CN116139342B - 一种全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法 - Google Patents
一种全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116139342B CN116139342B CN202310222324.9A CN202310222324A CN116139342B CN 116139342 B CN116139342 B CN 116139342B CN 202310222324 A CN202310222324 A CN 202310222324A CN 116139342 B CN116139342 B CN 116139342B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- layer
- full
- engineering scaffold
- tissue engineering
- cartilage
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 122
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims abstract description 69
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 56
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 claims abstract description 55
- 238000005553 drilling Methods 0.000 claims abstract description 39
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims abstract description 25
- 210000005065 subchondral bone plate Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 36
- 230000006835 compression Effects 0.000 claims description 29
- 238000007906 compression Methods 0.000 claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 16
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 12
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 47
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 21
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 10
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 9
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 7
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 5
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 5
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 5
- 238000000116 DAPI staining Methods 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000010603 microCT Methods 0.000 description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000002407 tissue scaffold Substances 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000283977 Oryctolagus Species 0.000 description 2
- 201000009859 Osteochondrosis Diseases 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 2
- 229910001020 Au alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 1
- 206010061762 Chondropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 208000002804 Osteochondritis Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012237 artificial material Substances 0.000 description 1
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000022159 cartilage development Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003353 gold alloy Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
- A61L27/3612—Cartilage, synovial fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3641—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the site of application in the body
- A61L27/3645—Connective tissue
- A61L27/3654—Cartilage, e.g. meniscus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
- A61L27/3687—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the use of chemical agents in the treatment, e.g. specific enzymes, detergents, capping agents, crosslinkers, anticalcification agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
- A61L27/3691—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by physical conditions of the treatment, e.g. applying a compressive force to the composition, pressure cycles, ultrasonic/sonication or microwave treatment, lyophilisation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/56—Porous materials, e.g. foams or sponges
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/06—Materials or treatment for tissue regeneration for cartilage reconstruction, e.g. meniscus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/40—Preparation and treatment of biological tissue for implantation, e.g. decellularisation, cross-linking
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
本发明提供一种全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法,全层多孔骨软骨组织工程支架由全层骨软骨组织材料经过脱细胞化、激光打孔以及超声消化扩孔后得到;所述全层多孔骨软骨组织工程支架包括从上向下依次无缝自然过渡的软骨层、软骨下骨层和松质骨层。本发明提供的一种全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法,在结构层次上、力学性能和成分组成上高度和天然骨软骨接近,同时可以给种子细胞提供良好的接种环境。
Description
技术领域
本发明属于生物医学技术领域,具体来说,涉及一种全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法。
背景技术
对于外伤或疾病引起的骨软骨缺损修复是临床治疗的难题,应用组织工程技术构建组织工程软骨支架被认为是解决这一问题最好的技术手段。采用人工材料制作的支架,没有达到高仿生效果,对于骨软骨损伤的修复效果仍有改进的空间。自体骨软骨移植是取出自身关节非承重部分的骨软骨块放入关节缺损区域,被认为是缺损修复的金标准方法。自体骨软骨移植术优异的修复效果是由于其力学性能、层状结构和生物活性物质组成与自身天然骨软骨组织非常接近。但缺点是对非负重区造成损害,供区来源有限。因此,使用异体骨软骨组织块移植被用于修复缺损,但由于免疫原性引起的骨吸收等并发症时常导致修复失败。众所周知,同种异体骨软骨复合组织块的免疫原性主要来自其细胞成分。以往的研究表明,脱细胞后,脱细胞组织块的免疫原性大大降低。有人提出,异种组织脱细胞后可以达到同样的低免疫原性。因此去细胞化的同种异体或异种骨软骨组织块,接种自身的干细胞,能够达到接近自体骨软骨移植的修复效果。但脱细胞后软骨层的孔隙率过低,无法满足软骨组织工程支架的要求。因此,本领域迫切需要一种在结构层次上,力学性能上,成分组成上高度和天然骨软骨单元接近的骨软骨全层修复支架,同时可以给种子细胞提供良好的接种环境的制备技术和修复方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题是:一种全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法,在结构层次上、力学性能和成分组成上高度和天然骨软骨接近,同时可以给种子细胞提供良好的接种环境。
为解决上述技术问题,本发明实施例采用如下技术方案:
第一方面,本发明实施例提供一种全层多孔骨软骨组织工程支架,由全层骨软骨组织材料经过脱细胞化、激光打孔以及超声消化扩孔后得到;所述全层多孔骨软骨组织工程支架包括从上向下依次无缝自然过渡的软骨层、软骨下骨层和松质骨层。
作为本发明实施例的进一步改进,所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨层的厚度为0.2~2mm,孔隙率为50~60%,压缩模量为0.5~2Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨下骨层的厚度为0.2~1mm,孔隙率为65~80%,压缩模量为20~50Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的松质骨层的厚度为2~4mm,孔隙率为65~85%,压缩模量为20~40Mpa。
作为本发明实施例的进一步改进,所述全层骨软骨组织材料为从同种异体或异种动物体中获取。
第二方面,本发明实施例提供一种全层多孔骨软骨组织工程支架的制备方法,包括以下步骤:
步骤10)获取全层骨软骨组织材料,所述全层骨软骨组织材料包括从上向下依次无缝自然过渡的软骨层、软骨下骨层和松质骨层;
步骤20)将所述全层骨软骨组织材料进行脱细胞处理;
步骤30)对脱细胞化后的全层骨软骨组织材料的软骨层进行激光打孔;
步骤40)将激光打孔后的全层骨软骨组织材料放入氢氧化钠溶液中,并在超声波中进行超声消化,得到全层多孔骨软骨组织工程支架。
作为本发明实施例的进一步改进,激光打孔的孔径为150~200um,孔间距为150~200um,孔深度为500~1000um。
作为本发明实施例的进一步改进,所述步骤40)中,氢氧化钠溶液的浓度为0.5~1M。
作为本发明实施例的进一步改进,步骤40)中,超声消化的时间为120~240min。
作为本发明实施例的进一步改进,所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨层的厚度为0.2~2mm,孔隙率为50~60%,压缩模量为0.5~2Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨下骨层的厚度为0.2~1mm,孔隙率为65~80%,压缩模量为20~50Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的松质骨层的厚度为2~4mm,孔隙率为65~85%,压缩模量为20~40Mpa。
作为本发明实施例的进一步改进,还包括:
步骤40)将体外分离培养的种子细胞接种到全层多孔骨软骨组织工程支架中。
作为本发明实施例的进一步改进,所述步骤10)中,从同种异体或异种动物体中获取全层骨软骨组织材料。
与现有技术相比,本发明的技术方案具有以下有益效果:
(1)本发明的全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法,从同种异体或异种动物体中获取骨软骨组织材料,相比于获取自体骨软骨,不会对非负重区造成损害,且供区来源广。相比于采用人造骨软骨,同种异体或异种动物体的骨软骨组织材料具有生物活性物质,可以促进干细胞的成软骨和成骨分化,不需后期添加。
(2)本发明的全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法,采用全层结构骨软骨组织材料,制备全层组织支架,和天然组织具备十分接近的层次结构、力学性能和生物活性成分,可以对缺损区域进行整体修复。
(3)本发明的全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法,先在软骨层进行激光打孔,再利用超声消化对全层进行孔隙优化,在保证工程支架力学强度的同时获得较高孔隙率,给致密的软骨层引入了更有利于细胞粘附和迁移的三维空间结构,便于种子细胞或自身细胞的增殖,具有优异的修复效果。
附图说明
图1是本发明实施例的全层多孔骨软骨组织工程支架的照片;
图2(a)是实例1制备的工程支架的软骨层的电镜图,图2(b)是实例1制备的工程支架的软骨下骨层的电镜图,图2(c)是实例1制备的工程支架的松质骨层的电镜图;
图3(a)是将体外分离培养的干细胞接种到对比例1制备的工程支架后进行DAPI染色的荧光显微镜图;图3(b)是将体外分离培养的干细胞接种到实例1制备的工程支架后进行DAPI染色的荧光显微镜图;
图4(a)是移植实例1制备的工程支架修复后的大体观察照片,图4(b)是移植实例1制备的工程支架修复后进行HE染色的切片图,图4(c)是移植实例1制备的工程支架修复后的CT图像;图4(d)是移植实例4制备的工程支架修复后的大体观察照片,图4(e)是移植实例4制备的工程支架修复后进行HE染色的切片图,图4(f)是移植实例4制备的工程支架修复后的CT图像;图4(h)是移植对比例2得到的支架修复后的大体观察照片,图4(i)是移植对比例2得到的支架修复后的切片图,图4(j)是移植对比例2得到的支架修复后的CT图像。
具体实施方式
下面结合附图,对本发明的技术方案进行详细的说明。
以下的说明本质上仅仅是示例性的而并不是为了限制本公开、应用或用途。应当理解的是,在全部附图中,对应的附图标记表示相同或对应的部件和特征。
本发明实施例提供一种全层多孔骨软骨组织工程支架,由全层骨软骨组织材料经过脱细胞化、激光打孔以及超声消化扩孔后得到。其中,全层多孔骨软骨组织工程支架包括从上向下依次无缝自然过渡的软骨层、软骨下骨层和松质骨层。
全层多孔骨-软骨组织工程支架为整体件。该组织工程支架可以用于关节骨软骨缺损、剥脱性骨软骨炎,股骨头坏死、骨肿瘤切除后骨软骨缺损等组织的修复。
优选的,全层骨软骨组织材料为从同种异体或异种动物体中获取。
全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨层的厚度为0.2~2mm,例如:0.2mm、0.8mm、1mm、1.5mm或者2mm。软骨层的孔隙率为50~60%,例如:50%、53%、58%或者60%。软骨层的压缩模量为0.5~2Mpa,例如:0.5Mpa、0.7Mpa、1Mpa、1.5Mpa或者2Mpa。全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨下骨层的厚度为0.2~1mm,例如:0.2mm、0.5mm、0.7mm、0.9mm或者1mm。下骨层的孔隙率为65~80%,例如:65%、71%、77%或者80%。下骨层的压缩模量为20~50Mpa,例如:20Mpa、30Mpa、35Mpa、40Mpa或者50Mpa。全层多孔骨软骨组织工程支架的松质骨层的厚度为2~4mm,例如:2mm、2.5mm、3mm、3.5mm或者4mm。松质骨层的孔隙率为65~85%,例如:65%、71%、80%或者85%。松质骨层的压缩模量为20~40Mpa,例如:20Mpa、25Mpa、30Mpa、35Mpa或者40Mpa。
本实施例的全层多孔骨软骨组织工程支架,从同种异体或异种动物体中获取骨软骨组织材料,相比于获取自体骨软骨,不会对非负重区造成损害,且供区来源广;相比于采用人造骨软骨,同种异体或异种动物体的骨软骨组织材料具有生物活性物质,不需后期添加。本实施例的全层多孔骨软骨组织工程支架,采用全层结构骨软骨组织材料,制备全层组织支架,和天然组织具备十分接近的层次结构、力学性能和生物活性成分,可以对缺损区域进行整体修复。本实施例的全层多孔骨软骨组织工程支架,先对脱细胞化后的全层骨软骨组织材料的软骨层进行激光打孔,提供“细胞接种池”,增加细胞接种率,避免了细胞只粘附在表面。在激光打孔后还利用超声消化进行孔隙优化,增加整体的微孔隙率,有利于接种的细胞的迁移和增殖。本实施例通过激光打孔再进行超声消化扩孔,保证力学强度的同时获得较高孔隙率,给致密的软骨层引入了更有利于细胞粘附和迁移的三维空间结构,便于种子细胞或自身细胞的增殖,具有优异的修复效果。
本发明提供一种全层多孔骨软骨组织工程支架的制备方法,包括以下步骤:
步骤10)从同种异体或异种动物体中获取全层骨软骨组织材料,全层骨软骨组织材料包括从上向下依次无缝自然过渡的软骨层、软骨下骨层和松质骨层。
步骤20)将全层骨软骨组织材料进行脱细胞处理。在尽量保留原有组织结构和组成的情况下,完整地去除组织内细胞成分,可以使异体和异种来源的骨软骨组织工程支架都具有可接受的生物相容性。
步骤30)对脱细胞化后的全层骨软骨组织材料的软骨层进行激光打孔。激光打孔的孔径为150~200um,例如:150um、172um、188um、195um或者200um。孔间距为150~200um,例如:150um、165um、177um、190um或者200um。孔深度为500~1000um,例如:500um、650um、780um、920um或者1000um。激光打孔可以在软骨层蚀刻出微孔阵列。
步骤40)将激光打孔后的全层骨软骨组织材料放入氢氧化钠溶液中,并在超声波中进行超声消化,得到全层多孔骨软骨组织工程支架。超声消化后可以给软骨层引入瓦楞状孔隙结构,孔隙大小为10~100um,例如:10um、30um、50um、80um或者100um。这些大小孔隙可以更好的使细胞粘附和迁移。
优选的,本发明实施例方法的步骤20)中,采用物理法和化学洗涤法相结合进行脱细胞处理,可以将完整组织块的细胞较为彻底的脱除,达到脱细胞标准(DNA含量小于50ng/mg),并且不会对细胞外基质本身造成过多的丢失。
优选的,本发明实施例方法的步骤40)中,氢氧化钠溶液的浓度为0.5~1M,超声消化的时间为120~240min。氢氧化钠溶液的摩尔浓度为0.5~1mol/L。进行超声消化选择上述优选浓度范围内的氢氧化钠溶液,以及选择上述优选时间范围的处理时间,既可以保留理想的力学性能和细胞外基质,同时也可以一定程度提高孔隙率。
采用上述制备方法得到的全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨层的厚度为0.2~2mm,孔隙率为50~60%,压缩模量为0.5~2Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨下骨层的厚度为0.2~1mm,孔隙率为65~80%,压缩模量为20~50Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的松质骨层的厚度为2~4mm,孔隙率为65~85%,压缩模量为20~40Mpa。
将上述实施例结构的全层多孔骨软骨组织工程支架直接经过灭菌后,不需要将体外分离培养的种子细胞接种到该组织工程支架中。这样,组织工程支架直接与骨接触,通过募集体内的自身细胞的增殖,实现骨软骨缺损的原位修复。该过程也就无需从人体中提取细胞,进行体外培养成种子细胞。
优选的,所述方法还包括:
步骤40)将体外分离培养的种子细胞接种到全层多孔骨软骨组织工程支架中。
本实施例的全层多孔骨软骨组织工程支架的制备方法,从同种异体或异种动物体中获取骨软骨组织材料,相比于获取自体骨软骨,不会对非负重区造成损害,且供区来源广;相比于采用人造骨软骨,同种异体或异种动物体的骨软骨组织材料具有生物活性物质,不需后期添加。本实施例的全层多孔骨软骨组织工程支架,采用全层结构骨软骨组织材料,制备全层组织支架,和天然组织具备十分接近的层次结构、力学性能和生物活性成分,可以对缺损区域进行整体修复。本实施例的全层多孔骨软骨组织工程支架,先对脱细胞化后的全层骨软骨组织材料的软骨层进行激光打孔,提供“细胞接种池”,增加细胞接种率,避免了细胞只粘附在表面。在激光打孔后还利用超声消化进行孔隙优化,增加整体的微孔隙率,有利于接种的细胞的迁移和增殖。本实施例通过激光打孔再进行超声消化扩孔,保证力学强度的同时获得较高孔隙率,给致密的软骨层引入了更有利于细胞粘附和迁移的三维空间结构(三维空间结构是指细胞外基质成分天然的结构),便于种子细胞或自身细胞的增殖,具有优异的修复效果。
下面提供一个具体实例和两个对比例,实例1、对比例1和对比例2均是用于修复兔子的左膝关节的患处。
实例1
从幼猪的膝关节取一块圆柱形的全层骨软骨组织材料,进行清洗。其中,软骨层的厚度为0.2mm,孔隙率为60%,压缩模量为1Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨下骨层的厚度为0.3mm,孔隙率为75%,压缩模量为50Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的松质骨层的厚度为4mm,孔隙率为80%,压缩模量为40Mpa。将全层骨软骨组织材料进行脱细胞处理,具体的,将组织通过液氮1min-37℃生理盐水5min冻融循环5次,在1%的Triton溶液中震荡洗涤24h,在混合0.2% SDS+0.1%EDTA的10mM Tris-HCL溶液中震荡洗涤72h。对脱细胞化后的全层骨软骨组织材料的软骨层进行激光打孔。激光打孔的孔径为200um,孔间距为200um,孔深度为1000um。将激光打孔后的全层骨软骨组织材料放入浓度为0.5M的氢氧化钠溶液中,并在超声波中进行超声消化120min,得到全层多孔骨软骨组织工程支架。
从待处理的兔子体中提取细胞,进行体外分离培养,形成的种子细胞接种到上述全层多孔骨软骨组织工程支架中。
实例2
从幼猪的膝关节取一块圆柱形的全层骨软骨组织材料,进行清洗。其中,软骨层的厚度为1mm,孔隙率为50%,压缩模量为2Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨下骨层的厚度为1mm,孔隙率为80%,压缩模量为20Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的松质骨层的厚度为3mm,孔隙率为65%,压缩模量为30Mpa。
将全层骨软骨组织材料进行脱细胞处理,具体的,将组织通过液氮1min-37℃生理盐水5min冻融循环6次,在1.5%的Triton溶液中震荡洗涤20h,在混合0.2% SDS+0.1%EDTA的12mM Tris-HCL溶液中震荡洗涤80h。对脱细胞化后的全层骨软骨组织材料的软骨层进行激光打孔。激光打孔的孔径为150um,孔间距为180um,孔深度为800um。将激光打孔后的全层骨软骨组织材料放入浓度为0.8M的氢氧化钠溶液中,并在超声波中进行超声消化200min,得到全层多孔骨软骨组织工程支架。
从待处理的兔子体中提取细胞,进行体外分离培养,形成的种子细胞接种到上述全层多孔骨软骨组织工程支架中。
实例3
从幼猪的膝关节取一块圆柱形的全层骨软骨组织材料,进行清洗。其中,软骨层的厚度为2mm,孔隙率为55%,压缩模量为0.5Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨下骨层的厚度为0.8mm,孔隙率为65%,压缩模量为40Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的松质骨层的厚度为2.5mm,孔隙率为70%,压缩模量为20Mpa。
将全层骨软骨组织材料进行脱细胞处理,具体的,将组织通过液氮1min-37℃生理盐水5min冻融循环7次,在1%的Triton溶液中震荡洗涤18h,在混合0.2% SDS+0.1%EDTA的10mM Tris-HCL溶液中震荡洗涤64h。对脱细胞化后的全层骨软骨组织材料的软骨层进行激光打孔。激光打孔的孔径为180um,孔间距为150um,孔深度为500um。将激光打孔后的全层骨软骨组织材料放入浓度为0.7M的氢氧化钠溶液中,并在超声波中进行超声消化240min,得到全层多孔骨软骨组织工程支架。
从待处理的兔子体中提取细胞,进行体外分离培养,形成的种子细胞接种到上述全层多孔骨软骨组织工程支架中。
实例4
从幼猪的膝关节取一块圆柱形的全层骨软骨组织材料,进行清洗。其中,软骨层的厚度为0.5mm,孔隙率为58%,压缩模量为1.5Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨下骨层的厚度为0.2mm,孔隙率为70%,压缩模量为30Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的松质骨层的厚度为2mm,孔隙率为85%,压缩模量为35Mpa。
将全层骨软骨组织材料进行脱细胞处理,具体的,将组织通过液氮1min-37℃生理盐水5min冻融循环5次,在1%的Triton溶液中震荡洗涤30h,在混合0.2% SDS+0.1%EDTA的10mM Tris-HCL溶液中震荡洗涤80h。对脱细胞化后的全层骨软骨组织材料的软骨层进行激光打孔。激光打孔的孔径为160um,孔间距为170um,孔深度为700um。将激光打孔后的全层骨软骨组织材料放入浓度为1M的氢氧化钠溶液中,并在超声波中进行超声消化180min,得到全层多孔骨软骨组织工程支架。
直接将上述全层多孔骨软骨组织工程支架修复到兔子左膝关节处,不对该支架种植体外分离培养的种子细胞。
对比例1
从幼猪的膝关节取一块圆柱形的全层骨软骨组织材料,进行清洗。将全层骨软骨组织材料进行脱细胞处理,具体的,将组织通过液氮1min-37℃生理盐水5min冻融循环5次,在1%的Triton溶液中震荡洗涤24h,在混合0.2% SDS
+0.1%EDTA的10mM Tris-HCL溶液中震荡洗涤72h。对脱细胞化后的全层骨软骨组织材料的软骨层进行激光打孔。激光打孔的孔径为200um,孔间距为200um,孔深度为1000um,得到全层多孔骨软骨组织工程支架。
对比例2
从兔子的右膝关节取一块圆柱形的全层骨软骨组织。
实例1制备得到的工程支架,如图1所示。如图2所示,对实例1得到的工程支架,将样品紧贴在导电碳膜双面胶上,用金钯金合金对样品表面进行喷涂,利用Zeiss Gemini30,进行观察材料表面超微结构并获取图片,得到工程支架各层的电镜图。从图2所示的实例1制备得到的工程支架的各层电镜图可以看出,软骨层经过脱细胞和空隙优化后,有较多的孔隙结构,软骨下骨层和松质骨层结构疏松,各层内的孔隙结构相互连通且均具有立体多维性。
进行体外分离培养种子细胞:使用的细胞来源于新西兰兔的骨髓间充质干细胞。方法如下:使用过量戊巴比妥钠将7~14日龄的新西兰兔安乐死后,无菌条件下暴露分离出兔股骨,剪去股骨两端暴露骨髓腔,使用1ml的注射器以L-DMEM反复冲洗骨髓腔直至骨髓腔发白,尽可能洗脱髓腔内细胞。将收集的髓腔冲洗液以1200rpm的转速离心5分钟,使用含10%胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)、1%的青霉素和链霉素的L-DMEM的培养基重悬,并置于细胞孵育箱(37℃、5% CO2)中培养。利用骨髓间充质干细胞在培养基中的贴壁优势特性,定期更换培养液去除不贴壁细胞从而得到纯化骨髓间充质干细胞。培养24小时后,缓慢吸除悬浮细胞,之后2~3天更换一次培养基。进一步培养贴壁的细胞,显微镜观察下细胞融合达到80%左右时,将骨髓间充质干细胞用胰蛋白酶消化,用含10%的FBS低糖培养基终止消化,离心后重悬到新的培养皿中继续培养。按上述步骤培养并扩增至第三代后使用。
将上述体外分离培养的种子细胞接种到实例1得到的工程支架中,进行DAPI染色,得到图3(b)。将体外分离培养的种子细胞接种到对比例1得到的工程支架中,进行DAPI染色,得到图3(a)。未进行孔隙优化的软骨层只有少数粘附的细胞;而激光打孔联合超声扩孔后,软骨层中不仅有细胞在孔壁粘附,更有大量细胞在孔壁之间分散,彼此相互融合。可以看出,实例1通过激光打孔和超声消化结合优化孔隙得到的工程支架,更有利于干细胞粘附和迁移,便于干细胞增殖。
将实例1得到的工程支架移植到兔子的左膝关节的患处,修复12周后,进行大体截面切片拍照,得到图4(a);进行HE染色,得到组织切片图,如图4(b)所示;进行micro-CT扫描,得到图4(c)。
将实例4得到的工程支架移植到兔子的左膝关节的患处,修复12周后,进行大体截面切片拍照,得到图4(d);进行HE染色,得到组织切片图,如图4(e)所示;进行micro-CT扫描,得到图4(f)。
将对比例2得到的全层骨软骨组织移植到兔子的左膝关节的患处,修复12周后进行大体截面切片拍照,得到图4(h);进行HE染色,得到组织切片图,如图4(i)所示;进行micro-CT扫描,得到图4(j)。
从图4(a)、图4(d)、图4(h)可以看出,实例1的缺损区域被关节软骨组织填充,表面光泽度与对比例2效果相当。同样,实例4的缺损区域被关节软骨组织填充,表面光泽度与对比例2效果相当。
从图4(b)、图4(e)、图4(i)可以看出,实例1的可见缺损修复完整,表面与相邻软骨面平齐,呈典型的软骨组织结构,有软骨陷窝结构。软骨下骨完整清晰,骨小梁区有新生血管形成,和对比例2效果无明显差异。实例4也具有和实例1相当的修复效果。
从图4(c)、图4(f)、图4(j)可以看出,实例1、实例4和对比例2中,软骨下的骨质都几乎完全修复。
因此,移植实例1制备得到的工程支架具有优异的修复效果,其修复效果与自体骨软骨移植的修复效果一致。移植实例4制备得到的工程支架具有优异的修复效果,其修复效果与自体骨软骨移植的修复效果基本一致。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本领域的技术人员应该了解,本发明不受上述具体实施例的限制,上述具体实施例和说明书中的描述只是为了进一步说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护的范围由权利要求书及其等效物界定。
Claims (10)
1.一种全层多孔骨软骨组织工程支架,其特征在于,由全层骨软骨组织材料经过脱细胞化、激光打孔以及超声消化扩孔后得到;所述全层多孔骨软骨组织工程支架包括从上向下依次无缝自然过渡的软骨层、软骨下骨层和松质骨层;
所述激光打孔的孔径为150~200um;超声消化后给软骨层引入瓦楞状孔隙结构,孔隙大小为10~100um,所述孔隙更好的使细胞粘附和迁移。
2.根据权利要求1所述的全层多孔骨软骨组织工程支架,其特征在于,所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨层的厚度为0.2~2mm,孔隙率为50~60%,压缩模量为0.5~2Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨下骨层的厚度为0.2~1mm,孔隙率为65~80%,压缩模量为20~50Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的松质骨层的厚度为2~4mm,孔隙率为65~85%,压缩模量为20~40Mpa。
3.根据权利要求1所述的全层多孔骨软骨组织工程支架,其特征在于,所述全层骨软骨组织材料为从同种异体或异种动物体中获取。
4.一种全层多孔骨软骨组织工程支架的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤10)获取全层骨软骨组织材料,所述全层骨软骨组织材料包括从上向下依次无缝自然过渡的软骨层、软骨下骨层和松质骨层;
步骤20)将所述全层骨软骨组织材料进行脱细胞处理;
步骤30)对脱细胞化后的全层骨软骨组织材料的软骨层进行激光打孔;激光打孔的孔径为150~200um;
步骤40)将激光打孔后的全层骨软骨组织材料放入氢氧化钠溶液中,并在超声波中进行超声消化,得到全层多孔骨软骨组织工程支架;超声消化后给软骨层引入瓦楞状孔隙结构,孔隙大小为10~100um,所述孔隙更好的使细胞粘附和迁移。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,激光打孔的孔间距为150~200um,孔深度为500~1000um。
6.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤40)中,氢氧化钠溶液的浓度为0.5~1M。
7.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤40)中,超声消化的时间为120~240min。
8.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨层的厚度为0.2~2mm,孔隙率为50~60%,压缩模量为0.5~2Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的软骨下骨层的厚度为0.2~1mm,孔隙率为65~80%,压缩模量为20~50Mpa;所述全层多孔骨软骨组织工程支架的松质骨层的厚度为2~4mm,孔隙率为65~85%,压缩模量为20~40Mpa。
9.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,还包括:
步骤40)将体外分离培养的种子细胞接种到全层多孔骨软骨组织工程支架中。
10.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤10)中,从同种异体或异种动物体中获取全层骨软骨组织材料。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211513138.2A CN115737930A (zh) | 2022-11-28 | 2022-11-28 | 一种全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法 |
CN2022115131382 | 2022-11-28 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN116139342A CN116139342A (zh) | 2023-05-23 |
CN116139342B true CN116139342B (zh) | 2024-03-08 |
Family
ID=85340676
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211513138.2A Withdrawn CN115737930A (zh) | 2022-11-28 | 2022-11-28 | 一种全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法 |
CN202310222324.9A Active CN116139342B (zh) | 2022-11-28 | 2023-03-09 | 一种全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211513138.2A Withdrawn CN115737930A (zh) | 2022-11-28 | 2022-11-28 | 一种全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (2) | CN115737930A (zh) |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101417151A (zh) * | 2008-07-10 | 2009-04-29 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 生物源性含钙化层骨软骨组织工程支架 |
CN102805674A (zh) * | 2012-05-23 | 2012-12-05 | 同济大学附属上海市肺科医院 | 一种促进细胞在气管脱细胞基质支架内部生长的方法 |
CN103301508A (zh) * | 2013-05-28 | 2013-09-18 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种医用软骨支架材料的制备方法 |
CN104667350A (zh) * | 2015-03-12 | 2015-06-03 | 南京医科大学第一附属医院 | 三层一体化复合支架及其移植方法 |
CN206566255U (zh) * | 2016-10-28 | 2017-10-20 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种快速成型可降解镁金属骨软骨支架 |
CN109731138A (zh) * | 2014-08-08 | 2019-05-10 | 罗旭 | 激光微孔脱细胞真皮基质及其制备方法 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0311800D0 (en) * | 2003-05-22 | 2003-06-25 | Univ Leeds | Ultrasonic modification of soft tissue matrices |
CA2878808A1 (en) * | 2012-07-11 | 2014-01-16 | Osiris Therapeutics, Inc. | Methods of manufacturing cartilage products |
-
2022
- 2022-11-28 CN CN202211513138.2A patent/CN115737930A/zh not_active Withdrawn
-
2023
- 2023-03-09 CN CN202310222324.9A patent/CN116139342B/zh active Active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101417151A (zh) * | 2008-07-10 | 2009-04-29 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 生物源性含钙化层骨软骨组织工程支架 |
CN102805674A (zh) * | 2012-05-23 | 2012-12-05 | 同济大学附属上海市肺科医院 | 一种促进细胞在气管脱细胞基质支架内部生长的方法 |
CN103301508A (zh) * | 2013-05-28 | 2013-09-18 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种医用软骨支架材料的制备方法 |
CN109731138A (zh) * | 2014-08-08 | 2019-05-10 | 罗旭 | 激光微孔脱细胞真皮基质及其制备方法 |
CN104667350A (zh) * | 2015-03-12 | 2015-06-03 | 南京医科大学第一附属医院 | 三层一体化复合支架及其移植方法 |
CN206566255U (zh) * | 2016-10-28 | 2017-10-20 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种快速成型可降解镁金属骨软骨支架 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115737930A (zh) | 2023-03-07 |
CN116139342A (zh) | 2023-05-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Okamoto et al. | Influence of the porosity of hydroxyapatite ceramics on in vitro and in vivo bone formation by cultured rat bone marrow stromal cells | |
CN110169959B (zh) | 生长因子缓释微球、组织工程软骨复合支架及制备方法 | |
Gong et al. | A sandwich model for engineering cartilage with acellular cartilage sheets and chondrocytes | |
CN101816806B (zh) | 一种组织工程骨软骨复合体及其制备方法 | |
US6884621B2 (en) | Method and carrier for culturing multi-layer tissue in vitro | |
Gao et al. | Vitalisation of tubular coral scaffolds with cell sheets for regeneration of long bones: a preliminary study in nude mice | |
Akahane et al. | Osteogenic matrix sheet‐cell transplantation using osteoblastic cell sheet resulted in bone formation without scaffold at an ectopic site‐ | |
CN102198292B (zh) | 组织工程用脐带去细胞Wharton胶支架及其制备方法 | |
CN1973910B (zh) | 一种组织工程骨 | |
Ma et al. | Enhancing bone formation by transplantation of a scaffold‐free tissue‐engineered periosteum in a rabbit model | |
Jin et al. | Transplantation of human placenta-derived mesenchymal stem cells in a silk fibroin/hydroxyapatite scaffold improves bone repair in rabbits | |
CN102552981A (zh) | 一种组织工程骨/软骨一体支架的制备方法 | |
Liu et al. | Preparation and characterization of collagen–hydroxyapatite composite used for bone tissue engineering scaffold | |
Geng et al. | Engineering tubular bone using mesenchymal stem cell sheets and coral particles | |
CN1954890A (zh) | 一种组织工程骨软骨复合物制备方法及其应用 | |
CN107789668B (zh) | 具有多层结构的仿生胶原蛋白骨修复材料及其制备方法 | |
CN101417151A (zh) | 生物源性含钙化层骨软骨组织工程支架 | |
JP5247796B2 (ja) | 細胞由来細胞外マトリックス支持体の製造方法 | |
Ding et al. | Cyclic freeze–thaw grinding to decellularize meniscus for fabricating porous, elastic scaffolds | |
Chen et al. | Engineering tubular bone constructs | |
CN101564555A (zh) | 一种组织工程骨移植物及其构建方法 | |
CN116139342B (zh) | 一种全层多孔骨软骨组织工程支架及其制备方法 | |
JP7321152B2 (ja) | 軟骨移植片の再細胞化を可能にするエラスチン低減 | |
Kim et al. | Tissue-engineered heart valve leaflets: an effective method for seeding autologous cells on scaffolds | |
CN115337458B (zh) | 一种修复周围神经损伤的细胞基质神经移植物及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |