CN116268182B - 基于白僵蚕提取物的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于白僵蚕提取物的组合物，所述组合物按质量百分比计，包括白僵蚕提取物20～40%，麦麸提取物60～80%，所述白僵蚕提取物是将长满白毛并僵硬的感染白僵病的家蚕经过有机溶剂浸提得到，所述麦麸提取物是将麦麸粉经过有机溶剂浸提得到。本发明还公开了该组合物的制备方法和应用。本发明提供的组合物可施用到家蚕和线虫上，可用于家蚕和线虫产卵量提高。本发明方法简单，原料易得，加工过程对环境友好，有利于家蚕养殖和茧丝绸业的发展。
Description
技术领域
本发明属于生物技术及农业生产领域，特别涉及一种基于白僵蚕提取物的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
家蚕原产我国，主食桑叶，是重要的经济动物，在人类经济生活及文化历史上有重要地位。蚕丝是优良纺织纤维，是丝绸的原料。桑蚕的蛹可食用，蚕蛾和蚕粪均有综合利用，是多种化工和医药工业的原料。养蚕业是我国农村振新，农民致富的重要途径。因此，家蚕产卵量的提高对于农业生产的意义极大。增加家蚕的产卵量，主要依靠杂交育种或基因工程手段，例如专利“一种提高原种产卵量的方法”。但育种或基因工程的工作量非常大，进程缓慢、过程复杂，而且还存在结果不确定性，制约了推广。本发明通过在饲料中添加组合物的方式即可提高家蚕产卵量，过程简单、喂食方法与现有方法较一致，容易在家蚕养殖地区推广。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供了一种成本低、安全性高，作用效果好的能提高家蚕产卵量的基于白僵蚕提取物的组合物。
本发明还要解决的技术问题是提供一种基于白僵蚕提取物的组合物的制备方法。
本发明最后要解决的技术问题是提供了该组合物的在提高家蚕产卵量的应用。
技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于白僵蚕提取物的组合物，所述组合物按质量百分比计，包括白僵蚕提取物20～40％，麦麸提取物60～80％，所述白僵蚕提取物是将长满白毛并僵硬的感染白僵病的家蚕经过有机溶剂浸提得到，所述麦麸提取物是将麦麸粉经过有机溶剂浸提得到。
其中，所述白僵蚕提取物的制备方法具体包括如下步骤：将长满白毛并僵硬的染白僵病的家蚕冷冻干燥粉碎处理，然后用乙醇进行浸提多次再过滤处理，滤液通过减压浓缩得到粘稠的溶液即为白僵蚕提取物。
其中，所述麦麸提取物的制备方法包括：将麦麸粉用乙醇进行浸提多次，再过滤处理，滤液通过减压浓缩得到的粘稠的溶液即为麦麸提取物。
本发明内容还包括所述的基于白僵蚕提取物的组合物的制备方法，包括以下步骤：
1)用球孢白僵菌菌液喷洒家蚕，及时收集患白僵病的家蚕于湿润清洁处直至家蚕长出白毛并僵硬得到白僵蚕，然后及时将白僵蚕于冷冻干燥处理，再粉碎成细粉，放入乙醇中浸泡，并经过浸提、过滤，滤液采用减压浓缩的方法得到提取物；
2)将麦麸烘干后粉碎过筛，用乙醇作为浸提溶剂，经过浸提、过滤，滤液采用减压浓缩的方法得到提取物；
3)将步骤1)得到的白僵蚕提取物与步骤2)得到的麦麸提取物充分混匀得到组合物。
其中，步骤1)中所述球孢白僵菌菌液的浓度为106cfu/mL以上。
其中，步骤2)中的烘干温度为60～80℃，作为优选地，烘干温度为70～80℃。
其中，步骤2)中减压浓缩是在真空度-0.07Mpa以上并置于40～50℃水浴下进行浓缩。
其中，作为优选，步骤2)中减压浓缩是在真空度为-0.08pa并置于40～50℃水浴下进行浓缩。
其中，步骤3)的僵蚕提取物与步骤2)得到的麦麸提取物质量比为2∶3～1∶4。
本发明内容还包括所述基于白僵蚕提取物的组合物在提高家蚕或线虫产卵量中的应用。
其中，所述基于白僵蚕提取物的组合物的饲养家蚕方法为：取组合物，配置成1g/L的溶液，均匀喷洒在新鲜桑叶表面直至桑叶完全湿润，然后自然晾干桑叶，再用此处理的桑叶一天多次喂食家蚕。
本发明的组合物的制备方法，作为优选，具体包括以下步骤：
1)配置106cfu/mL以上浓度球孢白僵菌菌液，均匀喷洒在5龄起蚕上，然后正常喂食桑叶养蚕，在此过程中，及时挑出染白僵病死亡的家蚕，将其放置在湿润清洁处，等待蚕身上长满白毛并僵硬，再放置于冷冻干燥装置中，于-70℃以下干燥24小时取出、粉碎、备用；
2)麦麸70～80℃烘干后，打成麦麸粉，过40目筛备用；
3)将步骤1)中的白僵蚕粉用80％乙醇进行浸提，每次24小时，期间伴随不定期的震荡，重复2～3次浸提；
4)通过过滤使乙醇浸提液与白僵蚕粉分离，将滤液合并，通过减压浓缩得到粘稠的白僵蚕提取物，其中减压浓缩是在-0.08MPa并置于40～50℃水浴下的浓缩过程；
5)将步骤2)的麦麸粉用80％乙醇进行浸提，每次浸提24h，期间伴随不定期的震荡，重复2～3次浸提；
6)通过过滤使乙醇浸提液与麦麸粉分离，将滤液合并，通过减压浓缩得到粘稠的麦麸提取物，其中减压浓缩是在-0.08MPa并置于40～50℃水浴下的浓缩过程；
7)将步骤4)所获的白僵蚕提取物与步骤6)所获的麦麸提取物按质量比为30％和70％的比例均匀混合，得组合物。
有益效果：与现有技术相比，本发明具备以下优点：
1、本发明的主要原料之一是白僵蚕。白僵蚕是我国的传统中药材，具有息风止痉，祛风止痛，化痰散结的功效，但没有用于家蚕产卵量方面的应用。本发明开发了白僵蚕在家蚕养殖中的应用，对白僵蚕的广泛开发具有意义。
2、本发明的另一主要原料麦麸是粮食工业的废弃物，成本低廉、容易获取、生物安全性高。通过本发明的制备方法得到的组合物，还可以使得麦麸的附加值升高；所使用的乙醇是农业加工领域和食品领域中常用的加工助剂，且能回收反复利用，对环境友好。
3、本发明生产条件温和，操作过程简单，易于扩大生产。
4、本发明能有效提高线虫和家蚕的产卵量。特别地，在家蚕养殖领域有较高的经济作用。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1提高家蚕产卵量的组合物制备
1)选择培养11天的球孢白僵菌HN6菌株(中国农业科学院蚕业研究所蚕病理研究室保藏)，配置成107cfu/mL浓度的球孢白僵菌菌液，均匀喷洒在5龄起蚕上、遍布家蚕全身至湿润，待蚕身表面水分稍干后正常喂食桑叶养蚕。在饲养过程中，及时挑出染白僵病死亡的家蚕，将其放置在湿润清洁处，等待蚕身上长满白毛并僵硬，再放置于冷冻干燥装置中，于-70℃以下干燥24小时取出、粉碎、备用；
2)麦麸75℃烘干后，打成麦麸粉，过40目筛备用；
3)将步骤1)中的白僵蚕粉用80％乙醇(体积分数比，下同)进行浸提，固液质量比为1∶2.5，每次24小时，期间伴随不定期的震荡，重复3次浸提；
4)通过抽滤使乙醇浸提液与白僵蚕粉分离，将滤液合并，通过减压浓缩得到粘稠的白僵蚕提取物，其中减压浓缩是在-0.08MPa并置于45℃水浴下的浓缩过程；
5)将步骤2)的麦麸粉用80％乙醇进行浸提，固液质量比为1∶2.5，每次浸提24h，期间伴随不定期的震荡，重复3次浸提；
6)通过抽滤使乙醇浸提液与麦麸粉分离，将滤液合并，通过减压浓缩得到粘稠的麦麸提取物，其中减压浓缩是在-0.08MPa并置于45℃水浴下的浓缩过程；
7)将步骤4)所获的白僵蚕提取物与步骤6)所获的麦麸提取物按质量比为30％和70％的比例均匀混合，得组合物。
实施例2提高家蚕产卵量的组合物制备
1)选择培养13天的球孢白僵菌HN6菌株，配置成106cfu/mL浓度球孢白僵菌菌液，均匀喷洒在5龄起蚕上，然后正常喂食桑叶养蚕，在此过程中，及时挑出染白僵病死亡的家蚕，将其放置在湿润清洁处，等待蚕身上长满白毛并僵硬，再放置于冷冻干燥装置中，于-70℃以下干燥24小时取出、粉碎、备用；
2)麦麸80℃烘干后，打成麦麸粉，过40目筛备用；
3)将步骤1)中的白僵蚕粉用80％乙醇进行浸提，固液比为1∶3的质量比，每次24小时，期间伴随不定期的震荡，重复2次浸提；
4)通过抽滤使乙醇浸提液与白僵蚕粉分离，将滤液合并，通过减压浓缩得到粘稠的白僵蚕提取物，其中减压浓缩是在-0.08MPa并置于50℃水浴下的浓缩过程；
5)将步骤2)的麦麸粉用80％乙醇进行浸提，固液比为1∶3的质量比，每次浸提24h，期间伴随不定期的震荡，重复2次浸提；
6)通过抽滤使乙醇浸提液与麦麸粉分离，将滤液合并，通过减压浓缩得到粘稠的麦麸提取物，其中减压浓缩是在-0.08MPa并置于50℃水浴下的浓缩过程；
7)将步骤4)所获的白僵蚕提取物与步骤6)所获的麦麸提取物按质量比为40％和60％的比例均匀混合，得组合物。
实施例3提高家蚕产卵量的组合物制备
1)选择培养13天的球孢白僵菌(菌株HN6，中国农业科学院蚕业研究所蚕病理研究室保藏)，配置成106cfu/mL浓度球孢白僵菌菌液，均匀喷洒在5龄起蚕上，然后正常喂食桑叶养蚕，在此过程中，及时挑出染白僵病死亡的家蚕，将其放置在湿润清洁处，等待蚕身上长满白毛并僵硬，再放置于冷冻干燥装置中，于-70℃以下干燥24小时取出、粉碎、备用；
2)麦麸80℃烘干后，打成麦麸粉，过40目筛备用；
3)将步骤1)中的白僵蚕粉用80％乙醇进行浸提，固液比为1∶2的质量比，每次24小时，期间伴随不定期的震荡，重复3次浸提；
4)通过抽滤使乙醇浸提液与白僵蚕粉分离，将滤液合并，通过减压浓缩得到粘稠的白僵蚕提取物，其中减压浓缩是在-0.08MPa并置于45℃水浴下的浓缩过程；
5)将步骤2)的麦麸粉用80％乙醇进行浸提，固液比为1∶3的质量比，每次浸提24h，期间伴随不定期的震荡，重复3次浸提；
6)通过抽滤使乙醇浸提液与麦麸粉分离，将滤液合并，通过减压浓缩得到粘稠的麦麸提取物，其中减压浓缩是在-0.08MPa并置于45℃水浴下的浓缩过程；
7)将步骤4)所获的白僵蚕提取物与步骤6)所获的麦麸提取物按质量比为20％和80％的比例均匀混合，得组合物。
实验例：
以下实验针对的是：实施例1～3制备的喂食了组合物的线虫和家蚕，对照1为正常饲养的线虫或家蚕，对照2为喂食了白僵蚕提取物的线虫或家蚕，对照3为喂食了麦麸提取物的线虫或家蚕。
喂食方法：
(1)对照1的家蚕，采用正常新鲜桑叶喂食；对照1的线虫，采用E.coli OP50菌液喂食(E.coli OP50菌在LB液体培养基中OD值为0.6～0.7之间，取200微升的此菌菌液，均匀分布在线虫培养基表面，下同)。
(2)对照2的家蚕，采用喷洒了白僵蚕提取物的桑叶喂食(取白僵蚕提取物，配置成1g/L的溶液，均匀喷洒在新鲜桑叶表面直至桑叶湿润，然后晾干再喂食)；对照2的线虫，将E.coli OP50菌液200微升与白僵蚕提取物溶液200微升混合后喂食(白僵蚕提取物浓度为20mg/mL)。
(3)对照3的家蚕，采用喷洒了麦麸提取物的桑叶喂食(取麦麸提取物，配置成1g/L的溶液，均匀喷洒在新鲜桑叶表面直至桑叶湿润，然后晾干再喂食)；对照3的线虫，将E.coli OP50菌液200微升与麦麸提取物溶液200微升混合后喂食(麦麸提取物浓度为20mg/mL)。
(4)实施例1-3制备的组合物喂养的家蚕，采用喷洒了组合物的桑叶喂食(取组合物，配置成1g/L的溶液，均匀喷洒在新鲜桑叶表面直至桑叶湿润，然后晾干再喂食)；对照2的线虫，将E.coli OP50菌液200微升与组合物溶液200微升混合后喂食(组合物浓度为20mg/mL)。
具体实验方法如下：
(1)、线虫实验。将线虫同步化后培养，到L4期时随机挑取各1条并分别放入不同喂食处理的平板中，每天将线虫转移至新板中，连续3天至新孵化的线虫长至成虫，统计成虫数目并计算平均值，该值为线虫产卵量。喂食时，对照1为E.coli OP50菌液喂养线虫；其它组则将组合物或提取物用少量水稀释成糊状并与E.coli OP50菌液均匀混合。各实验组对线虫的行动力无显著性差异，表示对线虫的生长无影响，但各实验组对线虫的产卵量有差异，实施例1、2、3显著高于对照1。
(2)、家蚕实验。从2龄起蚕时，开始用1g/L的组合物溶液喷洒的桑叶喂食家蚕，每天喂食三次。待家蚕成虫雌雄蛾交尾后统计产卵数目，此值为家蚕产卵量。对照1则为用正常桑叶喂食的家蚕。各实验组对家蚕5龄幼虫体重的影响无显著性差异，表示对家蚕的生长无影响，但各实验组对家蚕成虫的产卵量有差异，实施例1、2、3显著高于对照1。说明：与采用纯桑叶饲养的家蚕相比较，采用本组合物饲养的家蚕母蛾的产卵量提高。同时，与单独用白僵蚕提取物或麦麸提取物饲养的家蚕相比较，本组合物饲养的家蚕母蛾的产卵量要高。
注：表中的不同字母表示具有显著性差异P＜0.05。
实施例1相对于仅喂养桑叶的对照1家蚕的产卵量，可提高8.5％，也显著高于单纯添加了白僵蚕提取物或麦麸提取物的家蚕产卵量。实施例1相对于正常喂食的线虫对照1，产卵量提高29.7％。
实施例2相对于仅喂养桑叶的对照2家蚕的产卵量，可提高7.8％，也显著高于单纯添加了白僵蚕提取物或麦麸提取物的家蚕产卵量。实施例1相对于正常喂食的线虫对照2，产卵量提高33.1％。
实施例3相对于仅喂养桑叶的对照3家蚕的产卵量，差异显著，可提高5.4％，但与单纯添加了麦麸提取物的家蚕相比差异不显著。实施例3相对于正常喂食的线虫对照3，产卵量提高26.3％。
Claims (10)
1.一种基于白僵蚕提取物的组合物，其特征在于，所述组合物按质量百分比计，包括白僵蚕提取物20～40%，麦麸提取物60～80%，所述白僵蚕提取物是将长满白毛并僵硬的感染白僵病的家蚕经过80%乙醇浸提得到，所述麦麸提取物是将麦麸粉经过80%乙醇浸提得到。
2.根据权利要求1所述的基于白僵蚕提取物的组合物，其特征在于，所述白僵蚕提取物的制备方法具体包括如下步骤：将长满白毛并僵硬的染白僵病的家蚕冷冻干燥粉碎处理，然后用乙醇进行浸提多次再过滤处理，滤液通过减压浓缩得到粘稠的溶液即为白僵蚕提取物。
3.根据权利要求1所述的基于白僵蚕提取物的组合物，其特征在于，所述麦麸提取物的制备方法包括：将麦麸粉用乙醇进行浸提多次再过滤处理，滤液通过减压浓缩得到的粘稠的溶液即为麦麸提取物。
4.权利要求1~3任一项所述的基于白僵蚕提取物的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）用球孢白僵菌菌液喷洒家蚕，及时收集患白僵病的家蚕于湿润清洁处直至家蚕长出白毛并僵硬得到白僵蚕，然后及时将白僵蚕于冷冻干燥处理，再粉碎成细粉，放入80%乙醇中浸泡，并经过浸提、过滤，滤液采用减压浓缩的方法得到提取物；
2）将麦麸烘干后粉碎过筛，用80%乙醇作为浸提溶剂，经过浸提、过滤，滤液采用减压浓缩的方法得到提取物；
3）将步骤1）得到的白僵蚕提取物与步骤2）得到的麦麸提取物充分混匀得到组合物。
5.根据权利要求4所述的基于白僵蚕提取物的组合物的制备方法，其特征在于，步骤1）中所述球孢白僵菌菌液的浓度为106cfu/mL以上。
6.根据权利要求4所述的基于白僵蚕提取物的组合物的制备方法，其特征在于，步骤2）中的烘干温度为60～80℃。
7.根据权利要求4所述的基于白僵蚕提取物的组合物的制备方法，其特征在于，步骤2）中的烘干温度为70～80℃。
8.根据权利要求4所述的基于白僵蚕提取物的组合物的制备方法，其特征在于，步骤2）中减压浓缩是在-0.08MPa并置于40～50℃水浴下进行浓缩。
9.根据权利要求4所述的基于白僵蚕提取物的组合物的制备方法，其特征在于，步骤3）的白僵蚕提取物与步骤2）得到的麦麸提取物质量比为2:3~1:4。
10.权利要求1~3任一项所述的基于白僵蚕提取物的组合物在家蚕或线虫产卵量中的应用。
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