CN116730902B - 一种合成利拉鲁肽的方法 - Google Patents
一种合成利拉鲁肽的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116730902B CN116730902B CN202310982723.5A CN202310982723A CN116730902B CN 116730902 B CN116730902 B CN 116730902B CN 202310982723 A CN202310982723 A CN 202310982723A CN 116730902 B CN116730902 B CN 116730902B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- liraglutide
- resin
- fmoc
- synthesizing
- main chain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108010019598 Liraglutide Proteins 0.000 title claims abstract description 181
- YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N Liraglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N 0.000 title claims abstract description 171
- 229960002701 liraglutide Drugs 0.000 title claims abstract description 169
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 title claims abstract description 35
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 82
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 82
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 17
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims abstract description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 21
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 19
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 10
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 9
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 8
- CRTCWNPLKVVXIX-UHFFFAOYSA-N 5-(2-Hydroxyethyl)-4-methylthiazole acetate Chemical compound CC(=O)OCCC=1SC=NC=1C CRTCWNPLKVVXIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical class [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 6
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ARBOVOVUTSQWSS-UHFFFAOYSA-N hexadecanoyl chloride Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(Cl)=O ARBOVOVUTSQWSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 4
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- XBNGYFFABRKICK-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5,6-pentafluorophenol Chemical compound OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F XBNGYFFABRKICK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007821 HATU Substances 0.000 claims description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- ZUSSTQCWRDLYJA-UHFFFAOYSA-N n-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide Chemical compound C1=CC2CC1C1C2C(=O)N(O)C1=O ZUSSTQCWRDLYJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N pentachloro-phenol Natural products OC1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 claims description 2
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 claims description 2
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 claims description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 61
