标志物生成所述一种或多种测定结果之一，其指示所述特定生物标志物与所述结合试剂的结合。
79.权利要求78所述的方法，其中所述结合试剂包括抗体。
80.权利要求79所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
81.权利要求78所述的方法，其中所述结合试剂包括抗体的片段。
82.权利要求78-81中任一项所述的方法，其中对于每种所述特定生物标志物，所述测定仪器通过使结合的生物标志物与结合所述生物标志物的第二结合试剂进行接触来生成所述一种或多种测定结果之一，所述第二结合试剂与可检测的标记物缀合，任选地其中对于每种特定生物标志物，所述可检测的标记物是不同的。
83.权利要求82所述的方法，其中所述第二结合试剂包括抗体。
84.权利要求83所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
85.权利要求82所述的方法，其中所述第二结合试剂包括抗体的片段。
86.权利要求78-85中任一项所述的方法，其中所述一种或多种结合试剂包括多种结合试剂，每种结合试剂对选自所述一种或多种生物标志物中的不同生物标志物而言具有特异性。
87.权利要求86所述的方法，其中所述多种结合试剂中的每一种结合试剂结合到所述测定仪器的不同区域。
88.一种用于评估受试者将从使用持续的肾脏替代疗法(RRT)的治疗中获益的可能性的方法，包括：
检测从所述受试者获得的至少一种体液样品中一种或多种生物标志物的水平以产生由分析物结合测定产生的一种或多种测定结果，所述一种或多种生物标志物包括下列标志物中的一种或多种：C-C基序趋化因子14、激肽释放酶-14、抗白细胞蛋白酶、组织蛋白酶B、C-C基序趋化因子1、C-C基序趋化因子16、C-C基序趋化因子23、C-C基序趋化因子24、C-C基序趋化因子28、几丁质酶-3样蛋白1、C-X-C基序趋化因子2、C-X-C基序趋化因子9、dickkopf相关蛋白1、弹性蛋白酶抑制因子、脂肪酸结合蛋白脂肪细胞、卵泡抑素相关蛋白3、肝细胞生长因子样蛋白、***结合蛋白2、***结合蛋白4、***结合蛋白7、金属蛋白酶抑制因子1、金属蛋白酶抑制因子2、金属蛋白酶抑制因子4、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、巢蛋白-1、OX-2膜糖蛋白、白介素-16前体蛋白、促乳素、肾素、组织因子途径抑制因子、肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、肿瘤坏死因子受体超家族成员18、肿瘤坏死因子受体超家族成员6B和WNT1诱导型信号传导通路蛋白1；并且
将所述一种或多种测定结果与所述受试者将从持续的RRT中获益的可能性或所述受试者不会从持续的RRT中获益的可能性相关联，任选地其中所述关联步骤包括确定预期RRT治疗的持续时间。
89.权利要求88所述的方法，其进一步包括基于所述受试者从持续的RRT中获益的可能性来治疗所述受试者的步骤。
90.权利要求89所述的方法，其中如果所述受试者从持续的RRT中获益的可能性上升，则治疗所述受试者的步骤包括施用持续的RRT。
91.权利要求89或90所述的方法，其中如果所述受试者从持续的RRT中获益的可能性未上升，则治疗所述受试者的步骤包括停止RRT。
92.权利要求88-91中任一项所述的方法，其中所述RRT包括连续性肾脏替代疗法、间歇性肾脏替代疗法、延时间歇性肾脏替代疗法、连续性血液透析、连续性血液滤过、连续性血液透析滤过、间歇性血液透析、间歇性血液滤过、间歇性血液透析滤过、紧急血液透析、腹膜透析、缓慢连续性超滤或持续性低效透析。
93.权利要求88-92中任一项所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物由C-C基序趋化因子14和激肽释放酶-14组成。
94.权利要求88-93中任一项所述的方法，其中所述关联包括将受试者分配到预定的个体亚群中，所述个体亚群表现出关于从施用持续的RRT中获益的已知状态，其中分配包括将测定结果与在群体研究中选定的阈值进行比较，其中所述阈值将群体分成具有高于阈值的测量值的第一亚群，相对于具有等于或低于阈值的测量值的第二亚群，所述第一亚群具有从持续的RRT治疗中获益的增加的倾向，任选地其中所述倾向是对于从自测量之时起的超过1天、超过2天或超过3天的预期RRT中获益。
95.权利要求88-93中任一项所述的方法，其中所述关联包括将受试者分配到预定的个体亚群中，所述个体亚群表现出关于已成功停止或未成功停止RRT的已知状态，其中分配包括将测定结果与在群体研究中选定的阈值进行比较，其中所述阈值将群体分成具有高于阈值的测量值的第一亚群和具有等于或低于阈值的测量值的第二群体，所述第一亚群未成功停止RRT，所述第二群体已成功停止RRT，任选地其中成功停止RRT可能发生在自进行测量之时起的1、2或3天内。
96.权利要求88-93中任一项所述的方法，其中所述关联包括将测定结果与先前在受试者中测量的基线进行比较，任选地其中所述基线是在受试者未接受RRT期间测量的。
97.权利要求94或95所述的方法，其中将所述受试者分配到所述第一亚群。
98.权利要求96所述的方法，其中所述测定结果高于所述基线。
99.权利要求97或98所述的方法，其进一步包括通过施用持续的RRT来治疗所述受试者。
100.权利要求99所述的方法，其中在获得样品后施用RRT超过1天、超过2天或超过3天。
101.权利要求94或95所述的方法，其中将所述受试者分配到所述第二亚群。
102.权利要求96所述的方法，其中所述测定结果不高于所述基线。
103.权利要求101或102所述的方法，其进一步包括通过停止RRT来治疗所述受试者。
104.权利要求103所述的方法，其中在获得样品之时的1天内停止RRT。
105.权利要求104所述的方法，其中在停止RRT前将RRT维持1、2或3天。
106.权利要求88-105中任一项所述的方法，其中所述分析物结合测定包括抗体。
107.权利要求88-106中任一项所述的方法，其中所述至少一种体液样品包括尿液样品。
108.权利要求88-107中任一项所述的方法，其中所述至少一种体液样品包括全血、血浆样品或血清样品。
109.权利要求88-108中任一项所述的方法，其中所述至少一种体液样品包括尿液样品和血浆样品。
110.权利要求88-109中任一项所述的方法，其中在获得样品之时所述受试者患有充血性心力衰竭、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肝硬化、慢性肾脏疾病、癌症、慢性阻塞性肺病、贫血、脓毒症、休克或低血压中的一种或多种。
111.权利要求88-110中任一项所述的方法，其中在获得样品之前约12、24、36、48、72、96或120小时内，所述受试者经历过手术或外伤。
112.权利要求88-111中任一项所述的方法，其中在RRT启动后约6、8、12、24、36、48或72小时内收集所述至少一种体液样品。
113.权利要求112所述的方法，其中在所述受试者符合KDIGO 2期急性肾损伤标准的约6、8、12、24、36、48或72小时内或者在所述受试者符合KDIGO 3期急性肾损伤标准的约6、8、12、24、36、48或72小时内启动RRT。
114.权利要求88-113中任一项所述的方法，其中在获得样品之时，所述受试者患有急性肾损伤(AKI)。
115.权利要求114中任一项所述的方法，其中在获得样品之时，所述受试者处于KDIGO2期或3期急性肾损伤(AKI)。
116.权利要求88-115中任一项所述的方法，其中检测一种或多种生物标志物的水平的步骤包括将选自所述至少一种体液样品中的单个体液样品导入测定仪器的步骤，所述测定仪器(i)使所述单个体液样品的全部或一部分与一种或多种结合试剂进行接触，每种结合试剂结合选自所述一种或多种生物标志物中的单个特定生物标志物，以检测所述特定生物标志物，并且(ii)对于每种所述特定生物标志物生成所述一种或多种测定结果之一，其指示所述特定生物标志物与所述结合试剂的结合。
117.权利要求116所述的方法，其中所述结合试剂包括抗体。
118.权利要求117所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
119.权利要求116所述的方法，其中所述结合试剂包括抗体的片段。
120.权利要求116-119中任一项所述的方法，其中对于每种所述特定生物标志物，所述测定仪器通过使结合的生物标志物与结合所述生物标志物的第二结合试剂进行接触来生成所述一种或多种测定结果之一，所述第二结合试剂与可检测的标记物缀合，任选地其中对于每种特定生物标志物，所述可检测的标记物是不同的。
121.权利要求120所述的方法，其中所述第二结合试剂包括抗体。
122.权利要求121所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
123.权利要求120所述的方法，其中所述第二结合试剂包括抗体的片段。
124.权利要求116-123中任一项所述的方法，其中所述一种或多种结合试剂包括多种结合试剂，每种结合试剂对选自所述一种或多种生物标志物中的不同生物标志物而言具有特异性。
125.权利要求124所述的方法，其中所述多种结合试剂中的每一种结合试剂结合到所述测定仪器的不同区域。
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