CN116216719A - 复合纳米材料及制备方法、纳米纤维支架及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗菌医疗技术领域，尤其涉及一种Ti3C2Tx/MoO3‑y复合纳米材料和一种PLA‑Ti3C2Tx/MoO3‑y@PANI纳米纤维支架，以及PLA‑Ti3C2Tx/MoO3‑y@PANI纳米纤维支架在抗菌以及体内创面愈合领域的应用；通过将所述Ti3C2Tx/MoO3‑y复合纳米材料与PLA溶液混合制备为纺丝液，采用溶液喷射纺丝技术对纺丝液进行纺丝，得到P‑T/M纤维膜，进一步通过聚合反应，得到PLA‑Ti3C2Tx/MoO3‑y@PANI纳米纤维支架；本发明的PLA‑Ti3C2Tx/MoO3‑y@PANI纳米纤维支架可用于治疗耐多药细菌感染并有效促进伤口愈合。

Description

复合纳米材料及制备方法、纳米纤维支架及应用
技术领域
本发明涉及抗菌医疗技术领域，尤其涉及一种Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料、PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架，以及PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架的应用。
背景技术
近年来，感染导致的慢性伤口逐渐成为世界范围内最严重的健康问题之一。由于受损的皮肤极易发生创面感染，长期的感染和炎症不可避免地导致伤口愈合停滞，甚至促使慢性伤口的形成，给患者带来了巨大的痛苦和逐年升高的死亡率。针对细菌感染的治疗方法，通常是局部或全身应用抗生素。然而，由于抗生素的过度使用和滥用，耐药菌甚至是多重耐药菌株，如头孢菌素耐药大肠杆菌(CRE)、碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)和甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)等，已经出现并广泛传播。这些细菌菌株削弱了抗生素的治疗效果，导致高死亡率和医疗资源的严重浪费。因此，针对伤口细菌感染需要更有效且副作用更小的治疗方法。
近年来，光热疗法(PTT)和光动力疗法(PDT)作为两种强大的细菌感染治疗技术引起了广泛的关注，它们都涉及使用具有强光吸收特性的光敏剂，分别有效地将光能转化为热量或产生毒性活性氧(ROS)杀死细菌。然而，单一的使用PTT疗法和PDT疗法时仍有一定的局限性。PTT的主要局限在于，只有在温度过高和光照射时间过长的情况下，细菌才能被有效杀死，这会对正常组织造成损害并产生副作用。而PDT是一种不依赖于温度的抗菌途径，其利用光敏剂(PSs)和适当的光源产生活性氧(ROS)，通过氧化性地破坏细菌膜和细菌内的生物分子来达到抗菌目的，但往往治疗时需要通过高浓度的活性氧才能把细菌完全杀死，而这些活性氧又会不可避免地损害正常组织。因此，如果能把两种方案有效集成，在较低热量破坏细菌的同时只需施加少量活性氧就能完全杀死细菌，将是一种非常有潜力的治疗方案，这种结合将大大提高抗菌效率且有效避免了毒副作用。但根据以往的研究结果，由于大多数光敏剂结构的限制，PDT过程需要较高能量的激发光源才能产生电子跃迁，这种高能的光线主要集中在可见光，而对于光热治疗来说，能与光热转换材料匹配的光源又主要集中在近红外区域。这种光源的不统一使得联合治疗过程中不可避免地需要准备更多的光源和花费更换的时间，大大制约了其实际应用的普及。因此，设计一种基于分子水平的单光激发PTT-PDT级联材料变得尤为重要。
通过溶液喷射纺丝技术制备的纳米纤维(NFs)的纤维结构类似于天然细胞外基质(ECM)中的纤维结构，其中高微孔率和高比表面为细胞粘附和氧气交换提供了良好的场所，因此使其成为慢性伤口敷料的理想选择。但类似于纱布、橡胶和泡沫等传统敷料，仍主要侧重于减少渗出液的调节，而不是调节内源性细胞行为，可能导致被动修复过程，甚至出现意想不到的炎症反应。因此，需要开发一种能够主动引导细胞迁移并加速皮肤伤口愈合过程的伤口愈合新策略。
专利公开号CN111617309A的专利提出了一种具有良好的吸水保湿、止血性能的抗菌止血海绵制备方法；但是该专利的方案主要侧重于减少血液和渗出液的调节，仅靠MXene自身的抗菌能力产生缓慢的抗菌作用，无法通过光疗发(如光热疗法和光动力疗法等)快速杀菌，且不能调节内源性细胞行为，这样无法促进伤口愈合进程的加速，甚至出现意想不到的炎症反应。
专利公开号为CN114344544A的专利提出了一种光激活抗菌敷料及其制备方法，可以短期快速杀菌，长期抑菌并促进伤口愈合的效果；但是该专利的方案主要侧重于光疗下的抗菌作用，只能清除感染，而不能调节内源性细胞行为，这样无法促进伤口愈合进程的加速，甚至出现意想不到的炎症反应。
论文名称Interfacial engineering of Bi2S3/Ti3C2Tx MXene based on workfunction for rapid photo-excited bacteria-killing中设计了Bi2S3/Ti3C2Tx的界面肖特基结，但是仅制备了一种可在近红外激光照射下具有光动力和光热疗法的复合纳米材料，能够快速杀菌从而清除创面感染。其缺点是，不可降解的Bi2S3/Ti3C2Tx无法长时间定植与伤口表明从而持续治疗伤口，且通过伤口进入体内循环***，可能对机体造成损害。此外，更不能调节内源性细胞行为，这样无法促进伤口愈合进程的加速。
论文名称Bioactive anti-inflammatory,antibacterial,conductivemultifunctional scaffold based on MXene@CeO2 nanocomposites for infection-impaired skin multimodal therapy中设计了多功能MXene@CeO2通过结合2D抗菌导电Ti3C2Tx MXenes和抗氧化剂CeO2制备纳米复合材料，并应用于开发多功能水凝胶支架(FOM)；但是该专利的方案主要侧重于通过外源性的电刺激来调节内源性细胞行为，从而加速伤口愈合，但在抗菌方面，仅靠MXene自身的抗菌能力产生缓慢的抗菌作用，无法通过光疗发(如光热疗法和光动力疗法等)快速杀菌达到清除创面感染的目的，感染无法快速清除将导致炎症阶段的持续，阻碍伤口的自我修复。
发明内容
本发明为解决上述问题，通过优化生物材料的结构和多功能特性，提供一种新型的Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料，以及PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架，为多重耐药菌MDR感染受损皮肤提供了一种有效的多模式治疗方法。
本发明提供一种Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料的制备方法，包括步骤：
S1、将Mo原料溶解在Ti3C2Tx水溶液中，进行静电吸附，得到第一溶液；
S2、向所述第一溶液中加入无水乙醇，调节所述第一溶液的pH值至1.0～2.0，高温高压反应，得到黑色沉淀，即得到所述复合纳米材料。
优选的，所述Mo原料为钼酸铵((NH4)6Mo7O24·4H2O)、三氯化钼(MoCl3)、五氯化钼(MoCl5)、钼酸钠(Na2MoO4)或钼粉(Mo)中的至少一种；
通过调节所述Mo原料与所述Ti3C2Tx水溶液的比例，使得得到的所述复合纳米材料中Ti3C2Tx与MoO3-y的摩尔比为4:1。
优选的，所述静电吸附包括将所述第一溶液在100rpm～700rpm的转速下搅拌不少于2小时；所述高温高压反应的温度为160℃，所述高温高压反应的时间为12小时。
优选的，在步骤S1之前，所述复合纳米材料的制备方法还包括步骤：
S0、通过刻蚀制备Ti3C2Tx纳米片；将Ti3C2Tx纳米片配置为Ti3C2Tx水溶液；和/或
在S2中，得到黑色沉淀后，将所述黑色沉淀用去离子水洗涤，真空干燥，得到所述复合纳米材料。
本发明提供一种Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料，所述复合纳米材料通过上述的制备方法制得，所述复合纳米材料包括肖特基异质结。
本发明还提供一种PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架，所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架通过Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料制备得到，所述Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料上述的复合纳米材料。
优选的，所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架的制备方法包括步骤：
S3、将所述Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料制备为纺丝液，采用溶液喷射纺丝技术对纺丝液进行纺丝，得到P-T/M纤维膜。
优选的，所述纺丝液的制备方法包括步骤：
S31、所述Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料加入第二溶液中，进行透析，使得所述Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料表面包覆表面活性剂；所述第二溶液为含有PVP的DMF溶液；
S32、将表面包覆表面活性剂的Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料溶入1,4-二氧六环DIO中，分散；再加入聚乳酸PLA，搅拌，得到所述纺丝液。
优选的，所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架的制备方法还包括步骤：
S4、在所述P-T/M纤维膜中加入苯胺的樟脑磺酸溶液，振荡吸附；再加入过硫酸铵的樟脑磺酸溶液，将所述P-T/M纤维膜浸没，聚合反应，洗涤、干燥，得到所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架。
本发明还提供一种所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架的应用，PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架应用于抗菌和/或体内创面愈合。
附图说明
图1是本发明具体实施方式中P-T/M@PANI纳米纤维支架的制备方法流程示意图。
图2是本发明具体实施方式中Ti3C2Tx刻蚀的扫描电镜图。
图3是本发明具体实施方式中Ti3C2Tx纳米片的扫描电镜图。
图4是本发明具体实施方式中Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料的扫描电子镜图。
图5是本发明具体实施方式中Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料的透射电镜图。
图6是本发明具体实施方式中P-T/M@PANI纳米纤维支架的扫描电子镜图。
图7是本发明具体实施方式中不同纳米纤维膜在近红外光照射下的实时温度变化示意图。
图8是本发明具体实施方式中P-T/M@PANI纳米纤维支架的光热稳定性示意图。
图9是本发明具体实施方式中Ti3C2Tx、MoO3-y及Ti3C2Tx/MoO3-y的电化学阻抗谱图。
图10是本发明具体实施方式中MoO3-y及Ti3C2Tx/MoO3-y在有和没有近红外激光照射情况下的瞬态光电流响应谱图。
图11是本发明具体实施方式中Ti3C2Tx/MoO3-y在有无近红外光照射下·OH的ESR光谱图。
图12是本发明具体实施方式中Ti3C2Tx/MoO3-y在有无近红外光照射下的1O2的ESR光谱图。
图13是本发明具体实施方式中PLA的亚甲基蓝(MB)吸光度图谱。
图14是本发明具体实施方式中P-T/M@PANI纳米纤维支架的亚甲基蓝(MB)吸光度图谱。
图15是本发明具体实施方式中PLA的谷胱甘肽(GSH)吸光度图谱。
图16是本发明具体实施方式中P-T/M@PANI纳米纤维支架的谷胱甘肽(GSH)吸光度图谱。
图17是本发明具体实施方式中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌溶液和产超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌溶液用不同样品处理后的琼脂板涂布结果示意图。
图18是本发明具体实施方式中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌用不同样品处理后的存活率示意图。
图19是本发明具体实施方式中超广谱β-内酰胺酶肠杆菌用不同样品处理后的存活率示意图。
图20是本发明具体实施方式中用不同纳米纤维膜处理后的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和β-内酰胺酶肠杆菌的扫描电镜图。
图21是本发明具体实施方式中P-T/M@PANI纳米纤维支架在电刺激下促进L929细胞增殖的活/死染色图像。
图22是本发明具体实施方式中各组在第0、3、7、10天的皮肤伤口照片及伤口区域大小对比图。
图23是本发明具体实施方式中各组在第0、3、7、10天的创面未愈合率量化图。
图24是本发明具体实施方式中各组伤口的H&E染色结果照片。
图25是本发明具体实施方式中各组伤口的CD31和Ki67免疫组化染色结果照片。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，而不构成对本发明的限制。
本发明制备了一种多功能协同的纳米纤维支架PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI(以下简称P-T/M@PANI)，利用纳米颗粒的PTT/PDT/CDT联合治疗功能，结合纳米纤维的高生物相容性和聚苯胺涂层优异的导电性，实现耐多药细菌感染的快速清除并有效促进伤口愈合。
具体的实施方式中，本发明提供一种Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料的制备方法,包括步骤：
S1、将Mo原料溶解在Ti3C2Tx水溶液中，进行静电吸附，得到第一溶液，所述Mo原料为钼酸铵((NH4)6Mo7O24·4H2O)、三氯化钼(MoCl3)、五氯化钼(MoCl5)、钼酸钠(Na2MoO4)或钼粉(Mo)中的至少一种；通过调节所述Mo原料与所述Ti3C2Tx水溶液的比例，可以得到不同的Ti3C2Tx与MoO3-y比例的复合纳米材料；优选的实施方式中，通过调节所述Mo原料与所述Ti3C2Tx水溶液的比例，使得得到的所述复合纳米材料中Ti3C2Tx与MoO3-y的摩尔比为4:1，相应的，复合纳米材料的光热和光动力的性能最优。
具体的，所述静电吸附包括将所述第一溶液在100rpm～700rpm的转速下搅拌不少于2小时，优选的，转速为500rpm，足够的搅拌时间能够使得进行充足的静电吸附，从而使得复合纳米材料的产量达到最大；具体的，在步骤S1之前，所述复合纳米材料的制备方法还包括步骤：S0、通过刻蚀制备Ti3C2Tx纳米片；将Ti3C2Tx纳米片配置为Ti3C2Tx水溶液。
S2、向所述第一溶液中加入无水乙醇，进行氧化还原反应；进一步，可通过稀盐酸等溶液调节所述第一溶液的pH值至1.0～2.0，优选的，调节pH值至1.1，高温高压反应，得到黑色沉淀，将所述黑色沉淀用去离子水洗涤，真空干燥，得到所述复合纳米材料；具体的，所述高温高压反应的温度为160℃，所述高温高压反应的时间为12小时。
本发明具体实施方式中提供一种Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料，所述复合纳米材料通过上述的制备方法制得，所述复合纳米材料包括肖特基异质结。本发明的Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料为一种新颖的核心-卫星状材料，具体以新型二维无机纳米材料为基板，通过溶剂热法在表面原位生长MoO3-y纳米颗粒，其中，Ti3C2Tx里的Tx为官能团，具体可以为-OH、-O、-F和-Cl等。而MoO3-y里的y则代表缺氧，y的取值范围没有具体限制。
通过本发明的制备方法所制备得到的Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料有两大功能增强机制：一是，通过两个材料的复合可以构成一个肖特基异质结，增强光催化活性(光动力疗法的活性)；二是，这两种材料均为等离子体材料，在红光下有LSPR效应，两个材料复合后，通过LSPR效应的耦合，显著增强光热转换效果。
本发明还提供一种PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架，所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架通过Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料制备得到。
如图1所示，具体的实施方式中，所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架的制备方法包括步骤：
S3、将所述Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料制备为纺丝液，采用溶液喷射纺丝技术对纺丝液进行纺丝，得到P-T/M纤维膜；
具体的实施方式中，所述纺丝液的制备方法包括步骤：
S31、所述Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料加入第二溶液中，进行透析，使得所述Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料表面包覆表面活性剂；所述第二溶液为含有PVP(聚乙烯吡咯烷酮)的DMF(N,N-二甲基甲酰胺)溶液；在其他的实施方式中，DMF还可以用甲醇、乙醇、乙二醇、二氯甲烷、氯仿以及N-甲基吡咯烷酮等常见有机溶剂替代。
S32、将表面包覆表面活性剂的Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料溶入DIO中，分散；再加入聚乳酸PLA，搅拌，得到所述纺丝液；PLA是一种美国美国食品药品管理局(FDA)批准的可生物降解的生物医用高分子材料，DIO(1,4-二氧六环)是PLA的良溶剂，用来溶解PLA从而制备纺丝液；在其他的实施方式中，除PLA之外，还可用如PLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)、PCL(聚己内酯)等；DIO也可以替换为HFIP(六氟异丙醇)、二氯甲烷、三氯甲烷等溶剂均可。
具体的实施方式中，所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架的制备方法还包括步骤：
S4、在所述P-T/M纤维膜中加入苯胺的樟脑磺酸溶液，振荡吸附；再加入过硫酸铵的樟脑磺酸溶液，将所述P-T/M纤维膜浸没，聚合反应，洗涤、干燥，得到所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架；苯胺是制备PANI的原料，制备PANI的反应为聚合反应，过硫酸铵是聚合反应的引发剂，樟脑磺酸溶液用于溶解苯胺和过硫酸铵；在其他的实施方式中，樟脑磺酸溶液也可被替换为盐酸或十二烷基苯磺酸等；但是在优选的实施方式中，通过采用樟脑磺酸掺杂的PANI导电性最高，使得制得PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架的性能最优。
本发明还提供一种所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架的应用，PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架应用于抗菌和/或体内创面愈合，此处的创面广义的代表各种创面、伤口、感染伤口、慢性伤口或急性全层伤口等等。
与现有技术相比，本发明制得的Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料及PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架具有以下有益效果：
(1)对于光热材料，吸收系数、材料吸收光谱匹配等光学特性对入射光和热的传递和损失，对光热转换效率起着至关重要的作用。对于光动力材料，基态/激发态与入射光能量之间的能隙匹配，光吸收对入射光的特性是影响光动力效率的重要因素；同时，光动力过程又可分为I型PDT过程和II型PDT过程，涉及到不同的能量转换途径以产生不同种类的活性氧。因此，基于分子水平设计的单光激发PTT-PDT级联材料鲜有报道；本发明通过分子组成和结构设计，制备了一种具有光热、光动力、化学动力疗法联合治疗效果的异质结纳米材料Ti3C2Tx/MoO3-y NPs，这种材料的应用，可以通过活性氧和高温快速灭活细菌，有效取代了抗生素的使用，避免了耐药细菌的产生。
(2)Ti3C2Tx/MoO3-y异质结复合纳米材料的制备，显著提高了材料的光热转换效果。等离子体的光热转换效应是一种通过材料吸收光能(尤其是近红外光)，经表面局域等离子体共振效应(Localized surface plasmon resonance,LSPR)将光能转化为电子或空穴谐振的动能、或者电子跃迁产生能量，通过晶格散射的振动能，向周围环境传递从而使环境温度提高的现象。其中，局域表面等离子体共振(LSPR)是由入射光的电磁场驱动的纳米粒子(NPs)中自由电荷载流子的集体振荡引起的，这种强光与物相互作用会产生局部增强的电磁场，激发了人们对其在增强光学吸收、光催化和光电控制中极大的兴趣。
虽然近年来类似于Au-Cu2-xS的金属-重掺杂半导体混合组分的LSPR耦合效应被广泛研究并应用于光热治疗。但到目前为止，几乎没有关于半导体和半导体之间等离子体耦合的报道。特别是半导体或类金属纳米颗粒表面增强的近场是否会影响相邻重掺杂半导体中的集体空穴振荡，反之亦然，仍有待回答。自从Ti3C2-MXenes在近红外(NIR)窗口(808nm)中表现出半金属特性的强LSPR效应和优异的水溶性被发现，Ti3C2-MXenes已被广泛应用于利用LSPR效应引发的光热治疗和促进光催化反应。另一方面，类似于Cu2-xS NPs，携带大量氧空位的MoO3-y也展现出由于不同缺氧量的掺杂实现可调的LSPR效应。在本发明中，我们将Ti3C2Tx与MoO3-y通过核心-卫星结构相结合构成一种肖特基异质结，通过详细的实验探究和光学***明了，两种非贵金属等离子体材料间同样能实现由于LSPR效应耦合促进的亚波长区域内的电场增强，从而导致复合纳米材料光热效应的显著提高。
(3)Ti3C2Tx/MoO3-y异质结复合纳米材料的制备，也大大提高了材料的PDT活性。光动力疗法(PDT)已在当前的医疗需求中显示出巨大的潜力。它利用特定波长的光激活光敏剂(PSs)以通过II型机制的能量转移产生细胞毒性活性氧(ROS)产生单线态氧(1O2)或通过I型机制使电子转移产生羟基自由基(·OH)和超氧化物阴离子(·O2-)。然而，大多数PSs很大程度上依赖于II型机制，这使得其无法有效应用到缺氧的实体瘤中也同样造成伤口表面出现可能不利于愈合的局部缺氧环境；因此，II型与I型PDT相结合可能更有利于临床应用；且构成的肖特基异质结使得MoO3-y产生的光生电子通过Ti3C2-MXenes快速传输，有效地避免光生电子-空穴复合，进一步提高两种活性氧的量子产率。产生的1O2和·O2-可快速破坏细菌膜上的蛋白质和脂质，导致细菌失活。
(4)Ti3C2Tx/MoO3-y异质结复合纳米材料的制备，也提供了一种具有优异CDT疗效的材料。其中，MoO3-y完美地利用化学动力疗法(CDT)，利用Mo5+具有的过氧化物酶样(POD-like)活性，和Mo6+具有谷胱甘肽氧化酶样(GSHOx-like)活性，通过Mo5+/Mo6+的循环氧化还原完美解决了内源性谷胱甘肽(GSH)等细菌抗氧化机制阻碍ROS积累的问题，显著提高了菌内ROS水平，进一步提高抗菌效果。多种反应相互调节，在细菌细胞内和细胞外成功引起“ROS飓风”。
(5)通过溶液喷射纺丝技术制备的纳米纤维(NFs)的纤维结构类似于天然细胞外基质(ECM)中的纤维结构，其中高微孔率和高比表面为细胞粘附和氧气交换提供了良好的场所，因此使其成为慢性伤口敷料的理想选择。聚乳酸(PLA)是一种食品药品监督管理局(FDA)批准的共聚物，由于其可生物降解性和生物相容性，被认为是最具吸引力的生物材料之一。PLA纳米纤维膜已被证明支持多种细胞类型的生长，包括内皮细胞、成纤维细胞、软骨细胞和骨细胞。
(6)伤口愈合取决于细胞因子、生长因子和巨噬细胞之间的相互作用以及其他因素，这些活动依赖于来自伤口边缘细胞的信号。一旦皮肤受损，伤口的产生破坏了上皮细胞间屏障，阻断了伤口处的细胞间信号传导，从而延缓了愈合。物理电刺激(ES)疗法和导电伤口敷料为这个问题提供了解决方案。本发明中，将优异导电性的导电态聚苯胺通过原位聚合的方法包覆在P-T/M混纺纤维支架的表面，制备了一种导电性优良的仿生纳米纤维支架，通过增强电传输，构建细胞通讯网络，从而在伤口愈合的中后期刺激细胞迁移、增殖和分化，有效促进伤口愈合。
综上所述，我们制备了具PTT/PDT/CDT联合抗菌途径的Ti3C2Tx/MoO3-y(T/M)肖特基异质结复合纳米颗粒，将此纳米颗粒负载在由溶液喷射纺丝制备的PLA纳米纤维膜上，并进一步在其表面涂覆导电态聚苯胺，构成具有高导电性和高度类似天然细胞外基质(ECM)的混纺纳米纤维支架NFs，将支架原位植入小鼠耐多药细菌感染的全厚度切除伤口模型中，以PTT/PDT/CDT联合治疗为基础，结合外源性电刺激，用于治疗耐多药细菌感染并有效促进伤口愈合。
下面结合附图说明和具体实施例对本发明作进一步说明，本发明的方式包括但不仅限于以下实施例。
1、Ti3C2Tx纳米片的制备
将适量的LiF在2mol/L的稀盐酸溶液中充分搅拌溶解，然后将1.0g的Ti3AlC2粉末缓慢加入装有上述溶液的聚四氟乙烯烧杯中，在35℃下以500rpm的转速搅拌24h进行刻蚀。刻蚀结束后通过离心收获所得产物并先用2mol/L的稀盐酸超声清洗三次，再用去离子水清洗4-5次，直到悬浮液的pH值达到6-7。最后，将得到的Ti3C2Tx沉淀用50mL的去离子水重新分散，在氩气(Ar)保护的环境中，将重分散溶液用200W功率的超声清洗仪超声6h，超声过程始终保持在冰浴中。最后，将超声后的溶液在3500rpm的转速下离心1h，收集上清液并冷冻干燥以获得分层的MXene纳米片，即Ti3C2Tx纳米片。
使用扫描电子显微镜观测Ti3C2Tx刻蚀，观测结果如图2所示；通过扫描电子显微镜观测Ti3C2Tx纳米片，观测结果如图3所示。
2、Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料的制备
为了合成Ti3C2Tx/MoO3-y复合材料，首先将冷冻干燥的Ti3C2Tx通过超声细胞破碎仪进行超声处理配置成一定浓度的水溶液，该过程在冰浴下以200W的功率在2秒钟运行、2秒钟停止的脉冲模式下持续2小时。然后将0.1236g的(NH4)6Mo7O24·4H2O分别溶解在含有29.4mg、58.8mg、117.6mg、235.2mg、470.4mg、940.8mg Ti3C2Tx的水溶液中，并在500rpm的转速下搅拌2小时以确保足够的时间用于静电吸附。随后，向溶液中加入无水乙醇并将溶液的最终pH调节到1.1，搅拌30min混合均匀后将混合溶液转移到高压釜中，在160℃下高温高压反应12小时。最后，收集反应后的黑色沉淀，用去离子水离心洗涤3次，在真空干燥箱中干燥得到最终的Ti3C2Tx/MoO3-y粉末。由于Ti3C2Tx的摩尔比分别为MoO3-y的25％、50％、100％、200％、400％和800％，得到的样品标记为Ti3C2Tx/MoO3-y-1:4、Ti3C2Tx/MoO3-y-1:2、Ti3C2Tx/MoO3-y-1:1和Ti3C2Tx/MoO3-y-2:1、Ti3C2Tx/MoO3-y-4:1和Ti3C2Tx/MoO3-y-8:1。
通过扫描电子显微镜和透射电子显微镜观测Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料的肖特基异质结，描电子显微镜观测结果如图4所示，透射电子显微观测结果如图5所示。
3、对比例MoO3-y的制备
与Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料的制备相似，但没有引入Ti3C2Tx。具体为，将0.1mmol/L(0.1236g)的(NH4)6Mo7O24·4H2O溶解在20mL水溶液中，并在500rpm的转速下搅拌2小时以确保足够的时间用于静电吸附。随后，向溶液中加入10mL无水乙醇并用盐酸将溶液的最终pH调节到1.1，将混合溶液转移到50mL特氟隆内衬的高压釜中，在160℃下高温高压反应12小时。最后，收集反应后的蓝色沉淀，用去离子水离心洗涤3次，在真空干燥箱中干燥得到最终的MoO3-y粉末。
4、P-T/M@PANI纳米纤维支架的制备
称量300mg冷冻干燥后的Ti3C2Tx/MoO3-y粉末投进超纯水中，超声清洗仪中进行1h超声分散得到水溶液。称量适量PVP，投入DMF中，常温下搅拌。将超声好的水溶液在650rpm的搅拌转速下缓慢滴入PVP的DMF溶液中。搅拌5min后，将混合液装入透析袋，使用无氧水透析48h。将透析后的产品冷冻干燥以得到包有PVP的Ti3C2Tx/MoO3-y。
称量上一步的产品75mg，溶入25mL DIO中，超声清洗仪中分散30min，然后在650rpm的搅拌转速下投入2.5g PLA，剧烈搅拌至少12h获得纺丝液。采用溶液喷射纺丝技术，以下列纺丝参数得到P-T/M纤维膜：针头规格：25G、接收辊转速：100rpm～400rpm、接收辊到风口距离：30cm、推进速率：10mL/h、风压：80MPa～120MPa。将得到的纤维膜裁剪成适当大小的片状，比如2cm×2cm的片状，每片加入0.1mol/L的苯胺的樟脑磺酸溶液2mL，在30℃恒温摇床中，以180rpm的转速振荡吸附4h。然后缓慢滴加0.3mol/L的过硫酸铵的樟脑磺酸溶液1mL，确保纤维膜完全浸没在液面以下，4℃下聚合反应2h。反应完成后，捞出纤维片，用去离子水浸泡并冲洗3遍，置于60℃真空烘箱中低温烘干，即得到P-T/M@PANI纳米纤维支架。
通过扫描电子显微镜观测P-T/M@PANI纳米纤维支架，观测结果如图6所示。
5、光热效果评估
纤维样品的光热效应放置在48孔板中测量，分为干燥和湿润(加入0.3mL PBS)两种状态，在0.33W/cm2的808nm激光下照射10分钟。所有样品均使用Fluke红外热成像仪测量温度，每60s测定一次温度，拍摄红外热成像照片以观察样品升温情况。光热稳定性由光热循环实验测得，纤维样品在808nm激光下照射5分钟，然后在黑暗中冷却5分钟，循环5次，绘制光热循环曲线。
测试结果如图7所示，为PLA、P-MoO3-y、P-T/M以及P-T/M@PANI四种不同纳米纤维膜在近红外光照射下的实时温度变化，其中，P-T/M@PANI纳米纤维膜相应的为P-T/M@PANI纳米纤维支架；图8所示为P-T/M@PANI纳米纤维支架的光热稳定性，从图中可以看出，在808nm近红外光照射下，P-T/M@PANI纳米纤维支架具有良好的光热效果以及光热稳定性。
5、光动力效果评估
(1)光电化学测量：样品的电化学测试使用电化学工作站进行，以0.5mol/L Na2SO4为电解质，采用传统的三电极***，其中Ag/AgCl电极作为参比电极，铂箔作为对电极，在玻碳电极上滴加样品作为工作电极。为了制作工作电极，将200μL混合物(每份含有0.8mg样品、190μL无水乙醇和10μL Nafion溶液)滴在玻碳电极上，室温干燥以形成均匀的薄膜。最后，分别收集Ti3C2Tx、MoO3-y和Ti3C2Tx/MoO3-y的电化学阻抗谱、以及有或没有近红外激光照射情况下的瞬态光电流响应谱图。
测试结果如图9和图10所示，其中，图9为Ti3C2Tx、MoO3-y和Ti3C2Tx/MoO3-y的电化学阻抗谱，图10为MoO3-y和Ti3C2Tx/MoO3-y在有或没有近红外激光照射情况下的瞬态光电流响应谱图；从图中可以看出，Ti3C2Tx/MoO3-y中构成的肖特基异质结使得MoO3-y产生的光生电子通过Ti3C2Tx/MoO3-y快速传输，有效地避免光生电子-空穴复合并促进了载流子的传输。
(2)活性氧的测量：通过电子自旋共振波谱仪(ESR，Bruker A320，德国)室温下测量纤维样品在激光辐照下活性氧自由基的产生。简单而言，将适当质量纤维样品浸泡在溶剂中，加入适量的活性氧自由基捕获剂，然后使用近红外激光(0.33W/cm2，808nm)照射样品5分钟，用毛细管吸取适量溶液装载到仪器中测量。探测不同类型的活性氧自由基，使用DPMO试剂捕获·OH和·O2-，以及使用TEMP试剂捕获1O2。
测试结果如图11和图12所示，图11为Ti3C2Tx/MoO3-y在有无近红外光照射下·OH的ESR光谱，图12为Ti3C2Tx/MoO3-y在有无近红外光照射下的1O2的ESR光谱；从图中可以看出，在808nm激发下，MoO3-y可以通过I型机制产生·OH，而Ti3C2-MXenes则可通过II型机制产生单线态氧1O2；Ti3C2Tx/MoO3-y异质结成功实现II型与I型PDT的结合，使其具有良好的活性氧生成能力，大大提高了材料的PDT活性。
6、化学动力效果的评估
(1)P-T/M@PANI纳米纤维支架的过氧化物酶样(POD-like)活性通过利用亚甲基蓝(MB)的光谱学性质进行测量。简单地说，300μL MB溶液(60μg/mL)被加入到300μL样品悬浮液中，最后加入300μL H2O2溶液(6mmol/L)。然后在不同孵育时间后检测MB的吸收光谱。以去离子水作为对照，用紫外-可见分光光度计在300～700nm波长范围内测定不同孵育时间(0，30，60分钟)的吸光度。
测试结果如图13和图14所示，图13为PLA的亚甲基蓝(MB)吸光度图谱，图14为P-T/M@PANI的亚甲基蓝(MB)吸光度图谱；从图中可以看出，P-T/M@PANI纳米纤维膜具有良好的过氧化物酶样(POD-like)活性。
(2)P-T/M@PANI纳米纤维支架的谷胱甘肽氧化酶样(GSHOx-like)活性通过5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)显色法测定，在该测定法中还原性谷胱甘肽(GSH)能与DTNB反应显黄色，用于指示谷胱甘肽的含量。简而言之，将适量GSH溶解在磷酸盐缓冲溶液中配置成一定浓度的GSH溶液；同时，将适量DTNB溶解在二甲基亚砜(DMSO)溶液中配置成一定浓度的DTNB溶液。然后将GSH溶液和样品在37℃下共孵育，一定时间后，去除样品，取上清液加入到配置好的DTNB的溶液中，室温反应5min后加入使用酶标仪扫描300-700nm波长的吸收值。GSH的消耗反映在410nm处吸光度的降低。
测试结果如图15和图16所示，图15为PLA的谷胱甘肽(GSH)吸光度图谱，图16为P-T/M@PANI纳米纤维支架的谷胱甘肽(GSH)吸光度图谱；从图中可以看出，P-T/M@PANI纳米纤维支架具有良好的谷胱甘肽氧化酶样(GSHOx-like)活性；从图中可以看出，P-T/M@PANI纳米纤维支架是一种具有优异CDT疗效的材料。其中，MoO3-y完美地利用化学动力疗法(CDT)，利用Mo5+具有的过氧化物酶样(POD-like)活性，和Mo6+具有谷胱甘肽氧化酶样(GSHOx-like)活性，通过Mo5+/Mo6+的循环氧化还原完美解决了内源性谷胱甘肽(GSH)等细菌抗氧化机制阻碍ROS积累的问题，将显著提高菌内ROS水平。
7、抗菌能力的检测
体外抗菌实验使用多重耐药的革兰氏阴性细菌：产超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌(ESBL-product E.coli，ATCC 35218)和多重耐药的***：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA，ATCC 43300)用于评估材料的体外抗菌性能。纤维支架(PLA、P-MoO3-y、P-T/M和P-T/M@PANI)的抗菌能力首先通过平板涂布法进行评价，将各组别纤维膜裁剪成直径1cm的圆形大小，置于48孔板中，分别分为黑暗组和光照组；然后每孔加入300μL使用新鲜LB培养基配置的MRSA溶液(1×107CFU mL-1)和ESBL-product E.coli溶液(1×107CFU mL-1)，分组进行黑暗和光照处理。其中光照组使用808nm近红外激光在0.33W/cm2功率密度下辐照处理10min，而黑暗组在黑暗中孵育10分钟。随后，从每孔中提取100μL处理过的菌液，均匀地铺在LB琼脂板上，然后在37℃下培养18h，以长出可见的菌落。使用以下公式计算细菌的存活率。实验重复了3次。
Figure BDA0004103850360000171
式中，CFUcontrol代表对照组的细菌浓度(CFU mL-1)，CFUsample代表实验组的细菌浓度(CFU mL-1)。
实验结果如图17-图19所示，图17为MRSA和ESBL-Product E.coli用不同样品处理后的琼脂板涂布结果，图18为MRSA用不同样品处理后的存活率，图19为ESBL-ProductE.coli不同样品处理后的存活率；从图中可以看出，在808nm近红外光照射下，P-T/M@PANI纳米纤维支架对MRSA和ESBL-Product E.coli的抗菌效果最好。
8、对抗菌机制的探索
抗菌实验后，通过场发射扫描电子显微镜观察细菌形态。将各组别纤维膜裁剪成直径1cm的圆形大小，置于48孔板中，分别分为黑暗组和光照组；然后每孔加入300μL使用新鲜LB培养基配置的MRSA溶液(1×107CFU mL-1)和ESBL-product E.coli溶液(1×107CFU mL-1)。带有菌液和纤维膜的48孔板在37℃下培养12h。细菌粘附后，用磷酸盐缓冲溶液(PBS)小心清洗纤维膜3次，以除去未粘附的细菌。然后，每孔重新加入300μL新鲜LB培养基，分组进行黑暗和光照处理，黑暗组和光照组的处理方法同上。实验处理后，将纤维膜上的粘附细菌用2.5％(v/v)的戊二醛溶液在4℃下固定8h以上，然后分别用30％、50％、70％、80％、90％、100％的系列乙醇溶液依次脱水15分钟。最后，在干燥和镀金后，通过SEM检查细菌形态和完整性。
实验结果如图20所示，图为用不同纳米纤维膜处理后的MRSA和ESBL-ProductE.coli的电镜图像；从图中可以看出，在808nm近红外光照射下，材料通过损伤细菌的细胞膜，破坏细胞完整性杀灭细菌，其中，P-T/M@PANI纳米纤维支架相应的纳米纤维膜的抗菌效果最好。
10、体外电刺激促进细胞增殖实验
利用L929细胞研究P-T/M@PANI纤维支架的电刺激促进细胞增殖能力。简单而言，通过UV辐照对纤维支架进行灭菌，然后将1×104个细胞接种在P-T/M@PANI纳米纤维支架上，并添加新鲜的细胞培养基，然后用鳄鱼夹连接到外部电源，使用直流电源向纤维膜施加600mV电压，在37℃下电刺激1h。之后，用PBS清洗纤维支架，然后进行活/死细胞染色，在荧光显微镜下评估细胞在受试材料上的增殖活力。
实验结果如图21所示，图为P-T/M@PANI纳米纤维支架在电刺激下促进L929细胞增殖的活/死染色图像；从图中可以看出，在合适的电刺激下，P-T/M@PANI纳米纤维支架相应的纳米纤维膜能够有效的促进L929细胞增殖。
11、体内创面愈合试验
(1)多重耐药细菌感染皮肤伤口模型的建立
本研究中的所有动物护理和实验程序均按照中国动物护理协会的指导方针并经海南大学实验动物管理委员会批准。雄性昆明小鼠42只，6～8周龄(25～30g)，制作皮肤伤口感染模型。2％戊巴比妥钠(10mL kg-1)全身麻醉后，小鼠背部剃毛，用皮肤取样器在小鼠背侧造一个直径为8mm的全层圆形伤口。取1×108CFU mL-1金黄色葡萄球菌40μL接种于创面，待菌液被伤口吸收后，用透气密封胶布包扎，在厌氧环境下孵育建立皮肤伤口感染模型。24h后，创面出现明显化脓，将小鼠随机分为7组(n＝6)，分别给予3M、3M+NIR、3M+NIR+ES、P-T/M@PANI、P-T/M@PANI+NIR、P-T/M@PANI+ES、P-T/M@PANI+NIR+ES各组纤维敷料分别处理，并贴透气封口膜固定，在0、1、3、5、7天时分别揭下透气封口膜和纤维敷料拍照观察伤口愈合情况；特殊处理有：①对需用NIR处理的组，第0天给予0.33W/cm2、808nm、10min光照处理，整个过程中，伤口环境湿润，加入100μL生理盐水(0.9％)，避免烫伤。使用热红外成像仪每1分钟记录每只小鼠的热成像图像和绘制升温曲线。②对需施加ES的组，使用带有两个铜片电极的P-T/M@PANI纳米纤维支架相应的纳米纤维膜与直流电源连接，麻醉后第0～7天，每隔1天给予150mV/mm、1h外部电场刺激。治疗后，用无菌棉签蘸取每只小鼠创面渗出液，放入含有1mL无菌PBS的离心管中，评估创面感染治疗情况。术后7d、10d分别进行安乐死。收集伤口周围的组织、心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏，用4％多聚甲醛固定进行组织学分析。同时，每天记录小鼠体重和创面大小。
(2)伤口愈合评估
每天用数码相机拍摄伤口区域，以监测伤口愈合的进展。
实验结果如图22和图23所示，图22为各组在第0、3、7、10天的皮肤伤口照片及伤口区域大小对比图，图23为各组在第0、3、7、10天的创面未愈合率量化图；从图中可以看出，在808nm近红外光照射和合适的电刺激下，P-T/M@PANI纳米纤维支架相应的纳米纤维膜对于感染了多重耐药菌的皮肤伤口有最好的治疗效果，成功杀死伤口出处的多重耐药菌，并良好的促进了伤口快速愈合。
(3)组织病理分析
收集伤口周围的组织，用4％多聚甲醛固定24小时。用H&E(Sigma)染色获得感染伤口的总体视图。同时进行CD31、Ki67免疫组化染色，观察纤维支架促进血管生成和细胞增殖的情况。
实验结果如图24和图25所示，图24为各组伤口的H&E染色结果照片，图25为各组伤口的CD31和Ki67免疫组化染色结果照片；从图中可以看出，HE染色显示，P-T/M@PANI纳米纤维支架相应的纳米纤维膜在近红外光照射和体外电刺激下可以加速受感染伤口的伤口愈合和组织重塑。免疫组化中，CD31和Ki67的上调也表明了，P-T/M@PANI纳米纤维支架相应的纳米纤维膜在近红外光照射和体外电刺激下可以有效的促进伤口处血管的生成和细胞增殖。
在本发明中，我们成功构建了具有PDT/PTT/CDT以及优异导电性能的多功能的纳米纤维仿生支架，以协调快速杀菌和促进感染引起的慢性皮肤伤口愈合；与现有技术中已报道的光疗杀菌研究相比有以下创造性的关键技术点：
(1)P-T/M@PANI纳米纤维支架相应的纳米纤维膜中的复合纳米颗粒利用双等离子体的LSPR耦合效应极大的增强了自身的光热转换效果，构成的肖特基异质结加快光生电子的传输，通过II型与I型PDT有效产生两种活性氧自由基；
(2)与此同时，从纳米异质结中释放的Mo离子侵入细菌。Mo4+和Mo6+之间的环状POD-like反应和GSHOx-like反应不断激发菌内活性氧，消耗菌内谷胱甘肽，从而给病原菌带来内外“活性氧飓风”的强力攻击；
(3)通过体内外光热、光动力、化学动力疗法的联合治疗，仿生纳米纤维支架显示出显著的杀菌功效；
(4)由于导电高分子聚苯胺的加入，P-T/M@PANI纳米纤维支架相应的纳米纤维膜还表现出优异的导电性，通过增强电传输，构建细胞通讯网络，从而在伤口愈合的中后期刺激细胞迁移、增殖和分化，有效促进伤口愈合。
总体而言，本发明提供了一种前瞻性的新策略来设计有前景的刺激响应多功能支架，以对抗极度耐药的细菌感染，并促进伤口快速愈合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
以上本发明的具体实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何根据本发明的技术构思所做出的各种其他相应的改变与变形，均应包含在本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料的制备方法，其特征在于，所述复合纳米材料的制备方法包括步骤：
S1、将Mo原料溶解在Ti3C2Tx水溶液中，进行静电吸附，得到第一溶液；
S2、向所述第一溶液中加入无水乙醇，调节所述第一溶液的pH值至1.0～2.0，高温高压反应，得到黑色沉淀，即得到所述复合纳米材料。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述Mo原料为钼酸铵、三氯化钼、五氯化钼、钼酸钠或钼粉中的至少一种；
通过调节所述Mo原料与所述Ti3C2Tx水溶液的比例，使得得到的所述复合纳米材料中Ti3C2Tx与MoO3-y的摩尔比为4:1。
3.如权利要求1所述的复合纳米材料，其特征在于，所述静电吸附包括将所述第一溶液在100rpm～700rpm的转速下搅拌不少于2小时；所述高温高压反应的温度为160℃，所述高温高压反应的时间为12小时。
4.如权利要求1所述的复合纳米材料，其特征在于，在步骤S1之前，所述复合纳米材料的制备方法还包括步骤：
S0、通过刻蚀制备Ti3C2Tx纳米片；将Ti3C2Tx纳米片配置为Ti3C2Tx水溶液；和/或
在S2中，得到黑色沉淀后，将所述黑色沉淀用去离子水洗涤，真空干燥，得到所述复合纳米材料。
5.一种Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料，其特征在于，所述复合纳米材料通过权利要求1～4任意一项所述的制备方法制得，所述复合纳米材料包括肖特基异质结。
6.一种PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架，其特征在于，所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架通过Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料制备得到，所述Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料为权利要求5所述的复合纳米材料。
7.如权利要求6所述的PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架，其特征在于，所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架的制备方法包括步骤：
S3、将所述Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料制备为纺丝液，采用溶液喷射纺丝技术对纺丝液进行纺丝，得到P-T/M纤维膜。
8.如权利要求7所述的PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架，其特征在于，所述纺丝液的制备方法包括步骤：
S31、所述Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料加入第二溶液中，进行透析，使得所述Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料表面包覆表面活性剂；所述第二溶液为含有PVP的DMF溶液；
S32、将表面包覆表面活性剂的Ti3C2Tx/MoO3-y复合纳米材料溶入1,4-二氧六环DIO中，分散；再加入聚乳酸PLA，搅拌，得到所述纺丝液。
9.如权利要求7所述的PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架，其特征在于，所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架的制备方法还包括步骤：
S4、在所述P-T/M纤维膜中加入苯胺的樟脑磺酸溶液，振荡吸附；再加入过硫酸铵的樟脑磺酸溶液，将所述P-T/M纤维膜浸没，聚合反应，洗涤、干燥，得到所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架。
10.一种如权利要求6～9任意一项所述的PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架的应用，其特征在于，所述PLA-Ti3C2Tx/MoO3-y@PANI纳米纤维支架应用于抗菌和/或体内创面愈合。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN117326591A (zh) * 2023-08-31 2024-01-02 深圳技术大学 一种插层MoO3材料及其制备方法

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