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 14
- -1 fmoc-Gly-OH Chemical compound 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 8
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 8
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 8
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZHGNHOOVYPHPNJ-UHFFFAOYSA-N Amigdalin Chemical compound FC(F)(F)C(=O)OCC1OC(OCC2OC(OC(C#N)C3=CC=CC=C3)C(OC(=O)C(F)(F)F)C(OC(=O)C(F)(F)F)C2OC(=O)C(F)(F)F)C(OC(=O)C(F)(F)F)C(OC(=O)C(F)(F)F)C1OC(=O)C(F)(F)F ZHGNHOOVYPHPNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- LTYMSROWYAPPGB-UHFFFAOYSA-N diphenyl sulfide Chemical compound C=1C=CC=CC=1SC1=CC=CC=C1 LTYMSROWYAPPGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 5
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](COC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N 0.000 description 4
- LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N (2s,3r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]butanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@H](OC(C)(C)C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N 0.000 description 4
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010088406 Glucagon-Like Peptides Proteins 0.000 description 4
- PARWUHTVGZSQPD-UHFFFAOYSA-N phenylsilane Chemical compound [SiH3]C1=CC=CC=C1 PARWUHTVGZSQPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 4
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 4
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 3
- ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N 0.000 description 2
- JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N 0.000 description 2
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 description 2
- WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)CC(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N 0.000 description 2
- OJBNDXHENJDCBA-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-(prop-2-enoxycarbonylamino)hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OCC=C)C(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OJBNDXHENJDCBA-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 2
- OYXZPXVCRAAKCM-SANMLTNESA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-(1-tritylimidazol-4-yl)propanoic acid Chemical compound C1=NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CN1C(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OYXZPXVCRAAKCM-SANMLTNESA-N 0.000 description 2
- JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-[chloro(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007446 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010086246 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Proteins 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- 102400000322 Glucagon-like peptide 1 Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101000788682 Homo sapiens GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000886868 Homo sapiens Gastric inhibitory polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-pyrrolidine Natural products CN1CC=CC1 AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHABMANUFPZXEB-UHFFFAOYSA-N O-demethyl-aloesaponarin I Natural products O=C1C2=CC=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C=C(O)C(C(O)=O)=C2C MHABMANUFPZXEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N hexamethylphosphoric triamide Chemical compound CN(C)P(=O)(N(C)C)N(C)C GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- SNZXFRFQGXSSGN-UHFFFAOYSA-N phenylsulfanyloxysulfanylbenzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1SOSC1=CC=CC=C1 SNZXFRFQGXSSGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- VUTBELPREDJDDH-UHFFFAOYSA-N pyramin Natural products CC1=NC=C(CO)C(N)=N1 VUTBELPREDJDDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012048 reactive intermediate Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/605—Glucagons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C231/00—Preparation of carboxylic acid amides
- C07C231/12—Preparation of carboxylic acid amides by reactions not involving the formation of carboxamide groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C233/00—Carboxylic acid amides
- C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
- C07C233/45—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
- C07C233/46—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
- C07C233/47—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom having the carbon atom of the carboxamide group bound to a hydrogen atom or to a carbon atom of an acyclic saturated carbon skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D209/56—Ring systems containing three or more rings
- C07D209/58—[b]- or [c]-condensed
- C07D209/72—4,7-Endo-alkylene-iso-indoles
- C07D209/76—4,7-Endo-alkylene-iso-indoles with oxygen atoms in positions 1 and 3
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种合成利拉鲁肽的方法,属于多肽合成技术领域;其步骤包括:S1:首先在活化剂的条件下,将树脂与甘氨酸固相合成Fmoc‑Gly‑树脂;S2:将Fmoc‑Gly‑树脂去保护,采用固相合成法,按照利拉鲁肽主链肽的氨基酸顺序依次偶联,得到利拉鲁肽主链树脂;S3:在碱性条件下,将利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸与式Ⅰ的利拉鲁肽中间体进行偶联反应,调节pH,裂解,得到粗品,纯化,得到利拉鲁肽纯品。本发明制得的利拉鲁肽具有较高的收率与纯度。
Description
技术领域
本发明属于多肽合成技术领域,具体涉及一种合成利拉鲁肽的方法。
背景技术
利拉鲁肽是一种GLP-1(胰高血糖素样肽)类似物,与人GLP-1具有97%的序列同源性, 人GLP-1可以结合并激活GLP-1受体。GLP-1受体为天然GLP-1的靶点,GLP-1是一种内源性肠促胰岛素激素,能够促进胰腺β细胞葡萄糖浓度依赖性地分泌胰岛素。
目前,现有利拉鲁肽的制备方法主要包括:(1)基因工程法;其主要存在技术难度极大,设备要求高,大规模生产风险大,成本高,不利于工业化生产的缺点;(2)逐步偶联的固相合成方法;其存在的问题为:由于利拉鲁肽肽链较长,逐步偶联常导致偶联不完全,产生许多错配肽杂质、消旋肽杂质,粗肽收率不高,且杂质难以去除,给粗肽的纯化造成极大的困难。(3)片段合成法;现有的片段合成法,粗肽收率并不高,也未能抑制/减少错配肽杂质、消旋肽杂质等极为相似、相近的杂质的产生。因此,提供一种产品收率高的利拉鲁肽的合成方法具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利拉鲁肽中间体,将其再与利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸进行偶联反应,进而制得利拉鲁肽粗肽,提高了利拉鲁肽粗肽的收率,进而得到收率较高的利拉鲁肽。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为:
1. 一种利拉鲁肽中间体,其结构如式Ⅰ所示:
式Ⅰ;
其中R为活性中间体,其结构式选自下列至少一种:
。
本发明将活性中间体R到Palmitoyl-Glu-OtBu制得利拉鲁肽中间体,其可能具有较高的接枝活性,能较好地接枝到赖氨酸上,得到收率较高的利拉鲁肽粗肽,进而得到收率与纯度较高的利拉鲁肽纯品。
更进一步优选地,利拉鲁肽中间体的结构式选自下列至少一种:
。
本发明还公开了利拉鲁肽中间体在制备利拉鲁肽中的用途。
进一步地,本发明还公开了利拉鲁肽中间体在提高利拉鲁肽收率中的用途。
本发明的另一目的是提供一种合成利拉鲁肽的方法,包括以下步骤:
S1:首先在活化剂的条件下,将树脂与甘氨酸固相合成Fmoc-Gly-树脂;
S2:将上述Fmoc-Gly-树脂去保护,采用固相合成法,按照利拉鲁肽主链肽的氨基酸顺序依次偶联,得到利拉鲁肽主链树脂;
S3:在碱性条件下,将上述利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸与利拉鲁肽中间体进行偶联反应,调节pH,裂解,得到粗品,纯化,得到利拉鲁肽纯品。
本发明首先活性中间体接枝到Palmitoyl-Glu-OtBu制得利拉鲁肽中间体,再与利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸进行偶联反应,进而制得利拉鲁肽粗肽,提高了利拉鲁肽粗肽的收率,可能利拉鲁肽中间体具有较高的接枝活性,能较好地接枝到赖氨酸上,得到收率较高的利拉鲁肽粗肽,进而得到收率与纯度较高的利拉鲁肽纯品。
根据本发明合成利拉鲁肽的方法,活性剂选自HOBt、DIC、DIEA、HATU、DIPEA与PyBOP中的至少一种。
根据本发明合成利拉鲁肽的方法,碱性条件下所用碱选自三乙胺、N-甲基吗啉、N,N-二异丙基乙胺、醋酸钠、醋酸钾、磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸钾、磷酸氢二钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾与氢氧化钠中的至少一种。
根据本发明合成利拉鲁肽的方法,利拉鲁肽主链树脂与利拉鲁肽中间体的摩尔比为0.05-0.1:1,具体优选为0.05:1、0.06:1、0.07:1、0.08:1、0.09:1、0.1:1。
根据本发明合成利拉鲁肽的方法,偶联反应的温度为-20℃至60℃;具体优选0-40℃,更具体优选0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、11℃、12℃、13℃、14℃、15℃、16℃、17℃、18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃。
根据本发明合成利拉鲁肽的方法,pH范围为5-14;具体优选7-12。
本发明首先活性中间体接枝到Palmitoyl-Glu-OtBu制得利拉鲁肽中间体,再与利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸进行偶联反应,进而制得利拉鲁肽粗肽,提高了利拉鲁肽粗肽的收率,可能利拉鲁肽中间体具有较高的接枝活性,能较好地接枝到赖氨酸上,得到收率较高的利拉鲁肽粗肽,进而得到收率与纯度较高的利拉鲁肽纯品。
具体实施方式
本发明公开了一种合成利拉鲁肽的固相制备方法,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
需要说明的是,在合成利拉鲁肽的过程中,使用的实验方法若无特殊说明,均为常规实验方法。
需要说明的是,在合成利拉鲁肽的过程中,所用溶剂一般为常规溶剂,选自DCM、THF、乙酸乙酯、乙腈、DMF、DMSO、NMP、水、丙酮、二甲基乙酰胺和六甲基磷酰胺中的任意种;具体优选为DMF、DMSO、DMAC、HMP、乙腈和水体系、丙酮和水体系。
根据本发明公开的合成利拉鲁肽的方法,所用树脂选自2-CTC树脂、Resin树脂或王树脂中的至少一种。
根据本发明的合成利拉鲁肽的方法,所用裂解液为TFA、苯甲硫醚、苯甲醚与EDT的混合物,其体积比为85-90:2-5:1-5:1-5。
根据本发明的合成利拉鲁肽的方法,S1中Fmoc-Gly-树脂的制备步骤为:称取树脂加入到固相反应柱中,用溶剂洗涤,并用溶剂溶胀树脂25-45min,然后将Fmoc-Gly-OH溶于溶剂中,在冰浴条件下加入活化剂进行活化,再加入到上述固相反应柱中反应,加入无水甲醇封闭1-2h,用溶剂洗涤3-5次,再用无水甲醇封闭20-40min,抽干溶剂,得到Fmoc-Gly-树脂,其替代度为0.1-0.5mmol/g。
进一步地,S1中Fmoc-Gly-树脂的制备步骤中,树脂的取代度为0.25-1.0mmol/g。
进一步地,根据本发明的合成利拉鲁肽的方法,S1中Fmoc-Gly-树脂的制备步骤中,树脂、Fmoc-Gly-OH与活化剂的重量比为2-4:1-2:1-3。
根据本发明的合成利拉鲁肽的方法,S2中利拉鲁肽主链树脂的制备步骤为:称取Fmoc-Gly-树脂加入到固相反应柱中,用溶剂洗涤2-4次,用溶剂溶胀Fmoc-Gly-树脂25-45min,脱保护,洗涤,得到H-Gly-树脂,将Fmoc-Arg(Pbf)-OH、活化剂溶于溶剂中形成混合溶液,将其加入到上述固相反应柱中,在室温下反应2-4h,重复上述脱保护步骤,并按照利拉鲁肽主链肽序,加入相应氨基酸偶联的步骤,依次偶联Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys-(Alloc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala -OH与Boc-His(Trt)-OH,用溶剂洗涤3-5次,得到利拉鲁肽主链树脂。
进一步地,S2中利拉鲁肽主链树脂的制备步骤中,Fmoc-Gly-树脂、Fmoc-Arg(Pbf)-OH与活性剂的重量比为2-4:1-2:0.5-1.5。
本发明还提供了Palmitoyl-Glu-OtBu的合成方法,包括:称取H-Glu-OtBu置于容器中,加入溶剂,在0-10℃下加入三乙胺,然后加入棕榈酰氯,自然升温至室温,再反应2-4h,反应完全后,依次用饱和碳酸钠、去离子水、饱和食盐水萃取,弃去水相,有机相用无水硫酸钠干燥,旋蒸,得到油状物,在油状物中加入乙酸乙酯/石油醚混合液,放置2-4h,析出沉淀,重结晶,过滤,真空干燥,即得。
根据本发明中的Palmitoyl-Glu-OtBu的合成方法,H-Glu-OtBu与三乙胺的摩尔比为1:0.25-0.75。
根据本发明中的Palmitoyl-Glu-OtBu的合成方法,H-Glu-OtBu与棕榈酰氯的摩尔比为1:1-2。
本发明还提供了一种利拉鲁肽中间体的合成方法,包括:称取Palmitoyl-Glu-OtBu,用溶剂溶清,加入活性中间体R,在冰浴条件下,加入EDCl,然后升温至20-30℃搅拌反应10-20h,再加入EA与水,萃取有机相,将有机相蒸干,得到利拉鲁肽中间体。
根据本发明的利拉鲁肽中间体的合成方法,Palmitoyl-Glu-OtBu与活性中间体R的摩尔比为0.8-1:1-2。
根据本发明的利拉鲁肽中间体的合成方法,Palmitoyl-Glu-OtBu与EDCl的重量比为2-8:1。
根据本发明的合成利拉鲁肽的方法,S3中利拉鲁肽纯品的制备步骤包括:在碱性条件下,将利拉鲁肽主链树脂溶于溶剂中,并加入利拉鲁肽中间体,使上述利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸与利拉鲁肽中间体进行偶联反应,调节pH,制得利拉鲁肽树脂,加入苯基硅烷反应2-5min,然后加入Pd(PPh3)4,室温反应30-50min,抽掉反应液,以脱除Fmoc保护基团,再置于裂解液中,室温下反应2-5h,过滤,沉淀,离心,洗涤,干燥,得到利拉鲁肽粗肽,采用高效液相色谱***纯化,干燥,制得利拉鲁肽纯品。
以下结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细描述:
实施例1:
一种利拉鲁肽中间体的合成方法,包括:
称取21.5g H-Glu-OtBu置于三口烧瓶中,加入220mL二氯甲烷,在5℃下加入6mL三乙胺,然后加入34.6g棕榈酰氯,自然升温至室温,再反应3h,反应完全后,依次用120mL饱和碳酸钠、120mL去离子水、120mL饱和食盐水萃取3次,弃去水相,有机相用无水硫酸钠干燥,旋蒸以除去溶剂,得到油状物,在油状物中加入250mL乙酸乙酯/石油醚混合液,在0℃下放置4h,析出沉淀,重结晶,过滤,真空干燥,得到Palmitoyl-Glu-OtBu;
称取上述Palmitoyl-Glu-OtBu,用DMF溶清,加入活性中间体N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺,在2℃下,加入EDCl,其中Palmitoyl-Glu-OtBu与活性中间体R的摩尔比为1:1.5:0.4,然后升温至23℃搅拌反应18h,再加入EA与水,其中Palmitoyl-Glu-OtBu、EA与水的重量为1:12:20,萃取有机相,将有机相蒸干,得到利拉鲁肽中间体,收率为81.63%,纯度为94.28%。
其结构式如下:
;
采用Bruker AVANCE III HD 400型号的核磁仪器进行测定,溶剂为氘代氯仿,测定数据如下:
1H NMR (400 MHz,CDCl3):6.25(t,2H,CH)、3.38(t,2H,CH)、1.50-1.75(t,2H,CH2)、3.51(d,2H,CH)、1.98(t,2H,CH2)、1.95(m,2H,CH2)、4.47(m,1H,CH)、8.05(d,1H,NH)、1.40(s,9H,CH3)、2.08(t,2H,CH2)、1.55(m,2H,CH2)、1.31(m,8H,CH2)、1.24(m,14H,CH2)、1.35(m,2H,CH2)、0.86(t,3H,CH3)。
实施例2:
一种利拉鲁肽中间体的合成方法,与实施例1不同的是:将活性中间体替换为五氟苯酚;
利拉鲁肽中间体的结构式如下:
;
采用核磁仪器进行测定,测定数据如下:
1H NMR (400 MHz,CDCl3):1.99(t,2H,CH2)、1.93(m,2H,CH2)、4.48(m,1H,CH)、8.06(d,1H,NH)、1.41(s,9H,CH3)、2.10(t,2H,CH2)、1.57(m,2H,CH2)、1.30(m,8H,CH2)、1.26(m,14H,CH2)、1.38(m,2H,CH2)、0.89(t,3H,CH3)。
实施例3:
一种利拉鲁肽中间体的合成方法,与实施例1不同的是:将活性中间体替换为N-羟基丁二酰亚胺;
利拉鲁肽活性中间体的结构式如下:
;
采用核磁仪器进行测定,测定数据如下:
1H NMR (400 MHz,CDCl3):2.68(t,4H,CH2)、1.96(t,2H,CH2)、1.92(m,2H,CH2)、4.47(m,1H,CH)、8.08(d,1H,NH)、1.43(s,9H,CH3)、2.12(t,2H,CH2)、1.55(m,2H,CH2)、1.29(m,8H,CH2)、1.25(m,14H,CH2)、1.36(m,2H,CH2)、0.91(t,3H,CH3)。
实施例4:
一种利拉鲁肽中间体的合成方法,与实施例1不同的是:将活性中间体替换为N-羟基磺酸琥珀酰亚胺;
利拉鲁肽中间体的结构式如下:
;
采用核磁仪器进行测定,测定数据如下:
1H NMR (400 MHz,CDCl3):4.26(t,2H,CH2)、3.41(d,2H,CH2)、2.02(s,1H,OH)、1.99(t,2H,CH2)、1.95(m,2H,CH2)、4.51(m,1H,CH)、8.04(d,1H,NH)、1.42(s,9H,CH3)、2.10(t,2H,CH2)、1.52(m,2H,CH2)、1.33(m,8H,CH2)、1.27(m,14H,CH2)、1.39(m,2H,CH2)、0.93(t,3H,CH3)。
实施例5:
一种合成利拉鲁肽的方法,包括以下步骤:
S1:称取12g取代度为0.8mmol/g的2-CTC树脂加入到固相反应柱中,用DMF洗涤3次,并用DMF溶胀树脂35min,然后将5.2g Fmoc-Gly-OH溶于20mL DMF中,在冰浴条件下加入8.0mL DIEA进行活化,再加入到上述固相反应柱中反应1.5h,加入无水甲醇封闭2h,分别用DMF洗涤4次、NMP洗涤3次,再用无水甲醇封闭30min,抽干溶剂,得到Fmoc-Gly-树脂,其替代度为0.25mmol/g;
S2:称取8g Fmoc-Gly-树脂加入到固相反应柱中,用DMF洗涤3次,并用DMF溶胀Fmoc-Gly-树脂30min,用20%DBLK脱Fmoc保护,然后用DMF洗涤2次、NMP洗涤3次,得到H-Gly-树脂,将4.2g Fmoc-Arg(Pbf)-OH、1.0gHOBt、0.5g DIC溶于50mLDMF中形成混合溶液,将其加入到上述固相反应柱中,在室温下反应3h,重复上述脱保护步骤,并按照利拉鲁肽主链肽序,加入相应氨基酸偶联的步骤,依次偶联Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH 、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys-(Alloc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala -OH与Boc-His(Trt)-OH,分别用DMF洗涤4次、DCM洗涤5次,在55℃真空干燥10h,得到利拉鲁肽主链树脂;
S3:将55mg利拉鲁肽主链树脂溶于3.5mL乙腈/水溶液中,并加入实施例1中的利拉鲁肽中间体,使上述利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸与利拉鲁肽中间体进行偶联反应,其中拉鲁肽主链树脂与利拉鲁肽中间体的摩尔比为0.08:1,用浓度为1mol/L的碳酸氢钠调节pH为10,制得利拉鲁肽树脂,加入2.4mL苯基硅烷反应4min,然后加入450mg Pd(PPh3)4,室温反应40min,抽掉反应液,以脱除保护基团,并用DMF洗涤3次,再置于裂解液(TFA、苯甲硫醚、苯甲醚与EDT的体积比为90:3:3:4)中,室温下反应3h,过滤出树脂,收集滤液,加入无水***进行沉淀,离心,用无水***洗涤沉淀,在55℃下真空干燥10h,得到利拉鲁肽粗肽,将其用乙腈/水溶液溶解,通过反相制备型HPLC***,波长为215nm,色谱柱为C18填料,进行纯化,转盐,冷冻干燥,制得利拉鲁肽纯品。
实施例6:
一种合成利拉鲁肽的方法,与实施例5不同的是,步骤S3中,将实施例1中的利拉鲁肽中间体替换为实施例2中的利拉鲁肽中间体。
其他步骤均与实施例5相同。
实施例7:
一种合成利拉鲁肽的方法,与实施例5不同的是,步骤S3中,将实施例1中的利拉鲁肽中间体替换为实施例3中的利拉鲁肽中间体。
其他步骤均与实施例5相同。
实施例8:
一种合成利拉鲁肽的方法,与实施例5不同的是,步骤S3中,将实施例1中的利拉鲁肽中间体替换为实施例4中的利拉鲁肽中间体。
其他步骤均与实施例5相同。
实施例9:
一种合成利拉鲁肽的方法,与实施例5不同的是,
步骤S3中,将55mg利拉鲁肽主链树脂溶于4.5mL DMF中,并加入实施例1中的利拉鲁肽中间体,使上述利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸与利拉鲁肽中间体进行偶联反应,其中拉鲁肽主链树脂与利拉鲁肽中间体的摩尔比为0.05:1,用浓度为1mol/L的碳酸氢钠调节pH为8,制得利拉鲁肽树脂,加入2.8mL苯基硅烷反应4min,然后加入460mg Pd(PPh3)4,室温反应40min,抽掉反应液,以脱除保护基团,并用DMF洗涤3次,再置于裂解液(TFA、苯甲硫醚、苯甲醚与EDT的体积比为90:3:3:4)中,室温下反应3h,过滤出树脂,收集滤液,加入无水***进行沉淀,离心,用无水***洗涤沉淀,在55℃下真空干燥10h,得到利拉鲁肽粗肽,将其用乙腈/水溶液溶解,通过反相制备型HPLC***,波长为215nm,色谱柱为C18填料,进行纯化,转盐,冷冻干燥,制得利拉鲁肽纯品。
实施例10:
本发明为了进一步提高合成利拉鲁肽的产率,采取的有效措施还包括:将步骤S3中裂解液中的部分苯甲硫醚替换为4-甲基-5-(2-乙酰氧乙基)噻唑,能够提高利拉鲁肽树脂的裂解效率,进一步提高了利拉鲁肽的收率。
进一步地,裂解液中TFA、苯甲硫醚、4-甲基-5-(2-乙酰氧乙基)噻唑、苯甲醚与EDT的混合物,其体积比为85-90:1-3:1-3:1-5:1-5。
一种合成利拉鲁肽的方法,与实施例5不同的是,
步骤S3中,将55mg利拉鲁肽主链树脂溶于3.5mL乙腈/水溶液中,并加入实施例1中的利拉鲁肽中间体,使上述利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸与利拉鲁肽中间体进行偶联反应,其中拉鲁肽主链树脂与利拉鲁肽中间体的摩尔比为0.08:1,用浓度为1mol/L的碳酸氢钠调节pH为10,制得利拉鲁肽树脂,加入2.4mL苯基硅烷反应4min,然后加入450mg Pd(PPh3)4,室温反应40min,抽掉反应液,以脱除Fmoc保护基团,并用DMF洗涤3次,再置于裂解液(TFA、苯甲硫醚、4-甲基-5-(2-乙酰氧乙基)噻唑、苯甲醚与EDT的体积比为90:2:1:3:4)中,室温下反应3h,过滤出树脂,收集滤液,加入无水***进行沉淀,离心,用无水***洗涤沉淀,在55℃下真空干燥10h,得到利拉鲁肽粗肽,将其用乙腈/水溶液溶解,通过反相制备型HPLC***,波长为215nm,色谱柱为C18填料,进行纯化,转盐,冷冻干燥,制得利拉鲁肽纯品。
实施例11:
一种合成利拉鲁肽的方法,与实施例5不同的是,步骤S3中,裂解液中TFA、苯甲硫醚、4-甲基-5-(2-乙酰氧乙基)噻唑、苯甲醚与EDT的体积比为90:1:2:3:4。
对比例1:
按照现有技术CN103980358A中的实验方法合成利拉鲁肽。
实验结果如下:
1. 利拉鲁肽粗肽的收率
实施例5-11、对比例1中得到的利拉鲁肽粗肽的收率如表1所示。
表1 利拉鲁肽粗肽的收率
由表1可以看出,实施例5-9中利拉鲁肽粗肽的收率高于85%,均高于对比例1,这表明本发明首先活性中间体接枝到Palmitoyl-Glu-OH制得利拉鲁肽中间体,再与利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸进行偶联反应,进而制得利拉鲁肽粗肽,提高了利拉鲁肽粗肽的收率,可能利拉鲁肽中间体具有较高的接枝活性,能较好地接枝到赖氨酸上,得到收率较高的利拉鲁肽粗肽。
由表1也可以看出,实施例10-11中利拉鲁肽粗肽的收率高于90%,对比实施例5与实施例10-11,实施例10-11中利拉鲁肽粗肽的收率高于实施例5,这表明在步骤S3中的裂解液中加入4-甲基-5-(2-乙酰氧乙基)噻唑,替代部分苯甲硫醚,能较好的裂解树脂,得到收率更高的利拉鲁肽粗肽。
2. 利拉鲁肽纯品的收率与纯度
测定实施例5-11、对比例1中得到的利拉鲁肽纯品的收率与纯度。
表2 利拉鲁肽纯品的收率与纯度
由表2可以看出,实施例5-9中利拉鲁肽纯品的收率高于75%,纯度高于99%,均高于对比例1,这表明本发明首先活性中间体接枝到Palmitoyl-Glu-OtBu制得利拉鲁肽中间体,再与利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸进行偶联反应,进而制得利拉鲁肽粗肽,提高了利拉鲁肽粗肽的收率,可能利拉鲁肽中间体具有较高的接枝活性,能较好地接枝到赖氨酸上,得到收率与纯度较高的利拉鲁肽纯品。实施例10-11中利拉鲁肽纯品的收率高于80%,对比实施例5与实施例10-11,实施例10-11中利拉鲁肽粗肽的收率高于实施例5,这表明在步骤S3中的裂解液中加入4-甲基-5-(2-乙酰氧乙基)噻唑,替代部分苯甲硫醚,能较好的裂解树脂,得到收率更高的利拉鲁肽粗肽,进而得到收率更高的利拉鲁肽纯品。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明,不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干简单推演或替换,都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种合成利拉鲁肽的方法,包括以下步骤:
S1:首先在活化剂的条件下,将树脂与甘氨酸固相合成Fmoc-Gly-树脂;
S2:将所述Fmoc-Gly-树脂去保护,采用固相合成法,按照利拉鲁肽主链肽的氨基酸顺序依次偶联,得到利拉鲁肽主链树脂;
S3:在碱性条件下,将所述利拉鲁肽主链树脂的赖氨酸与利拉鲁肽中间体进行偶联反应,调节pH,裂解,得到粗品,纯化,得到利拉鲁肽纯品;
其中,所述利拉鲁肽中间体的制备方法,包括:
称取H-Glu-OtBu置于容器中,加入溶剂,在0-10℃下加入三乙胺,然后加入棕榈酰氯,自然升温至室温,再反应2-4h,反应完全后,依次用饱和碳酸钠、去离子水、饱和食盐水萃取,弃去水相,有机相用无水硫酸钠干燥,旋蒸,得到油状物,在油状物中加入乙酸乙酯/石油醚混合液,放置2-4h,析出沉淀,重结晶,过滤,真空干燥,即得Palmitoyl-Glu-OtBu;
称取Palmitoyl-Glu-OtBu,用溶剂溶清,加入活性中间体N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺或五氟苯酚或N-羟基磺酸琥珀酰亚胺或N-羟基丁二酰亚胺,在冰浴条件下,加入EDCl,然后升温至20-30℃搅拌反应10-20h,再加入EA与水,萃取有机相,将有机相蒸干,得到利拉鲁肽中间体;
所述裂解用裂解液为TFA、苯甲硫醚、苯甲醚、4-甲基-5-(2-乙酰氧乙基)噻唑与EDT的混合物,其体积比为85-90:1-3:1-3:1-5:1-5。
2.根据权利要求1所述的一种合成利拉鲁肽的方法,其特征是:所述活化剂选自HOBt、DIC、DIEA、HATU、DIPEA与PyBOP中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的一种合成利拉鲁肽的方法,其特征是:所述碱性条件下所用碱选自三乙胺、N-甲基吗啉、N,N-二异丙基乙胺、醋酸钠、醋酸钾、磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸钾、磷酸氢二钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾与氢氧化钠中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的一种合成利拉鲁肽的方法,其特征是:所述利拉鲁肽主链树脂与利拉鲁肽中间体的摩尔比为0.05-0.1:1。
5.根据权利要求1所述的一种合成利拉鲁肽的方法,其特征是:所述偶联反应的温度为-20℃至60℃。
6.根据权利要求1所述的一种合成利拉鲁肽的方法,其特征是:所述pH范围为5-14。
7.根据权利要求1所述的一种合成利拉鲁肽的方法,其特征是:所述Palmitoyl-Glu-OtBu与活性中间体的摩尔比为0.8-1:1-2。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310982723.5A CN116730902B (zh) | 2023-08-07 | 2023-08-07 | 一种合成利拉鲁肽的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310982723.5A CN116730902B (zh) | 2023-08-07 | 2023-08-07 | 一种合成利拉鲁肽的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN116730902A CN116730902A (zh) | 2023-09-12 |
CN116730902B true CN116730902B (zh) | 2023-11-21 |
Family
ID=87909797
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202310982723.5A Active CN116730902B (zh) | 2023-08-07 | 2023-08-07 | 一种合成利拉鲁肽的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN116730902B (zh) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999043341A1 (en) * | 1998-02-27 | 1999-09-02 | Novo Nordisk A/S | Glp-1 derivatives with helix-content exceeding 25 %, forming partially structured micellar-like aggregates |
CN1740198A (zh) * | 1996-08-30 | 2006-03-01 | 诺沃挪第克公司 | Glp-1衍生物 |
CN103980358A (zh) * | 2014-01-03 | 2014-08-13 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备利拉鲁肽的方法 |
CN109456403A (zh) * | 2018-12-31 | 2019-03-12 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | 一种利拉鲁肽的合成方法 |
CN111566123A (zh) * | 2017-10-04 | 2020-08-21 | 佩特雷化学和生物制药学实验室有限公司 | 胰高血糖素样肽的制备方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2327328T3 (es) * | 2002-07-04 | 2009-10-28 | Zealand Pharma A/S | Glp-1 y procedimientos para el tratamiento de la diabetes. |
-
2023
- 2023-08-07 CN CN202310982723.5A patent/CN116730902B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1740198A (zh) * | 1996-08-30 | 2006-03-01 | 诺沃挪第克公司 | Glp-1衍生物 |
WO1999043341A1 (en) * | 1998-02-27 | 1999-09-02 | Novo Nordisk A/S | Glp-1 derivatives with helix-content exceeding 25 %, forming partially structured micellar-like aggregates |
CN103980358A (zh) * | 2014-01-03 | 2014-08-13 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备利拉鲁肽的方法 |
CN111566123A (zh) * | 2017-10-04 | 2020-08-21 | 佩特雷化学和生物制药学实验室有限公司 | 胰高血糖素样肽的制备方法 |
CN109456403A (zh) * | 2018-12-31 | 2019-03-12 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | 一种利拉鲁肽的合成方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
"[125I], [127I]-and [14C]-labelling of the GLP-1-(7-37) derivative NN2211";Jesper B Kristensen etal.;《Journal of Labelled Compounds & Radiopharmaceuticals》;第46卷;第502页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN116730902A (zh) | 2023-09-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2017114191A1 (zh) | 索玛鲁肽的制备方法 | |
WO2019184089A1 (zh) | 化合物及其制备方法和应用 | |
US20230133716A1 (en) | Preparation method for semaglutide | |
WO2020199461A1 (zh) | 一种多肽衍生化合物的合成方法 | |
CN111087462B (zh) | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 | |
CN100335497C (zh) | 一种奥曲肽的固相合成方法 | |
CN112679602B (zh) | 索马鲁肽的固相合成方法 | |
CN114315538B (zh) | 一种作为多肽液相合成载体的苄醇酚醚类化合物及其制备方法与应用 | |
CN112111001B (zh) | 胸腺肽Tα-1的合成方法 | |
CN116730902B (zh) | 一种合成利拉鲁肽的方法 | |
CN110642936B (zh) | 一种制备特立帕肽的方法 | |
CN112062811B (zh) | 一种维拉卡肽的合成方法 | |
CN113549130B (zh) | 一种丰胸肽的液相合成方法 | |
CN110894227A (zh) | 一种利拉鲁肽的固相合成方法 | |
CN111233980B (zh) | 一种戈舍瑞林的片段法合成方法 | |
CN113801190A (zh) | 寡肽-1盐酸盐的制备方法 | |
CN106749542B (zh) | 一种夫替瑞林的合成方法 | |
CN116693653B (zh) | 一种规模化生产索玛鲁肽的制备方法 | |
CN111944038A (zh) | 一种索玛鲁肽的合成方法 | |
CN112010945B (zh) | 一种卡贝缩宫素杂质Gly9-OH的制备方法 | |
WO2018205402A1 (zh) | 一种乌拉立肽的合成方法 | |
CN110191892A (zh) | 丙氨酸-赖氨酸-谷氨酸三肽衍生物及其应用 | |
CN111944037A (zh) | 一种索玛鲁肽的合成方法 | |
CN117486976B (zh) | 一种自组装多肽raka 16的合成方法 | |
CN112521482B (zh) | 一种固液结合合成奈西立肽的制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |