CN116410346A - 一种还原性透明质酸酯及其制备方法 - Google Patents

一种还原性透明质酸酯及其制备方法 Download PDF

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郭学平
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Abstract

本发明提供一种还原性透明质酸酯的制备方法，所述方法包括以下步骤：将抗坏血酸钠和卤代烷基醇在水中进行反应；加入透明质酸或其盐、活化剂进行反应，得到还原性透明质酸酯。本发明的还原性透明质酸酯既具有透明质酸的保湿效果、抗炎、促细胞生长等功效，又具有维生素C的提亮皮肤、促胶原蛋白形成、抑制黑色素等功效，并且该物质提高了维生素C的稳定性，同时，提高了维生素C在皮肤中的渗透。

Description

一种还原性透明质酸酯及其制备方法
技术领域
本发明属于高分子材料制备技术领域，具体涉及一种还原性透明质酸酯及其制备方法。
背景技术
透明质酸具有良好的保湿作用，被誉为理想的天然保湿因子。低分子透明质酸更是具有独特的生理特性：(1)抗炎。(2)促进细胞生长和分化。(3)促进伤口修复。(4)防止皮肤衰老。(5)保持其光洁度等。
维生素C是维持人体正常功能不可缺少的营养素，在美容功效上，维生素C也有着十分强大的作用：(1)提亮皮肤。(2)促进胶原蛋白的合成。(3)中和自由基，保护皮肤免受紫外线的伤害。(4)抑制黑色素的形成。(5)减少皱纹等。但是维生素C在水溶液中极其不稳定，很容易被氧化，使溶液的颜色加深。当透明质酸与维生素C的3号碳通过化学键相连后，大大提升了维生素C的稳定性，同时，也能促进维生素C在皮肤中的渗透。
发明内容
本发明的目的在于提供一种还原性透明质酸酯及其制备方法。
具体来说，本发明涉及如下方面：
1、一种还原性透明质酸酯的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
将抗坏血酸钠和卤代烷基醇在水中进行反应；
加入透明质酸或其盐、活化剂进行反应，得到还原性透明质酸酯。
2、根据项1所述的制备方法，其特征在于，加入透明质酸或其盐、活化剂进行反应的步骤在水中进行反应；所述活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶；优选地，所述透明质酸或其盐选自透明质酸钾、透明质酸镁、透明质酸钠、透明质酸钙、透明质酸锌、透明质酸季铵盐中的一种或两种以上。
3、根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述卤代烷基醇选自氯丙醇、溴丙醇、碘丙醇、氯乙醇、溴乙醇、碘乙醇、氯丁醇、溴丁醇中的一种或两种以上。
4、根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述卤代烷基醇与抗坏血酸钠的摩尔比为1:1-5，优选1:1-4。
5、根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述卤代烷基醇在反应体系中的浓度为0.05mol/L-0.2mol/L。
6、根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述将抗坏血酸钠和卤代烷基醇在水中进行反应的步骤中，反应温度为20℃-60℃，优选40℃-55℃，反应时间为2-8h；优选地，所述加入透明质酸或其盐、活化剂进行反应的步骤中，反应时间为5-10h。
7、根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述透明质酸或其盐的分子量为5KDa-100KDa，优选5KDa-50KDa。
8、根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述透明质酸或其盐与卤代烷基醇的摩尔比为2-1.1:1，优选1.5-1.2:1，所述透明质酸或其盐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:0.5-2:0.3-1.8，优选1:1.2:1。
9、根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括对所述还原性透明质酸酯进行分离纯化、干燥，得到还原性透明质酸酯粉末的步骤，其中在所述分离纯化的步骤中，包括使用有机溶剂沉淀所述还原性透明质酸酯，其中所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮和***中的一种或两种以上。
10、由项1-9中任一项所述的制备方法制得的还原性透明质酸酯。
本发明的还原性透明质酸酯既具有透明质酸的保湿效果、抗炎、促细胞生长等功效，又具有维生素C的提亮皮肤、促胶原蛋白形成、抑制黑色素等功效，并且该物质提高了维生素C的稳定性，同时，提高了维生素C在皮肤中的渗透。
附图说明
图1为透明质酸或其盐、维生素C丙基透明质酸酯、维生素C的全波长扫描图；
图2为维生素C丙基透明质酸酯的13C谱。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本发明，并非用于限制本发明。
除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但不用来限制本发明的范围。
透明质酸(HA)是由D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺的双糖单位组成，本身带有负电荷，存在于大部分动物体的软***中，显示出润滑关节、调节血管壁的通透性、调节蛋白质、水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等多种重要的生理功能，尤其是透明质酸特殊的保水作用，广泛应用于医药、化妆品领域。同时透明质酸分子在空间上呈刚性螺旋柱形，柱的内侧由于存在大量的羟基而产生强吸水性，另一方面由于羟基的连续定向排列，又在透明质酸分子链上形成憎水区，使得透明质酸能形成三维网状结构。而且，透明质酸根据其分子量的不同，也表现出不相同的理化性质。天然的透明质酸易被体内的透明质酸酶降解，目前主要通过交联来有效降低透明质酸的降解，延长体内维持时间。为了达到理想的体内维持时间，一般采用加大交联剂用量或优化交联条件和方法来提高凝胶的交联度。
由于维生素C在水溶液中极其不稳定，很容易被氧化。因此当透明质酸与维生素C的3号碳通过化学键相连生成透明质酸酯后，一方面可以大大提升了维生素C的稳定性，另一方面生成的透明质酸酯还具有透明质酸的保湿效果、抗炎、促细胞生长等功效。
为了获得透明质酸维生素C透明质酸酯，本发明提供一种还原性透明质酸酯的制备方法，所述方法包括以下步骤：
将抗坏血酸钠和卤代烷基醇在水中进行反应；
加入透明质酸或其盐、活化剂进行反应，得到还原性透明质酸酯。
其中，加入透明质酸或其盐、活化剂进行反应的步骤在水中进行反应。所述活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶。
所述透明质酸或其盐选自透明质酸钾、透明质酸镁、透明质酸钠、透明质酸钙、透明质酸锌、透明质酸季铵盐中的一种或两种以上。
在一个具体的实施方式中，所述还原性透明质酸酯的制备方法包括以下步骤：
步骤1：将抗坏血酸钠和卤代烷基醇在水中进行反应；
步骤2：加入透明质酸或其盐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶进行反应，得到还原性透明质酸酯。
上述2个步骤的反应如下式所示：
Figure BDA0003452815820000041
其中，X为氯或溴或碘。
如上式所示，在步骤1中，将抗坏血酸钠和卤代烷基醇在水中进行反应生成相应的卤代烷抗坏血酸醚。其中，在步骤1中所述卤代烷基醇选自氯丙醇、溴丙醇、碘丙醇、氯乙醇、溴乙醇、碘乙醇、氯丁醇、溴丁醇中的一种或两种以上，例如可以为3-氯丙醇、3-溴丙醇、3-碘丙醇、2-氯乙醇、2-溴乙醇、2-碘乙醇、4-氯丁醇、4-溴丁醇等。
在一个具体的实施方式中，所述所述卤代烷基醇在反应体系中的浓度为0.05mol/L-0.2mol/L，例如可以为0.05mol/L、0.06mol/L、0.07mol/L、0.08mol/L、0.09mol/L、0.1mol/L、0.11mol/L、0.12mol/L、0.13mol/L、0.14mol/L、0.15mol/L、0.16mol/L、0.17mol/L、0.18mol/L、0.19mol/L、0.2mol/L。
在一个具体的实施方式中，所述卤代烷基醇与抗坏血酸钠的摩尔比为1:1-5，例如可以为1:1、1:1.1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:5，优选1:1-4。
步骤1中，反应温度为20℃-60℃，例如可以为20℃、25℃、30℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃，优选40℃-55℃。
在步骤1中，反应时间为2-8h。
在步骤2中，向步骤1的反应体系中加入透明质酸或其盐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)进行反应。反应式如上式所示，步骤1中生成的抗坏血酸醚与透明质酸或其盐在EDC、DMAP作为催化剂的条件下，维生素C透明质酸酯，即还原性透明质酸酯。
其中，透明质酸或其盐的分子量的分子量不作限定。在一个具体的实施方式中，所述透明质酸或其盐的分子量的分子量为5KDa-100KDa，例如可以为5KDa、10KDa、20KDa、30KDa、40KDa、50KDa、60KDa、70KDa、80KDa、90KDa、100KDa。
在一个具体的实施方式中，所述透明质酸或其盐与卤代烷基醇的摩尔比为2-1.1:1，例如可以为2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1，优选1.5-1.2:1。
在一个具体的实施方式中，所述透明质酸或其盐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:0.5-2:0.3-1.8，例如可以为1:0.5:0.3、1:0.5:0.5、1:0.5:0.8、1:0.5:1、1:0.5:1.2、1:0.5:1.5、1:0.5:1.8、1:1:0.3、1:1:0.5、1:1:0.8、1:1:1、1:1:1.2、1:1:1.5、1:1:1.8、1:1.2:0.3、1:1.2:0.5、1:1.2:0.8、1:1.2:1、1:1.2:1.2、1:1.2:1.5、1:1.2:1.8、1:2:0.3、1:2:0.5、1:2:0.8、1:2:1、1:2:1.2、1:2:1.5、1:2:1.8，优选1:1.2:1。
在步骤2中，反应时间为5-10h。
所述方法还可以包括步骤3，对所述还原性透明质酸酯进行分离纯化、干燥，得到还原性透明质酸酯粉末。即将反应生成的维生素C透明质酸酯进行分离纯化，得到维生素C透明质酸酯粉末。在分离纯化步骤中，可以使用有机溶剂沉淀所述反应产物以进行产物的分类纯化，其中所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮和***中的一种或两种以上。
干燥可采用现有干燥方法。例如可以为真空干燥。
本发明还提供上述制备方法制得的还原性透明质酸酯。
使用本发明的制备方法通过使抗坏血酸钠、卤代烷基醇和透明质酸或其盐反应制备得到维生素C透明质酸酯。得到的透明质酸酯可以大大提升了维生素C的稳定性，同时，既可以保持透明质酸的保湿效果、抗炎、促细胞生长等功效，也能促进维生素C在皮肤中的渗透，对自由基的清除率可以达90％以上。
实施例
下面结合实施例进一步说明本发明，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本发明，并非用于限制本发明。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊要求，均为常规方法。
下述实施例和对比例中所使用的透明质酸钠均为华熙生物科技股份有限公司生产。其他材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
将1.0mmol抗坏血酸钠与1.0mmol 3-氯丙醇溶于水中，20℃下反应，反应2h。向反应液中加入1.1mmol透明质酸钠(分子量为5KDa)、0.3mmol DMAP和0.5mmol EDC，反应5h。反应结束后，加入乙醇沉淀反应产物，并将过滤到的沉淀真空干燥得透明质酸接枝共聚物粉末，即维生素C丙基透明质酸酯。
采用以下方法检测所得维生素C丙基透明质酸酯的纯度、取代度和收率：
维生素C丙基透明质酸酯的纯度
1、试剂：0.025mol/L硼砂硫酸溶液：称取4.77g硼砂，溶于浓硫酸(优级纯)500ml中，摇匀即得。
2、咔唑试液：称取咔唑0.125g加无水乙醇100ml，振摇使其溶解，即得。本液应置棕色玻璃瓶中，密塞，置暗处保存。
3、对照品贮备液制备：精密称取经105℃，以五氧化二磷为干燥剂，真空干燥至恒重的葡萄糖醛酸对照品约0.100g(Ws1)，置100ml量瓶中，加水溶解，稀释至100.0g(Ws2)，摇匀，作为对照品贮备液。
4、样品溶液制备：精密称取本品(与干燥失重同时称重)约0.170g(W1)置100ml具塞锥形瓶中，加水溶解稀释至100.0g(W2)，加磁子搅拌，至样品完全溶解。取约10.0g(W3)置200ml具塞锥形瓶中，加水至200.0g(W4)，磁子搅拌约30min溶解，作为样品溶液。样品溶液平行制备3份。
Figure BDA0003452815820000071
5、标准曲线的制备：精密称取贮备液0.65g、1.5g、3.0g、4.5g、6.0g(Ws3)置100ml的量瓶中，各加水至100.0g(Ws4)，分别制成葡萄糖醛酸浓度为6.5μg/g～65μg/g之间的五个浓度的对照品溶液。
Figure BDA0003452815820000072
6、样品测定：取25支具塞试管，编号为1～25，置于冰水浴中，依次精密量取对照溶液各1.0ml置于1～15号管中，每个浓度的对照溶液平行取3份，依次精密量取样品溶液各1.0ml置于16～24号管中，每个样品溶液平行取3份，精密量取水1.0ml置25号管中(空白)。各加5.0ml的0.025mol/L硼砂硫酸溶液，盖上塞子，混匀，水浴15分钟，取出置于冰水浴中冷却，各加入0.20ml咔唑试液，加塞，混匀，水浴15分钟，冷却至室温，以25号管为空白，在530nm测定吸光度。
以对照溶液各管中葡萄糖醛酸的浓度与对应的吸光度制成标准曲线，根据样品溶液的吸光度，由回归方程得到样品溶液葡萄糖醛酸浓度Cg(μg/g)。
7、计算
Figure BDA0003452815820000073
式中Cg为由回归方程得到的样品中葡萄糖醛酸浓度，μg/g；
Cs为样品溶液透明质酸钠浓度，μg/g；
Z为D-葡萄糖醛酸对照品中C6H10O7的含量；
h为干燥失重；
401.3为透明质酸钠双糖片断的分子量；
194.1为葡萄糖醛酸的分子量。
其中，透明质酸钠含量X即为维生素C丙基透明质酸酯的纯度。
8、偏差要求
Figure BDA0003452815820000081
三个平行结果的相对偏差RD应≤2.0％。
9、结果报告：按平均值报告结果。结果保留的小数与标准规定一致。
维生素C丙基透明质酸酯的取代度测试
1、标准溶液配制
标准曲线的配制：称取维生素C乙基醚10mg用纯化水溶解在50ml容量瓶中定容，浓度为0.98mmol/L，吸取0.00ml、1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml维生素C乙基醚标准使用溶液，分别在50ml容量瓶中定容，浓度分别为0.00mmol/L、0.0196mmol/L、0.0392mmol/L、0.0588mmol/L、0.0784mmol/L,。
2、样品溶液配制
HA-Vc溶液的配制：取100mg HA-Vc样品用纯化水溶解在100ml容量瓶中定容。
3、操作步骤：紫外吸收波长244nm，测定标准曲线样品，以纯化水做空白对照；测定样品溶液，以纯化水做空白对照；
4、计算方法：将测得的样品紫外吸收代入下式即可得到维生素C丙基透明质酸酯的取代度。
Figure BDA0003452815820000082
式中C由回归方程得到的样品为维生素C对应浓度，mmol/L；
m为样品称量的质量，g；
h为干燥失重；
401.3为透明质酸钠双糖片断的分子量；
M为一个维生素C丙基透明质酸酯结构单元的摩尔质量。
其中，维生素C丙基透明质酸酯的纯度是指维生素C丙基透明质酸酯中透明质酸的含量，取代度是指透明质酸羧基被维生素C取代的物质的量与总的透明质酸的物质的量之比，表征透明质酸的羧基被维生素C中间体取代的程度。
维生素C丙基透明质酸酯的收率
按照下式计算维生素C丙基透明质酸酯的收率。
Figure BDA0003452815820000091
式中m为干燥完得到的维生素C丙基透明质酸酯质量；
h为维生素C丙基透明质酸酯的干燥失重；
M为加入的透明质酸及其盐的质量；
H为透明质酸及其盐的干燥失重。
经检测，所得维生素C丙基透明质酸酯的纯度为94.55％，取代度为1％，收率为78.4％。
实施例2
将4.0mmol抗坏血酸钠与1.0mmol 3-溴丙醇溶于水中，60℃反应，反应8h。向反应液中加入2.0mmol透明质酸钠(分子量为100KDa)、3.6mmol DMAP和4.0mmol EDC，反应10h。反应结束后，加入乙醇沉淀反应产物，并将过滤到的沉淀真空干燥得透明质酸接枝共聚物粉末，即维生素C丙基透明质酸酯。
按照实施例1中的方法检测维生素C丙基透明质酸酯的纯度和取代度。
经检测，所得维生素C丙基透明质酸酯的纯度为93.65％，取代度为11.42％，收率为73.9％。
实施例3
将4.0mmol抗坏血酸钠与1.0mmol 3-碘丙醇溶于水中，60℃反应，反应6h。向反应液中加入1.5mmol透明质酸钠(分子量为40KDa)、0.9mmol DMAP和0.9mmol EDC，反应8h。反应结束后，加入乙醇沉淀反应产物，并将过滤到的沉淀真空干燥得透明质酸接枝共聚物粉末，即维生素C丙基透明质酸酯。
按照实施例1中的方法检测维生素C丙基透明质酸酯的纯度和取代度。
经检测，所得维生素C丙基透明质酸酯的纯度为94.41％，取代度为15.3％，收率为79.3％。
实施例4
将1.5mmol抗坏血酸钠与1.0mmol 2-氯乙醇、2-溴乙醇混合卤代烷基醇(按照摩尔比为1:1混合)溶于水中，50℃反应，反应5h。向反应液中加入1.65mmol透明质酸钠(分子量为40KDa)、1.65mmol DMAP和1.65mmol EDC，反应10h。反应结束后，加入乙醇沉淀反应产物，并将过滤到的沉淀真空干燥得透明质酸接枝共聚物粉末，即维生素C丙基透明质酸酯。
按照实施例1中的方法检测维生素C丙基透明质酸酯的纯度和取代度。
经检测，所得维生素C丙基透明质酸酯的纯度为94.58％，取代度为13.32％，收率为75.4％。
实施例5
将3.5mmol抗坏血酸钠与1.0mmol 2-碘乙醇溶于水中，55℃反应，反应5h。向反应液中加入1.5mmol透明质酸钠(分子量为40KDa)、1.8mmol DMAP和1.5mmol EDC，反应10h。反应结束后，加入乙醇沉淀反应产物，并将过滤到的沉淀真空干燥得透明质酸接枝共聚物粉末，即维生素C丙基透明质酸酯。
按照实施例1中的方法检测维生素C丙基透明质酸酯的纯度和取代度。
经检测，所得维生素C丙基透明质酸酯的纯度为94.91％，取代度为20.00％，收率为73.0％。
实施例6
将1.5mmol抗坏血酸钠与0.5mmol 4-氯丁醇、0.5mmol 4-溴丁醇混合卤代烷基醇溶于水中，50℃反应，反应5h。向反应液中加入1.5mmol透明质酸钠(分子量为40KDa)、1.6mmol DMAP和1.3mmol EDC，反应10h。反应结束后，加入乙醇沉淀反应产物，并将过滤到的沉淀真空干燥得透明质酸接枝共聚物粉末，即维生素C丙基透明质酸酯。
按照实施例1中的方法检测维生素C丙基透明质酸酯的纯度和取代度。
经检测，所得维生素C丙基透明质酸酯的纯度为94.31％，取代度为16.51％，收率为72.4％。
实施例7-8
实施例7-8与实施例2的不同在于，抗坏血酸钠和3-溴丙醇的反应温度不同。其他反应条件均与实施例2相同。具体的实施例7的反应温度为40℃，实施例8的反应温度为50℃。
经检测，实施例7中，所得维生素C丙基透明质酸酯的纯度为94.57％，取代度为13.16％，收率为78.6％。
实施例8中，所得维生素C丙基透明质酸酯的纯度为94.91％，取代度为19.16％，收率为74.9％。
实施例9
实施例9与实施例2的不同在于，抗坏血酸钠和3-溴丙醇的反应温度不同。
实施例9的反应温度为15℃。
实施例10
实施例10与实施例6的不同在于，卤代烷基醇为4-碘丁醇。其他反应条件均与实施例6相同。
实施例11-12
实施例11-12与实施例2的不同在于，抗坏血酸钠和3-溴丙醇的摩尔比不同。其他反应条件均与实施例2相同。实施例11中抗坏血酸钠为0.5mmol，3-溴丙醇为1mmol。实施例12中抗坏血酸钠为1mmol，3-溴丙醇为1mmol。
经检测，实施例12中，所得维生素C丙基透明质酸酯的纯度为93.44％，取代度为12.96％，收率为77.1％。
具体的各实施例的反应条件如表1所示。
表1各实施例和对比例的反应条件
Figure BDA0003452815820000111
试验例
自由基(DPPH)清除率测试
1、溶液配制：
0.1mM DPPH溶液：精密称取4.0mg DPPH置100ml棕色容量瓶中，用95％乙醇溶解并定容。
样品溶液配制：配制0.1％浓度的样品溶液，其中样品是指上述实施例制备的透明质酸酯。
2、操作步骤：
分别精密量取DPPH溶液5.0ml和样品溶液5.0ml置具塞试管中，混匀。以等体积的水和无水乙醇混合溶液为空白对照。室温放置30min，于523nm处分别测定溶液吸光度值。另设一组分别精密量取DPPH溶液5.0ml和纯化水5.0ml混合，操作同上。
