CN116135010A - 一种泡桐脱毒苗组培快繁的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种泡桐脱毒苗组培快繁的方法，所述培养方法包括以下步骤：外植体的选择与消毒、外植体无菌化培养、芽诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗和移栽；通过本发明培养方法使泡桐脱毒苗组织培养萌芽率高、增殖系数大、生根率好，培养周期短，且成活率高，有较好的市场前景、适宜推广。
Description
技术领域
本发明涉及组培快繁技术领域，具体涉及一种泡桐脱毒苗组培快繁的方法。
背景技术
泡桐，玄参科泡桐属，别名：白花泡桐、空桐木等，树皮灰色、或灰褐色，喜光，较耐阴，喜温暖气候，耐寒性不强；泡桐属的树种都原产于中国，泡桐是我国重要的速生用材树种之一，在我国乃至世界范围内的建筑、家具、装饰材、人造板、乐器等商品材市场占据着举足轻重的地位。
泡桐主要繁殖的方法有扦插、播种和埋根等，常规的扦插繁殖不易生根，播种繁殖后代变异大，无法保留优良性状，埋根繁殖周期长，生产速度慢，而基本培养基无法满足泡桐的组织培养快速繁殖的需求，并且传统的扦插繁殖等无性繁殖手段繁殖效率低，泡桐作为一种快速成材的植物一定程度上可以取代对环境危害较大的桉树，需要一种能对其快速繁殖并可进行稳定和大量生产的方法。
现有的泡桐树以常规的埋根育苗为主，生长周期长，且占地面积大，并且容易遭受病虫害而导致成活率低，改善上述问题并提出一种泡桐脱毒苗组培快繁的方法是很有必要的，能够基本解决上述问题，并且提供成活率高且优质的脱毒泡桐苗。
发明内容
(一)解决的技术问题
本发明提供一种泡桐脱毒苗组培快繁的方法，解决现有培养方法培养萌芽率低、增殖系数小、生根率差，培养周期长，成活率低等缺陷。
(二)采用的技术方案
本发明为实现上述目的，通过以下技术方案予以实现：一种泡桐脱毒苗组培快繁的方法，所述培养方法包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取生长健康的泡桐当年生带有腋芽的嫩枝，用清水清洗后，先用质量分数为0.1％HgCl2消毒8min，再用无菌水清洗5次；
(2)外植体无菌化培养：将上述材料接种于不附加植物生长调节物质的MS基本培养基上，60d获得3～4对叶片的无菌材料，其茎段用作芽诱导的材料；
(3)芽诱导培养：将获得的无菌茎段切成长1cm左右的外植体，接种于芽诱导培养基上，培养30d分化出芽；芽诱导培养基配比为：MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA；
(4)增殖培养：将诱导出的芽以平放的方式接种于增殖培养基上，培养35d长出丛生芽；增殖培养基配比为：2MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA；
(5)生根培养：当诱导出的泡桐芽长到约3cm时，从茎基部切下，接种于生根培养基上进行生根培养，6d后分化出根；生根培养基配比为：MS+0.6mg/L IBA+0.2mg/L NAA；
(6)炼苗和移栽：当泡桐幼苗的根在生根培养基上长到约3cm时，逐步去掉组培瓶盖，在室温内锻炼7d，然后移入盛有蛭石(经121℃高温灭菌20min)的营养钵中；用1/2MS营养液浇灌湿润，放到温室中培养，温室温度25℃，开始2周空气湿度85％以上，2周后湿度逐渐降低与室外环境相同，4～5周后，移栽到大田中。
作为本方案的进一步优化，所述外植体的诱导培养、增殖培养和生根培养都在培养室内进行，且各培养基中均加入20g/L蔗糖，5.0g/L琼脂，PH值均为5.8；培养室温度控制在25℃，日光灯光照强度1200lx左右，光照时间为16h/d。
(三)有益效果
本发明提供一种泡桐脱毒苗组培快繁的方法，具有以下有益效果：
通过本发明可以使泡桐脱毒苗组织培养萌芽率高、增殖系数大、生根率好，培养周期短，且成活率高，有较好的市场前景、适宜推广。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。本发明的实施例是为了示例和描述起见而给出的，而并不是无遗漏的或者将本发明限于所公开的形式。很多修改和变化对于本领域的普通技术人员而言是显而易见的。选择和描述实施例是为了更好说明本发明的原理和实际应用，并且使本领域的普通技术人员能够理解本发明从而设计适于特定用途的带有各种修改的各种实施例。
