CN116496427B - 金针菇蛋白聚糖及其双波长筛选方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了金针菇蛋白聚糖及其双波长筛选方法和应用，涉及生物医药技术领域。本发明通过水提将金针菇中的多糖、蛋白聚糖和游离蛋白等组分提取出来，通过除蛋白将游离蛋白去除，通过醇沉将多糖和蛋白聚糖分离出来，以水为洗脱剂，通过琼脂糖凝胶FF离子交换色谱柱分离和G‑200葡聚糖凝胶色谱柱分离，并采用双波长检测，收集480nm和295nm双波长下同时具有吸收峰的洗脱液，使得同时具有蛋白结构和多糖结构的组分—金针菇蛋白多糖被保留下来，所得金针菇蛋白聚糖的纯度高，收率高，具有抗肝癌活性，在制备抗肝癌药物以及功能食品方面具有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及金针菇蛋白聚糖及其双波长筛选方法和应用、抗肝癌药物、金针菇蛋白聚糖复合颗粒和金针菇蛋白聚糖复合含片。
背景技术
金针菇蛋白聚糖是一种多糖链和蛋白（肽）链以共价键的形式连接在一起的高分子聚合物，蛋白聚糖既具有多糖的理化特性（例如免疫调节、抗肿瘤、改善记忆等）同时又具有蛋白（肽）的理化特性。目前，金针菇蛋白聚糖大多参照金针菇多糖的制备方法来进行分离纯化，通过热水浸提得到多糖、蛋白、蛋白聚糖等物质的混合物，Sevag法去除蛋白，色谱分离，根据蛋白吸收峰收集样品液，浓缩后冻干。然而，现有的金针菇蛋白聚糖的分离方法得到的蛋白聚糖产品中大部分为多糖物质，金针菇蛋白聚糖的纯度低（纯度在60%以下）。
现有技术“Isolation, characterization and HepG-2 inhibition of a novelproteoglycan from Flammulina velutipes. International Journal of BiologicalMacromolecules 189 (2021) 11-17”公开了一种新型蛋白聚糖PGD1-1的制备方法，其制备的蛋白聚糖PGD1-1的纯度为87.21%。然而，该蛋白聚糖PGD1-1对HepG-2细胞的抑制活性仅为37.96%，对HepG-2细胞的抑制活性不够高。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供金针菇蛋白聚糖及其双波长筛选方法和应用、抗肝癌药物、金针菇蛋白聚糖复合颗粒和金针菇蛋白聚糖复合含片。采用本发明提供的双波长筛选方法得到的金针菇蛋白聚糖的纯度在90%以上，对肝癌的抑制活性高。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种金针菇蛋白聚糖的双波长筛选方法，包括以下步骤：
将金针菇进行水提后除蛋白，得到去蛋白水提液；
将所述去蛋白水提液与无水乙醇混合，进行醇沉，得到蛋白聚糖沉淀；
将所述蛋白聚糖沉淀进行透析，得到粗蛋白聚糖；
以水为洗脱剂，将所述粗蛋白聚糖依次进行琼脂糖凝胶FF离子交换色谱柱分离和G-200葡聚糖凝胶色谱柱分离，收集在480nm和295nm同时出现吸收峰的组分，得到金针菇蛋白聚糖。
优选地，所述金针菇的干重与水提用水的体积之比为1g：20~30mL；
所述水提的温度为85~95℃，时间为3.5~4.5h。
优选地，所述去蛋白水提液与无水乙醇的体积比为1：（3.5~4）；
所述醇沉的温度为0~25℃，时间为24~72h。
优选地，所述的截留分子量为3~5kDa，所述透析的时间为20~28h。
优选地，所述粗蛋白聚糖溶解于水中后再进行琼脂糖凝胶FF离子交换色谱柱分离；
所述粗蛋白聚糖的干重与水的体积之比为1g：1~15mL。
本发明提供了上述技术方案所述双波长筛选方法得到的金针菇蛋白聚糖，所述金针菇蛋白聚糖的单糖单元包括葡萄糖、D-半乳糖和木糖；所述金针菇蛋白聚糖的肽链端与多糖链由O-糖苷键连接。
本发明提供了上述技术方案所述的金针菇蛋白聚糖在制备功能食品或抗肝癌药物中的应用。
本发明提供了一种抗肝癌药物，其特征在于，包括上述技术方案所述的金针菇蛋白聚糖和药学上可接受的辅料。
本发明提供了一种金针菇蛋白聚糖复合颗粒，包括以下质量份数的组分：上述技术方案所述的金针菇蛋白聚糖65~85份，麦芽糊精5~15份，低聚果糖5~10份，赤藓糖醇3~8份，碳酸钙5~8份，粘合剂2~5份。
本发明还提供了一种金针菇蛋白聚糖复合含片，包括芯片和包裹在所述芯片表面的包衣层；
所述芯片包括以下质量份数的组分：上述技术方案所述的金针菇蛋白聚糖65~85份，麦芽糊精5~15份，低聚果糖5~10份，赤藓糖醇3~8份，碳酸钙5~8份，粘合剂2~5份。
本发明提供了一种金针菇蛋白聚糖的双波长筛选方法，通过水提将金针菇中的多糖、蛋白聚糖和游离蛋白等组分提取出来，通过除蛋白将游离蛋白去除，通过醇沉将多糖和蛋白聚糖分离出来，通过琼脂糖凝胶FF离子交换色谱柱分离（以水为洗脱剂）和G-200葡聚糖凝胶色谱柱分离（以水为洗脱剂），并采用双波长检测，收集480nm和285nm双波长下同时具有吸收峰的洗脱液，使得同时具有蛋白结构和多糖结构的组分—金针菇蛋白多糖被保留下来，金针菇蛋白聚糖的纯度高，收率高；而且，本发明提供的双波长筛选方法工艺简单，操作简单，成本低，绿色环保，适宜工业化生产。如实施例测试结果所示，本发明制备得到的金针菇蛋白聚糖的纯度在90%以上，收率在75%以上。
本发明提供了上述技术方案所述双波长筛选方法得到的金针菇蛋白聚糖，所述金针菇蛋白聚糖的单糖单元包括葡萄糖、D-半乳糖和木糖；所述金针菇蛋白聚糖的肽链端与多糖链由O-糖苷键连接。本发明提供的金针菇蛋白聚糖纯度高，同时具有多糖的吸收波长和蛋白的吸收波长，具有抗肝癌活性，在制备抗肝癌药物以及功能食品（例如金针菇蛋白聚糖复合含片、金针菇蛋白聚糖复合颗粒）方面具有很好的应用前景。如实施例测试结果所示，200μg/mL的金针菇蛋白聚糖溶液对HepG-2细胞的抑制率在41%以上。
附图说明
图1为实施例1制备的金针菇蛋白聚糖的红外谱图；
图2为实施例1制备的金针菇蛋白聚糖的实物图。
具体实施方式
本发明提供了一种金针菇蛋白聚糖的双波长筛选方法，包括以下步骤：
将金针菇进行水提后除蛋白，得到去蛋白水提液；
将所述去蛋白水提液与无水乙醇混合，进行醇沉，得到蛋白聚糖沉淀；
将所述蛋白聚糖沉淀进行透析，得到粗蛋白聚糖；
以水为洗脱剂，将所述粗蛋白聚糖依次进行琼脂糖凝胶FF离子交换色谱柱分离和G-200葡聚糖凝胶色谱柱分离，收集在480nm和295nm同时出现吸收峰的组分，得到金针菇蛋白聚糖。
如无特殊说明，本发明采用的原料均为市售商品。
本发明将金针菇进行水提后除蛋白，得到去蛋白水提液。在本发明中，所述金针菇进行水提后除蛋白优选为：将金针菇与水混合，进行水提，得到水提液；将所述水提液进行除蛋白，得到去蛋白水提液。在本发明中，所述金针菇优选为金针菇干粉，所述金针菇干粉的粒径优选≤250μm。在本发明中，所述金针菇的干重（即金针菇干粉的质量）与水的体积之比优选为1g：20~30mL，更优选为1g：22~28mL，进一步优选为1g：24~25mL。在本发明中，所述水提的温度优选为85~95℃，更优选为90℃；所述水提的时间优选为3.5~4.5h，更优选为4h。在本发明中，所述除蛋白优选为Sevag法除蛋白，所述Sevag法除蛋白用试剂优选为Sevag试剂（体积比为5:1的氯仿和正丁醇的混合物）。在本发明中，所述水提液与Sevag试剂的体积比优选为3~4：1，更优选为3.5~4：1。
得到去蛋白水提液后，本发明将所述去蛋白水提液与无水乙醇混合，进行醇沉，得到蛋白聚糖沉淀。在本发明中，所述去蛋白水提液与无水乙醇的体积比优选为1：（3.5~4），更优选为1：（3.6~3.9），进一步优选为1：（3.7~3.8）。在本发明中，所述醇沉的温度优选为0~25℃，更优选为10~15℃；所述醇沉的时间优选为24~72h，更优选为48~72h。
得到蛋白聚糖沉淀后，本发明将所述蛋白聚糖沉淀进行透析（记为第一透析），得到粗蛋白聚糖。在本发明中，所述第一透析优选使用透析袋进行，所述透析袋的孔径优选为3~5kDa，更优选为4kDa；所述第一透析的温度优选为10~30℃，更优选为20~30℃；所述第一透析的时间优选为20~28h，更优选为22~26h。在本发明中，所述第一透析能够将盐等小分子物质除去，保留蛋白质和多糖等组分。所述第一透析后，本发明优选还包括将透析后的粗蛋白聚糖进行干燥，得到粗蛋白聚糖。在本发明中，所述干燥优选为冻干，所述冻干的温度优选为-60~-40℃，更优选为-60~-50℃；所述冻干的时间优选为48~96h，更优选为60~72h。
得到粗蛋白聚糖后，本发明以水为洗脱剂，将所述粗蛋白聚糖依次进行琼脂糖凝胶FF离子交换色谱柱分离和G-200葡聚糖凝胶色谱柱分离，收集在480nm和295nm同时出现吸收峰的组分，得到金针菇蛋白聚糖。在本发明中，所述琼脂糖凝胶FF离子交换色谱柱（DEAE Sepharose Fast Flow）分离和G-200葡聚糖凝胶色谱柱分离采用的洗脱剂均为水，优选为超纯水；所述水的流速优选为0.5~2mL/min，更优选为1~1.5mL/min。在本发明中，所述粗蛋白聚糖优选溶解于水中后再进行琼脂糖凝胶FF离子交换色谱柱分离；所述粗蛋白聚糖的干重与水的体积之比优选为1g：1~15mL，更优选为1g：2~10mL，进一步优选为1g：3~5mL。在本发明中，所述G-200葡聚糖凝胶色谱柱的分离范围优选为5~600kDa。所述收集后，本发明优选还包括将所述收集得到的洗脱液进行透析（记为第二透析）后干燥，得到金针菇蛋白聚糖。在本发明中，所述第二透析的条件优选与所述第一透析相同，在此不再赘述；所述第二透析的目的是将小分子盐等除去，进一步提高金针菇蛋白聚糖的纯度。在本发明中，所述干燥优选为冻干，所述冻干的温度优选为-60~-40℃，更优选为-60~-50℃；所述冻干的时间优选为48~96h，更优选为60~72h。
本发明提供了上述技术方案所述的双波长筛选方法得到的金针菇蛋白聚糖，所述金针菇蛋白聚糖的单糖单元包括葡萄糖、D-半乳糖和木糖；所述金针菇蛋白聚糖的肽链端与多糖链由O-糖苷键连接。在本发明中，葡萄糖、D-半乳糖和木糖的摩尔比优选为24~25：2~4：1~6，更优选为24:4:1或25:2:6。在本发明中，所述金针菇蛋白聚糖的分子量优选为30~33.5kDa，更优选为33.05kDa或30.42kDa。在本发明中，所述金针菇蛋白聚糖包括糖、蛋白和糖醛酸，所述金针菇蛋白聚糖中，糖的含量优选为93.38wt%，蛋白的含量优选为2.33wt%，糖醛酸的含量优选为1.53wt%。
本发明提供了上述技术方案所述的金针菇蛋白聚糖在制备功能食品或抗肝癌药物中的应用。在本发明中，所述金针菇蛋白聚糖在功能食品中的添加量优选为40~85wt%，更优选为65~85wt%。在本发明中，所述金针菇蛋白聚糖在抗肝癌药物中的添加量优选为60~95wt%，更优选为80~95wt%。
本发明提供了一种抗肝癌药物，包括上述技术方案所述的金针菇蛋白聚糖和药学上可接受的辅料。本发明对于所述药学上可接受的辅料没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的辅料即可。本发明对于所述抗肝癌药物的剂型没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的剂型即可。
本发明提供了一种金针菇蛋白聚糖复合颗粒，包括以下质量份数的组分：上述技术方案所述的金针菇蛋白聚糖65~85份，优选为70~80份，更优选为75份；麦芽糊精5~15份，优选为8~12份，更优选为10份；低聚果糖5~10份，优选为6~9份，更优选为7~8份；赤藓糖醇3~8份，优选为4~7份，更优选为5~6份；碳酸钙5~8份，优选为5.5~7.5份，更优选为6~7份；粘合剂2~5份，优选为2.5~4.5份，更优选为3~4份。在本发明中，所述粘合剂优选包括羟丙基甲基纤维素（HPMC）和/或***胶。在本发明中，所述金针菇蛋白聚糖复合颗粒的服用方式优选为口服，服用量优选为1.2~1.8g/天。
在本发明中，所述金针菇蛋白聚糖复合颗粒的制备方法优选包括以下步骤：将金针菇蛋白聚糖、麦芽糊精、低聚果糖、赤藓糖醇、碳酸钙、羟丙基甲基纤维素和水混合，进行制粒后干燥，得到金针菇蛋白聚糖复合颗粒；将所述保健糖果颗粒进行压片，得到保健糖果含片。在本发明中，所述金针菇蛋白聚糖含片的制备原料在使用前优选先进行超微粉碎后过筛，本发明对于所述超微粉碎没有特殊限定，能够粉碎至目数≥300目即可。在本发明中，所述过筛的筛网尺寸优选为300目，取筛下部分使用。在本发明中，所述制粒优选在沸腾制粒机或喷雾制粒机中进行。在本发明中，所述保健糖果颗粒的粒径优选为300~400目，更优选为300~350目。在本发明中，所述干燥的温度优选为30~60℃，更优选为40~50℃；本发明对于所述干燥的时间没有特殊限定，干燥至含水率≤10%即可。所述干燥后，本发明优选还包括将所述干燥后的颗粒进行包装，得到金针菇蛋白聚糖复合颗粒。本发明对于所述包装没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的包装方式即可。
本发明提供了一种金针菇蛋白聚糖复合含片，包括芯片和包裹在所述芯片表面的包衣层。在本发明中，所述芯片包括以下质量份数的组分：上述技术方案所述的金针菇蛋白聚糖65~85份，优选为70~80份，更优选为75份；麦芽糊精5~15份，优选为8~12份，更优选为10份；低聚果糖5~10份，优选为6~9份，更优选为7~8份；赤藓糖醇3~8份，优选为4~7份，更优选为5~6份；碳酸钙5~8份，优选为5.5~7.5份，更优选为6~7份；粘合剂2~5份，优选为2.5~4.5份，更优选为3~4份。在本发明中，所述粘合剂优选包括羟丙基甲基纤维素（HPMC）和/或***胶。在本发明中，所述金针菇蛋白聚糖复合含片的服用方式优选为口服，服用量优选为2~3片/天；所述金针菇蛋白聚糖复合含片的单片质量优选为0.4~0.6g/片，更优选为0.5~0.6g/片。
在本发明中，所述金针菇蛋白聚糖复合含片的制备方法优选包括以下步骤：将金针菇蛋白聚糖、麦芽糊精、低聚果糖、赤藓糖醇、碳酸钙和羟丙基甲基纤维素混合，依次进行制粒、干燥和压片，得到金针菇蛋白聚糖复合含片。在本发明中，所述金针菇蛋白聚糖含片的制备原料在使用前优选先进行超微粉碎后过筛，本发明对于所述超微粉碎没有特殊限定，能够粉碎至目数≥300目即可。在本发明中，所述过筛的筛网尺寸优选为300目，取筛下部分使用。在本发明中，所述制粒优选在沸腾制粒机或喷雾制粒机中进行；所述制粒得到的颗粒的粒径优选为300~350目，更优选为300目。在本发明中，所述干燥的温度优选为30~100℃，更优选为50~80℃；本发明对于所述干燥的时间没有特殊限定，干燥至含水率≤10%即可。所述压片后优选还包括将所得片料进行包装，得到金针菇蛋白聚糖复合含片。本发明对于所述包装没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的包装方式即可。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
采用90℃热水对金针菇干粉水提4h，将所得水提液用Sevag试剂去除蛋白，得到去蛋白水提液。在所述去蛋白水提液加入无水乙醇在4℃条件下醇沉48h，将所得蛋白聚糖沉淀用3kDa孔径透析袋第一透析24h，在-60℃条件下冻干72h，得到粗蛋白聚糖；将所述粗蛋白聚糖溶解于水中，以超纯水（流速为1mL/min）为洗脱剂，依次进行DEAE Sepharose FastFlow分离纯化和G-200葡聚糖凝胶色谱柱分离（分离范围为5~600kDa）纯化，收集480nm和295nm双波长同时出现的吸收峰的洗脱液，将所述洗脱液经3kDa透析袋第二透析24h，在-60℃条件下冻干72h，得到金针菇蛋白聚糖。其中，金针菇干粉与热水的固液比为1:20（1g：20mL），去蛋白水提液与无水乙醇的体积比为1:4，粗蛋白聚糖与溶解用水的料水比为3g：10mL。
金针菇蛋白聚糖的收率为79.32%，纯度为95.6%，金针菇蛋白聚糖的分子量为33.05kDa，葡萄糖、D-半乳糖和木糖的摩尔比为24:4:1，肽链端与多糖链由O-糖苷键连接。其中，收率=金针菇蛋白聚糖的质量/金针菇干粉的质量×100%；纯度使用TSK-gel PWXLG4000色谱柱（7.8 mm×300 mm，5 μm）配备蒸发光散射检测器（ELSD）与Agilent 1200系列HPLC仪器联用测定。
图1为实施例1制备的金针菇蛋白聚糖的红外谱图，由图1可知，金针菇蛋白聚糖在3000cm-1处存在一个峰，这是羟基的伸缩振动峰，而在1295cm-1附近存在吸收峰，这是C-C的伸缩振动峰，从而初步确定是一种糖类化合物。而样品在1630cm-1附近的吸收峰则由乙酰基中羰基的非对称伸缩振动引起的，这个峰是蛋白类物质的特征吸收峰，表明样品中含有蛋白基团。1080cm-1附近的相对较强的吸收峰是由于吡喃糖的伸缩振动引起的，因此表示糖链构型为吡喃环结构。此外，蛋白聚糖的红外光谱显示其在890 cm-1处皆存在突起峰，此峰对应D-葡聚糖的吸收峰，表明样品中含有D-葡聚糖，由此红外光谱可判断样品是蛋白聚糖。
图2为实施例1制备的金针菇蛋白聚糖的实物图，由图2可知，采用本发明提供的双波长筛选方法得到的金针菇蛋白聚糖的颜色浅，说明本发明提供的双波长筛选方法能够明显提高金针菇蛋白聚糖的纯度。
实施例2
按照实施例1的方法制备金针菇蛋白聚糖，与实施例1的区别仅在于：固液比为1:30，去蛋白水提液与无水乙醇的体积比为1:3.5，粗蛋白聚糖与溶解用水的料水比为3g：10mL，第一透析用透析袋孔径为5kDa。
金针菇蛋白聚糖的收率为75.17%，纯度为90.3%，金针菇蛋白聚糖的分子量为30.42kDa，葡萄糖、D-半乳糖和木糖的摩尔比为25:2:6，肽链端与多糖链由O-糖苷键连接。
对比例1
按照实施例1的方法制备金针菇蛋白聚糖，与实施例1的区别仅在于：第一透析用透析袋孔径为5kDa，收集苯酚硫酸法在480nm出现的吸收峰的洗脱液。
经测定金针菇蛋白聚糖的收率为83.88%，纯度为78.61%。
对比例2
文献“Isolation, characterization and HepG-2 inhibition of a novelproteoglycan from Flammulina velutipes. International Journal of BiologicalMacromolecules 189 (2021) 11-17”公开的新型蛋白聚糖PGD1-1。
测试例1
HepG-2（人肝癌细胞）抑制率测试
通过MTT法测定了实施例1~2和对比例1~2制备的金针菇蛋白聚糖对HepG-2细胞活力的抑制作用，具体步骤如下：将无氟尿嘧啶（5-Fu）作阳性对照组。将HepG-2细胞预培养，在倒置生物显微镜下观察生长在96孔细胞培养板上的HepG-2细胞，贴壁后，去除上层培养液，加含有不同组别蛋白聚糖（200μg/mL）的培养基100μL，100μL HepG-2细胞以1×105个/mL置于96孔板中。5-Fu（50μg/mL）组设为阳性对照组，加入100μL MTT（0.5mg/mL）。置于恒温培养箱（37℃，5% CO2）培养孵育4h后，除去培养基，并将DMSO（150μL）添加到每个孔中。每组样品设置5个平行试验。使用酶标仪测量550nm处的吸光度。
实施例1~2和对比例1制备的金针菇蛋白聚糖对HepG-2细胞活力的抑制作用结果如表1所示。
表1 不同浓度的金针菇蛋白聚糖对HepG-2细胞活力的抑制作用
由表1可知，采用本发明提供的双波长筛选方法，在480nm和295nm下得到的金针菇蛋白聚糖同时具有多糖的吸收波长和蛋白的吸收波长，具有抗肝癌活性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种金针菇蛋白聚糖的双波长筛选方法，包括以下步骤：
将金针菇进行水提后除蛋白，得到去蛋白水提液；
将所述去蛋白水提液与无水乙醇混合，进行醇沉，得到蛋白聚糖沉淀；所述去蛋白水提液与无水乙醇的体积比为1：（3.5~4）；
将所述蛋白聚糖沉淀进行透析，得到粗蛋白聚糖；所述透析的截留分子量为3~5kDa；
以水为洗脱剂，将所述粗蛋白聚糖依次进行琼脂糖凝胶FF离子交换色谱柱分离和G-200葡聚糖凝胶色谱柱分离，收集在480nm和295nm同时出现吸收峰的组分，得到金针菇蛋白聚糖。
2.根据权利要求1所述的双波长筛选方法，其特征在于，所述金针菇的干重与水提用水的体积之比为1g：20~30mL；
所述水提的温度为85~95℃，时间为3.5~4.5h。
3.根据权利要求1或2所述的双波长筛选方法，其特征在于，所述醇沉的温度为0~25℃，时间为24~72h。
4.根据权利要求1所述的双波长筛选方法，其特征在于，所述透析的时间为20~28h。
5.根据权利要求1所述的双波长筛选方法，其特征在于，所述粗蛋白聚糖溶解于水中后再进行琼脂糖凝胶FF离子交换色谱柱分离；所述粗蛋白聚糖的干重与水的体积之比为1g：1~15mL。
6.权利要求1~5任一项所述双波长筛选方法得到的金针菇蛋白聚糖，所述金针菇蛋白聚糖的单糖单元包括葡萄糖、D-半乳糖和木糖；所述金针菇蛋白聚糖的肽链端与多糖链由O-糖苷键连接。
7.权利要求6所述的金针菇蛋白聚糖在制备功能食品或抗肝癌药物中的应用。
8.一种抗肝癌药物，其特征在于，包括权利要求6所述的金针菇蛋白聚糖和药学上可接受的辅料。
9.一种金针菇蛋白聚糖复合颗粒，其特征在于，包括以下质量份数的组分：权利要求6所述的金针菇蛋白聚糖65~85份，麦芽糊精5~15份，低聚果糖5~10份，赤藓糖醇3~8份，碳酸钙5~8份，粘合剂2~5份。
10.一种金针菇蛋白聚糖复合含片，其特征在于，包括芯片和包裹在所述芯片表面的包衣层；
所述芯片包括以下质量份数的组分：权利要求6所述的金针菇蛋白聚糖65~85份，麦芽糊精5~15份，低聚果糖5~10份，赤藓糖醇3~8份，碳酸钙5~8份，粘合剂2~5份。
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| "双波长法测定小麦及小麦芽中直链、支链淀粉含量";金玉红等;《中国粮油学报》;第24卷(第1期);137-140页 * |
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