3、计算方法：
Figure BDA0003452815820000121
得到的结果如表2所示。
表2
DPPH清除率 取代度
实施例1 2.16％ 1％
实施例2 41.36％ 11.42％
实施例3 67.34％ 15.30％
实施例4 54.36％ 13.32％
实施例5 82.59％ 20.00％
实施例6 69.43％ 16.51％
实施例7 53.94％ 13.16％
实施例8 80.18％ 19.16％
实施例9 0 0
实施例10 0 0
实施例11 0 0
实施例12 50.71％ 12.96％
由表2可以看出，本发明实施例1-8、12所得的产物均具有还原性，而实施例9-11所得产物则无还原性。
全波长扫描和13C谱分析
对实施例2制备的透明质酸酯进行全波长扫描(紫外可见分光光度计，UV2550)和13C谱分析(AVANCE III HD 400)，结果分别图1和图2所示。
图1中维生素C水溶液紫外吸收最大吸收波长在265nm，维生素C3号碳反应生成醚键后产品的紫外吸收最大波长在244nm，透明质酸在上述波长都没有紫外吸收峰。
图2中13C谱显示，透明质酸羧基碳成酯后化学位移减小。维生素C3号碳成醚后化学位移减小，2号碳化学位移增大，符合推断。

Claims (10)

1.一种还原性透明质酸酯的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
将抗坏血酸钠和卤代烷基醇在水中进行反应；
加入透明质酸或其盐、活化剂进行反应，得到还原性透明质酸酯。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，加入透明质酸或其盐、活化剂进行反应的步骤在水中进行反应；所述活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶；优选地，所述透明质酸或其盐选自透明质酸钾、透明质酸镁、透明质酸钠、透明质酸钙、透明质酸锌、透明质酸季铵盐中的一种或两种以上。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述卤代烷基醇选自氯丙醇、溴丙醇、碘丙醇、氯乙醇、溴乙醇、碘乙醇、氯丁醇、溴丁醇中的一种或两种以上。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述卤代烷基醇与抗坏血酸钠的摩尔比为1:1-5，优选1:1-4。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述卤代烷基醇在反应体系中的浓度为0.05mol/L-0.2mol/L。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述将抗坏血酸钠和卤代烷基醇在水中进行反应的步骤中，反应温度为20℃-60℃，优选40℃-55℃，反应时间为2-8h；优选地，所述加入透明质酸或其盐、活化剂进行反应的步骤中，反应时间为5-10h。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述透明质酸或其盐的分子量为5KDa-100KDa，优选5KDa-50KDa。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述透明质酸或其盐与卤代烷基醇的摩尔比为2-1.1:1，优选1.5-1.2:1，所述透明质酸或其盐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:0.5-2:0.3-1.8，优选1:1.2:1。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括对所述还原性透明质酸酯进行分离纯化、干燥，得到还原性透明质酸酯粉末的步骤，其中在所述分离纯化的步骤中，包括使用有机溶剂沉淀所述还原性透明质酸酯，其中所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮和***中的一种或两种以上。
10.由权利要求1-9中任一项所述的制备方法制得的还原性透明质酸酯。
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