实施例
一种泡桐脱毒苗组培快繁的方法，所述培养方法包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取生长健康的泡桐当年生带有腋芽的嫩枝，用清水清洗后，先用质量分数为0.1％HgCl2消毒5-10min，再用无菌水清洗5次；
(2)外植体无菌化培养：将上述材料接种于不附加植物生长调节物质的MS基本培养基上，60d获得3～4对叶片的无菌材料，其茎段用作芽诱导的材料；
(3)芽诱导培养：将获得的无菌茎段切成长1cm左右的外植体，接种于芽诱导培养基上，培养30d分化出芽；芽诱导培养基配比为：MS+2.0-4.0mg/L 6-BA+0.2-0.4mg/L NAA；
(4)增殖培养：将诱导出的芽以平放和直插的方式接种于增殖培养基上，培养35d长出丛生芽；增殖培养基配比为：1-2MS+1.5-5.0mg/L 6-BA+0.1-0.5mg/L NAA；
(5)生根培养：当诱导出的泡桐芽长到约3cm时，从茎基部切下，接种于生根培养基上进行生根培养，5-10d后分化出根；生根培养基配比为：0.5-1MS+0.4-0.6mg/L IBA+0.2-0.4mg/L NAA+0.2-0.6mg/L ABT 6号；
(6)炼苗和移栽：当泡桐幼苗的根在生根培养基上长到约3cm时，逐步去掉组培瓶盖，在室温内锻炼7d，然后移入盛有蛭石(经121℃高温灭菌20min)的营养钵中；用1/2MS营养液浇灌湿润，放到温室中培养，温室温度25℃，开始2周空气湿度85％以上，2周后湿度逐渐降低与室外环境相同，4～5周后，移栽到大田中。
实验数据对比：
下表1～表7表示外植体的消毒时升汞不同消毒时间对泡桐成活率的影响、诱导培养时不同激素浓度配比对腋芽诱导的影响、增殖培养时不同基本培养基、不同激素、不同接种方式对泡桐继代增殖的影响和生根培养时不同基本培养基、不同激素对组培苗生根的影响。
表1升汞不同消毒时间对泡桐成活率的影响
由表1可以看出，在外植体消毒这一环节，升汞消毒时间3min时，灭菌不彻底，污染率高达93.04％，随着消毒时间增加，污染率逐渐降低；反之，褐化率随着消毒时间的增加而呈正向相关。消毒时间过长大于8min时，外植体成活率逐渐降低，褐化死亡率比较高。因此，在消毒时间为8min时，成活率最高达57.33％。因此，用升汞消毒8min是比较理想的消毒时间。
表2不同激素浓度配比对腋芽诱导的影响
由表2可以看出，利用不同浓度的6-BA、NAA设计试验，6-BA的浓度为2.0、3.0、4.0mg/L，NAA的浓度为0.2、0.3、0.4mg/L，共9个组合，表2中数据表明，NAA浓度超过0.4mg/L时，芽诱导率明显下降；当6-BA浓度为3.0mg/L、NAA浓度为0.3mg/L时，诱导外植体数最高，诱导率为79.69％。因此，促进腋芽诱导的最佳培养基配方：MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/LNAA。
表3不同基本培养基对泡桐继代增殖的影响
表4不同激素配比对泡桐继代增殖的影响
由表3可知，利用不同增殖基本培养基设计试验，培养基类型分别设置为MS、3/2MS和2MS，共3个处理，表3数据表明，基本培养基为2MS时，愈伤生长小，致密，玻璃化少，芽生长正常，叶浓绿，小芽生长整齐，茎壮，增殖系数最高，为4.9。因此，泡桐生根较为理想的基本培养基为2MS。
由表4可知，利用不同浓度的6-BA、NAA设计试验，6-BA的浓度为1.5、2.0、5.0mg/L，NAA的浓度为0.1、0.5，共6个组合，表4中数据表明，细胞***素6-BA的作用最明显，过高浓度6-BA对分化率有抑制作用，在6-BA浓度为2.0mg/L时增殖系数和分化率都最高，当NAA浓度为0.1mg/L时增殖系数相对比较高。综上分析，无菌苗增殖最佳培养基配方：2MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA。
表5不同接种方式对泡桐单株增殖的影响
由表5可知，利用不同接种方式对泡桐单株增殖影响设计试验，接种方式分为平放和直插，共2个处理。表5数据表明，采用平放接种方式芽条的侧芽基本全都萌动，芽绿，各侧芽生长均匀，增殖倍数最高，为4.5。因此，用平放接种方式将诱导芽接种于增殖培养基是较为理想的接种方式。
表6不同生根培养基对泡桐生根的影响
表7不同激素对泡桐组培苗生根的影响
由表6可知，利用不同生根培养基设计试验，培养基类型分别设置为1/2MS和MS，共2个处理。由表6数据表明，基本培养基为MS时，根白、壮、长，切口愈伤小，芽绿，生长正常，平均生根数较高，达9条。因此，泡桐生根较为理想的基本培养基为MS。
由表7可知，选择2-3cm高、生长健壮整齐一致的试管苗先在空白MS培养基上培养14d左右，以消除前期激素对生根试验的影响。进行生根培养，基本培养基采用MS，利用不同浓度的IBA、NAA和ABT 6号设计试验，IBA的浓度为0.4和0.6mg/L，NAA的浓度为0.2和0.4mg/L，ABT 6号的浓度为0.2、0.4和0.6mg/L，共8个处理。记录初始生根时间，25d后统计无菌苗生根率、平均根数、平均株高。表7中数据表明，当IBA浓度为0.6mg/L、NAA浓度为0.2mg/L时，平均根量、平均株高和出根率最高，虽初始生根时间为6d不是最早，但综合来看该激素配比是较为理想的配比。综上，生根培养最佳培养基配方为：MS+0.6mg/L IBA+0.2mg/L NAA。
由表1～表7可以得知，本发明中外植体消毒中消毒时间合理，诱导培养基配方、增殖培养基配方和生根培养基配方，三者配方合理，产生的效果最佳，使之对泡桐脱毒苗组织培养诱导率高、增殖系数大、生根率好，培养周期短，且成活率高，有较好的市场前景、适宜推广。
本发明的基本教导已加以说明，对具有本领域通常技能的人而言，许多延伸和变化将是显而易知者。由于说明书揭示的本发明可在未脱离本发明精神或大体特征的其它特定形式来实施，且这些特定形式的一些形式已经被指出，所以，说明书揭示的实施例应视为举例说明而非限制。本发明的范围是由所附的申请专利范围界定，而不是由上述说明所界定，对于落入申请专利范围的均等意义与范围的所有改变仍将包含在其范围之内。
Claims (2)
1.一种泡桐脱毒苗组培快繁的方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取生长健康的泡桐当年生带有腋芽的嫩枝，用清水清洗后，先用质量分数为0.1％HgCl2消毒8min，再用无菌水清洗5次；
(2)外植体无菌化培养：将上述材料接种于不附加植物生长调节物质的MS基本培养基上，60d获得3～4对叶片的无菌材料，其茎段用作芽诱导的材料；
(3)芽诱导培养：将获得的无菌茎段切成长1cm左右的外植体，接种于芽诱导培养基上，培养30d分化出芽；芽诱导培养基配比为：MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA；
(4)增殖培养：将诱导出的芽以平放的方式接种于增殖培养基上，培养35d长出丛生芽；增殖培养基配比为：2MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA；
(5)生根培养：当诱导出的泡桐芽长到约3cm时，从茎基部切下，接种于生根培养基上进行生根培养，6d后分化出根；生根培养基配比为：MS+0.6mg/L IBA+0.2mg/L NAA；
(6)炼苗和移栽：当泡桐幼苗的根在生根培养基上长到约3cm时，逐步去掉组培瓶盖，在室温内锻炼7d，然后移入盛有蛭石(经121℃高温灭菌20min)的营养钵中；用1/2MS营养液浇灌湿润，放到温室中培养，温室温度25℃，开始2周空气湿度85％以上，2周后湿度逐渐降低与室外环境相同，4～5周后，移栽到大田中。
2.根据权利要求1所述的一种泡桐脱毒苗组培快繁的方法，其特征在于，所述外植体的诱导培养、增殖培养和生根培养都在培养室内进行，且各培养基中均加入20g/L蔗糖，5.0g/L琼脂，PH值均为5.8；培养室温度控制在25℃，日光灯光照强度1200lx左右，光照时间为16h/d。
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