CN116327968A - 一种多西他赛前药抗肿瘤制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明的一种多西他赛前药抗肿瘤制剂，属于药物制剂新辅料和新剂型领域。具体设计合成了如下通式(I)所示的含有不同脂肪醇侧链与不同连接链的多西他赛‑脂肪醇前药，并制备了自组装纳米粒。结果表明：多西他赛‑脂肪醇前药自组装纳米粒能有效提高多西他赛的疗效，降低其毒副作用；支链脂肪醇侧链的长度、脂肪醇侧链的结构(支链或直链)、以及连接链长度会对多西他赛前药自组装纳米粒的制剂学性质、体内命运、抗肿瘤活性及安全性产生显著影响。多西他赛‑支链脂肪醇前药自组装纳米粒具有比多西他赛‑直链脂肪醇前药自组装纳米粒更高的抗肿瘤活性与更低的毒性。

Description

一种多西他赛前药抗肿瘤制剂
技术领域：
本发明属于药物制剂新辅料和新剂型领域，涉及一种多西他赛前药抗肿瘤制剂，具体涉及多西他赛-支链脂肪醇前药及其自组装纳米粒的构建，以及其在药物递送***中的应用。
背景技术：
近年来恶性肿瘤的发病率越来越高，严重威胁着人类的健康。化疗是癌症治疗中最有效的策略之一。多西他赛(Docetaxel，DTX)属于紫杉烷类抗肿瘤药物，具有很强的细胞毒性和抗肿瘤作用。然而，多西他赛的使用会带来很多副作用，包括强烈的骨髓抑制和免疫抑制。并且多西他赛在水中溶解性极差，市售的多西他赛溶液剂
Figure BDA0003411996860000011
必须使用吐温80和乙醇助溶。但即使是在增溶剂的帮助下，多西他赛溶液剂的稳定性也很差，稀释后容易沉淀且药动学性质较差。这些缺点限制了多西他赛的临床应用。
前药策略是提高化疗药物递送效率的有效方法。通过前药策略对多西他赛进行结构修饰可以有效的改善多西他赛溶解性差、毒副作用大等问题。纳米药物递送***可以有效的延长药物在体内的循环时间，增强抗肿瘤效果。因此，基于前药策略的自组装纳米药物递送***结合了纳米技术和前药策略的优点，并且具有载药量高、不需要增溶剂等优势，近年来得到广泛研究。
前药通常由母药、连接链和侧链三部分组成。连接链将母药和侧链连接到一起。为了构建具有自组装能力的前药，现有的多西他赛前药大多使用直链结构的脂肪酸或脂肪醇作为侧链。脂肪族侧链能够增加前药分子的结构灵活性，平衡分子间作用力，促进前药自组装。我们推测支链脂肪醇能够有效打乱前药分子的紧密堆积，有望进一步增强前药的自组装能力。此外，支链脂肪醇的碳链长度可能会影响前药自组装纳米粒的制剂学性质、体内命运和抗肿瘤效果。目前尚无研究对比支链脂肪醇碳链的长度对前药自组装纳米粒的影响，也没有研究报道过支链脂肪醇和直链脂肪醇作为侧链对前药自组装纳米粒的影响。
肿瘤微环境与正常组织细胞的微环境具有显著差异，肿瘤细胞内产生大量的活性氧和谷胱甘肽，造成氧化还原状态失衡的肿瘤微环境。二硫键具有氧化还原双敏感的特性，可以智能响应肿瘤细胞内的高氧化还原状态并释放药物。此外，连接链的链长也会影响前药自组装纳米粒的氧化还原敏感性，进而影响前药自组装纳米粒的抗肿瘤活性。
发明内容：
本发明的目的是克服上述现有技术存在的不足，提供一种多西他赛前药抗肿瘤制剂，具体为多西他赛-支链脂肪醇小分子前药及其自组装纳米粒及其制备与应用，具体涉及二硫键桥连的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药的合成，及其含有所述的前药自组装纳米粒的构建，以及其在药物递送中的应用一种二硫键桥连的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药，并制备前药自组装纳米粒，其具有粒径较小且分布均一、载药量高、稳定性好、抗肿瘤效果好和安全性好的优点。
本发明的目的是设计和合成以二硫键为连接链的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药，制备前药自组装纳米粒，探讨支链脂肪醇和连接链的长度对前药自组装纳米粒的影响，并考察相同长度碳链的支链脂肪醇与直链脂肪醇对前药自组装纳米粒的药动学和药效学产生的影响，从而为开发肿瘤微环境智能响应型药物递送***提供新的策略和更多的选择，满足临床中对高效化疗制剂的迫切需求。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
多西他赛-支链脂肪醇小分子前药或其药学上可接受的盐，所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药结构如下通式(I)所示：
Figure BDA0003411996860000021
其中，n＝1～3；
R为饱和或不饱和的C3-C30烃基，所述R为含支链结构的烃基，所述支链为C1-C18烷基、C2-C18烯基或C2-C18炔基中的一种或多种；
优选地，R为饱和或不饱和的C3-C24烃基，所述R为含支链结构的烃基，所述支链为直链C6-C10烷基、C6-C10烯基或C6-C10炔基中的一种或多种。
优选地，R为饱和或不饱和的C10-C24烃基，所述R为含支链结构的烃基，所述支链为直链C6-C10烷基、C6-C10烯基或C6-C10炔基中的一种或多种。
优选地，R为C10-C24烷基，所述R为含支链结构的烷基，所述支链为直链C6-C10烷基。
优选地，R为饱和或不饱和的C16-C24烃基，所述R为含支链结构的烃基，所述支链为直链C6-C10烷基。
优选地，R为C16-C24烷基，所述R为含支链结构的烷基，所述支链为直链C6-C10烷基。
所述的R当为不饱和烃基时，不饱和烃基中含有的烯基、炔基或烯基与炔基数目之和为1-5个。
所述的支链脂肪醇为2-己基-辛醇、1-庚基-辛醇、2-己基-癸醇、1-丁基-十二醇、1-庚基-壬醇、1-辛基-壬醇、2-辛基-癸醇、2-庚基-十一醇、1-壬基-癸醇、2-辛基-十二醇、2-癸基-十四醇或2-十二烷基-十四醇等。
优选地，所述的支链脂肪醇为2-己基-癸醇、2-庚基-十一醇、2-辛基-十二醇、2-癸基-十四醇。
所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药中的多西他赛与支链脂肪醇通过二元酸为连接链连接，所述的二元酸为2,2'-二硫代二乙酸、3,3'-二硫代二丙酸或4,4'-二硫代二丁酸。
所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药以2,2'-二硫代二乙酸或4,4'-二硫代二丁酸作为连接链，具体的：
(1)以2,2'-二硫代二乙酸作为连接链时，支链脂肪醇小分子前药为多西他赛-2-己基-癸醇前药、多西他赛-2-庚基-十一醇前药、多西他赛-2-辛基-十二醇前药或多西他赛-2-癸基-十四醇前药；对应的前药分别命名为DTX-SS-HD、DTX-SS-HUA、DTX-SS-OD、DTX-SS-DTD；结构式如下II、III、IV和V所示；
(2)以4,4'-二硫代二丁酸作为连接链时，支链脂肪醇小分子前药为多西他赛-2-辛基-十二醇前药，对应的前药命名为γ-DTX-SS-OD，结构式如下VI所示。
本发明另外提供了两种多西他赛-直链脂肪醇小分子前药，具体为多西他赛-硬脂醇前药，以硫代二乙酸或2,2'-二硫代二乙酸为连接链，将对应的前药分别命名为DTX-S-SA、DTX-SS-SA；结构式如下VII和VIII所示。
Figure BDA0003411996860000031
(II)以2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-己基-癸醇前药(DTX-SS-HD)；
Figure BDA0003411996860000041
(III)以2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-庚基-十一醇前药(DTX-SS-HUA)；
Figure BDA0003411996860000042
(IV)以2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-辛基-十二醇前药(DTX-SS-OD)；
Figure BDA0003411996860000043
(V)以2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-癸基-十四醇前药(DTX-SS-DTD)。
Figure BDA0003411996860000044
(VII)以硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-硬脂醇前药(DTX-S-SA)；
Figure BDA0003411996860000051
(VIII)以2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-硬脂醇前药(DTX-SS-SA)；
Figure BDA0003411996860000052
(VI)以4,4'-二硫代二丁酸作为连接链的多西他赛-2-辛基-十二醇前药(γ-DTX-SS-OD)；
多西他赛-支链脂肪醇小分子前药的合成方法，包括如下步骤：
步骤1：将二元酸成酸酐后，与支链脂肪醇成酯，得到中间产物支链脂肪醇-二元酸单边酯，其中，按摩尔比，支链脂肪醇：二元酸酐＝1:(1.5-5)；
步骤2：支链脂肪醇-二元酸单边酯与多西他赛发生成酯反应，得到终产物多西他赛-支链脂肪醇小分子前药，其中，按摩尔比，支链脂肪醇-二元酸单边酯；多西他赛＝1:(0.5-10)，反应方程式如下：
Figure BDA0003411996860000053
其中，n＝1～3；
R为饱和或不饱和的C3-C30烃基，所述R为含支链结构的烃基，所述支链为C1-C18烷基、C2-C18烯基或C2-C18炔基中的一种或多种。
多西他赛-支链脂肪醇小分子前药的合成方法，具体过程为：
(1)将二元酸溶于乙酸酐中搅拌2-4小时，使二元酸成酸酐，反应完毕后，加入甲苯，旋蒸除去甲苯和乙酸酐，获得二元酸酐；
(2)取支链脂肪醇和4-二甲氨基吡啶(DMAP)，与步骤(1)所得的二元酸酐一并溶于二氯甲烷中，室温条件下搅拌12-18小时，通过柱层析分离，得到中间产物支链脂肪醇-二元酸单边酯；
(3)取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI)、1-羟基苯并***(HOBt)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)，与支链脂肪醇-二元酸单边酯一并溶于无水二氯甲烷中，冰浴搅拌2-4小时后，加入多西他赛，室温条件下搅拌24-48小时，再经制备型液相分离纯化得终产物，上述反应全程在氮气保护下进行。
所述的步骤(1)中，二元酸为2,2'-二硫代二乙酸、3,3'-二硫代二丙酸、4,4'-二硫代二丁酸。
所述的步骤(2)中，支链脂肪醇为C3-C30饱和或不饱和脂肪醇，所述的支链为C1-C18烷基、C2-C18烯基或C2-C18炔基中的一种或多种。
所述的步骤(1)中，按比例，二元酸:乙酸酐＝1:(1-10)，单位为mmol:ml。
所述的步骤(1)中，优选地，按比例，二元酸:乙酸酐＝1:(1-2)。
所述的步骤(2)中，按摩尔比，4-二甲氨基吡啶(DMAP)：支链脂肪醇：二元酸酐＝1:(1-10):(5-15)。
所述的步骤(2)中，优选地，按摩尔比，4-二甲氨基吡啶(DMAP):支链脂肪醇:二元酸酐＝1:(2-5):(10-15)。
所述的步骤(3)中，按摩尔比，中间产物支链脂肪醇-二元酸单边酯:1-羟基苯并***(HOBt):1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI)：4-二甲氨基吡啶(DMAP):多西他赛＝1:(1-10):(2-6):(0.2-5):(0.5-10)。
所述的步骤(3)中，优选地，按摩尔比，中间产物支链脂肪醇-二元酸单边酯:1-羟基苯并***(HOBt):1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI)：4-二甲氨基吡啶(DMAP):多西他赛＝1:(1-2):(2-4):(0.5-2):(0.8-2)。
多西他赛-支链脂肪醇小分子前药的自组装纳米粒，所述的前药自组装纳米为非PEG化的小分子前药自组装纳米粒、PEG修饰/主动靶向基团修饰的小分子前药自组装纳米粒或包载荧光物质/疏水性药物的小分子前药自组装纳米粒。
所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药自组装纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
当为非PEG化的小分子前药自组装纳米粒时，制备方法步骤如下：
(1)将一定量的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药溶解到适量的乙醇、四氢呋喃或丙酮中，搅拌条件下将该溶液缓缓滴加到水中，多西他赛-支链脂肪醇小分子前药自发形成均匀的纳米粒；
(2)采用减压旋转蒸发法除去制剂中的有机溶剂，得到不含任何有机溶剂的纳米胶体溶液，即为非PEG化的小分子前药自组装纳米粒。
当为PEG修饰/主动靶向基团修饰的小分子前药自组装纳米粒，制备方法如下：
(1)将一定量的修饰剂和多西他赛-支链脂肪醇小分子前药溶解到适量的乙醇、四氢呋喃或丙酮中，搅拌条件下将该溶液缓缓滴加到水中，多西他赛-支链脂肪醇小分子前药自发形成均匀的纳米粒，其中，所述的修饰剂为PEG修饰剂或主动靶向修饰剂，所述的PEG修饰剂为DSPE-PEG、TPGS、PLGA-PEG、PE-PEG或DSPE-PEG-FA等两亲性聚合物或靶向基团，所述的主动靶向修饰剂为抗体、糖残基、激素、受体或配体；按质量比，多西他赛-支链脂肪醇前药：修饰剂＝(20～1):1；
(2)采用减压旋转蒸发法除去制剂中的有机溶剂，得到不含任何有机溶剂的纳米胶体溶液，即为PEG修饰/主动靶向基团修饰的小分子前药自组装纳米粒。
当为包载疏水性荧光物质或药物的小分子前药自组装纳米粒时，制备方法如下：
(1)将一定量的PEG修饰剂、疏水性荧光物质或药物与多西他赛-支链脂肪醇小分子前药溶解到适量的乙醇、四氢呋喃或丙酮中，搅拌条件下将该溶液缓缓滴加到水中，多西他赛-支链脂肪醇小分子前药自发形成均匀的纳米粒；按质量比，多西他赛-支链脂肪醇小分子前药:PEG修饰剂:疏水性荧光物质或药物＝(20-1):1:(1-5)；
(2)采用减压旋转蒸发法除去制剂中的有机溶剂，得到不含有机溶剂的纳米胶体溶液，即为包载疏水性荧光物质或药物的小分子前药自组装纳米粒。
所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药或自组装纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药或自组装纳米粒在制备注射给药、口服给药或局部给药***中的应用。
所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药或自组装纳米粒在制备提高疗效、降低毒性药物传递***中的应用。
本发明的有益效果：
(1)设计合成了含有不同脂肪醇侧链与不同连接链修饰的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药，并制备了粒径较小、粒度分布均一的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药自组装纳米粒，合成方法与制备方法简单易行；
(2)考察了四种长度支链脂肪醇侧链、脂肪醇侧链的结构(支链或直链)以及不同长度的连接链对前药自组装纳米粒制剂学性质、抗肿瘤活性、安全性等方面的影响。
结果表明：多西他赛-脂肪醇小分子前药自组装纳米粒能有效提高多西他赛的疗效，降低其毒副作用；不同结构和长度的侧链和连接链会对多西他赛前药自组装纳米粒的制剂学性质、体内命运、抗肿瘤活性及安全性产生显著影响。以2-辛基-十二醇作为侧链时，前药自组装纳米粒的安全性最好；多西他赛-支链脂肪醇小分子前药自组装纳米粒较含有相同碳数的多西他赛-直链脂肪醇小分子前药自组装纳米粒抗肿瘤效果更优、安全性更好。本发明为开发高效-低毒化疗制剂提供了新的策略与选择。
附图说明：
图1为本发明实施例8的PEG修饰的前药自组装纳米粒的血药浓度-时间曲线图(前药)；
图2为本发明实施例8的PEG修饰的前药自组装纳米粒的血药浓度-时间曲线图(母药)；
图3为本发明实施例8的PEG修饰的前药自组装纳米粒的血药浓度-时间曲线图(总和)；
图4为本发明实施例9的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中肿瘤体积变化图；
ns：无显著性差异(双尾t检验)**：P<0.01(双尾t检验)***：P<0.001(双尾t检验)
图5为本发明实施例9的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中小鼠体重变化图；
****：P<0.0001(双尾t检验)
图6为本发明实施例9的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中肿瘤负荷图；
ns：无显著性差异(双尾t检验)**：P<0.01(双尾t检验)
***：P<0.001(双尾t检验)****：P<0.0001(双尾t检验)
图7为本发明实施例10的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中肿瘤体积变化图；
*：P<0.05(双尾t检验)***：P<0.001(双尾t检验)
图8为本发明实施例10的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中小鼠体重变化图；
***：P<0.001(双尾t检验)
图9为本发明实施例10的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中肿瘤负荷图；
ns：无显著性差异(双尾t检验)***：P<0.001(双尾t检验)
图10为本发明实施例10的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中血液常规指标图；
ns：无显著性差异(双尾t检验)*：P<0.05(双尾t检验)
**：P<0.01(双尾t检验)
图11为本发明实施例10的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中丙氨酸转氨酶指标图；
ns：无显著性差异(双尾t检验)
图12为本发明实施例10的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中天冬氨酸转氨酶指标图；
ns：无显著性差异(双尾t检验)*：P<0.05(双尾t检验)
**：P<0.01(双尾t检验)
图13为本发明实施例11的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中肿瘤体积变化图；
ns：无显著性差异(双尾t检验)*：P<0.05(双尾t检验)
图14为本发明实施例11的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中小鼠体重变化图；
***：P<0.001(双尾t检验)
图15为本发明实施例11的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验中肿瘤负荷图；
ns：无显著性差异(双尾t检验)**：P<0.01(双尾t检验)
***：P<0.001(双尾t检验)
图16为本发明实施例13的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的较长期毒性实验中的小鼠体重变化图；
****：P<0.0001(双尾t检验)
图17为本发明实施例13的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的较长期毒性实验中的小鼠生存曲线图。
具体实施方式：
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1：2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-己基-癸醇前药(DTX-SS-HD)的合成
将适量的2,2'-二硫代二乙酸(2mmol)溶于4mL乙酸酐中，置于25mL茄形瓶中，溶解完全后25℃磁力搅拌2小时后转移到100mL茄形瓶中，加入三倍量甲苯，减压蒸馏除去甲苯与乙酸酐，加入适量二氯甲烷溶解所形成的二硫代二乙酸酐，然后加入溶于二氯甲烷中的2-己基-癸醇(1mmol)，并缓缓滴加二氯甲烷溶解的4-二甲氨基吡啶(DMAP,0.2mmol)溶液，25℃磁力搅拌12h，得到中间产物2-己基-癸醇-二硫代二乙酸单边酯，柱层析法采用环己烷-丙酮洗脱体系进行分离提纯；得到纯化的上一步产物(1mmol)后，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI,2mmol)、1-羟基苯并***(HOBt,1mmol)、4-二甲氨基吡啶(DMAP,0.5mmol)的二氯甲烷溶液，0℃冰浴活化2h，然后加入溶于二氯甲烷的多西他赛(0.8mmol)，25℃搅拌48h。反应结束后采用制备液相对产物进行分离，制得2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-己基-癸醇前药(DTX-SS-HD)。
采用质谱法以及核磁共振氢谱法来确定实施例1中前药的结构，波谱解析结果如下：
1H NMR(600MHz)：δ8.12(d,2H,Ar-H),7.62(t,1H,Ar-H),7.51(t,2H,Ar-H),7.40(m,4H,Ar-H),7.35(m,1H,Ar-H),5.68(d,1H,2-H),5.37(d,1H,2'-H),4.95～4.95(d,1H,5-H),4.33(dd,1H,7-H),4.05～4.20(m,2H,CH 2OCO),3.63(d,1H,3-H),3.54～3.61(m,4H,CH 2SSCH 2),2.59(m,2H,14-H),2.44(s,3H,COCH 3),1.83(s,1H,(CH2)6CH(CH2)8),1.75(s,3H,18-CH3),1.58(s,3H,19-CH3),1.47(s,9H,C(CH 3)3),1.23～1.33(m,28H,CH3(CH 2)6CH,CH3(CH 2)8CH),1.12(s,6H,16-CH3,17-CH3),0.88(t,6H,CH 3-(CH2)8-,CH 3-(CH2)6-).
MS(ESI)m/z for C63H88NO17S2[M-H]-＝1193.7553.
实施例2：2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-庚基-十一醇前药(DTX-SS-HUA)的合成
将适量的2,2'-二硫代二乙酸(2mmol)溶于4mL乙酸酐中，置于25mL茄形瓶中，溶解完全后25℃磁力搅拌2小时后转移到100mL茄形瓶中，加入三倍量甲苯，减压蒸馏除去甲苯与乙酸酐，加入适量二氯甲烷溶解所形成的二硫代二乙酸酐，然后加入溶于二氯甲烷中的2-庚基-十一醇(1mmol)，并缓缓滴加二氯甲烷溶解的4-二甲氨基吡啶(DMAP,0.2mmol)溶液，25℃磁力搅拌12h，得到中间产物2-庚基-十一醇-二硫代二乙酸单边酯，柱层析法采用环己烷-丙酮洗脱体系进行分离提纯；得到纯化的上一步产物后(1mmol)加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI,2mmol)、1-羟基苯并***(HOBt,1mmol)、4-二甲氨基吡啶(DMAP0.5 mmol)的二氯甲烷溶液，0℃冰浴活化2h，然后加入溶于二氯甲烷的多西他赛(0.8mmol)，25℃搅拌48h。反应结束后采用制备液相对产物进行分离，制得2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-庚基-十一醇前药(DTX-SS-HUA)。
采用质谱法以及核磁共振氢谱法来确定实施例2中前药的结构，波谱解析结果如下：
1H NMR(600MHz)：δ8.11(d,2H,Ar-H),7.62(t,1H,Ar-H),7.53(t,2H,Ar-H),7.51(m,4H,Ar-H),7.35(m,1H,Ar-H),5.70(d,1H,2-H),5.21(d,1H,2'-H),4.97(d,1H,5-H),4.33(dd,1H,7-H),4.05～4.20(m,2H,CH 2OCO),3.63(d,1H,3-H),3.54～3.61(m,4H,CH 2SSCH 2),2.59(m,2H,14-H),2.44(s,3H,COCH 3),1.83(s,1H,(CH2)5CH(CH2)7),1.75(s,3H,18-CH3),1.58(s,3H,19-CH3),1.47(s,9H,C(CH 3)3),1.23～1.33(m,24H,CH3(CH 2)5CH,CH3(CH 2)7CH),1.12(s,6H,16-CH3,17-CH3),0.87(t,6H,CH 3-(CH2)5-,CH 3-(CH2)7-).
MS(ESI)m/z for C65H93NO17S2Cl[M+Cl]-＝1258.5546.
实施例3：2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-辛基-十二醇前药(DTX-SS-OD)的合成
将适量的2,2'-二硫代二乙酸(2mmol)溶于4ml乙酸酐后置于25mL茄形瓶中，25℃磁力搅拌2小时后转移到100mL茄形瓶中，加入三倍量甲苯，减压蒸馏除去甲苯与乙酸酐，加入适量二氯甲烷溶解所形成的二硫代二乙酸酐，然后加入溶于二氯甲烷中的2-辛基-十二醇(1mmol)，并缓缓滴加4-二甲氨基吡啶(DMAP,0.2mmol)的二氯甲烷溶液，25℃磁力搅拌12h，得到中间产物2-辛基-十二醇-二硫代二乙酸单边酯，柱层析法采用环己烷-丙酮洗脱体系进行分离提纯；得到纯化的上一步产物后(1mmol)加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI,2mmol)、1-羟基苯并***(HOBt,1mmol)、4-二甲氨基吡啶(DMAP,0.5mmol)的二氯甲烷溶液，0℃冰浴活化2h，然后加入溶于二氯甲烷的多西他赛(0.8mmol)，25℃搅拌48h。反应结束后采用制备液相对产物进行分离，制得2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-辛基-十二醇前药(DTX-SS-OD)。
采用质谱法以及核磁共振氢谱法来确定实施例3中前药的结构，波谱解析结果如下：
1H NMR(600MHz)：δ8.12(d,2H,Ar-H),7.62(t,1H,Ar-H),7.52(t,2H,Ar-H),7.39(m,4H,Ar-H),7.35(m,1H,Ar-H),5.70(d,1H,2-H),5.21(d,1H,2'-H),4.97(d,1H,5-H),4.33(dd,1H,7-H),4.05～4.20(m,2H,CH 2OCO),3.63(d,1H,3-H),3.54～3.61(m,4H,CH 2SSCH 2),2.59(m,2H,14-H),2.44(s,3H,COCH 3),1.83(s,1H,(CH2)7CH(CH2)9),1.73(s,3H,18-CH3),1.66(s,3H,19-CH3),1.58(s,9H,-C(CH 3)3),1.23～1.33(m,32H,CH3(CH 2)7CH,CH3(CH 2)9CH),1.12(s,6H,16-CH3,17-CH3),0.88(t,6H,CH 3-(CH2)7-,CH 3-(CH2)9-).
MS(ESI)m/z for C67H97NO17S2K[M+K]+＝1290.4748.
实施例4：2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-癸基-十四醇前药(DTX-SS-DTD)的合成
将适量的2,2'-二硫代二乙酸(2mmol)溶于4mL乙酸酐中，置于25mL茄形瓶中，溶解完全后25℃磁力搅拌2小时后转移到100mL茄形瓶中，加入三倍量甲苯，减压蒸馏除去甲苯与乙酸酐，加入适量二氯甲烷溶解所形成的二硫代二乙酸酐，然后加入溶于二氯甲烷中的2-癸基-十四醇(1mmol)，并缓缓滴加二氯甲烷溶解的4-二甲氨基吡啶(DMAP,0.2mmol)溶液，25℃磁力搅拌12h，得到中间产物2-癸基-十四醇-二硫代二乙酸单边酯，柱层析法采用环己烷-丙酮洗脱体系进行分离提纯；得到纯化的上一步产物后(1mmol)加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI,2mmol)、1-羟基苯并***(HOBt,1mmol)、4-二甲氨基吡啶(DMAP,0.5mmol)的二氯甲烷溶液，0℃冰浴活化2h，然后加入溶于二氯甲烷的多西他赛，25℃搅拌48h。反应结束后采用制备液相对产物进行分离，制得2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-癸基-十四醇前药(DTX-SS-DTD)。
采用质谱法以及核磁共振氢谱法来确定实施例4中前药的结构，波谱解析结果如下：
1H NMR(600MHz)：δ8.12(d,2H,Ar-H),7.62(t,1H,Ar-H),7.52(t,2H,Ar-H),7.39(m,4H,Ar-H),7.35(m,1H,Ar-H),5.77(d,1H,2-H),5.21(d,1H,2'-H),4.97(d,1H,5-H),4.33(dd,1H,7-H),4.05～4.20(m,2H,CH 2OCO),3.63(d,1H,3-H),3.54～3.61(m,4H,CH 2SSCH 2),2.59(m,2H,14-H),2.44(s,3H,COCH 3),1.83(s,1H,(CH2)9CH(CH2)11),1.73(s,3H,18-CH3),1.66(s,3H,19-CH3),1.58(s,9H,-C(CH 3)3),1.23～1.33(m,40H,CH3(CH 2)9CH,CH3(CH 2)11CH),1.12(s,6H,16-CH3,17-CH3),0.87(t,6H,CH 3-(CH2)9-,CH 3-(CH2)11-).
MS(ESI)m/z for C71H106NO17S2[M+H]+＝1307.8946.
实施例5：4,4'-二硫代二丁酸作为连接链的多西他赛-2-辛基-十二醇前药(γ-DTX-SS-OD)的合成
将适量的4,4'-二硫代二丁酸(2mmol)溶于4mL乙酸酐中，置于25mL茄形瓶中，溶解完全后25℃磁力搅拌2小时后转移到100mL茄形瓶中，加入三倍量甲苯，减压蒸馏除去甲苯与乙酸酐，加入适量二氯甲烷溶解所形成的二硫代二丁酸酐，然后加入溶于二氯甲烷中的2-辛基-十二醇(1mmol)，并缓缓滴加二氯甲烷溶解的4-二甲氨基吡啶(DMAP,0.2mmol)溶液，25℃磁力搅拌12h，得到中间产物2-辛基-十二醇-二硫代二丁酸单边酯，柱层析法采用环己烷-丙酮洗脱体系进行分离提纯；得到纯化的上一步产物后(1mmol)加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI,2mmol)、1-羟基苯并***(HOBt,1mmol)、4-二甲氨基吡啶(DMAP,0.5mmol)的二氯甲烷溶液，0℃冰浴活化2h，然后加入溶于二氯甲烷的多西他赛(0.8mmol)，25℃搅拌48h。反应结束后采用制备液相对产物进行分离，制得4,4'-二硫代二丁酸作为连接链的多西他赛-2-辛基-十二醇前药(γ-DTX-SS-OD)。
采用质谱法以及核磁共振氢谱法来确定实施例5中前药的结构，波谱解析结果如下：
1H NMR(600MHz)：δ8.12(d,2H,Ar-H),7.62(t,1H,Ar-H),7.52(t,2H,Ar-H),7.39(m,4H,Ar-H),7.35(m,1H,Ar-H),5.70(d,1H,2-H),5.21(d,1H,2'-H),4.97(d,1H,5-H),4.33(dd,1H,7-H),4.05～4.20(m,2H,CH 2OCO),3.63(d,1H,3-H),3.54～3.61(m,4H,CH 2SSCH 2),2.59(m,2H,14-H),2.451～2.518(m,4H,CH2 CH2CH2SSCH2CH2CH 2),2.44(s,3H,COCH 3),1.925(m,4H,CH2CH 2CH2SSCH2CH 2CH2)，1.83(s,1H,(CH2)7CH(CH2)9),1.73(s,3H,18-CH3),1.66(s,3H,19-CH3),1.58(s,9H,-C(CH 3)3),1.23～1.33(m,32H,CH3(CH 2)7CH,CH3(CH 2)9CH),1.12(s,6H,16-CH3,17-CH3),0.88(t,6H,CH 3-(CH2)7-,CH 3-(CH2)9-).
MS(ESI)m/z for C71H106NO17S2[M+Na]+＝1331.5622.
实施例6：DSPE-PEG2k修饰的多西他赛-脂肪醇小分子前药自组装纳米粒的制备
精密称取DSPE-PEG2k 2mg和实施例1-5制备的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药和采用现有技术制备的2种多西他赛-直链脂肪醇小分子前药8mg，用1mL乙醇将其溶解，搅拌下，将该乙醇溶液缓缓滴加到4mL去离子水中，自发形成均匀的纳米粒，通过减压蒸馏除去乙醇，得到不含乙醇的纳米制剂，即为DSPE-PEG2k修饰的多西他赛-脂肪醇小分子前药自组装纳米粒：具体分别为DTX-SS-HD纳米粒、DTX-SS-HUA纳米粒、DTX-SS-OD纳米粒、DTX-SS-DTD纳米粒、γ-DTX-SS-OD纳米粒、DTX-S-SA纳米粒、DTX-SS-SA纳米粒。
如表1所示，前药纳米粒的粒径为75nm左右、粒径分布PDI<0.2，表面电荷-20mV左右，载药量在50％左右。
表1.PEG修饰的前药自组装纳米粒的粒径、粒径分布、表面电荷和载药量
Figure BDA0003411996860000131
实施例7：PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的细胞毒性
采用MTT法考察PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒对小鼠乳腺癌(4T1)细胞、人肺泡腺癌基底上皮细胞(A549)细胞和人肝(L02)细胞的细胞毒性。将状态良好的细胞消化，用培养液稀释至1000cells/mL细胞密度，吹匀后于96孔板中每孔加入细胞悬液200μL，置培养箱中孵育24h使其贴壁。待细胞贴壁后分别加多西他赛以及实施例6制备的DTX-S-SA、DTX-SS-SA、DTX-SS-HUA前药纳米粒。
小鼠乳腺癌(4T1)细胞和人肝(L02)细胞实验中药物溶液与纳米粒制剂的配制和稀释均用1640培养液，人肺泡腺癌基底上皮细胞(A549)细胞实验中药物溶液与纳米粒制剂的配制和稀释均用DMEM培养液，并用0.22μm滤膜无菌过滤。受试溶液每孔加入200μL，每个浓度3个平行孔。
对照组，即不加待测药液，单一补加200μL培养液，置培养箱中和细胞共同孵育。于加药后48h，将96孔板取出，每孔加入5mg/mL MTT溶液35μL，置培养箱中孵育4h后甩板，将96孔板倒扣于滤纸上充分吸干残留液体后，每孔加入200μL DMSO于振荡器上振荡10min以溶解蓝紫色结晶物。设定A1孔(只含有200μL DMSO)为调零孔。使用酶标仪在490nm处测定各孔调零后的吸光度值。
由于前药纳米粒释放多西他赛需要一定时间，多西他赛药效发挥受到一定限制，所以与多西他赛组相比，前药纳米粒的细胞毒性要低。前药纳米粒的细胞毒性大小顺序为DTX-SS-SA纳米粒>DTX-SS-HUA纳米粒>DTX-S-SA纳米粒。考察了多西他赛溶液剂和前药纳米粒对正常细胞和肿瘤细胞的选择性。如表2所示，与多西他赛溶液剂相比，前药纳米粒对L02细胞的毒性明显降低。选择性指数(SI)大于1时，说明药物对肿瘤细胞的毒性大于对正常细胞的毒性，数值越大说明毒性区别越明显，前药纳米粒可以分辨肿瘤细胞和正常细胞，选择性在肿瘤细胞内释放活性母药，显著降低了多西他赛的毒性。其中，DTX-SS-HUA纳米粒的选择性指数最高，细胞选择性最好。
表2.多西他赛和前药纳米粒对3种细胞的半抑制浓度(IC50 nmol/L)和选择性指数(SI)
Figure BDA0003411996860000141
实施例8：PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的药代动力学研究
取20只健康雄性大鼠，体重180-220g，随机分为4组，给药前禁食12h，自由饮水。4组分别尾静脉注射多西他赛溶液剂和实施例6中制备的PEG化DTX-S-SA、DTX-SS-SA、DTX-SS-HUA前药自组装纳米粒。其剂量为4mg/kg(以多西他赛计)。于规定的时间点眼眶取血，离心获得血浆。通过液相色谱-质谱联用仪测定血浆中的药物浓度。
实验结果如图1～3所示。图1、图2、图3分别代表血液中各前药与释放出母药多西他赛以及它们的总和的血药浓度曲线，从图中可以看出多西他赛溶液剂循环时间很短，给药后在体内迅速代谢清除。相比之下，PEG化的小分子前药自组装纳米粒循环时间明显延长，生物利用度明显提高，药动学参数提升明显。可见不同侧链对于前药纳米粒的药动学行为有显著影响。相比于DTX-SS-SA纳米粒和DTX-S-SA纳米粒，DTX-SS-HUA纳米粒具有更大的AUC，体内循环时间增长，有助于纳米粒在肿瘤部位的蓄积。此外，DTX-SS-HUA纳米粒在血液循环中最稳定，只释放出少量的多西他赛。
实施例9：PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验
将小鼠乳腺癌细胞悬液(4T1,5x106cells/100μL)接种于雌性Balb/c小鼠背侧皮下。待肿瘤体积生长至100mm3左右时，将荷瘤小鼠随机分为8组，每组5只：空白对照组(Saline)、多西他赛溶液剂2.5mg/kg组、多西他赛溶液剂10mg/kg组、多西他赛溶液剂20mg/kg组、DTX-S-SA纳米粒2.5mg/kg组(以多西他赛计)、DTX-SS-SA纳米粒2.5mg/kg组(以多西他赛计)、DTX-SS-HUA纳米粒2.5mg/kg组、DTX-SS-HUA纳米粒10mg/kg组(以多西他赛计)。给药所用的纳米粒为实施例6中制备的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒。每隔1天给药1次，连续给药5次。给药后，每天检测小鼠的存活状态和体重变化情况，测量肿瘤体积。最后一次给药后一天将小鼠处死，获取器官和肿瘤，进行进一步分析评价。
实验结果如图4～图6所示。从图4肿瘤体积变化曲线来看，与生理盐水组相比，多西他赛溶液剂和前药纳米粒组均显示出较强的抗肿瘤活性，肿瘤体积明显减小。荷瘤率如图6所示，给药剂量为2.5mg/kg(以多西他赛计算)的前药自组装纳米粒组均显示出比同剂量多西他赛溶液剂组更强的抗肿瘤活性，荷瘤率大小顺序为多西他赛溶液剂组>DTX-S-SA纳米粒组>DTX-SS-SA纳米粒组>DTX-SS-HUA纳米粒组，其中以DTX-SS-HUA纳米粒组效果最好，荷瘤率最低。当剂量升高至10mg/kg时，DTX-SS-HUA纳米粒组的抗肿瘤活性也明显强于同等剂量的溶液剂组，荷瘤率(图6)更低。此外，如图5所示，前药纳米粒组对于多西他赛的减毒效果也非常明显，多西他赛溶液剂组由于毒性较大，中剂量(10mg/kg)和高剂量组(20mg/kg)在给药后体重严重下降，而DTX-SS-HUA前药纳米粒两个剂量组在5次给药结束后体重几乎保持不变，具有良好的安全性。
实施例10：PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验
将小鼠乳腺癌细胞悬液(4T1,5x106cells/100μL)接种于雌性Balb/c小鼠背侧皮下。待肿瘤体积生长至100mm3左右时，将荷瘤小鼠随机分为7组，每组5只：空白对照组(Saline)、DTX-SS-SA纳米粒10mg/kg组、20mg/kg组、30mg/kg组(以多西他赛计)；DTX-SS-HUA纳米粒10mg/kg组、20mg/kg组、30mg/kg组(以多西他赛计)。给药所用的纳米粒为实施例6中制备的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒。每隔1天给药1次，连续给药5次。给药后，每天检测小鼠的存活状态和体重变化情况，测量肿瘤体积。最后一次给药后一天将小鼠处死，获取器官和肿瘤，进行进一步分析评价。
实验结果如图7～图12所示，从图7肿瘤体积曲线与图9荷瘤率情况来看，与生理盐水组相比，前药纳米粒组均显示出较强的抗肿瘤活性，具有更小的肿瘤体积和更低的荷瘤率。但是相同剂量下，两种纳米粒组的肿瘤体积与荷瘤率组间无显著性差异，且如图8所示，在30mg/kg剂量下均出现了体重下降的现象。但是，如图10所示，通过血常规评价判断，在30mg/kg的剂量下，DTX-SS-SA组的白细胞数量下降更为明显，表明出现了一定程度的免疫抑制，且肝功能检测结果(图11，图12)也显示其丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶相较于DTX-SS-HUA组更为异常，已超出或达到正常范围临界值，出现了明显的肝损伤，说明DTX-SS-HUA前药自组装纳米粒具有更好的安全性。
实施例11：PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的在体抗肿瘤实验
将小鼠乳腺癌细胞悬液(4T1,5x106cells/100μL)接种于雌性Balb/c小鼠背侧皮下。待肿瘤体积生长至100mm3左右时，将荷瘤小鼠随机分为6组，每组5只：空白对照组(Saline)、多西他赛溶液剂2.5mg/kg组、DTX-SS-HD纳米粒2.5mg/kg组(以多西他赛计)、DTX-SS-HUA纳米粒2.5mg/kg组(以多西他赛计)、DTX-SS-OD纳米粒2.5mg/kg组(以多西他赛计)、DTX-SS-DTD纳米粒2.5mg/kg组(以多西他赛计算)。给药所用的纳米粒为实施例6中制备的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒。每隔1天给药1次，连续给药5次。给药后，每天检测小鼠的存活状态和体重变化情况，测量肿瘤体积。最后一次给药后一天将小鼠处死，获取器官和肿瘤，进行进一步分析评价。
实验结果如图13～图15所示，与生理盐水组相比，多西他赛溶液剂和前药纳米粒组均显示出较强的抗肿瘤活性。如图13所示，同剂量下各给药组在肿瘤体积上无显著性差异，但均小于生理盐水组。通过荷瘤率(图15)来看，前药自组装纳米粒组均拥有比同剂量多西他赛溶液剂组更低荷瘤率，但不同纳米制剂组之间并无显著性差异。此外，前药纳米粒组对于多西他赛的减毒效果也非常明显，如图14所示，多西他赛溶液剂组由于毒性较大，在给药后体重严重下降，而前药纳米粒组各组在5次给药结束后体重几乎保持不变，具有较好的安全性。
实施例12：PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的急性毒性实验
取24只健康雌性Balb/c小鼠，随机分为8组，每组三只：多西他赛溶液剂组(50mg/kg)、多西他赛溶液剂组(60mg/kg)，DTX-SS-SA纳米粒组、DTX-SS-HD纳米粒组、DTX-SS-HUA纳米粒组、DTX-SS-OD纳米粒组、DTX-SS-DTD纳米粒组、γ-DTX-SS-OD纳米粒组。给药所用的纳米粒为实施例6中制备的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒。溶液剂组采用一次性给药方式，纳米粒组采用每次给药100mg/kg(以多西他赛计),每15min给药一次的方式，累计剂量增加至500mg/kg(以多西他赛计)时，给药间隔延长为4h。给药后记录小鼠死亡情况。
结果如表3所示，可以看出所有纳米制剂安全性较溶液剂均有大幅度改善。其中，碳链长度相同的情况下，DTX-SS-HUA纳米粒组安全性要优于DTX-SS-SA组，即支链脂肪醇安全性要优于直链脂肪醇。在不同碳数的支链脂肪醇相比较时，碳链数较长的DTX-SS-OD纳米粒组、DTX-SS-DTD纳米粒组与γ-DTX-SS-OD纳米粒组安全性要优于DTX-SS-HD纳米粒组与DTX-SS-HUA纳米粒组，具有更高的耐受剂量和致死剂量。
表3.各制剂组急性毒性实验结果统计
Figure BDA0003411996860000171
实施例13：PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒的较长期毒性实验
取36只健康雌性Balb/c小鼠，随机分为6组，每组6只：多西他赛溶液剂组(30mg/kg)、多西他赛溶液剂组(45mg/kg)，DTX-SS-OD纳米粒组(30mg/kg，以多西他赛计)、DTX-SS-OD纳米粒组(45mg/kg，以多西他赛计)、DTX-SS-DTD纳米粒组(30mg/kg，以多西他赛计)、DTX-SS-DTD纳米粒组(45mg/kg，以多西他赛计)。给药所用的纳米粒为实施例6中制备的PEG修饰的小分子前药自组装纳米粒。每4天给药一次，连续给药3次，每天记录小鼠体重变化与死亡情况。
实验结果如图16～17所示。给药剂量为30mg/kg与45mg/kg的多西他赛溶液剂组分别在给药第9天与第11天全部死亡(图17)。给药剂量为30mg/kg时，DTX-SS-OD纳米粒组未出现死亡情况，且体重正常，DTX-SS-DTD纳米粒组虽然也未有死亡，但已经出现了明显的体重下降(图16)。当剂量为45mg/kg时，DTX-SS-OD纳米粒组依旧未出现死亡现象，而DTX-SS-DTD纳米粒组在给药第11天已经死亡4只(图17)。由此可见，虽然给药剂量为30mg/kg时，DTX-SS-DTD纳米粒组出现了明显的体重下降；当剂量为45mg/kg时，DTX-SS-DTD纳米粒组在给药第11天死亡4只，但其安全性均优于相同剂量的多西他赛溶液剂组。综上，在所述的前药纳米粒中，DTX-SS-OD前药纳米粒拥有更好的安全性。

Claims (10)

1.多西他赛-支链脂肪醇前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的多西他赛-支链脂肪醇前药结构如下通式(I)所示：
Figure FDA0003411996850000011
其中，n＝1～3；
R为饱和或不饱和的C3-C30烃基，所述R为含支链结构的烃基，所述支链为C1-C18烷基、C2-C18烯基或C2-C18炔基中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的多西他赛-支链脂肪醇前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，当所述的R为不饱和烃基时，不饱和烃基中含有的烯基、炔基或烯基与炔基数目之和为1-5个。
3.根据权利要求1所述的多西他赛-支链脂肪醇前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的支链脂肪醇为2-己基-辛醇、1-庚基-辛醇、2-己基-癸醇、1-丁基-十二醇、1-庚基-壬醇、1-辛基-壬醇、2-辛基-癸醇、2-庚基-十一醇、1-壬基-癸醇、2-辛基-十二醇、2-癸基-十四醇或2-十二烷基-十四醇。
4.根据权利要求3所述的多西他赛-支链脂肪醇前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的支链脂肪醇为2-己基-癸醇、2-庚基-十一醇、2-辛基-十二醇、2-癸基-十四醇。
5.根据权利要求1所述的多西他赛-支链脂肪醇前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药中的多西他赛与支链脂肪醇通过二元酸为连接链连接，所述的二元酸为2,2'-二硫代二乙酸、3,3'-二硫代二丙酸或4,4'-二硫代二丁酸。
6.根据权利要求1所述的多西他赛-支链脂肪醇前药或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的多西他赛-支链脂肪醇前药或其药学上可接受的盐为如下结构的多西他赛-支链脂肪醇前药或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003411996850000021
以2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-己基-癸醇前药(DTX-SS-HD)；
Figure FDA0003411996850000022
以2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-庚基-十一醇前药(DTX-SS-HUA)；
Figure FDA0003411996850000023
以2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-辛基-十二醇前药(DTX-SS-OD)；
Figure FDA0003411996850000031
以2,2'-二硫代二乙酸作为连接链的多西他赛-2-癸基-十四醇前药(DTX-SS-DTD)；
Figure FDA0003411996850000032
以4,4'-二硫代二丁酸作为连接链的多西他赛-2-辛基-十二醇前药(γ-DTX-SS-OD)。
7.权利要求1所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：将二元酸成酸酐后，与支链脂肪醇成酯，得到中间产物支链脂肪醇-二元酸单边酯，其中，按摩尔比，支链脂肪醇：二元酸酐＝1:(1.5-5)；
步骤2：支链脂肪醇-二元酸单边酯与多西他赛发生成酯反应，得到终产物多西他赛-支链脂肪醇小分子前药，其中，按摩尔比，支链脂肪醇-二元酸单边酯；多西他赛＝1:(0.5-10)，反应方程式如下：
Figure FDA0003411996850000041
其中，n、R如权利要求1所述。
8.权利要求1所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药的自组装纳米粒，其特征在于，所述的前药自组装纳米为非PEG化的小分子前药自组装纳米粒、PEG修饰/主动靶向基团修饰的小分子前药自组装纳米粒或包载荧光物质/疏水性药物的小分子前药自组装纳米粒。
9.权利要求8所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药的自组装纳米粒的制备方法，其特征在于，所述的多西他赛-支链脂肪醇小分子前药自组装纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
当为非PEG化的小分子前药自组装纳米粒时，制备方法步骤如下：
(1)将多西他赛-支链脂肪醇小分子前药溶解到适量的乙醇、四氢呋喃或丙酮中，搅拌条件下将该溶液缓缓滴加到水中，多西他赛-支链脂肪醇小分子前药自发形成均匀的纳米粒；
(2)采用减压旋转蒸发法除去制剂中的有机溶剂，得到不含任何有机溶剂的纳米胶体溶液，即为非PEG化的小分子前药自组装纳米粒；
当为PEG修饰/主动靶向基团修饰的小分子前药自组装纳米粒，制备方法如下：
(1)将修饰剂和多西他赛-支链脂肪醇小分子前药溶解到适量的乙醇、四氢呋喃或丙酮中，搅拌条件下将该溶液缓缓滴加到水中，多西他赛-支链脂肪醇小分子前药自发形成均匀的纳米粒，其中，所述的修饰剂为PEG修饰剂或主动靶向修饰剂，所述的PEG修饰剂为DSPE-PEG、TPGS、PLGA-PEG、PE-PEG或DSPE-PEG-FA；所述的主动靶向修饰剂为抗体、糖残基、激素、受体或配体；按质量比，多西他赛-支链脂肪醇小分子前药：修饰剂＝(20～1):1；
(2)采用减压旋转蒸发法除去制剂中的有机溶剂，得到不含任何有机溶剂的纳米胶体溶液，即为PEG修饰/主动靶向基团修饰的小分子前药自组装纳米粒；
当为包载疏水性荧光物质或药物的小分子前药自组装纳米粒时，制备方法如下：
(1)将PEG修饰剂、疏水性荧光物质或药物与多西他赛-支链脂肪醇小分子前药溶解到适量的乙醇、四氢呋喃或丙酮中，搅拌条件下将该溶液缓缓滴加到水中，多西他赛-支链脂肪醇小分子前药自发形成均匀的纳米粒；按质量比，多西他赛-支链脂肪醇小分子前药:PEG修饰剂:疏水性荧光物质或药物＝(20-1):1:(1-5)；
(2)采用减压旋转蒸发法除去制剂中的有机溶剂，得到不含有机溶剂的纳米胶体溶液，即为包载疏水性荧光物质或药物的小分子前药自组装纳米粒。
10.权利要求1所述的多西他赛-支链脂肪醇前药或权利要求8所述的自组装纳米粒的应用，其特征在于，具体应用于抗肿瘤药物制备，注射给药、口服给药或局部给药***制备，提高疗效、降低毒性药物传递***制备。
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